CN1330076A

CN1330076A - 内皮素拮抗剂

Info

Publication number: CN1330076A
Application number: CN 00118667
Authority: CN
Inventors: 刘克良; 于文胜; 梁远军; 汪海; 赵玉芬; 丁振闿
Original assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Current assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Priority date: 2000-06-21
Filing date: 2000-06-21
Publication date: 2002-01-09
Anticipated expiration: 2020-06-21
Also published as: CN1155612C

Abstract

本发明涉及具有内皮素拮抗活性的六肽衍生物,其特备方法,含它们的药物组合物及它们在预防或治疗与内皮素有关疾病的用途。

Description

内皮素拮抗剂

本发明涉及具有内皮素拮抗活性的六肽衍生物，其特备方法，含它们的药物组合物及它们在预防或治疗与内皮素有关疾病的用途。

内皮素是重要的缩血管因子。人类或其它哺乳动物基因组存在三种分别编码内皮素的基因，形成的大内皮素在内皮素转换酶作用下，转变为ET_l，ET₂，ET₃。它们均为二十一肽，含有两个二硫桥键。ET₁不但表达于非血管细胞，而且是唯一存在于血管内皮细胞的内皮素。ET₂和ET₃主要在脑、肾和肾上腺及小肠中表达。ET与靶细胞中的特异受体结合，最终产生相应的生物学效应。迄今已发现三类ET受体，即ET_A，ET_B，和ET_C。ET_A主要分布于主动脉，心房，胎盘，肺、脑血的及肾脏血管平滑肌中；BT_B存在于中枢神经系统中的神经胶质细胞，脉落丛上皮细胞，肺、胎血、肾小球内皮，心室，脑中等，在血管平滑肌也有分布，ET_C则分布于内皮细胞中。三种受体对各型ET的亲和力不同。内皮素及受体在人体内具有广泛的生理病理学反应。参与了高血压，充血性心衰，心肌缺血，脑窒息，休克，急性肾衰，肺原性高血压，血管痉挛性疾病等过程。因此，内皮素拮抗剂有助于预防/治疗心血管疾病。

本发明的目的是寻找新的内皮素拮抗剂。

本发明人经研究现已发现式I的六肽衍生物

N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I或其立体异构体具有良好的内皮素拮抗活性，因此式I六肽衍生物或其立体异构体可作为药物用于预防或治疗与内皮素有关的心血管疾病。本发明第一方面涉及式I六肽衍生物或其立体异构体，

N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I

其中A为D-Phe，且其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被选自卤素，硝基，羧基或C_1-4烷基单取代或二取代，

或N-Ac-A为下式代表的基团：

本发明还涉及含至少一种式I六肽衍生物或其立体异物体，

N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I

或N-Ac-A为下式代表的基团：及药用载体或赋形剂的药物组合物。

本发明还涉及制备式I六肽衍生物或其立体异物体的方法，其包括

1)将Wang树脂与Fmoc-Trp-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt及DMAP中反应，其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，生成Fmoc-Trp-Wang树脂，

2)将1)中所得产物在哌啶，DMF，DCM中反应，生成Trp-Wang树脂，

3)将2)中产物Trp-Wang树脂与Fmoc-Ile-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt中反应，生成Fmoc-Ile-Trp-Wang树脂，所得产物如2)中所述进行反应，生成式Ile-Trp-Wang树脂，

4)将3)中产物与Fmoc-Ile-OH先按3)中所述反应，再按2)中所述反应，生成Ile-Ile-Trp-Wang树脂，

5)将4)中产物与Fmoc-Asp-OH先按3)中所述反应，再按2)中所述反应，生成Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂，

6)将5)中产物与Fmoc-Leu-OH先按3)中所述反应，再按2)中所述反应，生成Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂，

7)将6)中产物与N-Ac-A-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt中反应，生成N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂，所得产物再于TFA， EDT，苯酚和水中处理，得N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH，其中A如上定义。

本发明还涉及式I六肽衍生物或其立体异构体在制备预防或治疗与内皮素有关疾病或症状的药物中用途。

根据本发明、术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

术语“C_1-4烷基”指含1-4个碳原子的直链或支链烷基。

在本发明中使用的缩写具有下面含义：

DMAP-4-N，N-二甲胺基吡啶，

Ile-异亮氨酸，

Asp-天冬氨酸，

Pro-脯氨酸，

Leu-亮氨酸，

Ala-丙氨酸，

Phe-苯丙氨酸，

Trp-色氨酸，

Pya-β-吡啶基丙氨酸，

GABA-γ-氨基丁酸，

DMF-二甲基甲酰胺，

DCM-二氯甲烷，

NMM-N-甲基-吗啉，

DIC-HOBt-二异丙基碳二亚胺-1-羟基苯并三唑，

Fmoc-9-芴甲氧羰基，

TFA-三氟乙酸，

EDT-乙二硫醇，

HIM-六亚甲基亚胺基。

本发明所用术语：“式I六肽衍生物立体异构体”是指其相应的D-或L-立体构型。

具体讲，本发明涉及式I六肽衍生物或其立体异构体，

N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I

或N-Ac-A为下式代表的基团：

本发明还涉及药物组合物，其包括至少一种式I六肽衍生物或其立体异构体

N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I

或N-Ac-A为下式代表的基团：

及药用载体或赋形剂。

根据本发明，式I六肽衍生物或其立体异构体可选自下面的六肽：

N-Ac-D-Phe(2-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(2-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Br)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-NO₂)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Cl-4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(2，5-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl-2-CH₃)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。

根据本发明，式I六肽衍生物或其立体异构体进一步优选下面的六肽

N-Ac-D-Phe(2-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Br)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-NO₂)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(2，5-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。

根据本发明，本发明的式I六肽衍生物或其立体异构体可按本领域已知方法、文献方法或下面所示的反应路线1制备：

反应路线1

在反应路线1中，Wang树脂与Fmoc-Trp-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt及DMAP中反应，生成Fmoc-Trp-Wang树脂，将所得Fmoc-Trp-Wang树脂在哌啶，DMF及DCM中处理得Trp-Wang树脂。将Trp-Wang树脂与Fmoc-IIe-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt中反应，生成Fmoc-Ile-Trp-Wang树脂，所得Fmoc-Ile-Trp-Wang树脂在哌啶，DMF及DCM中处理，生成Ile-Trp-Wang树脂。接着Ile-Trp-Wang树与Fmoc-Ile-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt中反应，生成Fmoc-Ile-Ile-Trp-Wangs树脂，该产物然后在哌啶，DMF，DCM中处理，生成Ile-Ile-Trp-Wangs树脂。将Ile-Ile-Trp-Wangs树脂接着与Fmoc-Asp-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt中反应，生成Fmoc-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂，该产物随后在哌啶，DMF及DCM中处理，生成Asp-Ile-IIe-Trp-Wang树脂。将Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂与Fmoc-Leu-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt中反应，生成Fmoc-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂，该产物然后在哌啶，DMF及DCM中处理，生成Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂。将Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂与N-Ac-A-OH在DMF，DCM及DCC-HOBt中反应，生成N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂，该产物随后在TFA，EDT，苯酚及水中处理，生成N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。

根据本发明，式I六肽衍生物的立体异构体包括D-和/或L-构型。

根据本发明，式(I)六肽衍生物及其立体异构体在动物抗Et₁受体模型中显示出优良效果，因此可作为心血管药用于动物，优选用于哺乳动物，特别是人。

本发明因此还涉及含有作为活性成份的有效剂量的至少一种式(I)六肽衍生物和/或其立体异构体以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-90重量％的式(I)化合物和/或其立体异构体。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将式(I)化合物和/或立体异构体与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明的式(I)六肽衍生物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分式(I)六肽衍生物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分式(I)六肽衍生物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

