CN1426480A - 磷酸核糖焦磷酸合成酶1作为除草剂的靶标 - Google Patents
磷酸核糖焦磷酸合成酶1作为除草剂的靶标 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1426480A CN1426480A CN01805753A CN01805753A CN1426480A CN 1426480 A CN1426480 A CN 1426480A CN 01805753 A CN01805753 A CN 01805753A CN 01805753 A CN01805753 A CN 01805753A CN 1426480 A CN1426480 A CN 1426480A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- plant
- pyrophosphate synthetase
- phosphoribosyl pyrophosphate
- ala
- leu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 101001125551 Homo sapiens Ribose-phosphate pyrophosphokinase 1 Proteins 0.000 title claims abstract description 99
- 102100029508 Ribose-phosphate pyrophosphokinase 1 Human genes 0.000 title claims abstract description 89
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 27
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 38
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 38
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 24
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 24
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 23
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 19
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 17
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 3
- 239000011149 active material Substances 0.000 claims description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000004907 flux Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 abstract description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 131
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 27
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 23
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 22
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 17
- 230000006870 function Effects 0.000 description 16
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 16
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 102220023258 rs387907548 Human genes 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 10
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 9
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 9
- 102220369445 c.668T>C Human genes 0.000 description 9
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 8
- 108020000772 Ribose-Phosphate Pyrophosphokinase Proteins 0.000 description 8
- 102000000439 Ribose-phosphate pyrophosphokinase Human genes 0.000 description 8
- 102220369447 c.1352G>A Human genes 0.000 description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 7
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 7
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000037039 plant physiology Effects 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 6
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 6
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 6
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 6
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 6
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 4
- 241000801118 Lepidium Species 0.000 description 4
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 4
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 4
- 230000003570 biosynthesizing effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 4
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 4
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 4
- 102220023257 rs387907546 Human genes 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 3
- IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N D-Octopin Natural products OC(=O)C(C)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IMXSCCDUAFEIOE-RITPCOANSA-N D-octopine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H](C)[NH2+][C@H](C([O-])=O)CCCNC(N)=[NH2+] IMXSCCDUAFEIOE-RITPCOANSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- -1 Nucleotide activated carbon hydrate Chemical class 0.000 description 3
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose 5-phosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 3
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 3
- PQGCEDQWHSBAJP-TXICZTDVSA-N 5-O-phosphono-alpha-D-ribofuranosyl diphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@@H]1COP(O)(O)=O PQGCEDQWHSBAJP-TXICZTDVSA-N 0.000 description 2
- 241000219144 Abutilon Species 0.000 description 2
- 108010056443 Adenylosuccinate synthase Proteins 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000209136 Agropyron Species 0.000 description 2
- 241000743339 Agrostis Species 0.000 description 2
- NZGRHTKZFSVPAN-BIIVOSGPSA-N Ala-Ser-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N NZGRHTKZFSVPAN-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- VRTOMXFZHGWHIJ-KZVJFYERSA-N Ala-Thr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O VRTOMXFZHGWHIJ-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- 241000219318 Amaranthus Species 0.000 description 2
- 241000404028 Anthemis Species 0.000 description 2
- ACKNRKFVYUVWAC-ZPFDUUQYSA-N Asn-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ACKNRKFVYUVWAC-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- PLTGTJAZQRGMPP-FXQIFTODSA-N Asn-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CC(N)=O PLTGTJAZQRGMPP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- FLJVGAFLZVBBNG-BPUTZDHNSA-N Asn-Trp-Arg Chemical compound N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(=O)O FLJVGAFLZVBBNG-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- 235000005781 Avena Nutrition 0.000 description 2
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 2
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 2
- 241000611157 Brachiaria Species 0.000 description 2
- 241000339490 Brachyachne Species 0.000 description 2
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 2
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 2
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 2
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 2
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 2
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 2
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 2
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 2
- 235000012766 Cannabis sativa ssp. sativa var. sativa Nutrition 0.000 description 2
- 235000012765 Cannabis sativa ssp. sativa var. spontanea Nutrition 0.000 description 2
- 241000219312 Chenopodium Species 0.000 description 2
- 235000000509 Chenopodium ambrosioides Nutrition 0.000 description 2
- 244000098897 Chenopodium botrys Species 0.000 description 2
- 235000005490 Chenopodium botrys Nutrition 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000192528 Chrysanthemum parthenium Species 0.000 description 2
- 241000132536 Cirsium Species 0.000 description 2
- KQLDDLUWUFBQHP-UHFFFAOYSA-N Cordycepin Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OCC(CO)C1O KQLDDLUWUFBQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- 241000234653 Cyperus Species 0.000 description 2
- UKVGHFORADMBEN-GUBZILKMSA-N Cys-Arg-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UKVGHFORADMBEN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000208296 Datura Species 0.000 description 2
- 241000192043 Echinochloa Species 0.000 description 2
- 241000202829 Eleocharis Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 241000234642 Festuca Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241001101998 Galium Species 0.000 description 2
- FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N Gly-Asp-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- OQQKUTVULYLCDG-ONGXEEELSA-N Gly-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN)C(O)=O OQQKUTVULYLCDG-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- FFJQHWKSGAWSTJ-BFHQHQDPSA-N Gly-Thr-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FFJQHWKSGAWSTJ-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 description 2
