CN1314678C - 一种从红车轴草中提取总异黄酮的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从红车轴草中提取总异黄酮的方法，其步骤是：首先取红车轴草全草干燥粉碎，加入乙醇热回流，合并回流的溶液，减压回收至无醇味；第二、减压回收后的提取液干燥，加入石油醚或溶剂油萃取，萃取后滤渣干燥；第三、干燥物中加入乙醇热回流，合并热回流的溶液，减压回收乙醇，至有结晶析出后，加入中性氧化铝，搅拌、静置至溶液被中性氧化铝完全吸附；第四、中性氧化铝吸附物中加水搅拌洗涤、过滤，滤渣真空干燥，再以水饱和乙酸乙酯溶液热回流洗脱、过滤，滤液减压回收乙酸乙酯得到浓缩液，浓缩液真空干燥得总异黄酮提取物。本发明方法易行，操作简便，成本低廉，提取物收率高。

Description

一种从红车轴草中提取总异黄酮的方法

                           技术领域

本发明涉及一种从植物中提取药用化学成份的领域，更具体涉及一种从红车轴草中提取总异黄酮的方法。

                           背景技术

红车轴草总异黄酮是从红车轴草中提取分离的，其主要作用有：预防乳腺癌、前列腺癌、结肠癌，改善骨质疏松和妇女更年期症状等。

红车轴草，拉丁名：Trifolium pratense L.为豆科(Leguminosae)车轴草属(Trifolium L.)多年生草本植物。红车轴草全草含总异黄酮成分：鹰嘴豆芽素A(Biochanin A)和B(Formonometin)、大豆异黄酮(Daidzein)、染料木素(Genistein)及其相应的苷：刺芒柄花苷(Sission)、印度黄檀苷(Ononin)、大豆黄酮苷(Daidzin)、染料木苷(Genistin)。

目前，国内外均有以红车轴草为原料提取总异黄酮制成食品供人体服用。其总异黄酮的提取工艺方法很多：

1、一般溶媒提取法：此方法多采用醇溶媒提取、干燥，所得提取物总异黄酮含量多低于20％。

2、柱层析法：此方法系在方法1的基础上，增加精制、纯化的过程，除去一些非活性成份，从而提高提取物中总异黄酮含量。现有的柱层析方法主要有两种：

其一是先用甲醇或乙醇提取红车轴草全草，过滤该提取液并浓缩，将浓缩液离心取渣；将药渣用石油醚或正己烷脱脂、干燥；用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后，析晶得到提取物A，将萃取后渣用50-90％的醇提取，回收醇得浓缩液；将所得析晶后母液及浓缩液调pH值至8-10以内，过聚苯乙烯骨架大孔吸附树脂分离，得提取物B，将提取物A和B合并，用醇再精制即得(申请专利号：03118845.1)。

其二是以含水的醇溶媒提取红车轴草，提取液回收醇溶媒至4-6倍药材体积，含醇浓度10-60％，上柱，用吸附剂体积14-16倍量20-70％醇溶液洗脱，回收洗脱液，得沉淀物，将沉淀用含醇10-80％的低级脂肪醇或丙酮分级处理，得沉淀，干燥后得总异黄酮含量为50-90％，其中刺芒柄花素含量为25-70％，鹰嘴豆芽素含量在5-25％的红车轴草提取物(申请专利号：03128286.5)。

此两种柱层析方法均可得到较高纯度的总异黄酮提取物，但因其工艺复杂，收得率低，成本高，因此难以运用于工业化生产。

                           发明内容

本发明的目的在于提供一种从红车轴草中提取总异黄酮的方法，此方法易行，操作简便，成本低廉，提取物收率高，在提取物中总异黄酮的含量(重量比)以鹰嘴豆芽素A计为50-95％。

为了实现上述任务，本发明采用以下技术措施：

其制备步骤如下：

1、取红车轴草全草干燥，粉碎，过10-100目筛得粉；

2、加入10-80％的乙醇热回流1-4次，每次乙醇用量为红车轴草粉重量的10-30倍量，每次热回流时间0.5-2小时，合并热回流溶液，减压回收至无醇味；

3、上述减压回收后的提取液干燥后得提取物，加入石油醚或溶剂油萃取1-3次，每次石油醚或溶剂油的用量按重量比为上述提取物的5-30倍量，每次搅拌0.5-2小时，温度不高于20℃，每次萃取后过滤，萃取结束后的滤渣干燥，得到干燥物；

4、在干燥物中加入50-95％乙醇热回流1-4次，每次乙醇用量按重量比为干燥物的10-30倍量，每次热回流0.5-2小时，合并热回流的溶液，减压回收乙醇到有少量结晶析出；

5、加入浓缩液重量1-5倍的100-500目中性氧化铝，搅拌1-3小时后静置1-5小时至溶液被中性氧化铝完全吸附，得到中性氧化铝吸附物，于40-60℃烘干：

6、氧化铝吸附物加水搅拌洗涤1-3次，每次用水量为氧化铝吸附物10-30倍体积，每次洗涤时间为0.5-3小时，温度不高于15℃，每次洗涤结束后过滤，滤渣于40-60℃真空干燥；

