CN1313161C - 结直肠癌放射免疫导向手术药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种结直肠癌放射免疫导向手术药物，其特征在于，所述的药物是由CL58抗体经标记、冻干后制得。本药物的最大特点是临床可以随时使用，避免了以前制备导向手术药物受标记条件、放射性同位素来源、以及标记环境的等条件的限制，克服了导向手术推广过程中受放射性药物限制的缺点。

Description

结直肠癌放射免疫导向手术药物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种放射免疫导向手术药物的制备方法，具体地说，本发明涉及一种结直肠癌放射免疫导向手术药物的制备方法。
背景技术
50％接受根治性手术的结直肠癌患者最终会复发，其中主要原因是难以发现的微转移灶。放射免疫导向手术(RIGS，RadioImmunoGuided Surgery)为解决手术台上微转移灶的判断提供了定性的标准，为手术彻底切除微转移灶提供了可靠的手段。
RIGS是在放射免疫显像(RII，RadioImmunImaging)定位诊断的基础上，使用手持式探测器术中探测肿瘤及其转移淋巴结的技术。目前在结直肠癌的RIGS应用中，多采用杂交瘤技术制备的单克隆抗体如B72.3和CC49。使用的放射性标记核素为111In和125I和131I等。
目前使用的放射性核素标记的抗体进行结直肠癌的RIGS药物均为临时使用时，临时标记。这存在着很大的临床使用不便。它包括放射性核素的预定，如果要进口还需要等上2-4周，完全不利于及时给病人手术，同时放射性药物的标记受时间、标记场所和放射性药物操作者的限制，大大影响RIGS的开展和推广应用。发展一种可以较长时间保存、可以满足临床随时使用要求、不受标记场所限制、病人随到随时使用、灵活方便的用于结直肠癌RIGS的药物将给临床医生进行RIGS带来极大的方便，同时可以第一时间给患者进行给药并及时进行手术。
发明内容
本发明的发明目的在于提供随时使用的结直肠癌放射免疫导向手术药物的制备方法。
为实现上述目的，本发明提供了一种结直肠癌放射免疫导向手术药物，其特征在于，所述的药物是由CL58抗体经标记、冻干后制得。
本发明还提供了一种上述药物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)放射性的标记：在CL58抗体中加入缓冲溶液调pH值至7.4，摇匀后，加入Na125I溶液，再加入N-溴代琥珀酰亚胺，摇匀，充分反应后，加入人血清白蛋白终止反应，并用PD-10柱纯化，得到标记纯化后的抗体；
(2)标记抗体的纯化：在标记前，取Sigma公司生产的PD-10柱一根，用p7.2的0.01M的磷酸缓冲溶液25ml饱和淋洗该柱，并用10mg的人血清白蛋白饱和柱子，然后待用。标记后的抗体上柱纯化，体积不超过2.5ml，不足2.5ml的上住后用pH7.2的0.01M的磷酸缓冲溶液补足，弃之收集的该2.5ml淋洗液，然后再用2.5ml的pH7.2的0.01M的磷酸缓冲溶液淋洗，收集该淋洗液2.5ml，即为最终标记的产品。
(3)标记抗体的冻干：取标记纯化后的抗体，加入保护剂、成型剂或多糖后冷冻干燥即可。
其中所述的缓冲溶液为磷酸缓冲液；所述的保护剂选自以下物质：人血清白蛋白、VC、人IgG和其它无关蛋白质；所述的成型剂选自以下物质：尿素、蔗糖、果糖等；所述的多糖选自以下物质中的一种或多种：甘露醇、蔗糖、果糖等。
本药物的最大特点是临床可以随时使用，避免了以前制备导向手术药物受标记条件、放射性同位素来源、以及标记环境的等条件的限制，克服了导向手术推广过程中受放射性药物限制的缺点。
附图说明
图1是注射125I-CL58后荷人结肠癌CL187裸鼠的T/NT比值随时间的变化图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1：
放射性的标记：取CL58抗体1.0mg(5.0mg/ml)加入0.1mlpH7.4磷酸缓冲溶液(PB)，摇匀后，加入185MBq Na125I溶液，然后加入12-16μg的NBS，轻轻摇动，反应至合适时间后，加入20mg的HSA终止反应。测定标记率，并用PD10柱纯化。
标记抗体的冻干：取标记纯化后的抗体，其标记抗体的比活度为3mCi/mg，抗体浓度为0.6mCi/ml，加入保护剂人血清白蛋白(HSA)，HSA含量为4mg/ml，和适量的甘露醇。分装到干净的西林瓶中，每瓶0.5ml，采用Dura-DryTM冻干机冷冻干燥，24h后冻干完成。然后测定冻干的标记抗体的溶解性、抗体活性和抗体的聚合情况，以及放置不同时间后标记抗体的脱碘率和活性变化并进行SDS-PAGE电泳分析。
冻干后的样品成白色块状，轻轻抖动成蓬松的粉末状。用0.5ml的蒸馏水溶解成淡黄色的透明溶液(黄色考虑为HSA的颜色)，pH为7.2左右。放置30d后游离碘含量为8％(n＝10)左右。
实施例2：
