CN1436490A - 以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法：将深海沙蚕用盐水赡养3－4天，使其吐净内含物，加入生理盐水或磷酸盐缓冲液，匀浆机中匀浆，进行离心，之后依次经盐析、透析或柱层析及超滤去除杂质，获得去除杂质后的溶液；将得到的去除杂质后的溶液经喷雾干燥或冷冻干燥制成粉剂，并在钴60射线的照射下进行灭菌处理，便得到本发明的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品粉剂，定量包装制成胶囊；本方法所得制品含有丰富的氨基酸、脂肪酸、微量元素、维生素和多种生物活性酶，尤其是大量的纤溶酶，实验证明，具有调节血压和血脂、预防血栓形成、抗衰老、增强免疫能力的保健作用。
Description
发明领域
本发明涉及以海洋生物为原料的保健食品的制备方法，特别涉及一种以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法。
背景技术
众所周知，我国应用海洋中药有着悠久的历史。早在公元前三世纪左右，《黄帝内经》中已有乌贼骨作丸饮以鲍鱼汁治血枯的记载，至明代的《本草纲目》，收载海洋中药近100种，新中国成立后编撰的《中药大辞典》(1997)，收载144种(128味)。海洋中药的药用种数远不如陆生的多，且发展速度相形之下比较缓慢，主要是由于药材不易采集和捕捞。但自二十世纪七十年代以来，由于科技和相应学科飞速发展，国际上形成了向海洋要药，研究海洋天然产物的热潮，已从海葵、海绵、腔肠动物、被囊动物、棘皮动物及微生物体内，分离到数以万计的天然化合物，其中许多是具有强烈生理活性的新化合物，已有相当部分在临床上应用，成为防癌抗癌的新药。
沙蚕是海洋环节动物门多毛刚动物的总称，包括80余科、1600多个属、10000多个种。据估计我国沿海约有500种左右。很久以来，体大肉肥的沙蚕一直是我国闽、粤、桂沿海和东南亚一带脍炙人口的美味；在我国《药用动物志》中，沙蠋Arenicola Cristata被作为清热解毒的良药。经测定，沙蚕体内含有B-胍基异丁酸、亚牛磺酸花青苷、亚牛磺酸等多种硫胍基衍生物，和深海羟高铁血红素、海蚯蚓素、嘌呤核苷酸、磷酸脒基牛磺酸、二聚脒基牛磺酸激酶、纤溶酶以及溶菌酶等药用成份，而且，富有大量的人体所需要的必需氨基酸和不饱和脂肪酸，是一种很有应用的前景的海洋天然产物。与当前已被广泛地用于医药的陆地蚯蚓(俗称为地龙)相比，作为深海中生活无污染、能在海底无氧或少氧的底栖中生存的沙蚕常未得当应有的重视。国内外至今未有从沙蚕中获得有效物质制成保健食品。
既然陆地蚯蚓(俗称为地龙)已被广泛地用于提取纤溶酶酶，用于治疗脑血栓等；那么，同属于环节动物门的沙蚕(俗称为海蚯蚓)，也可能会有这种纤溶酶并具有相同的功能；而且，沙蚕能在海底无氧或少氧的底栖中生存，其体内一定有特殊的物质，此外，深海中生活无污染，也是做成保健食品的优质材料。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以深海沙蚕为原料，通过离心、盐析，透析、柱层析、超滤等分离、提纯方法，去除杂质，获得富含氨基酸、微量元素、维生素、不饱和脂肪酸和多种生物活性酶(尤其是大量的纤溶酶)等有益物质的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法。
本发明的实施方案如下：
本发明提供的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，其步骤如下：
1)将深海中获取的新鲜沙蚕，用盐水赡养3-4天，使其吐净内含物；
2)加入生理盐水或磷酸盐缓冲液，匀浆机中匀浆，进行离心，之后依次经盐析、透析或柱层析及超滤去除杂质，获得去除杂质后的溶液；
3)将步骤2)得到的去除杂质后的溶液经喷雾干燥或冷冻干燥制成粉剂，并将所得粉剂在钴60射线的照射下进行灭菌处理，便得到本发明的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品粉剂；
本发明提供的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，还进一步包括步骤4)：将步骤3)所得以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品粉剂进行定量包装，制成胶囊；
步骤2)所述的离心为：将匀浆液放入离心机中，在5-20℃下，以3000-14000rpm离心5-20min，收集上清液；
步骤2)所述的盐析为：将经离心后得到的上清液中加入研碎的硫酸铵，制成30％饱和度的溶液，4℃下静置2-10小时，离心收集上清液；再加硫酸铵制成70％饱和度的溶液，静置过夜，离心收集沉淀；
步骤2)所述的透析或柱层析为：将盐析后得到的沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，透析或过层析柱脱盐，得到脱盐后的溶液；
步骤2)所述的超滤为：将经透析或柱层析脱盐后的溶液过超滤系统进行超滤，得到去除水分和金属离子的溶液；
本发明提供的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，所使用的新鲜沙蚕包括：
沙蚕科Nereididae的双齿围沙蚕Perinereris aibuhitensis；
弯齿围沙蚕Perinereris aibuhitensi；
独齿围沙蚕Perinereris aibuhitensi；
多齿围沙蚕Perinereris aibuhitensi；
扁齿围沙蚕Perinereris aibuhitensi；
日本刺沙蚕Neanthes japoniea；
锐足全刺沙蚕Neetoneanthes Oxypoda；
沙蠋科Arenicolidae的沙蠋Arenicola brasiliensis；
矾沙蚕科Eunicidae的岩虫Marphysa sanguinea；
矾沙蚕Eunice tenlacucata；
或裂虫科Syllidae吻沙蚕科Glyceridae沙蚕。
本发明以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，具有如下特点：
1.主要原料从海洋深处获取，无任何污染；
2.提取方法科学，所得制品为纯天然保健食品；
3.所得制品含有多种人体所需要的微量元素锌(290ppm)、碘(100.6ppm)、硒(1.13ppm)，以及维生素E(26.70ppm)等(见表1)，尤其是硒和维生素E含量偏高，具有抗衰老、增强免疫能力的保健作用；
4.所得制品含有多种人体所必需氨基酸(540mg/g)(见表2)，尤其含有基脯氨酸，具有增加养和抗衰老保健作用；
5.所得制品含有丰富的纤溶酶(1000-2000单位)(见表3)，预防血栓形成，调节血压和血脂功能好；
6.所得制品含有14.29％的脂肪酸，其中EPA含量为6.354％，具有预防血栓形成的作用(见表6)；
7.无任何毒性和副作用，重金属(铜、镉、汞、锡、铅等)含量(表4)均未超标，符合安全卫生标准；
8.毒性、存活率实验(表5)表明，本发明的沙蚕制品即使使用大剂量对实验动物的行为、生长发育及死亡的也无影响，说明了它是安全可靠的，可长期服用。
表1沙蚕中微量元素及维生素的测定结果(ppm)
表2.本发明的沙蚕中氨基酸系列含量(g/100g)的测定结果
| 碘 | 锌 | 硒 | 维生素E | 维生素A |
| 100.60 | 290.00 | 1.13 | 26.70 | / |
| 双齿围沙蚕 | 岩虫 | 土蚯蚓 | |
| 天门冬氨酸 | 6.633 | 6.115 | 4.87 |
| 苏氨酸 | 2.613 | 1.498 | 2.66 |
| 丝氨酸 | 2.827 | 2.363 | 2.72 |
| 谷氨酸 | 10.288 | 8.329 | 7.81 |
| 甘氨酸 | 6.73 | 3.003 | 3.07 |
| 丙氨酸 | 4.011 | 4.628 | 2.75 |
| 缬氨酸 | 2.591 | 2.21 | 2.01 |
| 蛋氨酸 | 1.185 | 0.998 | 0.95 |
| 异亮氨酸 | 2.041 | 1.821 | 2.01 |
| 亮氨酸 | 8.981 | 7.081 | 3.89 |
| 酪氨酸 | 1.883 | 1.785 | 1.71 |
| 苯丙氨酸 | 2.358 | 2.227 | 1.91 |
| 组氨酸 | 3.231 | 2.809 | 1.22 |
| 赖氨酸 | 6.361 | 5.362 | 3.77 |
| 精氨酸 | 5.696 | 4.548 | 3.26 |
| 脯氨酸 | |||
| 总： | 67.429 | 54.777 |
表3.深海沙蚕中纤溶酶的酶活力
