CN1528333A - 具有保肝降酶作用的中药制剂及其生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种具有保肝降酶作用的中药制剂,该制剂中起保肝降酶作用的成分是银合欢叶的提取物,以银合欢叶提取物为基础,不加或只加适量的药用辅料,按通常的制药工艺制备而成。本发明的实验结果表明,以银合欢叶为原料制成的中药制剂,在高转氨酶动物模型和转氨酶异常升高的病人上应用,结果显示有良好的保肝降酶效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药制剂,特别是一种以银合欢为原料,具有保护肝脏、降低转氨酶作用的中药制剂。
背景技术
银合欢Leucaena leucocephala(L.)是生长在热带亚热带地区的多年生豆科木本植物,耐寒、耐贫瘠、适应性广、速生高产、在中美洲及东南亚一带广泛种植,分布于我国的福建、广东、广西和南等省,东北和西北亦有零星分布。由于银合欢蛋白质和其它营养价值较高、适口性好、易于栽培管理,目前人们将其作为家畜和家禽的优质饲科。在药用方面,古代人们将银合欢入药,有古书记载:“合欢踢(免除)岔(怒气)”,意即可平息怒气。树皮味甘平,安五脏和心志,久服能轻身明目,欢乐无忧。目前广东、广西、海南的民间还常采集其叶作茶饮用,作为清热解毒、消食积及解渴开胃的凉茶。现代科学技术对银合欢的化学成分进行了分析,如万方数据库摘录了东北师范大学通过分步结晶法、硅胶低压柱层法、薄层色谱法等分离手段,从银合欢叶提取液的乙酸酯萃取物中分离得4个化合物(王恩举,1999年学位论文),并用紫外光谱、红外光谱、拉曼光谱、<’1>H核磁共振和<’13>C核磁共振波谱对所得化合物进行了结构鉴定,分别为:槲皮素、槲皮素-3-0阿拉伯糖甙、槲-3-0-鼠李糖甙、杨梅素3-0-鼠李糖甙。对正丁醇萃取物主要通过聚酰胺柱色谱进行了研究,初步确定所含甙元主要为槲皮素,另外还有黄颜木素等少量其它黄酮醇。组成糖元的单糖主要包括葡萄糖、半乳糖、鼠李糖以及少量阿拉伯糖和甘露糖。正丁醇部分聚酰胺柱色谱的水洗脱液富含氨基酸、用氨基酸自动分析仪对所含游离氨基酸作了分析,共检出十三种氨基酸,并测得其相对含量。
经检索,银合欢叶还没有列入国家药品监督管理部门认可的中药材标准(或目录)中,也没有与入药有关的公开文献报道。
技术内容
本发明人的研究和试验结果表明,银合欢叶具有保肝降酶作用。本发明人从银合欢叶中提取具有保肝降酶作用的有效部位(或有效部位群)后,进一步制备成中药制剂,应用于临床,在高转氨酶动物模型和转氨酶异常升高的病人身上应用,结果显示有良好的保肝降酶效果。
本发明的中药制剂的成分和重量百分含量如下(以干物质计):
银合欢叶提取物 0.01-100%
辅料 0-99.99%
以上所述的银合欢叶提取物至少含有以下成分的一种或几种:黄酮类化合物、生物碱、皂苷类。
以上所述的辅料包括起赋形、防腐、赋香、矫味等作用的药物填充剂,从国际或我国规定的药用辅料中选取。
本发明的保肝降酶中药制剂,利用通用的中药制药工艺,可生产得到不同的口服给药剂型,主要有口服液、片剂、胶囊剂、含片、颗粒剂等;还可以制成注射给药制剂,如注射剂、静脉输液等。
本发明的保肝降酶中药制剂,可以银合欢叶为君药,加入其它中药与之配伍,制成复方中药制剂。
以下及具体的例子说明生产工艺过程:
1.银合欢叶提取物的制备
提取方法采用通常的制药工艺和方法,例如水煮法、水提醇沉法、渗漉法、树脂吸附法、萃取法、超临界提取法等,无论以何方法制备,均以提取物中含有保肝降酶的有效部位(或有效部位群)为原则,即提取物中应至少含有以下成分的一种或几种:黄酮类化合物、生物碱、皂苷类。
银合欢叶可采用干品或鲜品,但推荐使用干品,以便于贮存,并保证原料品质的一致性。
银合欢叶提取物最终可制备成稠膏或干膏。以下是提取方法介绍:
方法一(水提法)
取银合欢叶粗粉,加水煎煮3-4次,合并水煮液,过滤,浓缩成稠膏或干膏,其主要成分是黄酮类化合物、生物碱和皂苷类。
方法二(水提醇沉法)
以上方法一所得水煮液,按制药工艺中贯行的“水煮醇沉”方法处理。如:水煮液过滤,浓缩到比重1.2(80℃测定),按浓缩液体积,加入2倍体积的95%乙醇,48小时后取上清液,乙醇蒸馏回收,上清液浓缩成稠膏或干膏,其主要成分是黄酮类化合物、生物碱和皂苷类。
方法三(醇提取法)
取银合欢叶粗粉,加95%的乙醇回流提取3-4次,合并提取液,过滤,浓缩成稠膏或干膏,其主要成分是黄酮类化合物、生物碱和皂苷类。
方法四(渗漉法)
取银合欢叶粗粉,用70%的乙醇渗漉,收集漉出液,过滤,浓缩成稠膏或干膏,其主要成分是黄酮类化合物、生物碱和皂苷类。
方法五(树脂吸附法)
取银合欢叶粗粉,加水煎煮3-4次,合并水煮液,过滤,滤液通过D101大孔树脂层析柱,用大量的水洗柱后,用75%乙醇洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,所得提取物的主要成分为黄酮类化合物。
方法六(萃取法)
取银合欢叶粗粉,加水煎煮3-4次,合并水煮液,过滤,浓缩至1∶1(ml∶g生药),以乙酸乙酯萃取;收集乙酸乙酯相,回收乙酸乙酯,所得提取物的主要成分为黄酮类化合物和皂苷类。
方法七(超临界提取法)
取银合欢叶粗粉,以超临界CO2(二氧化碳)为提取溶媒,以乙醇为夹带剂,进行二氧化碳超临界提取,所得提取物的主要成分为黄酮类化合物和生物碱。
具体实施方式
降糖中药制剂的制备实例
实施例一
取以上提取方法一所得干膏,粉碎,与辅料混合后,直接填充入胶囊,每粒胶囊相当于1.5g生药材(干银合欢叶)。
实施例二
取以上提取方法三所得干膏,加适量淀粉,压成片剂,基片重0.3g,每片相当于2g生药材(银合欢叶)。
实施例三
取以上提取方法五所得提取物,加入适量结晶型山梨醇和水溶性淀粉,压制成舌下含片。
实施例四
方法二所得干膏,加入适量蔗糖糖粉,以75%乙醇水溶液润湿后制粒,烘干,制成颗粒剂。
实施例五
方法二水煮醇沉处理后,浓缩到比重1∶1(ml浓缩液∶g干药材),加入浓缩液重量1.5倍的蔗糖,煮沸溶解,制成口服液。
本发明的保肝降酶中药制剂,银合欢叶为君药,加入其它中药与之配伍,制成复方中药制剂。例子如下:
例1 银合欢叶50g 黄芪10g
水煎服,每日一剂。或者以惯常的中成药制备方法,制成中成药后服用。方中的银合欢叶起降酶作用,黄芪可增加免疫功能,增强体质,起辅助作用。
例2 银合欢叶50g 芒果叶15g 马齿苋10g
水煎服,每日一剂。或者以惯常的中成药制备方法,制成中成药后服用。方中的银合欢叶起降酶作用;马齿苋可增加免疫功能,增强体质;芒果叶具有抗病毒和利尿作用。此方可用治疗病毒性肝炎引起的转氨酶升高。
例3 银合欢叶30g 叶下珠15g 苦参5g
水煎服,每日一剂。或者以惯常的中成药制备方法,制成中成药后服用。方中的银合欢叶起降酶作用;叶下珠、苦参可增加免疫功能,清热解毒,增强体质,具有抗病毒作用。此方可用治疗病毒性肝炎引起的转氨酶升高。
例4 银合欢叶80g 茵陈20g
水煎服,每日一剂。或者以惯常的中成药制备方法,制成中成药后服用。方中的银合欢叶起降酶作用;茵陈具有抗病毒和利尿作用,可用治疗病毒性肝炎引起的转氨酶升高。
本发明的效果和突出的实质性特点
为了验证本发明银合欢提取物的保肝降酶作用,我们进行了药效学试验和毒性试验,方法及结果如下:
1实验材料
1.1药物和试剂:银合欢叶片(每片相当于2g生药)由李学坚提供,用以上“制备实例二”工艺制得。实验时在研钵中定量加入蒸馏水研磨后配制成实验所需的浓度。阿斯匹林肠溶片,为桂林南药股份有限公司产品,批号:020301。联苯双酯滴丸,北京协和药厂产品,批号:02050102。速显HBsAg酶联免疫诊断试剂盒,批号:030233,速显HBeAg酶联免疫诊断试剂盒,批号:030245,由厦门新创公司提供。人乙型肝炎病毒感染血清:HBsAg,HBeAg阳性血清(滴度1∶64),由广西医科大学附属医院住院乙型肝炎患者提供。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒,批号:030303;天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒,批号:020822;总蛋白(TP)试剂盒,批号:021122;白蛋白(ALB)试剂盒,批号:030128,均为四川省迈克科技有限责任公司产品。四氯化碳(CCL4),分析纯,为广东西陇化工厂产品,批号:020054。二甲苯,分析纯,为武汉有机合成化工厂产品,批号:020032。
1.2实验动物:NIH种小鼠,体重20-24g;SD种大鼠,体重为180-200g,雌雄兼用;均由广西壮族自治区中医药研究所动物研究室提供,普通级。大鼠和小鼠分性别饲养于空调实验室内,室温22±2℃,湿度60±5℃,喂标准颗粒饲料,自由饮水和摄食。
1.3仪器:722型光栅分光光度计,上海分析仪器三厂产品。宝特-311S型酶标光度计(美国产)。LD5-2A型医用离心机,北京医用离心机厂生产。不锈钢代谢笼,按文献方法自制。FA/JA型万分之一电子天平,上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂生产。
1.4统计学处理:实验所得数据采用联想电脑中微软Excel处理,以均数±标准差(X±S)表示,进行T检验比较组间差异显著性。
2方法与结果
2.2对病毒性乙型肝炎HBsAg、HBeAg体外研究
(1)选择4份乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBeAg)阳性血清,用磷酸缓冲液按1∶2将血清作倍比稀释,经酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定原血清及不同稀释度血清样品的HBsAg或HBeAg含量(光密度,O.D值)。当被测血清样品O.D值≥阴性血清对照O.D值的2.1倍时为阳性,阳性血清样品的最高稀释度为原血清HBsAg或HBeAg的滴度.(2)将银合欢叶片配成0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125g生药/ml等6种不同浓度,将以上不同浓度的药液分别与等容量的滴度为1∶64的乙型肝炎血清混合;用磷酸缓冲液(PBS,pH7.4)与肝炎血清混合作阳性对照;PBS与阴性对照血清混合作阴性对照,置37℃水浴中作用24h后,按ELISA法在酶标仪上测定各血清样品的O.D值。结果见表1。
表1 银合欢叶片体外对HBsAg、HBeAg HCV的抑制作用(n=4)
组别 药物浓度 HBsAg 抑制率 HBeAg 抑制率%
(g/ml) (X±S) (%) (X±S) (%)
银合欢叶片 0.4 1.089±0.456** 61.1 0.509±0.084** 76.5
银合欢叶片 0.2 1.367±0.240** 51.3 0.518±0.081** 76.2
银合欢叶片 0.1 1.399±0.225** 50.1 1.507±0.215** 30.7
银合欢叶片 0.05 1.575±0.037** 43.8 1.633±0.389** 24.9
银合欢叶片 0.025 2.294±0.435 18.2 1.741±0.120** 19.9
银合欢叶片 0.013 2.505±0.296 10.6 1.871±0.1 33* 13.9
阳性对照 2.805±0.104 — 2.174±0.031 —
与阳性对照比较:*P<0.05;**P<0.01
体外实验表明,与阳性对照比较,银合欢叶片在不同浓度时对HBsAg有明显抑制作用,抑制率在61.0-10.6%。并且6种药物浓度,均对HbeAg有明显的抑制作用,抑制率在76.5-13.9%之间。提示银合欢叶片在体外对HbsAg、HbeAg均有明显的抗乙肝病毒作用。
2.2对CCl4致急性肝损伤小鼠的保护作用
取小鼠50只,随机分为正常对照组、模型对照组(蒸馏水,20ml/kg),银合欢叶片大小剂量(40g生药/kg,20g生药/kg)组,以及联苯双酯(0.2g/kg)组。动物每天灌胃(ig)给药1次连续10d。末次给药1h后除正常对照组外,各鼠ip1%CCl4花生油溶液10ml/kg。20h后从小鼠眼眶静脉丛取血,2500rpm/min离心20min,分离血清。测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,以及总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量,然后按试剂盒方法制作转氨酶活性标准曲线,查出丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶活性单位,并按试剂盒方法给出的计算公式,计算出总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量,采用微软Excel处理,以均数±标准差(X±S)表示,进行T检验比较组间差异显著性。结果见表2。
表2 银合欢叶片对CCl4致急性肝损伤小鼠的保护作用(X±S,n=10)
组别 剂量 ALT AST TP ALB
g/kg-1 (u/L) (u/L) (g/L) (g/L)
对照组 21.4±7.9 56.4±11.0 55.6±6.1 39.9±3.2
模型组 230.4±36.8### 132.2±16.3### 50.1±3.2# 35.6±3.5##
联苯双酯 0.2 76.7±30.3*** 107.9±9.7*** 53.4±3.1*** 39.4±1.8**
银合欢叶片 40 197.6±25.3* 123.2±13.7 57.5±6.8** 36.6±3.4
银合欢叶片 20 186.5±48.4* 125.0±16.28 50.8±7.1 35.8±4.5
与对照组比较:#P<0.05;##P<0.01;###P<0.001。
与模型组比较:*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001
结果表明:与模型组比较,银合欢叶片大小剂量组和联苯双酯组能显著降低ALT、AST活性,并能升高TP和ALB含量,小剂量组对AST也有降低趋势,但差异不显著(P>0.05),提示银合欢叶片具有较好的保肝降酶作用。
2.4抗炎作用
小鼠耳廓肿胀试验。取小鼠40只,随机分为4组。设正常对照组,阿斯匹林组(0.2g/kg),银合欢叶片大小剂量组(40g生药/kg,20g生药/kg),每天灌胃给药1次,正常对照组给予等体积蒸馏水,连续7天。于末次给药后0.5小时,用微量注射器取20ul二甲苯(化学致炎剂,分析纯)滴涂于小鼠右耳,待15min后通过拉颈椎处死小鼠。立即用口径为6mm的打孔器,沿着小鼠左右耳廓相同部位打孔取材,然后用万分之一电子天平分别称重,以两耳片重量(mg)的差值作为肿胀程度指标,求出每只小鼠的平均值,采用T检验统计学处理,比较药物组与对照组之间差异,并求出百分抑制率(%)。结果见表3。
表3 银合欢叶片对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀的影响
组别 剂量 两耳片重量差 抑制率
(g/kg) (X±S) (%)
对照组 23.4±4.0
阿斯匹林 0.2 15.9±5.3** 32.1
银合欢叶片 40 18.8±4.8* 19.6
银合欢叶片 20 19.3±4.1* 17.5
与对照组比较:#P<0.05;##P<0.01;###P<0.001。
与模型组比较:*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001
结果表明:与对照组比较,阿斯匹林组和银合欢叶片大小剂量组对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀具有明显的抑制作用,抑制率分别为32.1、19.6、17.5%。提示银合欢叶片具有明显的抗炎作用。
3急性毒性
取小鼠30只,雌雄各半,体重18-22g,禁食12h,ig给银合欢叶片进行初步毒性试验,掌握100%-0%动物死亡的剂量范围。另取小鼠30只,雌雄各半,体重18-22g,均分为3组,禁食12h,分别ig银合欢叶片540,432,346g生药/kg(0.3ml/10gw),观察7天,给药后约30min动物出现活动减少,进而出现昏睡,紫绀,呼吸衰竭而死亡,经解剖,未见明显器质性病变。死亡时间均在24h内,死亡率分别为90,60,10%。用简化机率法进行计算,LD50为426g生药/kg,95%可信限为468-387g生药/kg。
4结论
实验研究表明,在抗乙肝病毒体外实验中,银合欢叶片在6种不同药物浓度时对HBsAg和HBeAg均有明显抑制作用。银合欢叶片大小剂量组能显著降低CCL4所致急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性,并能升高TP和ALB含量。银合欢叶片大小剂量组对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀具有明显的抑制作用。结果提示银合欢叶片体外试验具有明显的抗乙肝病毒作用;在以上动物模型中,具有保肝降酶、抗炎作用。急性毒性试验结果表明,银合欢叶片ig给药的LD50为426g生药/kg,95%可信限为468-387g生药/kg,相对于临床拟用剂量,是安全的。
六、临床效果
因本发明制得的“银合欢叶片”在3例志愿者身上进行临床应用实验,临床结果全部评为“显效”。其中的一个例子如下:
程××,男,广西南宁市人,45岁,临床表现:大便不正常,大便每日2-3次,为黄色软便,便前有腹痛,腹部烧灼感,排气增多,每次量不多,有排便未净感。西医诊断为转氨酶升高。服用以上实例二制得的银合欢叶片,每日3次,每次3粒。用药15天后症状减轻,大便次数明显减少,大便基本成形或干糊状,临床症状减轻,粪常规检查基本正常。临床治疗效果评价为“显效”。
Claims (6)
1.一种保肝降酶中药制剂,其特征在于它含有从银合欢叶中提取的提取物以及辅料,其成分和重量百分含量如下:
银合欢叶提取物 0.01-100%
辅料 0-99.99%
2.根据权利要求1所述的保肝降酶中药制剂,其特征在于银合欢叶提取物至少含有以下成分的一种或几种:黄酮类化合物、生物碱、皂苷类。
3、根据权利要求1所述的保肝降酶中药制剂,其特征在于与该中药制剂所述的辅料,从国际或我国规定的药用辅料中选取。
4.根据权利要求1所述的保肝降酶中药制剂,其特征在于银合欢叶提取物保肝降酶中药制剂包括口服给药制剂和注射给药制剂。
5、一种权利要求1所述的保肝降酶中药制剂的生产方法,其特征在于用以下方法的一种或几种的组合制成稠膏或干膏:水煮法、水提醇沉法、渗漉法、树脂吸附法、萃取法、超临界提取法。
6、根据权利要求1所述的保肝降酶中药制剂的生产方法,其特征在于将银合欢叶作为君药,加入其它中药与之配伍,做成复方中药制剂。
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2003
- 2003-10-04 CN CNA2003101112059A patent/CN1528333A/zh active Pending
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C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |