CN1368979A - 造血的阿拉伯半乳聚糖组合物 - Google Patents
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Abstract
从黄芪(特别是根部)中分离得到的纯化的阿拉伯半乳聚糖,以及从这些纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物中分离的重均分子量至少是100千道尔顿的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物,能够配制成用于静脉注射的液体剂型;对哺乳动物采用静脉注射给药后,有利于刺激造血,诱导巨核细胞的增殖或成熟,刺激生成IL－1β、IL－6、TNF－α、IFN－γ、GM－CSF、或G－CSF,刺激生成嗜中性白血球或激活作用,治疗嗜中性白血球减少症、贫血、或血小板减少症,促进受细胞毒性剂或辐射照射作用之后个体复原,治疗恶病质,治疗呕吐、或撤药综合征、或改善生物反应性、或保护乙型肝炎患者的肝脏细胞。
Description
本发明所属技术领域
本发明涉及一种阿拉伯半乳聚糖。更具体地说，本发明涉及一种从黄芪(Astragalus membranaceus)，特别是其根部分离的纯化的阿拉伯半乳聚糖，以及从这些纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物、或其中间物中分离的重均分子量至少是100千道尔顿(KD)的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物。
与本发明相关的背景技术
黄芪(Radix Astragali)，是蒙古黄芪或膜荚黄芪(Astragalusmembranaceus Bge.Var.mongholicus(Bge)Hsiao or A.membranaceus (Fisch) Bge.(Fabaceae))晒干后的根部。黄芪是一种众所周知的古老中药。中国药典中有正式记载，而且主要当作一种补药，用来治疗肾炎和糖尿病。通常当作煎剂或单独当作“茶”来使用，或是在传统草药西加龙(shi-ka-ron)(由紫草(Lithospermum erythrorhizon)和川芎(Ligusticum wallachii)两种草药组成)和人参养容汤(Ren-shen-yang-rong-tang)(是由包括黄芪Radix Astragali)在内的十二种草药组成)中与其他植物联合使用。[参阅由W.Tang和G.Eisenbrand编辑的“中药(Chinese Drugsof Plant Origin)”第26小节，第191-197页，标题“Astragalusmembranaceus(Fisch)Bge.”，Springer Verlag，Berlin，1992]。
已有人用黄芪煎剂，和由该煎剂的酒精沉淀物制备成的溶液注射给药，可改善胃和十二指肠溃疡症状和增加慢性白细胞减少症患者的白血球数(参阅由H.-M.Chang和P.P.-H.But等人编辑的“中药的药理和应用(Pharmacology and Applications of Chinese materialMedica)”第1041-1046页，题目“黄芪”(Huangqi)，World ScientificPublishing Co.，Singapore，1987)。已知黄芪煎剂，纯化的低分子量部分(例如分子量在25,000-35,000的部分)，和内含黄芪的草药混合物的煎剂，也可恢复局部的异种移植物和宿主对抗反应的免疫系统(D.-T.Chu等，《中草药免疫疗法》“Immunotherapy withChinese medicinal herbs.I...”，J. Clin.Lab.Immunol.，25，119-123(1988))，并逆转因环磷酸胺诱导的免疫抑制反应D.-T.Chu等.，《中草药免疫疗法》“Immunotherapy with Chinese medicinal herbs.II...”，J.Clin.Lab.《免疫学》(Immunol.)，25，125-129(1988))，促进“LAK细胞中由rIL-2所致的细胞毒性(D.-T.Chu等.，《黄芪抽提物的分离》“Fractionated extract of Astragalus membranaceus”，J.Clin.Lab.Immunol.，25，183-187(1988))，促进免疫抑制性小鼠的免疫反应[K.S.Zhao等.，《黄芪抽提物增强小鼠体内的免疫反应》(“Enhancement of the immune response in mice by Astragalusmembranaceus extracts”)，《免疫药理学)》(Immunopharmacology)，20，225-234(1990)]，刺激单核细胞的反应[Y.Sun等.，“preliminaryobservation on the effects of the Chinese medicinal herbs...”，《生物应答调节物杂志》(J.Biol.Response Modifiers)，2，227-237(1983)]，和刺激小鼠的骨髓造血能力[M.Rou等.，《黄芪对骨髓造血的影响》，(The effect of Radix astragali on mouse marrow hemopoiesis)，《中国传统医学》(J.Trad.Chin.Med.) 3(3)，199-204(1983)；S.I.Miura等.，《中国草药药效》(“Effect of a traditional Chinese herbalmedicine...”)，Int.J.Immunopharmacol.《免疫药理学杂志》，7(11)，771-781(1989)；and Y.Ohnishi等.，“Effects of Juzen-taiho-toh(TJ-48)...”，Exp.Hematol.《实验血液学》，18，18-22(1990)]。
Liu的美国专利4,843,067中披露了一种药物组合物，它含有黄芪多糖(可由Astragalus membranaceus Bge.或Astragalus gummiferLabillard中提取得到)和当归多糖组成。该黄芪多糖可用水从黄芪根部粉末或酒精沉淀中提取得到。Verbiscar的美国专利5,2868,467中发表了一种来自西黄蓍胶(Astragalus tragacantha(tragacanth))植物的免疫调节性多糖，在低温下制备而成，用以“保持多糖结构的完整性，不致有化学或构象变化”。Josephson等人的美国专利第5,336,506号中发表了用诸如阿拉伯半乳聚糖(分离自落叶松(Larixoccidentalis))和甘露聚糖这类植物性多糖和一些药剂形成的复合物，能靶向可引起受体介导胞饮的细胞受体。Adams等人的美国专利5,116,969发表了一种适合用于密度梯度分离的特别精制的的阿拉伯半乳聚糖产物。Jung等人的美国专利5,478,576发表了一种纯化的阿拉伯半乳聚糖(同样来自Larix occidentalis)、裂解产物、及其修饰物等，同样可用来将药剂传递到能引起胞饮作用的靶向细胞受体。Lewis等人的美国专利5,589,591披露了一种不含内毒素的多糖，例如阿拉伯半乳聚糖、葡聚糖、甘露聚糖、和阿拉伯胶；用超滤法将一种不纯的多糖进行制备而成，首先通过一种可去掉低分子量部分的薄膜，留下滞留物，再通过另一种可去除较高分子量部分的薄膜，同样仍留下滤液部分。
但上述这些参考文献，都着重在产物中的多糖部分(如阿拉伯半乳聚糖)，并可能甚至使用可排除阿拉伯半乳聚糖蛋白质的技术。
阿拉伯半乳聚糖蛋白质，也存在于开花植物中，并广泛存于高等植物中。阿拉伯半乳聚糖蛋白质(AGPs)，有时又称阿拉伯半乳聚糖肽，是内含高比例碳水化合物和少量蛋白质(通常低于10％)的糖蛋白，虽然已知也有含高蛋白质的阿拉伯半乳聚糖蛋白质。在由植物分离出的富含羟脯氨酸的糖蛋白中，阿拉伯半乳聚糖蛋白质的特点是蛋白含量低和能与β-葡萄糖基亚里夫(Yariv)试剂，即1，3，5-三-(4-β葡萄糖基呋喃氧苯基偶氮)-2，4，6-三羟基苯结合的能力[J.H.yariv等.，Biochem.J.，85，383-388(1962)；R.L.Anderson等.，Aust.J.plant physiol.，4，143-158(1977)]。阿拉伯半乳聚糖蛋白质是是阿拉伯胶(即一种阿拉伯胶树(Acacia senegal)的胶状渗出物)的一部分，常被当作乳化剂、防止结晶剂、和风味剂添加到食品中。自植物(花烟草(Nicotiana alata)、白花单叶烟草(Nicotianaplumbaginafolia)、和西洋梨(Pyrus communis))中分离出AGP基因的方法，在Chen等人申请的美国专利5,646,029中有披露。有关阿拉伯半乳聚糖蛋白质的详细讨论，请参考E.A.Nothnagel的《植物细胞中的葡聚糖蛋白及相关化合物》(Proteglycans and relatedcompounds in plant cells)，Int.Rev.cytology，174，195-291，1997)。
这里所披露的及本说明书中提到的文献在此结合作为参考文献。
发明简述
本发明的第一方面是提供一种分离自黄芪(Astragalusmembranaceus)，特别是其根部的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物。
本发明的第二方面是提供一种阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物，具有平均分子量至少是100千道尔顿，其是从本发明第一方面的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物中分离的的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物。
本发明的第三方面是提供一种可供静脉注射的阿拉伯半乳聚糖水剂，包含一种药学有效量的本发明第一方面的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物，或本发明第二方面的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物，和一种供静脉注射的辅药溶液。