| 类型 | 用量 | 相对活力(uk/g) |
| 沙蚕第一次离心液沙蚕二次盐析 | 0.392mg0.392mg | 20661204 |
| 溶栓胶囊作对照 | 0.392mg | 2091 |
表4.深海沙蚕中重金属含量测定(ppm)
| 沙蚕(5月13日) | 沙蚕(6月5日) | 说明 | |
| 铜镉汞锡铅砷 | 7.5500.514＜0.0027.4200.2430.92 | 9.5200.0690.0282.6301.2800.87 | 未超标未超标未超标未超标未超标未超标 |
表5、沙蚕对实验动物的急性毒性、存活率实验
| 试验时间 | 沙蚕来源 | 剂量(g/kg) | 数量(只) | 行为反应 | 15天后死亡状况 |
| 4月27日 | 冷冻干燥 | 5 | 15 | 无 | 无 |
| 3 | 15 | 无 | 无 | ||
| 1 | 15 | 无 | 无 | ||
| 对照 | 0 | 15 | 无 | 无 |
| 6月2日 | 喷雾干燥 | 10 | 13 | 无 | 无 |
| 5 | 13 | 无 | 无 | ||
| 1 | 13 | 无 | 无 | ||
| 0 | 13 | 无 | 无 |
表6.沙蚕组织脂肪酸含量
| 脂肪酸 | 总面积(pA*s) | 含量(％) |
| 16∶0 | 1490.63013 | 6.3515 |
| 16∶1 | 288.97583 | 1.2296 |
| 18∶0 | 463.73932 | 2.4037 |
| 18∶118∶2 | 645.42279154.44255 | 2.84080.6741 |
| 18∶3 | 229.00520 | 1.0955 |
| 20∶0 | 222.86333 | 1.0932 |
| 20∶1 | 11.99753 | 0.0472 |
| 20∶2 | 218.53302 | 0.9368 |
| 20∶3 | 192.90662 | 0.6767 |
| 20∶4 | 45.29221 | 0.1853 |
| 20∶5 | 1063.35437 | 6.5343 |
| 22∶0 | 4.29776 | 0.0205 |
| 22∶1 | 3.86298 | 0.0177 |
| 22∶6 | 1.22897 | 6.569e-3 |
综上所述，本发明提供的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，主要原料来自海洋深处，无任何污染；提取方法科学，所得制品含有多种人体所需要的微量元素锌、氨基酸、纤溶酶、脂肪酸以及维生素等，具有预防血栓形成、抗衰老、增强免疫力等的保健作用，而且无任何毒性和副作用，安全可靠的，可长期服用。
实施方式
下面结合实施例进一步描述对本发明。
实施例1：
1.将深海中获取的沙蚕科Nereididae的双齿围沙蚕Perinereris aibuhitensis新鲜沙蚕，迅速带回室内，用盐水赡养3-4天，使其吐净内含物；
2.加入磷酸盐缓冲液，在匀浆机匀浆；
3.将匀浆液放入离心机中离心，离心机转速为3000rpm，5℃下离心20min，收集上清液；
4.称取一定量研碎的硫酸铵，加入上述上清液中制成30％饱和度，4℃下静置10小时后，离心收集上清液；再加硫酸铵至70％饱和度，静置过夜，离心收集沉淀；
5.用磷酸盐缓冲液溶解上述沉淀，在经透析或过层析柱脱盐，得到脱盐后的溶液；
6.将上述脱盐后的溶液经过超滤杯进行超滤处理，去除过多的水分和金属离子；
7.将超滤后所得溶液喷雾干燥或冷冻干燥成粉，在钴60射线下照射灭菌；
8.按剂量包装制成胶囊。
实施例2：
1.将深海中获取矾沙蚕科Eunicidae的岩虫Marphysa sanguinea的新鲜沙蚕，迅速带回室内，用盐水赡养3-4天，使其吐净内含物；
2.加入磷酸盐缓冲液，在匀浆机匀浆；
3.将匀浆液放入离心机中离心，离心机转速为14000rpm，10℃下离心5min，收集上清液；
4.称取一定量研碎的硫酸铵，加入上述上清液中制成30％饱和度；静置5小时后，离心收集上清液；再加硫酸铵至70％饱和度，静置过夜，离心收集沉淀；
5.用磷酸盐缓冲液溶解上述沉淀，在经透析或过层析柱脱盐，得到脱盐后的溶液；
6.将上述脱盐后的溶液经过超滤杯进行超滤处理，去除过多的水分和金属离子；
7.将超滤后所得溶液喷雾干燥或冷冻干燥成粉，在钴60射线下照射灭菌；
8.按剂量包装制成胶囊。
实施例3：
