CN1309831C - 牛催乳素基因组序列、含其基因的载体及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了牛的催乳素基因组核苷酸序列、利用牛催乳素基因组DNA和cDNA构建的载体、由这些载体转染的细胞以及载体和细胞的应用。本发明所提供的牛催乳素基因组、含其基因的载体和由载体转染的细胞，可以用于科学研究，应用于基因工程领域和转基因工程领域，也可以用于畜牧业以提高家畜的产奶质和量，还可用于转基因动物乳腺生物反应器，以提高转基因动物乳腺生物反应器中目的基因产品的质和量。

Description

牛催乳素基因组序列、含其基因的载体及其应用

本发明属基因工程领域和转基因工程领域，具体涉及一种新的牛催乳素基因核苷酸序列、利用牛催乳素基因组DNA和cDNA构建的载体、由这些载体转染的细胞以及载体和细胞的应用。

牛的催乳素(bovine Prolactin；bPRL)是牛腺垂体分泌的单链多肽类激素。1928年Stricker等用牛腺垂体提取物导致兔泌乳，提示腺垂体中含有催乳的活性物质。(Stricker P，Gruter R1928.Action du lobe anterieur de l′hypophyse sur la monteelaiteuse.C R soc Biol 99：1978-1980)Riddle等根据该活性物质的特性命名为催乳素(prolactin，PRL)。(Riddle O，Bates RW，andDykshorn SW.1933.The preparation，identification and assay ofprolactin-a hormone of anterior pituitary.Am J physiol105：191-216)。随后在鱼类、两栖类和哺乳类(鼠、猫、兔、羊、牛、人)动物的腺垂体组织中均分离、纯化和鉴定了相应的催乳素。

PRL生物学功能非常广泛，以往的文献报告(Nicoll CS，Bern H.1972.On the actions of PRL among the vertebrates：is there acommon denominator？In：Wolstenholme G，Knight J，editors.Lactogenic Hormone.London：Churchill Livingstone，299-327)，在各种脊椎动物中PRL的生物学作用多达85种，这比其它垂体激素生物学作用的总和还多。近期文献报导(Bole-Feysit C，Goffin V，Edery M et al.，1998.Prolactin and its receptor：actions，signaltransduction pathways and phenotypes observed in PRL receptorknockout mice.Endocr Rev 19：225-268)PRL的生物学作用至少在300种以上，其中主要集中在：(1)乳腺相关的功能：PRL对于哺乳动物的乳腺发育和乳汁生成、发动和维持泌乳是必不可少的激素；(2)生殖相关的功能；(3)免疫相关的功能；(4)生长代谢及其它功能等。

牛PRL相对分子质量为23000-24000，初始的翻译产物为229个氨基酸的多肽，成熟的多肽含有199个氨基酸。在PRL分子的氨基端、羧基端以及中间区有3对半胱氨酸之间的二硫键，使PRL分子形成3个环。垂体中PRL主要相对分子质量为23000，但在大多数哺乳动物中包括牛的体内存在一些与其本源PRL(native PRL)分子大小、结构不同的异型，这些异型PRL的结构和生理学功能有待于更深入的研究。

牛PRL基因位于22号染色体，长度超过10Kb。与其它物种基因结构相似，编码区具有5个外显子、4个内含子，第1、部分2外显子编码信号肽，部分2，第3、4、5外显子编码成熟的PRL的多肽分子。其内含子的长度远远大于外显子，成熟的mRNA全长907bp。

在本发明之前，牛PRL基因cDNA序列已经公布(Genebank)，全长907bp，但牛PRL基因全长未见报告，用牛PRL基因(GenomicDNA，cDNA)构建载体、特别是乳腺特异表达载体未见报告，用牛PRL基因(Genomic DNA，cDNA)载体转染细胞以及建立转基因动物模型未见报告。

本发明的目的在于提供全长牛催乳素基因组DNA，并提供利用牛PRL基因构建的载体，由载体转染的细胞，以及载体、细胞的应用。

在本发明中，牛PRL基因全长核苷酸序列是通过以下方法得出的：以牛外周血DNA为模板，用二对(A₁/A₂、B₁/B₂)核苷酸为引物：寡核苷酸A₁：5′-CCACTGTCACTTCCCCAGTATGAAC-3′为正向引物，寡核苷酸A₂：5′-GCATGAGCGCTCTAAGATGATGTA-3′为反向引物；寡核苷酸B₁：5′-CTCAGAGAAGTTTGCCAGGGAATG-3′为正向引物，寡核苷酸B₂：5′-ACATCATCTTAGAGCGGCTCATGC-3′为反向引物，采用Long-PCRKit(Perkin Elemer公司)进行PCR扩增。PCR反应条件为：98℃1min；(94℃，15sec；65℃，8min)*16；(94℃，15sec；65℃，8min，增加15sec/循环)*12；72℃，10min。然后电泳检测目的片段。

将上面获得PCR扩增产物A₁/A₂、B₁/B₂分别与pGEM-T载体(Promega公司)连接，常规方法转染大肠杆菌Top 10F′宿主菌感受态细胞，质粒小量扩增，碱裂解法提取质粒。取小量提取的质粒，分别用NotI(New England Bio公司)、ApaI(Amersham Pharmacia Bio公司)酶切初步鉴定，ABI370自动测序仪(Perkin-Elemer公司)测序，分别获得5764bp和4102bp二个bPRL片段。

通过Internet站点Webcutter查询经测序bPRL序列酶谱图。选择单一酶切位点(BsrBI：GAGCGG)，用BsrBI，NotI、ApaI双酶切经上述测序的二片段以及pcDNA3.1(+)表达载体(Invitrogen公司)，T4连接酶(New England Bio公司)将经酶切的两个片段同时插入到pcDNA3.1(+)表达载体上，经ABI370对构建的三处接头测序，结果正确无误，获得如SEQ ID No：1所示的9389bp的牛PRL全长基因。

为了验证本发明所分离的牛PRL基因序列的正确性，本发明利用获得的基因序列，进行了牛PRL cDNA的序列克隆，并将获得的cDNA序列与Genebank中公布的bPRL cDNA序列进行比较。首先构建pcDNA3.1(+)的启动子表达的bPRL Genomic DNA表达载体，将非洲绿毛猴肾细胞COS-7(中科院细胞所提供)按常规方法复苏、传代、培养，然后DOTAP脂质体介导bPRL Genomic DNA表达载体转染COS-7细胞。经培养72小时，收集转染bPRL Genomic DNA的COS-7细胞，提取总RNA，采用RT-PCR Kit(Gibeo BRL)进行逆转录PCR。以逆转录的cDNA为模板，用能覆盖bPRL cDNA全部编码序列的寡核苷酸作为引物：寡核苷酸C₁：：5′-ATAGGACGAGAGCTTCCTGGTGA-3′为正向引物，寡核苷酸C₂：5′-CTCAGAGAAGTTTGCCAGGGAATG-3′为反向引物，进行RT-PCR。C₁/C₂的PCR反应条件为：94℃ 5min；(94℃ 1min，65℃45sec，72℃ 1min)*28个循环，72℃ 10min。电泳检测得到804bp bPRLcDNA片段。以上获得的PCR扩增产物C1/C2与pGEM-T载体(Promega)连接，按常规方法转染JM109宿主菌感受态细胞，质粒小量扩增，碱裂解提取质粒，取小量提取的质粒，分别用PvuII、NotI、AvaII(均为New England Bio公司)酶切鉴定，经ABI370自动测序仪测序，证实C1/C2片段804bp(核苷酸序列如SEQ ID No：2所示)，包括全部的编码区，与Genebank中公布的bPRL cDNA序列完全一致。

利用本发明所提供的牛PRL Genomic DNA或者cDNA，与常规的或者特别构建的表达质粒相结合，可以成功构建多种牛PRL基因表达载体。本发明利用pcDNA3.1(+)的pCMV和pcDNA3.1(-)的pCMV分别与bPRL基因组DNA以及bPRL基因cDNA构建成功由pcDNA3.1(+)的pCMV启动表达的bPRL基因组DNA的表达载体、由pcDNA3.1(+)的pCMV启动表达的bPRL基因cDNA的表达载体、由pcDNA3.1(-)的pCMV启动表达的bPRL基因组DNA的表达载体、由pcDNA3.1(-)的pCMV启动表达的bPRL基因cDNA的表达载体。

利用本发明所提供的牛PRL Genomic DNA或者cDNA，与常规的或者特别构建的乳腺表达质粒相结合，特别适合构建bPRL基因乳腺表达载体。本发明构建了山羊β-酪蛋白基因乳腺表达载体：从山羊血白细胞中提取基因组DNA，参照绵羊β-酪蛋白(β-casein)基因的序列，利用引物设计软件Oligo 4.0辅助设计了5组扩增引物，通过PCR分段扩增山羊β-酪蛋白5’端片段，包括5’端上游以及外显子1、2和内含子1共6608bp的DNA序列，并通过点突变使密码子ATG突变为AAG，PCR产物经DNA限制性酶切位点鉴定和测序分析后，依次进行克隆及连接，从而得到具有SEQ ID No：3核苷酸序列的山羊β-酪蛋白基因乳腺表达载体。本发明利用构建的山羊β-酪蛋白基因乳腺表达载体，结合本发明所提供的牛PRL Genomic DNA或者cDNA，再结合其他的表达质粒，可以构建多种bPRL基因乳腺表达载体，如由pcDNA3.1(+)或pcDNA3.1(-)的pCMV和山羊β-酪蛋白基因5’端6608bp序列共同启动表达的乳腺组织特异的bPRL基因组DNA或cDNA的表达载体。

利用本发明所提供的牛PRL Genomic DNA或者cDNA，与特异性乳腺表达载体结合，或/和其他表达质粒结合，再结合其他的人或动物的目的基因，可以构建多种多样的共同表达的特异性乳腺表达载体。结合牛PRL Genomic DNA或者cDNA和其他目的基因的共同表达的特异性乳腺表达载体，可以提高利用转基因动物乳腺生物反应器生产的目的基因产品的质和量。发明人据此构建了由pcDNA3.1(-)的pCMV和山羊β-酪蛋白基因5’端6608bp序列共同启动表达的乳腺组织特异的人乳铁蛋白基因cDNA和pcDNA3.1(-)的pCMV启动的bPRL基因cDNA的共表达载体、由pcDNA3.1(-)的pCMV和山羊β-酪蛋白基因5’端6608bp序列共同启动表达的乳腺组织特异的人乳球蛋白基因cDNA和pcDNA3.1(-)的pCMV启动的bPRL基因组DNA的共表达载体、由pcDNA3.1(+)的pCMV和山羊β-酪蛋白基因5’端6608bp序列共同启动表达的乳腺组织特异的人凝血因子IX基因cDNA和pcDNA3.1(+)的pCMV启动的bPRL基因cDNA的共表达载体、由pcDNA3.1(+)的pCMV和山羊β-酪蛋白基因5’端6608bp序列共同启动表达的乳腺组织特异的人血清白蛋白基因cDNA和pcDNA3.1(+)的pCMV启动的bPRL基因组DNA的共表达载体等。

为了证实本发明所提供的牛PRL基因和各种载体的有效性和实用性，本发明选择了部分载体，采用脂质转染法，转染非洲绿毛猴肾细胞COS-7和孕中期小鼠乳腺上皮细胞HC-11。经细胞培养，提取RNA，进行RT-PCR扩增，目的片段测序证实，证明了在mRNA水平上的表达。同时通过酶联免疫实验，证明了在蛋白质水平上的表达。

为了进一步证实本发明的实用性，发明人通过转基因技术建立了由pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)的pCMV和山羊β-酪蛋白基因5’端6608bp序列共同启动表达的bPRL Genomic DNA和cDNA表达载体整合的转基因小鼠。经PCR和Southern blot印记杂交检测证实，转基因小鼠体内有bPRL基因整合。

本发明所提供的牛催乳素基因组、含其基因的载体和由载体转染的细胞，可以用于科学研究，也可以用于畜牧业以提高家畜的产奶质量，还可用于转基因动物乳腺生物反应器，提高转基因动物乳腺生物反应器中目的基因产品的质和量。

本发明中，以上所述和以下的实施例中，所使用的技术，包括基因测序、PCR扩增与检测、细胞转染、载体构建、转基因等分子生物学技术，以及细胞培养、检测技术等，除有特别说明的，均为本领域内的技术人员已知的常规技术；所使用的仪器设备、试剂、质粒和载体、细胞株等，除非是本说明书中特别注明，均为一般本领域的研究和技术人员可以通过公共途径获得的。

以下结合具体的实施例，对本发明做进一步的阐述。这些实施例仅用于对本发明做说明而不是对本发明的限制。

实施例1：

bPRL的Genomic DNA序列的克隆和测定

1.PCR扩增

以牛外周血DNA为模板，二对(A₁/A₂；B₁/B₂)核苷酸为引物：

寡核苷酸A₁：5′-CCACTGTCACTTCCCCAGTATGAAC-3′为正向引物

寡核苷酸A₂：5′-GCATGAGCGCTCTAAGATGATGTA-3′为反向引物

寡核苷酸B₁：5′-CTCAGAGAAGTTTGCCAGGGAATG-3′为正向引物

寡核苷酸B₂：5′-ACATCATCTTAGAGCGGCTCATGC-3′为反向引物

采用Long-PCR Kit进行PCR扩增。PCR反应条件为：98℃ 1min；(94℃，15sec；15℃，8min)*16；(94℃，15sec；65℃，8min，增加15sec/循环)*12；72℃，10min

电泳检测目的片段。

2.PCR产物的测序

将上面获得PCR扩增产物A₁/A₂、B₁/B₂分别与pGEM-T载体连接，按常规方法转染大肠杆菌Top 10F′宿主菌感受态细胞，质粒小量扩增，碱裂解法提取质粒。取小量提取的质粒，分别用NotI(New EnglandBio公司)、ApaI(Amersham Pharmacia Bio公司)酶切初步鉴定。ABI370自动测序仪(Perkin-Elemer公司)测序。分别获得5764bp和4102bp二个bPRL片段。

实施例2：

bPRL genomic DNA二个片段连接：

通过Internet站点Webcutter查询测序bPRL序列酶谱，获得全长的酶谱图。选择单一酶切位点(BsrBI：GAGCGG)，用BsrBI，NotI、ApaI双酶切经上述测序的二片段以及pcDNA3.1(+)表达载体(Invitrogen公司)，T4连接酶(New England Bio公司)将经酶切的两个片段同时插入到pcDNA3.1(+)表达载体上，经ABI370对构建的三处接头测序，结果正确无误，获得如SEQ ID No：1所示的9389bp的牛PRL全长基因。

实施例3

bPRL cDNA的序列克隆和测定

1.真核细胞的转染

对非洲绿毛猴肾细胞COS-7复苏、传代、培养，DOTAP脂质体介导由pcDNA3.1(+)的启动子表达的bPRL Genomic DNA表达载体转染COS-7细胞，经培养72小时，收集COS-7细胞。

2.RT-PCR

收集转染bPRL Genomic DNA的COS-7细胞，提取总RNA，采用RT-PCR Kit(Gibco BRL)进行逆转录PCR。用能覆盖bPRL cDNA全部编码序列的寡核苷酸作为引物：

寡核苷酸C₁：：5′-ATAGGACGAGAGCTTCCTGGTGA-3′为正向引物，

寡核苷酸C₂：5′-CTCAGAGAAGTTTGCCAGGGAATG-3′为反向引物。

C1/C2的PCR反应条件为：94℃ 5min；(94℃ 1min，65℃ 45sec，72℃ 1min)*28个循环，72℃ 10min。电泳检测得到804bp bPRL cDNA片段。

3.PCR产物测序

将以上获得的PCR扩增产物C1/C2与pGEM-T载体(Promega)连接，按常规方法转染JM109宿主菌感受态细胞，质粒小量扩增，碱裂解提取质粒，取小量提取的质粒，分别用PvuII、NotI、AvaII(均为New England Bio公司)酶切鉴定，经ABI370自动测序仪测序，C1/C2片段804bp，包括全部的编码区，核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。

实施例4：

乳腺特异的表达载体构建：

将克隆测序正确的bPRL Genomic DNA(cDNA)，用NotI，BamHI(NewEngland Bio公司)，ApaI(Amershem公司)双酶切，同样酶切含有山羊β-酪蛋白基因5′端6608bp(β6608：P1A3)的载体DNA及pcDNA3.1质粒，电泳回收目的片段，用T4连接酶(New England Bio公司)将上述片段一次有顺序地装载到pcDNA3.1表达载体中。形成pcDNA3.1/P1A3+BP1-4和pcDNA3.1/P1A3+BPE(BP1-4：系指bPRL genomicDNA；BPE：系指bPRL cDNA)。按常规转化、质粒扩增、提取，经ApaI、NotI、BamHI(来源同前)、XhoI(New England Bio公司)酶切鉴定正确，送经酶切鉴定正确克隆子对连接处测序，结果正确。

实施例5：

共表达的表达载体构建

将克隆测序正确的bPRL cDNA酶切装入pcDNA3.1表达载体中，用SalI(NEB公司)酶切，再将含pCMV-BPE-BGH pA单元转入pSL301质粒。对已经构建鉴定的pcDNA3.1/P1A3.Lactoferrin(Lactoferrin：人乳铁蛋白基因cDNA)和pcDNA3.1/P1A3.FIX(人凝血因子IX基因cDNA)的表达载体(上海医学遗传研究所提供)及pSL301/pCMV-BPE-BGH pA用BssHII(TakaRa公司)酶切，电泳回收目的片段，将pCMV-BPE-BGH pA的表达单元连接到pcDNA3.1/P1A3.Lactoferrin和pcDNA3.1/P1A3.FIX载体的BssHII位点，形成共表达的载体。

实施例6

bPRL基因在真核细胞中的表达

1.转染COS-7细胞株：

按常规细胞培养。pcDNA3.1/P1A3+BP1-4和pcDNA3.1/P1A3+BPE质粒转染COS-7细胞是采用DOTAP(BM公司)脂质体转染法，转染COS-7细胞72小时，收集细胞的上清液，进行ELISA测定，证明是有bPRL表达。收集COS-7细胞，提取总RNA，按实施例3之2进行RT-PCR，证明在mRNA水平是有表达。

2.转染HC-11细胞株：

pcDNA3.1/P1A3+BP1-4，pcDNA3.1/P1A3+BPE，pcDNA3.1/P1A3Laf+BPE和pcDNA3.1/P1A3FIX+BPE质粒转染HC-11细胞是采用脂质体转染法，按生长期培养、休克期培养及诱导期培养三种要求进行培养HC-11细胞，转染HC-11细胞72小时，收集细胞的上清液，进行ELISA测定，证明是有bPRL表达。收集HC-11细胞，提取RNA，按实施例3之2进行进行RT-PCR，检测证实在mRNA水平上有表达。

实施例7：

转基因小鼠的建立

pcDNA3.1/P1A3+BP1-4，pcDNA3.1/P1A3+BPE的质粒，QIAquick公司Kit提取质粒，纯化定量测定，供显微注射。按常规进行转基因小鼠的制备程序。现已建立的转基因小鼠，经PCR和Southern blot印记杂交检测证实，其体内有bPRL基因整合。

附图说明：

图1是牛催乳素基因组序列构建图。

图2是pcDNA3.1(+)的pCMV和山羊β-酪蛋白基因5’端6608bp序列共同启动表达的乳腺组织特异的牛催乳素基因组DNA表达载体构建图。

图3是pcDNA3.1(-)的pCMV和山羊β-酪蛋白基因5’端6608bp序列共同启动表达的乳腺组织特异的牛催乳素基因cDNA表达载体构建图。

图4是pcDNA3.1(-)的pCMV和山羊β-酪蛋白基因5’端6608bp序列共同启动表达的乳腺组织特异的人乳铁蛋白基因cDNA和pcDNA3.1(-)的pCMV启动的牛催乳素基因cDNA的共表达载体构建图。

                          序列表

(1)一般资料：

   (i)申请人：

      (A)名称：上海滔滔转基因工程股份有限公司

      (B)地址：上海市北京西路1277号1209室

      (C)邮政编码：200040

      (D)电话：021-62793980

      (E)传真：021-62894066

   (ii)发明名称：牛催乳素基因组序列、含其基因的载体及其应用

   (iii)序列数目：3

(2)SEQ ID No：1的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：9389碱基

      (B)类型：核酸

      (C)拓扑结构：线形

   (ii)分子类型：核苷酸

   (iii)序列描述：SEQ ID No：1

   1   CCACT GTCAC TTCCC CAGTA TGAAC TCCCT AAAGT

  36   TAGGG GTGAG TTTTG TGCTC ATTGT AGAAG AGAGG

  71   GCAAC GTATG TTGGA GGATT CATTT TCCAG CCCTC

 106   TTCAC ATCCC TCCTG ATTTC TCTTG AAGTG ATAAA

 141   CATTT CGGTA TCTAA CTTGA CTAAT TCTAT ATCCT

 176   TGACA TTTAA ACTCC CCATC CCACT GTTTC TCAAT

 211   CTGGG GACGA AAGAT ATAAC TTTAC ATACA TGTTA

 246   AAATC AAAAG ACTTA TGTGA AAATG CACAT TTTAC

 281   CACAG AGATA TATCC TTTTA GAAAG GACAA AACAG

 316   AATGT GTAAA AATCA AGAAA AAAAA ATGAG GAAAA

 351   TGTAT TGAGA GTATA ACAGG AACTG AAAAT CTTAC

 386   TTACT CATCC TTATT CTATA TTTCT TAGTA TTTAG

 421   TGTGT AAATT TTGAA ATCTT GACTT CAGCC AGCAA

 456   TTTTG AATGA GAATA AAATA CTCTT TGATA ATACA

 491   TGAGA CACCT AAGTG AGAGA TAATG CTATA TTCAA

 526   GAAAC TGCAG AGAAA TAAAG GCAAA TGTTA CAAGA

 561   AATGA CTGCT ATAAT TTTAT AGTTC CTCTA ACTCA

 596   AACTA GTCTC CAGAT CTCAC CATCA TTATC TCTCT

 631   CATTT CCTTT CAGTC TAATT AATCA AAATC CTTCC

 666   TAGAT GTTCA TTTCT GGTCA GTATG TCTTC CTGAA

 701   TATGA ATAAG AAATA GAATA CCATT CAATG TTTGA

 736   AATTA TGGGG GTAAT CTCAA TGACG GAAAT AGATG

 771   ACTGG CAAAA GGGAA GGGAA TGCCT GATTA AATAT

 806   ATTCA TGAAG ATGTC AAAGC CTTAT AAAGC CAACA

 841   TCTGG GGAAG AGAAA GCCAT AGGAC GAGAG CTTCC

 876   TGGTG AAGTG TGTTT CTTGA AATCA TCACC ACCAT

 911   GGACA GCAAA GGTTC GTCGC AGAAA GGTAT GTACA

 946   GCAGC TTGTG GAGTT GTTGG GTTTT ATCCA TGTTC

 981   CAATG GGGGC ATTAA TTTGA AATTT GAGGA AATAT

1016   TCTCT TAGGT TTCAG GATTA CAGAG TTTAG AAGAA

1051   CTAGC TAATC CTGCT CTAGA AATCA ATTGT ATAGG

1086   GGCAC AATAG GACAG TGGTT CTTGA ATGGA GGACT

1121   GTCTT CCAGA GACAT TTGGT TAATG TCTGG AGATG

1156   GTTTT GGTTG TCTTA ATATG GGGCA GGGGT GCAAC

1191   TGGTG CCCAG GGGGT AGAGA ACAGT GATAT TGCTA

1226   AGCAT ACTAC AATGC ACAAG TTAGC CCCCA GAACA

1261  AGTAC TTATC TAGCT CAGGG TGCCA ATCAT GTCAA

1296  AGTTG AGAAA ACTTA GACTG GAATA AGACC AAAAA

1331  TGTCT ATGAG TCCAA TTCAT CACAA CTCCA GAAGG

1366  TAGAA ACAAA CATTT TCTAG TTACC AAGAT TCTTA

1401  TGTGG TGTGG CTAAG ATGAG TCAGC CTGAT GAAAC

1436  TTTTA ACTCT GAAGC TATAA TACAG ACAGT GACAG

1471  CAGAG TAGTC TCCTA CAATA CTTTG TTGAC TGGGT

1506  TCAAT CCAAA TGATA TCTTA GAAGA AAACA CAGGC

1541  TAGTA ACAAT AATCG CCTTT ACTTG CTTGG TTGAC

1576  ATTCG CTAGA AAAAG AAATT GCAGA TAACT AATGA

1611  GAACT TACTG TATAG CAAGG ACAAA TCTAC TCAGT

1646  GCTCT CTGGT GACCT AACTG GGAAG GAAAT CCAAA

1681  AAAGA GGGTA TATAT GTATA CATAC AGCTA ATTCA

1716  CTTTG CTATA CAGCA GGAAC TAGCA TAATA TTCTA

1751  AAGCA AGTAT ATTCC GATAA AAATT AATTT AACAA

1786  AAGAA ATTAT AAGGC AAAGA CAATT ACAAA ATTTA

1821  TCTTA TGAAA CAACA AAAAC ATTTC TTTTT TATCT

1856  CATCT TAGGC TGTGG AAAAA AGTCC TTCAG ATGAT

1891  AAAGG TTCAG ATAAA TGTAG TCAGA GTTAA AGAAT

1926  GTCTA TCCAG TTATG AATTT CCTAG AACCA ATATT

1961  CCAAT TTCTC TATCT GTAAA GTACT TTATA TTTAT

1996  ACTTG TAGAT AAAAC AGTTA ATCAG CTGTG TTACA

2031  TGACT GTAAA GTACC TAAAA TAATC TCTTT GGAAA

2066  TATGC CTTTG AAAAA TTAAA AGACT GTTAT ATGAA

2101  TTATC TCACA ATATT GATAT TTTTA TTTTG CAACT

2136  AAAAG GTTGT TCATT CTATA CTACA TTCTA TACTA

2171  AATAG TCTTT TAGAT ATTTT CAGGT GTTGA AGGTT

2206  AGGTA TTTTT TCACC CTAAA TCTTT AGCCC TTGCC

2241  TCGTT TTGTC TTGGA CACTT TCCAA TTACA TTTAT

2276  TCAAG ATTCC AGACG AAAGG AGTTT TTTGG TAAAC

2311  ACATT TCTAC ATTCT TTATT TTATT TGGAG CAATT

2346  TGAAC TTAAA CATGA TTTAA ATCAT TGCCT TTTTC

2381  CTTTT GAAAG TGTAA GTTAT TGATA TGTTA GTGGT

2416  TCATA TCAGT CCATC TGCTG AGATA GTAAA TCGGT

2451  GACTA CATTG TCTCT GCTAA TTGTA AAGGA CTTTA

2486  AAAAT GAATG TTTTA TAGAC AGAGC AGAAT GAGTG

2521  GATAA AATCG TCTTT CTAGG GTCAC TGCTG TCATG

2556  CAAAG ACAAA ATATT TTTCT CTACT AGTAA CGGCA

2591  ATGAT CGCCC CAAGC ACGGG TCATC ACAGC TACTG

2626  ATGGG GTCCC TGTTA CACAC ATGCA ACCCA AGAGC

2661  CCAGC TGCCT GTGTG TTGTG ACATG AGGAA GTGAA

2696  AAGAT GACAG TGTGG TCCCC AGTCA TCTCC ATCTG

2731  CTAAT CATGG GACTT GGGGG AAAAT CACTT GCCCT

2766  AAGTC ACTGT TTATT AATAA AATCT GATGA TAATA

2801  ATGGA GATCA CTGGA GAGAG CCCTG ATGCT GCGAA

2836  GATTG AAGGC AATAC AAGAA GTGGG CGGGA GAGGA

2871  TGAGA TGGTT AAATA GCATC ACTGA CTTAA CAGAC

2906  ATAAA TTTGA GCAAA CTCCA GGATA TAATG AATGA

2941  AGGGG AGCCT AGAAT GCTGC AGTCT ATGGG GTGAC

2976  AAAGA GACTG AACTT AGTTA TGCAC AACAA TAATA

3011  CAGTG AAGGC CAAGG CTATC TCAGA GGATT ATCAT

3046  GAAAC ACAAA TTTTA CACAT TTTTA AAAGC TTTTA

3081  GCAAA GTATC AAGGA AATGG ATGGG GTTAG CAGAT

3116  CCAAG ATGCA GTATC CTTTT TCTCT TAGAA TTCTC

3151  TTTGT GTTCA ATAAT AGGGT TCAGG AAGTC ATGTG

3186  TTTCT TCTTA CCCAC CATGA TGGTA AACCA CACAA

3221  ATCAG ACTGT GCTGT TCTTG CCATT TCAGT GTCTA

3256  AAATG CAAGC ATGAG TCAGT AACAG TGAAA AAATG

3291  ACGAA CTCCT ACAAG CTGCT GAGAA TCTGC AGAGA

3326  ATCCC AAGAC ATTAG ACTAT CGTAG GAGAA TGACC

3361  TAAAC ACGCT GACTC ACATT AAATT TAAAT TCCAA

3396  GTGTT TGCAG AACAC AGGAG CACTT CTGGG AGCAA

3431  TACAA AAATG CATGG GGTAA CCTAC TTCTG CAACT

3466  ATATA TCTGT GCAAA TATCA TCATC CATCT AAATT

3501  TACAC AGTGG AAGGT GTTGC TTCTT CCCCA CCCCA

3536  GCTGC TACAG CACCA AATCC TGCTC AGGGC AACGG

3571  GGAGA GATGA GGCCT CCCTG GACAG GATGG CTTTT

3606  GCTAA CCTTG GGCTA ATACA TCATC TTAGA GCGGC

3641  TCATG CTTTT ATTTA AGCAG GGTCC CGCCT GCTCC

3676  TGCTG CTGGT GGTGT CAAAT CTACT CTTGT GCCAG

3711  GGTGT GGTCT CCACC CCCGT CTGTC CCAAT GGGCC

3746  TGGCA ACTGC CAGGT ATCCC TTCGA GACCT GTTTG

3781  ACCGG GCAGT CATGG TGTCC CACTA CATCC ATGAC

3816  CTCTC CTCGG AAATG TTCAA CGAAT TTGTA AGTAC

3851  TGTAT TTCTT GCTTA TTTCC AGAAG AAACC TTTGC

3886  GTAAG TGACT GGGCT ATACT ATCCT TTAAA CAAGA

3921  AGGCT GCATC AGCCA AACTT CAAAG AACAC ACTTT

3956  CTAGG TCAAA TAAGA CATTA GCTCA TAAGA TGTGG

3991  TAACT GAAGA AAAGA TGTTT CATGA AATCT CCAGG

4026  ATTCT TAAGC AGTGA CATAC CTGTT TCAAT TTGCT

4061  TTTAT TTGTT AAATT TCCAA AATAA ATTTA AAGCA

4096  CCTGT ATTTG TCAGC TTGGA CTCTC ATAGC AGAAT

4131  ACCAT AGACT CAGTG GATTA AACAA CAGAA CTTTA

4166  TTTCC TTGCA CTTCT GGGGG CTGGT GGTCC CCGAT

4201  CAGAG TGCCA GCAAG GTCAG TTTCT GGTAA GGGCT

4236  CTGTC TACCC AGGTT GGCTT CTCCC TGTGT CCATG

4271  CAGGG TTGGG GGCAG GGAAG AGAAA CAGAG GAAAG

4306  GCACA GAGAC AAAAG AGAAA ACTCT CCAGT GTTTC

4341  TCTTC ATAAA GACTC TAACA TTTTG GATCA GTGTT

4376  CCACC CTACG AGCTC ATTTA ACTTT AATTA ATCCT

4411  CATAA TCTTC TGGGC TTCCC TTGTG GCTCA GCTGG

4446  TAAAG AATCC ACCTG CAATG TGGGA GATCT GGGTT

4481  CAATC CCTGG GTTGG GAAGA TCCCC TGGAT AAGGG

4516  AAAGG CTACC CACTC CAGTA TTCTG GCCTG GAGAA

4551  TTCCA TGAGT GGGAC ACAAA TGAGT GATTT TCACT

4586  TTTAT TGTCA ATCTT CATAA GGGCT TCCTA GGTGG

4621  TGCTC GTGGG GAAGA ACCCT CCTGC CAATG CAGGA

4656  GACAT AAAAA ATGCA GGTGC AATCC CTGGG TCAGG

4691  AAGAT GCCCT GGAGG AGGGC ATGAC AACCC ATTCC

4726  AGTAT TCTTG CCTGG AGAAT CTCCA TGGAC AGAGG

4761  AGCCT AGAGG GCTAT AGTCC ACAGG GTTGC AAATA

4796  GCGGT GCACA ACTGA AGCGA CGTAG CTTGC ACACA

4831  GTCTT CATAA AGACC CTTCT CCAAA CACAG TACTT

4866  CGGAG ATTTT TGCTT CAACA CATGA ATTTG GGGGA

4901  GAAGG AAATG GCAAC CCACT CCAGT GTTCT TGCCT

4936  GGAGA ATCCC AGGGA CTGGG GAGCC TGGTG GGCTG

4971  CCGTC TATGG GGTCG CACAG AGTCG GACAC GACTG

5006  AAGTG ACTTA GCAGC AGCAG CAGCA TTCAG TTCAT

5041  AGCAG TACCT GACAA AAAGC ACTCT TAGGT GGGGC

5076  TGGGG AAAAG AACCA TCTTG ATTTT CTGGT CCTTC

5111  AGTGT CCCTC TGGGC ATTCT TCACC CAGCA CACAG

5146  TAAAT AGCCA ATAAA TGGGA ACTGC ACTTC AGTGA

5181  ACTGG GTGGA TGGAA CACAT TAGAC AGAGC TGAAT

5216  TCCTG TAATG AAAAC AAATA ATGAT AGTTT TTTAA

5251  ATGCT ACAAA TTACT GTTCT AAGAT GTGCA ATATA

5286  TGGGT TTATA ACTAC AATAG AATGC TTGGT TTATA

5321  ATTGG AAACA AAATT ATTCT CTTTC TGATG AAATT

5356  ACTTT TAAAG TTGTA TACTC TTTTA TGTCA ATCAA

5391  GGAGC CCATA GTAGA GCAGA AAACT GATAA AAAAT

5426  GGTGC TCAAA GTTTC TATTA AATTC ATATA GTTCT

5461  TTTTA TTCAC TAGTT TTCCT TTCAT CTTCC ATTTT

5496  TGACT GTCAT CTTTT TTCCA GATCT TCGAA GTAAT

5531  CTCTT TAAAT GCTCA CAACT TTTGC TAAAG ATAAG

5566  GTTTT CTTTA TCAAC ATGTT AGCTA GTTAT TGCGA

5601  CTCTC CTTCT CAGTC CATTG CTTAC TATTT TCAAA

5636  AATTT TATGC CATGT TTTTC TGACT TACCA CTTTC

5671  TCATC ATCAA CAATG CTGTA TTCTG CATCT GTGAA

5706  GCATA CTAAG CTATA GGTTT GTGGA TTCAG ATTAG

5741  TCAAA GAAAA GTTAT AATTA TATAT CTTCT TTTAA

5776  GGGAG TACAT TGGTT CCAAC CCAAA GTAAA CAAGA

5811  GATTA AATGT CTACA TAGGT ATCAT ACATA TGCAC

5846  TATAT TTGGT TCAAA TACTG AAAAT AGATG ATACT

5881  TAATA AAGCA GTTAA TATTT CATAT TTGGG TTATT

5916  TTTAG TGTTT GCTAT CCAAA TAGTA ACTAT GGGAA

5951  GGATG AAATG AAACA AGGGA AAAAA AAGAA GGAAA

5986  GAGGT TGGAA TTTAG ATGAC AAGCA ACTGT TTTCA

6021  GAGAT AATAG AAAGT AAAAG TAGGA AAAAG AATTA

6056  CTTTC AATTT TTATG TGACC CTCAT TAAAA AAAAT

6091  TATTC ATCTA TCAAA CGTGT TAATA TTCTG CTAAA

6126  GGTTC ATTTA TTGAA TGCCC AAACA ACCCT AACGA

6161  ATTGA ATTTG CTTGA TTGCT TCCAG GATAA ACGGT

6196  ATGCC CAGGG CAAAG GGTTC ATTAC CATGG CCCTC

6231  AACAG CTGCC ATACC TCCTC CCTTC CTACC CCGGA

6266  AGATA AAGAA CAAGC CCAAC AGACC CATGT GAGTC

6301  TTTTA TCCGG GTTTT CACCA GAACA AGTGA GACAG

6336  TGCAC TGGTG TCAGC AGGCT TCAGG TTATT AGAGG

6371  TCATG GTAAC TGGAC ATGCA GAGAA AGGTG GAGAA

6406  ACATT ATGCA TTATG CAGTT GCATT ATGCA GTTGA

6441  TGAAA TATGA GTAAA ATCAA GGGAT GACTA TAAAG

6476  ATCTG TAGCA GCAAA ATAAA TAACA GATCT ATGAA

6511  TTGTC CATGT GGACA ACATA AGTTC AACCA ATGCA

6546  TTAGA TCCAA GGTTG CAGCC ATTAT ACTGC ATGAA

6581  AACAT GAAAT AAATG GAATG TCCAT GTTTA AAATA

6616  TAGAT TTAAA AAATT CATGG ATATG TAAGA AACAC

6651  AACCC CAGTT TTGAG TATTC CCTGT ACTAG TGACT

6686  CCTAC ATGGG AGTCA CTTCT ACACT GCACT ACTTA