- XKMLYUALXHKNFT-UUOKFMHZSA-N Guanosine-5'-triphosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XKMLYUALXHKNFT-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 2
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 2
- WZPIKDWQVRTATP-SYWGBEHUSA-N Ile-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 WZPIKDWQVRTATP-SYWGBEHUSA-N 0.000 description 2
- 241001327265 Ischaemum Species 0.000 description 2
- 101150000102 LEB4 gene Proteins 0.000 description 2
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 2
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 2
- 241000520028 Lamium Species 0.000 description 2
- MJOZZTKJZQFKDK-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Gln Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O MJOZZTKJZQFKDK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N Leu-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 2
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 2
- 241000209082 Lolium Species 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000017945 Matricaria Nutrition 0.000 description 2
- 235000007232 Matricaria chamomilla Nutrition 0.000 description 2
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 2
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 2
- 235000003990 Monochoria hastata Nutrition 0.000 description 2
- 240000000178 Monochoria vaginalis Species 0.000 description 2
- 240000001307 Myosotis scorpioides Species 0.000 description 2
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 241000209117 Panicum Species 0.000 description 2
- 235000006443 Panicum miliaceum subsp. miliaceum Nutrition 0.000 description 2
- 235000009037 Panicum miliaceum subsp. ruderale Nutrition 0.000 description 2
- 235000011096 Papaver Nutrition 0.000 description 2
- 240000001090 Papaver somniferum Species 0.000 description 2
- 241001330453 Paspalum Species 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- 241000195887 Physcomitrella patens Species 0.000 description 2
- 241000205407 Polygonum Species 0.000 description 2
- 241000219295 Portulaca Species 0.000 description 2
- YTWNSIDWAFSEEI-RWMBFGLXSA-N Pro-His-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N3CCC[C@@H]3C(=O)O YTWNSIDWAFSEEI-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000218206 Ranunculus Species 0.000 description 2
- 241001107098 Rubiaceae Species 0.000 description 2
- 241000780602 Senecio Species 0.000 description 2
- JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N Ser-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 2
- VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 235000005775 Setaria Nutrition 0.000 description 2
- 241000232088 Setaria <nematode> Species 0.000 description 2
- 241000207763 Solanum Species 0.000 description 2
- 235000002634 Solanum Nutrition 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- 241000488874 Sonchus Species 0.000 description 2
- 240000006694 Stellaria media Species 0.000 description 2
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 2
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 2
- UBKKNELWDCBNCF-STQMWFEESA-N Tyr-Met-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 UBKKNELWDCBNCF-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 241000219422 Urtica Species 0.000 description 2
- AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 2
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 2
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 2
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 2
- 241001506766 Xanthium Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 102000005130 adenylosuccinate synthetase Human genes 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 2
- 108010010430 asparagine-proline-alanine Proteins 0.000 description 2
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009120 camo Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M cefotaxime sodium Chemical compound [Na+].N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M 0.000 description 2
- 235000005607 chanvre indien Nutrition 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- OFEZSBMBBKLLBJ-BAJZRUMYSA-N cordycepin Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)C[C@H]1O OFEZSBMBBKLLBJ-BAJZRUMYSA-N 0.000 description 2
- OFEZSBMBBKLLBJ-UHFFFAOYSA-N cordycepine Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)CC1O OFEZSBMBBKLLBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 108010066198 glycyl-leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000011487 hemp Substances 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N phosphoenolpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=C)OP(O)(O)=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 102220023256 rs387907547 Human genes 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 238000012882 sequential analysis Methods 0.000 description 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 description 2
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 229940048102 triphosphoric acid Drugs 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N (+)-Abscisic acid Chemical compound OC(=O)/C=C(/C)\C=C\[C@@]1(O)C(C)=CC(=O)CC1(C)C JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N 0.000 description 1
- NWXMGUDVXFXRIG-WESIUVDSSA-N (4s,4as,5as,6s,12ar)-4-(dimethylamino)-1,6,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4,4a,5,5a-tetrahydrotetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@]4(O)C(=O)C3=C(O)C2=C1O NWXMGUDVXFXRIG-WESIUVDSSA-N 0.000 description 1
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 2-acetyloxypropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)OC(C)=O WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150090724 3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710099475 3'-phosphoadenosine 5'-phosphate phosphatase Proteins 0.000 description 1
- GLRNUORBOPEUCX-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenesulfonamide;benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1.NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 GLRNUORBOPEUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTAPDZBZLSXHQQ-UHFFFAOYSA-N 8-methyl-3,7-dihydropurine-2,6-dione Chemical class N1C(=O)NC(=O)C2=C1N=C(C)N2 RTAPDZBZLSXHQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000427159 Achyranthes Species 0.000 description 1
- 102000002281 Adenylate kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020000543 Adenylate kinase Proteins 0.000 description 1
- OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N Ala-Leu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 241000743985 Alopecurus Species 0.000 description 1
- 240000001592 Amaranthus caudatus Species 0.000 description 1
- 235000009328 Amaranthus caudatus Nutrition 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001666377 Apera Species 0.000 description 1
- 108010037365 Arabidopsis Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 1
- UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N Arg-Tyr Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccc(O)cc1)C(=O)O UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000209200 Bromus Species 0.000 description 1
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 241000217446 Calystegia sepium Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000320316 Carduus Species 0.000 description 1
- 244000036828 Carduus nutans Species 0.000 description 1
- 241000132570 Centaurea Species 0.000 description 1
- 240000004385 Centaurea cyanus Species 0.000 description 1
- 235000005940 Centaurea cyanus Nutrition 0.000 description 1