1.将深海中获取的沙蠋科Arenicolidae的沙蠋Arenicola brasiliensis新鲜沙蚕，迅速带回室内，用盐水赡养3-4天，使其吐净内含物；
2.加入磷酸盐缓冲液，在匀浆机匀浆；
3.将匀浆液放入离心机中离心，离心机转速为10000rpm，10℃下离心10min，收集上清液；
4.称取一定量研碎的硫酸铵，加入上述上清液中制成30％饱和度；静置2时间后，离心收集上清液；再加硫酸铵至70％饱和度，静置过夜，离心收集沉淀；
5.用磷酸盐缓冲液溶解上述沉淀，在经透析或过层析柱脱盐，得到脱盐后的溶液；
6.将上述脱盐后的溶液经过超滤杯进行超滤处理，去除过多的水分和金属离子；
7.将超滤后所得溶液喷雾干燥或冷冻干燥成粉，在钴60射线下照射灭菌；
8.按剂量包装制成胶囊。
上述实施例所得制品含有丰富的氨基酸、脂肪酸、微量元素、维生素和多种生物活性酶，尤其是含大量纤溶酶，具有调节血压和血脂、预防血栓形成、抗衰老、增强免疫能力的保健作用。
Claims (7)
1.一种以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，其步骤如下：，
1)将深海中获取的新鲜沙蚕，用盐水赡养3-4天，使其吐净内含物；
2)加入生理盐水或磷酸盐缓冲液，匀浆机中匀浆，进行离心，之后依次经盐析、透析或柱层析及超滤去除杂质，获得去除杂质后的溶液；
4)将步骤2)得到的去除杂质后的溶液经喷雾干燥或冷冻干燥制成粉剂，并将所得粉剂在钴60射线的照射下进行灭菌处理，便得到本发明的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品粉剂。
2.按权利要求1所述的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，其特征在于，还进一步包括步骤4)：将步骤3)所得以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品粉剂进行定量包装，制成胶囊。
3.按权利要求1所述的深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，其特征如下：步骤2)所述的离心为：将匀浆液放入离心机中，在5-20℃下，3000-14000rpm离心5-20min，收集上清液。
4.按权利要求1所述的深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，其特征如下：步骤2)所述的盐析为：将经离心后得到的上清液中加入研碎的硫酸铵，制成30％饱和度的溶液，4℃下静置2-10小时，离心收集上清液；再加硫酸铵制成70％饱和度的溶液，静置过夜，离心收集沉淀。
5.按权利要求1所述的深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，其特征如下：步骤2)所述的透析或柱层析为：将盐析后得到的沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，透析或过层析柱脱盐，得到脱盐后的溶液。
6.按权利要求1所述的深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，其特征如下：步骤2)所述的超滤为：将经透析或柱层析脱盐后的溶液过超滤系统进行超滤，得到去除水分和金属离子的溶液。
7.按权利要求1所述的以深海沙蚕为原料的纯天然海洋生物保健食品的制备方法，其特征在于，所使用的新鲜沙蚕包括：
沙蚕科Nereididae的双齿围沙蚕Perinereris aibuhitensis；
弯齿围沙蚕Perinereris aibuhitensi；
独齿围沙蚕Perinereris aibuhitensi；
多齿围沙蚕Perinereris aibuhitensi；
扁齿围沙蚕Perinereris aibuhitensi；
日本刺沙蚕Neanthesjaponica；
锐足全刺沙蚕Nectoneanthes Oxypoda；沙蠋科Arenicolidae的沙蠋Arenicola brasiliensis；矾沙蚕科Eunicidae的岩虫Marphysa sanguinea；矾沙蚕Eunice tenlacucata；或裂虫科Syllidae吻沙蚕科Glyceridae沙蚕。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |