CN1384360A - 用于支睾吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病和裂头蚴病诊断的酶联免疫吸附测定试剂盒 - Google Patents

用于支睾吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病和裂头蚴病诊断的酶联免疫吸附测定试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN1384360A
CN1384360A CN02118880A CN02118880A CN1384360A CN 1384360 A CN1384360 A CN 1384360A CN 02118880 A CN02118880 A CN 02118880A CN 02118880 A CN02118880 A CN 02118880A CN 1384360 A CN1384360 A CN 1384360A
Authority
CN
China
Prior art keywords
serum
antigen
kit
paragonimus
simon
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN02118880A
Other languages
English (en)
Inventor
赵昇烈
蔡鍾一
洪性臺
韩信
赵一焕
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shin Poong Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Shin Poong Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shin Poong Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Shin Poong Pharmaceutical Co Ltd
Publication of CN1384360A publication Critical patent/CN1384360A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种ELISA试剂盒,能同时诊断华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的感染。本发明提供的试剂盒能简单、快速、准确的通过标准化方法一次同时诊断主要的组织寄生的蠕虫类寄生虫的感染。

Description

用于支睾吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病 和裂头蚴病诊断的酶联免疫吸附测定试剂盒
                       技术领域
本发明涉及组织寄生虫感染的血清学诊断。更具体地，本发明涉及酶联免疫吸附测定(以下缩写为ELISA)试剂盒，它能同时诊断华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)、卫斯特曼并殖吸虫(Paragonimuswestermani)、猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)和裂头蚴(Sparganum)的感染。
                       背景技术
在韩国，人类肠道寄生虫，如人蛔虫、毛首鞭虫、犬钩虫和东方毛圆线虫(它们经常通过粪便检来被检测)，已经被明显降低，因此现在是可被忽视的。现在，这样的粪便检验仅在象医院这样的医疗机构进行。相反，迄今为止，居住于组织内的寄生虫不断地出现，因此，也变得相对越来越重要。进一步地，居住于组织内的寄生虫比肠道寄生虫引起更严重的损伤，因此，它们的感染需要一种合适的药物治疗。精确的诊断是适当治疗的第一步，因此，获得合适的诊断工具是关键。
具体地，在许多发展中国家，被华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的感染是重要的地方病。很多人已经被它们感染但没有有效的治疗。超过15百万的病人所患支睾吸虫病，一般通过粪便检验进行诊断。然而，很难诊断轻度感染。而且，很多人有不愿做粪便检验的倾向。此外，皮内试验可以用于群体筛选检查，但用作诊断工具时特异性太低。因此，皮内试验倾向于被血清学试验代替。
在另一方面，肺吸虫病、猪囊尾蚴病和裂头蚴病，每年有几万病人在遭受痛苦，只能通过血清学检验进行诊断。这样的血清学试验使用的ELISA包含了准备每种寄生虫抗原的步骤和使用这些抗原的步骤。当前，在韩国，几个试验室已经建立了它们自己的标准，并在自己试验室试验。然而，这种已知的方法不能被标准化。而且，这种方法一次只能检测一种寄生虫，要检测几种寄生虫要重复几次。因此，需要发展一种新的能通过简单标准化方法一次诊断主要组织内寄生虫的试剂盒。
                       发明内容
本发明人进行了广泛的研究来解决在组织内寄生虫诊断中的在先的问题。作为结果，本发明人注意了抗原-抗体反应的免疫化学特性。发明人使用了来自华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的粗抗原，并使用人血清作为其阳性或阴性对照抗体，对支睾吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病和裂头蚴病同时诊断。