6721  AGCCA CCAAT TCTGC CTTTC AAGGC CCACC TGATT

6756  CTTCT ACTTC TCTGA CACCT ACCTC ATTCT TGACT

6791  GACTC CTCTA ACACC TCTTA TTTTT AATTA TAAAT

6826  CTCCC TCCAA AACGG GTCCT AAAAA ATATT ATGTT

6861  TTGCT TCTCA TGGTT GTGAT GATTG CCTTT GTACT

6896  GATGA CCACA TGTCT ACCGA TAAGC CTCAA TCATG

6931  TATCC CAGAT CCAAA TTTTT ATCAT TATAA TCGCT

6966  CCTTC CTCAT TCCCT GAACT AGGCA CAGCG CTAAC

7001  ATTAT TTAAA ATATT TCCAC ATGCA CCTCC CCTTA

7036  AGTAC AATCT GTTCT CTTGC TTCAG CTTTG TTAGT

7071  GATAC CAGGA TTTTT TTCAT CTGCT AATCT TCTTA

7106  ATAAG GAGGA TGATA AAATG AAGGA AGAAG GTCAA

7141  GAAGA AAAAG GAGGA CTTTT AAAAT AAGTT TAAAA

7176  TAAAT TTAAA ATTTA TTGAG AGCTA TTACC TTGCC

7211  ATACA ATTTA CAAAG TACTT TGTTT TCATT ACTAT

7246  GTTTA ATCCT CATGA AAATT CCTGT AGCAC AATGA

7281  CCGTT ATTAC ACTTC CTGTA ATATG GAAAC CAAGA

7316  CTCAG AAAAA TTGTG GAATT TGTAC CAGTC ACATA

7351  GGTAG TAAGC AGTGA TTCTG GGTTT CTTCC AATCA

7386  GAGCT CTCAC TCTTC CTCTT TAAGC TACAA CGCCC

7421  CCAGG AAAAC CATGC TGCCA CTCAC CCTAG AGTCT

7456  GAATT TCATT TCAGC TCCCT TACTC TCACA TCCCA

7491  TCATG TTTCT ATTGC AATGT CTGTT TGATT CTTCT

7526  CTGCT GTTCA TTTCC TGTAC CATTA AAGTA GTTCA

7561  TGGCC ATCAA GAAAT CAAGA ATTTT AATCA GAGAT

7596  GCTCA GCCCC TGGGG GCATG TCCAG TCCTG ATAGT

7631  AGTGA ACTAG GGGGC AAAAC CCTCC ATGGG GAATC

7666  CCACT AATGC TCTTA ATAAA GACAA CACTG TGCCA

7701  TTTCC TGCCC AGACA CATGT CAACA AAATA GACTG

7736  CTCTG ATATC AGCTT GGGGG CTGAT GTTGG GAGGA

7771  CTGAG GAAAG TGTGG TTAGG AATGT CATAT CTTCT

7806  TTACT GCCTC TTTGT TCTAA TATCA TAAAA GGAAC

7841  TACCA CTCAA AAACT AAAAA TACAT GAATG AATAC

7876  ATCGA TTCAT TAATA TGAAT GAATC ACTGG GTGAA

7911  AATGA GTTGG GCACT GGTGG AGTCC TTCTT TCCTG

7946  GGTCA GGTAC TCCAG GCACA TACTG AGTTC CAACA

7981  AAATA CTTAG ATTTC TCTCC CCAGA CAAGC AAAGC

8016  ATTCA AATAT AAAAG AACTC ACTCA GTGGA TGGCA

8051  GAATT TCAGA GGGAA AAAGA AAATT CTTTA TGTTA

8086  TAAAT TAGAA CTCAT CAGAA ACATT GGTTA CTAAA

8121  ATAAG CCAGA TTTTT AAGTA TTTCA GCAAA GTATA

8156  AACCG ATAGC TTACA TTTTA TAATT TTGCA ACCTT

8191  CAAAA AATTT TCAAT ACATA TAGGA AAAAC CAGGA

8226  GTTTT TTAGG TCAAT CACTC TGAGC AAAAA TCACA

8261  TGTTA CCAAA TCCAC TGAAT TATGC TTATT TTAAT

8296  GAGAT TGTTT CTTGT GGTCG TTCAG CATGA AGTCC

8331  TTATG AGCTT GATTC TTGGG TTGCT GCGCT CTTGG

8366  AATGA CCCTC TGTAT CACCT AGTCA CCGAG GTACG

8401  GGGTA TGAAA GGAGC CCCAG ATGCT ATCCT ATCGA

8436  GGGCC ATAGA GATTG AGGAA GAAAA CAAAC GACTT

8471  CTGGA AGGCA TGGAG ATGAT ATTTG GCCAG GTGAG

8506  CAGCT TCATG AAAGC TTCCT TGCTA TTTTC ATGAA

8541  TGAGA GAGGT GATTT CTGTA ATGAG GAATG AGTTT

8576  TGAAC TATCT CACTG TACAA GAACA CAATT CAGGC

8611  CTTCT TTTTC TAGAC CGGTG TTACA TAAAG CAAGA

8646  ACCTG TTCAT TCATA GTGAT AGATT CTATT GTAAG

8681  TGAAT TAGAA TTCCA CAGCA ATTTT TCACA GGTAT

8716  AGTCT TTCTT GAATT GTACA GTTAC ACCAA AATCT

8751  TGCCT CTTCC TGGGT ACAGA TGGCT GAAAT ATTTT

8786  CAAGG ATAAG AGAAT TAGAG AATAC AATTT GCAAG

8821  ATAAA TGTTT TCTTC AAAAT ATCCC AAGAT ATCCT

8856  CTACT GAAAT TCAGC TTGTA TTCTT TCTCT ATTCT

8891  CCTCA AACCA CAGGA TGAGA ATGAG AAGAA AGAAA

8926  AGAGA AGATC AAAAC CAAAT ACTTG AGTTC TGCTT

8961  TAGTT TTTAT TAATA AATTA CTAAC ATATA TCTGA

8996  TACAC TGGCT CCAAA ATCCA AGTGT AGAGA CTTTC

9031  ATGTA TCTTC CCTAA TTTTT AATTT GATAA ATAGA

9066  AAGAA CAAAG ATGAG CTAAT ACTAC TAAAA CTCAT

9101  AATAA CTCAT TATCT TTTGG ATGTT TAGGT TATTC

9136  CTGGA GCCAA AGAGA CTGAG CCCTA CCCTG TGTGG

9171  TCAGG ACTCC CGTCC CTGCA AACTA AGGAT GAAGA

9206  TGCAC GTTAT TCTGC TTTTT ATAAC CTGCT CCACT

9241  GCCTG CGCAG GGATT CAAGC AAGAT TGACA CTTAC

9276  CTTAA GCTCC TGAAT TGCAG AATCA TCTAC AACAA

9311  CAACT GCTAA GCCCA CATTC ATCCT ATCCA TTTCT

9346  GAGAT GGTCC TTAAT GATCC ATTCC CTGGC AAACT

9381  TCTCT GAGA

(3)SEQ ID No：2的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：804碱基

      (B)类型：核酸

      (C)拓扑结构：线形

   (ii)分子类型：核苷酸

   (iii)序列描述：SEQ ID No：2

  1   GACGA GAGCT TCCTG GTGAA GTGTG TTTCT TGAAA

 36   TCATC ACCAC CATGG ACAGC AAAGG TTCGT CGCAG

 71   AAAGG GTCCC GCCTG CTCCT GCTGC TGGTG GTGTC

106   AAATC TACTC TTGTG CCAGG GTGTG GTCTC CACCC

141   CCGTC TGTCC CAATG GGCCT GGCAA CTGCC AGGTA

176   TCCCT TCGAG ACCTG TTTGA CCGGG CAGTC ATGGT

211   GTCCC ACTAC ATCCA TGACC TCTCC TCGGA AATGT

246   TCAAC GAATT TGATA AACGG TATGC CCAGG GCAAA

281   GGGTT CATTA CCATG GCCCT CAACA GCTGC CATAC

316   CTCCT CCCTT CCTAC CCCGG AAGAT AAAGA ACAAG

351   CCCAA CAGAC CCATC ATGAA GTCCT TATGA GCTTG

386   ATTCT TGGGT TGCTG CGCTC TTGGA ATGAC CCTCT

421   GTATC ACCTA GTCAC CGAGG TACGG GGTAT GAAAG

456   GAGCC CCAGA TGCTA TCCTA TCGAG GGCCA TAGAG

491   ATTGA GGAAG AAAAC AAACG ACTTC TGGAA GGCAT

526   GGAGA TGATA TTTGG CCAGG TTATT CCTGG AGCCA

561   AAGAG ACTGA GCCCT ACCCT GTGTG GTCAG GACTC

596   CCGTC CCTGC AAACT AAGGA TGAAG ATGCA CGTTA

631   TTCTG CTTTT TATAA CCTGC TCCAC TGCCT GCGCA

666   GGGAT TCAAG CAAGA TTGAC ACTTA CCTTA AGCTC

701   CTGAA TTGCA GAATC ATCTA CAACA ACAAC TGCTA

736   AGCCC ACATT CATCC TATCC ATTTC TGAGA TGGTC

771   CTTAA TGATC CATTC CCTGG CAAAC TTCTC TGAG

(4)SEQ ID No：3的资料：_

   (i)序列特征：

      (A)长度：6608碱基

      (B)类型：核酸

      (C)拓扑结构：线形

   (ii)分子类型：核苷酸

   (iii)序列描述：SEQ ID No：3

   1   TAGCA GGAAT CACAG CATCT ACACA TTTTT TCATT

  36   TTGTG ACTTT TCAAG TCTTC TAGCT CAGTC ATTCT

  71   AAATG TGAGA TGATT TTGCA ACCCC CTGCC TCAGG

 106   AGACA CTGGG AAATT TCCTG AGACA TTTTT GATTC

 141   CAAAA GCTGT GCAGT TGGTG CTTCT ACCAT CTTCG

 176   TGGTA GAGGT CAAGG ATGCT GCTAA ACATT CTACA

 211   ACACA TTAAG AAAAC CCCCA CAACA AAGAA TTCTT

 246   CCGCC AAAAA TATCA ATAAT ATGAA GGTTG AAAAA

 281   TACTG GTCTA GCATG TAGTA TGTGC TCAAT AGCAA

 316   GGAGA GAAAA GAAAG CCTTC CTCAC TGATT AATGC

 351   AAAGA AATAG AGGAA AACAA TAGAA TGGGA AAGAC

 386   TAGAG AGCTC TTCAA GCAAA TTAGA GATAT CAAGG

 421   GAACA TTTCA CGCAA AGATG GGCAC AATAA AGGAC

 456   AGAAA TTTTA TGGAG GAGTT GCTGA TGGAG AGGGA

 491   GGCCT GGCGT GCTGC GATTC ATGGG GTCGC AAAGA

 526   GTCGG ACACA ACTGA GCGAC TGAAT TGAAC TGAAC

 561   TGAAC TGGAC AAAGC AGAAG ATATT AAGAA GAGGT

 596   GGTAA GAATA CACAG AAGAA CAATA TAAAA AAGAT

 631   CTTCA TGACC CAGAT AACCA CGATG ATGTG ATCAC

 666   TCACC TAGAG CCAGA CACCC TGGAA TGCAA AGTCA

 701   AGCGG CCTTA GAAAG CCTCA CTATG AACAA AGCTA

 736   GTGGA GGTGA TGGAA TTCCA GTTGA GCTAT TTCAA

 771   ATCTT AAAAG GTGAT GCTGT GAAAG TGCTG CACTC

 806   AATAT GTCAG CAAAT TTGGA AAACT CAGCA GTGGC

 841   CACAG GACTG CCACA ATCCC AAAGA AAAGC AATGA

 876   CAAAG AATGT TCAAA CACCC ACATG ATTGC ACTCA

 911   TCTCA CATGC TAGCA AAATA ACTCT CAAAA TTCTC

 946   CAAGC CAGGC TTCAA CAGTA CGTGG ACCAT GAACT

 981   TCCAG ATGTT CAAGC TGGAT TTAGA AAAGG CAGAG

1016   GAACC AGAGA TCAAA TTGCC AACAT CCATT GGATC

1051   ATCAA AAAAG CACGA GAGTT CCAGA AAAAC ATCTG

1086   CTTTA TTGAC TACGC TAAAG CCTTT GATTG TGTGG

1121   ATCAC AATAA ACTGT GGAAA ATTCT TCAAG AGATG

1156   GGAAT ACCAG ACCAC TTTAC CTGCC TCCTG AGAAA

1191   TCTGT ATACA GGTCC AGAAG CAGCA GTTAG AACTG

1226   GACAT GGAAC AACAG ACTGG TTCCA AACTG CGAAA

1261  GGGGT ACATC AAGGA ATATT CATTG GAAGG ATTGA

1296  TGCTG AAGCT GAAAC TCCTA TACTT TGGCC ACCTA

1331  ATGTG AAGAT CTGAC TCATT GGAAA AGACT CCAAT

1366  GCTGG GAAAG ATTGA AGGCA GGAGA AGAGG ATGAC

1401  AGAGG ATGAG ATGGT TGGAT GGGAT CACTG ACTCA

1436  ATGGA CATGA GTTTG AGTAA GCTCC AGGGG TTGGT

1471  GGTGG ACAGG AAAGC CTGGC GTGCT GCAGT CCACA

1506  AGGTC ACAAA GATTC GGACA TGACT GAGTG ACTGG

1541  ACTGA TACTG ATGTG CTCAA CAAAT GTATC TTGAA

1576  CTTGT GTGAA GCTCT ATGGT CACAT GTAAA GGAAG

1611  AATAA TCAGG ATTAG CTGTG TGTCT TAGGA GTCAG

1646  GGTTC TGAGT TTTAT GTGTT CATAG TATCT GCTGG

1681  TTCAC AAAAC ATTTT TCTTA TTCTC TGGTT CTTGA

1716  TTTAC TTTAT AAAGT AATCT TAATA GTTAT ACTTC

1751  ACATA GATAC GAAAT TATTA TATTT GGATA ATCTC

1786  ATGGA AAGGA TTAAA TACTC CATCT ATACG AGTAA

1821  TGCTG AACTA TCTAC TCCTA CCTAA TAATT TGTCA

1856  GAATT CACTA ATTCT GTGTT ATATT GTTTC TAAAT

1891  CTGAA TCATT ATATG AATCC TCAGT ATTTT GTTTT

1926  CCTTC CTCTA TATTT TGGAA TTTAT TAAAC AGTGC

1961  TTCAA ATAAT TTTTA GGAAA CTGAA GTTTT TAGTA

1996  ACAGC TCTAT CTCTA AATAG CTTTA GTATC TTGAA

2031  AAAGT AATAC AAATT CTCAC ATCCT TAATT TCCTC

2066  TTCTC TAAAA TATCT TTAAA ATATT CTATG AATGA

2101  TATCT CTTAA TATTT ATTTT TTTGG CAATC CAACA

2136  CAGCT TATGG GATCT TAGTT CCCCA GTGAG GGATT

2171  ATATC CATGC CAACT GCAGT GAAAG TACAA AATCC

2206  TAAAC TGGAC TCACC AGGGA TTTCC CAATA TCTCC

2241  TCTAG TTCTT ATTTC TGAAT ATTTT TGGTC CCTTT

2276  ATTGA CTCTT CATCC AACTT TTCTA TTGAT TTCTT

2311  TCTTG AGGAT ATTAT TTACT TGGTT TCAGC TAGAA

2346  ATATA TGCAA GTCTC AGGAC TGCAT ATTTC AGATT

2381  CATTG GCCAA TATGG GAAAA AACCT TTGGC TGAAC

2416  AAATC ATGCT TATAA AAAAT AGTAC TAGAG CATCT

2451  TACTT TGACT ATATC TTGCT CCTCA TTCAG GGTTA

2486  TCTAA TACAA TTTCC CCATA TGAAA TTCTT TTGCA

2521  TTATA AAAAT GGAAG CTCTT AGGTA ACATT GCAAA

2556  AATTC GAGTT GCTCA TATGG CACTT TGCTT CTTAC

2591  TGGTC ATTGT GTTCT GAGGC TTACC TGGAC AGTGG

2626  TACCT GATGT CATCT TAAAT TGCTG GCTTT TTAAT

2661  TTTCC ATTGG ACAAG CTTCT TTCTT TAGTA TATTG

2696  TTAAG GATTT CCTTG ATCAA GATTT TACCT ACTTT

2731  TCTGG TCCAA TTGGT GAGAG ACAGT CATAA GGAAA

2766  TGCTG TGTTT ATTGC ACAAT ATGTA AAGCA TCTTC

2801  CTGAG AAAAT AAAAG GGAAA TGTTG AATGG GAAGG

2836  ATATG CTTTC TTTTG TATTC CTTTT CTGAG AAATC

2871  AGACT TTTTC ACCTG TGGCC TTGGC CACCA AAAGC

2906  TAACA AATAA AGGCA TATGA AGTAG CCAAG GCCTT

2941  TTCTA GTTAT ATCTA TGACA CTGAG TTCAT TTCAT

2976  CATTT ATTTT CCTGA CTTCC TCCTG GGTCC ATATG

3011  AGCAG TCTTA GAATG AATAT TAGCT GAATA ATCCA

3046  AATAC ATAGT AGATG TTGAT TTGGG TTTTC TAAGC

3081  AATCC AAGAC TTGTA TGACA GTAAG ATGTA TTACC

3116  ATCCA ACACA CATCT CAGCA TGATA TAAAT GCAAG

3151  GTATA TTGTG AAGAA AAATT TTTAA TTATG TCAAA

3186  GTGCT TACTT TAGAA GGTCA TCTAT CTGTC CCAAA

3221  GCTGT GAATA TATAT ATTGA AGGTA ATGAA TAGAT

3256  GAAGC TAACC TTGTA AAAAT GAGTA GTGTG AAATA

3291  CAACT ACAAT TATGA ACATC TGTCA CTAAA GAGGC