本发明式(I)六肽衍生物或其立体异构体的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。

下面的实施例及生物活性实验用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。制备例1 D，L-N-3-硝基-苯丙氨酸及其衍生物的合成1.1 D，L-3-硝基-苯丙氨酸(1aa)3-硝基-苯胺100克(0.725mol)悬浮于500毫升水和500毫升浓盐酸中，维持内温不高于零下5℃，搅拌条件下滴加亚硝酸钠59.0克(0.908mol)/150毫升水溶液，亚硝酸钠加毕，反应液澄清，继续搅拌20分钟。加入2.0克脲，再搅拌10分钟，随后加入48.0克醋酸钠，反应液为黄色透明溶液。另外，预先将110毫升丙烯酸、300毫升丙酮与26.0克水合氯化铜/80毫升水溶液混合，室温下将此溶液加入上述重氮盐溶液中，逐渐升温(25～100℃/0.5小时)，60～70℃产生大量气泡，颜色逐渐加深为棕色，产气完毕，停止加热。冷却后分层，分出有机相，水相用三氯甲烷提取(2×150毫升)，合并有机相，用水洗(3×150毫升)，浓缩有机相得到红棕色油状物。浓缩物用氨水溶成500毫升，放热，用水稀释为5000毫升澄清溶液，冷却条件下充入足量的氨气，溶液置于10升高压釜中，60℃、70℃、80℃各反应一天，90℃反应两天。冷却后开启高压釜，取出反应液，减压浓缩至400毫升，加入500毫升工业酒精，冰箱中冷却，析出白色固体，抽滤，固体干燥，约100克。1.2 D，L-3-硝基-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(1bb)将600毫升无水乙醇冰盐浴冷却至零下10℃，搅拌条件下缓慢滴入180毫升二氯亚砜，维持内温零下5℃以下，20分钟后加入(1aa)粗品100克，室温下搅拌两天，再回流两小时，趁热滤除不溶物(无机盐)约25克，溶液减压蒸干，有白色固体析出，加入无水乙醇反复浓缩二次，得(1bb)52.0克(收率26.1％，按3-硝基苯胺计)，m.p.184～186℃。FAB-MS m/z 239(M＋1－HCl)。1.3 D，L-N-乙酰-3-硝基苯丙氨酸乙酯(1cc)将(1bb)40.0克(0.146mol)加入150毫升干燥的三氯甲烷中，搅拌溶解，加入45.0毫升(0.323mol)三乙胺，析出白色固体(三乙胺盐酸盐)，室温下滴加30毫升(0.322mol)醋酐，反应放热，滴加完醋酐后继续搅拌1小时。减压浓缩，加入50毫升水，减压浓缩除去醋酸，加入100毫升水，冷却，油状物固化，滤集固体，干燥，用乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)重结晶，得到絮状晶体，滤集干燥得(1cc)40.2克(98.5％)，m.p.86～87℃TLC Rf＝0.68(A，乙酸乙酯：石油醚/80：20，254nm显色)；¹HNMR(CDCl₃)：δ1.27(t，J＝7.08Hz，-OCH₂CH₃)，2.01(s，3H，-COCH₃)，3.21(m，2H，β-H)，4.20(q，J＝7.08Hz，2H，-OCH₂CH₃)，4.88(m，1H，α-H)，6.06(s，1H，α-NH)，7.46-8.13(m，4H，Ar-H)。IR 3260(NH)，2976(CH)，1738(C＝0，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH₃)，1560，1523(CH，苯环)，809，738，689(苯环间位硝基取代)。

元素分析 C H N(％)

C₁₃H₁₆N₂O₃ 理论值：55.71 5.75 9.99

280.28 测试值：55.68 5.67 9.52制备例2 2-氟-苯丙氨酸及其衍生物的合成2.1 D，L-2-氟-苯丙氨酸(2aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2-氟-苯胺25毫升(0.256mol)。用高压釜氨解时，55℃七天，减压浓缩至约100毫升，用浓盐酸酸化至pH4～5，析出固体，冰箱放置过夜，滤集固体，干燥得(2aa)粗品约17克。2.2 D，L-2-氟-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(2bb)方法同(1bb)。投入(2aa)粗品17.0克。浓缩反应液后，加入10毫升无水乙醇和50毫升乙醚，0℃以下放置一周，析出无色针状结晶，滤集晶体，得(2bb)16.0克(24.7％，以2-氟苯胺计)，m.p.112～115℃。FAB-MS m/z 212(M＋1-HCl)。2.3 D，L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯(2cc)方法同(1cc)。投入(2bb)16.0克(0.065mol)。浓缩后，加入乙酸乙酯100毫升，依次用水、1M盐酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠溶液洗涤，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥过夜，过滤，浓缩，加入乙醚-石油醚冷却析出无色晶体。滤集，得(2cc)13.0克(79.0％)，m.p.58～61℃。TLC R_f＝0.63(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ 1.22(t，J＝7.12Hz，-OCH₂CH₃)，1.96(s，3H，-COCH₃)，3.14(m，2H，β-H)，4.15(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.82(m，1H，α-H)，5.98(s，1H，α-NH)，6.98-7.22(m，4H，Ar-H)。IR 3334(NH)，2964(CH)，1726(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH₃)，1553，1498(CH，苯环)，753(苯环邻氟取代)。

元素分析 C H N(％)

C₁₃H₁₆NFO₃ 理论值：61.65 6.37 5.53

测试值：61.65 6.44 5.75制备例3 3-氟-苯丙氨酸及其衍生物的合成3.1 D，L-3-氟-苯丙氨酸(3aa)方法及投量比同(1aa)的合成。3-氟-苯胺25毫升(0.256mol)。用高压釜氨解时，50℃八天，减压浓缩至约100毫升，用浓盐酸酸化至pH4～5，析出固体，冰箱放置过夜，滤集固体，干燥得(3aa)粗品约25克。FAB-MS m/z 184(M＋1)。3.2 D，L-3-氟-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(3bb)方法同(1bb)。投入(3aa)粗品24.0克。浓缩反应液后，加入10毫升无水乙醇和50毫升乙醚，0℃以下放置，析出无色针状结晶，滤集晶体，得(3bb)20.0克(31.4％，以3-氟苯胺计)，m.p.119～121℃。3.3 D，L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯(3cc)方法同(1cc)。投入(3bb)20.0克(0.080mol)。浓缩后，加入乙酸乙酯100毫升，依次用水、1M盐酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠溶液洗涤，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥过夜，过滤，浓缩，加入乙醚-石油醚冷却析出无色晶体。滤集，得(3cc)16.0克(78.9％)，m.p.75～77℃。TLC R_f＝0.60(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.25(t，J＝7.32Hz，-OCH₂CH₃)，2.00(s，3H，-COCH₃)，3.12(m，2H，β-H)，4.18(q，J＝7.32Hz，2H，-OCH₂CH₃)，4.85(m，1H，α-H)，6.00(s，1H，α-NH)，6.80-7.27(m，4H，Ar-H)。IR3334(NH)，2989，2939(CH)，1732(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH₃)，1529(CH，苯环)，776，701(苯环间氟取代)。

元素分析 C H N(％)

C₁₃H₁₆NFO₃ 理论值：61.65 6.37 5.53

253.27 测试值：61.70 6.26 5.37制备例4 4-氟-苯丙氨酸及其衍生物的合成4.1 D，L-4-氟-苯丙氨酸(4aa)方法及投量比同(1aa)的合成。4-氟-苯胺100毫升(1.04mol)。室温下氨解7个月，减压浓缩至约300毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，冰箱放置过夜，滤集固体，干燥得(4aa)粗品约150克。4.2 D，L-4-氟-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(4bb)方法同(3bb)。投入(4aa)粗品150.0克。得(4bb)81.0克(31.5％，以4-氟苯胺计)，m.p.130～132℃。FAB-MS m/z 212(M＋1-HCl)。4.3 D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯(4cc)方法同(3cc)。投入(4bb)40.0克(0.162mol)。得(4cc)39.0克(95.0％)，m.p.71～73℃。TLCR_f＝0.68(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ 1.25(t，J＝7.02Hz，-OCH₂CH₃)，2.00(s，3H，-COCH₃)，3.10(m，2H，β-H)，4.17(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.84(m，1H，α-H)，6.01(s，1H，α-NH)，6.95-7.09(m，4H，Ar-H)。IR 3309(NH)，3087，2989(CH)，1756(C＝O，COOEt)，1658(C＝O，NHCOCH₃)，1553，(CH，苯环)，830，800，707(苯环对氟取代)。

元素分析 C H N(％)

C₁₃H₁₆NFO₃ 理论值：61.65 6.37 5.53

测试值：61.56 6.30 5.25制备例5 2-氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成5.1 D，L-2-氯-苯丙氨酸(5aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2-氯-苯胺51.5克(0.40mol)。室温下氨解5个月。减压浓缩至约300毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体。得19.8克。浓缩滤液，冰箱中放置过夜，得白色固体，干燥后重28.0克。合并共重47.8克。5.2 D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸(5bb)(5aa)15.6克(0.078mol)溶于2mol/L NaOH 156ml，保持零下5℃，滴加醋酐15毫升，10分钟后，加入23毫升浓盐酸，pH约为3，冰箱中放置过夜，得白色固体，干燥后重14.0克。收率74％。熔点158～160℃5.3 D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯(5cc)方法同(1bb)。(5bb)13.3克，无水乙醇170毫升，二氯亚砜8.5毫升。室温下反应4小时，减压浓缩，残液倒入500毫升水中，冰箱中放置过夜，过滤干燥得12.0克(81％)。熔点63～65℃。TLC R_f＝0.61(A)¹HNMR(CDCl₃)：δ1.25(t，J＝7.12Hz，-OCH₂CH₃)，2.00(s，3H，-COCH₃)，3.20～3.36(m，2H，β-H)，4.14～4.24(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.94(m，1H，α-H)，6.04(s，1H，α-NH)，7.22～7.40(m，4H，Ar-H)。FAB-MS m/z 270.2(M)IR3334(NH)，3063，2976(CH)，1726(C＝O，COOEt)，1640(C＝O，NHCOCH₃)，1547(CH，苯环)，750(苯环邻氯取代)。