本发明的第四方面是提供一种使用本发明第一方面的纯化阿拉伯半乳聚糖组合物，或本发明第二方面的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物来治疗哺乳动物疾病的方法(例如刺激造血，诱导巨核细胞增殖和成熟，刺激IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF、或G-CSF的生成，刺激嗜中性白血球的生成或活化，治疗嗜中性白血球减少症、贫血、或血小板减少症，加速因曝露(例如因意外或非治疗性的曝露，以及治疗性的曝露)于细胞毒性物质、或辐射照射后的恢复情形，治疗恶病质、呕吐、或撤药综合征，或改善生物反应或保护乙型肝炎患者的肝脏细胞)，包括在该接受治疗的哺乳动物身上注射药学有效量的本发明第一方面的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物，或本发明第二方面的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物，特别是本发明第三方面的一种可供静脉注射的阿拉伯半乳聚糖配方；或者与至少一种其他药剂(例如能刺激造血的药剂)合用。
本发明的第五方面提供了制备方法，用于制备本发明第一方面的纯化的阿拉伯半乳聚组合物，和本发明第二方面的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物，以及本发明第三方面的一种可供静脉注射的阿拉伯半乳聚糖水剂。
附图简要描述
图1示出人类癌症患者接受化疗后，没有进一步接受治疗者、以及用本发明纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物治疗、或用G-CSF治疗，其治疗后白血球平均值随天数变化的情况。
图2示出人类癌症患者接受化疗后，没有进一步接受治疗者、和用本发明纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物、或用G-CSF治疗后，治疗后总症状值随天数变化的情形。
图3示出人类癌症患者接受化疗后，没有进一步接受治疗者、和用本发明纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物、或用G-CSF治疗后，卡诺夫斯基表现指数(Karnofsky performance Index)数值。
发明详述定义
“阿拉伯半乳聚糖蛋白质”或“AGP”通常可以用β-葡萄糖基亚里夫(Yariv)试剂沉淀，而且高度糖基化的蛋白质，碳水化合物约占分子量的至少50％，而且主要的碳水化合物组成是阿拉伯糖和半乳糖，且该阿拉伯糖残基主要位于末端。对于阿拉伯半乳聚糖蛋白质，其通常与单克隆抗体MAC207进行特异性的反应。
“阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物”是指一种组合物，至少包含上述组合物重量的至少70％，特别是至少80％，尤其是至少90％的的阿拉伯半乳聚糖蛋白质、和相关的阿拉伯半乳聚糖、以及其他多糖。
“纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物”是一种包含阿拉伯半乳聚糖蛋白质(如上述)和相关的阿拉伯半乳聚糖与其他多糖的组合物。
“哺乳动物”包括人类和非人类的哺乳动物，例如宠物(猫、狗等)和家畜(牛、马、绵羊、山羊、猪等)。
“疾病”包括一种动物的任一种不健康的情况，包括因医疗(如副作用)所致的不健康情况，例如一种疾病状态，补血效果是具疗效的，特别是包括本发明的“药理和用途”部分记载的那些疾病状态。
“可药用的辅药”是指一种对制备药学组合物有效的辅药，一般是安全、无毒、而且必要的，并包括可用于兽医用药和人类用药的辅药。这类辅药可以是固体、液体、半固体、或气雾组合物形式、和气体形式。
“药学有效量”是指一种药量，当被施用于动物身体上以治疗疾病时，该药量足以有效地治疗该疾病。
疾病的“治疗”包括预防已感染但尚未出现病危的动物不致发病(预防治疗)，抑制疾病(减缓或抑制疾病的发展)，提供缓解该疾病的症状或副作用(包括纾减疗法)，和缓解该疾病(使疾病减轻)。纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物
本发明纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物的定义如上所述，它从黄芪(Astragalus membranaceus)(特别是根部)中分离，较好是从蒙古黄芪或膜荚黄芪(Astragalus membranaceus Bge.Var.mongholicus(Bge)Hsiao或A.membranaceus(Fisch)Bge.)的根部分离；优选是生长在中国内蒙古或山西省的黄芪植物的根部，特别是前者；而且较好的植物根部是选自生长两年的黄芪。具有典型的糖组合物(用GLC分析所述组合物的甲醇提取物的三甲基硅基衍生物来测定)，含约5-15mole％(摩尔百分比)，特别是10％的阿拉伯糖(Ara)；1.5％以下，特别是1％以下的鼠李糖；含量达到约4％的GalA(半乳糖酸)；约3％至7％的Gal(半乳糖)；和约70％至90％的葡萄糖(Glc)；其中阿拉伯糖∶半乳糖的比例不低于1.5∶1；特别是不低于1.75∶1；尤其是不低于3∶1；灰分不高于2％(重量百分比)；重金属含量不高于10ppm；羟脯氨酸含量不高于0.1％，特别是不高于0.05％。几乎不含任何内毒素(依制备商手册说明进行的内毒素测试[Seikagaku corporation，Tokyo，Japan])，含量低于1.0EU/毫克，特别是低于0.8EU/毫克，尤其是低于0.5EU/毫克，最好是低于0.3EU/毫克)；水中溶解度至少是20毫克/毫升，而且水溶液pH值介于约4.5至6.5间；重均分子量介于20至60千道尔顿间，特别是介于25至40千道尔顿间，尤其是介于27至35千道尔顿间。为方便起见，以下都用“PAGC”来代表本物质。制备纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物
纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物是在有或无碱金属盐(特别是磷酸二氢钾或磷酸二氢钠)这类共提物(co-extract)存在下，用热水(温度一般不低于80℃，特别是不低于90℃，特别是约100℃)，在该温度下提取黄芪(Astragalus membranaceus)晒干后的根部(一般是于无菌下将干燥的根部切片和分割，修剪干燥的根部，用超过滤水搓洗，再用诸如70％酒精的灭菌溶液冲洗后，将根部切成薄片，并于灭菌条件下风干，以下称这种制备是“浸制切片”)一段时间，在一个温度下，并视需要重复进行许多次提取步骤，让根部阿拉伯半乳聚糖蛋白质和相关的多糖可尽量溶出(一般是在约100℃，提取三次，每次3小时)。所有在制备根部碎片后进行的步骤都是使用无菌设备和试剂在无菌环境下操作。将热水萃出物浓缩(于60-70℃下真空浓缩至约1公升/千克的干燥根部)，然后用低级醇类(例如酒精，室温下最终浓度是70％)沉淀。再用更低级的醇类来清洗这些低级醇类的沉淀物(一般是用95％酒精清洗三次)，并用适当浓度悬浮于水中等待进一步处理(一般是18-20％重量/体积)。然后将悬浮液中不溶于水的物质去除，例如由低级脂肪醇(约35％的乙醇)加入沉淀去除。然后，低脂肪醇沉淀物(例如35％的酒精沉淀物)的上清液再用高浓度的低级脂肪醇作进一步沉淀，例如40％-80％的酒精，特别是60-70％的酒精，将内含阿拉伯半乳聚糖蛋白质和结合多糖的阿拉伯半乳聚糖组合物的粗产物沉淀出来。将沉淀再溶于水中，并干燥(喷雾干燥，避免过度加热)，用分离出阿拉伯半乳聚糖组合物的粗产物。该组合物粗产物一般是淡黄色粉末，可溶于水，浓度至少是100毫克/毫升，特别是至少200毫克/毫升，因干燥损失的干重约低于15％，而且内毒素含量低于0.5，特别是低于0.3EU/毫克。
为了调节黄芪粗原料批次和批次之间的变化，在工艺过程中可对原料、“浸制切片”、和中间产物进行混合，以保持终产物的一致性。
用离子交换色谱层析法进一步纯化阿拉伯半乳聚糖组合物的粗产物。将其溶于水，或是将沉淀溶解后的溶液调整至适当浓度(一般约2％)，然后进行超过滤，去除掉低分子量部分，用减少溶液体积(例如用可排除分子量在5千道尔顿下的超过滤系统(5K MWCOUF系统)进行过滤)。再将超过滤后的上清液流经阳离子交换管柱(例如SP琼脂糖凝胶阳离子交换管柱，用pH5.20的20mM乙酰钠(NaOAc)缓冲液平衡)，再将洗脱液装填至阴离子交换管柱中(例如Q琼脂糖凝胶阴离子交换管柱，用同样的NaOAc缓冲液平衡)。从阴离子交换管柱中洗脱液可直接拿来制备本发明第二方面的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物，并可浓缩干燥形成一种适合用来制备阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物的中间产物，或直接用来制备一种纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物。在制备纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物时，可用适当能过滤细菌的微过滤膜(例如0.1μm的滤膜)进行超过滤，去除盐类并减少溶液体积(例如用8K MWCO UF系统)。将超过滤后的上清液浓缩(50-60℃下，20-26％)，然后用低级脂肪醇(约80-90％的乙醇)进行沉淀。进一步清洗沉淀(例如用无水酒精，清洗三次)，并干燥(60-70℃的真空烤箱)，可获得纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物。阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物
