CN1330542A - 对肠道完整性有维持和修复作用的方法与组合物 - Google Patents

Abstract

一种用于维持和增强个体肠道完整性修复作用的方法以及该方法用到的制剂。本方法中给个体使用一种制剂,制剂中包括了有效量至少一种n－6多不饱和脂肪酸以及与之相组合的至少一种n－3多不饱和脂肪酸。

Description

对肠道完整性有维持和修复作用的方法与组合物

发明领域：

本发明涉及包含有长链多不饱和脂肪酸(PUFAs)的肠道制剂，以及为维持肠道完整性及增强肠道完整性修复作用而采用的方法。更具体而言，本发明涉及为维持和增强肠道完整性修复作用而使用的能够降低肠道通透性并能够修复破损肠道细胞的制剂和方法。

发明背景：

有几种疾病的特征是肠道通透性有所增强。这些病例包括：结肠炎、克鲁氏疾病、肠道过敏综合症、腹腔疾病、饥饿、囊性纤维化、坏死性肠结膜炎以及由于化学疗法和放射疗法导致的肠道破损。此外，发生在早产婴儿和/或未熟肠道中的食物过敏反应常伴随有通透性的增强。而通透性的增强容易使婴儿营养吸收发生异常，并且使得内毒素和细菌极易进入到循环中去。

肠道制剂或组合物中的长链PUFAs是熟知的。编号为4670285的美国专利公开了一种特定的脂肪混合物，该混合物适合用作婴儿配方。脂肪混合物中至少包括一种C₂₀或C₂₂n-6脂肪酸以及一种C₂₀或C₂₂n-3脂肪酸。C₂₀或C₂₂n-6脂肪酸总量约占组合物中所有脂肪酸重量的0.13～5.6％。C₂₀或C₂₂n-3脂肪酸总量约占组合物中所有脂肪酸重量的0.013～4.44％。该专利公开了用卵脂来供应脂肪酸的用途。

编号为4918063的美国专利公开了用于抑制或治疗溃疡和炎性肠道疾病的制剂。制剂中包括了磷脂和中性脂质的混合物。此项专利公开了一种除包括饱和或不饱和甘油三酯和/或固醇外，还包括饱和或不饱和磷脂的混合物。混合物为试验动物模型的溃疡提供了保护作用。

编号为WO96/10922的PCT国际公开文本公开了一种用作婴儿配方的脂肪混合物，其特征在于花生四烯酸和二十二碳六烯酸以磷脂的形式存在。

编号为0376628B1的欧洲专利申请公开了一种全部为植物性油脂的混合物，该混合物把随机棕榈油或随机棕榈油精油作为唯一的棕榈酸油来源。研究表明，该组合物用作婴儿配方尤其有用，特别是那些前期或生下来体重较轻的婴儿更是如此。

发明概述：

本发明涉及为维持有此种需要的个体肠道完整性以及增强肠道完整性修复作用而采用的方法。该方法给个体使用一种制剂，制剂中包括了至少一种n-6多不饱和脂肪酸与之相组合的至少一种n-3多不饱和脂肪酸。本发明涉及以上方法中用到的制剂，制剂中包含了有效量的一种由至少一种n-6多不饱和脂肪酸以及与之相组合的一种n-3多不饱和脂肪酸。本发明涉及怎样使用有效量的一种n-6多不饱和脂肪酸以及与之相组合的一种n-3多不饱和脂肪酸在用以维持个体肠道完整性以及增强个体本身的肠道完整性修复作用的药物制备中的用途。

附图简述：

图1中比较了补充本发明制剂的大鼠与未补充本发明制剂的大鼠中血浆内毒素的水平。

图2显示了本制剂对肠道PLA₂mRNA表达水平的影响情况。

图3显示了本制剂对肠道PAF受体RNA水平的影响情况。

发明详述：

本制剂中用到的多不饱和脂肪酸包括了至少含有两个C＝C双键的20个或更多个碳原子的脂肪酸。采用传统命名法标出脂肪酸中双键的数目和位置。例如，花生四烯酸链长20个碳原子，其4个双键从位于末端第六个碳原子开始出现，因此花生四烯酸记为C₂₀：4 n-6。同样，因为二十二碳六烯酸链长22个碳原子，6个双键开始出现在从分子末端数的第三个碳原子上，所以记为C22：6 n-3。

