CN1482231A - 蛇葡萄素保健酒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种含有蛇葡萄素作为添加剂的酒及其制备方法。酒包括酒精酒和果汁酒。酒中蛇葡萄素含量可以是0.1－53％w/v(重量体积百分比(克/升))，优选是2％w/v至蛇葡萄素在各种酒中的溶解饱和度的量。可以直接将所述量的蛇葡萄素加到酒中搅拌均匀，制得含有蛇葡萄素作为添加剂的酒。

Description

蛇葡萄素保健酒
本发明属于保健食品领域。
文献Walter Karrerr，Birkhauser Verlag，Bassel undstuttgart(1958)，P.652，NO：1640公开了蛇葡萄素的结构式，
但是没有对蛇葡萄素的活性进行充分的研究。
本申请人令人惊奇地发现蛇葡萄素在保健品领域具有广泛的用途。
本发明人发现蛇葡萄素具有预防和/或恢复酒精性肝损伤的功能，具有保肝护肝，增强免疫系统免疫力的功能，还具有降血糖和降血脂作用，可以作为添加剂加到各种类型的酒中，其与酒相匹配，能够不改变酒的原来的色度和清澈度和味觉。本发明的一个目的是提供一种含有蛇葡萄素作为添加剂的酒及其制备方法。酒包括果汁酒、勾兑酒和发酵酒。酒中蛇葡萄素含量可以是0.1-53％w/v(重量体积百分比(克/升)，下文相同)，优选是2％w/v至蛇葡萄素在各种酒中的溶解饱和度的量。可以直接将所述量的蛇葡萄素加到酒中搅拌均匀，制得含有蛇葡萄素作为添加剂的酒。本发明的另一个目的是提供蛇葡萄素作为添加剂在制备各种酒中的用途。
蛇葡萄素可以从蛇葡萄属植物中提取，也可以用上述文献公开的方法制备。
通过下面的实施例详细说明本发明。但是应该理解这些实施例只是说明本发明，而不是在任何方面限制本发明的范围。实施例1：蛇葡萄素作为添加剂的果酒的制备小枣酒1000毫升，蛇葡萄素0.5g，
上述组分搅拌均匀，得到原小枣酒原色的液体，饮用味觉和未加蛇葡萄素的小枣酒一样。实施例2：蛇葡萄素作为添加剂的白酒的制备茅台酒1000ml，蛇葡萄素10g，
上述组分搅拌均匀，得到澄清透明的液体，饮用味觉和未加蛇葡萄素的茅台酒一样。实施例3：蛇葡萄素作为添加剂得白酒1的制备用医用酒精和水配制成56度白酒1000ml，加入蛇葡萄素0.5g.
上述组分搅拌均匀，得到澄清透明的液体。实施例4：蛇葡萄素作为添加剂的白酒2的制备用医用酒精和水配制成38度白酒1000ml，加入蛇葡萄素1g.上述组分搅拌均匀，得到澄清透明的液体。实施例5：蛇葡萄素作为添加剂的白酒3的制备用医用酒精和水配制成52度白酒1000ml，加入蛇葡萄素2g.上述组分搅拌均匀，得到澄清透明的液体。实施例6：蛇葡萄素预防和/或恢复酒精性肝损伤的功能1.材料与方法1.1试品：含有蛇葡萄素的保健酒1.2实验动物：成年雄性小鼠(18-22克)，每组10只。1.3实验方法和步骤1.3.1剂量分组及受试样品给予时间
实验设空白对照组、模型对照组和受试品三个剂量组(分别为10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg，分别用医用乙醇配制，浓度分别为0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml，见实施例3、4和5)，用无水乙醇(分析纯)造成肝损伤模型，无水乙醇浓度为50％(以蒸馏水稀释)，小鼠灌胃12-14ml/kgBW(折合乙醇的剂量为6000-7000mg/kg BW)。受试样品给予时间为30天。1.3.2给予受试样品的途径
经口灌胃给予受试样品，并记录每只动物的饲料摄入量或饮水量。1.3.3实验步骤
受试品三个剂量组每日经口灌胃给予受试样品的乙醇溶液0.2ml，空白对照组和模型对照组给予蒸馏水。动物每周称重两次。给予受试样品结束时将模型对照组及各样品组一次灌胃给予50％乙醇12ml/kg BW，空白对照组给蒸馏水，禁食15小时处死动物，进行各项指标的检测及病理组织学检查。1.3.4检测指标
肝组织中丙二醛(MDA)  还原型谷胱甘肽(GSH)
甘油三酯(TG)的含量1.4肝匀浆中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)测定方法1.4.1原理
MDA(malondiadehycle)是细胞膜脂质过氧化的终产物之一，检测其含量可间接估计脂质过氧化的程度，MDA与硫代巴比要酸在酸性条件下共热，形成粉红色复合物，吸收峰在535nm，具此可测得MDA的含量。1.4.2仪器与试剂
仪器721分光光度计、微量加样品、恒温水浴锅、普通离心机、混旋器、具塞离心管、组织匀浆器
试剂0.2M乙酸盐缓冲液PH3.5
0.2M乙酸溶液185ml
0.2M乙酸钠溶液15ml
1mmol/L四乙氧基丙烷(贮备液，4℃保存3个月)，临用前用水稀释成40nmol/ml
8.1％十二烷基硫酸钠SDS
0.8％硫代巴比妥酸TBA
0.2M磷酸盐缓冲液PH7.4
0.2M磷酸氢二钠1920ml
0.2M磷酸二氢钾480ml1.4.3实验步骤1.4.3.1样品制备
组织匀浆样品：取一定量的所需脏器，生理盐水冲洗、拭干、称重、剪碎，置匀浆器中，加入0.2M磷酸盐缓冲液，以2000r/min匀将10s，间歇30s，反复进行3次，制成5％组织匀将(W/V)，3000r/min离心5~10min，取上清液待测。1.4.3.2样品测定
                                         表1
试剂                       空白管       样品管                标准管
5％组织匀浆                             0.1ml
40nmol/ml四乙氧基丙烷                                         0.1ml
