CN1308434C - 活性阶段细胞或者组织的取样装置及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及提供植入物，细胞或者组织的装置和方法，例如用作组织工程或者细胞治疗的移植物或者体外研究培养物。本发明尤其适用于足量生成具有高增殖和/或分化能力适合于恢复手术或者治疗，尤其适用于人类的组织工程的特异性细胞群。本发明也涉及制备这种装置的方法，及其尤其是用于治疗组织损伤的应用，以及试剂盒，移植物，组织或者生物制品。

Description

活性阶段细胞或者组织的取样装置及其应用

本发明涉及提供植入物，细胞或者组织的装置和方法，例如用作组织工程或者细胞治疗的移植物物或者体外研究培养物。本发明尤其适用于足量生成具有高增殖和/或分化能力，适合于组织工程、修复手术或者治疗的特异性细胞群，尤其适用于人类。本发明也涉及制备这种装置的方法，及其尤其是用于治疗组织损伤的应用，以及试剂盒，移植物，组织或者生物制品。

哺乳动物细胞用于实验研究(遗传研究，毒性研究等)和药学及治疗目的(细胞治疗，组织修复等)的应用越来越广泛。到目前为止，已经发展了多种获得细胞或者组织的方法，尤其是主要基于活体组织检查的取样和离体处理制备原代细胞培养物。通常，传统活体检查技术的特征在于样品取自成熟组织的事实。目前，后者含有大量的细胞间基质并且常常含有较少的细胞。此外，样品中含有的细胞大部分是静息的。因此，这种细胞不在用于组织修复的最佳生理状态。

本发明提供了制备细胞，移植物，组织以及，更通常包括哺乳动物细胞的生物材料的新的方法，尤其是鉴于其体内移植或者其用于研究试验或者工业或者药物基因组筛选。

尤其是，本发明提供了通过受控的手术损伤以及随后的愈合期激活的细胞的恢复，以及以令人惊讶的方式促进所述回收的方法。

尤其是，本发明的一个目的是用于提供植入物，细胞或者组织的装置。更具体地，本发明涉及一种装置，其应用优选由时间限制，如上所述包括由限定一个空间的生物相容性材料制成的壁，所述壁含有允许细胞定殖于所述空间的孔。

本发明还涉及制备植入物，组织或者细胞培养物的方法，包括(i)将上述装置导入受试者的组织，(ii)保持装置足够的时间使得细胞在所述装置上的定殖表现出需要的特性，以及(iii)移去装置并回收细胞，所述细胞可被培养，保藏，包装和/或移植。

因此，本发明涉及如上所述用于制备移植物，组织或者细胞培养物的装置。

本发明进一步涉及用于制备实施人体治疗或者手术治疗的方法，尤其是细胞治疗的方法的组合物的本发明装置的应用。

本发明还涉及用于制备受试者的细胞和/或组织体内取样的试剂盒的本发明装置的应用。

本发明还涉及含有上述装置的试剂盒。还进一步涉及手术用具，通常是单独使用，所述用具与也可以试剂盒形式存在的各种类型的装置相关。

本发明还涉及包括通过上述方法获得的细胞培养物，细胞制备物，植入物或者含有细胞的组织。

本发明的装置和方法通过使在自然生理条件下进行最适培养来促进细胞增殖和分化，细胞外基质的产生，组织构成和成熟。因此，围绕着装置的植入部位的组织保证了装置中待重建的增殖组织的同源性和合适的营养以及生长，其自身的同源性。

装置的描述

如上所述，本发明基于制备生物材料的新方法。尤其是，本发明基于能从目标组织体内回收活化阶段细胞的装置和方法。因此，本发明描述了一种具体的装置，可以在体内移植，通过所述装置捕获目的细胞。本发明的装置进一步提供了细胞生长的空间，所述的空间不拥挤或者并没有由于周围组织的压力而变得狭窄。所述装置能够很容易的回收在其中已经增殖的组织和细胞。因此，所述装置的应用优选受限于时间，因为回收以后，所述装置从其所放置的组织回收。

