CN1444945A

CN1444945A - 一种治疗呼吸系统疾病的含贝母总碱的药物及其制备方法

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Publication number: CN1444945A
Application number: CN 03113291
Authority: CN
Inventors: 侯俊英; 倪文山
Original assignee: TIANYANG PHARMACEUTICAL CO Ltd ANHUI PROV
Current assignee: TIANYANG PHARMACEUTICAL CO Ltd ANHUI PROV
Priority date: 2003-04-25
Filing date: 2003-04-25
Publication date: 2003-10-01
Anticipated expiration: 2023-04-25
Also published as: CN1197580C

Abstract

治疗呼吸系统疾病的贝母总碱、含贝母总碱的药物组合物及其提取分离方法；贝母用稀盐酸溶液提取，通过大孔吸附树脂柱，活性炭脱色，中性氧化铝柱，制得的贝母总碱纯度可达50％以上，且提取率达到80－90％；将贝母总碱和口服制剂辅料或注射剂辅料混合，可制得滴丸或注射剂。

Description

一种治疗呼吸系统疾病的含贝母总碱的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗呼吸系统疾病的含贝母总碱的药物及其制备方法，具体地说是中药浙贝母和皖贝母的有效部位贝母总碱、含贝母总碱的药物组合物及其相应的制备方法。

背景技术

浙贝母(Feirillaria thunbergii Miq的干燥鳞茎)，为传统常用中药主产于浙江宁波地区，具有清热润肺，化痰止咳及散结等功能，用于风热犯肺，痰火咳嗽，肺痈，乳痛，瘰疬，疮毒。浙贝母的有效成分为甾醇类生物碱，其生物碱含量为0.12％-0.25％，经提取分离和化学结构鉴定为贝母甲素，贝母乙素，浙贝宁，浙贝宁甙，浙贝丙素，浙贝酮等。

皖贝母(Fritillaria anhuiensis s.c.chen et s.E.Yin的干燥鳞茎)又称安徽贝母，主要产于安徽省大别山区，80年代经鉴定为百合科贝母属新种，早在清光绪年间，已载入物产史籍，并在民间广泛使用。1990-1992年，国家卫生部批准该药为I类新药(中药材)，该药具清热润肺，止咳化痰功效。皖贝母的有效成分为甾醇类生物碱，总生物碱含量为0.43％-0.57％，经提取分离和化学结构鉴定为贝母甲素、贝母乙素，异贝母甲素、贝母辛及生物碱甙。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：研制源于中药的治疗呼吸系统疾病的有效部位贝母总碱，以及含贝母总碱的药物组合物。本发明还包括一种贝母总碱含量高的提取分离方法。

一种治疗呼吸系统疾病的贝母总碱，可用下述方法制备：

取贝母，稀盐酸溶液提取，通过大孔吸附树脂柱，水洗，乙醇梯度洗脱，收集70～100％乙醇洗脱液，减压回收乙醇液，浓缩液加活性炭脱色，过滤，滤液通过中性氧化铝柱，90～100％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇至浸膏状，真空干燥，得贝母总碱原料药。

所述的贝母总碱，其制备方法为：取浙贝母或皖贝母，用10～20倍的0.05M、0.1M或0.15M的盐酸水溶液渗漉；通过D-101、DM-130、SIP-1300或SIP-1400大孔树脂柱，收集90～95％乙醇洗脱液；减压回收乙醇液，浓缩液加活性炭脱色，过滤，滤液通过中性氧化铝柱，94～96％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇至浸膏状，真空干燥，得浙贝母总碱或皖贝母总碱。

上述贝母总碱，其特征在于：用12～14倍的0.1M的盐酸水溶液渗漉；通过D-101大孔树脂柱；贝母总碱原料药中其总碱含量大于50％。

用于治疗呼吸系统疾病的药物组合物，其中含有治疗有效量的前述任一项的贝母总碱和药学上可接受的载体。

所述药物组合物，其特征在于：基本上由贝母总碱和口服制剂辅料或注射剂辅料组成；是滴丸剂、口服液、注射液、滴注液、冻干粉、微囊剂、胶囊剂或各种缓释或速释片剂。

前述药物组合物的制备方法，可用如下步骤制得：

取PEG6000和/或PEG4000于90-100℃，混合熔融，加入贝母总碱混合，常规制成滴丸。其特征在于：按重量比计，取PEG6000和/或PEG40001-4份，于90-100℃混合熔融后，加入皖贝母总碱或浙贝母总碱原料1-1.4份混合，常规制成滴丸。

前述药物组合物的制备方法，可用如下步骤制得：

取注射用水，用2％盐酸溶液调PH2-3，加贝母总碱混合，按常规活性炭脱色，过滤，滤液加注射用水稀释并调节PH至4.5-5.5，并配成注射液。其特征在于：取注射用水500ml，用2％盐酸溶液调PH2-3，加皖贝母总碱3.85g或者或浙贝母总碱4.55g，溶解，加入0.2％活性炭脱色，过滤，滤液加注射用水稀释并调节PH至4.5-5.5，配成1000ml注射液。

贝母总碱的提取分离工艺，分别进行了工艺优选。

试验结果表明：

本发明贝母总碱提取工艺采用大孔吸附树脂法与传统的提取工艺酸碱转移氯仿提取法及离子交换树脂法相比较，本发明方法不仅工艺简单，易于工业化生产，不需使用价高且有毒的有机溶剂(氯仿、丙酮等)，再生无需酸碱处理利于环保，且贝母总碱提取率高。

采用大孔吸附树脂法的提取工艺，对该方法的工艺参数进行优选。首先对不同浓度的盐酸溶液用量进行优选，实验结果表明：可用0.05M，0.1M，0.15M的盐酸水溶液提取，其中采用0.1M浓度的盐酸溶液13倍量为最佳，其提取率达到94.06％。对各种型号的树脂进行优选，通过各种型号的树脂对贝母总生物碱的比吸附量及乙醇解吸率的比较，表明：可使用D-101、DM-130、SIP-1300、SIP-1400树脂，其中D101树脂为最佳，其比吸附量达到12.9mg/g，乙醇解吸率达到99.88％。而D231、D254的比吸附量及乙醇解吸率均低。参见表1。

表1各种树脂对贝母总生物吸附及解吸性能比较

树脂型号比吸附量(mg/g) 乙醇解吸率(％)

D-101 12.9 99.88DM-130 11.6 87.64SIP-1300 12.3 91.99SIP-1400 12.2 90.36

D231 3.9 8.61

D254 3.4 16.27

通过D101大孔吸附树脂吸附并经乙醇解吸后的贝母总生物碱的粗提取物，经过常规活性炭脱色，再通过常规中性氧化铝柱进行精制，制得的贝母总碱纯度可达50％以上，且提取率达到80-90％。

贝母总碱药效学试验

贝母总碱药效学试验动物按临床成人用量的1、2和4倍量给药，结果显示：贝母总碱能明显抑制氨水引起小鼠的咳嗽和电刺激引起猫的咳嗽反射；抑制组胺、乙酰胆碱引起豚鼠哮喘潜伏期和由卵蛋白复制哮喘模型豚鼠的反应，使哮喘模型豚鼠气管灌洗液中的WBC数、EOS的百分率、TP降低和哮喘的豚鼠模型血清的NO含量明显降低；排痰试验结果显示：贝母总碱使小鼠酚红泌量和排痰量增加。说明贝母总碱具有明显的平喘、祛痰、镇咳作用。1、实验材料

试验药物

本发明的贝母总碱(以下简称贝母)

川贝枇杷露(简称口服液)100ml/瓶，生产厂商：浙江亚东霍山制药有限公司

其他药品均为市售合格药品

试验动物昆明种小鼠、Wistar大鼠和豚鼠由安徽省医学科学研究所动物中心提供，其中小、大鼠合格证号皖医实动准第01、03号；猫由合肥市动物市场购买的家猫。2、实验方法2.1 镇咳试验2.1.1小鼠氨水引咳法

取体重18-22g小鼠50只，雌雄各半，随机分成正常组(等容量蒸馏水)、阳性药物组(川贝枇杷口服液6240.00mg/kg，按体表面积计算，相当于临床成人日用量30ml含生药量12g的4倍)、贝母总碱小、中、大剂量组(7.80、15.60和31.20mg/kg，按体表面积计算，相当于成人临床用量60mg的1、2、4倍量)。分别按剂量ig给药，连续ig7天，末次给药后40min分别将小鼠置密闭玻璃箱内(40×40cm²)，用超声雾化器(PARIBOY037G6000型德产)向箱内喷入浓氨水，时间约为10s，喷液量约为3ml，造成小鼠咳嗽反射。记录2min内小鼠咳嗽次数，结果如表2。2.1.2猫电刺激引咳法

取家猫50只，体重1.5-3.0kg，雌雄兼用，随机均分成5组，以戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉。背位固定于手术台上，在甲状软骨附近沿颈中线切开皮肤，找出并分离喉上神经，安上保护电极以备刺激。

手术完后，用方波刺激器刺激喉上神经，刺激参数频率40次/s，波宽0.5s，每次刺激5s，刺激电压由小逐步递增，以猫在5s内出现咳嗽的最小电压值作为引咳阈值，将此值作为正常引咳阈值，然后按正常组(等容积蒸馏水)、川贝枇杷口服液组(1872.00mg/kg)、贝母组小、中、大剂量(2.34、4.68和9.36mg/kg)组剂量口服给药，分别于药后20min、40min、60min、80min、100min和120min测引咳阈值，结果见表3。2.2平喘实验2.2.1药物引喘法

取体重为200-250g豚鼠50只，雌雄兼用，随机分成正常组、贝母组给、贝母总碱小、中和大剂量组，将豚鼠分别置密封玻璃容器内，以恒定压力用超声雾化器向容器内喷2％乙酰胆碱和0.1％组胺等容积混合液15s。观察并记录豚鼠哮喘发作、抽搐跌倒的时间(即引喘潜伏期)，然后按表4中剂量口服给药，连续7天，末次给药30min后按上述同样方法进行引喘，结果见表4。2.2.2对哮喘模型豚鼠的治疗作用

取体重为250-300g的雄性豚鼠60只，随机分成正常组、模型组、口服液组、贝母总碱小、中和大量组。除正常组外，其他各组豚鼠均由大腿肌肉注射4％卵蛋白生理盐水液1ml/只，其中正常组注射等容量生理盐水。第14天，除正常组外，各组均以5％卵蛋白雾化15s，并记录各组豚鼠出现气短及呼吸困难等症状的哮喘潜伏期(超过180秒者则按180秒计)，然后，各组豚鼠按表5中剂量给药，连续给药2周，并于第21天、28天给药后1小时以5％卵蛋白雾化致敏引喘，测哮喘潜伏期时，用20％乌拉坦腹腔麻醉，腹主动脉取血用721紫外分光光度计于(550nm)，按说明书操作，测NO；然后进行气管插管，用pH7.4的37℃生理盐水5ml缓慢注入豚鼠肺内并保留3分钟，回抽灌洗液。此过程反复2次，并混合2次回抽灌洗液，经1500r/min离心10min，收集上清液用意大利BT-224型全自动生化分析仪测定TP、日本产F-820血球分析仪测定WBC，手工操作测嗜酸性粒细胞(EOS)百分率，结果见表5、6。2.3祛痰作用：2.3.1小鼠酚红祛痰法

取体重18-22g小鼠50只，雌雄各半，随机分成正常组、贝母组、贝母总碱小、中和大剂量组，ig给药，连续7天，末次给药后40min，ip0.25％酚红生理盐水溶液0.5ml/只(酚红生理盐水的配制：取酚红0.5g，用1MNaOH5ml溶液，再用NS配至200ml)，40min后，颈椎脱臼处死小鼠。用5％NaHCO₃溶液灌洗小鼠气管和支气管3次，每次0.5ml，收集灌洗液约1.5ml，用721分光光度计在520nm波长处，以5％NaHCO₃为空白对照，测定吸收度，结果见表7。2.3.2毛细管排痰法

取体重18-22g小鼠50只，雌雄各半，随机均分成5组(同上)。按剂量连续用药7d，末次药后30min各鼠肌注20％的乌拉坦0.15ml，待小鼠于半昏迷状态时，将小鼠固定，剪开颈部皮肤，暴露并分离气管，在甲状软骨下缘正中处，两软骨之间(药后40min)插入一直径为1mm，长约10cm的毛细管。30min后，取出毛细管，测量痰液高度为排痰量，结果见表8。

表2贝母总碱对浓氨水引咳的抑制作用(X±S)

组别动物数剂量咳嗽次数

(n) (mg/kg) (次/2min)

正常组 10 等容积 68.4±7.6

口服液组 10 6240.00 33.7±13.9^**

贝母组(小) 10 7.80 22.0±6.94^**

贝母组(中) 10 15.60 22.1±7.17^**

贝母组(大) 10 31.20 19.7±6.22^**与正常组比**P＜0.01

表3 贝母总碱对电刺激引咳阈的影响(X±S)

时间(min) 正常组口服液组贝母组(小) 贝母组(中) 贝母组(大)

正常 16.2±2.3 16.5±2.3 16.5±1.9 16.7±2.2 16.8±2.1

引 20 16.3±2.1 20.5±4.0^** 18.0±2.4 21.6±3.0^** 24.5±4.6^**

40 7.3±2.4 29.1±6.0^** 21.1±4.3^* 28.4±7.3^** 31.9±4.3^**

咳 60 17.5±2.3 34.0±7.4^** 24.4±4.5^** 31.8±7.1^** 36.6±5.3^**

80 17.4±2.4 36.4±7.3^** 28.2±7.5^** 37.8±5.7^** 43.5±5.3^**

阈 100 17.7±2.1 41.5±9.3^** 31.7±8.4^** 39.7±3.9^** 45.3±5.4^**

(V) 120 18.0±2.3 43.8±7.6^** 35.7±11.4^** 45.3±5.4^** 47.7±6.1^**

与正常相比**P＜0.01

表4贝母总碱对正常豚鼠的诱喘潜伏期的影响(X±S)

组别动物数(n) 剂量(mg/kg) 潜伏期(s)

正常组 10 等容积 13.50±4.43

口服液组 10 3720.00 24.60±8.02^**

贝母组(小) 10 4.65 24.50±11.87^*

贝母组(中) 10 9.30 24.10±11.21^*

贝母组(大) 10 18.60 24.20±9.48^*

与正常组比^*P＜0.05 ^**P＜0.01

表5贝母总碱对哮喘模型豚鼠潜伏期的影响(X±S)

组别动物数剂量潜伏期(s)

(n) (mg/kg)

14天 21天 28天

正常组 10 等容积 / / /

模型组 10 等容积 125.8±24.9 102.8±29.2 76.7±23.6

口服液组 10 6930.00 122.8±38.7 146.0±36.5^** 155.4±28.7^**

贝母组(小) 10 4.65 121.4±46.1 156.2±24.7^** 152.2±31.0^**

贝母组(中) 10 9.30 119.3±47.3 160.6±26.5^** 167.4±17.8^**

贝母组(大) 10 18.60 117.4±38.9 122.8±35.2^** 137.3±52.3^**

与正常相比^**P＜0.01

表6贝母总碱对哮喘模型豚鼠的WBC、EOS、TP、NO的影响(n＝10 X±S)

组别剂量 WBC TP NO EOS

(mg/kg) (10⁹/L) (g/L) (mol/L) (％)

正常组等容积 0.61±0.28 12.028±0.370 7.9143±7.1845 6.7±1.5

模型组等容积 1.67±1.19^** 22.025±15.026^** 29.8857±2.6537^** 10.6±1.8^**

口服液组 3720.00 1.39±0.61 12.006±0.294# 15.4286±12.6233## 9.7±1.8

贝母组(小) 4.65 1.66±0.83 11.136±0.838# 23.0286±10.5230 9.9±1.9

贝母组(中) 9.30 1.27±0.46 11.401±0.428# 14.4000±13.3817## 11.1±2.2

贝母组(大) 18.60 0.76±0.32## 11.535±0.229# 16.2286±12.2148## 7.7±1.9##

与正常相比^**P＜0.01

与模型组比#P＜0.05 与模型组比## P＜0.01

表7贝母总碱对小鼠酚红祛痰法排痰量的影响(X±S)

组别动物数(n) 剂量(mg/kg) 吸收值(A)

正常组 10 等容积 0.0748±0.0269

口服液组 10 6240.00 0.1556±0.0877^*

贝母组(小) 10 7.80 0.1375±0.0472^**

贝母组(中) 10 15.60 0.1267±0.0258^**

贝母组(大) 10 31.20 0.1372±0.0379^**

与正常组比^*P＜0.05 ^**P＜0.01

表8贝母总碱对毛细管排痰法排痰量的影响(X±S)

组别动物数(n) 剂量(mg/kg) 痰液高度(cm)

正常组 10 等容积 0.37±0.18

口服液组 10 6240.00 1.05±0.43^**

贝母组(小) 10 7.80 0.52±0.22

贝母组(中) 10 15.60 0.64±0.27^*

贝母组(大) 10 31.20 1.26±0.62^**与正常组比^*P＜0.05 ^**P＜0.01

由表7可见，贝母总碱有明显的排痰作用，各用药组排痰量明显增加，与正常相比，有显著性差异，且随剂量增加，排痰量加大。

由上述动物试验结果可见，1.贝母总碱有很强的镇咳作用，明显对抗氨水引起小鼠和电刺激猫喉上神经引起的咳嗽反应；2.平喘作用显著，能抑制乙酰胆碱与组胺混和液引起豚鼠哮喘的潜伏期和由卵蛋白制哮喘的豚鼠模型的哮喘的潜伏期、使哮喘的豚鼠模型气管灌洗液中的WBC数、EOS的百分率、TP降低，还能降低哮喘模型豚鼠血清中的NO含量；3、祛痰作用明显，使小鼠酚红分泌量和毛细管内痰量增加。综上结果说明：本发明贝母总碱具有良好的止咳平喘的功效。

本发明亦可按常规制成滴丸剂、口服液、注射液、滴注液、冻干粉、微囊剂、胶囊剂、各种缓释或速释片剂。

贝母总碱制得的口服制剂如滴丸以及贝母总碱制得的注射剂亦有上述良好的止咳平喘疗效。

具体实施方式

实施例1

取贝母10公斤，湿润，切片(1mm)，用0.1M浓度盐酸溶液按渗漉法进行渗漉，收集渗漉液120L-150L，(至渗漉液无生物碱反应为止)。渗漉液通过已处理好的D101型大孔吸附树脂(8kg)柱(树脂预处理办法：医用乙醇洗涤D101型大孔吸附树脂至洗涤液1ml和10ml水不显混浊，用去离子水洗尽乙醇即可)，树脂柱加水洗至PH5-6，用乙醇梯度洗脱，收集85％乙醇洗脱液，100L(至无生物碱反应为止)，回收乙醇，浓缩至8L，加入20g活性炭脱色，滤过，滤液通过3kg中性氧化铝(110℃活化4小时)柱，用95％乙醇洗脱，收集洗脱液15L，回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，得皖贝母总碱43g，依法测定总碱含量为65％。

取贝母10公斤，按上法制备，得浙贝母总碱21g，依法测定总碱含量为55％。

实施例2

贝母总碱滴丸的制备

取PEG6000 18g-20g及PEG4000 18g-20g于90-100℃，混合熔融，待全部融后加入皖贝母总碱原料细粉10g，搅拌，充分混合均匀后，移至70-80℃保温的滴瓶(滴头内径3mm，外径5.5mm)，由上往下，滴入液体石蜡(-5℃)中，将成形的滴丸沥尽并擦除液体石蜡，制成1000粒，即得。规格：每丸50mg，含纯贝母总碱6.6mg；用法用量：每日三次，每次3丸。

取PEG6000 18g-20g及PEG4000 18g-20g于90-100℃，混合熔融，待全部融后加入浙贝母总碱原料细粉12g，按上法制成1000粒。用法同上。

实施例3

贝母总碱注射液的制备

取注射用水500ml，加2％盐酸溶液调PH2-3，加皖贝母总碱细粉3.85g，溶解，摇匀，加入0.2％活性炭脱色，过滤，滤液加注射用水稀释并调节PH至4.5-5.5，并配成1000ml药液，过滤，精滤，灌封，灭菌，检验，即得，规格：2ml∶5mg。用法与用量：静脉滴注每次5-20mg，用5％葡萄糖注射液250ml或500ml稀释后使用。

取注射用水500ml，加2％盐酸溶液调PH2-3，加浙贝母总碱4.55g，按上法制备，并配成1000ml药液，过滤，精滤，灌封，灭菌，检验，即得，规格：2ml∶5mg。用法与用量：静脉滴注每次5-20mg，用5％葡萄糖注射液250ml或500ml稀释后使用。

Claims

1、一种治疗呼吸系统疾病的贝母总碱，可用下述方法制备：

2、根据权利要求1所述的贝母总碱，其特征在于：取浙贝母或皖贝母，用10～20倍的0.05M、0.1M或0.15M的盐酸水溶液渗漉；通过D-101、DM-130、SIP-1300或SIP-1400大孔树脂柱，收集90～95％乙醇洗脱液；减压回收乙醇液，浓缩液加活性炭脱色，过滤，滤液通过中性氧化铝柱，94～96％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇至浸膏状，真空干燥，得浙贝母总碱或皖贝母总碱。

3、根据权利要求2所述的贝母总碱，其特征在于：用12～14倍的0.1M的盐酸水溶液渗漉；通过D-101大孔树脂柱；贝母总碱原料药中其总碱含量大于50％。

4、用于治疗呼吸系统疾病的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1-3任一项的贝母总碱和药学上可接受的载体。

5、根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于：基本上由贝母总碱和口服制剂辅料或注射剂辅料组成。

6、根据权利要求5所述的药物组合物，是滴丸剂、口服液、注射液、滴注液、冻干粉、微囊剂、胶囊剂或各种缓释或速释片剂。

7、根据权利要求4或6之一所述的药物组合物的制备方法，可用如下步骤制得：

取PEG6000和/或PEG4000于90-100℃，混合熔融，加入贝母总碱混合，常规制成滴丸。

8、根据权利要求7所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：按重量比计，取PEG6000和/或PEG40001-4份，于90-100℃混合熔融后，加入皖贝母总碱或浙贝母总碱原料1-1.4份混合，常规制成滴丸。

9、根据权利要求4或6之一所述的药物组合物的制备方法，可用如下步骤制得：

取注射用水，用2％盐酸溶液调PH2-3，加贝母总碱混合，按常规活性炭脱色，过滤，滤液加注射用水稀释并调节PH至4.5-5.5，并配成注射液。

10、根据权利要求9所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：取注射用水500ml，用2％盐酸溶液调PH2-3，加皖贝母总碱3.85g或者或浙贝母总碱4.55g，溶解，加入0.2％活性炭脱色，过滤，滤液加注射用水稀释并调节PH至4.5-5.5，配成1000ml注射液。