本发明纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物的定义如上文所述，它从黄芪(Astragalus membranaceus)(特别是其根部)中分离，而且较好是从从蒙古黄芪或膜荚黄芪(Astragalus membranaceusBge.Var.mongholicus(Bge)Hsiao或A.membranaceus(Fisch)Bge.)的根部分离；而且优选是生长在内蒙古或中国山西省的黄芪(A.membranaceus)植物的根部，特别是前者；而且较好的植物根部是选自生长两年的黄芪。具有典型的约45％至75％(摩尔百分比)的糖组合物，特别是约50％至70％阿拉伯糖；2％至4％的鼠李糖；约4％至6％的半乳糖酸；约8％至25％、特别是10％至20％间的半乳糖；和约5％至25％间的葡萄糖；其中阿拉伯糖∶半乳糖的比例不低于2∶1；特别是不低于3∶1；尤其是不低于4∶1；灰分不高于2％(重量百分比)；重金属含量不高于10ppm；而且羟脯氨酸含量不高于0.2％，特别是不高于0.3％。几乎不含任何内毒素(同上述定义)；水中溶解度至少是20毫克/毫升，水溶液pH值介于约4.5至6.5间；平均分子量不低于100千道尔顿，尤其是介于150至350千道尔顿间。含约95％碳水化合物(包括可将阿拉伯半乳聚糖蛋白质核心糖化的碳水化合物在内)，和约5％蛋白质。约占氨基酸总量20％的是羟脯氨酸是阿拉伯半乳聚糖蛋白质的特点。为方便起见，以下都用“AGPC”来代表本物质。制备阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物
本发明的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物是由100K MWCO超过滤系统，将上述阿拉伯半乳聚糖组合物或离子交换管柱纯化步骤所得的馏出物(或将馏出物浓缩干燥后的固态中间物)进一步纯化而制得。上述“制备阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物”中阴离子交换管柱中所得的馏出物，是直接加到100K MWCO超过滤系统中。将这种100K MWCO超过滤系统中留存的滤液进一步浓缩，并用低级的脂肪醇进行沉淀，或者进一步清洗、干燥，都与制备纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物类似，可得阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物。药理和用途
本发明第一方面的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物或本发明第二方面的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物的有利的活性，已在数种测试中获得证实，并有下列用途。治疗化疗患者嗜中性白血球减少症
1.从活化的人类外周血单核细胞(PBMC)中制备细胞因子
免疫和造血系统需通过数种细胞因子的交互作用才能被激活，实施例3中描述了PAGC体外诱导细胞因子的产生。PAGC引发是明显的，PHA激活的人类外周血单核细胞与剂量相关的IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF和G-CSF的释放。已知IL-6、GM-CSF和G-CSF这三种细胞因子可在体外和体内影响嗜中性白血球的产生和/或活化。IL-6本身或与其他细胞因子一起，可刺激骨髓中的巨核细胞成熟，可恢复小鼠和非人类灵长类动物外周血中血小板的数值。这些数据表明PAGC可通过产生与造血功能相关的细胞因子来刺激骨髓抑制患者产生嗜中性白血球并恢复血小板数。
2.经氟尿嘧啶处理的小鼠体内GM-CFC干细胞的恢复
如实施例5中所述PAGC，已经在短期、小鼠、先体外后体内的造血干细胞恢复的模型中得到测定。氟尿嘧啶被广泛用来去除小鼠骨髓中的干细胞和细胞培养中会产生的集落形成单位(CFU-C)。由于未被激活的干细胞不会受氟尿嘧啶的影响，因此经过这种处理后的小鼠，会沿着已知、可预期的时间曲线恢复[A.M.Yeager等.，《5-氟尿嘧啶对造血的影响：鼠巨核细胞-CFC，粒细胞-巨噬细胞-CFC，外周血细胞水平研究》(The effects of 5-fluorouracil onhematopoiesis：studies of murine megakaryocyte-CFC，granulocyte-macrophage-CFC，and peripheral blood cell levels)，《实验血液学》(Exp.Hematol.)，11，944-952(1983)]。由实施例5中的表格可知在剂量依赖的方法中，经氟尿嘧啶处理后第4天，随着PAGC剂量的增加，每只大腿骨内GM-CFC的数值量也跟着上升。当施用PAGC剂量是200毫克/千克时，每只小鼠平均增加的GM-CFC是对照组的3.3倍(p＜0.01)；若是用100毫克/千克的PAGC来处理，每只小鼠平均增加的GM-CFC是对照组小鼠的1.8倍(p＜0.01)；若是用50毫克/千克的PAGC来处理，每只小鼠平均增加的GM-CFC与对照组差别不大。这些数据表明PAGC可促进氟尿嘧啶诱导的骨髓抑制的小鼠体内骨髓干细胞(GM-CFC)的复原，这至少在某一方面可解释是因PAGC促进骨髓抑制的小鼠体内外周白血球的增加所致。
3.接受亚致死剂量辐射的小鼠体内外周白血球的恢复
用亚致死剂量的辐射照射量来照射BALB/c小鼠，然后再根据实施例6的方法从皮下注射生理食盐水或各种剂量的PAGC到小鼠体内。接受辐射照射的小鼠在辐射后第14天，白血球的数值会下降到正常小鼠值的12％。较之仅注射生理食盐水的小鼠而言，用PAGC治疗可增加小鼠体内白血球的总数。用100或300毫克/千克的PAGC治疗的小鼠体内白血球总数，可比仅注射生理食盐水的小鼠提前7-9天恢复至正常鼠数的80％(正常值：6000-10000白血球/微升血液)。在PAGC处理的动物中，约22-23天后，白血球数即可恢复正常；而仅注射生理食盐水的小鼠这时的数值是正常值的46％。此外，也可用外周血涂片染色来测定不同的白血球值。从这些信息中可计算出嗜中性白血球和淋巴细胞的绝对值。在这个模型中，与仅注射生理食盐水的小鼠的对照组相比较，用PAGC治疗可增加嗜中性白血球数目的绝对值，同时也能增加淋巴细胞数目的绝对值。
4.化疗患者体内白血球计数的恢复
所有II期临床实验都是在中华人民共和国内完成。试验中分析了一小群参与实验时白血球数低于3.0×109白血球/升的患者的数据：其中168位患者接受PAGC治疗，59位患者接受G-CSF治疗，以及23位患者未接受任何治疗。治疗流程在实施例9中详细描述。如图1所示，PAGC治疗可稳定地增加接受化疗后患者体内的白血球数，而且这种增加的情形的可持续到第14天。虽然施用G-CSF，可使白血球增加的速度较快，到第7天达到最大值，但却无法持续，7天后患者体内的白血球数即开始下降。这两个治疗组均可使白血球数比未治疗组更早恢复到正常。与未接受任何治疗的对照组相比较而言，PAGC治疗组的白血球数可在第10天和第14天产生明显差异；但PAGC组和G-CFC组在第14天时的白血球数无明显差异。上述结果表明对接受化疗的肺癌、肠胃癌、和乳癌患者使用PAGC作为治疗佐剂，不仅安全而且可以被患者接受。PAGC治疗可恢复化疗患者体内的白血球数。而且临床上用PAGC进行治疗时，也未发现任何明显的副作用。治疗化疗患者血小板减少症
1.接受亚致死剂量的辐射的小鼠体内外周血小板细胞数的恢复
在第0天时，用亚致死剂量的辐射照射量来照射BALB/c小鼠，然后再根据实施例6的步骤用生理食盐水或各种剂量的PAGC来进行治疗。接受辐射的小鼠在辐射后第10天，白血球的数值会下降到正常小鼠的7％。皮下注射100或300毫克/千克的PAGC治疗小鼠，可明显提高小鼠体内外周血小板细胞数。注射PAGC组可比注射生理盐水的对照组早5-6天诱导血小板细胞数目恢复到正常小鼠的80％(正常值：8-12×105血小板/微升血)。经PAGC处理的小鼠，在辐射照射后约24-25天，血小板数即可恢复正常；而仅注射生理食盐水的小鼠，这时的数值仅是正常值的72％。这些结果表明PAGC是一种能有效促进血小板生长的药剂，对治疗血小板数目减少相当有效。用同样方式在为期20天的治疗中，用100和250毫克/千克的AGPC进行治疗的小鼠比对照组在所有辐射照射后的时间点都能更好地恢复红血球和血小板数目；表明PAGC在这种模型系统中也有相同的疗效。
2.骨髓巨核细胞的增殖和成熟
如前所述，PAGC可加速恢复辐射照射动物模型中诱导的骨髓抑制动物体内外周血液的血小板数，提示PAGC可刺激骨髓巨核细胞的增殖和/或成熟。可以用实施例4所述的体外液体培养系统研究这种可能性。由剂量滴定曲线可知，这种模型中最佳的PAGC剂量是100-200微克/毫升，而ED50是30-40微克/毫升。这种研究表明单独使用PAGC就可以促进体外骨髓巨核细胞的增殖和/或成熟。此外，PAGC也可和低于最佳剂量的IL-3(50pg/ml)联合用药，用剂量相关的方式增加乙酰胆碱酯酶(AchE)的水平。经200微克/毫升的PAGC和50pg/ml的IL-3处理过的细胞培养物中获得的AchE含量与用最佳剂量的IL-3处理过后的培养物中的AchE含量相当。这些数据表明PAGC可提高骨髓巨核细胞对相当低剂量的IL-3的反应性，或是IL-3可增加骨髓巨核细胞对PAGC的反应性。因为化疗或辐射照射会破坏许多细胞和组织包括产生细胞因子的细胞，因此接受这种治疗的患者体内内生性细胞因子的含量会较低。这么低的细胞因子含量将无法支持造血系统的正常功能，因而无法产生足够数目的造血细胞用来恢复受抑制的骨髓功能。因此，PAGC可能是治疗这种疾病的良好药物。这种研究结果表明即使是在内生性细胞因子不足的情况下，PAGC也可以促进骨髓巨核细胞的增殖和/或成熟达到正常水平。如上所示，PAGC可刺激外周血小板数目恢复，而且这种作用似乎是因诱导骨髓巨核细胞的增殖和/或成熟产生的。这种数据表明PAGC对治疗因骨髓抑制所致的血小板数目减少症有效。
3.增加化疗后血小板细胞数
II期临床实验如实施例9所述。试验中分析了一小群参与实验时白血球数低于4.0×109白血球计数/升、而且血小板数低于90×109/升的患者的数据：其中54位患者是接受PAGC治疗。这些患者的血小板数在第7天增加到高于100×109/升，并持续增加到第14天，如实施例9的列表所示。这些数据表明PAGC可增加这些化疗患者体内的血小板数。改善癌症患者的生活品质