8.1％SDS                   0.2ml        0.2ml                 0.2ml
0.2M乙酸盐缓冲液           1.5ml        1.5ml                 1.5ml
0.8％TBA                   1.5ml        1.5ml                 1.5ml
H2O                       0.8ml        0.7ml                 0.7ml
混匀，避光沸水浴60min，流水冷却，于532nm比色1.4.3.3计算
Figure A0312388100051
A：空白管吸光度B：样品荧吸光度F：四乙氧基丙烷吸光度C：四乙氧基丙烷浓度K：稀释倍数1.4.3.4数据处理及结果判定
数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值/F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。结果判定
在模型成立的前提下，受试样品组的MDA含量与模型对照组比较，差异有显著性，判定该指标结果阳性。1.5.肝匀浆还原型谷胱甘肽(GSH)测定方法1.5.1原理
GSH和5，5′-二硫对硝基甲酸(DTNB)反应在GSH-Px催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基甲酸阳离子，于423nm波长有最大吸收峰，测定该离子浓度，即可计算GSH的含量。1.5.2试剂
0.9％生理盐水
4％磺基水杨酸溶液
0.1mol/L PBS溶液(pH＝8.0)
Na2HPO4  13.452g
KH2PO4    0.722g
加蒸馏水至1000ml
0.004％DTNB溶液：称取DTNB 40mg溶于1000ml的0.1mol/L PBS溶液
(pH＝8.0)中。
叠氮纳缓冲液
NaN3       16.25mg
EDTA-Na2    7.44mg
Na2HPO4     1.732g
NaH2PO4     1.076g
加蒸馏水至1000ml，用少量HCl、NaOH调pH7.0，4℃保存。
标准溶液：称取还原型GSH15.4mg，加叠氮纳缓冲液至50ml，终浓度为
1mmol/L1.5.3方法1.5.3.1样品测定：取肝脏0.5g加生理盐水5ml充分研磨成细浆(10％肝匀浆)，混匀后取浆液0.5ml加4％磺基水杨酸0.5ml混匀，室温下3000rpm离心10分钟，取上清液即为样品。
                            表2
                      测定管                   空白管
    样品              0.5ml                     -
4％磺基水杨酸         -                         0.5ml
    DTNB              4.5ml                     4.5ml混匀，室温放置10分钟后，412nm处测定吸光度。1.5.3.2标准曲线
                                    表3
                1      2           3        4       5        6
Immol/L(ml)     0      0.05        0.10     0.15    0.20     0.25
生理盐水(ml)    0.50   0.45        0.40     0.35    0.20     0.25
DTNB(ml)        4.50   4.50        4.50     4.50    4.50     4.50
GSH量(μmol/L)  0      100         200      300     400      5001.5.3.3计算
样品GSH含量(μmol/g肝组织)＝对应曲线浓度值((μmol/L)÷50g/L1.5.4数据处理和结果判定
数据采用方差分析，但需方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
结果判定
在模型成立的前提下，受试样品组的还原型GSH含量与模型对照组比较，差异有显著性，判定该指标结果阳性。
1.6肝匀浆中甘油三脂(TG)测定方法
1.6.1测定方法：采用甘油三脂测定试剂盒(甘油磷酸氧化酶过氧化物酶法)测定10％肝匀浆中的甘油三脂含量。与血清甘油三脂测定方法相同，以等量10％肝匀浆替代血清按操作说明进行操作，测定结果以mmol/g肝重表示。
1.6.2数据处理和结果判定
数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≥0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计，对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
结果判定
在模型成立的前提下，受试样品组的TG与模型对照组比较，差异有显著性，判定该指标结果阳性。1.7肝脏病理组织学变化，诊断标准和结果判定1.7.1实验材料：从肝左叶中部做横切面取材，冰冻切片，苏丹III染色。1.7.2镜检：从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用40倍物镜连续观察整个组织切片。主要观察脂滴在肝脏的分布、范围和面积。1.7.3评分标准
肝细胞内脂滴散在，稀少    0分
含脂滴的肝细胞不超过1/4   1分