相应地，本发明的目的是提供一种能一次对支睾吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病和裂头蚴病进行标准化血清学诊断的的诊断试剂盒。
本发明涉及诊断支睾吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病和裂头蚴病的ELISA试剂盒，其包含：
a)多孔平板或长条，在之上有来自华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的抗原覆盖；
b)不与上述抗原反应的人血清，作为阴性对照；和
c)作为阳性对照的人血清，每一种包含与上述抗原特异性反应的抗体。
这个试剂盒可以进一步包含稀释和清洗溶液、结合物溶液、底物缓冲液、封闭溶液。在优选的实施方案中，稀释和清洗溶液包含了磷酸盐缓冲盐水(PBS)。结合物溶液包含了辣根过氧化物酶标记的抗人IgG山羊血清。底物是O-苯二胺(OPD)。在这个例子中，试剂盒进一步包含了过氧化氢作为氧化剂。封闭溶液包含硫酸。
优选地，试剂盒分别包含作为蛋白质的来自华支睾吸虫和卫斯特曼并殖吸虫的抗原1.5-2μg/孔、以及猪囊尾蚴和裂头蚴的抗原2-2.5μg/孔。也更优选，使用前，与华支睾吸虫、猪囊尾蚴反应的血清被26倍稀释，与卫斯特曼并殖吸虫和裂头蚴反应的血清被101倍稀释。
                     附图简述
图1：表示抗原覆盖在抗原覆盖平板的每一个小孔上的示意图。
                    本发明的最好实施方式
本发明提供了一种同时诊断4种一般用血清学方法检测的蠕虫类寄生虫，华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的试剂盒。更具体的，本发明提供了采用来自华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的抗原和包含这些抗原的抗体的人血清间的抗原-抗体反应同时诊断上述寄生虫感染的ELISA试剂盒。
因此，本试剂盒的特征在于包含仅一个小平板用来诊断华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的感染。那就是说，一个96孔小平板或一个12×8孔长条，被来自华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的抗原覆盖并固定。然后，受试验者的血清被加上以诊断寄生虫感染。几种试剂是需要的，它们在这个平板的包装中以给定的量提供。这可以实现一次性标准化诊断。
本发明的一个实施方案是包含作为样品溶液的人血清、辣根过氧化物酶标记的抗人IgG山羊血清作为结合物溶液、O-苯二胺(OPD)作为底物、过氧化氢作为氧化剂的ELISA试剂盒。
试剂盒包含下列内容物。它包含合适数量的抗原和未稀释的血清，血清将依据寄生虫的种类在使用前进行稀释：
i)有4种寄生虫抗原覆盖的小平板：96孔平板或12×8孔长条
ii)阴性标准血清：一瓶
iii)阳性标准血清：相应于华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的各一瓶(共4瓶)
iv)稀释和清洗溶液(5倍浓缩的)：2瓶
v)结合物溶液(350倍浓缩的)：1瓶
vi)底物缓冲液：1瓶
vii)底物(O-苯二胺)：4.6mg
viii)过氧化氢：1瓶
ix)封闭溶液：1瓶
上述内容物将在下面具体描述。
(i)覆盖抗原的小平板：
表1：96孔小平板或12×8孔长条上每孔的成分与含量
    成分     含量
纯化的来自华支睾吸虫的粗抗原(A和E行)，23孔     1.5-2μg/孔，蛋白质
纯化的来自卫斯特曼并殖吸虫的粗抗原(B和F行)，23孔     1.5-2μg/孔，蛋白质
来自猪囊尾蚴囊液的抗原(C和G行)，23孔     2-2.5μg/孔，蛋白质
纯化的来自裂头蚴的粗抗原(D和H行)，23孔     2-2.5μg/孔，蛋白质
    碳酸盐缓冲液     适量
    磷酸缓冲液     适量
    Tween 20     适量
    脱脂乳     适量
在A，B，C，D行的第一列的孔中没有覆盖抗原(ii)阴性标准血清：一瓶
表2：一瓶阴性标准血清中的成分与含量(15μl)
    成分     含量
不与华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的抗原反应的正常人血清     未稀释，15μl
    Proclin 300     0.05v/v％
(iii)阳性标准血清：各1瓶(共4瓶)(iii-1)华支睾吸虫阳性标准血清表3：华支睾吸虫阳性标准血清1瓶(6μl)中的成分与含量
    成分     含量
  包含高浓度的特异与华支睾吸虫抗原反应的抗体的人灭活血清     未稀释，6μl
    Proclin 300     0.05v/v％
(iii-2)卫斯特曼并殖吸虫阳性标准血清表4：卫斯特曼并殖吸虫阳性标准血清1瓶(2μl)中的成分与含量
    成分     含量
包含高浓度的特异与卫斯特曼并殖吸虫抗原反应的抗体的人灭活血清     未稀释，2μl
    Proclin 300     0.05v/v％
(iii-3)猪囊尾蚴阳性标准血清表4：猪囊尾蚴阳性标准血清1瓶(6μl)中的成分与含量
    成分     含量
包含高浓度的特异与猪囊尾蚴抗原反应的抗体的人灭活血清   未稀释，6μl
    Proclin 300     0.05v/v％
(iii-4)裂头蚴阳性标准血清表4：裂头蚴阳性标准血清1瓶(2μl)中的成分与含量
    成分     含量
