JPH11130690A

JPH11130690A - 免疫調節薬及び抗炎症薬

Info

Publication number: JPH11130690A
Application number: JP9312852A
Authority: JP
Inventors: Miyato Higaki; 宮都桧垣; Chiyuki Abe; 千之安倍; Tadahiro Kikukawa; 忠裕菊川; Fumiharu Eguchi; 文陽江口; Hiroaki Yoshimoto; 博明吉本
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1997-10-29
Filing date: 1997-10-29
Publication date: 1999-05-18

Abstract

(57)【要約】【課題】安定した免疫調節作用及び抗炎症作用を有
し、自己免疫疾患、特に、膠原病、全身性エリテマトー
デス、慢性関節リウマチ等に有効である免疫調節薬及び
抗炎症薬を提供する。【解決手段】ヒメマツタケ（Agaricus blazei Mur
r.）の抽出物を有効成分とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は免疫調節薬及び抗炎
症薬に係り、特にヒメマツタケの抽出物を有効成分とす
る免疫調節薬及び抗炎症薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】全身性エリテマトーデス、慢性関節リウ
マチ等の膠原病は免疫系の異常を原因とする自己免疫疾
患である。全身性エリテマトーデスは多臓器障害性の慢
性炎症性疾患であり、慢性関節リウマチは関節炎を主徴
とする慢性炎症性疾患である。従来より、この疾患に対
しては、ペニシラミン、金剤等の非ステロイド系消炎鎮
痛薬やデキサメタゾン、プレドニゾロン等のステロイド
系薬剤が用いられてきた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記薬
剤は十分な治療効果を上げることができなかったり、副
作用を発現する場合がある。例えば、非ステロイド系消
炎鎮痛薬は活動性の慢性関節リウマチに対しては薬剤反
応性は低い。また、ステロイド系薬剤は長期連用により
重篤な副作用を生じることがあり、臨床的な使用に際し
てはかなりの注意を必要とする。一方、天然素材の中に
は免疫調節作用や消炎作用を有するものがあり、上記疾
患に対する薬剤としての利用が検討されてきた。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者は天然素材を用
いた免疫調節薬及び消炎薬について鋭意研究した結果、
ヒメマツタケの抽出物が安定した免疫調節作用及び消炎
作用を有し、膠原病、全身性エリテマトーデス、慢性関
節リウマチ等の自己免疫疾患に有効であり、しかも副作
用がないこととを見出し、本発明を完成した。即ち、本
発明はヒメマツタケ（Agaricus blazei Murr.）の抽出
物を有効成分として含有する免疫調節薬及び抗炎症薬で
ある。

【０００５】本発明で用いられる菌体は、ハラタケ属(A
garicus)のヒメマツタケ（Agaricusblazei Murr.）であ
る。この菌糸体の培養及びキノコの栽培方法は特に限定
されるものではなく、同種のキノコと同様の条件下で培
養、栽培することが可能である。本発明では、その薬理
効果の安定性からヒメマツタケＣＪ−０１株を用いるこ
とが好ましい。ヒメマツタケＣＪ−０１株は、例えば、
ｐＨ５．５〜７．０、含水率５５〜８０％、Ｃ／Ｎ比２
５〜９５の堆肥培地中で培養、栽培することが出来、特
に、サトウキビの葉、頂頭部、バカスを原材料として、
上記の条件で堆肥を熟成化させた後、菌糸体をその培地
に接種して植壌土によって覆土処理して、光照射下の条
件で栽培することができる。

【０００６】また、本発明の抽出物も特に限定されるも
のではなく、例えば、ヒメマツタケの子実体又は培養菌
糸体の水抽出液として、また、液体培地を用いて菌糸体
を培養した場合は液体培地のろ液として、さらにはこれ
らの液体を凍結乾燥させた粉体として得ることができ
る。通常、１日の服用分は、例えば、ヒメマツタケの子
実体の乾燥試料３〜１０ｇを８０〜９０℃の熱水４００
ｍｌ〜６００ｍｌで３０〜６０分間抽出して得ることが
でき、得られた抽出液は１日３〜６回に分けて、食前又
は食間に服用することが好ましい。

