CN1321193C - 活体分枝杆菌快速鉴定试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明属生物医学检测技术领域，具体分析为一种快速鉴定活体分枝杆菌的试剂盒。该试剂盒由前处理液、分枝杆菌病毒体、稀释剂和指示平皿所组成。可在24小时内即可鉴定待检样品中是否存在活体分枝杆菌。可用于各种待检样品中的活体分枝杆菌检测。本试剂盒操作简便、不需特殊仪器设备，结果观察容易，非常适合基层卫生单位应用。

Description

活体分枝杆菌快速鉴定试剂盒

技术领域

本发明属生物医学检测技术领域，具体涉及一种快速鉴定活体分枝杆菌的试剂盒。

发明背景

分枝杆菌是一类广泛分布于自然界的细菌，多数为腐生菌，少数可使人和动物致病。近年来，国内外普遍报道分支杆菌的感染日益严重，特别是免疫功能低下患者继发感染、以及医院内感染的暴发流行显著增加。通常能引起人类感染的分枝杆菌主要有耻垢、堪萨斯、鸟、胞内、偶然、结核、龟、脓肿、海、溃疡、瘰疬等，它们可以引起人体各个器官及全身各部位的严重感染，给人体健康带来极大危害。由于细菌学检查是诊断分枝杆菌所致疾病的确诊依据，因此快速准确的分枝杆菌活体检查极为重要。

目前，传统的分支杆菌活体检查方法就是细菌培养。通常是将待检标本接种至改良罗氏培养基进行培养，待菌落生长后再依据生物学特征及生化反应多项指标综合判断。这种鉴定方法通常需时1-4周，而且操作烦琐、准确性差，因此远不能满足临床诊治的需要。急需建立快速、简便、准确的分支杆菌活体鉴定方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能快速、简便、准确地鉴定分枝杆菌活体的试剂盒。

本发明提出的鉴定分枝杆菌活体的试剂盒，由下述组份组成：

(1)前处理液：为一种含有氯化钙、氯化镁和广谱抗生素的分枝杆菌液体培养基；

(2)分枝杆菌病毒体：为一种从污水中分离的能感染高浓度活体分枝杆菌的病毒，能被感染的分枝杆菌有丁酸、偶然、胞内、金色、耻垢、脓肿、结核、龟、草分枝杆菌等；

(3)稀释剂：为1-3％的硫酸溶液；

(4)指示平皿：为含有快速生长菌的琼脂平皿。

本发明中，前处理液的分枝杆菌液体培养基可采用市售的米氏7H9培养基，其中氯化钙、氯化镁和广谱抗生素的配比关系为：在1000ml米氏7H9培养基中，氯化钙1-2克，氯化镁1-2克，广谱抗生素75-150克(例如氨苄青霉素25-50克，二性霉素B25-50克，阿洛西林25-50克等)。

本发明中，指示平皿中所含的快速生长菌可以是草分枝杆菌或金色分枝杆菌液。

本发明提出快速鉴定分枝杆菌活体的试剂盒的使用方法如下：

(1)将待检分枝杆菌处于感染态状态，并被分枝杆菌病毒体感染；

(2)将感染物经离心、洗涤，沉淀移至指示平皿上温育；

(3)根据指示平皿细菌裂解情况判定结果。

本发明采用污水中分离的分枝杆菌病毒体，并与前处理液、稀释液和指示平皿一起组成活体分枝杆菌快速鉴定试剂盒。该发明的原理是通过制备感受态细胞方式，将待检菌株处于易感状态，并被分枝杆菌病毒体感染，病毒体在感染菌中增殖、并将感染菌裂解，释放出的病毒体立即感染指示平皿中的指示菌、并使其裂解，在指示平皿上出现肉眼可见的透亮圈。如待检样品不含活体分枝杆菌，则分枝杆菌病毒体随上清液的丢弃和硫酸作用而失活，指示菌未受病毒体感染，因此指示平皿不会出现透明圈。

由于处于感受态的活体分枝杆菌易被相应的病毒体感染，而且指示菌生长快速、结果容易观察，因此本法快速、简便，非常适用于基层卫生部门。同时只有活菌才能被病毒体感染，而且感染结果是将活菌裂解，因此本法既可鉴定活体分枝杆菌，又可保护实验人员免受感染。

具体实施方式

1.前处理液的配制：在1000毫升市售的米氏7H9培养基中，分别加入氯化钙1～2克、氯化镁1～2克、氨苄青霉素25～50克、二性霉素B25～50克、阿洛西林25～50克，无菌滤膜过滤后即为前处理液。

2.指示平皿的制备：取1.5～3％浓度的熔化琼脂6～8毫升，加入到市售的一次性无菌平皿中，再加入6～8毫升的液体培养基和1～2毫升的快速生长的草分枝杆菌或金色分枝杆菌菌液，混匀、凝集成型后即为指示平皿。

3.活体分枝杆菌的快速鉴定方法：

(1)在待检样品(污水、药液、食物、工作人员的手、诊疗器械等的浸泡液或可疑患者的脓、血、便、尿、痰、穿刺液、分泌物等)中加入10～20毫升的前处理液，在每分钟8000～10000转的条件下离心5～10分钟；

(2)取出待检样品管，弃去上清，沉淀中再次加入10～20毫升的前处理液，在每分钟8000～10000转的条件下离心5～10分钟；

(3)取出待检样品管，弃去上清，吸取沉淀0.1～0.2毫升加入到含有分枝杆菌病毒体的1毫升反应管中，35-38℃温育50-70分钟；

(4)吸取1毫升稀释剂加入到上述反应管中，混匀，在每分钟5000-6000转的条件下离心5-10分钟，弃去上清；

(5)吸取沉淀30～50微升，滴于指示平皿上的某一区域，35～38℃培养15～20小时观察结果；

(6)结果判断：在指示平皿上的滴样区域出现全透或半透明圈，表明待检样品中存在活体分枝杆菌，反之为不存在活体分枝杆菌。

Claims (3)

1、一种快速鉴定活体分枝杆菌的试剂盒，其特征在于由下列成份组成：

(1)前处理液：为一种含有氯化钙、氯化镁和广谱抗生素的市售米氏7H9分枝杆菌液体培养基，在1000ml该培养基中，氯化钙1-2克，氯化镁1-2克，广谱抗生素75-150克；

(2)分枝杆菌病毒体：为一种从污水中分离的能感染高浓度活体分枝杆菌的病毒；

(3)稀释剂：为1-3％的硫酸溶液；

(4)指示平皿：为含有快速生长菌的琼脂平皿。

2、根据权利要求1所述的快速鉴定活体分枝杆菌的试剂盒，其特征在于所述指示平皿中的生长菌为草分枝杆菌或金色分枝杆菌。

3、一种权利要求1所述的快速鉴定活体分枝杆菌试剂盒的使用方法，其特征在于具体步骤如下：

(1)将待检分枝杆菌处于感染态状态，并被分枝杆菌病毒体感染；

(2)将感染物经离心、洗涤，沉淀移至指示平皿上温育；

(3)根据指示平皿细菌裂解情况判定结果。