元素分析 C H N(％)

C₁₃H₁₆NClO₃ 理论值 57.89 5.98 5.19

MW.269.71 测试值：58.30 5.94 4.80制备例6 3-氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成6.1 D，L-3-氯-苯丙氨酸(6aa)方法及投量比同(1aa)的合成。间氯苯胺96.0克(0.784mol)。高压釜中(60℃)氨解十天。浓缩过滤，得粗品87克，经乙醚洗得干燥品66克。6.2 D，L-3-氯-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(6bb)，方法同(1bb)。粗品(6a)66克(0.33mol)。无水乙醇400毫升，二氯亚砜110毫升。浓缩，用乙醚研出固体，过滤，乙醚洗涤固体，得白色固体63.0克，熔点：138.5～140.5℃。按3-氯苯胺计，全程收率3L 7％FAB-MS m/z 228.0(M＋1，-HCl)6.3 D，L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯(6cc)方法同(1cc)。投入(6b)40.0克(0.162mol)。得(6cc)40.0克(98.0％)，m.p.88～90℃。TLC/Rf＝0.69(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.24(t，J＝7.25Hz，-OCH₂CH₃)，1.99(s，3H，-COCH₃)，3.08(m，2H，β-H)，4.16(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.84(m，1H，α-H)，6.06(s，1H，α-NH)，6.98～7.26(m，4H，Ar-H)。IR 3334(NH)，2989(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH₃)，1547(CH，苯环)，880，787，692(苯环间氯取代)。

元素分析 C H N(％)

C₁₃H₁₆NClO₃ 理论值：57.89 5.98 5.19

MW.269.71 测试值：57.86 5.93 5.08制备例7 4-溴-苯丙氨酸及其衍生物的合成7.1 D，L-4-溴-苯丙氨酸(7aa)方法及投量比同(1aa)的合成。对溴苯胺100.0克(0.58mol)。室温氨解半年。浓缩过滤，得粗品81克。水不溶。FAB-MS m/z 245.2(M＋1，)7.2 D，L-4-溴-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(7bb)，方法同(1bb)。粗品(7aa)80克(0.33mo1)。无水乙醇400毫升，二氯亚砜150毫升。浓缩，用乙醚研出固体，过滤，乙醚洗涤固体，得白色固体61.0克，熔点：166～168℃。按对溴苯胺计，全程收率34.0％。7.3 D，L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯(7cc)方法同(1cc)。投入(7bb)40.0克(0.143mol)。得(7cc)42.0克(94.0％)，熔点90～92℃。TLC/R_f＝0.57(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.23(t，J＝7.14Hz，-OCH₂CH₃)，1.97(s，3H，-COCH₃)，3.04(m，2H，β-H)，4.14(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.82(m，1H，α-H)，5.90(s，1H，α-NH)，5.94～7.39(m，4H，Ar-H)。IR 3334(NH)，3001(CH)，1744(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH₃)，1535(CH，苯环)，815(苯环对溴取代)。

元素分析 C H N(％)

C₁₃H₁₆NBrO₃ 理论值：49.70 5.13 4.46

MW.314.11 测试值：49.77 4.99 4.16制备例8 4-氟-3-氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成8.1 D，L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸(8aa)方法及投量比同(1aa)的合成。4-氟，3-氯-苯胺145克(1.00mol)。室温下氨解10个月，减压浓缩至约500毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，冰箱放置过夜，滤集固体，干燥得(8aa)粗品约196.0克。FAB-MS m/z 218(M)，220(M＋2)。8.2 D，L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(8bb)方法同(1bb)。投入(8a)粗品196.0克。得(8bb)126.0克(44.6％，以4-氟，3-氯-苯胺计)，熔点：136～138℃。8.3 D，L-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯(8cc)方法同(1cc)。投入(8bb)41.0克(0.145mol)。得(8cc)39.6克(94.7％)，熔点：106～107℃。TLC/R_f＝0.54(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.26(t，J＝7.02Hz，-OCH₂CH₃)，2.02(s，3H，-COCH₃)，3.10(m，2H，β-H)，4.19(q，J＝7.02Hz，2H，-OCH₂CH₃)，4.80(q，1H，α-H)，6.01(s，1H，α-NH)，6.96-7.16(m，3H，Ar-H)。IR 3297(NH)，3001(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH₃)，1553，(CH，苯环)，886，827，695(苯环对氟间氯取代)。

元素分析 C H N(％)

C₁₃H₁₅NFClO₃ 理论值：54.27 5.25 4.87

测试值：54.11 5.15 4.86制备例9 2，4-二氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成9.1 D，L-2，4-二氯-苯丙氨酸(9aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2，4-二氯-苯胺80克(0.50mol)。室温下氨解10个月，减压浓缩至约500毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，滤集固体，干燥得(9aa)粗品约103.0克。9.2 D，L-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(9bb)，方法同(1bb)。投入(9aa)粗品100克。得(9bb)59.0克(32.1％，2，4-二氯-苯胺计)，熔点：180～182℃。FAB-MS m/z 262.0(M)，264(M＋2)。9.3 D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯(9cc)方法同(1cc)。投入(9bb)54.4克(O.182mol)。得(9cc)53.0克(96.0％)，熔点：109～111℃。TLC/R_f＝0.66(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.21(t，J＝7.18Hz，-OCH₂CH₃)，1.92(s，3H，-COCH₃)，3.19(m，2H，β-H)，4.13(q，J＝7.02Hz，2H，-OCH₂CH₃)，4.85(q，1H，α-H)，5.97(s，1H，α-NH)，7.11～7.36(m，3H，Ar-H)。IR 3322(NH)，2989(CH)，1726(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH₃)，1553，(CH，苯环)，867,849,818(苯环对氯邻氯取代)。

元素分析 C H N(％)

C₁₃H₁₅NCl₂O₃ 理论值：51.33 4.97 4.60

测试值：51.38 4.92 4.34制备例10 2，5-二氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成10.1 D，L-2，5-二氯-苯丙氨酸(10aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2，5-二氯-苯胺80克(0.50mol)。500毫升氨水(25％)，2000毫升乙醇，100毫升吡啶，0℃充氨，50℃氨解10天，减压浓缩至干。1000毫升水充分溶解，滤除不溶物，滤液减压浓缩至约300毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，滤集固体，干燥得(10aa)粗品约25克。10.2 D，L-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(10bb)，方法同(1bb)。投入(10aa)粗品25克。得(10bb)16克(8.7％，2，5-二氯-苯胺计)，熔点：184～188℃。(软化，变黑)FAB-MS m/z 262.0(M)，264(M＋2)。10.3 D，L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯(10cc)方法同(1c)。投入(10bb)20.7克(0.069mol)。得(10cc)19.20克(91.0％)，熔点：116～118℃。TLC/R_f＝0.63(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.23(t，J＝7.15Hz，-OCH₂CH₃)，1.98(s，3H，-COCH₃)，3.22(m，2H，β-H)，4.14(q，J＝7.08Hz，2H，-OCH₂CH₃)，4.87(q，1H，α-H)，6.01(s，1H，α-NH)，7.14～7.36(m，3H，Ar-H)。IR 3297(NH)，3075，2989(CH)，1744(C＝O，COOEt)，1658(C＝O，NHCOCH₃)，1541(CH，苯环)，815，713(苯环2，5-二氯取代)。元素分析 C H N(％)C₁₃H₁₅NCl₂O₃ 理论值：51.33 4.97 4.60

测试值：51.43 4.98 4.39制备例11 3，4-二氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成11.1 D，L-3，4-二氯-苯丙氨酸(11aa)方法及投量比同(1aa)的合成。3，4-二氯-苯胺250克(1.56mol)。50℃氨解7天，减压浓缩至约1000毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，滤集固体，干燥得(11aa)粗品约287.0克。11.2 D，L-3，4-二氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(11bb)，方法同(1bb)。投入(11aa)粗品287克。得(11bb)159.0克(36.2％，3，4-二氯-苯胺计)，熔点：127～130℃。FAB-MS m/z 249.0(M)，251(M＋2)。11.3 D，L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸甲酯(11cc)方法同(1c)。投入(11bb)11.0克(0.039mol)。得(11cc)8.0克(71.3％)，熔点：101～103℃。TLC/R_f＝0.62(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.20(t，J＝7.12Hz，-OCH₂CH₃)，2.09(s，3H，-COCH₃)，3.15(m，2H，β-H)，4.13(q，J＝7.11Hz，2H，-OCH₂CH₃)，4.85(q，1H，α-H)，5.97(s，1H，α-NH)，7.05～7.36(m，3H，Ar-H)。IR 3322(NH)，3075，2964(CH)，1732(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH₃)，1547(CH，苯环)，898，830(苯环对氯间氯取代)。制备例12 2-氯，4-溴-苯丙氨酸及其衍生物的合成12.1 2-氯，4-溴-苯丙氨酸(12aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2-氯，4-溴-苯胺10克(0.048mol)。室温氨解5个月，减压浓缩至约100毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，滤集固体，干燥得(12aa)粗品约5.6克。12.2 D，L-2-氯，4-溴-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(12bb)，方法同(1bb)。投入(11aa)粗品5.6克。得(12bb)5.1克(30.7％，2-氯，4-溴-苯胺计)，熔点：172～174℃。FAB-MS m/z 308.0(M＋1)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.20(t，J＝7.02Hz，-OCH₂CH₃)，3.28～3.34，3.42～3.48(m，2H，β-H)，4.21～4.26，(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.45(m，2H，α-NH₂)，7.25～7.74(m，3H，Ar-H)。IR 3445(NH₂.HCl)，2939(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1590(CH，苯环)，855，821(苯环对溴邻氯取代)。元素分析 C H N(％)C₁₁H₁₄NBrCl₂O₂ 理论值：38.51 4.11 4.08MW.343.05 测试值：38.56 4.18 4.02制备例13 3-氯，2-甲基-苯丙氨酸及其衍生物的合成13.1 3-氯，2-甲基-苯丙氨酸(13aa)方法及投量比同(1aa)的合成。3-氯，2-甲基-苯胺142克(1.0mol)。室温氨解5个月，减压浓缩至约100毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，滤集固体，干燥得(13aa)粗品约105.6克。13.2 D，L-3-氯，2-甲基-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(13bb)，方法同(1b)。投入(13aa)粗品105.6克。得(13bb)74.0克(26.7％，3-氯，2-甲基-苯胺计)，熔点：142～4℃。FAB-MS m/z 242.2(M-HCl)。13.3 D，L-N-乙酰-3-氯，2-甲基-苯丙氨酸乙酯(13cc)方法同(1cc)。投入(13bb)19.0克(69mmol)。得(13cc)19.0克(98.1％)，熔点：106～107℃。TLC/R_f＝0.73(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.16(t，J＝7.32Hz，-OCH₂CH₃)，1.96(s，3H，-COCH₃)，3.01(m，2H，β-H)，4.12(q，J＝7.11Hz，2H，-OCH₂CH₃)，4.82(q，1H，α-H)，6.08(s，1H，α-NH)，7.01～7.27(m，3H，Ar-H)。IR 3284(NH)，3075，2976，2939(CH)，1756(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH₃)，1560，1498(CH，苯环)，796，707(苯环2-甲基，3-氯取代)。元素分析 C H N(％)C₁₄H₁₈NClO₃ 理论值：59.26 6.39 4.94

测试值：59.47 6.42 4.72制备例14 4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸及其衍生物的合成14.1 4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸(14aa)方法及投量比同(1aa)的合成。4-硝基，2-甲基-苯胺50克(0.33mol)。室温氨解5个月，减压浓缩至约l00毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，滤集固体，干燥得(14aa)粗品约32.6克。14.2 D，L-4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(14bb)，方法同(1bb)。投入(14aa)粗品32.6克。得(14b)26.0克(27.4％，4-硝基，2-甲基-苯胺)，熔点：172～5℃。FAB-MS m/z 253.0(M＋1-HCl)。14.3 D，L-N-乙酰-4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸乙酯(14cc)方法同(1cc)。投入(14bb)19.0克(66mmol)。得(14cc)12.5克(64.6％)，熔点：114～6℃。TLC/R_f＝0.64(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.22(t，J＝7.02Hz，-OCH₂CH₃)，2.00(s，3H，-COCH₃)，3.22(m，2H，β-H)，4.19(q，J＝7.02Hz，2H，-OCH₂CH₃)，4.88(q，1H，α-H)，6.14(s，1H，α-NH)，7.27～8.03(m，3H，Ar-H)。IR 3334(NH)，2989(CH)，1732(C＝O，COOEt)，1640(C＝O，NHCOCH₃)，1517(CH，苯环)，913，843，800，744(苯环邻甲基对硝基取代)。元素分析 C H N(％)C₁₄H₁₈N₂O₅ 理论值：57.14 6.16 9.52

测试值：56.99 6.19 9.48制备例15 4-羧基-苯丙氨酸及其衍生物的合成15.1 D，L-4-羧基-苯丙氨酸(15aa)将68.0克(0.5mol)4-羧基-苯胺与40.0克(0.29mol)碳酸钾/200毫升水混合溶解，搅拌加入35克(0.507mol)亚硝酸钠，形成红色溶液。500毫升浓盐酸/200毫升水搅拌冷却至-5℃，滴加入上述红色溶液，控制反应温度-5℃以下。20分钟后加入0.5克脲，搅拌20分钟，再加入30.0克醋酸钠，溶解，得到亮黄色的重氮盐。将预先配好的75毫升丙烯酸、100毫升丙酮与18克水合氯化铜/50毫升水溶液的混合液，加入至上述重氮盐中，逐渐升温，50～80℃产气，产气结束后冷却，形成大量略带粉红色的沉淀，滤集固体，用2000氨水，密封，室温放置9个月，滤去不溶物，滤液减压浓缩，酸化至pH4，析出沉淀，滤集固体，干燥得(15aa)粗品84.8克。15.2 D，L-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯盐酸盐(15bb)方法同(3bb)。投入(15aa)粗品84.8克。得(15bb)白色晶体60.0克(40.1％，以4-羧基-苯胺计)，m.p.137～139℃。FAB-MS m/z 266(M＋1-HCl)。15.3 D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯(15cc)方法同(3cc)。投入(15bb)40.0克(0.133mol)。得(15cc)34.0克(83.5％)，m.p.89.5～90.5℃。TLC R_f＝0.56(A)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.25(t，J＝7.02Hz，-OCH₂CH₃)，1.38(t，J＝7.02Hz，3H，Ar-CO₂CH₂CH₃)，2.00(s，3H，-COCH₃)，3.18(m，2H，β-H)，4.17(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.36(q，J＝7.02Hz，2H，Ar-CO₂CH₂CH₃)，4.88(m，1H，α-H)，5.99(d，1H，α-NH)，7.1-7.98(m，4H，Ar-H)。IR 3247(NH)，3075，2989(CH)，1738，1707(C＝O，COOEt)1646(C＝O，NHCOCH₃)，855，766(苯环对羧基乙酯取代)。元素分析 C H N(％)C₁₆H₂₁NO₅ 理论值：62.53 6.89 4.56307.34 测试值：62.56 6.85 4.46制备例16 3-羧基-苯丙氨酸及其衍生物的合成16.1 D，L-3-羧基-苯丙氨酸(16aa)3-氨基-苯甲酸100克(0.73mol)70～80℃氨解4天。减压浓缩至约100毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，滤集固体，干燥得(16aa)粗品约92.6克。16.2 D，L-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯盐酸盐(16bb)方法同(3bb)。投入(16aa)粗品92.6克。得(16bb)白色晶体65.0克(29.5％，以3-羧基-苯胺计)，m.p.165～7℃。FAB-MS m/z 266.1(M＋1-HCl)。¹HNMR(CDCl₃)：δ1.29(t，J＝7.12Hz，-OCH₂CH₃)，1.42(t，J＝7.08Hz，3H，Ar-CO₂CH₂CH₃)，3.25(m，2H，β-H)，4.19(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.39(q，J＝7.02Hz，2H，Ar-CO₂CH₂CH₃)，5.02(m，1H，α-H)，6.09(d，1H，α-NH)，7.21-8.08(m，4H，Ar-H)。元素分析 C H N(％)C₁₄H₂₀NClO₄ 理论值：55.72 6.68 4.64301.77 测试值：55.78 6.62 4.6216.3 D.L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯(16cc)方法同(3cc)。投入(16bb)54.0克(0.18mol)。得(16cc)54.5克(99.1％)，红色油状物，待拆分用。制备例17 2-羧基-苯丙氨酸及其衍生物的合成17.1 D，L-2-羧基-苯丙氨酸(17aa)2-氨基-苯甲酸100克(0.73mol)50℃氨解4天。减压浓缩至约100毫升，用浓盐酸酸化至pH3，析出固体，滤集固体，干燥得(17aa)粗品约88.6克。17.2 1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯(17bb)。方法同(3bb)。投入(17aa)粗88.6克。得(17bb)白色晶体74.0克(46.3％，以2-羧基-苯胺计)，m.p.87～9℃。FAB-MS m/z 221.0(M+2)。¹HNMR(CDCl₃)：5 1.15(t，J＝7.01Hz，-OCH₂CH₃)，3.24～3.45(m，2H，β-H)，4.15(m，J＝7.08Hz，2H，-OCH₂CH₃)，5.13(m，J＝5.49Hz，1H，α-H)，7.22-8.08(m，4H，Ar-H)。IR 3445(NH)，2989(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1726(C＝O，-NHCO-)，1553，1498(CH，苯环)，757(苯环邻羰基取代)。元素分析 C H N(％)C₁₂H₁₃NO₃ 理论值：65.74 5.98 6.39219.24 测试值：65.78 6.02 6.35制备例18 D，L-N-酰-3-硝基-苯丙氨酸乙酯的拆分18.1 D-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸乙酯(1AA)。D，L-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸乙酯16.3克(58mmol)研成粉末，悬浮于200毫升0.1M KH₂PO₄和K₂HPO₄溶液中，水浴恒温至37℃，用1M NaOH溶液调pH7.4，加入20.0毫克α-糜蛋白酶，缓慢搅拌，pH缓慢下降，用2M KOH溶液维持pH7.4，搅拌至pH稳定，继续搅拌2小时。反应液用乙酸乙酯提取(3×100毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗一次，无水硫酸钠干燥后浓缩至30毫升，加入石油醚，析出淡黄色针状结晶，滤集，得(1AA)7.8克(95.7％)，m.p.109～110℃，[α]²⁷ _D＝-9.90°(c＝1.02，无水甲醇)。18.2 L-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸(1BB)上述拆分萃取后的水相中用浓盐酸调至pH2～3，用乙酸乙酯提取(3×100毫升)，合并有机相，以饱和氯化钠溶液洗一次，无水硫酸钠干燥后，40℃以下减压浓缩，得到(1B)淡黄色固体6.8克(92.7％)，m.p.167～169℃，[α]²⁷ _D＝+31.09°(c＝1.01，无水甲醇)。18.3 D-3-硝基-苯丙氨酸盐酸盐(1CC)(1AA)5.00克(18mmol)，在100毫升6M盐酸中回流6小时，减压蒸干，加无水乙醇浓缩一次，加入50毫升乙酸乙酯滤集固体，得(1CC)淡黄色针晶4.38克(99.8％)，m.p.241～243℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-9.4°(c＝1.05，无水甲醇)。18.4 L-3-硝基-苯丙氨酸盐酸盐(1DD)(1BB)5.00克(20mmol)，同上法处理。得(1DD)白色细针状晶体4.65克(95.1％)，m.p.229～232℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+8.0°(c＝1.01，无水甲醇)。18.5 D-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸(1EE)(1AA)1.00克(3.64mmol)，加入10毫升甲醇溶解，冷却搅拌条件下加入3毫升2M氢氧化钾溶液，20分钟后，加入1M盐酸调至pH8.0，40℃以下减压蒸干，加入15毫升水溶解，用1M盐酸酸化至pH2～3，乙酸乙酯提取(3×20毫升)，合并有机相，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩得淡黄色固体(1EE)0.88克(98.0％)，m.p.162～164℃。[α]²⁰ _D＝-33.9°(c＝1.27，无水甲醇)。18.6 D-3-硝基-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(1FF)。1.00克(1CC)，SOCl₂/CH₃OH法。得(1F)1.05克(99.3％)m.p.174～6℃。 [α]²⁰ _D＝-13.5(c＝0.88，无水甲醇)。18.7 L-3-硝基-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(1GG)。1.00克(1DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(1GG)1.05克(99.4％)m.p.170～2℃。[α]²⁰ _D＝+14.1(c＝1.02，无水甲醇)。制备例19 D，L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯的拆分19.1 D-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯(2AA)拆分方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯12.16克(47.7mmol)，得(2AA)5.50克(90.5％)，为无色油状物。19.2 L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸(2BB)拆分方法同(1BB)项。得白色固体4.76克(88.0％)，m.p.163～165℃，[α]²⁰ _D＝+33.90°(c＝1.28，无水甲醇)。19.3 D-2-氟-苯丙氨酸盐酸盐(2CC)方法同(1CC)项。(2AA)4.73克(18.7mmol)，得(2CC)白色固体4.01克(97.7％)，m.p.215～218℃，[α]²⁵ _D＝-12.2°(c＝1.02，无水甲醇)。19.4 L-2-氟-苯丙氨酸盐酸盐(2DD)方法同(1DD)项。(2BB)4.20克(18.7mmol)，得(2D)白色细针状晶体4.09克(99.8％)，m.p.221～223℃，[α]²⁵ _D＝+14.50°(c＝1.02，无水甲醇)。19.5 D-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸(2EE)方法同(1EE)项。(2AA)1.00克(3.96mmol)，得(2EE)白色固体0.65克(73.1％)，m.p.156～159℃。[α]²⁰ _D＝-37.9°(c＝1.02，无水甲醇)。19.6 D-2-氟-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(2FF)。1.00克(2CC H₂O)，SOCl₂/CH₃OH法。得(2FF)0.88克(89.5％)m.p.176～8℃。[α]²⁰ _D＝-25.54(c＝1.21，无水甲醇)。19.7 L-2-氟-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(2GG)。1.00克(2DD·H₂O)，SOCl₂/CH₃OH法。得(2GG)0.97克(98.6％)m.p.176～7℃。[α]²⁰ _D＝+29.33(c＝0.75，无水甲醇)。制备例20 D，L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯的拆分20.1 D-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯(3AA)拆分方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯15.28克(62.5mmol)，得(3AA)无色针晶7.24克(91.5％)，m.p.107～108℃，[α]²⁵ _D＝-8.14°(c＝1.02，无水甲醇)。20.2 L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸(3BB)方法同(1BB)项。得(3BB)白色固体6.7l克(95.4％)，m.p.151～154℃，[α]²⁵ _D＝+31.59°(c＝0.997，无水甲醇)。20.3 D-3-氟-苯丙氨酸盐酸盐(3CC)方法同(1CC)项。(3AA)5.00克(19.8mmol)，得(3CC)白色固体4.32克(99.6％)，m.p.237～239℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-2.5°(c＝1.00，无水甲醇)。20.4 L-3-氟-苯丙氨酸盐酸盐(3DD)方法同(1DD)项。5.00克(3BB)。得(3DD)白色固体4.91克(99.3％)，m.p.＞241℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+3.7°(c＝1.02，无水甲醇)。20.5 D-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸(3EE)方法同(1EE)项。(3AA)1.00克(3.96mmol)，得白色固体0.87克(97.8％)，m.p.152～154℃。[α]²⁰ _D＝-33.6°(c＝1.19，无水甲醇)。20.6 D-3-氟-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(3FF)。1.00克(3CC)，SOCl₂/CH₃OH法。得(3FF)1.05克(98.7％)m.p.151～3℃。[α]²⁰ _D＝-12.52(c＝1.07，无水甲醇)。20.7 L-3-氟-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(3GG)。1.00克(3CC)，SOCl₂/CH₃OH法。得(3GG)1.05克(98.7％)m.p.175.5～177.5℃。[α]²⁰ _D＝+13.73(c＝0.75，无水甲醇)。制备例21 D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯的拆分21.1 D-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯(4AA)拆分方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯37.43克(148mmol)，得(4AA)无色针晶16.60克(88.7％)，m.p.64～66℃，[α]²⁵ _D＝-8.24°(c＝1.02，无水甲醇)。21.2 L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸(4BB)方法同(1BB)项。得(4BB)白色固体16.71克(99.9％)，m.p.133～136℃，[α]²⁵ _D＝+28.8°(c＝1.00，无水甲醇)。21.3 D-4-氟-苯丙氨酸盐酸盐(4CC)方法同(1CC)项。(4AA)5.00克(19.8mmol)，得(4CC)白色固体4.23克(97.5％)，m.p.238～240℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-5.9°(c＝1.00，无水甲醇)。21.4 L-4-氟-苯丙氨酸盐酸盐(4DD)方法同(1DD)项。(4BB)5.00克(22.2mmol)，得(4DD)白色固体4.88克(100％)，m.p.242～244℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+2.9°(c＝0.988，无水甲醇)。21.5 D-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸(4EE)方法同(1EE)项。(4AA)1.00克(3.96mmol)，得(4E)白色固体0.84克(94.4％)，m.p.139～142℃。[α]²⁰ _Dc＝-34.0°(c＝1.20，无水甲醇)。21.6 D-4-氟-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(4FF)。1.00克(4CC)，SOCl₂/CH₃OH法。得(4FF)1.06克(100.0％)m.p.190～2℃。[α]²⁰ _D＝-15.67(c＝1.04，无水甲醇)。21.7 L-4-氟-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(4GG)。1.00克(4DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(4GG)1.06克(99.6％)m.p.185～7℃。[α]²⁰ _D＝+14.76(c＝1.14，无水甲醇)。制备例22 D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分22.1 D-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯(5AA)拆分方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯10.0克(37mmol)，得(5AA)白色针晶4.7克(94.0％)，m.p.87～8℃，[α]²⁵ _D＝+10.6°(c＝0.99，无水甲醇)。22.2 L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸(5BB)方法同(1BB)项。得(5BB)白色固体4.17克(93.0％)，m.p.166～7℃，[α]²⁵ _D＝-12.2°(c＝1.02，无水甲醇)。22.3 D-2-氯-苯丙氨酸盐酸盐(5CC)方法同(1CC)项(5AA)3.47克(12.87mmol)，得(5CC)白色晶体2.97克(97.7％)，m.p.233～6℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+15.9°(c＝1.02，无水甲醇)。22.4 L-2-氯-苯丙氨酸盐酸盐(5DD)方法同(1DD)项。(5BB)3.97克(16.44mmol)，得(5DD)白色晶体3.80克(99.4％)，m.p.243～7℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-17.3°(c＝1.01，无水甲醇)。22.5 D-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸(5EE)方法同(1EE)项。(5AA)1.00克(3.7mmol)，得(5EE)白色固体0.87克(97.1％)，m.p.165～7℃。[α]²⁰ _D＝+11.8°(c＝1.26，无水甲醇)。22.6 D-2-氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(5FF)。1.00克(5CC)，SOCl₂/CH₃OH法。得(5FF)1.05克(99.1％)m.p.147～9℃。[α]²⁰ _D＝+28.3(c＝1.15，无水甲醇)。22.7 L-2-氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(5GG)。1.00克(5DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(5GG)1.06克(100.0％)m.p.144～6℃。[α]²⁰ _D＝-29.64(c＝0.685，无水甲醇)。制备例23 D，L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分23.1 D-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯(6AA)拆分方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯16.5克(61.05mmol)，得(6AA)白色针晶6.67克(80.72％)，m.p.70～2℃，[α]²⁵ _D＝-5.8°(c＝1.03，无水甲醇)。23.2 L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸(6BB)方法同(1BB)项。得(6BB)白色固体6.30克(85.2％)，m.p.155～7℃，[α]²⁵ _D＝+35.2°(c＝1.01，无水甲醇)。23.3 D-3-氯-苯丙氨酸盐酸盐(6CC)方法同(1C)项。(6AA)5.17克(19.18mmol)，得(6CC)白色固体4.29克(94.8％)，m.p.239～242℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-6.4°(c＝1.02，无水甲醇)。23.4 L-3-氯-苯丙氨酸盐酸盐(6DD)方法同(1DD)项。(6BB)5.38克(22.0mmol)，得(6DD)白色晶体5.06克(96.2％)，m.p.244～7℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+6.7°(c＝1.01，无水甲醇)。23.5 D-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸(6EE)方法同(1EE)项。(6AA)1.00克(3.7mmol)，得(6EE)白色固体0.85克(94.9％)，m.p.151～3℃。 [α]²⁰ _D＝-29.4°(c＝1.02，无水甲醇)。23.6 D-3-氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(6FF)。1.00克(6CC)，SOCl₂/CH₃OH法。得(6FF)0.80克(75.5％)m.p.122～3℃。[α]²⁰ _D＝-12.27(c＝0.92，无水甲醇)。23.7 L-3-氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(6GG)。1.00克(6DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(6GG)1.06克(100.0％)m.p.120～2℃。[α]²⁰ _D＝+13.14(c＝0.845，无水甲醇)。制备例24 D，L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯的拆分24.1 D-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯(7AA)拆分时采用枯草杆菌蛋白酶，其余方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯20.0克(63.5mmol)，得(7AA)无色针晶9.41克(94.1％)，m.p.96～98℃，[α]²⁵ _D＝-20.0°(c＝1.03，无水甲醇)。24.2 L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸(7BB)方法同(1BB)项。针状晶体9.17克(100.7％)，m.p.158～160℃，[α]²⁵ _D＝+39.9°(c＝1.02，无水甲醇)。24.3 D-4-溴-苯丙氨酸盐酸盐(7CC)方法同(1CC)项。(7AA)5.00克(16.0mmol)，得(7CC)白色固体4.33克(96.9％)，m.p.244～6℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-4.90°(c＝1.01，无水甲醇)。24.4 L-4-溴-苯丙氨酸盐酸盐(7DD)方法同(1DD)项。(7BB)9.15克(32.0mmol)，得(7DD)白色晶体8.67克(96.6％)，m.p.244～7℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+4.75°(c＝0.998，无水甲醇)。24.5 D-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸(7EE)方法同(1EE)项。(7AA)1.00克(3.2mmol)，得(7EE)白色固体0.87克(95.6％)，m.p.152～4℃。[α]²⁰ _D＝-37.9°(c＝1.00，无水甲醇)。24.6 D-4-溴-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(7FF)。1.00克(7CC)，SOCl₂/CH₃OH法。得(7FF)1.01克(96.2％)m.p.198～200℃。[α]²⁰ _D＝-16.02(c＝1.33，无水甲醇)。24.7 L-4-溴-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(7GG)。1.00克(7DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(7GG)1.05克(99.9％)m.p.190～2℃。[α]²⁰ _D＝+22.88(c＝0.75，无水甲醇)。制备例25 D，L-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分25.1 D-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯(8AA)拆分方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯17.6克(61mmol)，得(8AA)无色细针晶8.04克(91.4％)，m.p.92～94℃，[α]²⁰ _D-7.16°(c＝1.145，无水甲醇)。25.2 L-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸(8BB)方法同(1BB)项。得白色固体7.26克(91.4％)，m.p.163～165℃，[α]²⁰ _D＝+33.33°(c＝0.96，无水甲醇)。25.3 D-4-氟-3-氯-苯丙氨酸盐酸盐(8CC)方法同(1CC)项。(8AA)5.00克(17.4mmol)，得(8CC)白色固体4.18克(94.6％)，m.p.230～232℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-6.5°(c＝1.02，无水甲醇)。25.4 L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸盐酸盐(8DD)方法同(1DD)项。(8BB)5.00克(19.3mmol)，得(8DD)白色针晶4.76克(97.3％)，m.p.233～237℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+6.4°(c＝1.01，无水甲醇)。25.5 D-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸(8EE)方法同(1EE)项。(8AA)1.00克(3.48mmol)，得白色固体0.87克(96.4％)，m.p.160～163℃。[α]²⁰ _D＝-32.4°(c＝1.27，无水甲醇)。25.6 D-4-氟-3-氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(8FF)。3.00克(8CC)，SOCl₂/CH₃OH法。得(8FF)2.89克(91.3％)m.p.178～182℃。[α]²⁰ _D＝-12.40(c＝1.12，无水甲醇)。25.7 L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(8GG)。1.00克(8DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(8GG)1.08克(99.9％)m.p.182～3℃。[α]²⁰ _D＝+13.81(c＝1.00，无水甲醇)。制备例26 D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯的拆分26.1 D-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯(9AA)拆分时采用枯草杆菌蛋白酶^[4]，其余方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯5.0克(16.34mmol)，得(9AA)无色针晶2.34克(93.6％)，m.p.89～91℃，[α]²⁵ _D＝+7.0°(c＝1.00，无水甲醇)。26.2 L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸(9BB)方法同(1BB)项。得(9BB)针状晶体2.28克(100.4％)，m.p.177～9℃，[α]²⁵ _D＝-2.5°(c＝1.00，无水甲醇)。26.3 D-2，4-二氯-苯丙氨酸盐酸盐(9CC)方法同(1CC)项。(9AA)1.75克(5.76mmol)，得(9CC)白色固体1.51克(97.0％)，m.p.240～1℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-9.29°(c＝1.01，无水甲醇)。26.4 L-2，4-二氯-苯丙氨酸盐酸盐(9DD)方法同(1DD)项。(9BB)2.47克(10.0mmol)，得(9DD)白色晶体8.67克(96.6％)，m.p.244～7℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+9.00°(c＝0.995，无水甲醇)。26.5 D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸(9EE)方法同(1EE)项。D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯1.00克(3.29mmol)，得(9EE)白色固体0.908克(95.3％)，m.p.132～5℃。26.6 D-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(9FF)。1.00克(9CC)，SOCl₂/C₂H₅OH法。得(9FF)1.07克(97.0％)m.p.133～4℃。[α]²⁰ _D＝-29.6(c＝1.50，无水甲醇)。26.7 L-2，4-二氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(9GG)。1.00克(9DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(9GG)1.03克(98.0％)m.p.175～8℃。[α]²⁰ _D＝+16.86(c＝0.80，无水甲醇)。制备例27 D，L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯的拆分27.1 D-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯(10AA)拆分时采用枯草杆菌蛋白酶，其余方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯18.0克(59.2mmol)，得(10AA)无色针晶8.80克(97.8％)，m.p.125～126℃，[α]²⁵ _D＝-14.45°(c＝1.04，无水甲醇)。27.2 L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸(10BB)方法同(1BB)项。得(10BB)针状晶体7.97克(97.4％)，m.p.179～181℃，[α]²⁵ _D＝+14.27°(c＝1.08，无水甲醇)。27.3 D-2，5-二氯-苯丙氨酸盐酸盐(10CC)方法同(1CC)项。(10AA)4.00克(13.16mmol)，得(10CC)白色固体3.54克(99.5％)，m.p.227～230℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-25.7°(c＝1.05，无水甲醇)。27.4 L-2，5-二氯-苯丙氨酸盐酸盐(10DD)方法同(1DD)项。(10BB)5.00克(18.12mmol)，得(10DD)白色晶体4.82克(98.4％)，m.p.225～7℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+23.00°(c＝0.995，无水甲醇)。27.5 D-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸(10EE)方法同(1EE)项。(10AA)1.00克(3.29mmo1)，得(10EE)白色固体0.86克(94.7％)，m.p.176～8℃。[α]²⁵ _D＝-15.93°(c＝0.999，无水甲醇)。27.6 D-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(10FF)。1.00克(10CC)，SOCl₂/C₂H₅OH法。得(10FF)1.10克(99.7％)m.p.157～9℃。[α]²⁰ _D＝-24.72(c＝1.06，无水甲醇)。27.7 L-2，5-二氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(10GG)。1.00克(10DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(10GG)1.05克(99.9％)m.p.182～3℃。[α]²⁰ _D＝+32.70(c＝0.85，无水甲醇)。制备例28 D，L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸甲酯的拆分28.1 D-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸甲乙酯(11AA)拆分方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸乙酯7.7克(26.6mmol)，得(11AA)白色固体3.46克(89.9％)，m.p.122～4℃，[α]²⁵ _D＝-23.8°(c＝1.16，无水甲醇)。28.2 L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸(11BB)方法同(1BB)项。得(11BB)白色固体3.44克(93.9％)，m.p.149～151℃，[α]²⁵ _D＝+43.2°(c＝1.01，无水甲醇)。制备例29 D，L-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分29.1 D-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯(13AA)拆分方法同(1AA)项。D，L-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯19.0克(67.02mmol)，得(13AA)无色针晶9.22克(92.0％)，m.p.130～2℃，[α]²⁵ _D＝+9.40°(c＝1.165，无水甲醇)。29.2 L-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸(13BB)方法同(1BB)项。得(13BB)针状晶体7.74克(90.0％)，m.p.174～6℃，[α]²⁵ _D＝-11.86°(c＝1.265，无水甲醇)。29.3 D-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸盐酸盐(13CC)方法同(1CC)项。(13AA)2.0克(7.05mmol)，得(13CC)白色固体1.68克(95.2％)，m.p.224～7℃(分解)，[α]²⁵ _D＝-5.18°(c＝1.10，无水甲醇)。29.4 L-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸盐酸盐(13DD)方法同(1DD)项。(13BB)2.00克(7.05mmol)，得(13DD)白色晶体1.67克(95.0％)，m.p.222～5℃(分解)，[α]²⁵ _D＝+6.03°(c＝1.09，无水甲醇)。29.5 D-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸(13EE)方法同(1EE)项。(13AA)1.00克(3.53mmol)，得(13EE)白色固体0.88克(97.6％)，m.p.173～5℃。[α]²⁵ _D＝+10.35°(c＝0.85，无水甲醇)。29.6 D-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(13FF)。1.00克(13CC)，SOCl₂/C₂H₅OH法。得(13FF)1.08克(97.1％)m.p.188～190℃。[α]²⁰ _D＝-33.89(c＝0.95，无水甲醇)。29.7 L-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(13GG)。260毫克(13DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(13GG)260毫克(95.0％)m.p.174～6℃。[α]²⁰ _D＝+31.75(c＝0.63，无水甲醇)。制备例30 D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯的拆分30.1 D-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯(15AA)采用枯草杆菌蛋白酶，其余方法同(1AA)，D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯21.1克(68.7mmol)，得(15AA)无色细小针晶10.3克(97.6％)，m.p.97～98℃，[α]²⁵ _D＝+7.9°(c＝1.00，无水甲醇)30.2 L-N-乙酰-4-羧基乙酯-苯丙氨酸(15BB)方法同(1BB)项。针状晶体8.9克(92.8％)，m.p.174～175℃，[α]²⁵ _D＝-6.37°(c＝1.02，无水甲醇)。30.3 D-4-羧基-苯丙氨酸盐酸盐(15CC)方法同(1CC)项。(15AA)4.07克(13mmol)，得(15CC)白色固体3.28克(100％)，m.p.＞280(分解)， [α]²⁰ _D＝-33.96°(c＝1.96，二甲亚砜)。30.4 L-4-羧基-苯丙氨酸盐酸盐(15DD)。方法同(1DD)项。(15BB)4.43克(16mmol)，得白色固体3.87克(99.3％)，m.p.＞280(分解)，[α]²⁰ _D＝29.72°(c＝1.24，二甲亚砜)。30.5 D-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯盐酸盐(15EE)。1.00克(15CC)，SOCl₂/C₂H₅OH法。得(15EE)1.17克(95.3％)m.p.138～140℃。[α]²⁰ _D＝-15.02(c＝1.21，无水甲醇)。30.6 L-4-羧基-苯丙氨酸二甲酯盐酸盐(15FF)。1.00克(15DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(15FF)1.03克(92.4％)m.p.178～180℃。[α]²⁰ _D＝+17.09(c＝1.11，无水甲醇)。制备例31 D，L-N-乙酰-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯的拆分31.1 D-N-乙酰-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯(16AA)拆分方法同(1AA)项。按(1.16.3)项的合成产物55克(0.18mmol)，得(16AA)为油状物。31.2 L-N-乙酰-3-羧基乙酯-苯丙氨酸(16BB)方法同(1BB)项。针状晶体23.0克(92.0％)，m.p.148～9℃，[α]²⁵ _D＝+39.37°(c＝1.625，无水甲醇)。IR 3321(NH)，2989(CH)，1707(C＝O，COOEt)，1615(C＝O，NHCOCH₃)，1566(CH，苯环)，760,704(苯环3-羧基乙酯取代)。31.3 D-3-羧基-苯丙氨酸盐酸盐(16CC)方法同(1C)项。(16AA)的最终产物，得(16CC)白色固体21.5克(97.8％)，m.p.265～270(分解)，[α]²⁰ _D＝-26.65°(c＝1.314，二甲亚砜)。31.4 L-3-羧基-苯丙氨酸盐酸盐(16DD)。方法同(1DD)项。(16BB)1.00克(3.58mmol)，得白色固体0.84克(95.5％)，m.p.270～2(分解)，[α]²⁰ _D＝+28.03°(c＝1.106，二甲亚砜)。31.5 D-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯盐酸盐(16EE)。1.00克(16CC)，SOCl₂/C₂H₅OH法。得(16EE)1.18克(95.8％)m.p.192～194℃。[α]²⁰ _D＝-13.02(c＝1.26，无水甲醇)。31.6 L-3-羧基-苯丙氨酸二甲酯盐酸盐(16FF)。1.00克 (16DD)，SOCl₂/CH₃OH法。得(16FF)1.08克(92.4％)m.p.163～5℃。[α]²⁰ _D＝+18.85(c＝0.96，无水甲醇)。制备例32 1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯的拆分32.1 D-1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯(17AA)拆分方法同(1AA)项。D，L-1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯10.0克。得(17AA)4.55克(91％)。m.p.86～88℃，[α]²⁰ _D＝+7.8(c＝1.16，无水甲醇)。32.2 L-1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧酸(17BB)方法同(1BB)项。得(17BB)4.15克(95.2％)。m.p.151～3℃，[α]²⁰ _D＝-5.5(c＝1.22，无水甲醇)。实施例1N-Ac-DPhe(2-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH的制备1.1 Fmoc-L-Trp-OH导入Wang树脂

Wang树脂(ACT公司，0.5mmol/克，100～200目)0.5克(0.25mmol)，放入肽反应器中，按以下过程洗涤：

5毫升DMF，5分钟/次，二次；

5毫升DCM，5分钟/次，一次；

5毫升MeOH，5分钟/次，二次；

5毫升DCM，5分钟/次，三次。然后加入Fmoc-Trp 300毫克(0.7mmol)，3毫升DMF，2毫升DCM，加入HOBt 115毫克(0.83mmol)，DCC 170毫克(0.83mmol)，DMAP 10毫克，搅拌24小时。抽干，依次用DCM、MeOH、DMF洗涤，减压干燥。1.2苦味酸法测定树脂上氨基负载量取两份Fmoc-Trp-Wang树脂各10毫克左右，分别放入一小的砂心漏斗中，依次经过下列处理：

a.25％哌啶/DMF 2毫升，15分钟/次，二次；

b.洗涤：DMF 4毫升，二次，DCM 4毫升二次；0.1M苦味酸/DCM 3毫升，5分钟/次，二次；洗涤：DMF 4毫升，二次，DCM 4毫升二次；5％二异丙基乙胺/DCM 4毫升，5分钟/次，二次；DCM 2毫升，四次。收集e，f两项的溶液，用95％的乙醇稀释至100毫升，在358nm测定紫外吸收，按下式计算每克树脂氨基负载量(e＝14500M-1cm-1)：两份的结果分别为0.474mmol/g和0.452mmol/g，平均负载率为：92.6％。1.3循环接肽反应合成中所用溶剂都按照多肽合成用标准处理。合成每一个肽时，Fmoc-Trp-Wang树脂的量为200毫克(约0.0925mmol)，缩合时取3倍摩尔量的氨基酸，依次按照反应路线1所示，按序操作取Ile，Ile，Asp，Leu的相应Fmoc保护氨基酸及N-Ac-Phe(2-F)-0H。对每一个氨基酸的缩合按照下列程序：25％哌啶/DMF 5毫升，15分钟/次，二次；洗涤：DMF 5毫升/次，二次，DCM 5毫升/次，二次；加入Fmoe-氨基酸，HOBt，DCC，10毫升DMF/DCM(4∶1)；洗涤：DMF 5毫升/次，二次，MeOH/DCM(1∶1)5毫升/次，二次，DCM 5毫升/次，二次(茚三酮法实验阳性时，返回c)。之后，肽树脂真空干燥。1.4裂解

裂解液组成：TFA∶EDT∶苯酚∶水 7.5∶1.5∶0.5∶0.5(V/V/W/V)[11]。

裂解基本过程为：300毫克的肽树脂，置于一圆底烧瓶中，冰浴下冷却，加入新配制预先冷却的裂解液3毫升，自然升温，室温搅拌90分钟。砂心漏斗抽滤，树脂用1毫升洁净的TFA和5毫升DCM洗三次，滤液40℃以下迅速减压浓缩，浓缩液剧烈搅拌下加入1毫升乙酸乙酯和10毫升石油醚，得到白色固体，滤集干燥。得标题化合物。1.5分析部分高效液相条件：泵 Waters 600E型色谱柱 Kromasil-C18填料5μm，4.6×250mm流动相 A：0.1％三氟醋酸/水B：70％乙腈/0.1三氟醋酸-水紫外检测器 Spectra-Physics UV1000，波长280nm实施例2-12按类似于实施例1的方法和步骤，制备出六肽化合物的2-12。实施例1-12化合物均经过FAB-MS鉴定，同时用HPLC进行了纯度分析，具体见表1。

表1实施例1-12化合物的质谱和高效液相分析结果序六肽一级结构质谱(MS) HPLC

保留时间/含量号1 N-Ac-D-Phe(2-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 865(M-l) 13.72/100％^a2 N-Ac-D-Phe(3-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 865(M-l) 14.45/100％^a3 N-Ac-D-Phe(4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 865(M-l) 14.85/100％^a4 N-Ac-D-Phe(2-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 883.5(M) 8.73/100％^b5 N-Ac-D-Phe(3-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 883.5(M) 5.48/100％^b6 N-Ac-D-Phe(4-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 883.5(M) 16.17/97.2％^c7 N-Ac-D-Phe(4-Br)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 928(M) 16.39/100％^c8 N-Ac-D-Phe(3-NO₂)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 895.2(M) 14.47/100％^a9 N-Ac-D-Phe(3-Cl-4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 901.5(M-l) 6.45/100％^a10 833(M＋l) 7.14/95.4％^c11 N-Ac-D-Phe(2，5-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 919(M) 16.89/96.7％^c12N-Ac-D-Phe(3-Cl-2-CH₃)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp- 900(M＋2) 17.16/100％^cOHa时间(min) 流速 A％ B％ c 时间(min) 流速 A％ B％

0 1 40 60 0 0.6 50 50

10 1 0 100 10 1 0 100

20 1 40 60 20 1 50 50b时间(min) 流速 A％ B％d 时间(min) 流速 A％ B％

0 0.6 50 50 0 1 10 90

10 1 0 100 10 1 0 100

20 1 20 80*(皂化前的甲酯)，**(皂化前的二乙酯)，***(皂化前的二甲酯)。生物活性实验材料Wistar大鼠：军事医学科学院实验动物中心台式自动平衡记录仪：上海大华仪器厂ET-1： American peptide company10％碳酸钾溶液：自配改良Kreb’s-Ringer缓冲液：自配实验方法样品溶液配制：定量称取样品(实施例1-12的化合物)2×10^-6摩尔，加入0.5毫升10％碱金属碳酸盐溶解，用改良Kreb’s-Ringer缓冲液定量稀释为5.0毫升，作为贮备液冰箱中保存。用缓冲液稀释为10^-6、10^-7、10^-8和10^-9nM四个浓度。体外血管实验：

将大鼠断头处死，迅速开胸，摘取主动脉，置于盛有血管营养液的培养皿中，清除血污，仔细分离血管周围组织，剪成长约3毫米的动脉环，分别将两根直径为0.1毫米的不锈钢钢丝小心穿入，作成三角环状。随后置于盛有10毫升血管营养液的37℃恒温浴槽中，下端固定，上端通过张力换能器连于自动台式平衡记录仪，持续同入95％氧气和5％二氧化碳混合气。动脉环负荷0.5克，稳定之后开始给药。拮抗实验

先用10nM量的ET-1诱发血管环收缩，约10分钟左右，达到平台后，给予10^-9M样品，观察对抗收缩效应。当低浓度没效时，逐渐升高浓度至10^-6M。结果

按照上述方法，活性结果见下表：

药理活性结果

拮抗活性(mmol/L)序号六肽一级结构

10^-6 10^-7 10^-8 10^-91 N-Ac-D-Phe(2-F)-Leu-Asp-IIe-Ile-Trp-OH +2 N-Ac-D-Phe(3-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH ++3 N-Ac-D-Phe(4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH ++4 N-Ac-D-Phe(2-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH +5 N-Ac-D-Phe(3-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH +6 N-Ac-D-Phe(4-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH -7 N-Ac-D-Phe(4-Br)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH +8 N-Ac-D-Phe(3-NO₂)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH ++9 N-Ac-D-Phe-(3-Cl-4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH +10

+11 N-Ac-D-Phe(2，5-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH +12 N-Ac-D-Phe(3-Cl-2-CH₃)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH +++拮抗活性很强：+：拮抗活性中等-：不表现拮抗活性

Claims

1.式I六肽衍生物或其立体异构体

N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I

其在A为D-Phe，且其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被选自卤素，硝基，羧基或C1-4烷基单取代或二取代，

或N-Ac-A为下式代表的基团：

2.权利要求1的六肽衍生物或其立体异构体。其选自下面六肽化合物：

N-Ac-D-Phe(2-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(2-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Br)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-NO₂)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl-4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(2，5-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl-2-CH₃)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。

3．权利要求1或2的六肽衍生物或其立体异构体，其选自下面六肽化合物：

N-Ac-D-Phe(2-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Br)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-NO₂)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(2，5-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。

4.药物组合物，其包括至少一种式I六肽衍生物其立体异构体

N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I

或N-Ac-A为下式代表的基团：

及药用载体或赋形剂。

5.权利要求4的药物组合物，其中式I六肽衍生物或其立体异构体选自：

N-Ac-D-Phe(2-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(2-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Br)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-NO₂)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl-4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(2，5-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl-2-CH₃)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH 。

6.权利要求4或5的药物组合物，其中式I六肽衍生物或其立体异构体选自：

N-Ac-D-Phe(2-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-F)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(4-Br)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(3-NO₂)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH

N-Ac-D-Phe(2，5-Cl)-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。

7.式I六肽衍生物或其立体异构体衍生物的制备方法，其包括：

2)将1)中所得产物在哌啶，DMF，DCM中反应，生成Trp-Wang树脂，

3)将2)中产物Trp-Wang树脂与Fmoc-IIe-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt中反应，生成Fmoc-Ile-Trp-Wang树脂，所得产物如2)中所述进行反应，生成式Ile-Trp-Wang树脂，

7)将6)中产物与N-Ac-A-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt中反应，生成N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang树脂，所得产物再于TFA，EDT，苯酚和水中处理，得N-Ac-A-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH，其中A如上定义。