CN1470249A - 牦牛血去蛋白提取物及其提取方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种牦牛血去蛋白提取物及其提取物方法和应用，所述的牦牛血去蛋白提取物是分子量小于5000或小于6000道尔顿的生理成份；其提纯过程是：无菌条件下采牦牛血，分离出血清，用Milipore超滤器过滤，将超滤液除菌、冻干。本发明所述的牦牛血去蛋白提取物可作药品、保健食品及食品用于糖尿病及其并发症治疗，用于老年性痴呆、颅脑外伤、脑昏迷等各种脑功能不全及用于各种急慢性高原病的防治。

Description

牦牛血去蛋白提取物及其提取方法和应用

技术领域

本发明涉及一种从牦牛(包括新生六个月内的小牦牛)血提取的去蛋白提取物及其提取方法和应用。属于生物药品制剂、保健食品及食品生产方法、及应用领域。

背景技术

Parade等人于1968年，首次报道了新生六个月内的小牛(特指黄牛)血去蛋白提取物，不仅具有胰岛素样作用，还能刺激细胞对氧的摄取和利用。同时，也有学者注意到成年牛血去蛋白提取物，也有以上生物活性，但其作用远逊色于新生六个月内的小牛血去蛋白提取物。造成成年牛血去蛋白提取物与新生小牛血去蛋白提取物生物活性的显著差异，主要是由于新生小牛在出生前，长期停留于密闭缺氧的母体子宫内造成的，在这样的缺氧环境下，胎牛血这种类胰岛素样物质含量增加，有利于胎牛体内的氧代谢及能量代谢。

牦牛在分类上属于牛属，牦牛亚属，牦牛种。据研究，其生理生化特征与黄牛有较大的差异。我国青藏高原是牦牛的主要发源地和主要产区，牦牛长期生长繁衍于海拔2500-5000米高原缺氧环境，对高原严寒、缺氧的气候特别适应。鉴于牦牛以上生活习性及生长环境，本发明人经过多年的研究，发现不论成年牦牛，还是6个月内新生的牦牛，其血液均存在着生物活性极强的类胰岛素物质，而这种物质与Parade等人报道的新生六个月内的小牛血去蛋白提取物，不论是分子量、成分及生物功能均极为相近。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种高原地区牦牛血去蛋白提取物，该提取物主要是通过促进细胞对葡萄糖的摄取和利用(不依赖于胰岛素)增加细胞对氧的摄入和利用，从而使ATP生成增加，在细胞水平促进细胞能量代谢，该提取物可应用于药品、保健食品及食品，可制成注射剂、片剂、胶囊及口服液等剂型。

本发明的目的之二是提供两种提取高原牦牛血去蛋白提取物的制备方法。

本发明的目的之三是提供了一种牦牛血去蛋白提取物应用于药品、保健食品及食品上的应用范围。

本发明的以上目的将通过下列详细说明和描述来进一步阐述。

本发明中所提供的一种牦牛血去蛋白提取物主要是从高原牦牛(包括新生六个月内小牦牛)血中获得，根据本发明人对牦牛血去蛋白提取物的成份分析，此种提取物分子量小于5000或6000道尔顿，只含生理性成份，即60％无机物质，如Na⁺，K⁺、Cl^-、Ca²⁺等电解质和微量的必需元素，以及40％有机物质，如磷酸肌醇寡糖、氨基酸、低分子多肽、核酸衍生物、糖脂类及糖和类脂代谢的中间产物等。

本发明所得到的牦牛血去蛋白提取物的质量标准为：该提取物为无菌冻干制剂，含牛血衍生物应为标示量的90.0-110.0％；性状为白色或微黄色疏松状冻干粉，易溶于水，相对密度为1.021-1.025。

本发明的牦牛血去蛋白提取物可通过以下两种制备方法获得：

1、

(1)、在无菌条件下采牦牛血，在温度3℃～8℃下，3000-5000rpm，离心10-40分钟，得上清液。

(2)、取上清液，利用0.2-0.9微米的薄膜过滤澄清，得澄清液。

(3)、澄清液用Milipore超滤器截留分子量小于6000道尔顿以下的组分(超滤速度为10-1000ml/分，蠕动泵压为≤0.1-0.5mPa)。

(4)、分装、冻干。

2、

(1)在无菌条件下采牦牛血，在温度3℃～8℃下，3000-5000rpm，离心10-40分钟，得上清液。

(2)、取上清液，加入70％-99％两倍于血清体积的乙醇，不断搅拌静止60分钟，使蛋白质变性沉淀，然后经10000-20000rpm4℃离心30-60分钟，留上清液。

(3)、利用真空旋转蒸发仪，20℃-40℃，0.5-3个大气压减压除乙醇。

(4)、上清液用Milipore超滤器截留分子量小于6000道尔顿以下的组分(超滤速度为10-1000ml/分，蠕动泵压为≤0.1-0.5mpa)。

(5)、分装、冻干。

本发明的产品牦牛血去蛋白提取物，在药品、保健食品及食品中应用，主要用于：(1)II型糖尿病的治疗；(2)糖尿病性多发性神经病变的治疗；(3)老年性痴呆、颅脑外伤、中风及各种脑昏迷造成的脑功能不全的治疗；(4)各种急慢性高原病即急性高原反应、高原肺水肿、高原心脏病及高原红细胞增多症的治疗。本发明的产品牦牛血去蛋白提取物应用于药品、保健食品及食品时，可制成注射剂、片剂、软胶囊、硬胶囊及口服液等剂型。