含脂滴的肝细胞不超过1/2   2分
含脂滴的肝细胞不超过3/4   3分
肝组织几乎被脂滴代替      4分1.7.4数据处理和结果判定
采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差剂性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性：F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变是转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍来达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。结果判定
在模型成立的前提下，模型对照组与受试样品任何一个剂量组之间，脂肪变性减轻，有统计学上的差异，可判断为阳性结果。1.8结果判定：满足任一条件，可判定受试样品具有对酒精性肝扣内务有辅助保护作用1.8.1肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标结果阳性。1.8.2.肝脏MDA、还原型GSH和TG三项指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性。2.结果2.1肝匀浆中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)
由表4可知，损伤对照组与阴性对照组相比，肝组织中MDA含量明显升高，差异有极显著性(P＜0.01)；受试物各剂量组MDA含量比损伤对照组降低，且有极显著性差异(P＜0.01)。说明受试物可降低肝组织中MDA含量。2.2肝匀浆还原型谷胱甘肽(GSH)
由表4可知，损伤对照组与阴性组相比GSH含量明显降低，差异有极显著
性(P＜0.01)。受试物各剂量组GSH含量高于损伤对照组，差异有显著性
(P＜0.01)。说明受试物可有效阻止GSH的耗竭。2.3肝匀浆中甘油三脂(TG)
由表4可知，损伤对照组与阴性对照比较，肝脏TG含量明显升高，差异有极显著性(P＜0.01)。受试物各剂量组TG含量明显低于损伤对照组，差异有显著性(P＜0.05)。说明受试物可降低肝脏中TG的含量。
           表4  蛇葡萄素对丙二醛、还原型谷胱甘肽和甘油三脂的影响
  组别   动物数         MDA(μmol/g肝重)          GSH(μmol/g肝重)           TG(mmol/g肝重)
  平均值   P值   平均值   P值   平均值   P值
  对照组   10   7.59±0.59   0.000   15.34±1.26   0.000   10.08±1.20   0.000
  模型组   10   17.08±2.30   8.89±0.96   50.94±1.22
  低剂量组   10   11.96±1.14   0.000   12.03±0.91   0.000   39.85±2.89   0.000
  中剂量组   10   11.75±1.58   0.000   12.14±1.05   0.000   33.51±2.37   0.000
  高剂量组   10   13.44±1.49   0.001   11.08±1.16   0.000   39.52±2.03   0.000
2.4肝脏病理组织学检查：取肝脏(左大叶)10％福尔马林固定，冰冻切片苏丹
III脂肪染色，苏木精复染，封片，镜检，结果见表5。
1)阴性对照组动物：有3例见肝细胞出现轻度脂肪变性。
2)损伤对照组动物：肝细胞均出现弥漫性脂肪变性，脂滴分级为+++~++++级。
3)中、高剂量组肝细胞脂肪变性程度明显低于阳性对照组，且差异有显著性
(P＜0.05)。低剂量组肝细胞脂肪变性程度与阳性对照组比较无显著性差异。
                       表5对肝脏脂滴分布的影响
组别                    动物数            总积分          P值
(mg/kg)                   (只)
阴性对照(0)                   10                     3
损伤对照(0)                   10                     39##        ＜0.01
低剂量(10)                    10                     29
中剂量(20)                    10                     28*         ＜0.05
高剂量(40)                    10                     27*         ＜0.05
与阴性对照组比较：##P＜0.01；与损伤对照组比较：*P＜0.053..结论：试验结果表明，蛇葡萄素可有效地阻止乙醇导致肝脏肝脏GSH耗竭和MDA、TG升高，减轻肝细胞脂肪变性，具有预防乙醇性肝损伤功能。实例7蛇葡萄素的降血糖的试验1.材料与方法1.1.受试物：含有蛇葡萄素的原料(其中蛇葡萄素的含量为73％)1.2.试验动物和检测条件
选用健康清洁级雌性昆明种小鼠，体重24±2g，动物饲料执行标准GB14924-94。检测环境条件，温度范围20-25℃，相对湿度范围40-70％。1.3.剂量选择
试验分正常动物和高血糖模型动物两批进行，各设1个对照组(蒸馏水)和受试物0.25、0.50、1.50g/kg剂量组，分别相当于人推荐摄入量的5、10和30倍，灌胃量均为0.1ml/10g。1.4.主要仪器与试剂
四氧嘧啶(Alloxan)：Sigma公司；50％葡萄糖注射液：盐城新曹制药厂。
SUPER GLUCOCARD II GT-1640型超级血糖测定仪：日本京者第一科学株式会社生产：GLUCOCARD血糖试纸：日本京者第一科学株式会社生产。1.5.实验方法1.5.1.正常动物：禁食5小时后，取小鼠测血糖。筛检空腹血糖在正常范围内的小鼠40只，按血糖水平随机分为四组，每组10只，分别为正常对照组和样品各剂量组(组间差不大于1.1mmol/L)》1.5.2.高血糖模型动物：严格禁食24小时后，小鼠尾静脉注射四氧嘧啶50mg/kgBW，6天后禁食5小时，测血糖。筛检空腹血糖值＞10mmol/L的小鼠40办，按血糖水平随机分为四组，每组10只，分别为模型对照组和样品各剂量组(组间差不大于1.1mmol/L)。1.5.3.空腹血糖和糖耐量的测定：按设计剂量对小鼠连续灌胃给受试物30天，然后禁食5小时，给予葡萄糖1.5g/kgBW灌胃，于0、0.5、2.0小时三时相分别测定血糖值。1.6.统计方法
全部实验数据采用SPSS/PC软件包(单因素方差分析)在微机上处理。2.结果2.1.蛇葡萄素对正常小鼠体重的影响
                    表6各组正常小鼠的初始体重、中期体重、结束体重
组别                初始体重                 中期体重           结束体重
                    动物数    体重(g)        动物数  体重(g)    动物数   体重(g)
正常对照            10        23.4±1.0      10      30.5±1.5  10       32.4±1.6
受  0.25g/kg        10        23.6±1.1      10      31.2±1.2  10       33.1±1.6
试  0.50g/kg        10        23.7±1.2      10      30.9±1.6  10       32.3±1.9
物  1.50g/kg        10        23.5±1.2      10      31.1±1.2  10       33.5±1.5
F值                           0.113                  0.478               0.369
P值                           0.952                  0.698               0.790
注：受试物各剂量组小鼠体重在各试验期和正常对照组比较，差异均无显著意义(方差分析，P＞0.05)2.2.蛇葡萄素对正常小鼠空腹血糖的影响
                  表7  蛇葡萄素对正常小鼠空腹血糖的影响
     组别        动物数         空腹血糖值(mmol/L)      差值
                 (只)   试验前      试验后
   正常对照       10    4.7±0.5    4.6±0.7            0.1±06
受    0.25g/kg    10    4.5±0.6    4.4±0.7            0.1±1.1
试    0.50g/kg    10    4.6±0.8    4.4±0.8            0.2±1.0
物    1.50g/kg    10    4.4±0.7    4.4±0.7            0.0±0.5
      F值               0.385       0.303               0.098
      P值               0.758       0.819               0.958
注：受试物各剂量组空腹血糖值和正常对照组比较，差异均无显著性意义(方差分析，P＞0.05)。2.3.蛇葡萄素对正常小鼠餐后血糖的影响
                             表8  蛇葡萄素对正常小鼠餐后血糖的影响
组别           动物数        葡萄糖       0h         血糖值(mmol/L)
                (只)        (g/kgBW)                 0.5h       2h
正常对照         10            1.5        4.6±0.7   10.4±1.2  5.5±0.7
受  0.25g/kg     10            1.5        4.4±0.9   10.7±1.1  5.1±1.1
试  0.50g/kg     10            1.5        4.5±0.8   10.6±1.7  5.1±1.0
物  1.50g/kg     10            1.5        4.5±0.9   10.4±1.4  5.2±1.7
F值                                       0.311      0.221      0.518
P值                                       0.823      0.865      0.664注：受试物各剂量组餐后血糖值和正常对照组比较，差异均无显著性意义(方差分析，P＞0.05)。2.4.蛇葡萄素对正常小鼠糖耐量的影响
              表9蛇葡萄素对正常小鼠糖耐量的影响
组别         动物数    血糖升高及降低幅度(mmol/L)
              (只)      0.5h-0h            0.5h-2h
正常对照           10    5.8±0.9    4.8±0.9
受  0.25g/kg       10    6.4±0.5    5.6±1.1
试  0.50g/kg       10    6.0±1.1    5.6±1.1
物  1.50g/kg       10    6.0±1.3    5.4±1.2
F值                      0.995       1.015
P值                      0.406       0.393注：受试物各剂量组糖耐量值和正常对照组比较，差异均无显著性意义(方差分析，P＞0.05)。2.5.蛇葡萄素对引起的高血糖小鼠体重的影响
           表10各组高血糖模型小鼠的初始体重、中期体重、结束体重
组别          初始体重           中期体重                   结束体重
              动物数 体重(g)     动物数    体重(g)          动物数    体重(g)
正常对照      10     24.3±1.3   10        30.7±2.0        10        31.2±1.9
受  0.25g/kg  10     24.4±2.5   10        31.7±2.1        10        32.5±2.3
试  0.50g/kg  10     24.2±1.3   10        31.6±2.5        10        32.2±2.8
物  1.50g/kg  10     24.2±1.4   10        31.1±1.8        10        31.5±1.5
F值                  0.273                 0.569                      1.423
P值                  0.845                 0.628                      0.250
注：受试物各剂量组各阶段体重和模型对照组比较，差异均无显著性意义(方差分析，P＞0.05)。2.6.蛇葡萄素对引起的高血糖小鼠空腹血糖的影响
      表11蛇葡萄素对高血糖模型小鼠空腹血糖的影响
      组别        动物数            空腹血糖值(mmol/L)      差值
                  (只)      试验前         试验后
    正常对照       10       22.9±3.3      20.4±5.1        2.5±4.2
受    0.25g/kg     10       22.6±2.8      13.3±4.1*       9.3±3.6*
试    0.50g/kg     10       22.3±2.5      15.5±6.1        7.8±4.5
物    1.50g/kg     10       22.6±3.5      17.4±6.5        5.2±6.3
F值                         0.067          3.010            4.230
P值                         0.976          0.039            0.015
注：与模型对照组比较，*P＞0.05(q检验)
受试物低剂量组试验后空腹血糖值及前后空腹血糖差值与模型对照组比较，差异均有显著(方差分析，P＞0.05)。2.7.蛇葡萄素对引起的高血糖小鼠餐后血糖的影响
                     表12蛇葡萄素对高血糖型小鼠餐后血糖的影响
组别             动物数          葡萄糖         0h         血糖值(mmol/L)
                 (只)             (g/kgBW)                  0.5h        2h
正常对照         10               1.5           20.4±5.1   31.2±2.7   24.7±3.7
受  0.25g/kg     10               1.5           13.4±4.1*  26.9±4.6   16.8±6.9*
试  0.50g/kg     10               1.5           15.2±6.0   27.9±5.6   17.5±7.9*
物  1.50g/kg     10               1.5           17.6±6.1   28.6±4.8   20.7±7.8
F值                                             3.132       2.415       3.689
P值                                             0.043       0.079       0.032
注：受试物低剂组餐后0h血糖值和低中剂量组餐后2h血糖值与模型对照组比较，差异均有显著(方差分析，P＞0.05)。2.8.蛇葡萄素对引起的高血糖小鼠糖耐量的影响
             表13蛇葡萄素对高血糖模型小鼠糖耐量的影响
组别               动物数             血糖升高及降低幅度(mmol/L)
                   (只)               0.5h-0h             0.5h-2h
正常对照           10                 10.8±3.2           6.5±2.9
受   0.25g/kg      10                 13.9±1.6           10.1±2.9
试   0.50g/kg      10                 12.0±3.3           9.1±3.9
物   1.50g/kg      10                 11.4±2.7           8.7±4.5
F值                                   1.311               2.278
P值                                   0.265               0.120注：受试物各剂量组糖耐量值和模型对照组比较，差异均有显著(方差分析，P＞0.05)。实验结果表明，蛇葡萄素具有调节血糖作用。实施例8：蛇葡萄素降血脂的试验
将动物随机分为4组，正常对照组、阳性对照组、模型对照组、受试物组。每组10只小鼠，一日一次，连续给药10天，正常对照组不给任何药。其余各组小鼠均给高脂乳剂0.5ml/只，形成实验性高血脂，于10天用药后禁食过夜，次日从小鼠眼眶取静脉血，按酶法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。结果表明，模型对照组血清TC、TG值明显升高，HDL-C值下降，与模型对照比较，蛇葡萄素组能明显降低血清TC、TG值，还使HDL-C略有升高，说明蛇葡萄素能抑制高脂乳剂引起的小鼠血脂升高，具有降脂作用。1.材料和方法1.1.  受试物：含有蛇萄萄素的原料(其中蛇葡萄素的含量为65％)，将受
试物用蒸馏水配制成所需浓度的浑浊液供试验用。1.2.实验动物：SPF级Wistar大鼠，体重170-190g，雌性，共55只(5只
备用)。实验温度：23-25℃，相对湿度：65-70％。1.3.饲料：1.3.1.普通基础饲料：Wistar纯鼠料。1.4.剂量分组：实验分为五个组，即正常对照组、高脂模型对照组和受试物低、中、高三个剂量组，剂量分别为0.5、1.0、1.5g/kg.bw，相当于推荐人体日摄入量3g/60kg.bw的10、20、30倍。1.5.实验方法：
大鼠适应性饲养3天后开始实验。取大鼠尾血，测定血清总胆固醇(TCO)、甘油三脂(TGO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-cO)基础值。根据TCO水平，将大鼠随机分成五组，每组10只动物，即低、中、高剂量组，正常对照组和高脂模型对照组。除正常对照组给予基础饲料外，其余各组均给予高脂饲料。三个受试物剂量组按1.0ml/100g.bw的容量经口灌胃给予，正常对照组和高脂模型对照组自由饮水进食。连续给予30天，于灌胃第30天检测TC、TG、HDL-C值。1.6.主要仪器与试剂：SABA-18型全自动生化分析仪(意大利产)，标准质控血清及相应试剂盒均由上海复星长征医学科学有限公司生产。1.7.数据处理：采用STATA统计软件进行统计分析2.  结果2.1.蛇葡萄素对高脂模型动物体重的影响：从表14可见，与模型对照组比较，低、中、高剂量组在第四周时大鼠体重均低于模型对照组，低、中、高剂量组与模型对照组比较差异有显著性(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)。与正常对照组比较，低、中、高剂量组第四周体重均高于正常对照组，但经统计学分析，差异无显著性。2.2.蛇葡萄素对高血脂模型大鼠体重的影响：由表14可知，和对照组相比，蛇葡萄素对大鼠体重无明显影响。
                      表14蛇葡萄素对高血脂模型大鼠体重的影响(g， x±s)
             剂量       动物数                             体重
             g/kg.bw    (只)       始重        第一周      第二周         第三周        终重
正常对照                10         181.4±2.8  202.2±6.2  219.6±4.7     226.2±3.7    230.7±4.0**
模型对照                10         181.7±3.5  208.7±2.6  224.5±4.4     231.4±3.5    237.6±3.7
  0.5                   10         181.5±3.90 207.9±3.2  220.79±3.2    226.9±3.4    232.1±2.8**
  1.0                   10         181.6±2.5  208.6±3.1  222.40±2.3    228.2±3.0    233.9±2.2**
  1.5                   10         184.2±2.3  207.9±3.2  221.5±3.1     226.5±3.0    232.0±3.0**
**与模型对照组比较P＜0.012.3.蛇葡萄素对大鼠总胆固醇含量的影响：从表15可见，与模型对照组比较，实验结束时中、高剂量组总胆固醇含量在实验期间下降明显，经统计学分析，差异有显著性(p＜0.05、P＜0.01)。
            表15蛇葡萄素对大鼠总胆固醇含量的影响(mmol/L， x±s)
剂量           动物数                           总胆固醇
g/kg.bw        (只)           试验前        P值          试验后         P值
正常对照       10             1.80±0.07    0.786        1.81±0.16    0.000
模型对照       10             1.81±0.11    -            3.72±0.34     -
  0.5          10             1.82±0.10    0.812        3.38±0.62    0.272
  1.0          10             1.82±0.10    0.916        3.15±0.56*   0.010
    1.5        10           1.83±0.11      0.765       2.91±0.57**       0.001
*与模型对照组比较P＜0.05，**与模型对照组比较P＜0.012.4.蛇葡萄素对大鼠甘油三酯含量的影响：从表16可见，与模型对照组比较，试验结束时低、中、高剂量组甘油三酯含量下降明显，经统计学分析，差异有显著性(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01)。
表16蛇葡萄素对大鼠甘油三酯含量的影响(mmol/L， x±s)
剂量         动物数                         总胆固醇
g/kg.bw      (只)      试验前          P值            试验后         P值
正常对照     10        1.24±0.25      0.828          1.29±0.11     0.000
模型对照     10        1.26±0.27      -              2.30±0.47     -
  0.5        10        1.22±0.18      0.782          1.95±0.21*    0.012
  1.0        10        1.26±0.17      0.791          1.92±0.22**   0.009
  1.5        10        1.22±0.16      0.645          1.88±0.12**   0.007
*与模型对照组比较P＜0.05，**与模型对照组比较P＜0.012.5.蛇葡萄素对大鼠高密度脂蛋白胆固醇含量的影响：从表17可见，与模型对照组比较，低、中、高剂量组对高密度脂蛋白胆固醇有升高作用，经统计学分析，差异有显著性(P＜0.05)。
表17蛇葡萄素对大鼠高密度脂蛋白胆固醇含量的影响(mmol/L， x±s)
 剂量                 动物数                       高密度脂蛋白胆固醇
g/kg.bw               (只)        试验前            P值        试验后         P值
正常对照              10          1.13±0.12        0.872      1.06±0.11     0.000
模型对照              10          1.12±0.18        -          0.84±0.11     -
  0.5                 10          1.10±0.07        0.656      0.97±0.09*    0.026
  1.0                 10          1.14±0.08        0.859      0.94±0.07*    0.041
  1.5                 10          1.14±0.07        0.798      0.95±0.08*    0.016
*与模型对照组比较P＜0.052.6.蛇葡萄素对大鼠血脂水平的影响：本实验方法为高脂饲料与受试物同时给予，属预防性，故TG、TC下降及HDL-c上升值均与高脂模型对照组比较。由表18可见，中、高剂量组总胆固醇含量下降幅度分别为15.8％、20.2％，低、中、高剂量组甘油三酯含量下降幅度分别为15.9％、17.3％、18.0％，低、中、高剂量组高密度脂蛋白胆固醇含量升高值为4.48、4.98、4.35mg/dl。
                       表18蛇葡萄素对大鼠血脂水平的影响
  剂量               动物数               TC         TG           HDL-C
  g/kg.bw           (只)                 (％)        (％)         (mg/dl)
  0.5               10                   10.1        15.9         4.48
  1.0               10                   15.8        17.3         4.98
  1.5               10                   20.2        18.0         4.35
判断标准：                               下降＞10％  下降＞15％   升高4mg/dl
