CN1446534A

CN1446534A - 中药生物碱类脂质体及其制剂

Info

Publication number: CN1446534A
Application number: CN 02158899
Authority: CN
Inventors: 邓意辉; 王绍宁; 吴琼
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2002-12-30
Filing date: 2002-12-30
Publication date: 2003-10-08

Abstract

本发明是一种中药生物碱类脂质体及其制剂，它能够提高有效血药浓度，其组分和含量为：中药生物碱0.1～2％、磷脂0.5～10％、胆固醇0～5％，以上均为质量百分比，所说的磷脂为卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油，脂质体可以制成注射剂、口服剂型、糖浆、滴剂、喷鼻剂、外用软膏等制剂，所说的脂质体制法为主动载药法中pH梯度法。本发明脂质体包封率高，渗漏小，提高了Ber体内抑瘤作用，从而提高疗效。

Description

中药生物碱类脂质体及其制剂

技术领域：

本发明涉及医药技术领域，确切地说它是中药生物碱类脂质体及其制剂。

背景技术：

利用磷脂与所说的生物碱(包括：小檗碱、小檗胺、千金藤啶碱(千金藤素)、四氢帕马丁和黄藤素)制成脂质体，可以经静脉、肌肉、口腔、鼻腔等途径给药。

中药生物碱类药物是一类有着较强生理活性化合物，如小檗碱(berberine，Ber)是从黄连等植物中提取出的一种异喹啉类生物碱，对多种革兰氏阳性菌和阴性菌有抑菌作用，临床上主要用于清热解毒和治疗肠道感染。近年来发现Ber具有多种非抗菌作用，开发了许多新用途，如治疗心律失常、高血压、高血脂症、糖尿病、消化性溃疡(胃及十二指肠溃疡)、口腔溃疡、结肠炎、慢性胆囊炎、中耳炎、结膜炎、皮肤感染、预防癌症等(1、袁建喜，安俊荣黄连素的临床新用河北中西医结合杂志1999，8(2).-174-175；2、曾明辉黄连素临床应用新进展河北中西医结合杂志1999，8(3).-344-345；3、韦正步小檗碱临床应用概况西北药学杂志1998，13(4).-178-179；4、邢周英，胡玉生几种老药的新用途安徽医科大学学报1997，32(4).-441；5、刘一民，王敬东黄连素非抗菌作用的应用进展河北中西医结合杂志1997，6(2).-325-326；6、陶岳多，徐树英黄连素临床应用进展临床医学1998，18(5).-32-33；7、郝文黄连素在内科疾病中的应用实用中医内科杂志1997，11(2)：20；8、钟中黄连素在心血管科的应用研究临床荟萃1996，11(1).-16；9、周元余黄连素在心血管疾病中的应用山东医药工业1997，16(6).-22-24；10、周保国，李红梅黄连素在心血管疾病中的应用研究进展实用中西医结合杂志1997，10(7).-609；11、宋云可，刘红旗小檗碱对心血管系统的作用及临床应用山东医药工业1997，16(5)。-28-29；12、周本杰黄连及黄连素抗肿瘤研究概况中药材 1998，21(10).-536-537；13、黄林清，传福小檗碱抗肿瘤作用实验研究中国药理学通报1997，13(2)-189)。有资料显示，Ber对艾氏腹水瘤和NK/LY细胞均有一定的抑制作用，对人鼻咽癌细胞HNE1、恶性畸胎瘤细胞NT2/D1、大鼠9L脑肿瘤细胞也有一定的抑制和杀灭作用。黄林清等在进行抗肿瘤的实验中发现，Ber体内抑瘤作用没有体外作用明显，可能与其肠道吸收较差，在体内很难达到对肿瘤细胞有效的血药浓度。为了提高Ber体内抑瘤作用，我们将其制成脂质体，同时还制备了其他生物碱如：小檗胺、千金藤啶碱(千金藤素)、四氢帕马丁和黄藤素脂质体。

发明内容：

本发明的目的是提供一种中药生物碱类脂质体及其制剂，它能有效提高Ber体内抑瘤作用，可在制备多种剂型。本发明的特征在于：其组分和含量为：中药生物碱0.1～2％、磷脂0.5～10％、胆固醇0～5％，以上均为质量百分比。所说的磷脂为卵磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂)、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油。其组分和含量的最佳范围为：中药生物碱0.5～1％、磷脂0.2～2％、胆固醇0～1％。脂质体可以制成注射剂、口服剂型、糖浆、滴剂、喷鼻剂、外用软膏等制剂。注射剂包括注射液和无菌粉针。无菌粉针为注射液中加入适当支持剂(或赋形剂)，通过喷雾干燥和冷冻干燥获得。所说的支持剂为一种或任何两种或两种以上混合的多元醇，包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇等。所说的生物碱包括：小檗碱、小檗胺、千金藤啶碱(千金藤素)、四氢帕马丁和黄藤素。所说的脂质体制法为“主动载药法”。所说的“主动载药法”为“pH梯度法”。

在制备含药脂质体时，根据药物装载的机理不同，可分为“被动载药”与“主动载药”两大类。传统上，人们采用最多的方法是“被动载药”法。所谓“被动载药”，即首先将药物溶于水相或有机相(脂溶性药物)中，然后按所选择的脂质体制备方法制备含药脂质体，其共同特点是：在装载过程中，脂质体的内外水相或双分子层膜上的药物浓度基本一致，决定其包封率的因素为药物与磷脂膜的作用力、膜材的组成、脂质体的内水相体积、脂质体数目、分子量及药脂比(药物与磷脂膜材比)等。对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物，“被动载药”法较为适用；而对于两亲性药物，其油水分配系数受介质的pH值和离子强度的影响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包封率有较大的变化，不适于工业化大生产。所谓“主动载药”，即通过内外水相的不同离子或化合物梯度进行载药，主要有K⁺-Na⁺梯度和H⁺梯度(即pH梯度)等。由于采用“主动载药”法制备脂质体的包封率高、渗漏小，非常适合于工业化大生产。

评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布和包封率等。其中包封率是衡量脂质体内在质量的一个重要指标。常见的包封率测定方法有分子筛法、超速离心法、超滤法等。我们采用阳离子交换树脂法测定包封率，具有样品有量少、耗时短、操作简单、成本低等优点。“阳离子交换树脂法”是利用离子交换作用，将荷正电的未包进脂质体中的生物碱吸附除去。而包封于脂质体中的生物碱，由于脂质体荷负电荷，不能被阳离子交换树脂吸附除去，从而达到分离目的，用以测定包封率。

包封率的测定：

取生物碱脂质体0.1mL各两份。一份直接加入10mL容量瓶中，加入6ml 95％乙醇溶解脂质体，用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释至刻度，吸附7～10分钟，摇匀；另一份加于阳离子交换树脂柱顶端，吸附7～10分钟，然后用PBS洗脱，收集滴出液于10mL容量瓶中，加入6ml 95％乙醇溶解脂质体，用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释至刻度，摇匀。于最大吸收波长处(小檗碱的最大吸收波长为：347nm)测定吸光度值(A)，并按下式计算包封率：

E％＝(A₁/A₂)×100％

其中，E％为包封率；A₁为过阳离子柱样品的A值；A₂为未过阳离子柱样品的A值。下面以小檗碱为例详细比较“被动载药法”与“主动载药法”制备脂质体的工艺及包封率。

被动载药：

1、磷酸盐缓冲液的配制，称取Na₂HPO₄·12H₂O 3.7g和NaH₂PO₄·2H₂20g，加蒸馏水溶解，并稀释成10000ml，即得(pH5.67)。

2、脂质体的制备，将磷脂、胆固醇等按重量比3∶1的比例混和，用适量无水乙醇溶解，减压蒸发，制备磷脂膜后，加入盐酸小檗碱的PBS溶液(1mg/ml)，制备脂质体，并过0.8um微孔滤膜3遍，即得。三批样品包封率测定结果分别为：12.6％、14.3％、13.1％。

3、主动载药

3.1柠檬酸缓冲液的配制

称取柠檬酸10.5g，柠檬酸钠7g，加水溶解，并配成1000ml，混匀，即得(pH3.64)。

3.2 NaHCO₃溶液

称取NaHCO₃50g。加水溶解，并配成1000ml，混匀，即得(pH8.32)。

3.3空白脂质体的制备

将SPC、CH按重量比3∶1的比例混和，用适量无水乙醇，于60℃水浴中加热溶解，减压蒸发，制备磷脂膜后，加入柠檬酸缓冲液，水化。将所得脂质体用0.8um的微孔滤膜过滤3～5遍，即得。

3.4不同载药方式对包封率的影响

(1)加药顺序对包封率的影响

将空白脂质体、NaHCO₃溶液、盐酸小檗碱溶液按下列顺序混合，于60℃水浴中孵化10分钟，测定包封率，结果见表1。

表1加药顺序对包封率的影响结果(n＝3)

	加药顺序	包封率(％)	包封率(％)	包封率(％)
	加药顺序	包封率(％)	包封率(％)	包封率(％)	abcd	脂质体+NaHCO₃+药物脂质体+药物+NaHCO₃药物+NaHCO₃+脂质体药物+脂质体+NaHCO₃	53.258.164.363.8	55.756.661.663.6	54.057.862.565.3

由此可知，加药顺序a的包封率最小，d的包封率最大。为了在下面的试验中充分显示这一差别，选择此两种加药顺序进行“孵化时间”、“孵化温度”、“pH值(梯度值)”和“粒度大小”对包封率影响的试验。

(2)孵化时间对包封率的影响

将空白脂质体、NaHCO₃溶液、盐酸小檗碱溶液按a、b顺序混合后，于水浴中孵化不同时间，结果见表2。

表2孵化时间对包封率的影响结果(n＝3)

	孵化时间(min)	5	10	20	30	40
	孵化时间(min)	5	10	20	30	40	包封率(％)	脂质体+NaHCO₃+药物药物+NaHCO₃+脂质体	38.141.6	51.861.2	74.683.5	79.884.6	72.878.8

由此可知，包封率随着孵化时间的延长而增大，当孵化时间为20分钟时，包封率趋于平台。为了能让下面的各因素对包封率影响的差别显示出来，选择孵化时间10分钟进行试验。

(3)孵化温度对包封率的影响

将空白脂质体、NaHCO₃溶液、盐酸小檗碱溶液按ab顺序混合后，于不同温度水浴中孵化10分钟，结果见表3

表3孵化温度对包封率的影响结果(n＝3)

	孵化温度(℃)	40	50	60	70	80
	孵化温度(℃)	40	50	60	70	80	包封率(％)	脂质体+NaHCO₃+药物药物+脂质体+NaHCO₃	24.533.7	45.152.3	56.768.8	63.072.3	58.267.6

由此可知，包封率随着孵化温度升高而增大，当孵化温度为60～70℃时，达到最大，80℃时，包封率则下降。

(4)pH值对包封率的影响

将“空白脂质体”、“NaHCO₃溶液”、“盐酸小檗碱溶液”按a、b顺序混合后，于60℃水浴中孵化10分钟，结果见表4。

表4pH值对包封率的影响结果

	pH	5.66	6.33	6.85	7.37	8.01
	pH	5.66	6.33	6.85	7.37	8.01	包封率(％)	脂质体+NaHCO₃+药物药物+脂质体+NaHCO₃	58.866.6	68.773.2	70.877.3	65.773.4	59.668.8

由此可知，pH值对包封率的影响较复杂，pH值在较低和较高区时，包封率均较低，包封最适pH值为6.33～7.37。

(5)脂质体粒径对包封率的影响

制备空白脂质体，分别过0.8um和0.45um微孔滤膜5次，进行整粒，按a、b顺序混合后，于60℃水浴中孵化10分钟，结果见表5。

表5脂质体粒径对包封率的影响结果

	粒径(um)	0.8	0.8	0.8	0.45	0.45	0.45
	粒径(um)	0.8	0.8	0.8	0.45	0.45	0.45	包封率(％)	脂质体+NaHCO₃+药物药物+脂质体+NaHCO₃	66.173.6	61.871.2	62.370.1	76.278.6	72.679.6	75.381.0

由此可知，脂质体粒径对包封率有一定影响，粒径小包封率高。

通过上述实验获得最佳组方、工艺：药物浓度0.5～1mg/ml，磷脂浓度10～30mg/ml。

本发明的优点是：本发明脂质体包封率高，渗漏小，提高了Ber体内抑瘤作用，提高了有效血药浓度，从而提高疗效。

具体实施方式：

实施例1：小檗碱脂质体的制备

处方：

小檗碱 0.2g

大豆卵磷脂 2g

乙醇适量

制成50ml

制备工艺：

按“主动载药法”制备。包封率为75.3％。

实施例2：小檗胺脂质体的制备

处方：

小檗胺 0.1g

氢化大豆卵磷脂 1g

乙醇适量

制成50ml

制备工艺：同“实施例1”，包封率为81.3％。

实施例3：千金藤啶碱(千金藤素)脂质体的制备

处方：

千金藤啶碱(千金藤素) 0.4g

蛋黄卵磷脂 4g

胆固醇 1g

乙醇适量

制成100ml

制备工艺：同“实施例1”，包封率为86.6％。

实施例4：四氢帕马丁脂质体的制备

处方：

四氢帕马丁 0.5g

二硬脂酰磷脂酰胆碱 6g

二氯甲烷适量

制成100ml

制备工艺：同“实施例1”，包封率为86.6％。包封率为51.0％。

实施例5：黄藤素脂质体的制备

处方：

黄藤素 0.2g

大豆卵磷脂 2g

二硬脂酰磷脂酰甘油 0.2g

乙醇适量

制成100ml

制备工艺：同“实施例1”，包封率为88.1％。

实施例6：小檗碱脂质体外用软膏剂的制备

处方：

小檗碱脂质体 100g

卡波姆941 0.5g

三乙醇胺适量

甘油 10g

制成约110g

制备工艺：“小檗碱脂质体”中加入卡波姆941，分散，加入甘油混匀，用三乙醇胺调pH值至5～8，即得。

Claims

1、中药生物碱类脂质体及其制剂，其特征在于：其组分和含量为：

中药生物碱 0.1～2％

磷脂 0.5～10％

胆固醇 0～5％

以上均为质量百分比。

2、根据权利要求1所述的中药生物碱类脂质体及其制剂，其特征在于：所说的磷脂为卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油。

3、一种如权利要求1所述的中药生物碱类脂质体及其制剂，其特征在于：脂质体可以制成注射剂、口服剂型、糖浆、滴剂、喷鼻剂、外用软膏等制剂。

4、根据权利要求3所述的中药生物碱类脂质体及其制剂，其特征在于：注射剂包括注射液和无菌粉针。

5、根据权利要求4所述的中药生物碱类脂质体及其制剂，其特征在于：无菌粉针为注射液中加入适当支持剂或赋形剂，通过喷雾干燥和冷冻干燥获得。

6、根据权利要求5所述的中药生物碱类脂质体及其制剂，其特征在于：所说的支持剂为一种或任何两种或两种以上混合的多元醇，包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇等。

7、根据权利要求1所述的中药生物碱类脂质体及其制剂，其特征在于：所说的生物碱包括：小檗碱、小檗胺、千金藤啶碱、四氢帕马丁和黄藤素。

8、根据权利要求1所述的中药生物碱类脂质体及其制剂，其特征在于：所说的脂质体制法为“主动载药法”。

9、根据权利要求8所述的中药生物碱类脂质体及其制剂，其特征在于：所说的“主动载药法”为“pH梯度法”。