3326  AAAGA AACTT GAAGA TTGCT TTTGC AAATG GGCTC

3361  CTATT AATAA AAAGT ACTTT TGAGG TCTGG CTCAG

3396  ACTCT ATTGT AGTAC TTAGG GTAAG ACCCT CCTCC

3431  TGTAT GGGCT TTCAT TTTCT TTCTT GCTTC CCTCA

3466  TTTGC CCTTC CATGA ATACT AGCTG ATAAA CATTG

3501  ACTAT AAAAG ATATG AGGCC AAACT TGAGC TGTCC

3536  CATTT TAATA AATCT GTATA AATAA TATTT GTTCT

3571  ACAAA AGTAT TATCT AAATA AATGT TACTT TCTGT

3606  CTTAA AATCC CTCAA CAAAT CCCCA CTATC TAGAG

3641  AATAA GATTG ACATT CCCTG GAATC ACAGC ATGCT

3676  TTGTC TGCCA TTATC TGACC CCTTT CTCTT TCTCT

3711  CTTCT CACCT CCATC TACTC CTTTT TCCTT GCAAT

3746  TCATG ACCCA GATTC ACTGT TTGAT TTGGC TTGCA

3781  TGTGT GTGTG CTGAG TTGCG TCTGA CTGTT ATCAA

3816  CCCCA TGAAT GATAG TCCAC CAGGC TCTAC TGTCC

3851  ATGAA ATTTT CCAGT CAAGA ATACT GGAGT GGATT

3886  GCATT TCCTA CTCCA TTTGA TTAAT TTAGT GACTT

3921  TTAAA TTTCT TTTTC CATAT TCGGG AGCCT ATTCT

3956  TCCTT TTTAG TCTAT ACTCT CTTCA CTCTT CAGGT

3991  CTAAG GTATC ATCGT GTGCT TGTTA GCTTG TTACT

4026  TTCTC CATTA TAGCT TAAGC ACTAA CAACT GTTCA

4061  GGTTG GCATG AAATT GTGTT CTTTG TGTGG CCTGT

4096  ATATT TCTGT TGTGT ATTAG AATTT ACCCC AAGAT

4131  CTCAA AGACC CACTG AATAC TAAAG AGACC TCATT

4166  GTGGT TACAA TAATT TGGGG ACTGG GCCAA AACTT

4201  CCGTG CATCC CAGCC AAGAT CTGTA GCTAC TGGAC

4236  AATTT CATTT CCTTT ATCAG ATTGT GAGTT ATTCC

4271  TGTTA AAATG CTCCC CAGAA TTTCT GGGGA CAGAA

4306  AAATA GGAAG AATTC ATTTC CTAAT CATGC AGATT

4341  TCTAG GAATT CAAAT CCACT GTTGG TTTTA TTTCA

4376  AACCA CAAAA TTAGC ATGCC ATTAA ATACT ATATA

4411  TAAAC AGCCA CTAAA TCAGA TCATT ATCCA TTCAG

4446  CTTCT CCTTC ACTTC TTCTC CTCTA CTTTG GAAAA

4481  AAGGT AAGAA TCTCA GATAT AATTT CAGTG TATCT

4516  GCTAC TCATC TTTAT TTTGG ACTAG GTTAA AATGT

4551  AGAAA GAACA TAATT GCTTA AAATA GATCT TAAAA

4586  ATAAG GGTGT TTAAG ATAAG GTTTA CACTA TTTTC

4621  AGCAG ATATG TTAAA AAATA GAAGT GACTA TAAAG

4656  ACTTG ATAAA AATTA TAGTG ACTGC AAATG TTTTA

4691  GGAAT ATAAT AAGAT ATAAT AACAG TGGTT GCTAT

4726  TTTCT TTAGC ACAAG ACTAG TTAAC AGGCT GTATT

4761  AAAAG ATCTT TTCTT GAATT AAATA TTTTC AATTT

4796  GATTA AACCT ACCTC AGCCA TAAAG GCAAG CACAT

4831  TTCAT TTATA CTATG GGGAT TTGAA TAATT ATTAC

4866  TGAAG AAGCT CTACC AACAA AAAGT TTATA GAGCT

4901  ATCAT ATTTA GTCAA GAGAT AAAGA GGGTT GTTAG

4936  GATAT ATATG CTATT TGAAA GGTAT TTATA AAAGA

4971  AGAGT ATATT TATCA AAATT TCTCA GAACA TCCAA

5006  ATTTC AAGTT TATCA TTTAT CCTAC AGTAT TTCAA

5041  AAATA TTAAA ATAGA TACAT GAAAT ACAGA AGTAA

5076  ATTAA AGAGA AAGTA TTTTA CTTGG TAAAA AAATT

5111  CTAGG TTGGA CAGAG AGTGC CAGGA AACAA AAACA

5146  ATGAA AAATG TGACC TGACA GGAAT TATAG CTCAA

5181  AGTAT AGTAG TAAGT AATGA AATGG CTTAA AAATT

5216  GGTAT ATAAA ATGCT AGTTA TAAAA TAAAC AAAAT

5251  GCAAT AATAT CCTCC CTACA TGTAA TGAAT TCTAG

5286  GTATT ATGCT CTTTT TTGAA GTCTT GACAA TAAAA

5321  ATTTT TTTAG AAGTT TATAG GCATC TTGAA TAAAG

5356  TGAAA CAAAT TAAGA ATTAG TATCC ATGAG AAAAA

5391  TATAG AACAA TTTTC CTAAT TTAGT TTGAA AATCT

5426  GGGAT TGAAG ATGTG TGTCA AGAGA TGTTG GTGGC

5461  AAGAA CATTT TTTTT TCAAG AACTT ATAAA AATGC

5496  AACAA AACAA ACCAT TTAAT ACATT TTGGT CAAAA

5531  TCAAT AATGT ATTTT ATTTT ATGCT CCAAG GAGCA

5566  TAAAA TTGGG GACTG GGCAA GAGAA ACTGA CACCC

5601  TGGTA AATTA CCAAG AGATA AGTAC ACAGT TCTAT

5636  GTAGA GAAAA TAAGC ATAGT GTATG ATCTC TAAAA

5671  TTATG TGAGA CAAAG GAGAG ATGAC ATTAG GCATG

5706  TGGGG ATGAA GACTG AGTAG AGAAG AAACA ATCTA

5741  ATCAG TCCAA GAAAA CATCT CGATC AGTGG AACAA

5776  ATAGA AGAAA TGCTA AAATG AAACA GAAGT CTTAC

5811  TGGAA ATAAA AGATA TGCAT AAGAC AAAAA TTCAT

5846  GAAAA TCACT TAGTT TAGCA GAGAA AAGAT AAAAA

5881  TAAAG TATGA CCTTC TTCAT ATACA TTGTT TGATC

5916  ATATG CACCT CAATA AAACT GAGTC TCCAA CAGAA

5951  ATGAA ACATT AATAT TTTGT TCACT GCTCT AATCC

5986  CAGAA TCTAA GCGAT ATCTG GCAAT AAAAA TAATA

6021  AATAT ATATT TTTTA ATAAA TGAAT CAACC ACTTA

6056  ATTTT TCTGT AAATA TCTGT AACTT CTCTT CTGTC

6091  TTTCC AAAAA CACTC ATAAG TACTG TGAAT GAGAT

6126  GAAAA AGAGT GAAGT AGGAT ATAGG CTGTT AGCAG

6161  AAAAC ATCTG AATGG CTGGC AGTGA AACAT TAACT

6196  TGAAA TGTAA GATTA ATGAG TAATA GTAAA TTTTA

6231  ACCTT GGCCA TATGA TAAAA TGTTC ATTAA TATTT

6266  TTCTA GAATA CAGGG CTTTT TGTTT TTGCC ATGAG

6301  GTTTG CAGGA TCTTG GTTCC CTGAC CAGGG ATCAA

6336  ACCTG CACTC CCCTG GAAGC ATGGA GTCTT GGACA

6371  TTTGT ATTAT ACACT ATCTT TGGTT CCTTT TAAAG

6406  GGAAG TAATT TTACT TAAAT AAGAA AATAG ATTGA

6441  CAAGT AATAC GCTGT TTCCT CATCT TCCCA TTCAC

6476  AGGAA TCGAG AGCCA AGAAG GATCC TCATC CTTGC

6511  CTGTC TGGTG GCTCT GGCCA TTGCA AGAGA GGTAA

6546  ATACA GAAAA AAATG TTGAA ATAAA TAAGA CTAGT

6581  ACTGT CTGCC TATGT GTAGA AATCA CATT

Claims (5)

1、一种分离出的DNA分子，其特征在于，该DNA分子含有SEQ ID NO：2所示的编码具有牛催乳素蛋白活性的多肽的cDNA序列。

2、如权利要求1所述的DNA分子，其特征在于，该DNA分子具有SEQ ID NO：1所示的牛催乳素全长基因组DNA序列。

3、一种表达载体，其特征在于，该表达载体含有权利要求1或2所述的DNA分子。

4、如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，该表达载体是乳腺特异表达载体。

5、如权利要求3或4所述的表达载体，其特征在于，该表达载体具有SEQ IDNO：3所示的核苷酸序列。