【０００７】本発明に係る免疫調節薬は安定した免疫調
節作用及び抗炎症作用を有し、自己免疫疾患、特に、膠
原病、慢性関節リウマチ等に有効である。

【０００８】

【実施例】以下、本発明の実施例について説明するが、
本発明はこれに限定されるものではない。以下の実施例
においては、ヒメマツタケとしてヒメマツタケＣＪ−０
１株を用いた。その理由は、栽培や品質管理の方法が確
立されており、その結果、最も安定した薬理効果が期待
できるからである。１．ヒメマツタケＣＪ−０１株子実体の栽培サトウキビの葉、頂頭部、バカスを原材料とし、ｐＨ
６．２、含水率７０％、Ｃ／Ｎ比４５の状態に熟成した
堆肥培地４００ｇを８００ｍｌ容のポリプロピレン製培
養瓶に詰め、オートクレーブで滅菌した。この培養基に
菌糸体を接種し３０日間培養したヒメマツタケＣＪ−０
１株の菌糸体が増殖した培地を栽培用培地に接種し、植
壌土によって覆土処理した後、温度２０〜３５℃、湿度
８０％以上で、５００ルクスの光照射下で培養し、ヒメ
マツタケＣＪ−０１株（Agaricus b lazei Murr. CJ-0
1）の栽培３０〜１２０日の間に連続的に子実体を得
た。

【０００９】２．ヒメマツタケＣＪ−０１株の系統的識
別上記の方法で培養、収穫したヒメマツタケＣＪ−０１株
の子実体及び対照としてヒメマツタケの他株Ａ並びにＢ
の子実体１０ｇを各々４℃の蒸留水１５０ｍｌ中で３時
間攪伴して冷水抽出液を得た。得られた各々の冷水抽出
液を、アンホライン（ｐＨ３．５〜９．５）を含む５％
ポリアクリルアミドゲルを使用して、７００Ｖ、１５ｍ
Ａ、１５Ｗの条件で３時間、電気泳動した後、活性染色
を行い各々のアイソザイムパターンを得た。結果を図１
に示す。図１から明らかなように、ヒメマツタケＣＪ−
０１株は、ｐＨ６．７、４．４及び３．９付近に他株Ａ
及びＢに見られない特異的バンドを有し、他株Ａ及びＢ
に見られるｐＨ４．１及び４．７付近のバンドを有しな
いことが認められる。以上の結果からヒメマツタケＣＪ
−０１株抽出物は、ヒメマツタケの他の株とは異なる特
異的成分を有することが明らかになった。

【００１０】３．ヒメマツタケＣＪ−０１株子実体の成
分分析上記の方法で培養、収穫したヒメマツタケＣＪ−０１株
の子実体について以下のような成分分析を行なった。（１）一般分析ヒメマツタケＣＪ−０１株の子実体を６０℃で通風乾燥
した後、水分、タンパク質、脂質、炭水化物（糖質、繊
維質）及び灰分の含量を日本食品標準成分表に記載され
た方法で定量した。結果を表１に示す。

【表１】また、ヒメマツタケＣＪ−０１株乾燥子実体１００ｇに
含まれる無機質を蛍光Ｘ線分析装置を用いて定量した。
結果を表２に示す。

【表２】

【００１１】（２）ビタミン類ヒメマツタケＣＪ−０１株乾燥子実体１００ｇに含まれ
るビタミン類を常法に従って、分析した。結果を表３に
示す。

【表３】表３から明らかなように、ヒメマツタケＣＪ−０１株子
実体は、キノコ類としては多量のビタミンを含有してい
た。また、動物性食品に含有されるビタミンＢ１２が検
出されたことは注目に値する。

【００１２】（３）アミノ酸ヒメマツタケＣＪ−０１株乾燥子実体をサンプルミルで
粉砕した。粉砕したもののうち１６メッシュのふるいを
透過した粉末３０ｇを秤量し、８０℃の蒸留水６００ｍ
ｌで１時間加熱抽出した。この熱水抽出液を凍結乾燥
し、粉末化した。この粉末（以下、熱水抽出物とい
う。）１ｍｇを７０％ギ酸１ｍｌに溶解し、気相加水分
解法でアミノ酸へ分解し、アミノ酸分析装置で分析し
た。その結果、ヒメマツタケＣＪ−０１株にグルタミン
酸、グリシン及びアスパラギンが多く含有されているこ
とが明らかになった。

