CN1314473C - 凝胶柱装柱方法 - Google Patents
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Abstract
一种凝胶柱装柱方法，是将凝胶浆加热煮沸，并通过细长移液管在液面下将凝胶浆沿层析柱内壁均匀旋转转移到层析柱内，来制备凝胶柱。本发明通过煮沸排气和在液面下转移凝胶浆，不仅可完全除去气泡，还兼顾了溶胀和消毒，特别是用改进的细长移液管将凝胶浆沿层析柱内壁均匀旋转转移到层析柱内，使得凝胶浆表面平整，避免出现凹凸不平的现象。本方法不仅简单、省时、方便、无需特殊设备，而且装柱成功率达到100%。
Description
技术领域
本发明涉及层析分离装置，特别涉及一种凝胶柱装柱方法。
背景技术
凝胶层析法是水溶性物质的一种快速而简单的分离分级方法，广泛应用于生物化学、分子生物学和医学等相关领域，是分离提纯蛋白质、生物酶、核酸和多糖类等生物大分子物质不可缺少的技术手段。传统的装柱方法分为机械装柱法和手工装柱法，机械装柱法是采用蠕动泵将准备好的凝胶浆缓缓加入柱中，一般质量较好，但受设备条件的限制，特别是在实验室内不能被广泛应用；手工装柱法方法简单，不需特殊工具，但传统手工装柱方法有两个缺陷，一是通过减压泵脱气不容易控制，很难将凝胶颗粒内部和凝胶浆中溶解的空气完全排除干净，另外在凝胶浆向层析柱转移过程中也容易裹进气体，从而使凝胶柱中容易形成气泡；二是由于凝胶浆加入不连续、或者在贴壁加入凝胶浆时会使颗粒较大的沉降在流速较高的层析柱一侧，造成凝胶床不均匀，从而使凝胶柱床层出现裂纹，影响层析效果，因此需要丰富的装柱经验，初学者难以掌握，往往不能一次装柱成功。另外，由于凝胶颗粒自身的特点，凝胶柱子使用一段时间后，凝胶颗粒会逐渐压实，最终不能继续使用，柱子必须倒掉重装，工作强度很大。因此迫切需要一种快速、高质量的装柱方法，以节约时间，提高效率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种凝胶柱装柱方法，在不具备设备条件的基础上，实现手工一次装柱成功，以达到节约时间、节约成本和提高效率的目的。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种凝胶柱装柱方法，其特征在于将凝胶浆加热煮沸，并通过细长移液管在液面下将凝胶浆沿层析柱内壁均匀旋转转移到层析柱内，来制备凝胶柱；其具体装柱方法为：a.凝胶浆处理：将凝胶粉加入去离子水中，控制水量浸过凝胶粉2-5厘米，轻轻搅拌使凝胶粉充分被水润湿后，加热煮沸1.5-3小时以充分排气、消毒和溶胀，冷却至室温备用；b.制备凝胶柱：将层析柱垂直固定，关闭出水口，注入2/3柱体积的洗脱液；用尖端带5-15°弯度的细长移液管一边轻轻搅动准备好的凝胶浆，一边吸入凝胶浆，然后转移至层析柱，待移液管尖端伸入液面下后，缓缓沿层析柱内壁均匀旋转释放凝胶浆；在保持移液管管尖一直处于液面下的情况下，随着凝胶的加入缓缓上提移液管；待凝胶沉降一段时间，并凝胶层高度超过5cm后，打开出水口，让洗脱液流出，并使流速低于预定的洗脱速度；上部继续添加凝胶，并注意移液管尖端与层析柱中的凝胶胶面接触，以保持凝胶连续；同时在添加凝胶过程中，始终保持凝胶层面上保留洗脱液高度在5cm；当凝胶沉淀达到预定高度时，停止添加凝胶浆，即为成品。
本发明所提供的凝胶柱装柱方法，一是通过加热煮沸制备凝胶浆，可以将凝胶颗粒内部及凝胶浆液体里的气体排净，同时又使凝胶得到充分溶胀和消毒，从而延长凝胶柱使用时间，另外采用细长移液管在液面下转移凝胶浆，可完全避免传统方法中凝胶浆向层析柱转移时裹进气体的现象出现；二是利用细长移液管沿凝胶柱内壁均匀旋转加入凝胶浆，有效地避免了凝胶柱床层出现裂纹的现象发生。本方法方便、省时、效率高、效果好，不需特殊装置，成本低，而且装柱成功率达到100％。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
实施例1.a.凝胶浆处理：取硅胶粉200克加入去离子水中，水量以浸过凝胶粉2-5厘米为宜，轻轻搅拌使凝胶粉充分被水润湿后，加热煮沸2小时以充分排气、消毒和溶胀，冷却至室温备用；b.制备凝胶柱：将层析柱垂直固定，关闭出水口，注入2/3柱体积的去离子水作洗脱液；用移液管一边轻轻搅动准备好的凝胶浆，一边吸入凝胶浆，然后转移至层析柱，待移液管尖端伸入液面下后，缓缓沿层析柱内壁均匀旋转释放凝胶浆；在保持移液管管尖一直处于液面下的情况下，随着凝胶的加入缓缓上提移液管；待凝胶沉降一段时间，并凝胶层高度超过5cm后，打开出水口，让洗脱液流出，并使流速低于预定的洗脱速度；上部继续添加凝胶，并注意移液管尖端与层析柱中的凝胶胶面接触，以保持凝胶连续；同时在添加凝胶过程中，始终保持凝胶层面上保留洗脱液高度在5cm以上；当凝胶沉淀达到预定高度时，停止添加凝胶浆，即为成品。利用此凝胶柱分离经过乙醇分级沉淀后的微藻多糖组分，层析分离谱图中共出现5个峰，且相距较远，表明分离效果较好。连续使用此凝胶柱进行微藻多糖的分离，仍可达到较好的分离效果。应用过程中，层析柱中凝胶层无气泡、无裂纹，分离效果好。表明此实验方法所装凝胶柱的操作性能和稳定性均较好。
Claims (1)
1.一种凝胶柱装柱方法，其特征在于将凝胶浆加热煮沸，并通过细长移液管在液面下将凝胶浆沿层析柱内壁均匀旋转转移到层析柱内，来制备凝胶柱；其具体装柱方法为：a.凝胶浆处理：将凝胶粉加入去离子水中，控制水量浸过凝胶粉2-5厘米，轻轻搅拌使凝胶粉充分被水润湿后，加热煮沸1.5-3小时以充分排气、消毒和溶胀，冷却至室温备用；b.制备凝胶柱：将层析柱垂直固定，关闭出水口，注入2/3柱体积的洗脱液；用尖端带5-15°弯度的细长移液管一边轻轻搅动准备好的凝胶浆，一边吸入凝胶浆，然后转移至层析柱，待移液管尖端伸入液面下后，缓缓沿层析柱内壁均匀旋转释放凝胶浆；在保持移液管管尖一直处于液面下的情况下，随着凝胶的加入缓缓上提移液管；待凝胶沉降一段时间，并凝胶层高度超过5cm后，打开出水口，让洗脱液流出，并使流速低于预定的洗脱速度；上部继续添加凝胶，并注意移液管尖端与层析柱中的凝胶胶面接触，以保持凝胶连续；同时在添加凝胶过程中，始终保持凝胶层面上保留洗脱液高度在5cm；当凝胶沉淀达到预定高度时，停止添加凝胶浆，即为成品。
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