具体实施方式

实施例1：

本发明的牦牛血去蛋白提取物可通过以下制备方法获得：

(1)、在无菌条件下采牦牛血，在温度4℃下，4000rpm，离心20分钟，得上清液。

(2)、取上清液，利用0.3微米的薄膜过滤澄清，得澄清液。

(3)、澄清液用Milipore超滤器截留分子量小于6000道尔顿以下的组分(超滤速度为200ml/分，蠕动泵压为≤0.2mpa)。

(4)、分装、冻干。

实施例2：

本发明的牦牛血去蛋白提取物也可以通过以下制备方法获得：

(1)在无菌条件下采牦牛血，在温度4℃下，4000rpm，离心20分钟，得上清液。

(2)、取上清液，加入95％两倍于血清体积的乙醇，不断搅拌静止60分钟，使蛋白质变性沉淀，然后经20000rpm4℃离心30分钟，留上清液。

(3)、利用真空旋转蒸发仪，40℃，1个大气压减压除乙醇。

(4)、上清液用Milipore超滤器截留分子量小于6000道尔顿以下的组分(超滤速度为200ml/分，蠕动泵压为≤0.2mpa)。

(5)、分装、冻干。

实施例3：

本发明的牦牛血去蛋白提取物对小白鼠急性缺氧耐力的影响：取实验动物昆明种小白鼠，雄性，10周龄，按体重随机分两组，每组30只，缺氧前1小时，药物组和对照组分别经口给予牦牛血去蛋白提取物3mg/kg，和等量淀粉，应用减压缺氧方法，观察小白鼠的缺氧耐力。缺氧高度10000米，上升速度15米/秒，观察1小时内动物死亡率。结果：服药组小白鼠的存活率为50％，对照组存活率为18％。由此可知牦牛血去蛋白提取物可显著提高动物的缺氧耐力。

实施例4：

对非胰岛素依赖性糖尿病小白鼠血糖的调节作用：取非胰岛素依赖性糖尿病小白鼠，雄性，10周龄，随机分为两组，每组15只，药物组和对照组分别经口给予牦牛血去蛋白提取物3mg/kg，和淀粉，一日一次，一周5日，共给药4周。给药前以及给药后4周由尾静脉取血，测定血中的葡萄糖浓度，给药前及给药第4周的取血均在断食12小时后进行。结果给药4周后小白鼠血糖明显低于给药前水平(见下表)分组                                        血糖值(mmol/L)

                                  给药前           给药4周后对照组                                17.86±1.22      16.94±1.38给药组                                17.09±1.08      9.43±0.89^{* *}＝P＜0.01

实施例5：

对糖尿病性多发性神经病变作用：

通过对100例糖尿病性多发性神经病变病人进行了牦牛血去蛋白提取物对照组双盲观察，发现治疗组病人的神经传导速度持续增加，在治疗8周时从最初的37.09米/秒，增加到41.02米/秒；痛觉程度自61.20下降为43.38。此外，患者的震动觉及温觉均有所改善。

实施例6：

对缺血性脑病的治疗作用：

通过对208例缺血性脑病(偏瘫)应用牦牛血去蛋白提取物治疗的观察，发现患者应用牦牛血去蛋白提取物后的完全与部分康复率达82.08％，说明该制剂在治疗偏瘫方面疗效显著。

Claims (7)

1、一种牦牛血去蛋白提取物，其特征是分子量小于5000-6000道尔顿的牦牛血去蛋白提取物。这种去蛋白血液提取物只含生理性成份，即60％无机物质，如Na⁺，K⁺、Cl^-、Ca²⁺等电解质和微量的必需元素，以及30％有机物质，如磷酸肌醇寡糖、氨基酸、低分子多肽、核酸衍生物、糖脂类及糖和类脂代谢的中间产物等。

2、如权利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物，其中的牦牛血主要指生活于高原地区的成年牦牛及新生六个月的小牦牛血。

3、如权利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物，其中的分子量是指小于5000道尔顿或小于6000道尔顿的牦牛血去蛋白提取物。

4、如权利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物的生产方法，是以青藏高原的牦牛(包括新生六个月内的小牦牛)血为原料，其特征是：

(1)、在无菌条件下采牦牛血，在温度3℃～8℃下，3000-5000rpm，离心10-40分钟，得上清液。

(2)、取上清液，利用0.2-0.9微米的薄膜过滤澄清，得澄清液。

(3)、澄清液用Milipore超滤器截留分子量小于6000道尔顿以下的组分(超滤速度为10-1000ml/分，蠕动泵压为≤0.1-0.5mPa)。

(4)、分装、冻干。

5、如权利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物的生产方法，也可以是：

(1)、在无菌条件下采牦牛血，在温度3℃～8℃下，3000-5000rpm，离心10-40分钟，得上清液。

(2)、取上清液，加入70％-99％两倍于血清体积的乙醇，不断搅拌静止60分钟，使蛋白质变性沉淀，然后经10000-20000rpm4℃离心30-60分钟，留上清液。

(3)、利用真空旋转蒸发仪，20℃-40℃，0.5-3个大气压减压除乙醇。

(4)、上清液用Milipore超滤器截留分子量小于6000道尔顿以下的组分(超滤速度为10-1000ml/分，蠕动泵压为≤0.1-0.5mPa)。

(5)、分装、冻干。

6、如权利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物的应用，其特征在于牦牛血去蛋白提取物，在药品、保健食品及食品中应用，主要用于：(1)II型糖尿病的治疗；(2)糖尿病性多发性神经病变的治疗；(3)老年性痴呆、颅脑外伤、中风及各种脑昏迷造成的脑功能不全的治疗；(4)各种急慢性高原病即急性高原反应、高原肺水肿、高原心脏病及高原红细胞增多症的治疗。

7、如权利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物应用于药品、保健食品及食品中其特征在于可制成注射剂、片剂、软胶囊、硬胶囊及口服液等剂型。