(1)放射性的标记：在CL58抗体中加入磷酸缓冲溶液调pH值至7.2，摇匀后，加入111MBqNa125I溶液，再加入14μgN-溴代琥珀酰亚胺，摇匀，充分反应后，加入人血清白蛋白终止反应，并用PD10柱纯化得到标记纯化后的抗体；
(2)标记抗体的冻干：取标记纯化后的抗体，加入人血清白蛋白后冷冻干燥即可。
实验例1：
冻干的标记抗体的动物体内分布研究：冻干后的样品用0.5ml蒸馏水溶解后，在用无菌的pH7.2磷酸缓冲溶液稀释，然后给荷CL-187人结肠癌裸鼠尾静脉注射冻干的标记抗体125I-CL58，注射体积0.1ml，放射性活度为370KBq，抗体含量为3.3μg。同时在用药前3天给裸鼠饮用1％的KI水以封闭甲状腺。于注射后1d、3d、5d和7d等从眼球取血(每组5只)，扭断颈椎至死，解剖，取心、肝、脾、肾、肺、胃、肠、肌肉、骨骼和肿瘤，称重，并测定放射性计数，计算ID％/g和T/NT比值。具体体内分布结果见表1。
从表1我们可以看出：在注射冻干的标记抗体后24h肿瘤摄取就比其它各脏器组织中的放射性摄取高，T/NT均大于1。在注射125I-CL58后在72小时肿瘤摄取达到最高，ID％/g高达为14.7％。到用药后7d肿瘤摄取仍高达11.5％，T/NT均大于3.0以上(见图1)。这表明冻干后的标记样品保持了很高的生物活性，冻干样品具有很好的肿瘤靶向性。随着时间的延长，T/NT越来越高。
荷瘤鼠显像：取荷人肠癌细胞CL187裸鼠，当瘤子直径约0.5cm时，用药前3天给饮用1％的KI水以封闭甲状腺，然后尾静脉注射标记抗体0.1ml，放射性活度约为0.1mCi，于注射后1d、2d、3d、4d和7d于西门子的ECT ICON下进行图像采集，能峰为51keV(因仪器的最低能峰为51keV，能窗为80％，采集矩阵为128×128，图像放大为3.20，进行裸鼠正位显像，观察肿瘤摄取变化和全身分布情况。其显像结果见图2(箭头所示为肿瘤)，由图可见，注射冻干的标记抗体后24h，肿瘤就能清晰显像，随着时间的推移，肿瘤显像越来越清晰，到7d后几乎就只有肿瘤显像，表明冻干后的标记抗体具有很好的生物活性肿瘤靶向性，为该冻干药物进行肠癌的RIGS提供了有力的药物支持。
表1. 125I标记的抗CEA单抗CL58的动物体内分布(荷CL187肠癌
                    细胞裸鼠，N＝5)
ORGAN   24h   48h   72h   168h
血   9.32±1.16   7.45±1.14   5.6±1.34   3.39±0.13
    心   2.52±0.27   1.85±0.42   1.42±0.26   0.89±0.12
    肝   2.73±0.25   2.40±0.72   1.24±0.24   0.96±0.2 1
    脾   2.56±0.23   2.79±1.22   1.11±0.28   0.92±0.19
    肾   2.44±0.40   1.74±0.19   1.26±0.07   0.84±0.05
    肺   3.63±0.54   3.24±0.99   2.39±1.02   1.67±0.13
胃 1.23±0.31 0.92±0.24 0.66±0.10 0.43±0.05
    肠   1.16±0.11   0.77±0.36   0.63±0.11   0.38±0.04
    肌肉   0.61±0.11   0.79±0.45   0.45±0.09   0.28±0.02
    骨   1.25±0.18   1.23±0.34   0.68±0.20   0.50±0.04
    肿瘤   10.38±5.4   14.01±3.11   14.70±2.10   11.56±0.90
注射125I-CL58后荷人结肠癌CL187裸鼠的T/NT比值随时间的变化见图1。
文献：
1.99mTc/188Re标记的抗CEA单抗CL58及其生物分布研究，中华核医学杂志，Vol 20，No5：p228-229(2000)；
2.CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODY CL58AGAINST CARCINOEMBRYONIC ANTIGEN (CEA) AND STUDYOF ITS BIODISTRIBUTION。Chinese Journal of CancerResearch，2002，Vol.14(2)：p108-112；
3.人结直肠癌粘膜下注射-(125)I标记抗CEA单抗CL58放射免疫导向手术的研究，中华普通外科杂志，2002，Vol7，No.10：p599-601；
4.Clinical Application of Radioimmunoguided Surgery inColorectal Cancer Using 125I-LabeledCarcinoembryonic Antigen-Specific MonoclonalAntibody Submucosally.Diseases of the Colon & Rectum.46(12)：1659-1666，December 2003.

Claims (6)

1、一种结直肠癌放射免疫导向手术药物，其特征在于，所述的药物是由CL58抗体经标记、冻干后制得。
2、如权利要求1所述药物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)放射性的标记：在CL58抗体中加入缓冲溶液调pH值至7-8，摇匀后，加入Na125I溶液，再加入N-溴代琥珀酰亚胺，摇匀，充分反应后，加入人血清白蛋白终止反应，并用PD-10柱纯化得到标记纯化后的抗体；
(2)标记抗体的冻干：取标记纯化后的抗体，加入保护剂后冷冻干燥即可。
3、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的缓冲溶液为磷酸缓冲液。
4、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的保护剂选自以下物质：人血清白蛋白、VC、人IgG。
5、如权利要求2所述的制备方法，其中步骤(2)冷冻干燥前还加入成型剂。
6、如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的成型剂选自以下物质：尿素、蔗糖、果糖。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1191490A (zh) * 1995-07-27 1998-08-26 基因技术股份有限公司 稳定等渗的冻干蛋白制剂
CN1244805A (zh) * 1996-11-19 2000-02-16 罗赫诊断器材股份有限公司 冷冻干燥的稳定的单克隆或多克隆抗体药物制剂

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1191490A (zh) * 1995-07-27 1998-08-26 基因技术股份有限公司 稳定等渗的冻干蛋白制剂
CN1244805A (zh) * 1996-11-19 2000-02-16 罗赫诊断器材股份有限公司 冷冻干燥的稳定的单克隆或多克隆抗体药物制剂

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
188Re-CL58、131I-chTNT放射免疫治疗的临床研究 丁勇等，中国肿瘤临床，第31卷第1期 2004 *
188Re-CL58、131I-chTNT放射免疫治疗的临床研究 丁勇等，中国肿瘤临床，第31卷第1期 2004;188Re-CL58多次小剂量RIT初探 丁勇等，同位素，第17卷第3期 2004;99Tcm/188Re标记抗CEA单抗CL58及其生物分布研究 杨志等，中华核医学杂志，第20卷第5期 2000;不同冷冻保护剂对外周血干细胞保存的研究 张俊萍等，癌症，第20卷第10期 2000;人结直肠癌粘膜下注射125I标记抗CEA单抗CL58放射免疫导向手术的研究 顾晋等，中华普通外科杂志，第17卷第10期 2002 *
188Re-CL58多次小剂量RIT初探 丁勇等，同位素，第17卷第3期 2004 *
99Tcm/188Re标记抗CEA单抗CL58及其生物分布研究 杨志等，中华核医学杂志，第20卷第5期 2000 *
不同冷冻保护剂对外周血干细胞保存的研究 张俊萍等，癌症，第20卷第10期 2000 *
人结直肠癌粘膜下注射125I标记抗CEA单抗CL58放射免疫导向手术的研究 顾晋等，中华普通外科杂志，第17卷第10期 2002 *

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