II期临床试验在实施例9中有所描述。如实施例9所述，用改善化疗症状和卡诺夫斯基表现指数(Karnofsky performance Index)的数值作为评估所有参与试验的患者生活品质的根据。纪录并计算治疗期间由化疗所引起的症状，包括疲惫和倦怠、不适、出汗、呼吸短促和缺乏食欲。如图2所示，随着治疗的进行，表明PAGC组的疗效最快，这种可由症状指数下降和较G-CSF组更快恢复至正常数(计数＝0)看出。此外，比起G-CSF组，PAGC组在第10天至第14天期间，统计数字上也表现出更明显的改善(p＜0.01)。然而，G-CSF组与对照组(未接受任何治疗)相比，在整个14天的监测期间，都无任何明显统计上的差异。这些数据表明PAGC可改善化疗患者的症状，而关于这点，G-CSF似乎没有任何效用。分析治疗前的卡诺夫斯基表现指数(Karnofsky performance Index)数低于70的一小群患者在经过各种治疗后症状指数的改善情况。比起G-CSF组和未接受任何治疗的对照组，PAGC组可显著改善症状，如图3所示，统计上的差异分别是p＜0.01和p＜0.0001。大部分PAGC组中的患者的指数都比其他两组高。预防接受化疗的癌症患者体内嗜中性白血球减少症
在前面段落中，已知PAGC可有效地治疗化疗诱导的嗜中性白血球减少症。这些数据提示了PAGC可能对预防和嗜中性白血球减少一样有效，目前已经计划要在中华人民共和国内进行临床试验。治疗接受辐射照射的癌症患者体内嗜中性白血球减少症
前面的药理数据也表明PAGC可有效地恢复辐射照射诱导的嗜中性白血球减少症。目前已开始在中华人民和国内进行临床试验，用以了解PAGC治疗非-哈金氏淋巴瘤癌症患者在接受辐射照射后引起的嗜中性白血球减少症的情形。治疗接受化疗的癌症患者的贫血现象
用亚致死剂量(4.25Gy)的辐射照射量来照射BALB/c小鼠，然后再根据实施例6的步骤用生理食盐水或各种剂量的PAGC来进行治疗。接受辐射的小鼠在辐射照射后第17天，RBC的数值会剧烈下降到正常小鼠RBC值的55％。经PAGC处理的小鼠在第17天时可得到相当高的RBC数，而仅注射生理盐水的小鼠这种时的数值仍旧很低。皮下注射100或300毫克/千克的PAGC治疗小鼠，可比仅用生理盐水治疗的对照组早4-6天使RBC数目升高至正常小鼠的80％(正常值：8.5-11×106RBC/微升血液)。经PAGC处理的小鼠，约在20-22天RBC记数即可恢复正常；而仅注射生理食盐水的小鼠这时的数值是正常值的65％。这些结果表明PAGC是一种相当有效的能促进红血球干细胞发育和/或移动的药剂，因此对治疗放疗或化疗引起的贫血相当有效。用同样方式在为期20天的疗程中，用100和250毫克/千克的AGPC进行治疗的小鼠比起对照组在所有辐射照射后的时间点进行测试时均可更好地恢复红血球和血小板数目；表明PAGC在这种模型系统中也有相同的疗效。
实施例9中的II期临床试验目的是研究化疗患者白血球的恢复情况，因此条件是要根据白血球数来进行分析实验。目前用计划要在PRC(中华人民共和国)研究用PAGC治疗贫血和化疗引起的贫血的临床试验。对接受外周血干细胞移植的患者单独移动外周血干细胞或与G-CSF结合治疗
CD34抗原存在于造血干细胞和干细胞中，包括能形成细胞集落的BFU-E(红细胞爆裂型集落生成单位)、GM-CFC(粒-巨噬细胞集落形成细胞)、和CFU-Mix(混合集落生成单位)。CD34+细胞的流式细胞仪分析结果提供了一种测定移植组合物(graftcomposition)最好的方式。早在1975年，就已提出人类外周血系统中存在有造血干细胞(PBPC)。这些外周血干细胞仅占总细胞数的一小部分，大部分的干细胞都位骨髓中。1976年时，首先有人提出化疗后的恢复期间，人类外周血系统中的造血干细胞数目会上升。最近，更有人报道说细胞群落刺激因子(colony stimulatingfactor)G-CSF和GM-CSF，可直接提高造血干细胞的数值。化疗时联合使用细胞群落刺激因子比只用一种方法治疗能更有效的增加造血干细胞的数值。目前，G-CSF被用来在人类自体和异体移植中移动造血干细胞。移植造血干细胞比传统的骨髓移植进行得更快速。如果与化疗或其他细胞因子联合使用的话，可更大幅度的提高G-CSF治疗产生的造血干细胞数目。单独使用PAGC和/或与G-CSF联合使用，来诱导造血干细胞移动的能力在实施例7有所阐述。如实施例7中的表格结果所示，PAGC可提高循环的GM-CFC量约6倍。此外，PAGC与G-CSF联合使用时，可提高循环的GM-CFC量约83倍。这种增加量还高于单独使用G-CSF时所增加的量的39倍。结果表明PAGC可提高循环的GM-CFC的量，或与G-CSF协同增加正常小鼠体内循环的GM-CFC的量。如表中所示，PAGC也可增加循环的BFU-E的量约9.5倍。这种增加量高于单独使用G-CSF时所增加的量的4.5倍。在类似实验中用环磷酸胺处理的小鼠，比起未接受PAGC治疗的小鼠，CD34+Lin-细胞的数值会增加。PAGC作为治疗制剂，可与G-CSF协同作用在增加造血干细胞数目方面发挥很好的效果。这类协同治疗可减少从供体内获取造血干细胞细胞所需的血浆分离置换的次数，从而减少治疗的费用。此外，这类的协同治疗，对于对单独使用G-CSF反应不佳或是不想使用化疗的患者也有帮助。同样的，AGPC对移植也很有效。促进受细胞毒性剂或辐射照射作用之后的个体复原
以上结果表明，当动物或病人谨慎地曝露于辐射照射或细胞毒性因子中时，PAGC比起未用这种治疗更能促进曝露于辐射照射或细胞毒性因子(如意外的或非治疗性的曝露，还有治疗性的曝露)后的恢复过程。治疗恶病质
化疗和辐射治疗最常见的一种副作用就是造成患者食欲降低和体重减轻。实施例8表明PAGC可使经化疗药剂环磷酸胺和氟尿嘧啶处理后的小鼠的体重增加。比起单独用环磷酸胺处理后的小鼠，经PAGC处理过的小鼠，体重减轻得到抑制，并可更快恢复原来体重。但这些差异在统计上并不明显。
如上述，PAGC可明显改善II期临床试验患者的生活品质。其中测量的一项参数是提高食欲。与小鼠模型研究结果共同表明PAGC可帮助改善患者的恶病质，这是由诸如癌症这种慢性病或癌症治疗造成的一种物质浪费和营养不良现象。与G-CSF协同治疗接受抑制骨髓疗法的癌症患者促进嗜中性白血球恢复并降低G-CSF用量
前面的讨论表明PAGC可刺激细胞因子的生成，特别是人类外周血单核细胞产生的G-CSF；并可促进因辐射所致的骨髓抑制动物模型中GM-CFC和外周白血球数目的恢复，以及使II期临床试验的癌症患者接受化疗后体内白血球值恢复至正常。这些结果表明PAGC可通过生成多种内源性细胞因子来间接作用于造血系统，这些细胞因子可彼此协同作用来恢复嗜中性白血球数目。同时，如上所述PAGC也可和IL-3协同作用来促进骨髓巨核细胞的增殖/成熟。
此外，施用PAGC不仅安全，而且临床试验中患者可以接受。而使用G-CSF时严重的并发副作用例如骨头痛、肌肉痛、头痛、疲惫、恶心、呕吐、腹泻等，而在施用PAGC时并未发现。这些结果和前面讨论过的协同作用表明PAGC可与G-CSF联合使用来降低外因性G-CSF的用量，并促进接受骨髓抑治疗的癌症患者体内嗜中性白血球数目的恢复。在高剂量细胞毒性治疗和自体或异体血干细胞移植后，联合使用G-CSF治疗用以促进嗜中性白血球恢复
目前用高剂量化疗和/或放疗和支持性的血干细胞(BPC)移植来治疗许多癌症患者，例如乳癌、淋巴癌和多重骨髓癌患者。移植BPC可加速恢复造血功能。通常在移植BPC后会配合使用G-CSF，用以加速恢复嗜中性白血球的数值，预防因感染所致的嗜中性白血球减少而引起的发烧，并缩短住院期和降低抗生素用量。如实施例9 II期临床试验所示，PAGC可恢复化疗癌症患者的白血球数；这些结果和前段文字总结的药理效用表明联合使用PAGC与G-CSF，对移植BPC后加速恢复嗜中性白血球的数值非常有效。改善乙型肝炎携带者的生物反应性和保护肝脏细胞
细胞因子在对抗病毒感染上扮演了相当重要的角色。细胞因子是由与免疫系统相关的细胞产生。例如巨嗜细胞；CD4+和CD8+T淋巴细胞。它们对个体在病毒感染，如乙型肝炎病毒(HBV)的恢复中起直接的作用。从动物模型到人体研究，可清楚地知道细胞免疫反应可能对解决HBV感染极疾病病理上起到一些作用。在急性HBV感染中，强烈的多株细胞免疫反应是至关重要的。CD4+T淋巴细胞生成IL-2和INF-γ标志着第1型细胞因子的释放；并且由IL-2和INF-γ来诱导并维持细胞免疫性，这点对于对抗病毒感染是相当重要的[C.A.Biron，《细胞因子对病毒感染反应性的产生和调节》(cytokines in the generation of immune response to，and regulation of，virus infection”，Cur.Opin.Immunol.)，6，530-538(1994)]。CD4+和CD8+细胞释放的细胞因子对于向下调节(downregulation)HBV的复制上也扮演了相当重要的角色。如果急性反应上出现了缺陷，就会变成慢性HBV感染。这些结果表明增强第1型反应或在肝脏局部产生适当的细胞因子可能对治疗慢性HBV感染非常有效[M.J.Koziel，Sem.Liver Disease，19(2)，157-161(1999)]。PAGC提取自传统中药植物(Astragalus membranaceus Var.mongholicus(AM))，这种植物早已被用来刺激免疫和造血系统。它被广泛用来治疗各种症状，这类患者的症状类似于化疗或放疗诱导的骨髓抑制(除嗜中性白血球减少外，还有血小板减少和贫血)。此外，已知AM用体外剂量依赖的方式刺激小鼠胰脏细胞增殖；并可提高已接种了S-180肉瘤细胞的动物体内胰脏细胞中的自然杀伤细胞(Naturalkiller，NK)活性；还能提高具细胞毒性的T-淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes，CTL)活性。CTL制备的细胞因子可控制体内病毒感染，而病毒专一性的CTL制备的INF-γ和INF-α，可增加CTL清除感染病毒的能力[L.G.Guidotti等.，《转基因小鼠内细胞毒性T淋巴细胞用非溶菌性机制抑制乙型肝炎病毒的表达》(Cytotoxic Tlymphocytes inhibit hepatitis B virus gene expression by a noncytolyticmechanism in transgenic mice)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，91，764-3768(1994)]。此外，如上所述，PAGC可经PHA活化后，刺激人类外周血单核细胞制备生成IL-1β、IL-6、TNF-α、TNF-γ、GM-CSF、和G-CSF。这些研究表明PAGC可通过调控细胞因子的生成来间接影响免疫系统。由AM得到的粗提取物已被用来治疗慢性肝炎患者，用降低体内过高的IgG量，并降低ALT值，改善患者的免疫和肝脏功能[Y.Liu，《从黄芪中提取的口服液对70名慢性乙型肝炎患者的疗效》“therapeutic effect of oral solution from Astragalus in thetreatment of 70 chronic hepatitis B patients”Jiang Su Chung Yao，15(12)，38(1994)]。此外，已知AM的分馏物具有如前述能增加免疫功能的能力。这些结果表明PAGC可用来改善和修饰乙型肝炎携带者的生物反应性和保护肝脏细胞。乙型肝炎患者的E疫苗佐剂