注：HDL-c升高值(mg/dl)是mmol/L×38.7＝mg/dl换算结果实施例9：蛇葡萄素增强免疫力功能的试验1.蛇葡萄素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
1.1实验目的
观察蛇葡萄素对小鼠吞噬功能的影响。
1.2受试药物
名称：蛇葡萄素
溶剂：热双蒸水
用量：0.5ml/20g小鼠
1.3对照样品
联苯双酯；上海天平制药厂，沪卫药准字(1995)第3765号-011
1.4动物
小鼠，昆明种，雄性，19～21g。
鸡红细胞：5％浓度
1.5方法
昆明种小鼠，随机分为5组，即对照组、蛇葡萄素75、150、300mg/kg、联苯双酯150mg/kg，对照组给予生理盐水，给药组均口服给药，每日1次，共6次，末次给药同时腹腔注射0.5％水解乳蛋白1.5ml/只，24小时后腹腔注射5％鸡红细胞0.1ml，30分钟后断头放血，用生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔巨噬细胞37℃孵育半小时，离心，沉淀物涂片，染色，油镜下计数细胞，以下列公式计算，并与对照组比较。
Figure A0312388100171
1.6结果
结果见表19，蛇葡萄素低、中、高剂量均能促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞及增加吞噬指数，联苯双酯150mg/kg剂量组也能促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。
   表19.蛇葡萄素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(±SD)
组别     剂量   途径mg/kg   动物数(只)   吞噬百分率％    吞噬指数
蛇葡萄素 75   po×6   8   31.2±3.4**     0.64±0.07**
150  po×6   8   43.2±4.2     0.85±0.02**
300  po×6   8   42.3±4.8**     0.81±0.06**
联苯双酯 150  po×6   8   40.1±4.5**     0.88±0.03**
对照组 相应溶剂   8   23.0±5.3     0.39±0.12
**P＜0.01与模型对照组比较
2.蛇葡萄素对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
2.1实验目的
观察蛇葡萄素对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。
2.2受试药物
名称：蛇葡萄素
溶剂：热双蒸水
用量：0.5ml/20g小鼠
2.3对照样品
联苯双酯；上海天平制药厂，沪卫药准字(1995)第3765号-011
2.4动物
小鼠，C57BL/6，♂，19～21g。
2.5其他材料
刀豆球蛋白(ConA)：Sigma产品，50μg/ml浓度
3H-TdR：上海原子核研究所，放射性浓度1mci/ml
培养基：RPMI-1640，内含15％小牛血清、巯基乙醇、Hepes等
2.6方法
C57BL/6小鼠，随机分为5组，即正常对照组、蛇葡萄素75、150、300mg/kg、联苯双酯150mg/kg，每天口服给药1次，连续7天，给药结束后，处死动物无菌条件下取脾，计数脾细胞，并调整细胞浓度为1×107/ml，在96孔细胞培养板上每孔加细胞悬液100μl，ConA 50μl，和培养液，各组均设三复管，37℃，5％CO2条件下培养48小时，加入3H-TdR 0.5μci/孔，继续培养18小时，用多头细胞收集器收集细胞，在液闪仪上测CPM值，并与对照组比较，结果见表20。
2.7结果
   表20.蛇葡萄素对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
    组别   剂量    途径mg/kg    动物数(只)     CPM值  (±SD)
    蛇葡萄素   75    po×7     4     11763±1985*
  150   po×7     4     7547±1369*
300   po×7 4 7832±1298*
联苯双酯 150   po×7 4 7188±1010**
    对照组   N.S.     4     5448±917
*P＜0.05  **P＜0.01与对照组比较
结果表明，蛇葡萄素有明显的促进小鼠脾淋巴细胞增殖的作用，并以低剂量作用较其它两组强。实施例10：急性毒性试验
取小鼠预试后，另选取20只小鼠，雌雄各半，以蛇葡萄素的最大浓度和最大体积给小鼠灌胃给药，24h给药3次，连续观察7d，记录小鼠活动行为、大小便和饮食等情况。结果：观察7天，未见动物有行为异常、死亡等情况，体重正常增长。计算其最大灌胃量为26.0g·kg-1。

Claims (9)

1.一种含有蛇葡萄素的保健酒，特征在于其中蛇葡萄素含量是0.1-53％克/升。
2.权利要求1的保健酒，特征在于其中蛇葡萄素含量是2％w/v至蛇葡萄素在各种酒中的溶解饱和度的量。
3.权利要求1的保健酒，特征在于其是一种酒精酒。
4.权利要求1-3任一项的保健酒的制备方法，特征在于直接将所述量的蛇葡萄素加到酒中搅拌均匀，制得含有蛇葡萄素作为添加剂的酒。
5.蛇葡萄素作为添加剂在制备各种酒中的用途。
6.蛇葡萄素作为添加剂在制备预防和/或治疗酒精性肝损伤保健酒中的用途。
7.蛇葡萄素作为添加剂在制备预防和/或治疗高血糖的保健酒中的用途。
8.蛇葡萄素作为添加剂在制备预防和/或治疗高血脂的保健酒中的用途。
9.蛇葡萄素作为添加剂在制备提高免疫力的保健酒中的用途。
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