CN1353816A - 不可逆性神经损伤易感个体的鉴定方法,包括定量检测胃蛋白酶原i(pgi)和维生素b12浓度的步骤 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及鉴定不可逆性神经损伤和恶性贫血危险的易感个体的方法和试剂盒,该方法的步骤包括定量检测上述个体血清样品中的胃蛋白酶原I(PGI)分析物浓度,选择针对该分析物的方法特异性阈值,将如此检测的分析物浓度与该分析物的方法特异性阈值比较,并测定上述个体血清样品中的维生素B12浓度或一种与其相关的分析物的浓度。

Description

不可逆性神经损伤易感个体的鉴定方法， 包括定量检测胃蛋白酶原I(PGI) 和维生素B12浓度的步骤
                      发明领域
本发明涉及一种用于鉴定不可逆性神经损伤包括痴呆的易感个体的联合诊断方法。
本发明的方法基于对血液或血清样品进行两种检验的联合，尤其为了鉴定倾向于发生B12缺乏并因这种缺乏而很可能遭受痛苦，如不可逆性神经损伤，包括痴呆和恶性贫血的病人。
                       发明背景
许多不同的胃部疾病或症状，如慢性萎缩性胃炎，恶性贫血，室性溃疡，胃息肉和Menetrier病(巨大肥厚性胃炎)可能导致胃癌。粘膜的明显可识别的改变是发育不良和腺癌。已被证实几乎所有疾病的危险都通过慢性萎缩性胃炎介导。
慢性胃炎是指胃粘膜的持续炎症状态。该病可粗略分为浅表型和萎缩型。在浅表型胃炎中，炎症细胞的浸润集中在表面的上皮以下。倘若炎症发展和扩散到特定的胃分泌腺之间，这一类即归为慢性萎缩性胃炎。在这种病例中，胃粘膜的正常腺体结构至少部分被组织转化的改变代替。
估计胃体部萎缩性胃炎病人患胃癌的相对危险，按芬兰的癌症统计计算，为具有健康粘膜的人的约4-5倍。另外，由于内在因子的缺乏和B12维生素的吸收障碍有患恶性贫血的危险。在胃窦部严重萎缩中，这种危险甚至达到18倍。如果萎缩性改变在胃体部和胃窦部(全胃炎(pangastritis)都出现，这种危险甚至可增加到90倍。
WO96/15456公开了一种筛查胃癌危险的方法，依据该方法，胃体或胃窦或这两个部位均存在的萎缩通过测定血清样品中的胃蛋白酶原I(PGI)和胃泌素-17(G-17)分析物水平来检测，并且把所检测的水平与每种分析物各自的方法特异性阈值比较。还优选将所检测的水平与两种分析物各自的方法特异性参考值比较。
血清PGI值低于PGI的特异性阈值表明萎缩性胃炎位于胃体部。如果血清G-17浓度低于它的阈值，则萎缩位于胃窦部。在全胃炎中，血清PGI低于阈值，并且血清G-17值在其参考值的下限。
充足的B12维生素的供给对于叶酸的新陈代谢和正常的血液产生，还有神经细胞的功能都是必需的。维生素B12与胃体粘膜产生的内在因子这种蛋白形成一种复合体，该复合体在回肠下段被重吸收。这是维生素B12优选的重吸收形式。
由于萎缩性胃炎或胃癌，特别是胃体部的胃炎或胃癌造成的内在因子的缺乏，将最终导致体内B12维生素的缺乏。长期的缺乏可以导致恶性贫血的发生，并且甚至在早期，即一年内，发展成不可逆性神经损伤和痴呆。因此，认为B12维生素的缺乏是与神经紊乱，如痴呆，特别在老年群体发生的痴呆的发生相关的一种重要危险因素。据估计，B12维生素的症状不明显的不足折磨着成千上万的人。在这些病例中，如果已知不足，则采用B12维生素的注射治疗是简单且有效的。特别有价值的是该治疗方法能够鉴定下述个体，他们目前还没有发展成B12维生素缺乏症，但有相当大的危险会在将来发生该疾病，除非采取防止这种缺乏继续发展的措施。
                    发明概述
本发明涉及将测定血样中萎缩性胃炎的标志的试验与测定维生素B12的试验联合用于辅助诊断个体的不可逆性神经损伤或确定其易感性的方法。
本发明的方法是鉴定对不可逆性神经损伤和恶性贫血易感的个体的方法，该方法包括以下步骤
-定量检测上述个体血清样品中的胃蛋白酶原I(PGI)分析物浓度，
-选择上述分析物的方法特异性阈值，
-把如此检测的分析物浓度与该分析物的方法特异性阈值比较，并且
-检测该个体血清样品中的B12维生素的浓度，或检测与B12维生素浓度相关的分析物浓度，并把它与所测的该分析物的方法特异性参考值比较。
对血清PGI和维生素B12浓度的测定，或对与B12浓度相关的分析物的检测可以以任何顺序进行，以便同时了解血清PGI和维生素B12水平，从而辅助诊断或评估上述个体对神经性损伤的易感性。但是，依据本发明的具体实施方案，检测血清PGI浓度并把它与它的方法特异性阈值比较，而且为了进一步诊断，选择出血清PGI浓度值低于它的方法特异性阈值的个体。在本实施方案中，只有显示出表明胃体萎缩的低血清PGI值的个体才进行维生素B12的筛查。
这样，依据优选实施方案，本发明尤其旨在筛查这样的个体，他们还没有显示出B12维生素缺乏症，即基本显示正常的B12维生素水平，但由于其被诊断为胃体部萎缩，随时间的推移倾向于发生这种缺乏症。这种鉴定使得有可能在早期采取预防措施，以防止发生与B12维生素缺乏有关的痛苦，特别是比痴呆更早发生的不可逆性神经损伤。
                    发明详述
1.胃蛋白酶原I(PGI)的检测
血清样品中PGI的检测可如WO96/15456所述进行，该出版物包括在此作为参考。
上述方法优选包括，在免疫学方法中使用抗胃蛋白酶原I的多或单克隆抗体检测胃蛋白酶原I的步骤。优选该反应在合适的支持物，如塑料、玻璃或纤维素支持物，例如微滴板上进行。免疫学方法可以用已知方式进行，如使用吸收度，发光技术或荧光技术检测上述样品中的胃蛋白酶原I浓度。
在这种情况下，针对血清PGI的方法特异性阈值根据用于检测分析物浓度的实验的特异性和敏感性来选择，并且是本领域的技术人员所熟知的，如见William J Marshall，临床化学，第三版，1995，Mosby。
当根据所用方法的特异性和敏感性将阈值定为20-30μg/l，相当于约450-690pmol/l时，如果血清胃蛋白酶原I浓度低于该阈值，则在胃体部存在萎缩。PGI的正常值或参考值为25-120μg/l。
2.维生素B12的检测
血清样品中维生素B12(钴胺素)的浓度可以按照任何一种本身已知用于此目的的方法检测。这些已知的方法包括利用诸如需要钴胺素促进生长的纤细眼虫(Euglena gracilis)或德氏乳杆菌(Lactobacillus leichnannii)进行的血清B12的微生物试验。还可使用B12维生素的放射性同位素稀释试验，这些试验技术在文献中有详细记录，如Lau等，“应用放射性同位素稀释法和包被炭法检测血清B12水平”，血液(Blood)，26(1965)，202。放射性同位素稀释法更快速并且给出的结果可与其它方法，如眼虫属试验的结果相比，前提是结合蛋白特异于生物学活性钴胺素。标准纯或纯化的内在因子是最合适的结合蛋白，因为它与真正的钴胺素而不是钴胺素类似物发生特异性结合。
B12的放射性同位素稀释试验通常包括从B12的天然结合蛋白上释放内源性B12的步骤，方法如在选定的pH值下煮沸然后加入精确量的放射性同位素57Co-B12，以及有限量的结合蛋白。由于所加入的放射性B12的量足以结合所述有限量蛋白，所以所有的结合蛋白都可被B12的某种形式结合。由于天然B12和放射性B12竞争与结合蛋白的结合，被蛋白结合的B12的放射活性计数被抑制的程度指示样品中B12的量。该方法已被Lau，出处同上修改，即利用蛋白包被的炭将未结合的B12与蛋白结合的B12分离，并且计数含有结合型放射性B12和结合型非放射性B12的混合上清液的放射性。然后由该计数算出血清B12浓度，通常通过比较标准图表得到。已有商业化放射测定试剂盒可用于进行该方法。
也有其它的方法可用于检测血清样品的B12水平。因为钴胺素辅酶是甲基丙二酸盐向琥珀酸盐的异构化的必需物质，所以在B12维生素缺乏症中发现甲基丙二酸盐排泄量的增加。这就提供了一种用于B12维生素缺乏症的敏感试验。另外，同型半胱氨酸的血浆水平也是增加的。美国专利号4,940,658描述了一种用于检测同型半胱氨酸水平升高的方法，该方法使已知数量的标记的同型半胱氨酸与样品混合，接着利用如质量分光术检测标记的与未标记的同型半胱氨酸的比率，然后计算样品中未标记的同型半胱氨酸的量。
B12维生素的缺乏也曾使用，如化学发光受体试验(Wentworth，S.等，临床化学，卷40 537-540)，放射免疫分析(Endres，D.B.等，临床化学，卷24，460-465)，以及非同位素结合试验，CEDIA法，克隆化酶供体的免疫分析(van der Weide，J等，临床化学，卷38，766-768)来检测。
测定B12，或甲基丙二酸盐或同型半胱氨酸等物质(样品中它们的浓度增加可指示B12的缺乏)的浓度时所能使用的任何已知方法和试剂盒都可在本发明的方法中使用。本发明还涉及对B12浓度以及与B12浓度相关的分析物浓度都进行测定的可能性。
依据本发明，将所测量的B12维生素浓度与选定的B12的方法特异性参考值或参考范围进行比较。这种参考值在200-900ng/l之间，相当于约170-700pmol/l之间变动。关于同型半胱氨酸，推荐的参考值小于15-16μmol/l，关于甲基丙二酸盐，推荐的参考值小于0.4μmol/l。
本发明还涉及一种在本发明方法中使用的试剂盒，该试剂盒包含
-检测血清样品中PGI浓度的工具(means)，
-检测血清样品中维生素B12浓度或与该维生素B12浓度相关的分析物的浓度的工具。

Claims (5)

1.用于鉴定对不可逆性神经损伤和恶性贫血易感的个体的方法，该方法包括以下步骤
-定量检测所述个体的血清样品中胃蛋白酶原I(PGI)分析物的浓度，
-选择一个针对该分析物的方法特异性阈值，
-将所测分析物浓度与该分析物的方法特异性阈值比较，并且
-检测该个体血清样品中的B12维生素的浓度，或检测与B12维生素浓度相关的分析物浓度，并把它与所测分析物的方法特异性参考值比较。
2.权利要求1的方法，包含测定血清PGI浓度，并选择表现出血清PGI浓度低于PGI阈值的个体，进一步测定其维生素B12或与维生素B12相关的分析物的浓度。
3.权利要求1的方法，其中检测样品中B12维生素的浓度。
4.权利要求1的方法，其中检测样品中甲基丙二酸盐或同型半胱氨酸的浓度。
5.用于实施权利要求1的方法的试剂盒，包含
-在血清样品中检测PGI浓度的工具，
-在血清样品中检测维生素B12浓度或与该维生素B12浓度相关的分析物浓度的工具。
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