包含高浓度的特异与裂头蚴抗原反应的抗体的人灭活血清   未稀释2μl
    Proclin 300   0.05v/v％
(iv)浓缩的稀释、清洗溶液(10倍浓缩的)：2瓶(使用前5倍稀释)表7：稀释、清洗溶液1瓶(25ml)中的成分与含量
    成分     浓度
    0.1M PBS     25ml
    Tween 20     0.5％
    Proclin 300     0.05v/v％
(v)稀释的(350倍)结合物溶液：1瓶(使用前稀释100倍)表8：稀释的结合物溶液1瓶中的成分和含量
    成分     含量
辣根过氧化物酶标记的抗人IgG山羊血清(Caltag结合物)、     1v/v％
    牛血清白蛋白PBS     适量
    Proclin300     0.05v/v％
(vi)底物稀释缓冲液：1瓶表9：底物缓冲液1瓶(6ml)中的成分与含量
    成分     含量
    底物缓冲液(PCB)     6ml
    Proclin300     0.05v/v％
底物缓冲液(6ml)：柠檬酸-磷酸缓冲液(vii)底物1瓶表10：底物(OPD)1瓶中的成分与含量
    成分     含量
    O-苯二胺盐酸盐     4.6mg
-O-苯二胺(OPD)盐酸盐(4.6mg)以粉状提供，使用前稀释于5ml PCB中。(viii)过氧化氢：1瓶，包含30μl 30％未稀释溶液，在使用前稀释在底物缓冲液中至浓度为0.1％。(xi)封闭溶液：1瓶表11：封闭溶液1瓶(15ml)中的成分和含量
    成分     含量
    4N硫酸     15ml
在上述试剂盒中，下列情况被认为是阳性。
华支睾吸虫：≥0.20；卫斯特曼并殖吸虫：≥0.25；猪囊尾蚴≥0.25；和裂头蚴：≥0.24。
本发明试剂盒用下列方法制造：(i)抗原覆盖平板的准备
经过纯化的4种寄生虫的粗抗原覆盖在96孔平板上，封闭并干燥，然后冷藏。参照孔、阴性标准血清孔和4种阳性标准血清孔，也包括在这个平板上。在其余的孔中，21个样品被检测。也就是在A，B，C，D行的第一列的孔中没有覆盖抗原，被用做空白孔。华支睾吸虫抗原覆盖在A行的第2到第12列和E行的第1到第12列。卫斯特曼并殖吸虫抗原覆盖在B行的第2到第12列和F行的第1到第12列。猪囊尾蚴  抗原覆盖在C行的第2到第12列和G行的第1到第12列。裂头蚴抗原覆盖在D行的第2到第12列和H行的第1到第12列。图1表示了小平板上抗原的覆盖。其他试剂通过标准方法准备。(ii)标准血清的准备-不与4种抗原反应的阴性标准血清-与华支睾吸虫抗原反应的血清-与卫斯特曼并殖吸虫抗原反应的血清-与猪囊尾蚴抗原反应的血清-与裂头蚴抗原反应的血清
本发明可以通过下面的实施例更好地理解。然而，本领域普通技术人员会容易领会，所描述的具体材料和结果只是例子，并且不是要，也不应，对随后的权利要求书中更全面描述的本发明进行限制。
实施例1：抗原覆盖小平板的准备(1)华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴抗原的准备
从自然感染的中间宿主(华支睾吸虫：Pseudorasbora parva、卫斯特曼并殖吸虫：Cambaroides similis)中分离华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫的囊蚴。兔子和狗分别被华支睾吸虫和卫斯特曼并殖吸虫口服感染。3到4个月后，在这些动物身上分别获得2g或更多的华支睾吸虫和卫斯特曼并殖吸虫成虫。
猪肉绦虫(Taenia solium)的幼虫被从被地方病地区猪囊尾蚴自然感染的猪中分离，从幼虫囊肿中分离囊液。约2g或更多的裂头蚴幼虫被从自然感染的蛇上分离。
获得的华支睾吸虫和卫斯特曼并殖吸虫成虫和裂头蚴被用10ml PBS(8g/L NaCl，0.2g/L KCl，1.13g/L Na2HPO4和0.2g/L KH2PO4，pH7.5)清洗5遍。把寄生虫加入到15ml PBS中，在匀浆器中匀浆1到2分钟。匀浆的天然寄生虫抗原在4℃10000g离心60分钟。测量上清液中蛋白浓度。每小瓶100μl分装并-70℃冷藏。
(2)在小平板孔上覆盖抗原
使用小平板，CostarTM产品(96孔分析平板，平底，聚苯乙烯，Corning)。每种寄生虫抗原用50mM的碳酸钠缓冲液(1.5g/l Na2CO3，2.93g/l NaHCO3，pH9.6)稀释，调整蛋白的量为20-25μg/ml。
从华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴中分离的每种抗原100μl被加到小平板上A和E、B和F、C和G、D和H行的小孔中(除了A1、B1、C1和D1)。然后，平板可以在4℃过夜，使抗原覆盖在平板底部。
(3)清洗和封闭
残留的抗原被从小孔中清除。每一小孔用0.2ml的PBST(0.01M磷酸缓冲液，0.0027M氯化钾，0.137M氯化钠，pH7.4，0.05％Tween 20)清洗3遍。每个孔中加入0.1ml固定剂(3％脱脂乳/PBST，pH7.6)。固定在37℃条件下进行1小时。每孔用0.2ml的PBST清洗3遍。倒空平板使平板没有残留的溶液，干燥、密封，然后冷藏。
实施例2：阴性标准血清的准备
从显示不与华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴抗原起反应的人上收集10ml血液，从血液中分离血清。将血清加热到56℃30分钟使之灭活。使用无菌过滤器过滤。定量于1000μl，加入0.5μlProclin300来获得1ml阴性标准血清。血清被分装为15μl每小瓶并冷藏直至使用。
实施例3：阳性标准血清的准备
(1)支睾吸虫病阳性对照血清
从通过粪便检测确认含有华支睾吸虫卵的人上收集10ml血液，从血液中分离血清。将血清加热到56℃30分钟使之灭活。使用无菌过滤器过滤。定量于1000μl，加入0.5μl Proclin300来获得lml华支睾吸虫阳性标准血清。血清被分装为5μl每小瓶并冷藏。血清在稀释后使用(每100μl缓冲液中含有4μl血清)。
(2)肺吸虫病阳性对照血清
从确认感染有卫斯特曼并殖吸虫或与特异抗原反应的人上收集10ml血液，从血液中分离血清。将血清加热到56℃30分钟使之灭活。使用无菌过滤器过滤。定量于1000μl中，加入0.5μl Proclin300来获得1ml卫斯特曼并殖吸虫阳性对照血清。血清被分装为2μl每小瓶并冷藏。血清在稀释后使用(每100μl缓冲液中含有1μl血清)。
(3)猪囊尾蚴病阳性对照血清
从确认含有猪囊尾蚴或与囊胞液中抗原反应的人上收集10ml血液，从血液中分离血清。将血清加热到56℃30分钟使之灭活。使用无菌过滤器过滤。定量在1000μl中，加入0.5μl Proclin300来获得1ml猪囊尾蚴阳性对照血清。血清被分装为5μl每小瓶并冷藏。血清在稀释后使用(每100μl缓冲液中含有4μl血清)。
(4)裂头蚴病阳性对照血清
从确认含有裂头蚴或与裂头蚴粗抗原反应的人上收集10ml血液，从血液中分离血清。将血清加热到55℃30分钟使之灭活。使用无菌过滤器过滤。定量在1000μl中，加入0.5μl Proclin300来获得1ml裂头蚴阳性对照血清。血清被分装为2μl每小瓶并冷藏。血清在稀释后使用(每100μl缓冲液中含有1μl血清)。
实施例4：血液中华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和/或裂头蚴的测定
平板都给定了自己的ID号码。待测血清被写在记录表中，识别号被标记作为记录。稀释的标准血清和稀释的血清样品被加入到实施例1中制备的抗体覆盖的小平板的小孔中。A1、B1、C1和D1小孔，作为空白小孔，不装任何样品。100μl阴性标准血清被加入到A2、B2、C2和D2小孔中，100μl阳性标准血清被加入到下一个小孔中。支睾吸虫病阳性血清(1∶26稀释)装入A3小孔；肺吸虫病阳性血清(1∶101稀释)装入B3小孔；猪囊尾蚴病阳性血清(1∶26稀释)装入C3小孔；裂头蚴病阳性血清(1∶101稀释)装入D3小孔。从A4、B4、C4和D4到E12、F12、G12和H12小孔被用来装21种稀释的血清来进行4孔单位的检测。在识别号的基础上，在与华支睾吸虫或猪囊尾蚴反应的孔上加入了100μl 26倍稀释(将10μl血清稀释在250μl稀释溶液中而获得)的血清。在与卫斯特曼并殖吸虫或裂头蚴反应的孔上加入了100μl 101倍稀释(将2.5μl血清稀释在250μl稀释液中而获得)的血清。A和E、B和F、C和G和D和H孔分别检测华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴。因此，一种合适的稀释血清应根据ID号被加入到小孔中。
小平板用盖子盖住并在37℃温育2小时。然后，用200μl稀释的PBST(0.01M磷酸缓冲液，0.0027M氯化钾，0.137M氯化钠，pH7.4，0.05％Tween 20)清洗3遍，小平板翻转过来并在吸水纸上轻敲使清洗液流尽。100μl稀释的结合物(100倍稀释的辣根过氧化物酶-结合抗人IgG山羊血清(Fc特异性)，蛋白终浓度：110-140ng/ml在1×PBS，0.05％Proclin300中)溶液被加到小孔中。小孔加盖后在黑暗37℃条件下反应2小时。反应液被从孔中移去，用清洗液清洗小孔3遍。
50μl底物溶液(将O-苯二胺(OPD)加入到柠檬酸盐缓冲液中并在使用前加入过氧化氢而制备)被使用多道移液器加到每一小孔中。反应在黑暗处进行10分钟。50μl封闭溶液(4N硫酸)被使用多道移液器加到每一小孔中以终止反应。在490nm处测量每一孔的光吸收。
在以上过程后进行检测，阴性和阳性的光吸收分别在0.1或以下和0.3或以上，被确认是有效的。具有每个抗原指定的标准值或更高值的血清被确定为阳性的。4种寄生虫感染的参照血清的光吸收值在下面的表11中列出。表12：4种寄生虫感染的参照血清的光吸收值
  感染   支睾吸虫病   肺吸虫病   猪囊尾蚴病     裂头蚴病
    -/+     -     +      -     +      -     +      -     +
    1     0.126     0.409      0.060     0.410      0.109     0.512      0.102     0.616
    2     0.058     0.255      0.035     0.555      0.070     0.395      0.032     0.583
    3     0.049     0.314      0.030     0.408      0.060     0.411      0.029     0.490
    4     0.103     0.345      0.069     0.413      0.128     0.520      0.152     0.273
    5     0.071     0.503      0.046     0.515      0.048     0.374      0.086     0.417
    6     0.054     0.261      0.033     0.375      0.040     0.391      0.039     0.419
    7     0.066     0.258      0.033     0.305      0.070     0.303      0.033     0.383
    8     0.051     0.282      0.036     0.365      0.161     0.299      0.086     0.395
    9     0.037     0.404      0.042     0.329      0.068     0.335      0.029     0.527
    10     0.042     0.351      0.049     0.313      0.062     0.419      0.028     0.428
    11     0.050     0.444      0.035     0.314      0.138     0.405      0.026     0.436
    12     0.070     0.254      0.042     0.286      0.137     0.442      0.039     0.443
    13     0.040     0.365      0.025     0.351      0.037     0.306      0.024     0.453
    14     0.069     0.337      0.038     0.448      0.080     0.485      0.033     0.490
    15     0.062     0.301      0.030     0.333      0.058     0.504      0.032     0.521
    16     0.071     0.254      0.033     0.383      0.073     0.503      0.035     0.303
    17     0.041     0.258      0.027     0.434      0.046     0.515      0.020     0 466
    18     0.121     0.387      0.068     0.417      0.102     0.482      0.054     0.482
    19     0 045     0.317      0.032     0.304      0.064     0.274      0.024     0.382
    20     0.071     0.329      0.063     0.395      0.093     0.364      0.040     0.584
    21     0.146     0.386      0.085     0.467      0.139     0.431      0.075     0.455
    22     0.074     0.339      0.056     0.409      0.064     0.789      0.036     0.258
    23     0.076     0.325      0.049     0.487      0.091     0.521      0.040     0.368
    24     0.078     0.394      0.044     0.398      0.071     0.678      0.037     0.380
    25     0.060     0.375      0.027     -      0.078     0.323      0.034     0.284
    26     0.046     0.293      0.037     -      0.075     0.828      0.032     0.483
    27     0.052     0.297      0.029     -      0.062     0.721      0.028     0.579
    28     0.119     0.351      0.063     -      0.129     0.507      0.052     0.291
    29     0.052     0.377      0.026     -      0.055     0.303      0.028     0.501
    30     0.140     0.262      0.098     -      0.127     0.344      0.053     0.479
    Average     0.071     0.334      0.045     0.392      0.085     0.456      0.045     0.439
    Cut-off            0.200          0.250           0.250             0.240
工业实用能力
本发明的试剂盒能简单、快速、准确地通过标准化方法一次同时诊断主要的组织寄生的寄生虫，即华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴，的感染。

Claims (7)

1.一种用于诊断华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴感染的ELISA试剂盒，包含：
a)多孔平板或长条，在之上有来自华支睾吸虫、卫斯特曼并殖吸虫、猪囊尾蚴和裂头蚴的抗原覆盖；
b)不与上述抗原反应的人血清，作为阴性对照；和
c)作为阳性对照的人血清，每一种与上述抗原之一特异性反应。
2.根据权利要求1的试剂盒，进一步包含稀释和清洗溶液、结合物溶液、底物缓冲液、底物和封闭溶液。
3.根据权利要求2的试剂盒，其中所述的稀释和清洗溶液包含PBS(磷酸盐缓冲盐水)。
4.根据权利要求2的试剂盒，其中所述的结合物溶液包含辣根过氧化物酶标记的抗人IgG山羊血清，底物是O-苯二胺，且该试剂盒进一步包含过氧化氢溶液。
5.根据权利要求2的试剂盒，其中所述的封闭液包含硫酸。
6.根据权利要求1的试剂盒，其中所述的华支睾吸虫和卫斯特曼并殖吸虫抗原的量分别是1.5-2.0μg蛋白/孔，且猪囊尾蚴和裂头蚴的抗原的量分别是2-2.5μg蛋白/孔。
7.根据权利要求1的试剂盒，其中向与华支睾吸虫和猪囊尾蚴的抗原发生反应的孔中加入26倍稀释的血清，并向与卫斯特曼并殖吸虫和裂头蚴的抗原发生反应的孔中加入101倍稀释的血清。
CN02118880A 2001-05-02 2002-04-30 用于支睾吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病和裂头蚴病诊断的酶联免疫吸附测定试剂盒 Pending CN1384360A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR23645/2001 2001-05-02
KR20010023645A KR100439731B1 (ko) 2001-05-02 2001-05-02 간흡충, 폐흡충, 유구낭미충 및 고충 감염증의효소면역진단 키트

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1384360A true CN1384360A (zh) 2002-12-11

Family

ID=19708948

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN02118880A Pending CN1384360A (zh) 2001-05-02 2002-04-30 用于支睾吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病和裂头蚴病诊断的酶联免疫吸附测定试剂盒

Country Status (5)

Country Link
KR (1) KR100439731B1 (zh)
CN (1) CN1384360A (zh)
EC (1) ECSP024253A (zh)
MX (1) MXPA02004417A (zh)
PE (1) PE20021090A1 (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100374559C (zh) * 2005-02-22 2008-03-12 中山大学 华支睾吸虫蛋白酶体亚单位c3，其编码核酸及其应用
CN101603964A (zh) * 2009-07-10 2009-12-16 中国海洋大学 海产品中异尖线虫的酶联免疫检测方法
CN102279259A (zh) * 2010-06-10 2011-12-14 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 一种检测并殖吸虫病的诊断试剂盒及其制备方法
CN101275140B (zh) * 2007-12-27 2012-05-09 中国农业科学院兰州兽医研究所 猪囊尾蚴病重组基因、疫苗及其制备方法
CN102539781A (zh) * 2010-12-31 2012-07-04 中山大学 华支睾吸虫病trfia诊断试剂盒及其使用
CN102565398A (zh) * 2010-12-31 2012-07-11 中山大学 一种华支睾吸虫病elisa诊断试剂盒
CN102830231A (zh) * 2012-09-13 2012-12-19 江苏省血吸虫病防治研究所 一种肝吸虫抗体IgG4生物素-亲和素酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100957675B1 (ko) * 2007-11-26 2010-05-12 원광대학교산학협력단 폐흡충 특이 항원의 생산을 위한 단클론 항체 및 폐흡충증신속 진단 키트
KR101062437B1 (ko) 2008-08-05 2011-09-06 주식회사 바이오랜드 간흡충 특이 항원을 포함하는 간흡충증 진단 키트 및 상기간흡충 특이 항원의 생산을 위한 단클론 항체
KR101034806B1 (ko) * 2009-05-08 2011-05-16 대한민국 고충증 진단용 항원단백질
CN102250231B (zh) * 2010-05-19 2014-09-10 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 华支睾吸虫特异性ppmp型抗原及其应用
CN102146446A (zh) * 2011-01-11 2011-08-10 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 一种快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的方法及其试剂盒
CN114717240B (zh) * 2022-04-21 2023-11-28 上海交通大学医学院 一种华支睾吸虫蛋白Cs144的制备和应用
CN117123109B (zh) * 2023-10-26 2024-01-02 吉林国际旅行卫生保健中心(长春海关口岸门诊部) 一种华支睾吸虫毛蚴检测用混合装置

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4740456A (en) * 1985-08-15 1988-04-26 Wake Forest University Immunological methods for diagnosing neurocysticercosis
KR880014373A (ko) * 1987-05-29 1988-12-23 스투어트 알.수터 키메릭(Chimeric) 항원을 이용한 면역반응 진단분석
US5354660A (en) * 1988-12-30 1994-10-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Isolation of diagnostic glycoproteins to taenia solium, immunoblot-assay and method for the detection of human cysticercosis
KR100321825B1 (ko) * 1998-09-29 2004-05-24 주식회사 휴먼바이오 폐흡충유래의시스틴단백분해효소를코딩하는유전자및이것에의해코딩된시스틴단백분해효소의용도
KR20010002857A (ko) * 1999-06-18 2001-01-15 고석수 소변검사에 의한 간흡충증의 진단방법

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100374559C (zh) * 2005-02-22 2008-03-12 中山大学 华支睾吸虫蛋白酶体亚单位c3，其编码核酸及其应用
CN101275140B (zh) * 2007-12-27 2012-05-09 中国农业科学院兰州兽医研究所 猪囊尾蚴病重组基因、疫苗及其制备方法
CN101603964A (zh) * 2009-07-10 2009-12-16 中国海洋大学 海产品中异尖线虫的酶联免疫检测方法
CN102279259A (zh) * 2010-06-10 2011-12-14 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 一种检测并殖吸虫病的诊断试剂盒及其制备方法
CN102539781A (zh) * 2010-12-31 2012-07-04 中山大学 华支睾吸虫病trfia诊断试剂盒及其使用
CN102565398A (zh) * 2010-12-31 2012-07-11 中山大学 一种华支睾吸虫病elisa诊断试剂盒
CN102565398B (zh) * 2010-12-31 2015-06-24 佛山顺德智研生物科技有限公司 一种华支睾吸虫病elisa诊断试剂盒
CN102539781B (zh) * 2010-12-31 2016-01-20 佛山顺德智研生物科技有限公司 华支睾吸虫病trfia诊断试剂盒及其使用
CN102830231A (zh) * 2012-09-13 2012-12-19 江苏省血吸虫病防治研究所 一种肝吸虫抗体IgG4生物素-亲和素酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
KR20020084850A (ko) 2002-11-13
ECSP024253A (es) 2003-01-13
PE20021090A1 (es) 2003-03-06
KR100439731B1 (ko) 2004-07-12
MXPA02004417A (es) 2004-07-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Hodinka et al. Detection of human immunodeficiency virus antibodies in oral fluids
Neva et al. Comparison of larval antigens in an enzyme-linked immunosorbent assay for strongyloidiasis in humans
Ungar et al. Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of Giardia lamblia in fecal specimens
Kabir clinic‐based testing for Helicobacter pylori infection by enzyme immunoassay of faeces, urine and saliva
Perry et al. Gastroenteritis and transmission of Helicobacter pylori infection in households
Stefano et al. Non-invasive tests for the diagnosis of helicobacter pylori: state of the art
ES2332523T3 (es) Metodo para el diagnostico rapido de blancos en fluidos corporales humanos.
CN1384360A (zh) 用于支睾吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病和裂头蚴病诊断的酶联免疫吸附测定试剂盒
AU2002248996B2 (en) Detection of candida
Marchildon et al. Evaluation of three commercial enzyme immunoassays compared with the 13C urea breath test for detection of Helicobacter pylori infection
Bodhidatta et al. Diagnosis of Helicobacter pylori infection in a developing country: comparison of two ELISAs and a seroprevalence study
Dezfulian et al. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Clostridium botulinum type A and type B toxins in stool samples of infants with botulism
Craft et al. Diagnosis of giardiasis by counterimmunoelectrophoresis of feces
WO1997023773A1 (en) Device for collecting and testing samples
DE69626683T2 (de) Verfahren zur feststellung von antipolymerantikörper und diagnosetestsatz zur feststellung von siliconabhängigen krankheiten
CN106018792A (zh) 一种胃功能检测用免疫层析试剂盒及其制备方法
El-Gebaly et al. Saliva and sera IgA and IgG in Egyptian Giardia-infected children
Tadege et al. Serioprevalence of Helicobacter pylori Infection in and its Relationship with ABO Blood Groups
De Klerk et al. Comparative evaluation of the enzyme-linked immunosorbent assay in the laboratory diagnosis of brucellosis
Alfa The laboratory diagnosis of Haemophilus ducreyi
Schinski et al. Enzyme-and 125I-labeled anti-immunoglobulin assays in the immunodiagnosis of schistosomiasis
Lin et al. Seroepidemiology of Helicobacter pylori infection among preschool children in Taiwan.
Chen Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies to Angiostrongylus cantonensis
Chakravarti et al. Immunodiagnosis of dengue virus infection using saliva
RU2339952C1 (ru) Способ дифференциальной диагностики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза и диагностический набор для его осуществления

Legal Events

Date Code Title Description
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication