CN1322139A

CN1322139A - 阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的药物

Info

Publication number: CN1322139A
Application number: CN99811832A
Authority: CN
Inventors: 松谷悦哉; 内藤健一郎
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1998-10-08
Filing date: 1999-10-07
Publication date: 2001-11-14
Also published as: EP1136079A4; AU6004999A; WO2000020034A1; CA2345213A1; US20060135435A1; HUP0103761A3; KR20010080007A; NO20011763D0; NO20011763L; HUP0103761A2; EP1136079A1

Abstract

本发明提供一种阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的试剂,其包含一种激素药物。上述试剂显示了有效阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的效应。

Description

阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的药物

发明领域

本发明涉及一种阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的组合物，其中包括一种激素药物等。

发明背景

目前，包括激素药物的化学抗雄激素药物被广泛用于癌症治疗。然而，一些癌症对激素药物没有应答(激素非依赖性癌症)。此外，即使可应答激素治疗的激素依赖性癌症也可因激素非依赖性癌症细胞增殖而向激素非依赖性癌症转化(实验观察Laboratory Investigation 67，540，1992)。

因此，在癌症治疗中(尤其是前列腺癌等)，理想的治疗应是对激素应答的癌症和激素不应答的癌症均有效；但是，尚不知有针对两种类型癌症均有效的治疗方法。

发明内容

在对激素治疗导致癌症细胞增殖途径改变的研究中，本发明者发现一个新问题，即由于使用激素药物引起激素非依赖性癌症细胞增殖，使激素药物抗癌症治疗效应不能持久。

发明者为解决这一问题进行了广泛研究，发现在使用激素的治疗中使用一种阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的组合物，能持续发挥激素药物的良好治疗效应，该组合物中包括激素药物。本发明者基于这一发现，经进一步研究开发出本发明。

因此，本发明提供：

(1)一种阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的组合物，其中包括一种激素药物，

(2)根据上述(1)的组合物，其中激素是LH-RH衍生物，

(3)根据上述(2)的组合物，其中LH-RH衍生物是LH-RH激动剂，

(4)根据上(3)的组合物，其中LH-RH衍生物是一种肽，其表示为下式：

5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

其中Y代表DLeu，DAla，DTrp，DSer(tBu)，D2Nal和DHis(ImBzl)中的氨基酸残基之一，Z代表NH-C₂H₅或Gly-NH₂，或其盐，

(5)根据上述(3)的组合物，其中LH-RH衍生物是5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H₅或其乙酸盐，

(6)根据上述(1)的组合物，其中除包括激素药物，还包括抑制细胞生长因子或其受体作用的药物，

(7)根据上述(6)的组合物，其中细胞生长因子是①EGF或基本上有同样活性的物质，②胰岛素或基本上有同样活性的物质，③FGF或基本上有同样活性的物质，

(8)根据上述(1)的组合物，其是预防/治疗前列腺癌，卵巢癌，宫颈癌或乳腺癌的药物，

(9)一种应用，其使用激素药物阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化，

(10)一种应用，其使用激素药物产生阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的药剂，

(11)一种阻滞哺乳动物的激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的方法，包括给予该哺乳动物激素药物。

此外，本发明还提供：

(12)阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的方法，包括使用激素药物，

(13)阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的方法，包括使用激素药物和抑制细胞生长因子或其受体作用的药物，

(14)治疗/预防癌症的一种方法，包括使用激素药物阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化，

(15)治疗/预防癌症的一种方法，包括使用激素药物和抑制细胞生长因子或其受体作用的药物，阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化，

(16)抑制癌症转移/复发的一种方法，包括使用激素药物阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化，

(17)抑制癌症转移/复发的一种方法，包括使用激素药物和抑制细胞生长因子或其受体作用的药物，阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化，

(18)根据上述(11)，(12)，(13)，(14)，(15)，(16)，或(17)的方法，其中激素药物是LH-RH衍生物，

(19)根据上述(18)的方法，其中LH-RH衍生物是5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H₅或其乙酸盐，

(20)根据上述(13)，(15)或(17)的方法，其中细胞生长因子是①EGF或基本上有同样活性的物质，②胰岛素或基本上有同样活性的物质，③FGF或基本上有同样活性的物质，

(21)根据上述(7)的方法，其中细胞生长因子是EGF或基本上有同样活性的物质，

(22)根据上述(7)的组合物，其中细胞生长因子是胰岛素或基本上有同样活性的物质，

(23)根据上述(7)的组合物，其中细胞生长因子是FGF或基本上有同样活性的物质，

(24)根据上述(20)的组合物，其中细胞生长因子是EGF或基本上有同样活性的物质，

(25)根据上述(21)的组合物，其中细胞生长因子是胰岛素或基本上有同样活性的物质，

(26)根据上述(21)的组合物，其中细胞生长因子是FGF或基本上有同样活性的物质，

(27)根据上述(7)或(21)的组合物，其中EGF或基本上有同样活性的物质是EGF或heregulin(HER2配体)，

(28)根据上述(7)或(22)的组合物，其中胰岛素或基本上有同样活性的物质是胰岛素，IGF-1或IGF-2，

(29)根据上述(7)或(23)的组合物，其中FGF或基本上有同样活性的物质是aFGF，bFGF，KGF，HGF或FGF-10，

(30)根据上述(20)或(24)的组合物，其中EGF或基本上有同样活性的物质是EGF或heregulin(HER2配体)，

(31)根据上述(20)或(25)的组合物，其中胰岛素或基本上有同样活性的物质是胰岛素，IGF-1或IGF-2，

(32)根据上述(20)或(26)的组合物，其中FGF或基本上有同样活性的物质是aFGF，bFGF，KGF，HGF或FGF-10，

(33)根据上述(6)的组合物，其中受体是EGF受体，heregulin受体(HER2)，胰岛素受体-1，胰岛素受体-2，IGF受体，FGF受体-1或FGF受体-2，

(34)根据上述(13)，(15)或(17)的组合物，其中受体是EGF受体，heregulin受体(HER2)，胰岛素受体-1，胰岛素受体-2，IGF受体，FGF受体-1或FGF受体-2，

(35)根据上述(6)的组合物，其中受体有酪氨酸激酶活性，

(36)根据上述(13)，(15)或(17)的方法，其中受体有酪氨酸激酶活性，

(37)根据上述(9)，(10)，(11)，(12)，(13)，(14)，(15)，(16)，或(17)的方法，其中癌症是指前列腺癌，卵巢癌，宫颈癌或乳腺癌。

附图简述

图1示雄激素拮抗剂对人前列腺癌细胞系受体型酪氨酸激酶基因表达的影响。

图2示雄激素拮抗剂和酪氨酸激酶抑制剂对人前列腺癌细胞增殖的影响。

发明的优选实施方案

尽管本发明可使用任何有药理作用的激素药物，但优选，例如，分子量大约300-40,000的激素药物，优选分子量大约400-30,000，更优选分子量大约500-20,000。

具体地说有促黄体生成激素释放激素(LH-RH)，雌激素制剂，雌激素拮抗剂(他莫昔芬(tamoxifen)等)，雄激素制剂，雄激素拮抗剂(氟他胺，环丙孕酮)，芳香酶抑制剂，5-α还原酶抑制剂，裂解酶抑制剂，胰岛素，生长抑素，生长激素，生长激素释放激素(GH-RH)，雄性激素还原剂，雌性激素还原剂，催乳素，促红细胞生成素，肾上腺皮质激素，黑色素细胞刺激激素，甲状腺激素释放激素，甲状腺刺激激素，黄体激素，孕酮，促卵泡激素，加压素，催产素，降钙素，胃泌素，促胰泌素，促胰酶素，胆囊收缩素，血管紧张素，人胎盘催乳素，人绒毛膜促性腺激素，脑啡肽，内啡肽，京都啡肽，吞噬刺激素，促胸腺生成素，胸腺激素，胸腺刺激素，胸腺体液因子，血胸腺因子，癌症坏死因子，集落刺激因子，胃动素，强啡肽，蛙皮素，神经降压素，蛙皮缩胆囊肽，舒缓激肽，心房利钠激素，神经生长因子，神经营养因子，内皮素拮抗肽，及其衍生物(例如，激动剂，拮抗剂)，和其片段或片段衍生物。

上述激素药物可以是可药用的盐。当激素药物有碱性基团如氨基时，这种盐类包括无机酸(例如盐酸，硫酸，硝酸，硼酸)盐，有机酸(例如碳酸，重碳酸，琥珀酸，丙酸，三氟醋酸)盐等。

当激素药物有酸性基团如羧基时，这种盐类包括无机碱盐(例如碱金属如钠和钾，碱土金属如钙和镁)，有机碱盐(例如有机胺类如三乙胺，碱性氨基酸如精氨酸)等。激素药物可形成金属复合物(例如铜复合物，锌复合物)。

本发明优选对表达细胞生长因子受体的癌症有效的药物，包括LH-RH衍生物，其对性激素依赖性癌症有效，如前列腺癌，卵巢癌，宫颈癌和乳腺癌。

具体的LH-RH衍生物，如在《GnRH类似物治疗的讨论和展望》[帕德农神庙出版有限公司发行，(The Parthenon Publishing Group Ltd.)，1996]，日本专利936349，专利503165/1991，日本专利申请101695/1991，97334/1995和259460/1996，等中描述的肽。

上述LH-RH衍生物可以是可药用的盐，这类盐包括上述可药用的激素盐类药物。

LH-RH衍生物可以是LH-RH激动剂或拮抗剂。可使用如通式[I]所示的肽作为LH-RH拮抗剂：

X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAla-NH₂

其中X代表N(4H₂-呋喃甲酰)Gly或NAc；A代表NMeTyr，Tyr，Aph(Atz)和NMeAph(Atz)中的残基之一；B代表DLys(Nic)，DCit，DLys(AzaglyNic)，Dlys(AzaglyFur)，DhArg(Et₂)，DAph(Atz)和DhCi中的残基之一；C代表Lys(Nisp)，Arg或hArg(Et₂)，或其盐。

可使用如通式[II]所示的肽作为LH-RH激动剂：

5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

其中Y代表DLeu，DAla，DTrp，DSer(tBu)，D2Nal和DHis(ImBzl)中的残基之一，Z代表NH-C₂H₅或Gly-NH₂，或其盐。优选的肽是其中Y是DLeu，Z是NH-C₂H₅(亮丙瑞林)或其一种盐(例如乙酸盐)(5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H₅或其乙酸盐)。

依照上述文献或专利公开的方法或其修饰的方法可以生成这些肽。

优选的激素药物包括雌激素制剂，雌激素拮抗剂制剂(他莫昔芬等)，雄激素制剂，雄激素拮抗剂(氟他胺，环丙孕酮)，芳香酶抑制剂，5-α还原酶抑制剂，雄性激素还原剂，雌性激素还原剂和孕酮。

激素依赖性癌症是指依赖激素的癌症，如前列腺癌。作为本发明组合物用药的优选目标是性激素依赖的癌症，如前列腺癌，卵巢癌，宫颈癌和乳腺癌。

激素非依赖性癌症是指对激素药物不应答的癌症(如前列腺癌，卵巢癌，宫颈癌，乳腺癌(尤其是某些前列腺癌，乳腺癌等))，或上文定义的经长期激素治疗后转变成对激素无应答的一类激素依赖性癌症。

术语“激素依赖性癌症”和“激素非依赖性癌症”中的“癌症”是指整个癌症组织，而不是单个癌症细胞。

“阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化(转化被阻滞)”是指对上述激素依赖性癌症采用激素治疗时，通过抑制或阻滞癌症(其因长期使用激素药物而对激素治疗不应答(激素非依赖性癌症))增殖，从而阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化。

具体是指，(1)当单独使用上述激素药物，可通过优化该组合物的剂量，服药时间，服药频率，服药间隔等阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化，(2)当上述激素药物与另一种激素药物或抑制细胞生长因子或其受体作用的药物联合使用时(优选使用上述激素药物与抑制细胞生长因子或其受体作用的药物的联合)，可通过优化该组合物的剂量，服药时间，服药频率，服药间隔等阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化。

本发明可使用任何能刺激细胞生长的细胞生长因子，通常是低分子量肽，分子量不超过20,000，在低浓度时发挥其与受体结合的作用。

可作细胞生长因子的实例有：

(1)EGF(表皮生长因子)或基本上有同样活性的物质(如EGF，heregulin(HER2配体))

(2)胰岛素或基本上有同样活性的物质(如胰岛素，IGF(胰岛素样生长因子)-1，IGF-2)，

(3)FGF或基本上有同样活性的物质(如，aFGF，bFGF，KGF(角质化细胞生长因子)，HGF(肝细胞生长因子)，FGF-10)，

(4)其它细胞生长因子(如CSF(集落刺激因子)，EPO(促红细胞生成素)，IL-2(白细胞介素-2)，NGF(神经生长因子)，PDGF(血小板衍生的生长因子)，TGFβ(转化生长因子β))。

抑制细胞生长因子或其受体作用的药物可以是可药用的盐。当抑制细胞生长因子或其受体作用的药物有碱性基团如氨基时，这类盐包括无机酸(例如盐酸，硫酸，硝酸，硼酸)盐，有机酸(例如碳酸，重碳酸，琥珀酸，丙酸，三氟醋酸)盐等。

当抑制细胞生长因子或其受体作用的药物有一酸性基团如羧基时，这类盐包括无机碱盐(如碱金属钠和钾等，碱土金属钙和镁等)，有机碱盐(有机胺类如三乙胺，碱性氨基酸如精氨酸)等。抑制细胞生长因子或其受体作用的药物可形成金属复合物(如铜复合物，锌复合物)。

本发明中可采用任何与上述细胞生长因子结合的受体，如EGF受体，heregulin受体(HER2)，胰岛素受体-1，胰岛素受体-2，IGF受体，FGF受体-1，或FGF受体-2。

抑制细胞生长因子或其受体作用的药物，可以如除莠霉素和PD153035(科学，265(5175)，1093页(1994))。

抑制细胞生长因子或其受体作用的药物还包括HER2抑制剂。本发明可采用任何具有抑制HER2活性(例如磷酸化活性)的HER2抑制剂，不论是抗体，低分子量化合物(合成化合物，天然物质)，反义核酸，HER2配体，还是heregulin或其部分修饰体或结构改变体。HER2抑制剂可通过抑制HER2受体间接抑制HER2活性，如HER2受体抗体。

有HER2抑制活性的低分子量化合物，可采用如WO98/03505中描述的化合物，具体指1-[3-[4-[2-[(E)-2-苯乙基]-4-噁唑基甲氧基]苯基]丙基]-1，2，4-三唑等。

当一种激素药物与另一种激素药物或抑制细胞生长因子或其受体作用的药物联合时，即使不优化各种药物的剂量，服药时间，服药频率，服药间隔等，只要它们是在常规范围就可获得有效的阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的效应。

本发明尤其优选在使用激素后，当该激素药物有效血浓度降低至约50％以下时，或因该激素药物的使用而使细胞生长因子受体开始表达时，使用能抑制细胞生长因子或其受体作用的药物。

另外，通过按要求精确启始给药时间，可增强阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的效应。

文中使用的缩写作如下定义：

缩写名称

5-oxo-Pro 焦谷氨酸残基

His 组氨酸残基

Trp 色氨酸残基

Ser 丝氨酸残基

Tyr 酪氨酸残基

Leu 亮氨酸残基

Arg 精氨酸残基

Pro 脯氨酸残基

Dleu 右旋-亮氨酸残基

DAla 右旋-丙氨酸残基

DTrp 右旋-色氨酸残基

N(4H₂-呋喃甲酰)Gly N-四氢-呋喃甲酰甘氨酸残基

Nac N-乙酰基团

D2Nal 右旋-3-(2-萘基)丙氨酸残基

D4ClPhe 右旋-3-(4-氯)苯丙氨酸残基

D3Pal 右旋-3-(3-吡啶基)丙氨酸残基

NMeTyr N-甲基酪氨酸残基

Aph(Atz) N-[5′-(3′-氨基-1′H-1′，2′，4′-三唑基)苯丙氨酸残基

NMeAph(Atz) N-甲基-[5′-(3′-氨基1′H-1′，2′，4′-三唑基)苯丙氨酸残基

DLys(Nic) 右旋-(e-N-烟酰)赖氨酸残基

DCit 右旋-瓜氨酸残基

DLys(AzaglyNic) 右旋-(重氮甘氨酰烟酰)赖氨酸残基

DLys(AzaglyFur) 右旋-(重氮甘氨酰呋喃)赖氨酸残基

DhArg(Et₂) 右旋-(N，N’-二乙基)高精氨酸残基

DAph(Atz) 右旋-N-甲基-[5′-(3′-氨基-1′H-1′，2′，4′-三唑基)苯丙氨酸残基

DhCi 右旋-高瓜氨酸残基

Lys(Nisp) (e-N-异丙基)赖氨酸残基

hArg(Et₂) (N，N’-二乙基)高精氨酸残基

Dser(tBu) 右旋-邻(叔丁基)丝氨酸残基

Dhis(ImBzl) N’-丁基组氨酸残基

本发明所用其它氨基酸的缩写参照IUPAC-IUB生物化学命名委员会的指定缩写(欧洲生物化学杂志(European Joumal of Biochemistry)，138卷，9-37页(1984))或相关领域的通用缩写。除非注明，本发明中氨基酸的光学异构体是指左旋构型。

本发明的组合物是低毒性的，可作为药用组合物使用，或与常规药用载体等混合在哺乳动物(例如马，牛，狗，猫，大鼠，小鼠，兔，猪，猴)中使用。

作为激素药物和需要时抑制细胞生长因子或其受体作用的药物，可与药用载体一起配制，本发明组合物可口服或非口服给药，为固形制剂，如片剂，胶囊(包括软胶囊和微型胶囊)，粒剂，粉剂和栓剂；或液体制剂，如糖浆和针剂。也可分别制备激素药物和抑制细胞生长因子或其受体作用的药物。

药用载体可使用制药常用的各种有机或无机载体物质，包括固形制剂中的赋形剂，润滑剂，黏合剂和崩解剂；液体制剂中的溶剂，助溶剂，悬浮剂，等渗剂，缓冲剂，和无痛剂。必要时还可使用药用添加剂如防腐剂，抗氧化剂，着色剂和甜味剂。

优选的赋形剂如乳糖，蔗糖，D-甘露醇，淀粉，结晶纤维素和轻质硅酐(light silicic anhydride)。

优选的润滑剂如硬脂酸镁，硬脂酸钙，滑石粉和胶态硅酸。

优选的黏合剂如结晶纤维素，蔗糖，D-甘露醇，糊精，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。

优选崩解剂如淀粉，羧甲基纤维素，羧甲基纤维素钙，交联羧甲纤维素钠和羧基甲基淀粉钠。

优选的溶剂如注射用水，乙醇，丙二醇，聚乙二醇，芝麻油，玉米油。

优选的助溶剂如聚乙二醇，丙二醇，D-甘露醇，苯甲酸苄酯，乙醇，三氨基甲烷，胆固醇，三乙醇胺，碳酸钠，柠檬酸钠。

优选的悬浮剂如表面活性剂，如硬脂酰三乙醇胺，十二烷基硫酸钠，月桂氨基丙酸，卵磷脂，苯扎氟铵，氯化苄乙铵和单硬脂酸甘油；亲水聚合物如聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟甲基纤维素，羟乙基纤维素，和羟丙基纤维素。

优选的等渗剂如氯化钠，甘油和D-甘露醇。

优选的缓冲剂如磷酸盐，醋酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐等。

优选的无痛剂如苄醇。

优选的防腐剂如对羟苯甲酸酯，氯丁醇，苄醇，苯乙醇，去氢醋酸和山梨酸。

优选的抗氧化剂如亚硫酸盐和抗坏血酸。

本发明药物中激素药物含量通常占制剂总量的约0.1-30％(W/W)，优选约1-20％(W/W)，更优选5-10％(W/W)，但根据剂型，服药方法，载体等而有所变化。

本发明的组合物中抑制细胞生长因子或其受体作用的药物(尤其是低分子量化合物)含量占制剂总量的约0.1-90％(W/W)，但其根据剂型、给药方式、载体等有所变化。

每种药用添加剂含量通常占制剂总量的约0.1-99.9％(W/W)，优选约10-99.9％(W/W)，更优选约20-90％(W/W)。

本发明的组合物剂量根据激素药物和抑制细胞生长因子或其受体作用的药物的种类，给药途径，症状等而不同，但优选每天约1.0-100mg/kg体重，更优选约5.0-50mg/kg体重，其取决于化合物，例如当乳腺癌或前列腺癌患者(体重40-80kg)皮下给予LH-RH衍生物作抗癌症组合物时，抑制细胞生长因子或其受体作用的药物是低分子量化合物。每天该药量1次服用或分2-3次服用。LH-RH衍生物剂量优选每天约1.0-100mg/kg体重，更优选约1.0-50mg/kg体重，其取决于化合物，例如乳腺癌或前列腺癌患者(体重40-80kg)可采用此剂量。这个剂量每天可以1次服用或分2-3次服用。当抑制细胞生长因子或其受体作用的药物是抗体时，可以通过静脉，皮下，(癌症)局部等数日内连续或间歇以通常约1-2,000m/kg/周，最好5-1,000mg/kg/周的剂量给药。

本发明的组合物可使激素药物作用维持或持续约1.5倍或更多，更可能约1.5-3倍。

而且，本发明的组合物可与另一种活性成分如化疗组合物或免疫治疗组合物一起配制。

化疗药物有烷化剂(例如环磷酰胺，异环磷酰胺)，代谢拮抗药(例如氨甲蝶呤，5-氟尿嘧啶)，抗癌症抗生素(例如丝裂霉素，阿霉素)，植物衍生的抗癌症药物(长春新碱，长春地辛，紫杉醇(taxol))，顺铂，卡铂，和依托泊甙(etoposide)。

免疫治疗药物有微生物或真菌成分(例如胞壁酰二肽衍生物，溶链菌)，具有免疫活性的多糖(香姑多糖，西佐糖(sizofiran)，云芝多糖)和基因工程技术获得的细胞因子(如干扰素，白细胞介素)。

实施例

本发明以下述非限制性工作实施例，参考实施例以及实验例作更详细的举例说明。

参考实施例1

为了在乙醚(10ml)中悬浮氢化铝锂(350mg)，将乙基4-[4-[2-[(E)-2苯乙烯基]-4-噁唑基甲氧基]苯基]丁酸酯(3.00g)的乙醚(10ml)-四氢呋喃溶液(10ml)在0℃时滴入。0℃搅拌1小时，室温搅拌1小时，加水；反应混合物用2N的盐酸酸化，用乙酸乙酯提取。用水洗涤乙酸乙酯层，并干燥(MgSO₄)，蒸馏溶剂。剩余物过硅胶柱色谱分析，用乙酸乙酯-己烷(1∶1，v/v)洗脱，产生4-[4-[2-[(E)-2苯乙烯基]-4-噁唑基甲氧基]苯基]丁醇(2.00g，74％)，从乙酸乙酯-己烷中再结晶，生成无色针状结晶，熔点是90-91℃。

参考实施例2

采用与参考实施例1同样的方法，将乙基3-[4-[2-[(E)-2-苯乙烯基]-4-噁唑甲氧基]苯基]丙酸酯还原生成3-[4-[2-[(E)-2-苯乙烯基]-4-噁唑甲氧基]苯基]丙醇(还原94％)，从乙酸乙酯-己烷中再结晶，生成无色针状结晶，熔点是95-96℃。

参考实施例3

向参考实施例2中获得的3-[4-[2-[(E)-2-苯乙烯基]-4-噁唑甲氧基]苯基]丙醇(760mg)中，于0℃滴加三丁基膦(1.01g)和1，2，4-三唑(280mg)的四氢呋喃溶液(15ml)，二乙基偶氮二羧酸盐(700mg)。加热回流1小时后，反应混合物倒入水中，乙酸乙酯提取。用水洗涤乙酸乙酯层，并干燥(MgSO4)，蒸馏溶剂。剩余物过硅胶柱色谱分析，乙酸乙酯-己烷(2∶1，v/v)洗脱，产生结晶，从乙酸乙酯-己烷中再结晶，产生1-[3-[4-[2-[(E)-2-苯乙烯基]-4-噁唑甲氧基]苯基]丙基]-1，2，4-三唑(540mg，70％)，其为无色棱状结晶，熔点108-109℃。

参考实施例4

(1)参考实施例3中的化合物 10.0mg

(2)乳糖 60.0mg

(3)玉米淀粉 35.0mg

(4)明胶 3.0mg

(5)硬脂酸镁 2.0mg

这些成分混合制成片剂。

实施例1

将参考实施例4中获得的片剂与如下方法获得的控释制剂组合。

400mg亮丙瑞林醋酸盐(由Takeda化学制剂有限公司生产)溶解在0.5ml蒸馏水中，生成水相溶剂。这种溶剂被加入4g多聚DL-乳酸[批号870818；平均分子量18000(微胶囊批号244和245)和批号880622；平均分子量18200，分散度1.76(微胶囊批号248)]的7.5ml二氟甲烷溶液中，用小型匀浆器(polytron，由瑞士Kinematica生产)乳化约60秒，生成油包水(w/o)乳剂。该乳剂冷却到15℃，注入1000ml预先冷却到15℃的0.25％聚乙烯醇水相溶剂，用小型匀浆器处理生成w/o/w乳剂。搅拌w/o/w乳剂，二氯甲烷挥发，使内部w/o乳剂固体化，然后离心收集。