7、干燥后滤渣以3-30倍体积的水饱和乙酸乙酯溶液热回流洗脱1-5次，每次2-4小时，每次热回流结束时趁热过滤，过滤时保持滤液温度降低不超过3℃，合并滤液，减压回收乙酸乙酯至减压回收前滤液体积的1/3。

8、将步骤7所得浓缩液在40-70℃真空干燥，得总异黄酮含量不低于50％提取物。

本发明关键工艺优化步骤：

1、通过研究发现，在采用石油醚或溶剂油萃取时，如温度高于20℃，虽然能够脱去脂类杂质，但异黄酮类成份也会因部分溶于石油醚或溶剂油而损失，从而降低总异黄酮的收率，因此，在采用石油醚或溶剂油萃取时温度不宜高于20℃。

2、吸附纯化工艺

研究发现，虽然采用大孔树脂、聚酰胺等柱层析方法可得到纯度较高的异黄酮提取物，但该类材料对总异黄酮成份的吸附率较高而解吸率低，从而降低了总异黄酮的收得率。本发明采用氧化铝作为吸附剂，利用氧化铝对异黄酮类成分的吸附作用，除去非异黄酮类成分。以水饱和乙酸乙酯溶液作为洗脱液，提高了异黄酮的解吸率，提高了收得率。另外，柱层析法提取总异黄酮成本较高，对生产设备及条件要求苛刻(如柱高与柱直径的比例要求达到10∶1以上)。而利用氧化铝吸附可以在普通密闭容器内进行，所需设备简单，生产工艺也比较简化。

3.在以水饱和乙酸乙酯热回流洗脱过程中，每次过滤应保持滤液温度降低不超过3℃，否则，部分总异黄酮会因温度降低后析出而被滤掉，降低总异黄酮收得率。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：方法易行，操作简便，成本低廉，提取物收率高，适用于工业化生产。

                          具体实施方式

1、取红车轴草全草干燥，粉碎，过50目筛得粉；

2、加入60％的乙醇热回流提取2次，每次乙醇用量为红车轴草粉重量的15倍量，每次热回流时间1小时，合并每次回流的溶液后，减压回收至无醇味；

3、上述减压回收后的提取液干燥后得提取物，中加入石油醚或溶剂油萃取2次，每次石油醚或溶剂油的用量按重量比为提取物的20倍量，每次搅拌1小时，温度为12-15℃，每次萃取后过滤，萃取结束后的滤渣干燥，得到干燥物；

4、在干燥物中加入90％乙醇热回流2次，每次乙醇用量按重量比为干燥物的15倍量，每次热回流1小时，合并每次热回流的溶液；减压回收至有少量晶体析出；

5、加入浓缩液3倍重量比的300目中性氧化铝，搅拌2小时后静置3小时至溶液被氧化铝完全吸附，得到氧化铝吸附物，于55℃烘干；

6、烘干后氧化铝吸附物中加水搅拌洗涤2次，每次用水量为氧化铝吸附物20倍体积，每次洗涤时间为2小时，温度为12-15℃，每次洗涤结束后过滤，滤渣于50℃真空干燥；

7、干燥物以水饱和乙酸乙酯溶液热回流洗脱2次，每次乙酸乙酯用量按重量比为干燥物的20倍，时间为3小时，每次热回流结束时趁热过滤，过滤时保持滤液温度降低不超过3℃；合并滤液减压回收乙酸乙酯至减压回收前滤液体积的1/3，得到浓缩液；

8、浓缩液于60℃真空干燥得总异黄酮提取物。

Claims (1)

1、一种从红车轴草中提取总异黄酮的方法，包括下列步骤：

A、取红车轴草全草干燥，粉碎，过10-100目筛得粉；

B、加入浓度为10-80％的乙醇溶液热回流1-4次，每次乙醇用量为红车轴草粉重量的10-30倍量，每次热回流时间0.5-2小时，合并热回流溶液，减压回收至无醇味；

C、上述减压回收后的提取液干燥后得到提取物，加入石油醚或溶剂油萃取1-3次，每次石油醚或溶剂油的用量为提取物重量的5-30倍量，每次搅拌时间0.5-2小时，温度不高于20℃，每次萃取后过滤，干燥萃取后的滤渣，得干燥物；

D、在干燥物中加入浓度为50-95％的乙醇溶液热回流1-4次，每次乙醇用量按重量比为干燥物的10-30倍量，每次热回流0.5-2小时，合并热回流的溶液，减压回收乙醇到有结晶析出；

E、加入浓缩液重量1-5倍的100-500目中性氧化铝，搅拌1-3小时后静置1-5小时至溶液被中性氧化铝完全吸附，得到中性氧化铝吸附物，于40-60℃烘干；

F、氧化铝吸附物加水搅拌洗涤1-3次，每次用水量为氧化铝吸附物的10-30倍体积，每次洗涤时间为0.5-3小时，温度不高于15℃，每次洗涤结束后过滤，滤渣于40-60℃真空干燥；

G、干燥后滤渣以3-30倍重量水饱和乙酸乙酯溶液热回流洗脱1-5次，每次2-4小时，每次热回流结束时过滤，过滤时保持滤液温度降低不超过3℃，合并滤液，减压回收乙酸乙酯至减压回收前滤液体积的1/3；

H、将步骤G所得浓缩液在40-70℃真空干燥，得总异黄酮含量提取物。