【００１３】（４）糖類熱水抽出物を７２％硫酸で加水分解した後、さらに４％
硫酸で加水分解し、アルジトールアセテートとしてＧＣ
分析して中性糖を定量した。内部標準物質としてはｍｙ
ｏ−イノシトールを用いた。結果を表４に示す。

【表４】熱水抽出物中のウロン酸の定量をｍ−ヒドロキシビフェ
ニル法により行なった。標準物質としてはグルクロン酸
を用いた。その結果、１．７％のウロン酸が検出され
た。

【００１４】（５）メチル化分析箱守法を２回繰り返し、さらにクーン法を１回行い熱水
抽出物をメチル化した。メチル化糖に９０％のギ酸を加
え、１００℃で２時間加熱後、０．５Ｎ硫酸を加え、１
００℃で１２時間加水分解し、炭酸バリウムで中和し
た。脱塩後、水素化ホウ酸ナトリウムを加え、室温で一
晩放置した。これに無水酢酸−ピリジン混合物（１：
１）を加え、１００℃で１時間加熱し、アルジトールア
セテートとして、ガスクロマトグラフ法により分析を行
なった。結果を図２及び表５に示す。図２はメチル化ア
ルジトールアセテートのガスクロマトグラムを示し、表
５は図２のクロマトグラムの各々のピークが表すメチル
化糖、そのグリコシド結合及び重量百分率を示す。

【表５】

【００１５】（６）¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル熱水抽出物８０ｍｇを重水１ｍｌに溶解し、アセトンを
内部標準物質として３９９．６５ＭＨｚ、７０℃で¹Ｈ
−核磁気共鳴スペクトルを得た。結果を図３に示す。 δｐｐｍ：５．０３５．２４５．６２
５．６６上記の結果から、グルコースはα（１−４）及びα（１
−６）結合しており、プルランと類似した構造を有する
ことが明らかになった。また、ガラクトースはβ（１−
６）結合していることが明らかになった。

【００１６】４．ヒメマツタケ抽出液の調製上記の方法で培養、収穫したヒメマツタケＣＪ−０１株
の乾燥子実体をサンプルミルで粉砕した。粉砕したもの
のうち１６メッシュのふるいを通過した粉末５ｇを８０
℃の熱水６００ｍｌで１時間抽出し、ヒメマツタケＣＪ
−０１株抽出液を得た。

【００１７】５．ヒトに対するヒメマツタケ抽出液の一
般薬理試験上記の操作で得られたヒメマツタケ抽出液のヒトに対す
る薬理作用を確認するため、手術経験、常備薬及び特記
事項となる既往暦のない２０代及び３０代の男性８人を
被験者として、ヒト服用試験を行なった。被験者はヒメ
マツタケ抽出液６００ｍｌを１日３回に分けて服用し
た。被験者の生活は、これまでの生活暦と同様とした。
被験者は服用開始前、服用開始後１ヶ月及び３ヶ月の時
点で採血され、採取された血液は一般血液検査、生化学
的検査、免疫学的検査に供された。結果を表６〜表８に
示す。

【表６】

【表７】

【表８】

【００１８】上記の結果から明らかなように、免疫学的
検査から、ヒメマツタケ抽出液の服用により、免疫力を
指標する各項目の上昇が認められたが、特に、自然免疫
系のＮＫ細胞の上昇が顕著であった。また、生化学的検
査からは、特に、血中脂質に関する項目が改善されたこ
とが認められる。さらに、上記いずれの検査からもヒメ
マツタケＣＪ−０１株抽出液の副作用を示唆する結果は
得られなかった。以上の結果から本発明に係るヒメマツ
タケ抽出液の効果は明らかであった。