由多孔菌属umbellatus(Polyporus umbellatus)制备而成的多糖，已被用作乙型肝炎疫苗的佐剂来治疗慢性乙型肝炎。已知对于转换乙型肝炎e抗原(HBeAg)是血清阴性和消除乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)具有令人满意的效果[S.M.Wu等.，《多孔菌属多糖和乙型肝炎疫苗联合用药用于治疗慢性乙型肝炎的治疗发现》“The therapeutic observation on the combined Polyporuspolysaccharide with hepatitis B vaccine in the treatment of chronichepatitis B”.J.Chin.Infectious Disease，13(3)，187-189(1995)；H.Z.Shu等.，《多孔菌属多糖和大剂量乙型肝炎疫苗联合用药用于治疗64例慢性乙型肝炎患者的治疗发现》“The therapeutic observationon the Polyporus polysaccharide with large dose of hepatitis B vaccinein the treatment of 64 cases of chronic hepatitis B patients”，Med.J.NDFSC，6(4)，211-212(1996)]。已知由AM制得的提取物可将乙型肝炎e抗原(HBeAg)和抗乙型肝炎病毒核心抗原(anti HBc)转阴，并去除乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)[C.K.Liu等.，《用黄芪抽提物治疗慢性乙型肝炎的临床和实验研究》“Clinicaland experimental studies on effects of chronic hepatitis B treated withAstragli composita”，Chung Kuo Chung His I Chieh Ho Tsa Chin，16(7)，394-397(1996)；P.L.Chen等.，《用来自黄芪的多糖治疗33例慢性乙肝患者》″Polysaccharide from Astragalus in treating 33 casesof chronic active hepatitis B patients″，New Drugs Clin.Remedies.11(2)，75-76(1991)]。上述这些结果表明PAGC可能可用作为乙型肝炎患者的疫苗佐剂。治疗麻醉药产生的停药症状
患者开始戒除使用麻醉药时，一般会出现脱瘾症状。传统中医药学(TCM)观点认为，所谓的脱瘾症状就是气(能量)不足。就中医师的观察而言，如果能强化气，就能加速药物戒除过程。实施例9关于PAGC临床实验的适应征之一，就是可改善化疗后癌症患者的生活品质。通过和化疗相关的症状的改善来衡量生活品质；这些包括疲倦和疲惫、不适、冒冷汗、呼吸急促、和缺乏食欲。这些症状都是典型“气”不足的一种表现，也是传统中医认为的脱瘾症状的典型表现。因此，PAGC除了能强化患者的“气”外，还可治疗欲戒除使用麻醉药物患者的脱瘾症状。预防和治疗接受化疗或放疗癌症患者的呕吐症状
化疗和/或放疗最常出现的副作用就是恶心和呕吐。虽然目前化疗或辐射照射技术已有很大改进，但仍有相当高比例的患者会出现呕吐的症状，因此仍需寻找能降低这类副作用的方法。虽然已有许多能抗呕吐的药物上市(例如5-羟色胺受体拮抗剂、类皮质激素和多巴胺受体拮抗剂)，但是，这类药物本身也有其他副作用。和这些药物相关的症状是轻微头痛、便秘、无法入睡、烦躁、肌肉和舌头的非自主运动、和镇静状态。虽然关于呕吐的神经药理目前尚不完全清楚，但是完全控制呕吐症状而采取的措施应包括尽量让患者感到方便舒适，和提供能减少患者住院和卧床时间的治疗，进而促进患者生活品质的药物等等。在中国境内进行的临床试验表明PAGC对化疗患者有益，特别是可用改善生活品质。研究人员的观察结果和患者的反映都支持PAGC可改善患者生活品质的结论，并表明PAGC在预防和治疗化疗后的呕吐症状中有明显功效。降低肾透析患者的红细胞生成素用量或作为红细胞生成素的替代物
EPOGEN(epoetin alfa，erythropoietin)是1989年核准用来治疗因慢性肾衰竭接受透析治疗的患者引起的贫血症状。这种药品能让患者过一种更积极，更有活力的生活。在EPOGEN问世前，90％的透析患者都患有贫血，使患者经常感到疲倦和全身无力以及影响其工作能力。现在，大部分的透析患者都会同时接受EPOGEN治疗来提高或维持体内红血球水平。在临床试验期间，最常见的由EPOGEN引起的副作用是高血压、头痛、中风、恶心/呕吐、以及血栓；一般如果出现这些副作用时，医师会建议患者降低EPOGEN用量。实施例6中PAGC研究表明，它能使接受亚致死剂量辐射照射的小鼠体内外周血红细胞数目复原。用100和250毫克/千克剂量的AGPC用同样的给药方式治疗经过辐射照射的小鼠，为期20天的研究表明，在辐射照射后的所有时间点进行测试，试验组的红血球和血小板数目的复原情况与对照组比较都有改善；说明在这个模型中与PAGC有相同的疗效。此外，如实施例7所示，PAGC可增加循环BFU-E的量，并与G-CSF协同增加正常小鼠体内循环BFU-E的量。此外，经PAGC处理后的正常鼠和经环磷酸胺处理的小鼠的外周血中的TER-119+细胞数目显著增加。从早期成红血细胞直到成熟红细胞阶段，TER-119抗原在红细胞表面表达。TER-119+细胞的数值的增多表示PAGC可刺激骨髓中的红血球系统的分化、增殖和成熟，并促使这些细胞进入到外周血中。所有这些结果都表明PAGC可促进试验用小鼠体内红血球的增殖和成熟。由于在在临床试验中使用PAGC不仅安全，而且从未发现任何显著的副作用，因此PAGC可能可用于降低肾透析患者的红细胞生成素用量或作为红细胞生成素的替代物。
根据实施例6的程序，用100和250毫克/千克剂量的AGPC用同样的给药方式治疗经过辐射照射的小鼠，为期20天的研究表明，在辐射照射后的所有时间点进行测试，试验组的红血球和血小板数目的复原情况与对照组比较都有改善；说明在这个模型中与PAGC有相同的疗效；而且意味着如果与本篇研究中其他PAGC数据一起讨论的话，AGPC与PAGC具有同样的疗效，因此与PAGC的各种药学应用和指标相适应。药学剂型和给药方式
一般来说，本发明中的药学有效量的第一方面的组合物——纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物，或第二方面的组合物——阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物，可用静脉注射方式给药，可单独或与至少一种其他药剂，特别是能刺激造血的药剂联用。药学有效量将随疾病、疾病的严重性、给药个体的年龄和健康情形、及其他因素有所不同。对刺激造血而言，包括诱导巨核细胞增殖或成熟，刺激生成IL-1β、IL-6、TNF-α、TNF-γ、IFN-γ、GM-CSF、或G-CSF，刺激嗜中性白血球的生成或作用、治疗嗜中性白血球减少、贫血、或血小板细胞数目减少症；或加快患者曝露在辐射(例如，意外的或非治疗性的辐射照射，也包括放疗)或细胞毒性剂下之后的恢复，对一般体形和体重的人来说，本发明第一方面的组合物纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物的药学有效量约介于50至1000毫克/天，特别是介于100至500毫克/天，特别是约250毫克/天。对治疗恶病质、恶心、或撤药综合征、或改善生物反应性、或保护乙型肝炎患者的肝脏细胞而言，上述的剂量也是药学有效量。因为本发明阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物本身所含的阿拉伯半乳聚糖蛋白含量较高，预计药性应较强，因此药学有效量将相应有所降低，例如介于纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物的药学有效量的10％至50％之间。对本领域的技术人员应能在无需进一步实验的条件下，根据本说明书和本身技术，来判断对一特定疾病应给予多少药学有效量的本发明组合物。
一般来说，本发明第一方面的组合物——纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物、或本发明第二方面组合物——阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物将制成药物剂型通过静脉注射方式给药。所述剂型包含本发明第一方面的组合物——纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物、或本发明第二方面的组合物——阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物、和适合的静脉注射佐剂溶液。本领域的技术人员熟知的用在静脉注射的适当佐剂溶液的配制方法可参考Alfonso AR：《Remington药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Science)，17th ed.，Mack PublishingCompany，Easton，PA，1985。静脉注射的适当的佐剂溶液包括水、生理食盐水、葡萄糖水溶液、和类似物。
通常，本发明第一方面的组合物——纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物、或本发明第二方面的组合物——阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物，作为造血剂应用时将用静脉注射方式来给药，特别是持续数分钟到一小时、或更长时间的静脉滴注方式，例如15分钟左右。所述组合物中本发明化合物的含量随组合物的种类、单位剂量大小、佐剂种类和其他众所周知的因素变化。一般来说，组合物最终可包含0.001％至10％(重量百分比)的本发明化合物，优选是介于0.01％至1％(重量百分比)之间，其余是佐剂。
本发明第一方面的组合物——纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物、或本发明第二方面的组合物——阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物，可选择性地与至少一种其他可治疗疾病的药剂联合用药，尤是能刺激造血的其他药剂，例如血红素、血小板生成素、粒细胞群落刺激因子(G-CFS)、IL-3，等等。实施例
通过下列非定性实施例进一步对本发明进行描述。所有纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物和阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物由尺寸排阻色谱(size exclusion chromatography)检定。
尺寸排阻色谱(size exclusion chromatography)组成如下：Shimadzu HPLC系统，配备有SCL-10A系统控制器、LC-10AD泵、DGU-4A脱气机、RID-6A折射率检测器、和SPD-10AV UV检测器，并且用0.2N氯化钠平衡的GS-701和GS-620管柱(Shodex Asahipak，7.6×500mm)。装载的样量是80μg(浓度是2mg/ml的40μl样品溶液)，样品洗出速率是1毫升/分钟。用不同平均分子量的标准物来制备标准曲线；样品的分子量可从标准曲线上读出。样品的重量平均分子量(Mw＝∑(AiMi/∑Ai)，数均分子量(Mn＝∑Ai/∑(Ai/MI))，和多分散性(Mw/Mn)是用2.4版的Shimadzu SEC软件绘制的标准曲线测定的。
采用气液相层析法(GLC)分析三甲基硅甲基糖苷衍生物来测定糖含量和本发明中的PAGC和AGPC组合物。在这种方法中，先将多糖加入到盐酸酸化的甲醇中甲醇化，接着用三甲基硅(TMS)衍生法来制备挥发性的单糖衍生物。除去杂质后，用配备DB-1管柱(包括火焰式离子检测器(FID))的气液相层析法(GLC)来分析衍生物。用内消旋肌醇做内标，与组合物样品一起作分析来测定含糖量和组分。
用比色测定法来测定羟基脯胺酸含量。样品先用盐酸水解，然后再用次溴酸钠(溴的氢氧化钠溶液)、盐酸和二甲基氨基苯甲醛来处理。用比色计测定最终溶液的光密度，羟基脯胺酸的含量从用同样方法制备各种羟基脯胺酸浓度梯度绘制的标准曲线中读出。实施例1 阿拉伯半乳聚糖组合物的制备步骤A “浸制切片”处理
将300千克晒干的黄芪(Astragalus membranaceus)根部经过除污，灭菌清洗并用超过滤水搓洗，然后浸泡在70％酒精中过夜，切成厚约3-5毫米的薄片，在60-70℃的灭菌烘箱中烘干，制成“浸制切片”。这些烘干后的“浸制切片”因干燥减重约＜15％。步骤B. 阿拉伯半乳聚糖组合物的粗提取
将200千克，步骤A中制备的“浸制切片”，用UF水(用10KMWCO UF系统进行超过滤的去离子水)在100℃下提取3次，每次3小时。在60-70℃下，将混合提取液减压浓缩至约200公升。在浓缩液中加入95％的酒精，使酒精最终浓度达70％，室温下搅拌1 5分钟，沉淀多糖。轻轻倒出上清液，用95％酒精清洗沉淀3次。将沉淀悬浮在UF水中，浓度约18-20％(由折射计测定)，再加入95％酒精，使酒精最终浓度是35％。将酒精悬浮液离心，丢弃沉淀部分，并在上清液中加入95％酒精，并搅拌使酒精浓度达70％。收集沉淀部分，再用UF水溶解，喷雾干燥后可得阿拉伯半乳聚糖组合物的粗产物。
阿拉伯半乳聚糖组合物的粗产物是质地轻的黄色粉末，水中溶解度是200毫克/毫升，烘烤减重约＜15％。内毒素含量约＜0.3EU/毫克。步骤C. 阿拉伯半乳聚糖组合物的纯化
将3.5千克，步骤B中制备的阿拉伯半乳聚糖组合物的粗产物，用UF水溶解得到浓度是2％的溶液(体积175公升)。用5K MWCOUF系统将溶液过滤至终体积是35-40公升。添加pH5.2的1.0M乙酰钠(NaOAc)缓冲液将浓缩液配制成pH5.2的20mM NaOAc缓冲液。将溶液装填到SP琼脂糖凝胶阳离子树脂交换柱(体积20升，床层高30厘米)中，并用20mM NaOAc洗脱，收集2.5-3.0倍床体积的洗脱液。将收集的洗脱液装填到Q琼脂糖凝胶阴离子树脂交换柱(与SP柱体积和床层高度相同)中，并用20mM NaOAc洗脱，收集3-3.5倍床体积的洗脱液。从Q琼脂糖凝胶阴离子树脂交换柱收集的洗脱液用0.1μm滤器过滤后，再用8K MWCO UF系统进行超过滤。将残留液体用浓缩系统在50-60℃下浓缩至20-26％，再添加无水酒精进行沉淀，酒精最终浓度是80-90％。用无水酒精清洗沉淀3次，然后在60-70℃下烘干，可得纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物。
纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物是一种白色粉末，溶于水、生理食盐水、和5％的葡萄糖水，浓度是20毫克/毫升，而且含水量≤6.0％。组合物所含灰分≤2.0％，重金属≤10ppm，内毒素≤0.1EU/mg。组合物溶液的pH值介于4.5-6.5之间。组合物的含糖量≤85％(用葡萄糖作为标准物，由苯酚-硫酸法检知)，而且Ara∶Gal比例≥1.5∶1(采用GLC分析所述组合物三甲基硅甲基糖苷衍生物来测定)。实施例2 制备阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物
将实施例1中步骤C得到的Q琼脂糖凝胶阴离子树脂交换柱洗脱液用100K MWCO UF系统进行超过滤。将超过滤后残留的液体进一步浓缩，再添加无水酒精进行沉淀，酒精最终浓度是80-90％。用无水酒精清洗沉淀3次，然后在60-70℃下烘干可得纯化的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物。
纯化的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物是一种白色粉末，溶于水、生理食盐水和5％的葡萄糖水，浓度是20毫克/毫升，并且组合物溶液的pH值介于4.5-6.5之间。该组合物内毒素含量≤0.5EU/mg，重金属含量≤10ppm。它的阿拉伯糖与半乳糖(Ara∶Gal)的比例≥2∶1，并而且羟脯氨酸含量大于0.2％。组合物的重平均分子量是≥100千道尔顿。实施例3 从活化的人类外周血单核细胞中制备细胞因子
按Boyum所述的方法制备人类外周血单核细胞(PBMC)[A.Boyum，《从人血中分离单核细胞和粒细胞》(“Isolation ofmononuclear cells and granulocytes from human blood...”)，Scan.J.Lab.Invest.，97，77-89(1968)]。人血棕黄层(血沉)样品，约25毫升/捐赠人，是从史丹佛大学医学中心血库取得。将每个棕黄层样品，在室温下轻轻地重新悬浮在总体积100毫升、无钙-、无镁-的Hank平衡盐溶液中(HBSS，Gibco)。将25毫升的细胞悬浮液放入内含15毫升Ficoll-Paque(Pharmacia LKB biotechnology，Inc.)的50毫升离心管内，用Beckman GPR台式离心机(GH-3.7型转子)在15℃用400×g离心30分钟。离心后，将界面间的外周血单核细胞悬浮液移动至另一个50毫升的离心管中，重新悬浮在HBSS中使终体积是45毫升，并在15℃用354×g的速度离心10分钟。丢弃上清液，并将细胞沉淀重新悬浮在HBSS中使终体积是45毫升，并在15℃用265×g的速度离心10分钟。将细胞沉淀重新悬浮在10毫升X-Vivo组织培养基中(Bio Whittaker，MD)，并用血球计计数。在下列实验中使用聚苯乙烯管(Falcon#2057，Becton Dickson)和来自两位不同捐赠人的外周血单核细胞。将外周血单核细胞悬浮液稀释成4×106/毫升，1毫升的细胞悬浮液中加入0.5毫升的植物凝血素P(PHA-P，Pharmacia 27-3703-01)，最终浓度是0.3μg/ml，以及加入0.5毫升各种浓度的本发明组合物溶液中的任何一种，进行细胞培养。每根管子内的总体积是2毫升。单独用PHA处理的细胞溶液作为对照组。在37℃、7％CO2下培养24小时，将这些离心管用Beckman GPR台式离心机(GH-3.7型转子)在15℃用1600×g的速度离心10分钟，收集上清液并而且在分析之前在-70℃温度储存。用市场可购的ELISA试剂盒按照生产商的使用说明来测量细胞因子含量，如人类细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、GM-CSF和G-CSF(R&D Systems，MN)和人类TNF-γ(Endogen，MA)。全自动定量绘图酶标仪(microplate reader，Thermo max，MolecularDevices，CA)来测定光密度。用全自动定量绘图酶标仪提供的软件计算结果，并用上清液中所含细胞因子含量(pg/ml)来表示。所有结果都用试验组与对照组的比值(S/C)来表示，其中S表示用PHA和测试样品刺激外周血单核细胞后产生的细胞因子量，而且C是单独用PHA刺激外周血单核细胞后产生的细胞因子量。下表表明PAGC可通过活化的人类外周血单核细胞来提高产生的细胞因子量。
实施例4 骨髓巨核细胞的增殖/成熟
| PAGCμg/ml | ELISA(S/C) | |||||
| IL-1β | IL-6 | TNF-α | IFN-γ | GM-CSF | G-CSF | |
| 25 | 9.1 | 11.8 | 4.9 | 3.1 | 6.5 | 49.9 |
| 10 | 4.3 | 5.9 | 2.3 | 1.2 | 2.1 | 16.5 |
用9-14周的G3H/HeJ雄鼠进行实验。分析巨核细胞成熟情况的液态培养分析法是一种可研究骨髓巨核细胞(外周血小板干细胞)增殖和/或成熟的体外试验方法。详细介绍参见S.A.Burstein，《白介素3加快鼠类体外巨核细胞的成熟》(“Interleukin 3 promotesmaturation of murine megakaryocytes in vitro”)《血细胞》(BloodCells)11，469-479(1986)。首先分离出小鼠正常骨髓单核细胞，在室温下将悬浮于内含0.5mM二异丙基氟化磷酸盐(DFP，Sigma，St.Louis，MO)的基质中20分钟，使内生的乙酰胆碱酯酶(AchE)失活。清洗细胞，以4×106/毫升的浓度重新悬浮于15％FCS-IMDM(Gibco BRL，Gaithersburg，MD)，然后放置在组织培养塑料瓶中，利用基质细胞和巨噬细胞会附着在瓶上的特性来除去它们。将内含重新悬浮的骨髓细胞的组织培养瓶放在37℃、5％CO2下培养1.5小时。收集那些未附着在瓶上的细胞，以1×106/毫升的浓度悬浮在1％Nutridoma SP(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)-IMDM中进行分析。将细胞加到96孔洞，U-型组织培养皿中，每孔含有105个细胞和总体积0.2毫升的内含各种PAGC浓度和含或不含50pg/ml的小鼠重组IL-3(R&D Systems，Minneapolis，MN)的组织培养基。在37℃、5％CO2下培养7天。PAGC活性是通过测定乙酰胆碱酯酶活性的提高情况来测定的，乙酰胆碱酯酶活性的提高是啮齿类动物巨核细胞增殖或成熟的相对特异的细胞标志物。7天后，将培养皿离心并弃去上清液。在每个培养孔中加入溶液I(0.2％Triton X-100，1mM EDTA，0.12mM NaCl，50mM HEPES，pH7.5)0.2毫升和20微升的6.27mM的碘化硫代乙酰胆碱(sigma，St.Louis，MO)(碘化硫代乙酰胆碱的最终浓度是0.57mM)。组织培养皿在37℃下培养4小时，然后每个孔洞取出10μl的反应混合物放到96孔的黑色平板中(black plate)(Labsystems，Helsinki，Finland)，然后加入10μl、0.4mM溶液的香豆素苯顺丁烯二酰亚胺(coumarinphenylmaleimide)，(CPM，Molecular Probes Inc.，Eugene，OR)的DMSO溶液，和0.2毫升的溶液II(5mM乙酸钠，1mM EDTA，0.2％Triton X-100，pH5.0)。轻轻摇动平板使液体混合均匀。用390nm的感光滤光片和460nm的发射滤片在荧光计中测量释放的荧光强度(Fluoroskan II，Labsystems，Helsinki，Finland)。荧光强度与所培养的巨核细胞产生的AchE量成正比。PAGC浓度介在12.5μg/ml和400μg/ml(波峰出现在浓度是200μg/ml时)时可增加所培养的巨核细胞数目，而且PAGC浓度介在12.5μg/ml和400μg/ml(波峰出现在浓度是200μg/ml时)时，联合应用50pg/ml的IL-3将大大增加所培养的巨核细胞数目(浓度是50至200μg/ml时使巨核细胞数目增加两倍)。实施例5复原经氟尿嘧啶处理的小鼠体内GM-CFC干细胞数目
在第0天，将用量是150毫克/千克的氟尿嘧啶(Sigma)注射到8-10周大的BALB/c雌鼠腹膜内；并在第1-3天，分别由皮下注入生理食盐水、各种浓度的PAGC或100μg/千克的重组人类G-CSF(Neupogen，Amgen)。并在第4天，处死试验小鼠。收集大腿骨骨髓，计数后，将5×104个白细胞培养在35毫米的有盖培养皿中，每个培养皿中放了1毫升的甲基纤维素完全培养基和波草促细胞分裂素的胰腺细胞培养基(pokeweed mitogen spleen cell conditionedmedium)作为可提供群落刺激因子的来源物(StemCellTechnologies，Inc)。在37℃下培养6-7天后，用Nikon Diaphot显微镜(30-60倍)计数细胞数超过50个的细胞群落。下表表明PAGC可促进经氟化脲嘧啶处理后的小鼠GM-CFC干细胞的恢复。
实施例6 接受亚致死剂量辐射照射的小鼠体内外周血的复原
| 处理 | 生理食盐水 | PAGC50mg/Kg | PAGC100mg/Kg | PAGC200mg/Kg | G-CSF100μg/Kg |
| GM-CFC/大腿骨 | 601 | 608 | 1075 | 2020 | 1196 |
用平均体重是20克，9-14周的BALB/c雌鼠来进行此实验。每一次实验前5天，在小鼠未酸化的饮水中加入40毫克/升的新霉素(Neomycin，Sigma，St.Louis，MO)。随机挑选对照组或实验组的小鼠，每组各6只，并在第0天用4.25Gy的X射线(250KVP，0.35mm Cu filter，Philips，Germany)来进行辐射照射。辐射照射后，小鼠体内外周血白血球和血小板的数值都比正常鼠低，并且红血球数目略为减少。由皮下注射300和100mg/Kg的PAGC。最初5天(从第0天至第4天)，每天注射一次，然后是每周3次，连续注射3周，其中包括辐射照射后的第一次注射。共用了14针剂量的PAGC。对照组是经皮下注射0.1毫升的生理食盐水。实验期间，每周由小鼠尾部静脉抽血两次，并将血样存放在涂覆了EDTA的管子中(Sarstedt，Germany)，并用Serono 9010+细胞计数器(Serono BakerDiagnostics Inc.Allentown，PA)来计算分析外周血白血球、血小板、和红血球的数值、以及血红素含量。与对照组相比较，100和300mg/Kg的PAGC可明显(p＜0.01)促进辐射照射后第17至30天(实验结束)的小鼠白血球的恢复；并可明显(p＜0.05，一般是p＜0.01)促进辐射照射后第14至25天的小鼠血小板的复原。还可明显(p＜0.05，一般是p＜0.01)促进辐射照射后第14至25天的小鼠红血球的恢原。在20天研究期间，用相同方式施用100和250mg/Kg的AGPC，无论在哪一个时间点测试，均可改善辐射照射后的小鼠体内红血球和血小板的复原，表明与PAGC在这个模型中有相同的效能。实施例7 单独用PAGC或与粒细胞群落刺激因子(G-CSF)一起来移动外周血干细胞
让8-10周的BALB/c小鼠自由取用酸化水和食物。正常小鼠依下列方式处理7天，每天一次：生理食盐水(200μl，皮下注射)，PAGC(100mg/Kg，皮下注射)，G-CSF(100μg/Kg，皮下注射)，或PAGC+G-CSF(100mg/Kg的PAGC+100μg/Kg的G-CSF，皮下注射)。每只小鼠的注射量约200μL。每一组有五只小鼠。经过七天上述处理后，第8天时在小鼠腹膜内注射20单位的肝素(Elkins-Sinn，Inc.，Cherry Hill，NJ)，然后用吸入30分钟CO2的方式将小鼠处死，并用心脏穿刺方式收集外周血。用水溶性聚蔗糖-Paque(Ficoll-Paque)(Pharmacia Biotech AP，Uppsala，Sweden)密度离心方法分离出外周血单核细胞，用磷酸缓冲液清洗两次，重新悬浮在培养基中并用细胞计数器计算细胞数目。将介于2.5×104至1×105个数的外周血单核细胞培养在35毫米的有盖培养皿中，每个培养皿中放了1毫升含有促红细胞生成素的甲基纤维素完全培养基(complete erythropoietin-containing methylcellulose medium)和重组的IL-3+IL-6+干细胞因子(StemCell Technologies Inc.，Vancouver，B.C.)。在37℃下培养7-14天后，用Nikon Diaphot显微镜(30-150倍)计数细胞数超过50个的细胞群落。计数可形成粒细巨嗜细胞群落(GM-CFC)和红细胞爆裂型集落生成单位(burst-formingunit-erythroid(BFU-E))。下表表明PAGC可与G-CSF协同增加正常鼠体内循环的GM-CFC与BFU-E的数值。
| 生理食盐水 | PAGC100mg/Kg | G-CSF100μg/Kg | PAGC，100mg/Kg+G-CSF，100μg/Kg | |
| GM-CFC，100/ml | 0.8 | 4.6 | 30 | 64 |
| BFU-E，100/ml | 1.0 | 3.1 | 4.5 | 9.5 |
在另一类似实验中，用200毫克/千克的环磷酸胺来处理小鼠，然后再用生理食盐水或100或300毫克/千克的PAGC处理11天，收集外周血单核细胞后重新悬浮成2×107细胞/毫升，用荧光素异硫氰酸-抗-CD34和PE-血统标志物(CD3、CD4、CD6、CD19、CD11b、GR-1、CD41和Ter-119)(Pharmingen，San Diego，CA)进行染色，再用流体细胞计(FACSCalibur，Becton Dickson，San Jose，CA)分析，可看到PAGC会加速CD34+Lin-细胞移动进入外周血中。实施例8 PAGC可恢复氟化脲嘧啶或环磷酸胺处理过的小鼠体重
用8-10周的BALB/c雌鼠来进行这种实验。将10只小鼠随机分成5组：分别是正常对照组、环磷酸胺(CY)-处理组、氟化脲嘧啶(FU)-处理组、CY+PAGC-处理组、或FU+PAGC-处理组。对正常对照组而言，第0天时由腹膜内注射生理食盐水，然后由第1天至第12天，是由皮下注射生理食盐水。对环磷酸胺(CY)-处理组或CY+PAGC-处理组，在第0天时由腹膜内注射200毫克/千克的环磷酸胺，然后由第1天至第12天，是由皮下注射生理食盐水或200毫克/千克的PAGC。对氟尿嘧啶(FU)-处理组或FU+PAGC-处理组，是在第0天时由腹膜内注射150毫克/千克的FU，然后由第1天至12天，是由皮下注射生理食盐水或200毫克/千克的PAGC。小鼠在第0天时称一次体重，然后每隔一天再称一次体重，直到第12天。结果表明经CY+PAGC-处理和FU+PAGC-处理过的小鼠，体重减轻最少，而且比单独用CY或FU处理的小鼠更快恢复体重。实施例9 在中国进行的PAGC人体临床试验
在中国进行的PAGE人体临床试验是根据中华人民共和国卫生部的规定的GCP标准来进行的。
第一期临床试验，将PAGC用正常生理食盐水稀释并用静脉注射的方式施用到32位正常的志愿者，连续注射7天。施用临床剂量(250毫克/天)的三倍剂量后未发现任何严重的临床副作用。
II期临床试验评估PAGC对抑制肺癌、肠胃癌、或乳癌患者在接受化疗后引起的白血球减少(＜4.0×109白血球/L＝的效能。总计六个医学中心、487位患者参与了这次临床试验，其中328位患者在PAGC治疗组，84位患者在G-CSF治疗组，以及75位患者在对照组。在整个14天的化疗期间，若任何时候患者的白血球值低在4×109/L，即将该患者纳入任三组之一。对第一组患者，将250毫克PAGC溶在500毫升生理食盐水中后，每天一次静脉注射到患者体内，连续注射7天。在施用PAGC期间对患者进行观察，并在停药后持续观察7天。G-CSF治疗组的患者，每天由皮下注射75μg的G-CSF一次，连续注射5天，用药期间对患者进行观察，并在停药后持续观察9天。在对照组，在化疗后不给予其他可强化造血系统的药物，并观察患者14天。治疗后14天内观察所有3组患者的白血球、RBC、和血小板数值。同时通过患者与化疗相关症状和其卡诺夫斯基表现指数，来评定其改善患者生活品质的效能。与化疗相关的症状包括疲惫和倦怠、不适、出汗、呼吸短促和缺乏食欲，并由合格的中医师进行评定。每一类的分数如下：0分-没有症状，1分-症状轻微，2分-中等症状，3分-症状严重。因此，最严重的例子标示是15分。卡诺夫斯基表现指数是世界卫生组织(WHO)用来评估一般健康状态的评价方法。图1表明化疗后，白血球数目随天数变化曲线；图2化疗后，总症状分数随天数变化曲线；图3是卡诺夫斯基表现指数的分数(PAGC与GCSF比较：U＝18.36，p＜0.01；PAGC与对照组比较：U＝15.62，p＜0.0001＝；下表列出化疗后平均血小板数与天数的变化情形；所有结果都表明用250毫克PAGC治疗7天，确实可促进白血球和血小板细胞数目恢复，改善化疗引起的症状，并改善化疗患者的卡诺夫斯基表现指数，总的说来比对照组在统计上有明显改善；并而且通常比用75μg的G-CSF治疗5天具有更好的统计上的效果。
| 血小板，109/L，PAGC-治疗组患者(n＝54) | ||||
| 第0天 | 第4天 | 第7天 | 第10天 | 第14天 |
| 65±21 | 87±61* | 118±94** | 149±107** | 178±111** |
| *p＜0.05，**p＜0.001 | ||||
虽然本发明是通过特定具体实施例进行说明，但是对本领域技术人员来说，可用轻易根据本发明进行各种改变，而不脱离本发明的目的和精神，所有这些修改都包括在所附权利要求的范围内。
Claims (20)
1.一种从黄芪中分离，特别是从其根部分离得到的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物。
2.根据权利要求1所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物，其中所述黄芪是指是蒙古黄芪、或膜荚黄芪。
3.根据权利要求1或2所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物，分离自产于中国内蒙古或山西省的黄芪，特别是前者。
4.根据权利要求1至3中任何一项权利要求所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物，其中所述的黄芪是生长两年的黄芪。
5.根据权利要求1至4中任何一项权利要求所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物，其重均分子量在20千道尔顿至60千道尔顿之间。
6.根据权利要求1至5中任何一项权利要求所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物，其阿拉伯糖/半乳糖的比例至少是1.5。
7.根据权利要求1至6中任何一项权利要求所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物，其所含内毒素量不高于1.0EU/mg。
8.一种阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物，具有重均分子量至少是100千道尔顿，是从权利要求1至7中任一项权利要求所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物中分离得到的。
9.一种可静脉注射的阿拉伯半乳聚糖水剂，包括：
(a)药学有效剂量的根据权利要求1至7中任何一项权利要求所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物和根据权利要求8所述的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物；以及
(b)一种可静脉注射的液体佐剂。
10.一种施用根据权利要求1至7中任何一项权利要求所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物、或根据权利要求8所述的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物治疗哺乳动物疾病状态的方法，包括静脉注射药学有效量的根据权利要求1至7中任何一项权利要求所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物、根据权利要求8所述的阿拉伯半乳聚糖蛋白组合物、或根据权利要求9所述的可静脉注射的阿拉伯半乳聚糖水剂。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述的方法可刺激造血、诱导巨核细胞的增殖或成熟、刺激生成IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF、或G-CSF，刺激嗜中性白血球生成、或激活，治疗嗜中性白血球减少症、贫血、或血小板减少症，促进受细胞毒性剂、或辐射照射作用之后的个体复原，治疗恶病质、呕吐、或撤药综合征，改善生物反应性、或保护乙型肝炎患者的肝脏细胞。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述方法是一种可刺激造血，诱导巨核细胞的增殖、或成熟，刺激生成IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF、或G-CSF，刺激嗜中性白血球生成、或激活，或治疗嗜中性白血球减少症，血、或血小板减少症的方法。
13.根据权利要求10至12中任何一项权利要求所述的方法，其中所述哺乳动物是人类。
14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述哺乳动物患有骨髓抑制。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述骨髓抑制起因于癌症化疗、或辐射照射治疗。
16.根据权利要求10至15中任何一项权利要求所述的方法，进一步包括施用至少一种其他治疗药剂。
17.根据权利要求15所述的方法，其中至少一种其他治疗药剂是一种能刺激造血的药剂。
18.根据权利要求17所述的方法，其中至少一种其他治疗药剂选自血红素生成素、血小板生成素、或粒细胞群落刺激因子，或IL-3。
19.一种根据权利要求1所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物的制备方法，包括：
(a)从黄芪中提取出的一种含有阿拉伯半乳聚糖组合物的液体提取物；
(b)在步骤(a)中的所述液体提取物中添加足够量的低级脂肪醇，将阿拉伯半乳聚糖组合物沉淀出来，并分离所述沉淀的阿拉伯半乳聚糖组合物；
(c)将步骤(b)所述沉淀的阿拉伯半乳聚糖组合物溶于水，形成含有阿拉伯半乳聚糖组合物的溶液；
(d)处理步骤(c)所述含有阿拉伯半乳聚糖组合物的溶液，去除掉任何分子量低于阿拉伯半乳聚糖组合物的物质；
(e)用离子交换色谱法纯化从步骤(d)得到的所述含有阿拉伯半乳聚糖组合物的溶液；以及
(f)自步骤(e)的纯化的含有阿拉伯半乳聚糖组合物的溶液中分离出可静脉注射的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物。
20.一种根据权利要求8所述的阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物的制备方法，包括：
(a)将根据权利要求1至7中任何一项权利要求所述的纯化的阿拉伯半乳聚糖组合物的溶液用超过滤系统进行超过滤，去除分子量在100千道尔顿以下的组分；以及
(b)从步骤(a)得到的保留物中分离出阿拉伯半乳聚糖蛋白质组合物。
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Cited By (3)
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|---|---|---|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1854158B (zh) * | 2005-04-25 | 2011-09-07 | 蒋来高 | 运用超临界流体萃取技术提取黄芪多糖的工艺 |
| CN109432242A (zh) * | 2018-11-07 | 2019-03-08 | 郑毅男 | 一种落叶松阿拉伯半乳聚糖制备方法及其在医疗方面的应用 |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20140306 Address after: 301700 Tianjin New Technology Industrial Park, Wuqing Development Zone, No. 9, source road Patentee after: Tianjin Cinorch Pharmaceutical Co., Ltd. Address before: American California Patentee before: Pharmagenesis Inc. |
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Granted publication date: 20041215 |
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