- 241000398616 Chloronema Species 0.000 description 1
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 description 1
- 244000189548 Chrysanthemum x morifolium Species 0.000 description 1
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 1
- 241000207892 Convolvulus Species 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 108010076804 DNA Restriction Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 230000008836 DNA modification Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000320605 Dactyloctenium Species 0.000 description 1
- 241000721045 Daubentonia Species 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 235000017896 Digitaria Nutrition 0.000 description 1
- 241001303487 Digitaria <clam> Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007351 Eleusine Nutrition 0.000 description 1
- 241000209215 Eleusine Species 0.000 description 1
- 235000014716 Eleusine indica Nutrition 0.000 description 1
- 244000025670 Eleusine indica Species 0.000 description 1
- 235000006369 Emex spinosa Nutrition 0.000 description 1
- 244000294661 Emex spinosa Species 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 241001517310 Eria Species 0.000 description 1
- 241001290564 Fimbristylis Species 0.000 description 1
- 101710196411 Fructose-1,6-bisphosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101710186733 Fructose-1,6-bisphosphatase, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- 101710109119 Fructose-1,6-bisphosphatase, cytosolic Proteins 0.000 description 1
- 101710198902 Fructose-1,6-bisphosphate aldolase/phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000816457 Galeopsis Species 0.000 description 1
- 241000748465 Galinsoga Species 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- LCNXZQROPKFGQK-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LCNXZQROPKFGQK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- JSLVAHYTAJJEQH-QWRGUYRKSA-N Gly-Ser-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JSLVAHYTAJJEQH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 240000004153 Hibiscus sabdariffa Species 0.000 description 1
- 235000001018 Hibiscus sabdariffa Nutrition 0.000 description 1
- 101001125547 Homo sapiens Ribose-phosphate pyrophosphokinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 235000021506 Ipomoea Nutrition 0.000 description 1
- 241000207783 Ipomoea Species 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N Leu-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 241000064140 Lindernia Species 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 1
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241001504654 Mustela nivalis Species 0.000 description 1
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 101150101414 PRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000746981 Phleum Species 0.000 description 1
- 241001092090 Pittosporum Species 0.000 description 1
- 108020005089 Plant RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000209048 Poa Species 0.000 description 1
- 244000292693 Poa annua Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 235000006386 Polygonum aviculare Nutrition 0.000 description 1
- 244000292697 Polygonum aviculare Species 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- AIZVVCMAFRREQS-GUBZILKMSA-N Pro-Cys-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AIZVVCMAFRREQS-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 101100368710 Rattus norvegicus Tacstd2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100029509 Ribose-phosphate pyrophosphokinase 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000490453 Rorippa Species 0.000 description 1
- 241000341978 Rotala Species 0.000 description 1
- 235000005291 Rumex acetosa Nutrition 0.000 description 1
- 101100342406 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PRS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000009132 Sagittaria sagittifolia Species 0.000 description 1
- 241000202758 Scirpus Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 244000082988 Secale cereale Species 0.000 description 1
- CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N Senegenin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@](C)(C(O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)C(CC[C@]4(CCC(C[C@H]44)(C)C)C(O)=O)=C4[C@@H](CCl)C[C@@H]3[C@]21C CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- PTWIYDNFWPXQSD-GARJFASQSA-N Ser-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O PTWIYDNFWPXQSD-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- 244000275012 Sesbania cannabina Species 0.000 description 1
- 241000220261 Sinapis Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000017967 Sphenoclea zeylanica Nutrition 0.000 description 1
- 244000273618 Sphenoclea zeylanica Species 0.000 description 1
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000245665 Taraxacum Species 0.000 description 1
- 240000001949 Taraxacum officinale Species 0.000 description 1
- 235000005187 Taraxacum officinale ssp. officinale Nutrition 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- VCXWRWYFJLXITF-AUTRQRHGSA-N Tyr-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 VCXWRWYFJLXITF-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- 241000159750 Urtica cannabina Species 0.000 description 1
- JOQSQZFKFYJKKJ-GUBZILKMSA-N Val-Arg-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N JOQSQZFKFYJKKJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241001573053 Vandellia Species 0.000 description 1
- 241000405217 Viola <butterfly> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 101150099105 alien gene Proteins 0.000 description 1
- 238000003453 ammonium sulfate precipitation method Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000035584 blastogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Chemical compound BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- JYYOBHFYCIDXHH-UHFFFAOYSA-N carbonic acid;hydrate Chemical compound O.OC(O)=O JYYOBHFYCIDXHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- UCKZMPLVLCKKMO-LHLIQPBNSA-N cephamycin Chemical compound S1CC(C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](C)[C@]21OC UCKZMPLVLCKKMO-LHLIQPBNSA-N 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 108010031100 chloroplast transit peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 229940088530 claforan Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 1
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 239000002837 defoliant Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 108010074027 glycyl-seryl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000442 meristematic effect Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N monobenzone Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 230000037360 nucleotide metabolism Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000004144 purine metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 description 1
- 239000002719 pyrimidine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- XKMLYUALXHKNFT-UHFFFAOYSA-N rGTP Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XKMLYUALXHKNFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 235000003513 sheep sorrel Nutrition 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N sulfanilamide Chemical compound NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000009871 tenuigenin Substances 0.000 description 1
- YAPQBXQYLJRXSA-UHFFFAOYSA-N theobromine Chemical class CN1C(=O)NC(=O)C2=C1N=CN2C YAPQBXQYLJRXSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000009333 weeding Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1235—Diphosphotransferases (2.7.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
- G01N2333/9124—Diphosphotransferases (2.7.6)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2430/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving synthetic organic compounds as analytes
- G01N2430/20—Herbicides, e.g. DDT
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/20—Screening for compounds of potential therapeutic value cell-free systems
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及植物来源的编码具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1(E.C.2.7.6.1)活性的多肽的DNA序列在制备鉴定磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂的检测系统中的用途。通过使用反义技术，本发明首次证明磷酸核糖焦磷酸合成酶1是除草剂的靶标。
Description
本发明涉及植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1(E.C.2.7.6.1)作为新的除草活性成分作用靶标的鉴定。本发明也涉及编码具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的多肽的DNA序列SEQ-ID No.1，SEQ-ID No.3或者SEQ-IDNo.5或者其衍生物的一部分在建立鉴定具有除草作用活性的磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂的检测系统中的用途。本发明也涉及鉴定可抑制植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的物质的方法或者检测系统，以及使用此类方法或者这一检测系统鉴定出的植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1的抑制剂。
植物能够利用二氧化碳、水和无机盐合成它们的细胞成分。
此过程只有通过利用合成有机物质的生物化学反应才可能进行。植物体内核苷酸是从头合成的。作为核酸的成分，它们具有特别的重要性。通过与之共价结合，核苷酸活化碳水化合物进行多糖的生物合成。它们还活化用于脂类生物合成的头部基团。核苷酸实际上参与了所有的代谢过程。三磷酸核苷，特别是ATP，驱动细胞中大部分能量依赖的反应。还发现腺嘌呤核苷是一些基本因子，如参与了大量细胞内反应的辅酶A、烟酰胺和黄素辅酶的一种组成成分。5’-三磷酸鸟苷(GTP)的偶联水解决定了多种细胞内过程，如蛋白质翻译、微管组装、小泡转运、信号转导和细胞分裂所需反应的方向。而且，核苷酸也构成了甲基黄嘌呤类，如茜草科(Rubiaceae)和山茶科(Theaceae)植物中咖啡因和可可碱生物合成的起始代谢物。
由于植物依赖于有效的核苷酸代谢，可以设想参与核苷酸生物合成的酶可作为除草剂的合适靶标蛋白质。因此，现已有关于抑制植物从头嘌呤生物合成的活性成分的描述。可以提到的一个例子是天然物质hydanthocidin，其在植物体内磷酸化后可抑制腺苷酸琥珀酸合成酶(ASS)。(Siehl等人，植物生理学(Plant Physiol.)110(1996)，753-758)。
磷酸核糖焦磷酸(PRPP)是植物新陈代谢中一个必需成分。其为嘌呤和嘧啶核苷酸，吡啶核苷酸辅酶NAD的从头合成，以及已经合成的嘌呤、嘧啶和吡啶的再利用所必需。此外，PRPP也为组氨酸和色氨酸的合成所必需(参见Krath和Hove-Jensen，植物生理学119(1999)，497-505)。负责PRPP合成的酶是PRPP合成酶，其使核糖-5-磷酸和MgATP转换成AMP和PRPP。一些生物体的磷酸核糖焦磷酸合成酶还需要Mg2+。真核生物经常具有超过一种的磷酸核糖焦磷酸合成酶。因而，例如，人类就具有功能冗余的三种形式同工酶。植物磷酸核糖焦磷酸合成酶，例如，在菠菜中就存在四种同工型，可被分为两类，它们在位置和功能上是不同的，或者受植物细胞不同发育依赖调节机制的支配。例如，磷酸核糖焦磷酸合成酶2被运送至叶绿体中(Krath和Hove-Jensen，植物生理学119(1999)，497-505)。这也同在鼠耳芥属(Arabidopsis)叶绿体中检测到与嘌呤从头生物合成有关的几种酶的结果相吻合(Senecoff和Meager，植物生理学102(1993)，387-399；Ito等人，植物分子生物学(Plant Mol Biol.)26(1994)，529-533；Schnorr等人，植物杂志(Plant Journal)6(1994)，113-121)。在酵母中，已经证明4种磷酸核糖焦磷酸合成酶同工型具有不同的功能(Cater等人，酵母(Yeast)10(1994)，1031-1044)。与人、其它高等真核生物和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的磷酸核糖焦磷酸合成酶相反，对植物磷酸核糖焦磷酸合成酶仅有极少数的研究。在美国专利(US Patents)5,780,253和5,780,254中已经描述了鉴定植物嘌呤代谢抑制剂的一般方法。
从多种生物体中都已经分离出了编码磷酸核糖焦磷酸合成酶1的基因。至于植物，已经从拟南芥(Arabidopsis thaliana)(登录号X83764)和烟草中(Badur博士，Gttingen大学，1998)分离到了其全长DNA序列。
一种酶作为除草剂的靶标是否合适可以通过降低酶活性，例如在转基因植物中利用反义技术降低酶活性来确定。如果将某种基因的反义DNA导入植物中导致植物生长减慢，就提示活性降低的酶是适合作为除草剂活性成分作用位点的。例如，在转基因马铃薯中反义抑制乙酰乳酸合成酶(ALS)，如同使用ALS抑制性除草剂处理对照植物一样，导致了类似的表现型(Hfgen等人，植物生理学107(1995)，469-477)。
本发明的一个目的是提供在植物中磷酸核糖焦磷酸合成酶1是合适的除草剂作用靶标的证据，以及产生一种有效、简便的磷酸核糖焦磷酸合成酶1检测系统以进行抑制剂-酶结合研究。
我们发现，通过分离编码植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1的基因，构建植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1的反义构建体和使其在植物中表达，以及在细菌或真核细胞中功能性表达植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1，可以达到此目的。
为达到此目的，烟草(Nicotiana tabacum)和拟南芥编码植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1的cDNA以及展叶剑叶藓(Physcomitrella patens)的部分cDNA得到分离和测序，参见实施例1和实施例6，序列表SEQ-ID No.1、SEQ-ID No.3和SEQ-ID No.5。
携带有义和反义磷酸核糖焦磷酸合成酶1构建体的拟南芥和枯斑三生烟(Nicotiana tabacum cv.Samsun NN)烟草植株的性质得到非常仔细的分析。这些反义植物显示了不同程度的生长延迟。转基因植株以及第一、第二代后代植株在土壤中生长减慢。Northern杂交显示，生长减慢的植株与野生型植株相比磷酸核糖焦磷酸合成酶1的RNA数量降低了，参见实施例5和图3。此外，通过酶活性测定发现转基因反义株系与野生型植株相比磷酸核糖焦磷酸合成酶1的活性值也降低了。磷酸核糖焦磷酸合成酶1表达水平和活性的降低与生长延迟相关。尽管在植物中极可能存在数种磷酸核糖焦磷酸合成酶的同工型，但是令人吃惊的是，发现导入一种磷酸核糖焦磷酸合成酶反义构建体就可观察到生长减慢。这种清楚的关系第一次明确地证明磷酸核糖焦磷酸合成酶1可以作为除草剂活性成分的合适靶标蛋白质。
本发明的另一主题涉及通过高通量筛选来鉴定植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂的方法。因此，本发明涉及植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1，特别是烟草和拟南芥磷酸核糖焦磷酸合成酶1在适当的表达系统中的功能性表达，以及由此制备的酶在测定磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的体外检测系统中的用途。
为了能够发现有效的植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂，必须提供可以研究抑制剂-酶结合的合适检测系统。例如，为此将磷酸核糖焦磷酸合成酶1 cDNA序列或者烟草或拟南芥磷酸核糖焦磷酸合成酶1 cDNA序列的合适片段克隆入表达载体(pQE，Qiagen)并在大肠杆菌(E.coli.)中超量表达。
但是，作为选择，也可以在其它种类的细菌中、在酵母、真菌、藻类、植物细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞中表达含有SEQ-ID No.1或者SEQ-ID No.3的DNA序列或者DNA亚序列，或者这些序列的衍生序列的表达盒。
本发明的另一主题涉及源自SEQ-ID No.1或SEQ-ID No.3、或者与这些序列之一杂交并编码具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1生物活性的蛋白质的DNA序列的用途。
在表达盒的帮助下表达的植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1蛋白特别适合用于鉴定磷酸核糖焦磷酸合成酶1的特异性抑制剂。
至此，例如，将可以在待测活性成分存在或不存在的情况下测定磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的酶分析方法中利用植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1。通过比较两种情况下的活性测定结果，可对待测活性成分的抑制性作用进行定性和定量的评价，参见实施例7。
根据本发明的检测系统允许对大量的化合物进行快速、简便的检测以确定其除草特性。使用此方法，具有有效作用的物质可被特异性地和可重复地从大量的物质中筛选出来，以利于接下来对这些物质进行研究人员所熟悉的深入检测。
本发明的另一个主题涉及通过克隆植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因并在合适的表达盒中超量表达—例如在昆虫细胞中表达，裂解细胞并将细胞提取物直接，或浓缩，或分离磷酸核糖焦磷酸合成酶1后，应用于检测系统以便在低分子量化合物存在的情况下测定酶活性以鉴定具有潜在除草剂作用的植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂的方法。
本发明的另一个主题涉及用以鉴定可抑制植物中磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的具有除草作用的活性物质的方法，该方法包括：
a)产生含有编码具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的酶以及能够超量表达具有酶活性的磷酸核糖焦磷酸合成酶1的额外DNA序列的转基因植物、植物组织或植物细胞；
b)对转基因植物、植物细胞、植物组织或者植物器官和未转化的植物、植物细胞、植物组织或者植物器官使用一种物质；
c)在使用该化学物质之后，确定转基因和未转化植物、植物细胞、植物组织或者植物器官的生长或者存活能力；以及
d)比较在使用该化学物质之后，转基因和未转化植物、植物细胞、植物组织或者植物器官的生长或者存活能力；
当b)中使用的物质可抑制未转化植物、植物细胞、植物组织或者植物器官的生长或者存活能力，但是基本上不抑制转基因植物、植物细胞、植物组织或者植物器官的生长或者存活能力时，可以确认该物质具有除草剂活性并可抑制植物中的磷酸核糖焦磷酸合成酶1的酶活性。
本发明的另一个主题是可用以上描述的检测系统鉴定的具有除草剂活性的化合物。
具有除草剂活性的磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂可作为落叶剂、干燥剂、除茎杆剂，特别是除杂草剂使用。杂草在最广义上讲应理解为是指生长在不希望它们出现的地点的所有植物。在根据本发明的检测系统帮助下鉴定出的活性成分是以广谱除草剂还是选择性除草剂的形式起作用将尤其取决于使用的量。
例如，具有除草剂活性的磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂可用来清除下述杂草：
下列种属的双子叶杂草：
白芥属(Sinapis)、独行菜属(Lepidium)、拉拉藤属(Galium)、繁缕属(Stellaria)、母菊属(Matricaria)、春黄菊属(Anthemis)、牛膝菊属(Galinsoga)、藜属(Chenopodium)、荨麻属(Urtica)、千里光属(Senecio)、苋属(Amaranthus)、马齿苋属(portulaca)、苍耳属(Xanthium)、旋花属(Convolvulus)、蕃薯属(Ipomoea)、蓼属(Polygonum)、田菁属(Sesbania)、豚草属(Ambrosia)、蓟属(Cirsium)、飞廉属(Carduus)、苦苣菜属(Sonchus)、茄属(Solanum)、蔊菜属(Rorippa)、节节菜属(Rotala)、母草属(Lindernia)、野芝麻属(Lamium)、婆婆纳属(Veronica)、苘麻属(Abutilon)、刺酸膜属(Emex)、曼陀罗属(Datura)、蓳菜属(Viola)、鼬瓣花属(Galeopsis)、罂粟属(Papaver)、矢车菊属(Centaurea)、车轴草属(Trifolium)、毛茛属(Ranunculus)、蒲公英属(Taraxacum)。
下列种属的单子叶杂草：
稗属(Echinochloa)、狗尾草属(Setaria)、黍属(Panicum)、马唐属(Digitaria)、梯牧草属(Phleum)、早熟禾属(Poa)、羊茅属(Festuca)、蟋蟀草属(Eleusine)、臂形草属(Brachiaria)、黑麦草属(Lolium)、雀麦属(Bromus)、燕麦属(Avena)、莎草属(Cyperus)、高梁属(Sorghum)、冰草属(Agropyron)、狗牙根属(Cynodon)、雨久花属(Monochoria)、飘拂草属(Fimbristyslis)、慈姑属(Sagittaria)、荸荠属(Eleocharis)、蔍草属(Scirpus)、雀稗属(Paspalum)、鸭嘴草属(Ischaemum)、尖瓣花属(Sphenoclea)、龙爪茅属(Dactyloctenium)、剪股颖属(Agrostis)、看麦娘属(Alopecurus)、阿披拉草属(Apera)。
本发明的主题也涉及编码拟南芥或烟草磷酸核糖焦磷酸合成酶1或其功能等价物的表达盒序列在建立鉴定具有除草剂活性的化合物的检测系统中的用途。例如，该核苷酸序列可以是DNA或cDNA序列。
这样的表达盒还包含控制编码序列在宿主细胞中表达的调节核苷酸序列。按照优选的实施方案，根据本发明的表达盒包括上游(例如在编码序列的5′末端)启动子，和下游(例如在编码序列的3′末端)聚腺苷酸化信号以及，如果适当的话，操作性地连接磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因编码序列的其它调节元件，所述编码序列位于启动子和聚腺苷酸化信号之间。操作性连接应理解为是指启动子、编码序列、终止子以及，如果适当的话，其它调节元件均以一定的形式有序排列，以致每一调节元件都可象编码序列得到表达时期望的那样起作用。
根据本发明的这样表达盒通过利用常规的，例如T.Maniatis，E.F.Fritsch和J.Sambrook，分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning：ALaboratory Manual)，冷泉港实验室，冷泉港，NY(1989)和T.J.Silhavy，M.L.Berman和L.W.Enquist，基因融合实验操作(Experiments with genefusions)，冷泉港实验室，冷泉港，NY(1984)和Ausubel，F.M.等人，最新分子生物学实验指南(Current Protocols in Molecular Biology)，Greene Publishing Assoc.和Wiley-Interscience(1987)所描述的重组和克隆技术将适当的启动子同合适的磷酸核糖焦磷酸合成酶1 DNA序列和聚腺苷酸化信号相融合而得到。
本发明的主题也涉及编码磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因的，以及依据DNA序列的总长度与SEQ-ID No.1，SEQ-ID No.3和SEQ-ID No.5具有40～100％同源性的功能上等价DNA序列的用途。
本发明的优选主题涉及编码磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因的，以及依据DNA序列的总长度与SEQ-ID No.1，SEQ-ID No.3和SEQ-ID No.5具有60～100％同源性的功能上等价DNA序列的用途。
本发明的特别优选主题涉及编码磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因的，以及依据DNA序列的总长度与SEQ-ID No.1，SEQ-ID No.3和SEQ-ID No.5具有80～100％同源性的功能上等价DNA序列的用途。
按照本发明，编码磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因的功能上等价序列是保持有期望功能的(不论是否是衍生核苷酸序列)那些序列。因而，功能等价物包括此处所描述的序列的天然变体，也包括人工的核苷酸序列，例如通过化学合成并经改造过以适应植物密码子使用的人工核苷酸序列。
功能等价物也应理解为尤其是指编码磷酸核糖焦磷酸合成酶1并一直表现出期望功能的原始分离序列的天然或人工突变体。突变包括一个或多个核苷酸残基的替代、添加、缺失、交换或者插入。因此，例如本发明也扩展至通过修饰核苷酸序列而得到的那些核苷酸序列。例如，此类修饰的目的可以是进一步界定包含在其中的编码序列或引入其它的限制性酶切位点。
功能等价物也指那些与起始基因或起始片段相比较功能降低或增加了的变体。
此外，根据本发明的表达盒也可用于转化细菌、蓝细菌、酵母、丝状真菌和藻类以产生足够数量的磷酸核糖焦磷酸合成酶1。
本发明的另一个主题涉及烟草或拟南芥蛋白质，所述蛋白质的特征在于具有SEQ-ID No.2和SEQ-ID No.4的氨基酸序列，或者该蛋白质的具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的衍生物或部分，在建立鉴定具有除草剂活性的化合物的检测系统中的用途。
本发明的主题也涉及具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的植物蛋白质的用途，所述蛋白质在氨基酸序列上与具有SEQ-ID No.2、SEQ-ID No.4或SEQ-ID No.6序列的烟草、拟南芥或展叶剑叶藓磷酸核糖焦磷酸合成酶1有20～100％一致性，所述用途是指用以建立鉴定具除草剂活性的化合物的检测系统。
优选地，还涉及具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的植物蛋白质的用途，所述蛋白质在氨基酸序列上与具有SEQ-ID No.2、SEQ-ID No.4或SEQ-ID No.6序列的烟草、拟南芥或展叶剑叶藓磷酸核糖焦磷酸合成酶1有50～100％一致性，所述用途是指用以建立鉴定具除草剂活性的化合物的检测系统。
特别优选的是具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的植物蛋白质的用途，所述蛋白质在氨基酸序列上与具有SEQ-ID No.2、SEQ-ID No.4和SEQ-ID No.6序列的烟草、拟南芥或展叶剑叶藓磷酸核糖焦磷酸合成酶1有80～100％一致性，所述用途是指用以建立鉴定具除草剂活性的化合物的检测系统。
在植物中，编码磷酸核糖焦磷酸合成酶1的SEQ-ID No.1或SEQ-IDNo.3基因序列的超量表达导致植物对磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂的抗性增高。由此产生的转基因植物也是本发明的主题。
重组表达的磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因的表达效率可通过，例如体外茎分生组织繁殖或萌芽测试来确定。此外，类型和水平已改变的磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因的表达和其对磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂抗性的作用情况，可利用测试植物通过温室实验来检测。
本发明的主题还有用根据本发明的含有SEQ-ID No.1或SEQ-ID No.3 DNA序列的表达盒转化的、通过额外表达SEQ-ID No.1或SEQ-ID No.3的DNA序列而对磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂产生耐受性的转基因植物，以及此类植物的转基因细胞、组织、器官和繁殖材料。特别优选的是转基因农作物，例如大麦、小麦、黑麦、玉米、大豆、水稻、棉花、甜菜、canola、向日葵、亚麻、大麻、马铃薯、烟草、番茄、油菜籽、紫花苜蓿、莴苣，以及多种树木、坚果和葡萄及豆类植物。
特别优选确保靶向质外体、原生质体、液泡、线粒体和内质网的序列，或由于缺少合适的操作性序列而确保表达产物保留在其形成的区室即细胞质中(Kermode，植物科学重要综述(Crit.Rev.Plant Sci).15，4(1996)，285-423)的序列。
例如，植物表达盒可以整合入植物转化载体pBinAR之中。
原则上，表达盒的合适启动子可以是能够控制外源基因在植物中表达的任何启动子。优选使用尤其是植物启动子或来源自植物病毒的启动子。尤其优选的是使用花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子(Frank等人，细胞(Cell)21(1980)，285-294)。该启动子包含有不同的转录效应因子识别序列，它们作为整体导致所导入基因的永久和组成型表达(Benfey等人，欧洲分子生物学杂志(EMBOJ.)，8(1989)，2195-2202)。
表达盒也可包含使外源磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因在植物中可以受控在特定时间点表达的化学诱导型启动子。在文献中描述过的和可以使用的这样的启动子有，尤其是PRP1启动子(Ward等人，植物分子生物学，22(1993)，361-366)、水杨酸诱导型启动子(WO95/19443)、苯磺胺诱导型启动子(EP 388186)、四环素诱导型启动子(Gatz等人，植物杂志(PlantJ.)，2(1992)，397-404)、脱落酸诱导型启动子(EP 0335528)，或者乙醇或环己酮诱导型启动子(WO93/21334)。
特别优选的启动子还有那些确保表达发生在嘌呤或其前体进行生物合成的植物组织或器官中的启动子。特别要提到的是那些确保叶特异性表达的启动子。必须提到的启动子是马铃薯胞质FBPase或马铃薯ST-LSI的启动子(Stockhaus等人，欧洲分子生物学杂志，8(1989)，2445-245)。
在种子特异性启动子的作用下，外源蛋白质可在转基因烟草种子中稳定表达，直至占到种子全部可溶性蛋白质的0.67％(Fiedler和Conrad，生物工程技术(Bio/Technology)，10(1995)，1090-1094)。因此，根据本发明的表达盒可包含，例如，种子特异性启动子(优选地，phasolin启动子，USP启动子或LEB4启动子)，LEB4信号肽，待表达的基因和ER驻留信号(retention signal)。
编码磷酸核糖焦磷酸合成酶1的插入核苷酸序列可以通过合成产生，或者取自天然序列，或者是包含合成的或天然的DNA成分的混合序列。一般来讲，使用植物优选的密码子来制备合成的核苷酸序列。植物优选使用的密码子可通过研究在最感兴趣的植物品种中具有最高表达频率的蛋白质所使用的密码子来确定。当制备表达盒时，可能需要操作多种DNA片段以获得可在正确方向上顺利阅读和按正确读码框架拼接的核苷酸序列。为了将这些DNA片段彼此互相连接起来，可向片段增加衔接子或接头。
其他合适的DNA序列是人工DNA序列，只要它们能造成期望的表达磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因的性质即可。此类人工DNA序列可通过，例如，从具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的蛋白质反翻译来确定，或者它们可通过体外筛选而得出。特别合适的是按照宿主植物特异性密码子使用反翻译多肽序列所获得的编码DNA序列。特异性密码子使用可容易地由熟悉植物遗传学方法的技术人员利用计算机评价待转化植物的其它已知基因而确定。
必须提到的根据本发明的其它合适的等价核苷酸序列是编码融合蛋白质的序列，该融合蛋白质的组成成分是植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1多肽或者其功能上等价的部分。融合蛋白质的第二部分可以是，例如，具有酶活性的其它多肽、或者抗原性多肽的序列，在其帮助下可以检测磷酸核糖焦磷酸合成酶1的表达情况(例如myc标签或者His标签)。但是，优选的是调节蛋白质序列，例如是可将磷酸核糖焦磷酸合成酶1蛋白质引导到期望的作用位点的信号或转运肽。
有利地启动子和终止子区域应当在转录的方向上装备有包含1个或多个限制性位点的接头或多接头以便插入该序列。通常，接头有1至10，大部分是1至8，优选地是2至6个限制性位点。一般来讲，位于调节区域中间的接头大小小于100bp，常常小于60bp，但至少有5bp。根据本发明的启动子可以是宿主植物自身的，或者同源的，或者外来的，或者异种的启动子。根据本发明，表达盒按5’-3’转录方向包含依照本发明的启动子，任何序列和转录终止区。多种终止区可根据需要互相调换。
还可以进行提供适当限制性裂解位点或去除多余DNA或限制性裂解位点的操作。当适合出现插入、缺失或替代，例如转换或颠换时，可以使用体外诱变、引物修复、限制性酶切或连接技术。在适当操作，例如限制性酶切、削平或补平粘性末端以产生平端的情况下可产生片段的互补末端以供连接。
优选的聚腺苷酸化信号是植物聚腺苷酸化信号，优选的是与根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)T-DNA聚腺苷酸化信号基本上符合的，特别是与Ti质粒pTiACH5的T-DNA的基因3(章鱼碱合成酶)(Gielen等人，欧洲分子生物学杂志，3(1984)，835)聚腺苷酸化信号基本上符合的那些，或者其功能等价物。
为了利用编码磷酸核糖焦磷酸合成酶1的DNA转化宿主植物，将根据本发明的表达盒作为插入片段整合到重组载体中，所述载体DNA上包含其它功能调节信号，例如复制和整合所需的序列。适当的载体在，尤其是“植物分子生物学和生物工程技术方法(Methods in Plant MolecularBiology and Biotechnology)”(CRC出版社，第6/7章，71-119)一书中得到描述。
转移外来基因到植物的基因组中术语称为转化。其利用以上描述的转化和从植物的组织或植物细胞再生植物的方法进行瞬时或稳定转化。适当的方法是利用聚乙二醇诱导的DNA摄入所进行的原生质体转化，利用基因枪进行的生物轰击方法、电穿孔、在含有DNA的溶液里浸泡干胚芽、微注射和农杆菌介导的基因转移。上述提到的方法在，例如，B.Jenes等人，基因转移技术，见：转基因植物(Transgenic Plants)，第一卷，工程化和应用，S.D.Kung和R.Wu主编，Academic Press(1993)，128-143，和Potrykus，植物生理学和植物分子生物学综述年鉴(Annu.Rev.PlantPhysiol.Plant Mole.Biol.)，42(1991)，205-225，中得到描述。优选地，将要表达的构建体克隆入适合转化根瘤农杆菌的载体，例如pBin19中(Bevan等人，核酸研究(Nucl.Acids Res.)，12(1984)，8711)。
同样地，以根据本发明的表达盒转化的农杆菌可按已知方式用于转化植物，尤其是农作物例如谷类作物、玉米、大豆、水稻、棉花、甜菜、canola、向日葵、亚麻、大麻、马铃薯、烟草、番茄、油菜籽、紫花苜蓿、莴苣，以及多种树木、坚果和葡萄及豆类植物，方式有例如通过将采下的叶片或叶的切片浸泡在农杆菌悬液中并接下来在合适的培养基中培养。
嘌呤的生物合成位点通常是叶组织，因此磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因在叶中特异性表达是有意义的。然而，很明显嘌呤生物合成不一定限制在叶组织，也可在植物所有其余部分中以组织特异性的方式发生，例如在富含脂肪的种子中。
此外，组成型表达外源性的磷酸核糖焦磷酸合成酶1基因是有益的。另一方面，也可能希望进行诱导型表达。
使用以上引用的重组和克隆技术，可以将根据本发明的表达盒克隆入适当的载体中，所述载体能够使它们例如在大肠杆菌中扩增。适当的表达载体为，尤其是pBR332、pUC系列、M13mp系列和pACYC184。特别适合的载体为二元载体，其能够在大肠杆菌和农杆菌两者中复制。
本发明的另一主题涉及依据本发明的表达盒在转化植物、植物细胞、植物组织或植物器官中的用途。该用途的优选目的是增加植物中磷酸核糖焦磷酸合成酶1的含量。
根据所选择的启动子，表达可特异性地发生在叶，种子或植物的其它部分。这样的转基因植物和它们的繁殖材料和它们的植物细胞、植物组织或植物器官是本发明的另一主题。
现在将通过下面的实施例来举例说明本发明，实施例并不能限制本发明。
实施例所依据的重组方法：
普通克隆方法
克隆方法，例如限制性酶切、DNA分离、琼脂糖凝胶电泳、DNA片段纯化、转移核酸至硝酸纤维素或尼龙膜、DNA片段连接、转化大肠杆菌细胞、细菌培养和重组DNA的序列分析按照Sambrook等人，冷泉港实验室出版社(1989)；ISBN 0-87969-309-6所描述的方法进行操作。转化根瘤农杆菌参照Hfgen和Willmtzer(核酸研究，16(1988)，9877)的方法进行操作。农杆菌使用YEB培养基培养(Vervliet等人，普通病毒学(Gen.Virol.)，26(1975)，33)。
重组DNA的序列分析
重组DNA分子使用ABI激光荧光测序仪，按照Sanger法(Sanger等人，美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，74(1977)，5463-5467)进行测序。对多聚酶链式反应的片段进行了序列测定和检查以避免在将要表达的构建体中有聚合酶引入的错误。
植物组织中总RNA的分析
植物总RNA依照Logemann等人的方法，分析生物化学(AnalyticalBiochem.)，163(1987)，16)分离并利用含有甲醛的琼脂糖凝胶分开(Lehrach等人，生物化学(Biochem.)16(1977)，4743)。在20×SSC(1.5M氯化钠，150mM柠檬酸钠)中毛细作用过夜转移至尼龙膜(GeneScreen，NEN)。在杂交缓冲液(500mM磷酸钠(pH7.2)，7％SDS，0.5％牛血清白蛋白，1mM EDTA)中预杂交2小时后，使用放射性标记的NtPrs1探针在65℃杂交16小时。然后，在下列条件下洗涤：65℃下6×SSC，0.1％SDS中10分钟，65℃下4×SSC，0.1％SDS中5分钟。
除非有其它说明，使用的都是购自Fluka(Neu-Ulm)、Merck(Darmstadt)、Roth(Karlsruhe)、Serva(Heidelberg)和Sigma(Deisenhofen)公司的分析纯级化学试剂。溶液使用由Milli-Q水纯化系统(Millipore，Eschborn)制备的纯化无致热原的水，以下称为H2O，配制。限制性内切酶、DNA修饰酶和分子生物学试剂盒购自AGS(Heidelberg)、Amersham(Braunschweig)、Biometra(Gttingen)、Roche(Mannheim)、Genomed(Bad Oeynnhausen)、New England Biolabs(Schwalbach/Taunus)、Novagen(Madison，Wisconsin，USA)、Perkin-Elmer(Weiterstadt)、Pharmacia(Freiburg)、Qiagen(Hilden)和Stratagene(Freiburg)。除非有其它说明，试剂均按生产厂商的说明书使用。
大肠杆菌菌株(XL-1 Blue)购自Stratagene。转化植物使用的农杆菌菌株(含有质粒pGV3850kan的C58C1)参见Debleare等人，核酸研究，13(1985)，4777)所描述。
实施例1编码烟草和拟南芥5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶1(Prs1)的cDNA克隆的分离
利用编码拟南芥Prs1的cDNA序列(登录号X 83764；Krath和Hove-Jensen，1995)，推导出具有下述序列的寡核苷酸：
RBPRPP3 5’-aag aat tcg gat cca cca tgg tct tga agt tgt tct ctg gta ctgc-3’
RBPRPP4 5’-aag aat tcg gat cct cca agg aaa atg cta ctg ac-3’
利用这些寡核苷酸，扩增(35个循环，94℃30秒，45℃45秒，72℃2分钟)拟南芥(var.Landsberg erecta)叶cDNA的cDNA片段，进而经EcoR V位点平端克隆入pGEM-T载体(Promega)。通过序列测定鉴定鼠耳芥属Prs1 cDNA克隆的身份，参见SEQ-ID No.3。
利用此克隆筛选克隆入λZAPII的枯斑三生烟的叶cDNA文库。该cDNA文库以2.5×105噬斑形成单位的滴度铺平板并利用噬斑筛选方法进行分析(T.Maniatis，E.F.Fritsch和J.Sambrook，分子克隆：实验室手册，冷泉港实验室，冷泉港，NY 1989)。分离到12个噬菌体群并用于进行第二轮筛选，结果分离得到遗传学上一致的噬菌体群用于体内切除。内切酶分析在不同的cDNA克隆间未见任何差别，挑选具有最大插入片段的4个克隆进行序列测定。序列资料显示它们是编码5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶的cDNA克隆。
cDNA克隆NtPrs1-参见SEQ-ID No.1-全长1251bp，在第21位有起始密码子，第1089位有终止密码子TAG。开放阅读框架编码包含356个氨基酸且分子量38.3kD的蛋白质。152bp的3’非翻译区没有聚腺苷酸化信号。在分析从cDNA克隆NtPrs1推导出的蛋白质序列-参见SEQ-IDNo.2-时，计算机分析在最初的36个氨基酸内鉴定出了叶绿体转运肽。
实施例2产生转化烟草的二元载体
为了在反义的方向上产生质粒pBinAR-NtPrs1，利用BamH I在二元载体pBinAR(Hfgen和Willmitzer，植物科学(Plant Science)，66(1990)，221-230)的多接头处进行酶切。长度为1226bp的NtPrs1 cDNA片段(SEQ-ID No.1)从质粒pBluescript SK-NtPrs1(图1)中自pBluescript SK质粒多接头内的BamH I位点和NtPrs1 cDNA中的BamH I位点处切下(1208bp)。将此片段连接入BamH I酶切的pBinAR载体中。连接入的NtPrs1 cDNA片段的插入方向通过Hind III限制性酶切鉴定。切下300bp的Hind III片段证明反向插入正确。pBinAR-NtPrs1-反义质粒(图2)由A、B和C3个片段组成。片段A包括作为pBinAR载体的组成部分的、导致转基因植物中组成型表达的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子。此片段包括CaMV核苷酸的6909位至7437位(Franck，细胞(Cell)，21(1980)，285)。片段B包括1226bp的NtPrs1 cDNA片段，其作为BamH I片段分离自质粒pBluescript SK-NtPrs1并克隆入pBinAR载体多接头的BamH I位点。片段C包括Ti质粒pTiACH5(Gielen等人，欧洲分子生物学杂志，3(1984)，835)核苷酸11749-11939位的T-DNA的基因3(章鱼碱合成酶，OCS)的聚腺苷酸化信号。
如图1所示，cDNA文库的构建包括提供具EcoR I/Not I接头的各片段，然后将它们克隆入pBluescript多接头的EcoR I限制性位点。因此，Not I切割位点不是pBluescript的原始成分。
A 质粒pBluescript SK的多克隆位点
B NtPrs1 cDNA 1251bp
C 质粒pBluescript SK的多克隆位点
图2显示了在烟草中以反义方向表达NtPrs1 cDNA(1226bp)的表达盒。
A：花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子，529bp，CaMV的6909至7437位核苷酸。
B：自质粒pBluescript SK-NtPrs1作为BamH I片段分离的反义方向的NtPrs1 cDNA(1226bp)，包括NtPrs1编码区1-1208位的碱基。
C：Ti质粒pTiACH5的T-DNA基因3(章鱼碱合成酶，OCS)的聚腺苷酸化信号(192bp)。
实施例3利用根瘤农杆菌转化烟草
烟草利用Rosahl S、Schell J和Willmitzer L，欧洲分子生物学杂志，6(1987)，1155-1159的方法进行转化。质粒pBinAR-NtPrs1-反义(图2)同质粒pGV3850kan(Debleare等人，核酸研究，13(1985)，4777)一起转化入根瘤农杆菌C58C1。使用10ml在YEB培养基中过夜培养的阳性转化农杆菌菌落培养物(Vervliet等人，普通病毒学，26(1975)，33)转化烟草(枯斑三生烟)。无菌植物的圆形叶片(每片大约1cm2)置平皿中在此溶液中浸泡5-10分钟。然后在25℃下置含有0.8％BiTeKTM琼脂(DIFICO Laboratories)的MS培养基(Murashige-Skoog培养基，Murashige和Skoog，植物生理学，15(1962)，473)上黑暗培养2天。2天后在16小时光照/8小时黑暗的条件下和以弱节律在含有500mg/LClaforan(氨噻肟头孢霉素钠)，100mg/L卡那霉素，1mg/L苄基氨基嘌呤(BAP)，0.2mg/L萘乙酸和1.6g/L葡萄糖的MS培养基上继续培养。将生长的苗转移至含2％蔗糖，250mg/L Claforan和0.8％BiTeKTM琼脂的MS培养基上。在根长出后，将苗移至土壤中并在可控制环境的橱柜中按16小时光照/8小时黑暗的条件培养2周。然后，移植到稍大些的盆中转移到温室中。
实施例4转基因植物的分析
以pBinAR-NtPrs1反义构建体转化的转基因植物，其特征在于与未转化的野生型植物相比叶片上有大的萎黄区域和叶片强烈退色。一般来讲，转基因pBinAR-NtPrs1-反义植物包括其生长受到严重不利影响的植物。
此资料建立了降低的磷酸核糖焦磷酸合成酶1表达和烟草降低的生长之间的直接关系，因此证明磷酸核糖焦磷酸合成酶1可作为具除草作用的活性成分的合适靶标蛋白质。
实施例5Northern分析确证NtPrs1反义基因表达
通过NtPrs1 cDNA片段的链特异性标记来进行RNA分析。为了进行链特异性放射性标记，质粒pBluescript SK-NtPrs1以EcoR I酶切，分离具有NtPrs1基因编码区的1251bp片段。利用序列为：5’-CTT CAA GTTCCA GAC AAC AGT GTC-3’的3’寡核苷酸进行反应。反应使用的试剂盒由Finnzymes Oy生产，按照说明书操作。反应混合物包含有大约10ng的DNA片段，0.1mM的寡核苷酸，5ml的10×缓冲液，1.5mM MgCl2，5mM脱氧核糖核苷酸(dGTP、dATP、dTTP、)，50mCi a-32P-dCTP(Amersham)和1ml DyNazyme聚合酶。扩增条件如下所示：
变性温度：95℃，5秒
退火温度：45℃，30秒
延伸温度：72℃，1分钟
循环数：40
为了进行Northern分析，自大约0.5-1.0cm大小的叶片汇集物中分离总RNA，然后在甲醛琼脂糖凝胶中分离了20μg RNA，通过毛细管印迹法将片段转移至尼龙膜上。尼龙膜与链特异性标记的NtPrs1基因探针杂交。图3显示了野生型(WT)和转基因植物的杂交信号。
接下来杂交信号通过磷光影像分析仪(phospho-imager)进行定量。与植物的表现型一致，在45-1株中NtPrs1合成酶mRNA的转录本积累显著地降低了。植株33.4、14.5和30.4仅仅显示mRNA转录本积累降低了，以及类似地，较不太明显的生长表型。
实施例6自展叶剑叶藓产生cDNA文库
本工作使用了来自Hamburg大学分子遗传系公共收藏中心的植物品种展叶剑叶藓(Hedw.)B.S.G.。所使用的品系16/14由H.L.K Whitehouse收集于Gransden Wood，亨廷登郡(英格兰)并按照Engel的方法(美国植物学杂志(Am.J.Bot.)，55(1968)，438-446)经孢子进行传代培养。此苔藓植物通过孢子和配子托的再生进行繁殖。单倍体孢子发育成的原丝体组织由高叶绿体的chloronema和低叶绿体的茎原丝组成，大约12天后其上形成芽。这些芽生长成为配子托，其含有精子器和颈卵器。受精之后产生二倍体的孢子体、短蒴柄(short seta)、和供正在成熟的孢子发育的孢子囊。
为了产生cDNA文库，从自生长9天的原丝体所提取的PolyA+ RNA起始，使用鼠白血病病毒反转录酶(Roche，Mannheim，德国)和Oligo-d(T)引物，进行第一链的合成。通过与DNA聚合酶I，Klenow酶，RNaseH在12℃(2小时)，16℃(1小时)，22℃(1小时)孵备进行第二链的合成。65℃作用(10分钟)后终止反应并移至冰上。利用T4 DNA聚合酶(Roche，Mannheim)在37℃(30分钟)作用补平双链DNA，核苷酸通过酚/氯仿抽提去除然后经Sephadex G50层析。EcoR I衔接子(Pharmacia，Freiburg，德国)通过T4 DNA连接酶(Roche，12℃，16小时)连接到cDNA末端，进而利用多核苷酸激酶(Roche，37℃，30分钟)进行磷酸化。DNA片段通过凝胶电泳得到分离，大于300碱基对的片段利用酚抽提进行分离并经Elutip-D柱(Schleicher和Schuell，Dassel，德国)得到浓缩。使用Gigapack Gold试剂盒(Stratagene，Amsterdam，荷兰)按照厂家说明书操作将所得的双链DNA连接入λZAPII。体内切除产生用于转化大肠杆菌菌株XL-1 Blue的质粒DNA。来自单菌落的克隆利用液体培养基进行培养，提取质粒DNA用于测序反应。通过同源性比较，鉴定出编码5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶的EST片段，见SEQ-ID No.5。
实施例75-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶1检测系统
为了获得有活性的拟南芥5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶1用于高通量筛选方法，通过限制性酶BamH I和EcoR I(经引物RBPRPP3和RBPRPP4插入的识别位点)消化pGEM-T AtPrs1载体(图2)获得拟南芥Prs1片段并克隆入经相同酶切的转移载体pFastBacHTb(GibcoBRL)中。按照生产厂商的说明(GibcoBRL)应用所获得的构建体pFAST HTb-AtPrs1产生重组杆状病毒。按照生产厂商的说明(GibcoBRL)使用此种病毒感染昆虫细胞Sf21以产生有活性的拟南芥5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶1。细胞经超声破碎后，利用光度测定法测定5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶1的比活性。每90μl反应液使用如下成分：
16.4mM磷酸二氢钠缓冲液pH 7.8；0.3mM磷酸烯醇丙酮酸盐(Sigma，P-71279)；0.3mM氯化镁；0.15mM ATP(Sigma，A-3377)；0.06mM NADH(Sigma，N-8129)；0.3 U丙酮酸激酶(Sigma，P-9136)；0.2U肌激酶(Sigma，M-5520)；0.3 U L-乳酸脱氢酶(Bhringer/Roche127230)；用于抑制剂分析的0.5-5mM蛹虫草菌素5′-三磷酸(Sigma，C-9137)；64mM核糖-5-磷酸(Sigma，R-7750)。
在细胞于裂解缓冲液(50mM磷酸二氢钠，300mM氯化钠，pH7.8)中超声裂解后，使用18μg总蛋白质。按照生产厂商的说明(Qiagen)，利用由载体引入的His标签可经亲和色谱法进行进一步的纯化。可利用PD-10柱(Pharmacia)和标准的浓缩方法，例如硫酸铵沉淀法更换蛋白质的缓冲液。所测量的是NADH在340nm处光吸收值的降低。结果表明，蛹虫草菌素5′-三磷酸(其它高等真核生物的5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶抑制剂)也可以抑制植物5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶1的酶活性。
序列表<110>巴斯福股份公司<120>磷酸核糖焦磷酸合成酶1作为除草剂的靶标<130>BASF-OZ-0050/51207 PCT<140><141><160>6<170>PatentIn Vers. 2.0<210>1<211>1251<212>DNA<213>烟草<220><221>CDS<222>(22)..(1089)<400>1gcatccctct ctcttctcca c atg gca tct tta gct cta cct gga agc ttt 51
Met Ala Ser Leu Ala Leu Pro Gly Ser Phe
1 5 10tta gct acc agc aaa cct agt cct tgt aga tat gct gcc gga gac tca 99Leu Ala Thr Ser Lys Pro Ser Pro Cys Arg Tyr Ala Ala Gly Asp Ser
15 20 25att gta aga tgt aat gtg gca gaa cca tta agt ttt aac aag gag aat 147Ile Val Arg cys Asn Val Ala Glu Pro Leu Ser Phe Asn Lys Glu Asn
30 35 40ggg aga tca aac atg cct ctt cag att aat ggc gac act tca ttt aac 195Gly Arg Ser Asn Met Pro Leu Gln Ile Asn Gly Asp Thr Ser Phe Asn
45 50 55aat ctt tgg aac gct aat caa gta aga aga ttt cca gtt cca cat gct 243Asn Leu Trp Asn Ala Asn Gln Val Arg Arg Phe Pro Val Pro His Ala
60 65 70cag att gat act aga ctc cgc att ttc tcc ggc act gcc aat cct gca 291Gln Ile Asp Thr Arg Leu Arg Ile Phe Ser Gly Thr Ala Asn Pro Ala75 80 85 90ctt tct cag gaa ata gct tgc tac atg ggt ttg gaa ctt gga aag ata 339Leu Ser G1n Glu Ile Ala Cys Tyr Met Gly Leu Glu Leu Gly Lys Ile
95 100 105atg ata aaa cgt ttt gct gat ggc gaa atc tat gtc cag tta caa gag 387Met Ile Lys Arg Phe Ala Asp Gly Glu Ile Tyr Val Gln Leu Gln Glu
110 115 120agt gtt agg ggt tgt gat gta tat ctt gtc caa cct acg tgt ctc ctg 435Ser Val Arg Gly Cys Asp Val Tyr Leu Val Gln Pro Thr Cys Leu Leu
125 130 135cta atg aaa tct gat gga ctc ttg ata atg att gat gct tgc cgt aga 483Leu Met Lys Ser Asp Gly Leu Leu Ile Met Ile Asp Ala Cys Arg Arg
140 145 150gcc tca gcc aaa aat att act gca gtg att ccg tac ttt ggg tat gcc 531Ala Ser Ala Lys Asn Ile Thr Ala Val Ile Pro Tyr Phe Gly Tyr Ala155 160 165 170cgt gct gat cgt aag act caa ggt cgt gaa tcg att gct gcc aaa ctt 579Arg Ala Asp Arg Lys Thr Gln Gly Arg Glu Ser Ile Ala Ala Lys Leu
175 180 185gta gca aac ctg att aca gaa gct ggt gca gat cga gtt ctt gct tgt 627Val Ala Asn Leu Ile Thr Glu Ala Gly Ala Asp Arg Val Leu Ala Cys
190 195 200gat ctt cat tct ggc cag tca atg ggt tac ttt gat att cca gtg gat 675Asp Leu His Ser Gly Gln Ser Met Gly Tyr Phe Asp Ile Pro Val Asp
205 210 215cat gta cat ggc cag cct gtc ata ctt gat tac ctt gcc agc aag act 723His Val His Gly Gln Pro Val Ile Leu Asp Tyr Leu Ala Ser Lys Thr
220 225 230atc tgc tct gat gat cta gtt gtg gta tct ccg gat gtt ggt ggg gtt 771Ile Cys Ser Asp Asp Leu Val Val Val Ser Pro Asp Val Gly Gly Val235 240 245 250gca agg gca aga gct ttt gcc aaa aag tta tct gat gca cct cta gct 819Ala Arg Ala Arg Ala Phe Ala Lys Lys Leu Ser Asp Ala Pro Leu Ala
255 260 265att gtg gat aaa agg cgt cat ggg cac aat gtt gct gag gta atg aat 867Ile Val Asp Lys Arg Arg His Gly His Asn Val Ala Glu Val Met Asn
270 275 280ttg att ggc gat gtt agg gga aaa gtg gca gtt atg gtt gat gac atg 915Leu Ile Gly Asp Val Arg Gly Lys Val Ala Val Met Val Asp Asp Met
285 290 295att gat acg gct ggt act att gca aaa gga gct gcc ctt tta cat caa 963Ile Asp Thr Ala Gly Thr Ile Ala Lys Gly Ala Ala Leu Leu His Gln
300 305 310gga gcc agg gaa gtt tat gca tgc acc act cat gca gtt ttc agg gcg 1011Gly Ala Arg Glu Val Tyr Ala Cys Thr Thr His Ala Val Phe Arg Ala315 320 325 330gct ttg agc ctt act ccg gat tgg gaa ttg att agt cct tcc tgt tca 1059Ala Leu Ser Leu Thr Pro Asp Trp Glu Leu Ile Ser Pro Ser Cys Ser
335 340 345ttg ctt gtt ttg aca ctg ttg tct gga act tgaagcagta tgttgatcag 1109Leu Leu Val Leu Thr Leu Leu Ser Gly Thr
350 355atccaccaaa attttcgtcc agtaacaaag agagcatttt ctgttgtaca aatattttgt 1169gcggaatgtt acgttgtaaa tctttcaatc agtgacttgg atccatgtag tagatgagtt 1229ttttgattaa tatgaagttt ac 1251<210>2<211>356<212>PRT<213>烟草<400>2Met Ala Ser Leu Ala Leu Pro Gly Ser Phe Leu Ala Thr Ser Lys Pro1 5 10 15Ser Pro Cys Arg Tyr Ala Ala Gly Asp Ser Ile Val Arg Cys Asn Val
20 25 30Ala Glu Pro Leu Ser Phe Asn Lys Glu Asn Gly Arg Ser Asn Met Pro
35 40 45Leu Gln Ile Asn Gly Asp Thr Ser Phe Asn Asn Leu Trp Asn Ala Asn
50 55 60Gln Val Arg Arg Phe Pro Val Pro His Ala Gln Ile Asp Thr Arg Leu65 70 75 80Arg Ile Phe Ser Gly Thr Ala Asn Pro Ala Leu Ser Gln Glu Ile Ala
85 90 95Cys Tyr Met Gly Leu Glu Leu Gly Lys Ile Met Ile Lys Arg Phe Ala
100 105 110Asp Gly Glu Ile Tyr Val Gln Leu Gln Glu Ser Val Arg Gly Cys Asp
115 120 125Val Tyr Leu Val Gln Pro Thr Cys Leu Leu Leu Met Lys Ser Asp Gly
130 135 140Leu Leu Ile Met Ile Asp Ala Cys Arg Arg Ala Ser Ala Lys Asn Ile145 150 155 160Thr Ala Val Ile Pro Tyr Phe Gly Tyr Ala Arg Ala Asp Arg Lys Thr
165 170 175Gln Gly Arg Glu Ser Ile Ala Ala Lys Leu Val Ala Asn Leu Ile Thr
180 185 190Glu Ala Gly Ala Asp Arg Val Leu Ala Cys Asp Leu His Ser Gly Gln
195 200 205Ser Met Gly Tyr Phe Asp Ile Pro Val Asp His Val His Gly Gln Pro
210 215 220Val Ile Leu Asp Tyr Leu Ala Ser Lys Thr Ile Cys Ser Asp Asp Leu225 230 235 240Val Val Val Ser Pro Asp Val Gly Gly Val Ala Arg Ala Arg Ala Phe
245 250 255Ala Lys Lys Leu Ser Asp Ala Pro Leu Ala Ile Val Asp Lys Arg Arg
260 265 270His Gly His Asn Val Ala Glu Val Met Asn Leu Ile Gly Asp Val Arg
275 280 285Gly Lys Val Ala Val Met Val Asp Asp Met Ile Asp Thr Ala Gly Thr
290 295 300Ile Ala Lys Gly Ala Ala Leu Leu His Gln Gly Ala Arg Glu Val Tyr305 310 315 320Ala Cys Thr Thr His Ala Val Phe Arg Ala Ala Leu Ser Leu Thr Pro
325 330 335Asp Trp Glu Leu Ile Ser Pro Ser Cys Ser Leu Leu Val Leu Thr Leu
340 345 350Leu Ser Gly Thr
355<210>3<211>942<212>DNA<213>拟南芥<220><221>CDS<222>(1)..(939)<400>3atg gtc ttg aag ttg ttc tct ggt act gca aat cca gca ctt gct cag 48Met Val Leu Lys Leu Phe Ser Gly Thr Ala Asn Pro Ala Leu Ala Gln1 5 10 15gaa att gct tgg tat atg ggc ttg gat ctt ggc aag gtt aat att aag 96Glu Ile Ala Trp Tyr Met Gly Leu Asp Leu Gly Lys Val Asn Ile Lys
20 25 30agg ttt gct gat gga gag atc tat gtt cag cta caa gag agc gtt agg 144Arg Phe Ala Asp Gly Glu Ile Tyr Val Gln Leu Gln Glu Set Val Arg
35 40 45gga tgt gac gtc tat ttg gtg cag cct act tgc act ccc act aat gag 192Gly Cys Asp Val Tyr Leu Val Gln Pro Thr Cys Thr Pro Thr Asn Glu
50 55 60aat ctc atg gag ctt ttg att atg gta gat gct tgc cga aga gca tca 240Asn Leu Met Glu Leu Leu Ile Met Val Asp Ala Cys Arg Arg Ala Ser65 70 75 80gct aag aaa gtt aca gct gtg att ccg tat ttt gga tat gca aga gct 288Ala Lys Lys Val Thr Ala Val Ile Pro Tyr Phe Gly Tyr Ala Arg Ala
85 90 95gac agg aag aca caa ggg cgt gaa tcc att gct gcc aaa ttg gtt gca 336Asp Arg Lys Thr Gln Gly Arg Glu Ser Ile Ala Ala Lys Leu Val Ala
100 105 110aat ctt atc act gaa gct ggt gca gat cga gtt ctt gct tgt gat ctt 384Asn Leu Ile Thr Glu Ala Gly Ala Asp Arg Val Leu Ala Cys Asp Leu
115 120 125cat tca gga cag tcg atg ggt tat ttt gac att cca gtc gac cat gtg 432His Ser Gly Gln Ser Met Gly Tyr Phe Asp Ile Pro Val Asp His Val
130 135 140tac tgc cag ccg gtg ata ctt gat tat ctt gct agc aag tca att ccc 480Tyr Cys Gln Pro Val Ile Leu Asp Tyr Leu Ala Ser Lys Ser Ile Pro145 150 155 160tca gag gat ttg gta gtg gtt tct cct gat gtt ggt gga gta gcc agg 528Ser Glu Asp Leu Val Val Val Ser Pro Asp Val Gly Gly Val Ala Arg
165 170 175gcc cgc gct ttt gca aag aaa tta tca gat gca cca ctt gcc att gtc 576Ala Arg Ala Phe Ala Lys Lys Leu Ser Asp Ala Pro Leu Ala Ile Val
180 185 190gat aaa agg cgt tct gga cac aat gtt gct gag gtc atg aac cta att 624Asp Lys Arg Arg Ser Gly His Asn Val Ala Glu Val Met Asn Leu Ile
195 200 205ggt gat gta aga ggg aag gtg gca ata atg gtg gat gat atg att gat 672Gly Asp Val Arg Gly Lys Val Ala Ile Met Val Asp Asp Met Ile Asp
210 215 220act gct gga acc att gta aaa gga gca gct ttg tta cac cag gaa ggt 720Thr Ala Gly Thr Ile Val Lys Gly Ala Ala Leu Leu His Gln Glu Gly225 230 235 240gct cgg gag gta tat gcg tgc tgc aca cac gct gtt ttc agc ccg cca 768Ala Arg Glu Val Tyr Ala Cys Cys Thr His Ala Val Phe Ser Pro Pro
245 250 255gcg ata gag cga tta tca ggg ggt ttg ctg caa gaa gtg ata gtg aca 816Ala Ile Glu Arg Leu Ser Gly Gly Leu Leu Gln Glu Val Ile Val Thr
260 265 270aac aca tta cct gta gca gag aag aat tac ttc ccg cag tta aca ata 864Asn Thr Leu Pro Val Ala Glu Lys Asn Tyr Phe Pro Gln Leu Thr Ile
275 280 285tta tca gtg gct aat ctc ctg ggt gag acc att tgg cgt gtg cat gat 912Leu Ser Val Ala Asn Leu Leu Gly Glu Thr Ile Trp Arg Val His Asp
290 295 300gat agt tcc gtc agt agc att ttc ctt tga 942Asp Ser Ser Val Ser Ser Ile Phe Leu305 310<210>4<211>313<212>PRT<213>拟南芥<400>4Met Val Leu Lys Leu Phe Ser Gly Thr Ala Asn Pro Ala Leu Ala Gln1 5 10 15Glu Ile Ala Trp Tyr Met Gly Leu Asp Leu Gly Lys Val Asn Ile Lys
20 25 30Arg Phe Ala Asp Gly Glu Ile Tyr Val Gln Leu Gln Glu Ser Val Arg
35 40 45Gly Cys Asp Val Tyr Leu Val Gln Pro Thr Cys Thr Pro Thr Asn Glu
50 55 60Asn Leu Met Glu Leu Leu Ile Met Val Asp Ala Cys Arg Arg Ala Ser 65 70 75 80Ala Lys Lys Val Thr Ala Val Ile Pro Tyr Phe Gly Tyr Ala Arg Ala
85 90 95Asp Arg Lys Thr Gln Gly Arg Glu Ser Ile Ala Ala Lys Leu Val Ala
100 105 110Asn Leu Ile Thr Glu Ala Gly Ala Asp Arg Val Leu Ala Cys Asp Leu
115 120 125His Ser Gly Gln Ser Met Gly Tyr Phe Asp Ile Pro Val Asp His Val
130 135 140Tyr Cys Gln Pro Val Ile Leu Asp Tyr Leu Ala Ser Lys Ser Ile Pro145 150 155 160Ser Glu Asp Leu Val Val Val Ser Pro Asp Val Gly Gly Val Ala Arg
165 170 175Ala Arg Ala Phe Ala Lys Lys Leu Ser Asp Ala Pro Leu Ala Ile Val
180 185 190Asp Lys Arg Arg Ser Gly His Asn Val Ala Glu Val Met Asn Leu Ile
195 200 205Gly Asp Val Arg Gly Lys Val Ala Ile Met Val Asp Asp Met Ile Asp
210 215 220Thr Ala Gly Thr Ile Val Lys Gly Ala Ala Leu Leu His Gln Glu Gly225 230 235 240Ala Arg Glu Val Tyr Ala Cys Cys Thr His Ala Val Phe Ser Pro Pro
245 250 255Ala Ile Glu Arg Leu Ser Gly Gly Leu Leu Gln Glu Val Ile Val Thr
260 265 270Asn Thr Leu Pro Val Ala Glu Lys Asn Tyr Phe Pro Gln Leu Thr Ile
275 280 285Leu Ser Val Ala Asn Leu Leu Gly Glu Thr Ile Trp Arg Val His Asp
290 295 300Asp Ser Ser Val Ser Ser Ile Phe Leu305 310<210>5<211>530<212>DNA<213>展叶剑叶藓<220><221>CDS<222>(1)..(528)<400>5cac gag ttg tcg ccg cac cct tgc cgc cga gga tcc ttg gct tcg ccg 48His Glu Leu Ser Pro His Pro Cys Arg Arg Gly Ser Leu Ala Ser Pro1 5 10 15caa gcg acg aga ggc agc ggc ctt ttc ctt gga gat aga aat tgg agg 96Gln Ala Thr Arg Gly Ser Gly Leu Phe Leu Gly Asp Arg Asn Trp Arg
20 25 30caa cgg aga gga ccg cta gcg cga ccg aaa tgt gcg cta gcg gat tcc 144Gln Arg Arg Gly Pro Leu Ala Arg Pro Lys Cys Ala Leu Ala Asp Ser
35 40 45tca gta tcc tgg aat gga agg cca gta gta cct gtt gtg ccg aat cag 192Ser Val Ser Trp Asn Gly Arg Pro Val Val Pro Val Val Pro Asn Gln
50 55 60aat tgg aat agc gtg gct ggg tca aaa gtg cta agg gat act gtg ctt 240Asn Trp Asn Ser Val Ala Gly Ser Lys Val Leu Arg Asp Thr Val Leu65 70 75 80cat gat atc cgc ttg gag aat cgc ctc aaa att ttc tct ggc act gca 288His Asp Ile Arg Leu Glu Asn Arg Leu Lys Ile Phe Ser Gly Thr Ala
85 90 95aat aag gct ctt tcc caa gaa atc gcg tac tac atg ggt ctc gat tta 336Asn Lys Ala Leu Ser Gln Glu Ile Ala Tyr Tyr Met Gly Leu Asp Leu
100 105 110gga aag ata acc ata aag cgc ttc gcg gac gga gaa atc tac gta cag 384Gly Lys Ile Thr Ile Lys Arg Phe Ala Asp Gly Glu Ile Tyr Val Gln
115 120 125cta caa gag agt gtt cgt ggt tgt gac gtg ttt cta gtg caa cca aca 432Leu Gln Glu Ser Val Arg Gly Cys Asp Val Phe Leu Val Gln Pro Thr
130 135 140tgt cca cct gca aat gag aat ctg atg gag ctc ctc att atg atc gat 480Cys Pro Pro Ala Aan Glu Asn Leu Met Glu Leu Leu Ile Met Ile Asp145 150 155 160gca tgc cgc cga gct tct gct aag aac ata aca gct gtg ata cca tac 528Ala Cys Arg Arg Ala Ser Ala Lys Asn Ile Thr Ala Val Ile Pro Tyr
165 170 175tt 530<210>6<211>176<212>PRT<213>展叶剑叶藓<400>6His Glu Leu Ser Pro His Pro Cys Arg Arg Gly Ser Leu Ala Ser Pro1 5 10 15Gln Ala Thr Arg Gly Ser Gly Leu Phe Leu Gly Asp Arg Asn Trp Arg
20 25 30Gln Arg Arg Gly Pro Leu Ala Arg Pro Lys Cys Ala Leu Ala Asp Ser
35 40 45Ser Val Ser Trp Asn Gly Arg Pro Val Val Pro Val Val Pro Asn Gln
50 55 60Asn Trp Asn Ser Val Ala Gly Ser Lys Val Leu Arg Asp Thr Val Leu 65 70 75 80His Asp Ile Arg Leu Glu Asn Arg Leu Lys Ile Phe Ser Gly Thr Ala
85 90 95Asn Lys Ala Leu Ser Gln Glu Ile Ala Tyr Tyr Met Gly Leu Asp Leu
100 105 110Gly Lys Ile Thr Ile Lys Arg Phe Ala Asp Gly Glu Ile Tyr Val Gln
115 120 125Leu Gln Glu Ser Val Arg Gly Cys Asp Val Phe Leu Val Gln Pro Thr
130 135 140Cys Pro Pro Ala Asn Glu Asn Leu Met Glu Leu Leu Ile Met Ile Asp145 150 155 160Ala Cys Arg Arg Ala Ser Ala Lys Asn Ile Thr Ala Val Ile Pro Tyr
165 170 175
Claims (14)
1.具有植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1编码区的DNA序列SEQ-ID No.1、SEQ-ID No.3或SEQ-ID No.5在制备鉴定植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂的检测系统中的用途。
2.权利要求1的DNA序列的用途，所述DNA序列可与SEQ-ID No.1、SEQ-ID No.3或SEQ-ID No.5DNA序列或者其部分序列、或者通过对所述的序列进行插入、缺失或替代产生的并编码具有植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1生物活性的蛋白质的衍生物杂交。
3.权利要求1或2的DNA序列在导入原核或真核细胞中的用途，此序列任选地同控制元件相连接，该控制元件可确保在细胞中的转录和翻译并导致造成植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1合成的可翻译mRNA表达。
4.具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的蛋白质在制备用于鉴定抑制植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1的物质的检测系统中的用途。
5.权利要求4的具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的蛋白质的用途，其中蛋白质包含如SEQ-ID No.2、SEQ-ID No.4或SEQ-ID No.6所示的氨基酸序列。
6.权利要求5的具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的蛋白质的用途，其中蛋白质包含SEQ-ID No.2或SEQ-ID No.4的至少100个氨基酸的氨基酸亚序列。
7.用于鉴定抑制植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的物质的方法，其包括，第一步，使用权利要求1、2或3中所提出的DNA序列产生磷酸核糖焦磷酸合成酶1，和第二步，在测试物质的存在下检测植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性。
8.权利要求7的方法，其中植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1通过高通量筛选(HTS)步骤来测定。
9.鉴定可抑制植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1的具除草作用的活性物质的方法，该方法包括：
a)产生转基因植物、植物组织或植物细胞，其包含有编码具有磷酸核糖焦磷酸合成酶1活性的酶的额外DNA序列，并且能够超量表达具有酶活性的磷酸核糖焦磷酸合成酶1；
b)对转基因植物、植物细胞、植物组织或植物器官和未转化的植物、植物细胞、植物组织或植物器官使用一种物质；
c)在使用该化学物质之后，确定转基因和未转化的植物、植物细胞、植物组织或者植物器官的生长或者存活能力；以及
d)比较在使用该化学物质之后，转基因和未转化的植物、植物细胞、植物组织或者植物器官的生长或者存活能力；
当未转化植物、植物细胞、植物组织或者植物器官的生长或者存活能力受到抑制，但是转基因植物、植物细胞、植物组织或者植物器官的生长或者存活能力基本上不受抑制时，证实b)中的物质具有除草剂活性并可抑制植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1的酶活性。
10.一种检测系统，其基于权利要求1、2或3所述的SEQ-ID No.1、SEQ-ID No.3或SEQ-ID No.5或者其部分、或者衍生物的DNA序列的表达，用于鉴定植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂。
11.权利要求10的用于鉴定植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂的检测系统，其包括将酶同待研究的测试物质一起孵育，在适当的反应时间后，测定酶的酶活性并同未受抑制的酶的活性相比较。
12.植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂。
13.使用权利要求10或11的检测系统鉴定出的植物磷酸核糖焦磷酸合成酶1抑制剂。
14.权利要求12或13之一的用做除草剂的抑制剂。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10009277.2 | 2000-02-28 | ||
| DE10009277 | 2000-02-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1426480A true CN1426480A (zh) | 2003-06-25 |
Family
ID=7632654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN01805753A Pending CN1426480A (zh) | 2000-02-28 | 2001-01-30 | 磷酸核糖焦磷酸合成酶1作为除草剂的靶标 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040241648A1 (zh) |
| EP (1) | EP1294925A2 (zh) |
| JP (1) | JP2004503210A (zh) |
| CN (1) | CN1426480A (zh) |
| AU (1) | AU2001233721A1 (zh) |
| BR (1) | BR0108729A (zh) |
| CA (1) | CA2401177A1 (zh) |
| IL (1) | IL151189A0 (zh) |
| WO (1) | WO2001064861A2 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116445530A (zh) * | 2022-12-14 | 2023-07-18 | 华南农业大学 | 磷酸核糖焦磷酸激酶PrsA基因在制备抗弓形虫病药物中的应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4859768A (en) * | 1984-07-11 | 1989-08-22 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Derivatives of 2', 5'-oligoadenylate and antiviral uses thereof |
| US5780254A (en) * | 1995-05-04 | 1998-07-14 | Sandoz Ltd | Method for detection of herbicides |
| US5780253A (en) * | 1995-05-04 | 1998-07-14 | Sandoz Ltd. | Screening method for detection of herbicides |
| US20020040489A1 (en) * | 2000-01-27 | 2002-04-04 | Jorn Gorlach | Expressed sequences of arabidopsis thaliana |
-
2001
- 2001-01-30 CA CA002401177A patent/CA2401177A1/en not_active Abandoned
- 2001-01-30 WO PCT/EP2001/000971 patent/WO2001064861A2/de not_active Application Discontinuation
- 2001-01-30 JP JP2001564344A patent/JP2004503210A/ja not_active Withdrawn
- 2001-01-30 CN CN01805753A patent/CN1426480A/zh active Pending
- 2001-01-30 IL IL15118901A patent/IL151189A0/xx unknown
- 2001-01-30 US US10/220,154 patent/US20040241648A1/en not_active Abandoned
- 2001-01-30 BR BR0108729-0A patent/BR0108729A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-01-30 AU AU2001233721A patent/AU2001233721A1/en not_active Abandoned
- 2001-01-30 EP EP01905708A patent/EP1294925A2/de not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116445530A (zh) * | 2022-12-14 | 2023-07-18 | 华南农业大学 | 磷酸核糖焦磷酸激酶PrsA基因在制备抗弓形虫病药物中的应用 |
| CN116445530B (zh) * | 2022-12-14 | 2024-03-19 | 华南农业大学 | 磷酸核糖焦磷酸激酶prps基因在制备抗弓形虫病药物中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2004503210A (ja) | 2004-02-05 |
| WO2001064861A2 (de) | 2001-09-07 |
| CA2401177A1 (en) | 2001-09-07 |
| BR0108729A (pt) | 2003-12-30 |
| AU2001233721A1 (en) | 2001-09-12 |
| WO2001064861A3 (de) | 2002-10-24 |
| IL151189A0 (en) | 2003-04-10 |
| EP1294925A2 (de) | 2003-03-26 |
| US20040241648A1 (en) | 2004-12-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1186666B1 (fr) | Utilisation d'inhibiteurs d' hydroxylphenyl pyruvate dioxygenase (HPPD) comme agents de sélection dans la transformation de plantes | |
| CN1270636A (zh) | 编码羟苯基丙酮酸双加氧酶的dna序列及其于植物中的超量生产 | |
| KR20120007038A (ko) | 식물 ｓｎｆ１-관련 단백질 키나제 유전자 | |
| CN1146663C (zh) | 选择性标记 | |
| CN1129015A (zh) | 植物中海藻糖的产生 | |
| CN1390432A (zh) | 抗噪音拾音器 | |
| CN1426480A (zh) | 磷酸核糖焦磷酸合成酶1作为除草剂的靶标 | |
| CN1390261A (zh) | 植物gmp合成酶 | |
| CN1406281A (zh) | 天冬氨酸转氨甲酰酶作为除草剂的靶标 | |
| CN1317051A (zh) | 拟南芥hmp－p激酶和tmp－pp酶及其在除草剂筛选中的用途 | |
| CN1289369A (zh) | 植物核黄素生物合成基因及其用途 | |
| US7811823B2 (en) | Gene encoding an enzyme for catalyzing biosynthesis of lignan, and use thereof | |
| US7727753B2 (en) | Plant dihydroorotase | |
| EP1244792B1 (fr) | Procede d'obtention de plantes a teneur enrichie en cysteine et glutathion | |
| CA2388851A1 (en) | Formylglycinamidinribotide synthase from plants | |
| CA2387159A1 (en) | Prpp-amidotransferase from plants | |
| NEGOIANU-TENEA et al. | Genetic Modified Medicinal Plants. I. Agrobacterium tumefaciens Mediated Reporter gus Gene Transfer and Expression in Atropa belladonna Plants | |
| FR2823063A1 (fr) | Procede d'obtention de plantes c4 a metabolisme carbone modifie | |
| CN1241215A (zh) | 利用nim1基因赋予植物抗病性的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |