CN1451267A - 曼地亚红豆杉快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种曼地亚红豆杉快速繁殖方法，它利用曼地亚红豆杉的“全能性”和“全息性”，以植物组织培养为原理，并结合常规扦插育苗和全光雾扦插育苗技术，取曼地亚红豆杉器官的一部分(曼地亚红豆杉的微型材料)经研发配制的“G·P克隆补液”处理后，直接接种在大田的沙床(或沙质土)上，后结合“G·P克隆补液”和配套管理技术进行管理，约经25天即可生根。该发明具有取材小、培养速度快、繁殖率高、成本低、易推广、繁殖种苗不变异等特点，突破了曼地亚红豆杉原有繁育技术的取材大、繁育时间长、成活率低、成本高、难推广等技术难题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖再生方法，尤其是曼地亚红豆杉微体快速繁殖方法。
背景技术
曼地亚红豆杉，红豆杉科，红豆杉属，系东北红豆杉和欧洲红豆杉的杂交种，是第四纪冰川后遗留下来的世界珍稀濒危物种，我国一级保护植物。原产加拿大和美国、海拔100-2000米的酸性沙质山地。我国1996年从加拿大引进，我国现有母本仅数万株，资源非常稀少。该树体内含有非常昂贵的抗癌原料——紫杉醇，是目前全球最有疗效的抗癌药物之一。1992年，美国FDA首次批准将紫杉醇用于治疗转移性卵巢癌，后又批准用于治疗晚期转移性乳腺癌。目前紫杉醇合成制药已在美国、英国、加拿大、瑞典、奥地利等国家上市应用。我国卫生部也于1995年批准紫杉醇的制剂和原料药作为II类新药(西药)，用于治疗卵巢癌、乳腺癌、肺癌和鼻咽癌等。
曼地亚红豆杉生长速度快、侧根发达，对环境适应能力强，可广泛应用于营建水土保持林、水源涵养林，是正在实施的天然林保护工程退耕还林工程等国家重点生态建设工程首选的经济型树种之一。
曼地亚红豆杉资源非常稀少，在我国生长仅6年的历史，到目前为止还没有一套完整可行的高效繁育技术，为了保护我国濒危野生红豆杉资源，扩大优质红豆杉的种群，实现人工优质红豆杉产业化种植，成为了该行业专家们一直想解决的难题。
发明内容
本发明的目的是提供一种取材小、繁育时间短、成活率高、成本低、易推广的曼地亚红豆杉快速繁殖方法。
该繁殖方法，是利用曼地亚红豆杉的“全能性”和“全息性”，以植物组织培养为原理，并结合常规扦插育苗和全光雾扦插育苗技术，取曼地亚红豆杉器官的一部分(曼地亚红豆杉的微型材料)经研发的“G·P克隆补液”处理后，直接接种在大田的沙床(或沙质土)上，后结合“G·P克隆补液”和配套管理技术进行管理，约经25天即可生根。
本发明的具体方案是：一种曼地亚红豆杉快速繁殖方法，按如下步骤进行：
(1)育苗床及育苗棚的准备
A：育苗床以西偏5°的方向作床，苗床长8米，宽2.7米，床中深挖一地沟，沟长8米，宽30cm，深40cm，地沟将苗床分成相等的两个小苗床，各宽1.2米。
B：在苗床上方搭小拱棚(以竹片为材料)，要求棚高12米，棚长8米；并覆白色塑料膜(厚度不限)，膜长11米，两棚口分别下垂1.5用以覆盖棚口。
C：将河沙(粗细均可)或沙质土平铺在小苗床上，厚度为5cm，铺后要求沙层松软，并用高锰酸钾800倍液将沙层消毒，将棚口塑料膜拉下盖住棚口，24小时后掀开塑料膜备用。
(2)配制适合曼地亚红豆杉生长的一套补液“G·P克隆补液”1号：
IBA(吲哚丁酸) 1540～1660mg
NAA(萘乙酸) 242～265mg
6-BA(6-苄基氨基嘌呤) 0.4～0.56mg
蒸馏水 加至1000ml
要点：根据浓度配制出混合液，用少量的95％的酒精溶解IBA和NAA，后再加入适量的水。6-BA先用1mol·L-1的HCl溶解，再加水定溶。配制完毕后，用酸度计测量其PH值，该溶液的PH值为6.0，若偏酸用1mol·L-1NaOH来调节，若偏碱用1mol·L-1HCl来调节。“G·P克隆补液”2号：
KNO3(硝酸钾) 1580～1620mg
CaCl2·2H2O(氯化钙) 395～410mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”3号：
NH4NO3(硝酸铵) 1440～1460mg
MgSO4·7H2O(硫酸镁) 325～335mg
KH2PO4(磷酸二氢钾) 96～110mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”4号：
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 18.5～22.5mg
ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 10～12.5mg
H3BO3(硼酸) 9.6～11mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”5号：
Na2MoO4·2H2(钼酸钠) 0.2～0.3mg
CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.025～0.035mg
CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.025～0.035mg
KI(碘化钾) 0.85～1.24mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”6号：
FeSO4·7H2O(硫酸铁) 46～53mg
Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠)； 38.5～45mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”7号：
Vit.B6(盐酸吡哆辛) 0.78～0.85mg
Gly(甘氨酸) 2.25～2.65mg
肌醇 75.5～80mg
椰乳 120～128mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”8号：
C2H22O11(蔗糖) 15800～16150mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”9号：
过氧化氢 85000～120000mg
蒸馏水 加至1000ml
(3)母本繁育材料的准备
将曼地亚红豆杉的枝条(枝条的年龄不限，但不宜过粗)用锋利的刀片或剪刀从母树上采集下来，穗条不需消毒(该技术接种操作过程实施带菌操作，不需任何消毒)。
保持曼地亚红豆杉枝条的温度和湿度，在暗光条件下将枝条切成0.5cm左右长的茎段或茎尖，保留叶片，下切口保持平口。
(4)接种
快速的将切好的茎段或茎尖材料的下切口在“G·P克隆补液”1号液中速蘸，速蘸时间不超过1秒，材料浸蘸深度为0.5～0.15cm。
将浸蘸后的材料立即接种在经处理的小拱棚内的沙床上，要求沙床湿度以沙拳捏不成团为宜，接种深度为下切口接触沙床母本材料不倒为宜。接种密度为每平方米800-1000株。接种完毕后，用“G·P克隆补液”9号液将苗床及小拱棚喷雾一遍(该技术采用拉杆式人工喷雾器人工喷雾，以更好的调节喷雾强度)，强度以叶面不滴液为宜。
(5)接种后的管理
温度：
曼地亚红豆杉4-10月份接种苗管理，白天一般棚内温度控制在25-28度为宜，若温度过高靠喷雾调节水分降温，若温度过低则采用封棚口的方法增温，晚上封一部分棚口(即留小口)，棚内温度一般控制在15-20度，但要注意通风。
曼地亚红豆杉11月至次年3月份接种苗管理，白天一般棚内温度控制在12-16度(苗床铺设地热线更佳)，温度过低可封棚控制温度，但要随时通风。晚上一般棚内温度控制在8-12度为宜。
湿度(水分)：
湿度管理主要有棚内湿度，接种苗叶面湿度和苗床湿度管理。4-10份接种，棚内湿度要求要大，接种苗湿度要求时时保持一层薄薄的水膜，即干即补(补水工具为拉杆式喷雾器，方法为人工喷雾，若采用自动喷雾或电脑控制喷雾则达不到理想的效果，成活率降低)，苗床湿度要求也要大。其余时间接种，棚内湿度要求小，接种苗湿度也要求时时保持一层薄薄的水膜，即干即补，苗床湿度要求相对较小。
光照：
4-10月份接种苗白天要进行遮光处理，光照较强时可用75％遮光网遮光，必要时可用2层遮光网(接种材料上有部分叶片，适当的光照可进行光合作用，产生部分养料)。其余时间接种，可根据实际情况进行适当遮光或不遮光。遮光网一般搭建在育苗棚上方2米处。
通风(氧气及二氧化碳)：
通风在育苗过程中非常重要，气温过高时要敞开两端棚口，经常通风，气温过低时也要根据实际情况间隔式通风。通风可交换棚风外空气，排出废气，增强氧气及二氧化碳，增加曼地亚红豆杉的光合作用，并可减少病害的发生。
养分(营养)：
曼地亚红豆杉在育苗过程中，要消耗大量的养料。为此在整个育苗过程中，配制了适合曼地亚红豆杉的一套补液。具体施用方案如下：
“G·P克隆补液”9号：
施用时间：第1、11、19、27、35天
“G·P克隆补液”2号：
施用时间：第4、12、20、28天
“G·P克隆补液”3号：
施用时间：第5、13、21、29天
“G·P克隆补液”6号：
施用时间：第6、14、22、30天
“G·P克隆补液”7号：
施用时间：第7、15、23、31天
“G·P克隆补液”8号：
施用时间：第8、16、24、32天
“G·P克隆补液”4号：
施用时间：第9、17、25、33天
“G·P克隆补液”5号：
施用时间：第10、18、26、34天
说明：
“G·P克隆补液”2-9号均为喷雾施用，专用于曼地亚红豆杉的矿物元素的补充。育苗过程中共用补液35天，其中第2-3天不用任何补液，每天补液施用时间为最后一次喷雾时间，喷雾强度以叶片不滴液为宜。
(6)生根、炼苗及出圃
经过培养，第25天时，育苗床即有60％左右的曼地亚红豆杉生根，到第30天时，生根率可达99％。第30-35天，逐渐减轻喷雾强度，第36天时停止补液的施用，即可将小拱棚掀开进行炼苗，到第50天时，小苗已经发出嫩芽，即可进行出圃移植或进行继代繁育。
A：本发明中“G·P克隆补液”1号液各原料的优选重量配比是：
IBA(吲哚丁酸) 1585～1610mg
NAA(萘乙酸) 248～255mg
6-BA(6-苄基氨基嘌呤) 0.45～0.53mg
蒸馏水 加至1000ml
B：本发明中“G·P克隆补液”2号液各原料的优选重量配比是：
KNO3(硝酸钾) 1590～1610mg
CaCl2·2H2O(氯化钙) 398～405mg
蒸馏水 加至1000ml
C：本发明中“G·P克隆补液”3号液各原料的优选重量配比是：
NH4NO3(硝酸铵) 1445～1455mg
MgSO4·7H2O(硫酸镁) 326～332mg
KH2PO4(磷酸二氢钾) 98～105mg
蒸馏水 加至1000ml
D：本发明中“G·P克隆补液”4号液各原料的优选重量配比是：
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 19.5～21.5mg
ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 10.5～12mg
H3BO3(硼酸) 9.8～10.05mg
蒸馏水 加至1000ml
E：本发明中“G·P克隆补液”5号液各原料的优选重量配比是：
Na2MoO4·2H2(钼酸钠) 0.22～0.29mg
CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.026～0.032mg
CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.026～0.034mg
KI(碘化钾) 0.95～1.04mg
蒸馏水 加至1000ml
F：本发明中“G·P克隆补液”6号液各原料的优选重量配比是：
FeSO4·7H2O(硫酸铁) 48～52.5mg
Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠)； 39～44mg
蒸馏水 加至1000ml
G：本发明中“G·P克隆补液”7号液各原料的优选重量配比是：
Vit.B6(盐酸吡哆辛) 0.79～0.82mg
Gly(甘氨酸) 2.26～2.62mg
肌醇 76～78.5mg
椰乳 124～127.5mg
蒸馏水 加至1000ml
H：本发明中“G·P克隆补液”8号液各原料的优选重量配比是：
C2H22O11(蔗糖) 15940～16050mg
蒸馏水 加至1000ml
I：本发明中“G·P克隆补液”9号液各原料的优选重量配比是：
过氧化氢 88000～110000mg
蒸馏水 加至1000ml
A：本发明中“G·P克隆补液”1号液各原料的最佳重量配比是：
IBA(吲哚丁酸) 1600mg
NAA(萘乙酸) 250mg
6-BA(6-苄基氨基嘌呤) 0.5mg
蒸馏水 加至1000ml
B：本发明中“G·P克隆补液”2号液各原料的最佳重量配比是：
KNO3(硝酸钾) 1600mg
CaCl2·2H2O(氯化钙) 400mg
蒸馏水 加至1000ml
C：本发明中“G·P克隆补液”3号液各原料的最佳重量配比是：
NH4NO3(硝酸铵) 1450mg
MgSO4·7H2O(硫酸镁) 330mg
KH2PO4(磷酸二氢钾) 100mg
蒸馏水 加至1000ml
D：本发明中“G·P克隆补液”4号液各原料的最佳重量配比是：
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 20mg
ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 11mg
H3BO3(硼酸) 10mg
蒸馏水 加至1000ml
E：本发明中“G·P克隆补液”5号液各原料的最佳重量配比是：
Na2MoO4·2H2(钼酸钠) 0.25mg
CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.03mg
CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.03mg
KI(碘化钾) 1mg
蒸馏水 加至1000ml
F：本发明中“G·P克隆补液”6号液各原料的最佳重量配比是：
FeSO4·7H2O(硫酸铁) 50mg
Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠)； 40mg
蒸馏水 加至1000ml
G：本发明中“G·P克隆补液”7号液各原料的最佳重量配比是：
Vit.B6(盐酸吡哆辛) 0.8mg
Gly(甘氨酸) 2.6mg
肌醇 78mg
椰乳 125mg
蒸馏水 加至1000ml
H：本发明中“G·P克隆补液”8号液各原料的最佳重量配比是：
C2H22O11 (蔗糖) 16000mg
蒸馏水 加至1000ml
I：本发明中“G·P克隆补液”9号液各原料的最佳重量配比是：
过氧化氢 100000mg
蒸馏水 加至1000ml
本发明在植物组织培养技术、全光雾扦插技术、常规育苗技术有机结合的基础上，大胆创新，形成了一套全新的繁育技术，克服了现有育苗技术的全部缺点。
本发明从接种至出圃均一次性成功，不需任何移动，克服了组织培养的不定芽诱导培养、芽生长培养、生根培养等繁杂工序。本发明在“G·P克隆补液”1号液中加入了较高的细胞分裂素和生长素，能高效快速的促进曼地亚红豆杉接种苗生根。同时在培养过程中，结合曼地亚红豆杉的生理、生长特性，提供了曼地亚红豆杉所需的大量元素、微量元素、有机成份、微生素等，并结合适当的光、温、水、气等条件，特别是光的利用，能使曼地亚红豆杉在培养过程中进行光合作用，补充体内所需的养料，这都大大的提高了曼地亚红豆杉接种苗的成活率和培养的成功率。
采用本发明提供的方法进行培养，到第12天时，曼地亚红豆红杉即有大量的愈伤组织产生，并出现小白点，第17天时即有新根生出，第25天时，育苗床即有60％左右的曼地亚红豆杉生根，到第30天时，生根率可达99％。第30-35天，逐渐减轻喷雾强度，第36天时停止补液的施用，即可将小拱棚掀开进行炼苗，到第50天时，小苗已经发出嫩芽，即可进行出圃移植或进行继代繁育。
利用本发明每年可用极少的母本材料繁殖大量的优质小苗，是现有传统技术所不能及的。同时本发明具有取材小、培养速度快、繁殖率高、成本低、易推广、繁殖种苗不变异等特点，突破了曼地亚红豆杉原有繁育技术的取材大、繁育时间长、成活率低、成本高、难推广等技术难题。
曼地亚红豆杉可用种子繁殖，但时间长，成活率低，现均不采用此法。现有曼地亚红豆杉繁育技术主要是：组织培养法、常规扦插法、全光雾扦插法，但至目前为止，利用率很底，一是因为母本资源少，二是繁育时间长，不利于规模化生产。现有繁育技术该三种方法和本发明方法相比较，本发明能克服现有曼地亚红豆杉繁育技术的全部缺点，具体对比情况如下表所示：
曼地亚红豆杉微体高效快速繁殖方法与现有育苗技术技术指标对比表
微体高效快繁 常规扦插技术指标 组织培育法 全光雾扦插法
法 法
实验室、试
管培育条件 大田 大田 大田繁育代数
5-7代 4-6 无 1代/年育苗时间 全年 全年 无 2个月育苗设备 简易 复杂 较复杂 简单技术传授 易 差 较差 易繁育成本 较低 高 较高 低繁殖材料消微小(0.5cm) 微小 大 大耗根系长势 异常发达 非常弱 壮 较壮生根时间 25天左右 40天左右 50天左右 60-90天移苗 一次性成苗 需 需 不需生根率 99％ 95％ 67％ 45％移植成活率 100％ 80-90％ 96％ 98％繁育污染率 微 高 微 微推广生产 易 难 较难 易
具体实施方式
下面结合实例对本发明进一步详细说明：
实施例一
(1)育苗床及育苗棚的准备
A：育苗床以西偏5°的方向作床，苗床长8米，宽2.7米，床中深挖一地沟，沟长8米，宽30cm，深40cm，地沟将苗床分成相等的两个小苗床，各宽1.2米。
B：在苗床上方搭小拱棚(以竹片为材料)，要求棚高12米，棚长8米；并白色塑料膜(厚度不限)，膜长11米，两棚口分别下垂1.5用以覆盖棚口。
C：将河沙(粗细均可)或沙质土平铺在小苗床上，厚度为5cm，铺后要求沙层松软，并用高锰酸钾800倍液将沙层消毒，将棚口塑料膜拉下盖住棚口，24小时后掀开塑料膜备用。
(2)配制“G·P克隆补液”
A：本实例中“G·P克隆补液”1号液各原料的重量配比是：
IBA(吲哚丁酸) 1600mg
NAA(萘乙酸) 250mg
6-BA(6-苄基氨基嘌呤) 0.5mg
蒸馏水 加至1000ml
B：本实例中“G·P克隆补液”2号液各原料的重量配比是：
KNO3(硝酸钾) 1600mg
CaCl2·2H2O(氯化钙) 400mg
蒸馏水 加至1000ml
C：本实例中“G·P克隆补液”3号液各原料的重量配比是：
NH4NO3(硝酸铵) 1450mg
MgSO4·7H2O(硫酸镁) 330mg
KH2PO4(磷酸二氢钾) 100mg
蒸馏水 加至1000ml
D：本实例中“G·P克隆补液”4号液各原料的重量配比是：
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 20mg
ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 11mg
H3BO3(硼酸) 10mg
蒸馏水 加至1000ml
E：本实例中“G·P克隆补液”5号液各原料的重量配比是：
Na2MoO4·2H2(钼酸钠) 0.25mg
CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.03mg
CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.03mg
KI(碘化钾) 1mg
蒸馏水 加至1000ml
F：本实例中“G·P克隆补液”6号液各原料的重量配比是：
FeSO4·7H2O(硫酸铁) 50mg
Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠)； 40mg
蒸馏水 加至1000ml
G：本实例中“G·P克隆补液”7号液各原料的重量配比是：
Vit.B6(盐酸吡哆辛) 0.8mg
Gly(甘氨酸) 2.6mg
肌醇 78mg
椰乳 125mg
蒸馏水 加至1000ml
H：本实例中“G·P克隆补液”8号液各原料的重量配比是：
C2H22O11(蔗糖) 16000mg
蒸馏水 加至1000ml
I：本实例中“G·P克隆补液”9号液各原料的重量配比是：
过氧化氢 100000mg
蒸馏水 加至1000ml
(3)母本繁育材料的准备
将曼地亚红豆杉的枝条(枝条的年龄不限，但不宜过粗)用锋利的刀片或剪刀从母树上采集下来，穗条不需消毒(该技术接种操作过程实施带菌操作，不需任何消毒)。
保持曼地亚红豆杉枝条的温度和湿度，在暗光条件下将枝条切成0.5cm长的茎段或茎尖，保留叶片，下切口保持平口。
(4)接种
快速的将切好的茎段或茎尖材料的下切口在“G·P克隆补液”1号液中速蘸，速蘸时间不超过1秒，材料浸蘸深度为0.1cm。
将浸蘸后的材料立即接种在经处理的小拱棚内的沙床上，要求沙床湿度以沙拳捏不成团为宜，接种深度为下切口接触沙床母本材料不倒为宜。接种密度为每平方米800-1000株。接种完毕后，用“G·P克隆补液”9号液将苗床及小拱棚喷雾一遍(该技术采用拉杆式人工喷雾器人工喷雾，以更好的调节喷雾强度)，强度以叶面不滴液为宜。
(5)接种后的管理
温度：
曼地亚红豆杉4-10月份接种苗管理，白天一般棚内温度控制在25-28度为宜，若温度过高靠喷雾调节水分降温，若温度过低则采用封棚口的方法增温，晚上一般封一半棚口(即留小口)，棚内温度一般控制在15-20度，但要注意通风。
曼地亚红豆杉11月至次年3月份接种苗管理，白天一般棚内温度控制在12-16度(苗床铺设地热线更佳)，温度过低可封棚控制温度，但要随时通风。晚上一般棚内温度控制在8-12度为宜。
湿度(水分)：
湿度管理主要有棚内湿度，接种苗叶面湿度和苗床湿度管理。4-10份接种，棚内湿度要求要大，接种苗湿度要求时时保持一层薄薄的水膜，即干即补(补水工具为拉杆式喷雾器，方法为人工喷雾，若采用自动喷雾或电脑控制喷雾则达不到理想的效果，成活率降低)，苗床湿度要求也要大。其余时间接种，棚内湿度要求小，接种苗湿度也要求时时保持一层薄薄的水膜，即干即补，苗床湿度要求相对较小。
光照：
4-10月份接种苗白天要进行遮光处理，光照较强时可用75％遮光网遮光，必要时可用2层遮光网(接种材料上有部分叶片，适当的光照可进行光合作用，产生部分养料)。其余时间接种，可根据实际情况进行适当遮光或不遮光。遮光网一般搭建在育苗棚上方2米处。
通风(氧气及二氧化碳)：
通风在育苗过程中非常重要，气温过高时要敞开两端棚口，经常通风，气温过低时也要根据实际情况间隔式通风。通风可交换棚风外空气，排出废气，增强氧气及二氧化碳，增加曼地亚红豆杉的光合作用，并可减少病害的发生。
养分(营养)：
曼地亚红豆杉在育苗过程中，要消耗大量的养料。为此在整个育苗过程中，配制了适合曼地亚红豆杉的一套补液。具体施用方案如下：
“G·P克隆补液”9号：
施用时间：第1、11、19、27、35天
“G·P克隆补液”2号：
施用时间：第4、12、20、28天
“G·P克隆补液”3号：
施用时间：第5、13、21、29天
“G·P克隆补液”6号：
施用时间：第6、14、22、30天
“G·P克隆补液”7号：
施用时间：第7、15、23、31天
“G·P克隆补液”8号：
施用时间：第8、16、24、32天
“G·P克隆补液”4号：
施用时间：第9、17、25、33天
“G·P克隆补液”5号：
施用时间：第10、18、26、34天
(6)生根、炼苗及出圃
经过培养，第25天时，育苗床即有60％左右的曼地亚红豆杉生根，到第30天时，生根率可达99％。第30-35天，逐渐减轻喷雾强度，第36天时停止补液的施用，即可将小拱棚掀开进行炼苗，到第50天时，小苗已经发出嫩芽，即可进行出圃移植或进行继代繁育。
实例二
本实例中的各项准备工作和配套技术管理方法均与实例一一致，不同的是“G·P克隆补液”的配制原料重量比不同，详细情况如下：
A：本实例中“G·P克隆补液”1号液各原料的重量配比是：
IBA(吲哚丁酸) 1590mg
NAA(萘乙酸) 248mg
6-BA(6-苄基氨基嘌呤 0.48mg
蒸馏水 加至1000ml
B：本实例中“G·P克隆补液”2号液各原料的重量配比是：
KNO3(硝酸钾) 1590mg
CaCl2·2H2O(氯化钙) 398mg
蒸馏水 加至1000ml
C：本实例中“G·P克隆补液”3号液各原料的重量配比是：
NH4NO3(硝酸铵) 1445mg
MgSO4·7H2O(硫酸镁) 326mg
KH2PO4(磷酸二氢钾) 98mg
蒸馏水 加至1000ml
D：本实例中“G·P克隆补液”4号液各原料的重量配比是：
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 19.8mg
ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 10.5mg
H3BO3(硼酸) 9.8mg
蒸馏水 加至1000ml
E：本实例中“G·P克隆补液”5号液各原料的重量配比是：
Na2MoO4·2H2(钼酸钠) 0.22mg
CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.028mg
CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.026mg
KI(碘化钾) 0.98mg
蒸馏水 加至1000ml
F：本实例中“G·P克隆补液”6号液各原料的重量配比是：
FeSO4·7H2O(硫酸铁) 49.5mg
Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠)； 39mg
蒸馏水 加至1000ml
G：本实例中“G·P克隆补液”7号液各原料的重量配比是：
Vit.B6(盐酸吡哆辛) 0.79mg
Gly(甘氨酸) 2.26mg
肌醇 76mg
椰乳 124.6mg
蒸馏水 加至1000ml
H：本实例中“G·P克隆补液”8号液各原料的重量配比是：
C2H22O11(蔗糖) 15940mg
蒸馏水 加至1000ml
I：本实例中“G·P克隆补液”9号液各原料的重量配比是：
过氧化氢 88500mg
蒸馏水 加至1000ml
实例三
本实例中的各项准备工作和配套技术管理方法均与实例一一致，不同的是“G·P克隆补液”的配制原料重量比不同，详细情况如下：
A：本实例中“G·P克隆补液”1号液各原料的重量配比是：
IBA(吲哚丁酸) 1610mg
NAA(萘乙酸) 255mg
6-BA(6-苄基氨基嘌呤) 0.45mg
蒸馏水 加至1000ml
B：本实例中“G·P克隆补液”2号液各原料的重量配比是：
KNO3(硝酸钾) 1610mg
CaCl2·2H2O(氯化钙) 402mg
蒸馏水 加至1000ml
C：本实例中“G·P克隆补液”3号液各原料的重量配比是：
NH4NO3(硝酸铵) 1450mg
MgSO4·7H2O(硫酸镁) 332mg
KH2PO4(磷酸二氢钾) 105mg
蒸馏水 加至1000ml
D：本实例中“G·P克隆补液”4号液各原料的重量配比是：
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 21mg
ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 12mg
H3BO3(硼酸) 10mg
蒸馏水 加至1000ml
E：本实例中“G·P克隆补液”5号液各原料的重量配比是：
Na2MoO4·2H2(钼酸钠) 0.29mg
CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.03mg
CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.033mg
KI(碘化钾) 1mg
蒸馏水 加至1000ml
F：本实例中“G·P克隆补液”6号液各原料的重量配比是：
FeSO4·7H2O(硫酸铁) 52mg
Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠)； 40mg
蒸馏水 加至1000ml
G：本实例中“G·P克隆补液”7号液各原料的重量配比是：
Vit.B6(盐酸吡哆辛) 0.8mg
Gly(甘氨酸) 2.6mg
肌醇 78.5mg
椰乳 127.5mg
蒸馏水 加至1000ml
H：本实例中“G·P克隆补液”8号液各原料的重量配比是：
C2H22O11(蔗糖) 16050mg
蒸馏水 加至1000ml
I：本实例中“G·P克隆补液”9号液各原料的重量配比是：
过氧化氢 105000mg
蒸馏水 加至1000ml
为证明本发明的实施情况，发明人将第一个实例实施情况进行了全面的实验，实验情况如下：
1.实验材料：曼地亚红豆杉枝条。
2.材料提供单位：重庆远大生态农业发展有限公司。
3.实验方法：
实验方法及所有的材料准备，步骤，补液配制均与第一个实例相同，实验结果如下：
表一：愈伤组织产生情况结果表
| 各种枝条接种数(个) | 10天时愈伤组织产生率 | 12天时愈伤组织产生率 | 17天时愈伤组织产生率 | 25天时愈伤组织产生率 |
| 1000 | 32 | 48 | 76.5 | 100 |
表二：生根情况结果表
| 各种枝条接种数(个) | 开始生根时间 | 第25天时生根率 | 第30天时生根率 | 平均每苗生根数(个) |
| 1000 | 第15天 | 60 | 99 | 24.6 |
表二：发芽情况结果表
| 各种枝条接种数(个) | 开始发芽时间 | 第50天时发芽率 | 第50天时平均苗高(mm) | 第50天时平均苗粗(mm) |
| 1000 | 第27天 | 99 | 5.9 | 2.3 |
4、实验结论：
①曼地亚红豆杉各种枝条均可用此发明方法繁殖。
②本发明可使曼地亚红豆杉在25天左右生根，30天内生根率达到99％。
③本发明可在50天内进行第二代快速繁殖，每株小苗可扩繁8-10株。
④本发明可以在较短的时间内，获得大量的曼地亚红豆杉种苗，对保护我国红豆杉资源，推广种植起决定性因素。
⑤本发明不与现有曼地亚红豆杉繁殖技术雷同，是一项全新的曼地亚红豆杉繁殖方法，在我国还没有相关技术出现。
Claims (3)
1、一种曼地亚红豆杉快速繁殖方法，其特征在于按如下步骤进行：
(1)育苗床及育苗棚的准备
A：育苗床以西偏5°的方向作床，苗床长8米，宽2.7米，床中深挖一地沟，沟长8米，宽30cm，深40cm，地沟将苗床分成相等的两个小苗床，各宽1.2米；
B：在苗床上方用竹片搭小拱棚，要求棚高12米，棚长8米；并覆白色塑料膜，膜长11米，两棚口分别下垂1.5用以覆盖棚口；
C：将河沙或沙质土平铺在小苗床上，厚度为5cm，铺后要求沙层松软，并用高锰酸钾800倍液将沙层消毒，将棚口塑料膜拉下盖住棚口，24小时后掀开塑料膜备用；
(2)配制适合曼地亚红豆杉生长的一套补液“G·P克隆补液”1号：
IBA(吲哚丁酸) 1540～1660mg
NAA(萘乙酸) 242～265mg
6-BA(6-苄基氨基嘌呤) 0.4～0.56mg
蒸馏水 加至1000ml
要点：根据浓度配制出混合液，用少量的95％的酒精溶解IBA和NAA，后再加入适量的水。6-BA先用1mol·L-1的HCl溶解，再加水定溶。配制完毕后，用酸度计测量其PH值，该溶液的PH值为6.0，若偏酸用1mol·L-1NaOH来调节，若偏碱用1mol·L-1HCl来调节。“G·P克隆补液”2号：
KNO3(硝酸钾) 1580～1620mg
CaCl2·2H2O(氯化钙) 395～410mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”3号：
NH4NO3(硝酸铵) 1440～1460mg
MgSO4·7H2O(硫酸镁) 325～335mg
KH2PO4(磷酸二氢钾) 96～110mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”4号：
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 18.5～22.5mg
ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 10～12.5mg
H3BO3(硼酸) 9.6～11mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”5号：
Na2MoO4·2H2(钼酸钠) 0.2～0.3mg
CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.025～0.035mg
CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.025～0.035mg
KI(碘化钾) 0.85～1.24mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”6号：
FeSO4·7H2O(硫酸铁) 46～53mg
Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠)； 38.5～45mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”7号：
Vit.B6(盐酸吡哆辛) 0.78～0.85mg
Gly(甘氨酸) 2.25～2.65mg
肌醇 75.5～80mg
椰乳 120～128mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”8号：
C2H22O11(蔗糖) 15800～16150mg
蒸馏水 加至1000ml“G·P克隆补液”9号：
过氧化氢 85000～120000mg
蒸馏水 加至1000ml
(3)母本繁育材料的准备
将曼地亚红豆杉的枝条用锋利的刀片或剪刀从母树上采集下来，穗条不需消毒；
保持曼地亚红豆杉枝条的温度和湿度，在暗光条件下将枝条切成0.5cm左右长的茎段或茎尖，保留叶片，下切口保持平口；
(4)接种
将切好的茎段或茎尖材料的下切口在“G·P克隆补液”1号液中速蘸，速蘸时间不超过1秒，材料浸蘸深度为0.5～0.15cm；
将浸蘸后的材料立即接种在经处理的小拱棚内的沙床上，要求沙床湿度以沙拳捏不成团为宜，接种深度为下切口接触沙床母本材料不倒为宜，接种密度为每平方米800-1000株；接种完毕后，用“G·P克隆补液”9号液将苗床及小拱棚喷雾一遍，强度以叶面不滴液为宜；
(5)接种后的管理
温度：
曼地亚红豆杉4-10月份接种苗管理，白天一般棚内温度控制在25-28度为宜，晚上封一部分棚口，棚内温度控制在15-20度，保证良好的通风；
曼地亚红豆杉11月至次年3月份接种苗管理，白天棚内温度控制在12-16度，晚上棚内温度控制在8-12度；
湿度：
湿度管理主要有棚内湿度，接种苗叶面湿度和苗床湿度管理；4-10份接种，棚内湿度要求要大，接种苗湿度要求时时保持一层薄薄的水膜，即干即补，补水工具为拉杆式喷雾器，方法为人工喷雾，苗床湿度要求也要大，其余时间接种，棚内湿度要求小，接种苗湿度也要求时时保持一层薄薄的水膜，即干即补，苗床湿度要求相对较小；
光照：
4-10月份接种苗白天要进行遮光处理，光照较强时可用75％遮光网遮光，必要时可用2层遮光网；其余时间接种，可根据实际情况进行适当遮光或不遮光，遮光网一般搭建在育苗棚上方2米处；
通风：
气温过高时要敞开两端棚口，经常通风，气温过低时也要根据实际情况间隔式通风；
养分：
在整个育苗过程中，分阶段施加适合曼地亚红豆杉生长的一套补液，具体施用方案如下：
“G·P克隆补液”9号：
施用时间：第1、11、19、27、35天
“G·P克隆补液”2号：
施用时间：第4、12、20、28天
“G·P克隆补液”3号：
施用时间：第5、13、21、29天
“G·P克隆补液”6号：
施用时间：第6、14、22、30天
“G·P克隆补液”7号：
施用时间：第7、15、23、31天
“G·P克隆补液”8号：
施用时间：第8、16、24、32天
“G·P克隆补液”4号：
施用时间：第9、17、25、33天
“G·P克隆补液”5号：
施用时间：第10、18、26、34天
说明：
“G·P克隆补液”2-9号均为喷雾施用，专用于曼地亚红豆杉的矿物元素的补充；育苗过程中共用补液35天，其中第2-3天不用任何补液，每天补液施用时间为最后一次喷雾时间，喷雾强度以叶片不滴液为宜；
(6)生根、炼苗及出圃
经过培养，第25天时，育苗床即有60％左右的曼地亚红豆杉生根，到第30天时，生根率可达99％，第30-35天，逐渐减轻喷雾强度，第36天时停止补液的施用，即可将小拱棚掀开进行炼苗，到第50天时，小苗已经发出嫩芽，即可进行出圃移植或进行继代繁育。
2、按照权利要求1所述的曼地亚红豆杉快速繁殖方法，其特征在于：
A：所说的“G·P克隆补液”1号液中各原料的重量配比是：
IBA(吲哚丁酸) 1585～1610mg
NAA(萘乙酸) 248～255mg
6-BA(6-苄基氨基嘌呤) 0.45～0.53mg
蒸馏水 加至1000ml
B：所说的“G·P克隆补液”2号液中各原料的重量配比是：
KNO3(硝酸钾) 1590～1610mg
CaCl2·2H2O(氯化钙) 398～405mg
蒸馏水 加至1000ml
C：所说的“G·P克隆补液”3号液中各原料的重量配比是：
NH4NO3(硝酸铵) 1445～1455mg
MgSO4·7H2O(硫酸镁) 326～332mg
KH2PO4(磷酸二氢钾) 98～105mg
蒸馏水 加至1000ml
D：所说的“G·P克隆补液”4号液中各原料的重量配比是：
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 19.5～21.5mg
ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 10.512mg
H3BO3(硼酸) 9.8～10.05mg
蒸馏水 加至1000ml
E：所说的“G·P克隆补液”5号液中各原料的重量配比是：
Na2MoO4·2H2(钼酸钠) 0.22～0.29mg
CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.026～0.032mg
CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.026～0.034mg
KI(碘化钾) 0.95～1.04mg
蒸馏水 加至1000ml
F：所说的“G·P克隆补液”6号液中各原料的重量配比是：
FeSO4·7H2O(硫酸铁) 48～52.5mg
Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠)； 39～44mg
蒸馏水 加至1000ml
G：所说的“G·P克隆补液”7号液中各原料的重量配比是：
Vit.B6(盐酸吡哆辛) 0.79～0.82mg
Gly(甘氨酸) 2.26～2.62mg
肌醇 76～78.5mg
椰乳 124～127.5mg
蒸馏水 加至1000ml
H：所说的“G·P克隆补液”8号液中各原料的重量配比是：
C2H22O11(蔗糖) 15940～16050mg
蒸馏水 加至1000ml
I：所说的“G·P克隆补液”9号液中各原料的重量配比是：
过氧化氢 88000～110000mg
蒸馏水 加至1000ml
3、按照权利要求1所述的曼地亚红豆杉快速繁殖方法，其特征在于：
A：所说的“G·P克隆补液”1号液中各原料的重量配比是：
IBA(吲哚丁酸) 1600mg
NAA(萘乙酸) 250mg
6-BA(6-苄基氨基嘌呤) 0.5mg
蒸馏水 加至1000ml
B：所说的“G·P克隆补液”2号液中各原料的重量配比是：
KNO3(硝酸钾) 1600mg
CaCl2·2H2O(氯化钙) 400mg
蒸馏水 加至1000ml
C：所说的“G·P克隆补液”3号液中各原料的重量配比是：
NH4NO3(硝酸铵) 1450mg
MgSO4·7H2O(硫酸镁) 330mg
KH2PO4(磷酸二氢钾) 100mg
蒸馏水 加至1000ml
D：所说的“G·P克隆补液”4号液中各原料的重量配比是：
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 20mg
ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 11mg
H3BO3(硼酸) 10mg
蒸馏水 加至1000ml
E：所说的“G·P克隆补液”5号液中各原料的重量配比是：
Na2MoO4·2H2(钼酸钠) 0.25mg
CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.03mg
CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.03mg
KI(碘化钾) 1mg
蒸馏水 加至1000ml
F：所说的“G·P克隆补液”6号液中各原料的重量配比是：
FeSO4·7H2O(硫酸铁) 50mg
Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠)； 40mg
蒸馏水 加至1000ml
G：所说的“G·P克隆补液”7号液中各原料的重量配比是：
Vit.B6(盐酸吡哆辛) 0.8mg
Gly(甘氨酸) 2.6mg
肌醇 78mg
椰乳 125mg
蒸馏水 加至1000ml
H：所说的“G·P克隆补液”8号液中各原料的重量配比是：
C2H22O11(蔗糖) 16000mg
蒸馏水 加至1000ml
I：所说的“G·P克隆补液”9号液中各原料的重量配比是：
过氧化氢 100000mg
蒸馏水 加至1000ml
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