【００１９】６．膠原病モデルマウスに対するヒメマツ
タケ抽出液の薬理試験ヒメマツタケＣＪ−０１株抽出液の膠原病に対する有効
性を確認するため膠原病モデルマウスＭＲＬ／ｌｐｒを
用いた試験を行なった。ＭＲＬ／ｌｐｒマウスのオス３
２頭を固形飼料及び滅菌水で１週間予備的に飼育し、１
６頭ずつ２組に組み分けした。組み分けに際し、各群の
マウスの総体重が均一になるようにした。組み分けされ
たマウスはさらに２週間飼育された後、試験に供され
た。処置群にはヒメマツタケ抽出液の体重換算量５ｇ／
６００ｍｌ／６０ｋｇを７週齢から投与し、未処置群に
は抽出液を投与しなかった。投与試験開始後、飼料、滅
菌水は自由に摂取させた。飼育は、温度２１±５℃、湿
度５０±２０％、白色蛍光燈下で１２時間の明暗サイク
ルの条件下で行われた。飼育中、摂食量と摂水量を毎
日、体重を１週間毎に測定し、各週の平均を求めた。さ
らに、飼育中に膠原病に特有の病変を肉眼で観察した。

【００２０】各群のマウスとも２２週齢で屠殺して、採
血し、膠原病に関連する血液検査項目を定法により測定
した。また、採血後、内臓器の状態を調べるため各群の
マウスを解剖するとともに、各群のマウスの四肢を切断
し、脚部、胴体部及び頭部の組織を中性ホルマリンで固
定し、病理組織検査を行なった。

【００２１】血液検査の結果を図４〜図７に示す。図４
は各群のマウスのＣ反応性タンパク（ＣＲＰ）の平均値
を示すグラフ、図５は各群のマウスのリウマチ因子（Ｒ
Ｆ）の平均値を示すグラフ、図６は各群のマウスの乳酸
脱水素酵素（ＬＤＨ）の平均値を示すグラフ、図７は各
群のマウスのＣＤ４並びにＣＤ８の百分率及びＣＤ４／
ＣＤ８を示すグラフである。図４〜図７から明らかなよ
うに、膠原病及び慢性関節リウマチの指標となる各項目
について、処置群は未処置群より低い値を示した。ま
た、肉眼的観察では、処置群、未処置群のいずれにおい
ても、脱毛、血管炎、壊死の各症状が観察されたが、各
症状について処置群は未処置群に比べて発症の遅延が観
察され、各症状も軽度であった。

【００２２】組織病理検査の結果を図８及び図９に示
す。図８は未処置群のマウスの後肢関節部の超薄切片を
ヘマトキシリン−エオシンで染色した顕微鏡写真（×４
００）、図９は処置群のマウスの後肢関節部の超薄切片
をヘマトキシリン−エオシンで染色した顕微鏡写真（×
２００）である。図８及び図９から明らかなように、未
処置群では慢性関節リウマチに特有のフィブリン析出及
び滑膜重層化が認められる。一方、図９からはこのよう
なリウマチの特徴はみられない。上記の結果から得られ
た病理所見を表９に示す。表９では各病変の状態はスコ
アー化されており、数値が大きいものほど炎症が激しい
ことを意味する。

【表９】以上の結果から本発明に係るヒメマツタメ抽出液は膠原
病や慢性関節リウマチ等の自己免疫性疾患に有効である
ことが明らかになった。

【００２３】７．II型コラーゲン誘導関節炎モデルマウ
スに対するヒメマツタケＣＪ−０１株抽出液の薬理試験ヒメマツタケＣＪ−０１株抽出液の慢性関節リウマチ等
に対する有効性を確認するためII型コラーゲン誘導関節
炎モデルマウスＤＢＡ／１Ｊを用いた試験を行なった。
０．０５Ｎ酢酸溶液に牛鼻中隔由来のII型コラーゲンを
溶解し、これを同量のフロイント完全アジュバント（Ｆ
ＣＡ）と混合してエマルジョンを得た。このエマルジョ
ンをマウスＤＢＡ／１Ｊの尾根部皮内に１００μｇ／
０．０５ｍｌ投与し、初回免疫を行った。３週間後にフ
ロイント不完全アジュバント（ＦＩＡ）と同量のII型コ
ラーゲンによる追加免疫を同部に投与して、慢性関節リ
ウマチモデルマウスＤＢＡ／１Ｊを得た。

【００２４】上記の操作で得られたＤＢＡ／１Ｊマウス
のオス２４頭のうち処置群の１２頭にはヒメマツタケＣ
Ｊ−０１株抽出液１．６ｍｇ／日（ヒト体重換算量５ｇ
／６００ｍｌ／６０ｋｇ）を追加免疫後発症を確認した
２日目から投与し、未処置群には抽出液を投与しなかっ
た。投与試験開始後、飼料、滅菌水は自由に摂取させ
た。飼育は、温度２１±５℃、湿度５０±２０％、白色
蛍光燈下で１２時間の明暗サイクルの条件下で行われ
た。飼育中、摂食量と摂水量を毎日、体重を１週間毎に
測定し、各週の平均を求めた。

【００２５】結果を図１０に示す。図１０は各群のマウ
スの関節炎の発症率を示すグラフである。図１０におい
ては発症率は関節炎を発症したマウスの四肢の数を各群
のマウスの肢数で除して示されている。図１０から明ら
かなように、未処置群では初回免疫後６週目で５０％以
上の発症率を示しているのに対し、処置群では２０％前
後の発症率を示しており、明らかな抑制効果が認められ
た。

【００２６】図１１は未処置群のマウスの右前肢甲部を
示す写真、図１２は未処置群のマウスの右前肢掌部を示
す写真、図１３は処置群のマウスの右前肢甲部を示す写
真、図１４は処置群のマウスの右前肢掌部を示す写真、
図１５は正常マウスの右前肢甲部を示す写真、図１６は
正常マウスの右前肢掌部を示す写真である。図１１〜図
１６から明らかなように、未処置群では関節炎に特有の
発赤と腫張が認められるが、処置群ではこのような特徴
はみられず、正常マウスに近い状態となっていることが
わかる。

【００２７】図１７は各群のマウスの関節炎係数（スコ
アー）を示すグラフである。図１７においては、関節炎
係数はスコアー化されており、無変化を０点、１指ある
いは複数指の腫張を１点、全体に見られる発赤と腫張を
２点、全体にみられる強い発赤と腫脹を３点とし、図１
７に示した。四肢の合計を最高１２点とし、発症した全
てのマウスの合計点を１群マウスの肢数で除してスコア
ーとした。図１７から明らかなように、処置群では未処
置群と比較して関節炎係数は低値であり、関節炎の進行
阻止が認められた。

【００２８】また、初回免疫の３週後より各群のマウス
の尾静脈より採血した血清中の抗−II型コラーゲンマウ
ス抗体を酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）により測定し
た。ウシ由来のII型コラーゲン１０μｇ／０．１ｍｌを
９６孔マイクロプレートに固相化し、ウシ血清アルブミ
ンでブロックした後、５００倍に希釈した被検マウスの
血清と反応させた。その後、ペルオキシダーゼ標識Ｉｇ
Ｇ抗体と反応させ２，２’−アシノビス−３−エチルベ
ンゾチアゾリン−６−スルホン酸アンモニウム塩（ＡＢ
ＴＳ）基質溶液で呈色後、４１５ｎｍにおける吸光度を
測定した。また、対照としてデキサメタゾン（ＤＥＸ）
を０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウムに懸
濁し、１ｍｇ／ｋｇを週３回腹腔内投与したマウスを用
いて同様な処理を行った。結果を図１８に示す。図１８
から明らかなように、処置群のマウスは対照群（ＤＥ
Ｘ）ほどの抑制効果は示さないものの、未処置群に比べ
て抑制効果が認められる。

【００２９】病理組織検査の結果を図１９〜図２１に示
す。図１９〜図２１はマウスの前肢関節部の超薄切片を
ヘマトキシリン−エオシンで染色した顕微鏡写真であ
り、図１９は未処置群マウスを、図２０は処置群マウ
ス、図２１は正常マウスの組織を示す。図１９〜図２１
から明らかなように、処置群では、滑膜細胞重層化の抑
制、線維芽細胞増殖抑制、軟骨細胞の空胞変性抑制、パ
ンヌス形成の抑制が観察された。以上の結果から本発明
に係るヒメマツタメ抽出液は慢性関節リウマチに有効で
あることが明らかになった