将其再分散在蒸馏水中，璃心；洗涤被释放的药物，分散的组合物等。

冻干所收获的微胶囊以完全除去溶剂，脱水，生成粉剂。

实验实施例1

人前列腺癌细胞系LNCaP(ATCC(美国典型培养物保藏中心)目录号CRL1740，J.S.Horoszewicz，癌症研究(cancer res.)43：1809-1818(1983))细胞悬液5ml，接种于60mm Petri培养皿，在5％CO₂中37℃培养过夜。用含有指定浓度环丙孕酮(Sigma；目录号C-3412)的培养液替换上述培养液，5％CO₂中37℃继续培养3天。弃去培养液，用酸性异硫氰酸胍/酚/氯仿法提取每个平皿中的RNA。用这些RNA提取物作模板，以oligo-dT接头引物(TakaraShuzo)作引物合成cDNA，作为PCR反应的模板。根据受体型酪氨酸激酶区域的共有序列，即HisArgAspLeuAlaAla和SerAspValTrpSer(Hanks等，1988)合成这类激酶的特异引物。具体地，合成EGF受体样激酶的引物：5’-CA(C/T)(C/A)GGGA(C/T)(C/T)TGGC(A/T/C)GC(有义引物)和5’-A(A/G)CTCCA(A/C)AC(A/G)TC(A/G)CT(反义引物)，胰岛素受体样激酶的引物：5’-CA(C/T)(C/A)G(G/A)GAC(C/T)T(G/T)GC(A/T)GC(有义引物)和5’-A(A/G)CTCCA(A/C)ACGTC(A/C)GA(反义引物)，PDGF受体样激酶和FGF受体样激酶的引物5’-CA(C/T)(C/A)G(G/A)GAC(C/T)TGGC(A/G)GC(有义引物)和5’-A(A/G)GACCA(G/C)AC(A/G)TC(A/G)CT(反义引物)。扩增35个循环，每个循环包括95×1min(变性)，40×1min(退火)，72×1min(延伸)。PCR反应产物经琼脂糖凝胶(4％)电泳，溴化乙锭染色，照像分析，确定每种受体激酶的表达量(图1)。为了标准化，将每份样品中的每种激酶表达量以相对于该样品中β-肌动蛋白表达量的比例表示。图1的数值表示，以缺乏环丙孕酮时的表达量为1，不同时间点的表达量。

β-肌动蛋白扩增25个循环(每个循环包括95×0.5min，60×1min，72×0.5min)，引物为：5’-ATCTGGCACCACACCTTCTACAATGAGCTGCG(有义引物)，5’-CGTCATACTCCTGCTTGCTGATCCACATCTGC(反义引物)。

实验实施例2

人前列腺癌细胞系LNCaP的传代培养细胞用胰蛋白酶消化，悬浮在含10％胎牛血清(BioWhittaker)的RPMI1640培养基(Gibco BRL)中。用Coulter计数器测定该细胞悬液中细胞密度并用上述培养基调整为2×10⁴个细胞/ml。将该悬液以每孔0.5ml接种于24孔板(Becton Dickinson)，5％CO₂中37℃培养过夜。每孔加入0.5ml的含2×10^-9-2×10^-6M的环丙孕酮(Sigma；目录号C-3412)的培养液，或含有指定浓度之环丙孕酮和10mMPD153035(科学Science 265(5175)，1093页(1994)；日本生物科学，生物技术和农业化学社团1996年年会摘要号21a14(3月30日，1996，Kyoto))。在5％CO₂中37℃培养4天后，用Coulter计数器计数每孔的细胞数(图2)。

工业应用性

本发明的阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的组合物(其包括一种激素药物)能有效阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化。

Claims

1、一种阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的组合物，其包括一种激素药物。

2、根据权利要求1的组合物，其中所述激素是LH-RH衍生物。

3、根据权利要求2的组合物，其中所述LH-RH衍生物是LH-RH激动剂。

4、根据权利要求3的组合物，其中所述LH-RH衍生物是由下式所表示的肽：

5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

其中Y代表选自Dleu，DAla，DTrp，Dser(tBu)，D2Nal和DHis(ImBzl)的残基；Z代表NH-C₂H₅或Gly-NH₂，或其盐。

5、根据权利要求3的组合物，其中所述LH-RH衍生物是5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H₅或其乙酸盐。

6、根据权利要求1的组合物，其中除包括激素药物，还包括抑制细胞生长因子或其受体作用的药物。

7、根据权利要求6的组合物，其中所述细胞生长因子是①EGF或基本上有其同样活性的物质，②胰岛素或基本上有其同样活性的物质，或③FGF或基本上有其同样活性的物质。

8、根据权利要求1的组合物，其是预防/治疗前列腺癌，卵巢癌，宫颈癌或乳腺癌的药物。

9、一种应用，其使用激素药物阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化。

10、一种应用，其使用激素药物产生阻滞激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的药剂。

11、一种阻滞哺乳动物的激素依赖性癌症向激素非依赖性癌症转化的方法，包括给予该哺乳动物激素药物。