更具体地，本发明的装置包括由限定一个空间的生物相容性材料制成的壁，所述壁含有允许细胞定殖于所述空间的孔。

所述孔优选具有足够的面积从而使装置壁的通透性可以允许快速定殖。它们的面积必须不能太大从而避免过长时间的停留在组织中或者难于从组织抽取装置。实际上，去除可能导致嵌入装置内部空间的组织拉伤并且缺失部分的所述组织。孔的总面积和装置壁总的外部面积之间的比例可以根据组织和愈合需要的阶段而变化。所述比例优选低于0.5，尤其是在0.1和0.5之间，通常在0.1和0.4之间。例如对于骨头和韧带而言优选0.2的比例。

在装置壁上存在的孔可具有不同的形式，大小和排列。

虽然圆孔适合于一些组织，为了通过将孔的主轴垂直于纤维从而较容易的从纤维性组织中，例如诸如韧带中去除装置，优选拉长或者椭圆形。因此本发明提供了其孔眼可以是圆形，拉长和/或椭圆形和/或任何其它适合于目标组织的形状的装置，尤其是任何促进细胞定殖，组织再生和/或植入或者去除装置的形状。相同的装置可含有基本上相同大小和规则排列的孔。然而，通常，可以生产含有不同形状和/或不同大小和/或在壁上不规则排列的孔的装置。

根据待取样的组织，装置壁可以是柔软的或者更硬或者更软。用于产生装置的材料必须是生物适应性的，以免负干扰细胞增殖。如果装置不是植入体，换言之不是设计用于整合到组织中，而是用于提供细胞，植入物或者组织，就不需要选择使用对压力有抗性的材料，如果是植入体的情况，例如用于制备植入物的材料应该可以代替脊椎盘或者部分脊柱。虽然下列列举不全面，但是可以使用例如钛，钛合金，陶瓷，铬-钴合金，镍-铬合金，诸如聚四氟乙烷或者聚碳酸酯的聚合物。根据一个具体的实施方案，本发明的装置壁由基于钛，钛合金，陶瓷，铬-钴合金，镍-铬合金，诸如聚四氟乙烷或者聚碳酸酯的聚合物的生物相容性材料制成。

根据人们想从其中回收细胞的组织，本发明的装置可以采用多种外形。所述形状由装置壁限定，并且可以是例如圆柱形(尤其是对于骨组织而言)，纺锤形(尤其是对于韧带而言)，圆锥形槽(尤其是对于牙槽而言)，双凸透镜形(尤其是对于真皮，脂肪组织或者腱膜而言)，单凸透镜形(尤其是对于骨膜而言)，或者其它任何需要的形式。在一个优选的方式中，壁给装置赋予了一种外形，可以是圆柱形，圆锥槽形，纺锤形，双凸或者单凸透镜形或者其它的任何适合于从其中回收细胞的组织的形状。

中空的空间被理解为由装置壁限定的一个体积，所述体积为空的，或者含有中心支柱从而避免壁不期望的变平或者包括一个支持物允许或者促进细胞的培养或者附着细胞和/或能够构建植入物。所述支持物的形状可以由本领域技术人员根据植入的部位进行选择。装置的支持物或者内壁可以是功能化的或者可被进行处理从而有助于定殖或者细胞生长，例如使用生物因子(生长因子等)或者合适的材料。

在一个优选的方式中，本发明的装置具有包括4到3000mm³之间体积的内部中空体积，优选在4和250之间，更优选在20和100mm³之间。装置优选地具有2和35mm之间的长度，优选在5和15mm之间，宽度在2和15mm之间，优选地在3和6mm之间，厚度在1和6mm之间，更优选在2和4mm之间。

在本发明的一个优选的实施方案中，壁或者装置在中空空间只与装置通过孔连通的封闭位置和一个开放位置之间包括一个可移动部分。在开放位置，中空空间与装置的外部通过回收细胞或者组织的较大通道进行连通。

当装置壁含有可移动部分时，后者根据装置的类型可以具有不同的特性和形状。例如，在装置为细长形状(例如圆柱形或者圆锥形)的情况下，壁的可移动部分可以通过位于装置末端的一个或者多个可移动金属环形成。为壳形装置，例如扁平或者透镜形的情况下，可移动部分可以是装置的一半，换言之通过使两半壳移离和移向彼此的铰链将一半壳与另一半连接起来，所述铰链是一种闭锁装置(或者闭合)，优选地保证两半壳彼此固定。在这个方面，可以固定一些孔优选地使线或者任何其它保证壁的可移动部分处于关闭位置的合适装置(松紧带，舌簧等)的固定或者通过。如果线由诸如金属的可变形材料制成，在出口点的扭转可以作为闭合装置。如果线不是金属，单股的和/或合成材料的，为了相同的目的可以打一个结。闭合(或者闭锁)装置也可具有不同的形式并且可以通过例如与装置模制成一个整体进行生产。

装置壁的可移动部分可以设计成任何其它合适的形式。例如它可以是与装置的剩余部分通过机械断层线连接的壁的一部分。因此，用合适的工具撕破或者切割的包套可以组成壁的可移动部分。

最终，如果壁不含有可移动部分，装置的破坏使其被打开以回收在其内部空间增殖的细胞。

在一个优选的实施方案中，本发明的装置另外含有优选方式的牵引装置，设计用于促进装置的去除而且最底可能性的损坏周围组织。一方面，牵引装置使装置能够从其所植入的组织中抽出，另外还用于指导操作者清理装置。

因此可以利用牵引装置作为向导用薄刀片清除附着于装置的组织。

因此牵引装置通常为装置的一个突出部分，诸如导向器，带，线，舌簧等，通过其抓紧和/或定位装置。

在第一个具体的实施方案中，牵引装置包括一个例如通过穿过装置的一个孔固定到装置的线。线可以由可变形的材料或者不可变形的材料，合成的或者天然的材料制成。其特性可以是金属的，天然的(胶原)或者合成的(例如，聚合物)。其长度优选由本领域技术人员根据在体内植入装置后可以触及一游离端进行选择。

因此，一旦体内阶段完成后，用牵引线去除装置。线的延伸或者更普遍的牵引装置的延伸可以与取样部位有一段距离并且可以通过其它缝合固定在上皮细胞以下，从而当抽出装置时可以很容易的发现。

牵引线可以与固定装置到闭合位置的线相同。

牵引装置可以具有不同的形式。例如，它可以模压到装置上作为一个整体，尤其是当后者由聚合物制成时。

在这种情况下，本发明的装置优选包括诸如上述定义的壁和牵引装置和/或闭合器，所述部件由生物相容性材料制成，优选选自钛，钛合金，陶瓷，铬-钴合金，镍-铬合金，诸如聚四氟乙烷或者聚碳酸酯的聚合物。部件可以通过模压成一个整体进行制备，或者通过分别模压和装配进行制备。此外，如上所述，牵引装置和闭合装置可以是一个并且相同的部分，例如一根线。

本发明的一个具体装置包括一个中空的套管，所述套管由壁的主要部分和一个或者多个套圈组成，每个套圈代表或者构成密封套管一个末端壁的可移动部分(参见图1)。每个套圈适合中空的套管，没有出现任何伸出的部分，因此不参与组织中装置的插入以及随后的抽出和/或因此不会产生由于组织损伤引起的炎症区域。由套圈组成的壁的可移动部分以及密封套管根据取样的组织可以是例如半圆形，圆锥形或者扁平形。对于柔软和易碎的组织，诸如脂肪组织优选半圆形，对于组织的组分为细长形的组织，诸如韧带和肌肉优选圆锥形，并且对于骨组织优选带有圆形边缘的扁平形。

根据本发明另一个具体的装置，包括组成整个壁的双凸或者单凸透镜状体，所述的整个壁通过铰链连接分成两半部分(参见图6)。优选地，这种装置另外含有连接两半部分之一的抽取把柄。优选地，抽取把柄是弹性可变形的并且在静止状态中穿过在另一半透镜状体中的夹缝，从而防止这两半彼此舒展开。

本发明进一步涉及含有诸如上述的允许进行受试者细胞和/或组织体内取样的装置的试剂盒。本发明进一步涉及与每种类型的装置相关的单独使用的手术用具，所述每种类型的装置也可以试剂盒的形式提供。所述试剂盒含有：

-一个装载管，其内横截面对应于待植入的装置的外横截面，并且允许在最低操作难度和污染危险性的条件下就会将装置运送到需要的受试者的部位；在优选的方式下，对于圆柱形装置而言所述装载管为圆形的，对于表现相同特征的装置而言为扁平形的；和/或

-装入装载管的活塞，使装置可以挤出装载管并插入受试者的部位，所述活塞优选包括允许牵引装置通过的“U”形部分。

如果牵引装置为一根线，可以预先固定到装置上并且如果需要闭合的话可以另外保证其闭合，从而使其较容易的回收。

操作装载管和活塞可以由任何合适的材料制成，例如一种聚合材料，优选在操作中透明的可以进行观察，例如聚碳酸酯。

装置组合件及其操作附件优选地以组装的及无菌的方式提供在两个小袋中。

生物材料的制备

本发明提供了如上所述装置尤其优选用于体外或者离体以及体内制备组织，细胞培养物，移植体或者植入体的应用。它可以是哺乳动物的组织尤其是人的组织。更具体地，它可以是例如骨头，韧带，软骨，肌肉，血管或者上皮连接组织。

本发明描述的装置或者“细胞捕捉器”优选利用目标组织中生物学，细胞学或者分子学的动态愈合。

尤其是，本发明提供了通过合适的手术创伤获得一个部位的方法，所述部位中的目标组织将经历不同的愈合阶段和不同的细胞状态，本发明还提供了在最佳条件下，换言之体内在选择的时间点在该部位取得需要的细胞的方法。也作为本发明的一个目的的具体装置的植入构建了最初的手术创伤并且能够“捕捉”定殖于装置空间的活性阶段的细胞，所述活性阶段的细胞是由原位释放大量生长因子激活的。

外伤，感染，手术或者烫伤的伤口愈合遵循相同的过程，条件是病因消失并且不持续较长时间。在手术或者外伤的情况下，愈合的持续现象被分成几个重叠的阶段：

第一个阶段对应于血凝块形成。在这个步骤，由于出血血流携带纤维蛋白(构成彼此交连的纤维网)和血小板，所述血小板通过聚集密封切开的血管并允许形成促进细胞迁移的临时基质。这些血小板是生长因子和细胞因子的储存器。实际上，一旦激活，血小板就释放这些作为修复伤痕的启始信号的分子。它们引发炎症细胞向伤口的补充，然后上皮形成，形成粒状组织和血管形成。

早期炎症阶段是第二个阶段对应于血液中多形核嗜中性白细胞的大量到达，所述多形核嗜中性白细胞被细胞因子吸引，吞噬外来颗粒、残骸和细菌。通过产生酶和氧自由基，嗜中性白细胞中和这些元素，所述氧自由基甚至对于周围的组织具有破坏作用。嗜中性白细胞也释放促炎细胞因子吸引并活化临近的成纤维细胞和角质细胞，以及其它的免疫细胞，尤其是成为组织巨噬细胞的血液单核细胞。

晚期炎症阶段一方面包括继续嗜中性白细胞的作用，另一方面包括能够吞噬外来核组织碎片以及细菌的巨噬细胞的聚集。在血小板和嗜中性白细胞后，它们持续合成并分泌生长因子和细胞因子从而继续产生愈合过程所需的分子信号。巨噬细胞清除所有损伤组织的区域。

因此，组织破坏发生在这些炎症阶段期间。当本发明的装置被植入时，通常优选地等待直到最初愈合阶段的末期抽出装置并回收组织或细胞。

实际上，酶(血纤蛋白溶酶)随后逐渐降解纤维蛋白凝块，使得细胞，尤其是成纤维细胞和角质细胞迁移。蛋白酶诱导组织基质组分，尤其是胶原蛋白的再吸收从而促进细胞迁移。最终，其它信号对需要修复的细胞产生趋化作用。

颗粒化组织阶段大约在第四天开始，并且是细胞尤其是成纤维细胞和新毛细血管强烈增殖和分化，伴有巨噬细胞和松散的结缔组织持续存在的阶段。

因此颗粒化组织组成了具有趋化性，有丝分裂性和调节特性的细胞因子的复合存储器。在这个阶段，在细胞组之间具有重要的依赖性：形成用于细胞支架和心血管形成的成纤维细胞，其本身提供有高度活化的细胞所需的营养。成纤维细胞也具有至少部分相关于由组织内的拉伸限制引起的细胞功能激活的自分泌调节。

下一个阶段-组织重建-是在上一阶段增殖的所述组织的细胞分化和产生细胞外基质的阶段，所述细胞外基质修复并重建损伤的组织。在这个阶段成纤维细胞依然存在。在骨组织的情况下，成骨细胞在这个阶段被激活并且参与组织修复。组织逐渐成熟并且在修复临近完成时调节减少了细胞的数量。

组织取样根据是成熟致密的组织或者是愈合阶段新近损伤的组织，以及在第二个阶段根据创伤后的时间间隔，产生非常不同的结果。

创伤后约7天(根据组织和动物种类的不同这个时期有所改变)，颗粒化组织阶段达到最大化，在这个阶段取样将产生最大量的增殖阶段的细胞。

创伤后约14天，基质形成阶段达到最大化，在这个阶段取样将产生最大量的活化阶段的分化的细胞。

任何中间阶段的取样(或者在最初炎症阶段以后)也提供了具有完全有益的增殖特性和/或活性的细胞群。与这些不同的目的位置相比，在成熟致密组织中的取样将只提供很少的具有较低活性或者静态的束缚于致密基质中的细胞，所述细胞置于培养时可能很难捕捉。在这种类型的取样中，损失的细胞的百分比可以高达存在的细胞群的90-95％。

因此本发明提供了通过上述的具有诸如如下特征的装置来制备组织，细胞培养物或者植入物的方法：能够在愈合的过程中发展天然再生能力。

因此，本发明的装置可以植入到目的组织中，所述组织优选是健康的，换言之在移植之前没有其它的损伤，从而获得组织的同源再生。在想要获得细胞样品的目标组织中产生一个创伤，诸如例如一个切口，形状适合于目标组织的装置例如通过本发明的装载管和活塞的方式放置于所述组织中。然后进行缝合将装置稳定在目标组织中。在一个优选的实施方案中，任选存在的牵引装置通过在远离装置，并且远离取样部位的另外的缝合处进行稳定化，并且使后者更简单的定位。

去除装置后(例如在第二个手术过程)，在无菌条件下打开，内容物为：

-直接作为存在用同一类型的组织处理的伤口或者组织缺陷的另一个手术部位的移植体，

-或者放置在培养或者转移培养基中，用于细胞治疗方法，组织工程或者研究。

-如果装置的内容物作为移植体，后者优选移植到其自身已经事先准备好的部位上，目的在于处于具有为移植组织供应营养的新血管形成的组织重建阶段。然后将所有的条件结合来获得非常快速和更加可靠的愈合。

本发明的另一个方面涉及诸如上述的用于制备治疗组织损伤的组织或者移植体的装置的优选应用。

本发明的另一个方面涉及修复组织损伤或者治疗受试者的方法，所述方法包括如下步骤：

a)从人们想要获得细胞样品的组织产生外伤，并根据本发明将一个装置移植到所述组织中(这两个阶段通常同时发生，例如通过切开插入装置形成了外伤。装置的插入通常包括将装置固定在目标组织而进行的缝合步骤)；

b)在限定的时间点回收装置，组织的细胞在所述的时间点具有需要的特征，例如在切开后包括5和21天的5和21天之间，优选在包括6和14天的6和14天之间；以及

c)直接或者在培养和/或调节后，回收装置中的细胞或组织并将它们植入到需要组织修复的受试者的可接受部位或允许来治疗受试者。

在本发明的修复的具体方法中，在重建阶段期间的约14天去除装置。所述方法适合于修复骨头，韧带，肌肉，腱，结缔组织，血管组织等。

在一个优选的实施方案中，取样的细胞是自体细胞。在这种情况下，直接从需要组织修复的受试者提取细胞。它们可以是收集自与需要治疗的受试者一样的双胞胎的同基因的细胞，或者是来自相同种类(相关的或者不相关的)的另外一个受试者的异基因的细胞，换言之在治疗人类患者的情况下的另一个人。

本发明的其他方面的优点将根据下列的实施例而显而易见，所述实施例的给出是为了说明的目的而非限制的方式，附图说明如下：

-图1是本发明的第一个实施方案中的圆柱形装置的分解的前视图；

-图2是沿着图1的II-II的纵向切面图；

-图3是沿着组装的装置的II-II的纵向切面图；

-图4是穿过图1的IV的侧视图；

-图5是图1的穿过V的侧视图显示套圈的内表面；

-图6显示本发明另一个实施方案中处于打开状态的装置；

-图7是沿着图6的VII-VII的剖面图；

-图8类似于图6，只是装置处于关闭状态；以及

-图9是沿着图8的IX-IX的剖面图。

在图1所示的实施方案中，装置包括一个圆柱形套管1，其侧壁用使细胞定殖于装置内表面的孔2穿孔。

加上两个套圈3完成这个装置。每个套圈的直径略小于套管的内直径，使其可以强有力的捏合于其中并且十分牢固。每个套圈3包括一个末端轮缘4，当套圈在适当的位置时通过其没有锐利边缘的圆形的形状将套管的侧面与套圈的外表面连接从而靠在套圈的边缘5并且伸出后者的外表面。

所述外表面通过根据本发明构成装置壁可移动部分的横隔板6形成。

在显示的实例中，隔板6与套圈的剩余部分连接成为一个整体。

相同于或者类似于套管侧壁孔2的孔7排列在每个套圈的横隔板上，如图4和5所示。

可以看出由隔板6形成的壁的可移动部分可以位于关闭状态，其中套圈咬合在套管上。然后装置的内部空间可以与外面仅仅通过在打开位置的孔2，7连通，在所述打开位置套圈被去除。在后者的情况下，装置的内部空间通过其横截面大小的通道向外打开。

图3显示了形成穿过套圈的孔7的环的缝合线。通过在其从装置伸出点的缠绕，缝合线在两个套圈3之间拉紧从而将所述套圈固定连接到套管1。

缝合线8的延伸9用作捕获阶段后抽出装置的牵引线。

在改变的情况下，线可以用打结代替缠绕。

在图6到9显示的实施方案中，装置具有由两个半壳11，12通过柔软的铰链13连接形成的扁平壳形状10。

每个半壳壁用定殖孔14进行穿孔。

每个半壳相对于彼此是可移动的。通过排列，半个壳12被认为是构成了装置壁的可移动部分。

根据本发明，半个壳12可以调解到图8和图9表示的关闭位置，其中装置的内部空间只与外部通过孔14连通，在图7显示的打开位置，其中内部通过整个横截面与外部连通，所述横截面显示在其主平面。

在其主平面，如图6所示，壳具有完整的矩形横截面。在垂直面，尤其如图7和9所示，装置具有一个圆锥形横截面。

一个半壳11含有，相对的铰链13，终止于固定孔16的牵引柄通过所述柄可用于后来回收的上皮缝合。

如图7和9所示，牵引柄15由两个臂构成，其中一个臂15 a是短臂，另一个15 b为长臂，彼此垂直。短臂15 a从半个壳11内伸出，并且上升垂直于沿着其边缘17相对铰链13的半个壳的主要平面。长臂15 b位于半个壳边缘的较短距离并且与短臂15 a形成一个直角。

另外的半个壳含有沿着边缘19相对铰链13的一个狭缝18，其长度略微大于牵引柄15的宽度。

牵引柄类似于装置的剩余部分由柔软的塑料材料制成。它的可变形性足以能够在其自身上弹性地弯曲，从而使其具有固定孔16地游离端当两个半个壳通过绕着铰链13的旋转合在一起时扣住狭缝18的路径。当柄与狭缝吻合时，其啮合于其中并且装置继续关闭直到两个半个壳紧紧地彼此靠紧。正好在关闭装置之前，狭缝消除了由两个柄臂形成的直角。然后牵引柄恢复到其静止位置从而将装置固定到关闭的位置，如图9所示。

在打开装置去除已经定殖其中的细胞之后进行反向运动有助于通过柄上的变形操作将两个半个壳舒展开。

为了防止当装置处于关闭位置时装置被挤碎，两个半个壳中的一个11含有一个中心柱20其位于另外半个壳的内表面，也参见图9。

实施例

实施例1-骨细胞的取样

通过取样骨头上一个至少4厘米的切口取样，例如上颌骨的无牙顶部或者胫骨的前内侧边缘。然后分离粘膜-骨膜。在顶端处1cm，利用冲洗法对骨头逐渐的转孔，每mm从2到5mm直径，以及10mm深，从而符合“细胞收集器”的尺寸。后者置于如此制备的牙槽中的“收集器支持物”，而且牵引线紧靠骨的表面直到切口的另一端。缝合皮肤或者粘膜从而皮下或者在粘膜内固定收集器牵引线的末端环。

指导组织再生的膜可任选地放置在牙槽开口，收集器和线上靠着骨表面，至少伸出牙槽每一侧5mm从而预防软组织的入侵。

然后发生骨组织愈合的不同阶段，伴有生长因子释放和细胞激活。

在移植后14天可以去除“收集器”以从那里抽出来自周围骨组织并且分化为成骨细胞的细胞群。

所述细胞可采用更加有利的方式进行体外培养，而不必等到细胞从骨组织移植物的迁移。

组织也可以移植在需要的部位。

实施例2-腱和韧带成纤维细胞的取样

使用一个带有圆锥形末端的小的(长度：8mm，直径：3mm)圆柱形收集器。在穿过皮肤和逐步切开的切割以后将其移植到腱或者韧带中。

通过缝合将其固定在韧带中。利用另一次缝合也稳定牵引线并且进行皮下固定。然后缝合皮肤。

在14天后通过去除“细胞收集器”收集细胞样品，从而收集最大量的定殖在收集器内部的分化的细胞。在收集器的套圈中相当大的开口(18)可以促进其功能的激活并且因此增强细胞分化。

一旦去除收集器，重新进行缝合。

如同骨头一样，这样获得的细胞在能够培养之前不必从致密的基质脱离，这样能够加速体外培养。

所述细胞也可根据其修复紧靠韧带的伤口。

实施例3-牙周韧带的细胞取样

拔掉牙以后，可以将圆锥槽“收集器”放置于牙槽中收集牙周韧带的细胞。实际上，如果没有清除牙槽，任何的拔取后所述细胞在牙槽洞的表面可以快速增殖。

一周以后，所述细胞可以分化成成骨细胞。在收集器放置的时间段内测定所收集的细胞的特性。在将收集器移植到拔掉的牙的牙槽内以后，在整个时期内，粘膜片状物应该覆盖并且密封牙槽。

缝合的原则是一样的，并且牵引线被拉到距离“收集器”大约3cm的位置。

实施例4-骨膜细胞的取样

优选扁平的单凸“收集器”。取样部位临近骨表面(胫骨，上颚)。在脱去4cm的骨膜以后需要进行整体切割从而将“收集器”滑入准备的“口袋”。与骨具有良好的接触是非常重要的。通过将牵引线的末端环固定到切口的另一端将平面(腱膜和皮肤)再次缝合。

获得足够的成骨细胞群需要14到21天的时间。然后，利用牵引线作为指导去除“收集器”。

Claims (17)

1.提供植入物，细胞或者组织的装置，所述装置包括一个构成壁的主要部分的中空套管(1)，一个或多个各自构成密封套管一端的壁的可移动部分(6)的套圈(3)以及穿过几个孔(7)将壁的可移动部分(6)固定在闭合位置的一根线(8)，其中所述壁由生物相容性材料制成，含有使细胞定殖于所述中空空间的孔(2，7)，每个套圈(3)适合于中空的套管(1)，因此没有突出部分，从而不干扰将装置插入组织及其的抽出。

2.根据权利要求1的装置，其中孔(2，7)的所有面积和壁的所有外表面的比例在0.1和0.5之间。

3.根据权利要求2的装置，其中所述比例为0.2。

4.根据权利要求1的装置，其中壁在关闭位置和打开位置之间含有一个可移动部分(3)，其中在关闭位置的中空空间仅仅通过孔(2，7)与装置的外部连通。

5.根据权利要求1的装置，其中壁赋予装置一种外形：圆柱形，圆锥槽形，纺锤形，双凸或者单凸形或者其它任何适合于人们想从其中取细胞样品的组织的形状。

6.根据权利要求1的装置，其中壁由基于钛，钛合金，陶瓷，铬-钴合金，镍-铬合金，或者聚合物的生物相容性材料制成。

7.根据权利要求1的装置，其中孔(2，7)为圆形，细长形和/或椭圆形和/或其它任何适合于组织的形状。

8.根据权利要求1的装置，其中所述装置的内部中空体积在4到3000mm³之间，所述中空体积的长度在2和35mm之间，宽度在2和15mm之间，而厚度在1和6mm之间。

9.根据权利要求8的装置，其中所述装置的内部中空体积在4到3000mm³之间，长度在5和15mm之间，宽度在3和6mm之间，而厚度在2和4mm之间。

10.根据权利要求9的装置，其中所述装置的内部中空体积在20到100mm³之间。

11.根据权利要求1的装置，其中由套圈构成的壁的可移动部分(6)为半圆形，圆锥形，或扁平形。

12.根据权利要求1到11任一项的装置在制备用于受试者体内取细胞和/或组织样品的试剂盒中的应用。

13.根据权利要求1到11任一项的装置在制备用于对人体实施细胞治疗方法的组合物中的应用。

14.试剂盒，其中含有权利要求1到11任一项的装置。

15.根据权利要求14的试剂盒，其中除了权利要求1到11任一项的装置外，还含有：

(i)一个装载管，其内横截面对应于待插入的装置的外横截面，并且允许所述装置运送到接受部位，和/或

(ii)装入装载管(i)的活塞，其允许所述装置被挤出装载管并插入接受部位，所述活塞具有允许牵引装置通过的“U”形部分。

16.根据权利要求15的试剂盒，其中装载管和活塞为聚合物材料制成。

17.根据权利要求16的试剂盒，其中聚合物材料是透明的。

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