本发明中的n-6多不饱和脂肪酸优选使用花生四烯酸，而本发明中用的n-3多不饱和脂肪酸优选使用二十二碳六烯酸。

本发明方法包括了给对于特征为细胞损伤或肠道组织破坏的具有一种或多种失调的个体施用一种有效量的制剂。制剂中包括至少一种n-6多不饱和脂肪酸以及至少一种n-3多不饱和脂肪酸。n-6多不饱和脂肪酸的有效量大约为5～61mg/kg体重，优选10～51mg/kg体重。同样，n-3多不饱和脂肪酸的有效量大约为5～61mg/kg体重，优选5～51mg/kg体重。花生四烯酸∶二十二碳六烯酸的有效比例大约为1∶1～2.5∶1，优选比例为1∶1～2∶1。这是在以下给药基础上给出的，即1kg大的婴儿给药量100kcal/kg/天。

为获得如上所示的n-6和n-3多不饱和脂肪酸的有效量，本方法中的制剂应该是包括大约4～50mg/ml，优选量为8～41mg/ml的n-6多不饱和脂肪酸。本方法中用的制剂应该包括大约4～50mg/ml，优选量为4～41mng/ml的n-3多不饱和脂肪酸。同样，花生四烯酸∶二十二碳六烯酸的有效比例为1∶1～2.5∶1，优选比例为1∶1～2∶1。

本发明涉及为维持肠道完整性及增强肠道完整性修复作用而采用的方法，为修复肠道完整性及增强肠道完整性修复作用而使用的制剂，以及怎样使用有效量至少一种n-6多不饱和脂肪酸以及与之相组合的至少一种n-3多不饱和脂肪酸在用以维持肠道完整性并增强肠道完整性修复作用的药物制备中的用途。多种疾病中肠道完整性发生损害，因为这些疾病中肠道通透性的提高将导致肠道细胞的损伤及破坏并使得细菌在肠道中转移，造成内毒素血症。以此种方式损害肠道完整性的疾病包括：结肠炎、克鲁氏疾病、肠道过敏综合症、腹腔疾病、饥饿、囊性纤维化、因化学疗及放射疗法造成的肠道损坏，以及食物过敏。前期婴儿中，未熟肠道常伴随有通透性的增强，易使婴儿营养吸收发生异常，并使得内毒素和细菌进入到循环中去。本肠道制剂既可供成人使用又可供婴儿使用。

本发明的优选实施方案是使用一种方法或制剂来维持和增强婴儿尤其是前期婴儿肠道完整性的修复作用。本方法包括了给婴儿肠道施用一种营养全面的婴儿配方，制剂中包括蛋白质、碳水化合物、脂类以及由有效量的至少一种n-6多不饱和脂肪酸和与之相组合的至少一种n-3多不饱和脂肪酸。

对于本领域的技术人员来说，“婴儿配方”这一称谓极易得到认可。典型的婴儿配方最初形式是浓缩形式或粉剂形式，那么稀释或兑水成为容易饲喂的状态时，其中除了应该包括维生素、矿物质、纤维、乳化剂等外，还应该包括大约60～110g/L碳水化合物、10～35g/L蛋白质以及20～50g/L脂类。对于需要治疗的婴儿，为维持和增强其肠道完整性的修复作用，其制剂中需要加入适量的n-6和n-3多不饱和脂肪酸。可以加入n-6和n-3多不饱和脂肪酸的可商购的婴儿配方包括从Wyeth Nutritionals International购得的S-26，S-26LBW以及SMA。

根据本发明，下面列出了具体脂肪混合物的实施例，混合物中包括适量的n-6和n-3多不饱和脂肪酸：

                脂肪混合物1

脂肪酸        脂肪酸           ％

 C6：0        己酸             —

 C8：0        辛酸             9.1

C10：0        癸酸             6.1

C12：0        月桂酸          10.3

C14：0        豆蔻酸           4.6

C14：1        肉豆蔻烯酸       —

C16：0        软脂酸          13.5

C16：0atsn-2  软脂酸的％

C16：1w7      棕榈油酸         0.1

C18：0        硬脂酸           4.8

C18：1w9      油酸            32.3

C18：2w6      亚油酸          15.9

C18：3w3      亚麻酸           1.7

C20：0        花生酸           0.3

C20：2w6                       —

C20：3w6                       —

C20：4w6      花生四烯酸       0.6

C22：0        山嵛酸           0.3

C22：6w3      二十二碳六烯酸   0.4

C24：0

总计                           100

              脂肪酸混合物2

脂肪酸        脂肪酸            ％

C6：0         己酸              0.35

C8：0         辛酸              9.87

C10：0        癸酸            4.63

C12：0        月桂酸          6.4

C14：0        豆蔻酸          2.46

C14：1        肉豆蔻烯酸      0.02

C16：0        软脂酸         13.43

C16：0at sn-2 软脂酸的％      39.0

C16：1w7      棕榈油酸        0.03

C18：0        硬脂酸          2.61

C18：1w9      油酸           39.39

C18：2w6      亚油酸         13.94

C18：3w3      亚麻酸          1.29

C20：0        花生酸          0.01

C20：2w6                      0.01

C20：3w6                      0.02

C20：4w6      花生四烯酸      0.61

C22：0        山嵛酸          0.3

C22：6w3   二十二碳六烯酸     0.38

C24：0                        0.02

总计                          100下面列出了适用于本发明的具体婴儿配方的实施例：

    婴儿配方A

成分         ％

水          84.30

乳糖        1.20

脱脂干乳    2.83

乳清粉      2.83

麦芽糖糊精  4.45

混合脂肪    4.11

维生素      0.02

矿物质       0.25

牛磺酸       0.01

             100

    婴儿配方B

成分          ％

水           57.77

脱脂乳(液状) 29.49

浓缩乳清蛋白 2.76

乳糖         1.16

麦芽糖糊精   4.35

混合脂肪     4.15

维生素       0.03

矿物质       0.28

牛磺酸       0.01

             100.00

现在通过介绍具体实施例阐述本发明。

                    实例

本发明中的方法是通过新生大鼠的低氧诱导肠道损伤模型来验证的。肠道通透性降低往往伴随着内毒素血症的减缓以及肠道磷脂酶-2(PLA₂)基因表达水平的降低。PLA₂表达水平的降低表明炎症级联发生下调。

动物模型。对妊娠21天的大鼠，通过剖腹术从时间确定的怀孕Sprague-Dawley大鼠身上接生幼鼠。采用从口到胃的路线饲喂新生大鼠72小时，每三个小时饲喂制剂0.1ml(S26-LBW制剂，购自WyethNutritionals International，Burlington，VT)，每次最多不超过0.4ml。此外，每天对动物进行两次窒息胁迫，呼吸5秒钟100％氮气，随后置于4℃冷处理10分钟。正如Caplan M.S、Hedlund E.、Adler L和Hsueh W.在Pedatr Pathol[14：1017～1028(1994)]杂志上的文章《窒息及饲喂在坏死性肠结膜炎新生大鼠模型中的作用》中描述的那样，使用该方案3～4天，70～80％的动物其腹部出现坏死。处理组。有两个处理组：前期制剂(制剂A)和加有LCPUFAs的前期制剂(制剂B)。制剂B中加入的LCPUFAs为花生四烯酸以及二十二碳六烯酸。LCPUFAs的加入量为：二十二碳六烯酸20mg/100kcal，花生四烯酸30mg/100kcal。研究的首要内容是检查肠道损坏情况，尸体剖检时需要宏观观察并进行组织病理学研究。通过宏观观察和组织病理学研究来描述肠道损坏、成熟度及完整性的变化情况。第二个研究内容是找出造成肠道损坏、成熟度及完整性变化的机制。需测定以下变量：内毒素血症和PLA₂。

肠道损坏。施行安乐死后，通过宏观观测和组织评价来确定肠道的损坏程度及其成熟度。

内毒素血症。采用商购Biowhittaker(Walkersville，MD.)的鲎变形细胞溶解物试验(LAL)分析法，用分光光度法对血浆内毒素进行评估。

磷脂酶A₂mRNA的表达。对从肠道的匀浆中得到的mRNA进行竞争性PCR，对PLA₂mRNA表达进行定量分析。cRNA系列稀释物加到肠RNA中，采用前面描述过的标准条件进行PCR反应。所得产物在琼脂糖凝胶上电泳后通过磷的成像密度进行定量。

统计。使用耶兹矫正-卡方分析方法对不同组的纵坐标数据比较其差分。选择合适的斯氏t检验或分析法或方差，对连续变量间的差分进行比较。P＜0.05时认为差别显著。

新生大鼠中，与未加LCPUFAs的制剂相比较(见表1)，加有LCPUFAs补充物的制剂减缓了局部缺血性肠道损伤的发生率(局部肠道损伤：对照17/24 vs.LCPUFA8/24，3x2卡方分析P＝0.031)。在48～72小时内动物们产生了典型的肠道损伤症状，包括腹膨胀、前腹壁变色、血便以及呼吸窘迫。

表1处方中补充物对减缓局部肠损伤的影响^*

处方编号    局部肠道损伤    无局部肠道损伤

LD.

A           17              7

B           8               16

^*P＝031

如图1，测定48～72小时内的血浆内毒素结果显示，补充LCPUFA的大鼠(25±4EU/ml)比未补充LCPUFA的大鼠中的血浆内毒素(276±39EU/ml)要低。图2说明，与未补加LCPUFA的大鼠(0.68±0.11个分子/克组织)相比，补充LCPUFA的大鼠中肠道PLA2 mRNA的表达水平(0.41±0.09个分子/克组织)明显降低。此外，在补加LCPUFA的大鼠中，肠道PAF受体mRNA的表达也保持较低水平，分别是1.5±0.3 vs.2.1±0.2(图3)。

结果表明，在建立的新生大鼠局部肠道损伤模型中补充LCPUFA可降低肠道的损伤程度。而且，数据显示补加LCPUFA的良好效果中包括了降低肠道的通透性。与肠道通透性的降低相伴发生的是内毒素血症的减缓，内毒素血症是由于细菌和/或内毒素转运进入到体循环中所致。同时出现的肠道PLA₂ mRNA及PAF受体mRNA表达水平的降低，表明内毒素诱导的炎症反应有所减缓。

在不违反其本质精神或基本属性的基础上，本发明也可以通过别的形式体现出来。因此，应该参考后面附加的权利要求而不是前面的说明书，来表明本发明的范围。

Claims (21)

1.一种维持和增强有此需要的个体肠道完整性修复作用的方法，包括给该个体使用一种制剂，制剂中包括至少一种n-6多不饱和脂肪酸以及与之相组合的至少一种n-3多不饱和脂肪酸。

2.权利要求1的方法，其中，所说的n-6多不饱和脂肪酸指的是花生四烯酸；所说的n-3多不饱和脂肪酸指的是二十二碳六烯酸。

3.权利要求1或2的方法，其中，制剂为婴儿配方。

4.权利要求1～3中的任何一个方法，其中，制剂包括n-6多不饱和脂肪酸4～50mg/100ml以及n-3多不饱和脂肪酸4～50mg/ml。

5.权利要求4的方法，其中，制剂中包括n-6多不饱和脂肪酸8～41mg/100ml以及n-3多不饱和脂肪酸4～41mg/100ml。

6.前面任一权利要求的方法，其中，制剂包括的n-6多不饱和脂肪酸与n-3多不饱和脂肪酸的比例是1∶1～2.5∶1.

7.权利要求6的方法，其中，制剂包括的n-6多不饱和脂肪酸与n-3多不饱和脂肪酸的比例是1∶1～2∶1。

8.用于维持和增强有此需要个体肠道完整性修复作用的制剂，其中包括有效量的至少一种n-6多不饱和脂肪酸以及与之相组合的至少一种n-3多不饱和脂肪酸。

9.权利要求8的制剂，其中，所说的n-6多不饱和脂肪酸指的是花生四烯酸；所说的n-3多不饱和脂肪酸指的是二十二碳六烯酸。

10.权利要求8或9的制剂，其中，制剂为婴儿配方。

11.权利要求8～10中任何一个的制剂，其中，制剂包括n-6多不饱和脂肪酸4～50mg/100ml以及n-3多不饱和脂肪酸4～50mg/100ml。

12.权利要求11的制剂，其中，制剂包括n-6多不饱和脂肪酸8～41mg/100ml以及n-3多不饱和脂肪酸4～41mg/ml。

13.权利要求8～12中任何一个的制剂，其中，制剂包括的n-6多不饱和脂肪酸与n-3多不饱和脂肪酸的比例为1∶1～2.5∶1。

14.权利要求13的制剂，其中，制剂包括的n-6多不饱和脂肪酸与n-3多不饱和脂肪酸的比例为1∶1～2∶1。

15.有效量的至少一种n-6多不饱和脂肪酸以及与之相组合的至少一种n-3多不饱和脂肪酸在用以维持和增强个体肠道完整性的修复作用的药物制备中的用途。

16.权利要求15的用途，其中，n-6多不饱和脂肪酸指的是花生四烯酸；n-3多不饱和脂肪酸指的是二十二碳六烯酸。

17.权利要求15或16的用途，其中，制剂为婴儿配方。

18.权利要求中15～17中的任何一个的用途，其中，制剂中包括n-6多不饱和脂肪酸4～50mg/100ml以及n-3多不饱和脂肪酸4～50mg/ml。

19.权利要求18的用途，其中，制剂中包括n-6多不饱和脂肪酸8～41mg/100ml以及n-3多不饱和脂肪酸4～41mg/100ml。

20.权利要求19的用途，其中，制剂中包括的n-6多不饱和脂肪酸与n-3多不饱和脂肪酸的比例为1∶1～2.5∶1。

21.权利要求20的用途，其中，制剂中包括的n-6多不饱和脂肪酸与n-3多不饱和脂肪酸的比例为1∶1～2∶1。

Images