【００３０】

【発明の効果】以上の説明から明らかなように、本発明
の免疫調節薬及び抗炎症薬は、安定した免疫調節作用及
び抗炎症作用を有し、自己免疫性疾患、特に、膠原病、
全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ等に有効で
ある。

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒメマツタケＣＪ−０１株の子実体及びヒメマ
ツタケの他株Ａ並びにＢの子実体の各々のアイソザイム
パターンを示す。

【図２】メチル化アルジトールアセテートのガスクロマ
トグラムを示す。

【図３】¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを示す。

【図４】各群のマウスのＣ反応性タンパク（ＣＲＰ）の
平均値を示すグラフである。

【図５】各群のマウスのリウマチ因子（ＲＦ）の平均値
を示すグラフである。

【図６】各群のマウスの乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の平
均値を示すグラフである。

【図７】各群のマウスのＣＤ４並びにＣＤ８の百分率及
びＣＤ４／ＣＤ８を示すグラフである。

【図８】未処置群のマウスの後肢関節部の超薄切片をヘ
マトキシリン−エオシンで染色した顕微鏡写真（×４０
０）である。

【図９】処置群のマウスの後肢関節部の超薄切片をヘマ
トキシリン−エオシンで染色した顕微鏡写真（×２０
０）である。

【図１０】各群のマウスの関節炎の発症率を示すグラフ
である。

【図１１】未処置群のマウスの右前肢甲部を示す写真で
ある。

【図１２】未処置群のマウスの右前肢掌部を示す写真で
ある。

【図１３】処置群のマウスの右前肢甲部を示す写真であ
る。

【図１４】処置群のマウスの右前肢掌部を示す写真であ
る。

【図１５】正常マウスの右前肢甲部を示す写真である。

【図１６】正常マウスの右前掌部を示す写真である。

【図１７】各群のマウスの関節炎係数（スコアー）を示
すグラフである。

【図１８】各群のマウスの抗II型コラーゲン抗体価を示
すグラフである。

【図１９】未処置群のマウスの後肢関節部の超薄切片を
ヘマトキシリン−エオシンで染色した顕微鏡写真（×４
０）である。

【図２０】処置群のマウスの後肢関節部の超薄切片をヘ
マトキシリン−エオシンで染色した顕微鏡写真（×４
０）である。

【図２１】正常マウスの後肢関節部の超薄切片をヘマト
キシリン−エオシンで染色した顕微鏡写真（×２０）で
ある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者江口文陽群馬県高崎市倉賀野町1884−１−Ａ103 (72)発明者吉本博明熊本県人吉市大野町4556−266

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒメマツタケ（Agaricus blazei Mur
r.）の抽出物を有効成分とする免疫調節薬。
【請求項２】抗自己免疫性疾患作用を有する請求項１
記載の免疫調節薬。
【請求項３】抗膠原病作用を有する請求項１記載の免
疫調節薬。
【請求項４】抗関節リウマチ作用を有する請求項１記
載の免疫調節薬。
【請求項５】抗全身性エリテマトーデス作用を有する
請求項１記載の免疫調節薬。
【請求項６】前記ヒメマツタケはヒメマツタケＣＪ−
０１株（Agaricus blazei Murr. CJ-01）である請求項
１乃至５のいずれか１項に記載の免疫調節薬。
【請求項７】前記ヒメマツタケＣＪ−０１株はｐＨ
５．５〜７．０、含水率５５〜８０％、Ｃ／Ｎ比２５〜
９５の堆肥培地中で覆土処理され、光照射下で培養され
たものである請求項６記載の免疫調節薬。
【請求項８】前記抽出物は電気泳動によりｐＨ６．
７、４．４及び３．９付近に特異的バンドを有する請求
項６記載の免疫調節薬。
【請求項９】前記抽出物はグルコースα（１−４）結
合及びα（１−６）結合を有しており、ガラクトースβ
（１−６）結合を有している請求項６記載の免疫調節
薬。
【請求項１０】ヒメマツタケ（Agaricus blazei Mur
r.）の抽出物を有効成分とする抗炎症薬。