CN1286632A - 嘌呤核苷用于调节中枢神经系统神经元的轴突突出生长 - Google Patents

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Abstract

提供了调节中枢神经系统神经元的轴突突出生长的方法和组合物。也提供了刺激损伤(如,中风、脑外伤、脑动脉瘤、脊髓损伤等)后中枢神经系统神经元的轴突突出生长的方法和抑制疾病例如癫痫,如外伤后癫痫和神经病性疼痛综合征中中枢神经系统神经元的轴突突出生长的方法。这些方法通常包括使中枢神经系统神经元与嘌呤核苷或其类似物接触。优选地,使用肌苷或鸟苷来刺激轴突突出生长并使用6－硫代鸟嘌呤来抑制轴突突出生长。本发明的方法和组合物对于调节哺乳动物中枢神经系统神经元如哺乳动物视网膜神经节细胞的轴突突出生长是特别有用的。也提供了含有本发明嘌呤核苷及其类似物的药物制剂和包装制剂。

Description

嘌呤核苷用于调节中枢神经系统神经元的轴突突出生长
发明背景
早逝的童年，对中枢神经系统(CNS)的损伤导致大多不可逆的功能损害。在脑或脊髓中，由中风、外伤或其它原因导致的损伤可导致终身丧失识别、感觉和运动功能，甚至丧失对生命功能的维持。失去的神经细胞不能被取代，剩余的那些通常不能使断开的连接再生，尽管有限的局部突触再生可使损伤的部位闭合。丧失的功能一般不能治疗。
CNS再生能力的丧失归因于多种因素，包括神经胶质细胞表面上存在的抑制分子抑制轴突生长；缺乏促进生长的合适的底物分子如层粘连蛋白并缺乏所需的合适的营养因子来活化细胞生存和分化所需的基因表达程序。
相对地，外周神经系统(PNS)中，损伤的神经纤维可长距离再生，甚至极好地恢复功能。过去的15年中，神经学家们逐渐认识到这并不是外周和中枢神经系统的神经细胞之间内在区别的结果；引人注目的是，如果给予CNS神经元通过PNS(如坐骨神经)移植片段生长的机会，它会在长距离间延伸其轴突。所以，如果细胞外环境给予正确的信号，CNS神经元会保留生长的能力。使CNS和PNS产生不同生长能力的因素包括位于少突神经胶质细胞表面的部分表征的生长抑制分子，它们包围在CNS的神经纤维上，但在PNS的类似细胞群(许旺细胞)中就很不丰富；促进PNS中生长的基底层和其它表面的分子，这些分子在CNS中缺乏(如，层粘连蛋白)；以及活化细胞生长和分化所需的基因表达程序营养因子、可溶性多肽的。尽管这些营养因子被认为是维持神经细胞活力和分化所必需的，但CNS中起诱导轴突再生作用的具体因素仍然不确定。其结果是，到目前为止，CNS损伤的有效治疗未得到发展。
因此，仍需要调节CNS神经元突出生长的方法和组合物。
发明概述
本发明提供调节中枢神经系统神经元，特别是哺乳动物中枢神经系统神经元的轴突突出生长的方法和组合物。本发明至少部分基于嘌呤核苷及其类似物能够调节(即，或者是刺激或者是抑制)CNS神经元，包括哺乳动物CNS神经元，如视网膜的神经节神经元的轴突突出生长的发现。而且，本发明嘌呤核苷及其类似物在缺乏任何其它神经元生长调节剂(如神经生长因子)的情况下对于调节CNS神经元轴突突出生长是有效的。
因此，本发明的方法通常包括将中枢神经系统神经元与嘌呤核苷或其类似物接触。一方面，本发明提供刺激突出生长的方法，优选使用肌苷或鸟苷或其类似物。另一方面，本发明提供抑制突出生长的方法，优选使用6-硫鸟嘌呤。在特别优选的实施方案中，本发明的方法调节视网膜神经节细胞的轴突突出生长。
本发明刺激中枢神经系统神经元轴突突出生长的方法可在CNS神经元损伤或其它伤害(如，中风、脑外伤、大脑的动脉瘤、脊髓损伤等)之后使用。本发明抑制CNS神经元轴突突出生长的方法可在产生异常轴突突出生长的神经增生疾病中使用，如在癫痫(如，外伤后癫痫)和神经病性疼痛综合征中使用。
一方面，嘌呤核苷或其类似物通过引入受治疗者的中枢神经系统中，例如引入受治疗者的脑脊液中来给予本发明的受治疗者。在本发明的某些方面中，嘌呤核苷或其类似物经鞘内给药，例如引入脑室、腰区或者小脑延髓池中。在优选的实施方案中，本发明的刺激方法促进损伤视网膜神经节细胞的突出生长。在这种情况下，嘌呤核苷或其类似物可局部给予视网膜神经节细胞来刺激轴突突出生长。
在本发明的另一方面中，嘌呤核苷或其类似物以可药用制剂的形式给药。可药用制剂可以是分散系统，例如基于类脂的制剂、脂质体制剂或多泡脂质体制剂。可药用制剂也可含有聚合物基料，例如选自合成的聚合物如聚酯(PLA、PLGA)、聚乙二醇、泊咯沙姆(poloxomer)、聚酐和pluronics(环氧丙烷与环氧乙烷嵌段共聚物)或选自天然衍生的聚合物，如白蛋白、藻酸盐、纤维素衍生物、胶原、纤维蛋白、明胶和多糖。
在优选的实施方案中，在将可药用制剂给予受治疗者以后，可药用制剂使嘌呤核苷持续释放，如“缓慢释放”给受治疗者达至少一周，更优选达至少一个月。使本发明制剂实现持续释放的优选方法包括使用缓慢释放聚合物胶囊或包括该制剂的输入泵。
本发明还包括嘌呤核苷或其类似物用于制备调节中枢神经系统神经元，优选哺乳动物CNS神经元轴突突出生长的药物。在优选的实施方案中，该药物不包括除嘌呤核苷或其类似物之外的其它神经元生长调节剂。例如，在一个实施方案中，药物不包括神经生长因子。
本发明也提供含有本发明嘌呤核苷或其类似物和可药用载体的药物组合物和包装的制剂。
本发明的其它特征和优点通过下列详细的说明书和权利要求书的描述将变得显而易见。
附图简述
图1A-D显示对轴突突出生长的嘌呤源作用的定量结果。
图1A描述在所示的1、10和100μM浓度下腺苷(A)、鸟苷(G)、胞苷(C)、尿苷(U)和胸苷(T)对轴突生长作用。数据通过减去阴性对照的生长水平然后除以用20-30％AF-1处理的阳性对照的净生长来标准化。
图1B描述腺苷和鸟苷的量效曲线。由这些数据评估的EC50是腺苷为10-15μM并且鸟苷为20-30μM。
图1C描述腺苷的作用。
图1D描述环AMP(dBCAMP，二丁酰环AMP；Sp-8-Br-cAMPS，8-溴腺苷-3’，5’环单硫代磷酸)或环GMP(8-BrcGMP，8-溴环GMP；8-pcpt-cGMP，8-(4-氯苯基硫代)鸟苷-3’，5’环单磷酸)的可渗透膜类似物的作用。数据表示为平均值+平均值的标准误差(SEM；如果＜0.02则不显示)并且经2-4次独立的实验来汇集。p值通过与阴性对照生长相比的双侧t检验来计算。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。
图2显示腺苷不通过细胞外受体刺激生长。由AF-1(a-b)、100μM腺苷(Ado)(c-d)或100μM鸟苷(Guo)(e-f)刺激的突出生长不受加入20pM 8-PST，一种A1和A2腺苷受体抑制剂(a，c和e与b，d和f的生长进行比较)的影响。不能水解的腺苷类似物2-氯腺苷(2-CA，100μM)减少生长使其低于基线水平(g)(在3次实验中p＜0.001)。
图3显示腺苷必须水解才刺激突出生长。上图描述脱氧柯福霉素(DCF)和外源性腺苷脱氨酶(ADA)对由AF-1(a-c)、腺苷(d-f)和鸟苷(g，h)诱导的突出生长的影响。下图描述脱氧柯福霉素(DCF)和外源性腺苷脱氨酶(ADA)对由AF-1(a-c)、腺苷(d-f)和鸟苷(g，h)诱导的生存的影响。考虑到用外源性ADA水解扩增腺苷不改变腺苷的活性(f)，用DCF阻断内源性ADA活性引起腺苷抑制生长(e，上图)和生存(e，下图)。***p＜0.001
图4描述肌苷的量效曲线。在大于50μM的浓度下，肌苷刺激作用约为AF-1所产生的生长最高水平的60％。肌苷的EC50估计为10-15μM。次黄嘌呤不具有活性，而5’IMP似乎低于肌苷活性的1/10。由10μM以上的所有肌苷浓度刺激的突出生长显著高于对照(p＜0.001)。
图5描述肌苷和鸟苷经细胞内机制刺激生长。在20μM时，NBTI(一种抑制剂或嘌呤转运剂)对AF-1的活性没有影响，但阻断大约90％的肌苷(50μM)或鸟苷(100μM)活性。***有或没有药物的生长差异是显著的，p＜0.001。数据由4次独立的实验汇总。
图6A显示AF-1包含不明显的肌苷活性。在G-10交联葡聚糖柱上，AF-1洗脱具有7分钟峰，在该时间峰(即，9-10分钟)的肌苷洗脱液未检测到活性。
图6B显示肌苷和鸟苷的作用不依赖于细胞密度。数据由多个独立的实验获得，每个数据均由单点来表示，通过这些数据来分析涂布密度对细胞突出生长的影响。在所有情况下，肌苷或鸟苷的浓度保持100μM。通过最小-二乘-法(Cricket Graph)计算回归线并在符号下标出。
图7A-D显示AF-1的作用被6-硫代鸟嘌呤抑制但可通过肌苷来恢复。
图7A显示在10μM时，嘌呤类似物6-TG抑制AF-1诱导的生长到基线之下(线2比1：p＜0.001)，并且减少由25μM肌苷(Ino-25)诱导的生长大约50％(线4比3)；较高浓度的肌苷或鸟苷诱导的生长(Guo-100：线8比7)不受影响。100μM的肌苷恢复所有10μM6-TG存在下的由AF-1诱导的生长(线10)，其显著高于单独或与10μM6-TG一起的100μM肌苷诱导的生长(p＜0.01)。
图7B显示在本文所使用的6-TG浓度下没有对细胞生存产生影响。
图7C显示AF-1和肌苷有部分加合作用。各自在0、EC50或饱和浓度下评价AF-1和肌苷的生长情况。尽管各自最高浓度一半的效果是加合的(线5)，但在各自更高浓度时生长达到一个平台水平(线6、8、9)。
图7D进一步显示了对6-硫代鸟嘌呤作用的研究。AF-1刺激的生长完全被6-TG(10μM)阻断并且在NBTI(N，20μM)和/或潘生丁(D，10μM)(抑制肌苷活性的嘌呤转运阻断剂抑制剂)的存在下没有恢复。6-TG的抑制作用与两种还原剂α-生育酚(α-toc，30μM)或者谷胱甘肽α-甲基酯(MEG，100μM)不同。
图8描述嘌呤对大鼠视网膜神经节细胞的影响(定量研究)。CNTF所刺激的生长被6-TG(10mM)抑制但通过加入25μM肌苷得到完全恢复。与对照相比具有显著性差异：*p=0.03；***p＜0.001。结果由3次独立的研究汇总。
发明详述
本发明提供调节中枢神经系统(CNS)神经元，特别是哺乳动物中枢神经系统神经元的轴突突出生长的方法。本发明至少部分基于发现某些嘌呤核苷(如，肌苷和鸟苷)及其类似物诱导刺激金鱼及哺乳动物视网膜神经节细胞的轴突突出生长(分别参见实施例Ⅰ和Ⅺ)。
本发明至少部分也基于发现其它嘌呤核苷如腺苷及其类似物诱导抑制视网膜神经节细胞的轴突突出生长(参见实施例Ⅹ)。如实施例Ⅱ所示，嘌呤核苷比相应核苷酸更具活性，并且他们通过细胞内途径发挥其作用(参见实施例Ⅵ)。而且，腺苷通过脱氨作用(如通过内源性腺苷脱氨酶)转化为肌苷导致刺激轴突生长，而腺苷脱氨作用的阻断导致抑制轴突突出生长(参见实施例Ⅳ)。再者，嘌呤核苷或其类似物对轴突突出生长的这种作用不需要其它神经生长调节剂(如神经生长因子)的存在。
因此，本发明调节CNS神经元轴突突出生长的方法通常包括将中枢神经系统神经元与嘌呤核苷或其类似物接触以便调节轴突突出生长。
在优选的实施方案中，本发明的方法用于刺激(如，使用肌苷或鸟苷)损伤如，中风、脑外伤、大脑动脉瘤或脊髓损伤后中枢神经系统神经元的轴突突出生长。
在其它优选的实施方案中，本发明的方法用于抑制(如，使用6-硫代鸟嘌呤)神经增殖疾病如产生异常的或过度的轴突突出生长的疾病，如癫痫或神经病性疼痛疾病中CNS神经元的轴突突出生长。观察到在癫痫病人，如外伤后的癫痫病人中，锥体神经元损伤的轴突的长芽导致形成过度再生的刺激性突触和兴奋过度的神经网状物(参见Prince D.A.等人(1997)Nature Medicine 3：957-958；和MckinneyR.A.等人(1997)Nature Medicine 3：990-996)。而且，神经病性疼痛综合征与不理想的神经末端长芽有关(例如，描述在Woolf C.J.等人(1983)Nature 306：686-688)。
本文所使用的语言“调节中枢神经系统神经元的轴突突出生长”打算包括刺激或抑制中枢神经系统神经元的轴突生长到各种水平(如允许靶向CNS损伤治疗的水平)的能力。
本文所使用的术语“突出生长”(即，轴突突出生长)是指轴突长出CNS神经元的过程。突出生长可导致完全新的轴突或修复部分损伤的轴突。突出生长通常由长度上延伸至少5个细胞直径的轴突生长过程来表明。而且，轴突突出生长可由GAP-43的表达来表明(例如可通过免疫染色来检测)。
本文所使用的术语“CNS神经元”打算包括不对神经生长因子(NGF)产生反应的脑和脊髓的神经元。该术语不打算包括支持或保护细胞如星形细胞、少突神经胶质细胞(oligodentrocytes)、小神经胶质细胞、室管膜等，也不打算包括外周神经系统(如，躯体的、自律的、交感的或副交感的神经系统)的神经元。优选的CNS神经元是哺乳动物神经元，更优选的是人的神经元。
本文所使用的语言“接触”打算包括将嘌呤核苷或其类似物引入CNS神经元的近端使得嘌呤核苷或其类似物可调节所述CNS神经元的轴突突出生长过程的体内或体外方法。
本文所使用的语言“嘌呤核苷”在本领域是已知的并且打算包括任何连接糖的嘌呤碱或其类似物。例如，嘌呤核苷包括鸟苷、肌苷或腺苷和类似物包括6-硫代鸟嘌呤(6-TG)等。本文所使用的嘌呤核苷“类似物”指保留有功能活性所需的嘌呤核苷的化学结构如连接糖的嘌呤环，但也含有某些在天然产生的嘌呤核苷中未发现的化学结构如修饰的侧基(如，硫-或氯-基)的化合物。
在一个具体实施方案中，优选使用肌苷或鸟苷或其类似物来刺激CNS神经元的轴突突出生长。在另一具体实施方案中，优选使用6-硫代鸟嘌呤来抑制CNS神经元的轴突突出生长。腺苷起抑制性嘌呤核苷的作用，但通过腺苷脱氨酶被转化为肌苷，肌苷是刺激性嘌呤核苷。因此，腺苷在脱氨转化为肌苷(如，在内源性腺苷脱氨酶活性存在下)后可用作刺激性嘌呤核苷。另外，腺苷脱氨酶活性被阻断时，腺苷可用作刺激性嘌呤核苷。腺苷类似物，2-氯腺苷也可用作抑制性核苷，尽管它的其它作用如A1、A2和/或A3受体可使它很少优选在体内使用。
本发明也提供刺激中枢神经系统神经元损伤后突出生长的方法。该方法包括给予受治疗者嘌呤核苷(如，肌苷或鸟苷)或其类似物。
本文所使用的术语“受治疗者”打算包括易于CNS损伤的动物，优选哺乳动物，最优选人。在优选的具体实施方案中，受治疗者是灵长目动物。在更优选的具体实施方案中，灵长目动物是人。受治疗者的其它实例包括狗、猫、山羊和牛。
本文所使用的术语“损伤”打算包括直接或间接影响CNS正常功能的损害。例如，损伤可以是对视网膜神经节细胞的损害；脑外伤；与中风有关的损伤；与大脑动脉瘤相关的损伤；脊髓损伤，包括单瘫、双瘫、截瘫、偏瘫和四肢瘫；神经增殖疾病；癫痫，如外伤后脑损伤；或神经病性疼痛综合征。
本文所使用的术语“中风”在本领域中是已知的并且打算包括因兴奋或脑动脉梗阻(如，血栓引起的)导致突然减低或丧失意识、感觉和遂意运动。
本文使用的术语“脑外伤”在本领域中是已知的并且打算包括外部殴打头引起的脑或相连脊髓损害，但常常没有渗透到脑外壳的疾病。一般来说，起初的外伤可导致扩张的血肿、蛛网膜下出血、大脑水肿、升高的颅内压(ICP)和大脑低氧症，这又可因低大脑血流(CBF)而导致严重的继发事件。可药用制剂
在本发明的方法中，嘌呤核苷或其类似物可以可药用制剂的形式给药。这种可药用制剂通常包括嘌呤核苷或其类似物以及可药用载体和/或赋形剂。本文使用的“可药用载体”包括生理相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣材料、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。例如，载体适于注射到脑脊液中。赋形剂包括可药用稳定剂和崩解剂。本发明涉及任何可药用制剂，包括大分子复合物、毫微胶囊、微球或珠粒形式的合成或天然聚合物，和基于类脂的制剂包括水包油型乳剂、微胶粒、混合的微胶粒、合成的膜泡和再密封的红细胞。
在一个具体的实施方案中，可药用制剂包含聚合物基料。
术语“聚合物”或“聚合的”在本领域中是已知的并且包括由重复的单体单位构成的结构骨架，它能够释放嘌呤核苷或其类似物以便治疗靶向疾病，如CNS损伤。该术语也包括共聚物和均聚物如合成或天然产生的。也包括线性聚合物、分枝聚合物和交联聚合物。
例如，适于形成本发明中使用的可药用制剂的聚合物材料包括天然衍生的聚合物如白蛋白、藻酸盐、纤维素衍生物、胶原、纤维蛋白、明胶和多糖，以及合成的聚合物如聚酯(PLA、PLGA)、聚乙二醇、泊咯沙姆、聚酐和pluronics。这些聚合物与神经系统包括中枢神经系统是生物相容的，它们在中枢神经系统中可生物降解而没有因降解产生任何毒性副产物，并且它们具有通过控制聚合物的动力学特性改善嘌呤核苷释放的方式和持续时间的能力。本文所使用的术语“可生物降解”意指聚合物将随时间而通过酶的作用，通过水解作用和/或通过其它类似机理在受治疗者的体内降解。本文所使用的术语“生物相容的”意指聚合物与活组织或活器官相容，不具有毒性或产生损伤并且不引起免疫排斥。
聚合物可使用本领域已知的方法来制备(Sandler，S.R.；Karo，W.Polymer Syntheses；Harcourt Brace：Boston，1994；Shalaby，W.；Ikada，Y.；Langer，R.；Williams，J.Polymers of Biologicaland Biomedical Significance(ACS Symposium Series 540；American Chemical Society：Washington，DC，1994))。聚合物可设计为可塑性的；可控制生物活性侧链之间的距离和聚合物骨架和基团之间的接头长度。其它合适的聚合物及其制备方法描述在美国专利5455044和5576018中，其内容引入本文供参考。
聚合物制剂可按照美国专利4883666中描述的方法通过在液化的聚合物中分散嘌呤核苷来制备，该文献的教导内容引入本文供参考，或者按照Odian G.，Principles of Polymerization and ringopening polymerization，第二版，John Wiley & Sons，NewYork，1981所述方法来批量聚合、界面聚合、溶液聚合和环聚合，其内容引入本文供参考。制剂的性质和特点通过改变反应温度、聚合物和嘌呤核苷的浓度、所使用的溶剂的类型和反应时间等参数来控制。
嘌呤核苷或其类似物可包囊在一种或多种可药用聚合物中来形成微囊、微球或微粒，这些术语在本文中可以互换。微囊、微球和微粒通常是自由流动的粉末，由2毫米或更小直径，通常为500微米或更小直径的球状颗粒构成。小于1微米的颗粒通常称作毫微胶囊、毫微颗粒或毫微球。微囊和毫微胶囊、微球和毫微球或者微粒和毫微颗粒之间的最主要的区别是大小；通常两类产品的内部结构之间的区别如果有的话也很小。在本发明中，平均直径约小于45μm，优选小于20μm，更优选在约0.1到10μm之间。
在另一实施方案中，可药用制剂包含基于类脂的制剂。任何已知的基于类脂的药物释放系统均可用于本发明的实施。例如，多泡脂质体(MVL)、多层脂质体(也称作多层泡或“MLV”)、单层脂质体，包括小的单层脂质体(也称作单层泡或“SUV”)和大的单层脂质体(也称作大的单层泡或“LUV”)均可使用，只要其能够产生持续释放速度的包囊的嘌呤核苷或其类似物。在一个实施方案中，基于类脂的制剂是多泡脂质体系统。在PCT申请号US96/11642，US94/12957和US94/04490中描述了制备控制释放的多泡脂质体药物释放系统的方法，这些内容引入本文供参考。
合成膜泡组合物通常为磷脂与甾类，特别是胆固醇的组合物。其它磷脂或其它类脂都可以使用。
产生合成膜泡可使用的类脂的实例包括磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘脂、脑苷脂类和神经节苷脂。优选使用的磷脂包括卵磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油和二油酰磷脂酰甘油。
在制备含有嘌呤核苷或其类似物的类脂泡时，应当考虑下列因素：嘌呤核苷包囊率、嘌呤核苷的易变性、所得微泡群体的均匀度和大小、嘌呤核苷与类脂的配比、渗透性、制剂的不稳定性和制剂的可药用性(参见Szoka等人，Annual Reviews of Biophysics andBioengineering，9∶467，1980；Deamer等人，in Liposomes，MarcelDekker，New York，1983，27；和Hope等人，Chem.Phys.Lipids，40∶89，1986，其内容引入本文供参考)。可药用制剂的给药
本发明可药用制剂被给药使得嘌呤核苷或其类似物与中枢神经系统接触并由此调节其轴突生长。本发明预计制剂可局部和系统给药，尽管局部给药是优选的，可实现嘌呤核苷或其类似物的有效局部浓度并避免因系统给予药物可能产生的副作用。在一个实施方案中，嘌呤核苷或其类似物通过引入受治疗者的中枢神经系统中，如引入受治疗者的脑脊液中给药。在本发明的某些方面，嘌呤核苷或其类似物可经鞘内引入到，如脑室、腰椎区、或小脑延髓池中。在另一方面，嘌呤核苷或其类似物经眼内引入，由此与视网膜神经节细胞接触。
可药用制剂易于被悬浮在含水载体中并通过常规的皮下注射针或使用输入泵来引入。引入之前，制剂可优选用美国专利436742中描述的γ-射线或电子束灭菌法灭菌，文献的内容引入本文供参考。
在一个实施方案中，本文所述的嘌呤核苷制剂在损伤到损伤发生后大约100小时的时间内给予受治疗者，例如在损伤后的24、12或6小时给药。
在本发明的另一实施方案中，嘌呤核苷制剂经鞘内给予受治疗者。本文所使用的术语“鞘内给药”打算包括将嘌呤核苷制剂直接释放到受治疗者的脑脊液中，是通过包括经钻孔或小脑延髓池或腰穿刺等注射到后脑室的技术来进行的(在Lazorthes等人，Advances inDrug Delivery Systems and Applications inNeurosurgery，143-192和Omaya等人，Cancer Drug Delivery，1：169-179，这些文献的内容引入本文供参考)。术语“腰区”打算包括第3和第4腰(下端背部)椎骨之间的区域。术语“小脑延髓池”打算包括脑后头颅末端和脊髓开始之间的区域。术语“脑室”打算包括与脊髓中心腔连接的脑腔。通过直接注射嘌呤核苷制剂或通过使用输入泵可实现将嘌呤核苷给予上述任何部位。为了注射，本发明的嘌呤核苷制剂可配制成液体溶液，优选用生理相容的缓冲液如Hank’s溶液或林格溶液。另外，嘌呤核苷制剂可配制成固体形式并且在使用之前重新溶解或悬浮。也包括冻干形式。注射例如可以是嘌呤核苷制剂的快速浓注或连续输注(例如，使用输入泵)形式。
在本发明的一个实施方案中，嘌呤核苷制剂经后脑室注射给予受治疗者的脑中，优选在损伤发生后的100小时之内(例如，损伤的6、12或24小时之内)。例如，注射可通过受治疗者的头颅上的钻孔来进行。在另一实施方案中，制剂通过外科插管在受治疗者的脑室中来给药，优选在损伤发生后的100小时之内(例如，损伤的6、12或24小时之内)给药。例如，可注射到较大的后脑室中，甚至也可注射到第3和第4小室中。再一实施方案中，嘌呤核苷制剂通过注射到受治疗者的小脑延髓池或腰区来给药，优选在损伤发生后的100小时之内(例如，损伤的6、12或24小时之内)给药。给药持续时间和水平
在本发明方法的优选实施方案中，将嘌呤核苷或其类似物与CNS神经元长时间接触来产生调节轴突突出生长的作用。与嘌呤核苷或其类似物的持续接触例如可通过在一段时间内，如一周、几周、一个月或更长时间反复给予嘌呤核苷或类似物来实现。更优选地，用于给予嘌呤核苷或其类似物的可药用制剂可使嘌呤核苷或其类似物持续释放，如“缓慢释放”给受治疗者。例如，可药用制剂给予受治疗者后，制剂可释放嘌呤核苷或其类似物至少一、二、三或四周。优选地，本发明被治疗者用嘌呤核苷或其类似物治疗至少30天(或者通过反复给药或者使用持续释放系统，或者两种方式同时使用)。
本文使用的术语“持续释放”打算包括在给药后的一段时间内在体内连续释放嘌呤核苷或其类似物，优选至少几天、一周、几周、一个月或更长时间。嘌呤核苷或其类似物的持续释放例如可通过嘌呤核苷或其类似物在一段时间内的持续治疗作用来证明(如，嘌呤核苷或其类似物的持续释放可通过CNS神经元在一段时间内持续突出生长或突出生长持续抑制来证明)。另外，嘌呤核苷或其类似物的持续释放可通过检测嘌呤核苷或其类似物在体内存在一段时间来证明。
持续释放的优选方法包括使用聚合物胶囊或小泵来释放制剂。聚合物胶囊按上文所述方法来制备。在本领域可得到可植入的输入泵系统(例如，Infusaid；如参见，Zierski，J.等人(1988)ActaNeurochem.增刊43：94-99；Kanoff，R.B.(1994)J.Am.Osteopath.Assoc.94：487-493)和渗透泵(由Alza Corporation出售)。另一种给药模式是通过可植入的外部可操作的输入泵来进行。合适的输入泵系统和储药库系统在Blomquist的美国专利5368562和Doan的美国专利4731058中也进行了描述，是由Pharmacia Deltec Inc.开发的。
本发明方法使用的药物制剂含有治疗有效量的嘌呤核苷或其类似物。“治疗有效量”指在剂量上和所需的时间期限上来说实现所需结果有效的量。嘌呤核苷或其类似物的治疗有效量可随各种因素来变化，如受治疗者疾病的状态、年龄和体重，以及嘌呤核苷或其类似物(单独或与一种或多种其它治疗剂组合的)在受治疗者中产生所需反应的能力。剂量方案可被调节以产生最佳的治疗效果。治疗有效量也是有益的治疗作用超过嘌呤核苷或其类似物的任何毒性或有害的作用时的剂量。非限定的剂量范围为约5μM-1000μM，尽管具体最佳的剂量会根据其它因素，所使用的具体嘌呤核苷或其类似物进行改变。
通过肌苷实现刺激轴突突出生长作用时，治疗有效浓度的非限定的范围为5μM-1000μM，更优选10μM-500μM。甚至更优选地，与CNS神经元接触的肌苷的局部浓度约为25μM。
通过鸟苷实现刺激轴突突出生长时，治疗有效浓度的非限定范围为5μM-1000μM，更优选10μM-500μM。甚至更优选地，与CNS神经元接触的鸟苷的局部浓度均为100μM。
通过6-硫代鸟嘌呤实现对轴突突出生长的抑制作用时，与CNS神经元接触的6-硫代鸟嘌呤的局部浓度优选为50μM或更低。可使用相对较高剂量的腺苷来抑制轴突突出生长，如，高于5mM(以便抑制其转化为肌苷)。然而，在此浓度下，腺苷可变得有毒。因此，优选腺苷类似物如6-硫代鸟嘌呤给予哺乳动物受治疗者来抑制轴突生长。
应当注意剂量值可根据欲被减轻的疾病的严重性来改变。还知道对于任何特定受治疗者来说，具体剂量方案应当根据个体需要和专家对给予嘌呤核苷或其类似物的个体的判断随时间来调整并且本文所述的剂量范围仅仅是例举性的并且不打算限定本发明要求保护的范围或操作。
在另一实施方案中，本发明提供一种药物组合物，基本上由嘌呤核苷或其类似物(如，肌苷、鸟苷、6-硫代鸟嘌呤)和可药用载体组成，也提供通过将组合物与CNS神经元接触来调节轴突突出生长的方法。术语“基本上由……组成”意指不含任何其它神经元生长调节剂如神经生长因子(NGF)的药物组合物。在一个实施方案中，本发明药物组合物可作为包装制剂来提供。包装的制剂可包括在容器中的本发明药物组合物并且印有给予组合物治疗患有与中枢神经系统神经元损伤如视网膜神经细胞损伤、脊髓损伤或脑外伤有关的疾病的使用说明书。本发明也包括使用本发明的嘌呤核苷及其类似物制备调节CNS神经元(如，哺乳动物CNS神经元)突出生长的药物。CNS神经元的体外治疗
还可以将CNS神经元与嘌呤核苷或其类似物在体外接触来体外调节轴突的突出生长。因此，可以从受治疗者中分离CNS神经元细胞并使用本领域公知的技术使其在体外生长，然后按本发明方法进行处理以调节轴突突出生长。简而言之，通过使神经元细胞移出神经组织片段粘合到合适的底物上(如，培养皿)或者通过使组织解聚如通过机械解聚或酶解产生CNS神经元细胞悬浮液而没到神经元细胞培养物。例如，可以使用胰蛋白酶、胶原酶、弹性蛋白酶、透明质酸酶、DNA酶、链霉蛋白酶、分散酶或其各种组合物。胰蛋白酶和链酶蛋白酶产生最完全的解聚但可破坏细胞。胶原酶和分散酶产生非常不完全的解聚但损伤很少。在Freshney R.I.，Cultrue of Animal Cells，A Manual of Basic Technique，第三版，1994中描述了分离组织(如，神经组织)和解聚组织以获得细胞(如，CNS神经元细胞)的方法，该文献的内容引入本文供参考。
然后将这些细胞与一定量的嘌呤核苷或其类似物接触上文所述的一段时间。一旦在CNS神经元细胞中实现对轴突突出生长的调节，这些细胞如通过植入再给予受治疗者。
通过下列实施例来进一步举例说明本发明，这些实施例不对本发明构成限定。在本申请中引用的所有参考文献、专利和公开的专利申请的内容均引入本文供参考。
实施例
在下列实施例中，使用下列方法：样品制备
基本上按照Schwalb等人1995和Schwalb等人，Neuroscience，72：901-910，1996所描述的方法来获得轴突发生因子-1(Axogenesis factor-1)。解离眼神经，切成1mm长的片段，并且以6根神经在3ml L-15培养基(Gibco BRL)或者磷酸盐缓冲盐水(Gibco BRL)中的比例培养。3-4小时后，神经片段通过经0.22μm孔低蛋白结合滤器(Gelman)过滤来分出。通过超滤来制备调节介质的低分子量部分，首先用3kDa截留分子量(Amicon Centriprep-3)超滤，然后用1kDa截留分子量(Filtron)超滤。滤液以20-30％最终浓度用作阳性对照。腺苷、腺苷5’单磷酸、腺苷脱氨酶、腺苷二磷酸、腺苷三磷酸、8-溴-3’，5’-环鸟苷单磷酸、3’，5’-环腺苷单磷酸、5’环鸟苷单磷酸、胞苷、鸟苷、次黄嘌呤、肌苷、5’-肌苷单磷酸、α-生育酚、6-硫代鸟嘌呤、胸苷、尿苷和黄嘌呤均从Sigma ChemicalCo.，St.Louis，MO.，处获得，8-对磺基苯基-茶硷、二丁酰环腺苷单磷酸和2-去氧助间型霉素来自Calbiochem，2-氯腺苷、赤型-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤和IB-MECA来自Research Biochemicals，Inc.(Natick，MA)，并且4-(硝基苄基-6-硫代肌苷)来自AldrichChemicals，Inc。cAMP和cGMP的可渗透膜的、不可水解的类似物、8-溴-腺苷-3’，5’-环硫代单磷酸酯和8-(4-氯苯基硫代)鸟苷-3’，5’-环单磷酸酯来自Biolog.。分离视网膜培养物
将6-10cm长的金鱼(Comet Variety，Mt.Parnell Fisheries，Mt.Parnell PA)放置在暗处进行适应并分离其视网膜。视网膜与木瓜蛋白酶(20μg/ml)一起培养，在室温下用半胱氨酸(2.8mM)活化30分钟，然后通过轻轻研磨来分离。反复进行研磨和沉降产生近乎均匀的神经节细胞培养物，这通过其卵圆的形状、发亮相的外观、大小(直径15μm)和仅仅有1或2均匀口径的轴突延伸易于鉴别；这些标准已经通过退减标记得到了证实(参见Schwartz ＆Agranoff，BrainRes.206：331-343，1981和Schwalb等人，J.Neuroscience15：5514-5625，1995，其内容引入本文供参考)。低密度培养物通过以约5×103细胞/孔的密度涂在聚L-赖氨酸涂覆的24-孔培养皿(Costar，Cambridge，MA)来产生。细胞在不含血清的特定培养基中于21℃温度下维持，培养基含有在Eagle’s L-15培养基中的胰岛素、硒、转铁蛋白、牛血清白蛋白、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、激素和维生素，记载在Schwalb等人1995中，其内容引入本文供参考。通过Barres等人在Neuron，1：791-803，1988(其内容引入本文供参考)中描述的免疫淘选来制备纯化的大鼠视网膜神经节细胞的分离培养物。简而言之，使用半胱氨酸活化的木瓜蛋白酶来从产后8天的Sparague-Dawley大鼠中分离视网膜。通过用抗大鼠巨噬细胞抗体(Accurate)培养然后用抗兔IgG抗体免疫淘选来分离巨噬细胞。通过用抗-Thy-1抗体免疫淘选然后用胰蛋白酶逐出来分离神经节细胞用作低密度培养物。大鼠视网膜神经节细胞使用上文所述的相同培养基，只是还含有30mM碳酸氢盐，在二氧化碳培养器中于37℃温度下进行培养。实验设计
在典型的实验中，样品以一式四份随机位置涂敷在24孔板中并且保守编号的秘密来确保生长评价以盲化方式进行。每次实验包括4孔阴性对照(培养基并仅仅加入补充物)和4孔阳性对照(已知活性的标准化的AF-1样品)。6天后，使用相差显微镜以400×的放大倍数通过每孔25个连续区域来评价所有神经节细胞的生长和存活情况(每孔记录约150个神经节细胞)。延伸5个细胞直径的长度是生长的标准，因为这样明显区别于阴性对照刺激的细胞(参见Schwalb等人1995)。完成计数后，打开编号，把数据制成表，并使用CrichetGraph(CA Associates，Islandia，NY)计算每个样品4个重复孔的平均值和标准误差。通过减去阴性对照的生长(通常为4-5％)并且除以阳性对照的净生长来使数据正常化。在大多数良好的实验中，暴露于AF-1六天后，超过50％的视网膜神经节细胞(RGCs)长度延伸轴突5个细胞的直径。根据成对双侧T检验来进行组间比较。按图例所示对大多数样品进行某些独立的实验。在某些情况下，用染料5，6-羧基荧光素二乙酸酯评价细胞活力。用每个高活力区的活RGCs的数目来描述细胞的生存情况。实施例Ⅰ嘌呤诱导的对金鱼视网膜神经节细胞的轴突突出生长的刺激作用
由眼神经神经胶质分泌的低分子量生长因子AF-1诱导金鱼视网膜神经节细胞显著突出生长。单独使用特定培养基的对照条件产生很小的突出生长。这两个边界是使其它因子的结果正常化的根据。对浓度在1-100μM的核苷(A、G、C、U和T)进行试验时，腺苷和鸟苷刺激金鱼视网膜神经节细胞突出生长几乎与AF-1相同(参见图1A)。在该浓度范围内，嘧啶碱没有活性。嘌呤更完整的量效曲线显示腺苷是两种中活性更强的，EC50为10-15μM(参见图1B)。在50-100μM浓度时，腺苷诱导最大的反应，等于AF-1诱导水平的60％，但在更高浓度时，突出生长降低。鸟苷的EC50比腺苷高(25μM，参见图1B)，并且在100μM时，刺激水平与腺苷活性的最高水平相同，更高浓度时活性没有明显的降低。实施例Ⅱ嘌呤核苷酸的活性比核苷低
在细胞外，腺苷可刺激P1受体(它对腺苷本身的反应最佳)或P2受体(它对ATP或其它核苷酸产生最大的反应)。AMP和ADP在100μM而ATP在10μM(不是100μM)(参见图1C)显示少许明显水平的活性(p0.05)。由于嘌呤核苷酸的活性明显低于嘌呤本身的活性，不太可能牵涉P2受体。似乎有理的是，嘌呤可能具有细胞内作为环核苷酸前体的功能，可作为第二个轴突产生的信使。所以，检测了cAMP和cGMP可渗透膜的类似物的生物活性。显示1-100μM的二丁酰环腺苷单磷酸(dBcAMP)和8-溴-3’，5’-环鸟苷单磷酸(Br cGMP)均不具有任何活性(参见图1D)。以高达1mM浓度试验时，也发现近来开发的不可水解的cAMP(8-溴腺苷-3’，5，-环硫代单磷酸酯：Sp-8-Br-cAMPS)和cGMP(8-(4-氯苯基硫代)鸟苷-3’，5’-环单磷酸酯：8-pcpt-cGMP)可渗透膜类似物不具有活性(参见图1D)。实施例Ⅲ腺苷的阳性结果不是通过细胞外腺苷受体介导的
在Collis等人Brit.J.Pharmacol.92：69-75，1987(其内容引入本文供参考)中描述的8-对(磺基苯基茶碱)(8-PST)是两种最普通腺苷受体(A1和A2)的抑制剂。在20μM(该剂量几乎完全阻断腺苷在大鼠中的受体介导作用)，8-PST对由腺苷、鸟苷或AF-1刺激的突出生长没有影响(参见图2)。使用不可水解的类似物2-氯腺苷(2CA)(它是A1、A2和A3受体的激动剂)研究证明腺苷的阳性结果不是通过细胞外腺苷受体介导的。在10和100μM浓度时，2-CA引起生长小的但明显的减少，在3个独立的实验中有3个低于基线(参见图2)。实施例Ⅳ腺苷必须被水解成肌苷才刺激生长
为了研究腺苷的活性是不是由于活性代谢物的形成，使用去氧助间型霉素(DCF)或者赤型-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤(EHNA)来抑制ADA的活性。在10μM DCF存在下，100μM的腺苷不仅不能刺激生长而且还使其降低到基线水平以下(图3，线e比d)。当阻断腺苷水解时，细胞存活也降低。在10μM DCF存在下，10μM腺苷使存活降低20％(未显示)，并且100μM腺苷使存活降低57％(图3，下部，线e)。DCF对突出生长和存活的影响与非水解的腺苷的存在特别有关，因为单独使用DCF时，AF-1或鸟苷不产生作用(图3，线b和h)。象DCF一样，10μM EHNA使腺苷(100μM)失去刺激突出生长的效果并且使细胞存活降低约30％(数据未显示)。EHNA也显示非特异性作用，然而，使鸟苷或AF-1生长刺激降低约50％，但不改变细胞的存活。通过加入外源性的ADA实验证明腺苷产生阳性作用需要进行水解。在0.4U/ml时，该酶不减少由100μM腺苷刺激的轴突突出生长或影响细胞存活(参见图3，线f)。实施例Ⅴ肌苷是活性代谢物
肌苷是腺苷脱氨作用的主要产物，证明肌苷是轴突突出生长的强活化剂。如图4显示，肌苷的EC50是10-15μM，并且最大反应等于AF-1水平的约60％，在25μM以上的浓度时获得。尽管肌苷诱导的EC50和最大反应类似于腺苷，但明显不同的是在较高浓度下，肌苷不引起生长降低，不象腺苷的情况。而且肌苷水解产生次黄嘌呤，它一点都不显示活性(参见图4)。肌苷5’单磷酸(5’IPM)在10μM时不显示活性，并且在100μM时，显示比10μM肌苷低的活性(参见图4)。实施例Ⅵ嘌呤通过细胞内途径刺激生长
使用嘌呤转运剂的两种抑制剂硝基苯甲基硫代肌苷(NBTI)和潘生丁来研究肌苷和鸟苷是不是需要进入神经元来刺激突出生长。在20μM时，NBTI阻断大约90％的由肌苷或鸟苷诱导的生长(参见图5；50μM的肌苷失去86％的活性，p＜0.001；100μM的鸟苷失去93％的活性，p＜0.01)。潘生丁(10μM)也减少由肌苷诱导的生长(减少114％；p＜0.01；未显示；鸟苷未试验)。相对地，NBTI对AF-1显示很小的抑制作用(降低10％n.s.)，潘生丁显示更小一点的抑制作用(降低25％，n.s.，未显示)。嘌呤与NBTI相关的活性损失远大于AF-1(p＜0.001)。实施例ⅦAF-1活性不是由于肌苷引起
为了论述AF-1制剂是不是仍可以含有可导致其某些生物活性的嘌呤，将天然的AF-1和肌苷在直径为1cm并且长度为10cm的交联葡聚糖G-10(Pharmacia Biotech，Uppsala，Sweden)大小排阻柱上进行色谱层析。装载0.5ml体积的样品并且收集1ml的馏分。柱缓冲液或者是20％甲醇的蒸馏水溶液或者是0.14M氯化钠。馏分在30％浓度下进行生物测定。如图6A所示，肌苷活性的峰在9-10分钟，而AF-1在7分钟。实施例Ⅷ轴突突出生长是肌苷和鸟苷的作用而不是二级因子的作用
本文使用的培养物含有70-90％的神经节细胞，剩余的是视网膜的其它神经和非神经成分(参见Schwartz & Agranoff，1982和Schwalb等人，1995，其内容引入本文供参考)。这样的不同成分增高了肌苷或鸟苷首先对另一类细胞群起作用，由这类细胞群分泌刺激视网膜神经节细胞生长的二级因子的可能性。在这种情况下，预计嘌呤的作用会随细胞密度而改变，因为任何二级因子的浓度因密度的增加而按比例增加。为了对此进行检测，研究了轴突突出生长在3-4倍范围的细胞密度内对固定浓度的肌苷或鸟苷的反应。肌苷和鸟苷的数据的回归线都表明生长不是细胞密度函数(参见图6B)，证明浓度依赖的二级因子不存在。实施例Ⅸ嘌呤对磷蛋白GAP-43表达的诱导作用
眼神经体内产生的一个标志是膜磷蛋白GAP-43增强的表达。为了研究这种上调作用是不是由嘌呤诱导的，使用抗重组金鱼GAP-43的多克隆兔抗血清来进行免疫组织化学。重组斑马鱼GAP-43通过用cDNA使大肠杆菌转化并亚克隆到原核生物表达载体pTrcHisB(Invitrogen)中来制备，cDNA是由Dr.Eva Reinhard，University of Basel，Switzerland分离的(参见Reinhard等人，Development，120：1757-1775，1994，其内容引入本文供参考)。产生的蛋白质通过Ni2+-NTA亲和色谱层析来纯化并用于免疫兔。所得抗体的特异性在蛋白质印迹技术中证明，其中抗体识别单一48kDa带，在再生视网膜神经节细胞或金鱼脑的突触体原生质膜中富含此带。
与L-15治疗的对照组相比，AF-1、肌苷和鸟苷均引起GAP-43水平的大幅增加。通过按0(无)、1(中等)或2(强)记录GAP-43免疫反应的水平和通过L-15、肌苷或AF-1处理的150-200细胞中染色强度与细胞轴突的长度之间的关系来进行半定量分析。与L-15相比，肌苷在强染色细胞的数目上增加5.5倍，而AF-1增加8倍。在所有3种情况下，GAP-43免疫染色的强度与轴突长度非常相关。实施例6-硫代鸟嘌呤(6-TG)对轴突突出生长的阻断
在金鱼RGCs中，10μM的6-TG阻断AF-1刺激的所有生长(参见图7A，线2)，但对细胞存活没有影响(参见图7B)。相同浓度的6-TG对25μM肌苷刺激的生长仅仅减少50％(参见7A，线3和4)，并且对100μM肌苷或100μM鸟苷刺激的生长没有影响(参见图7A，线5-8)。在10μM6-TG存在下，100μM的肌苷完全使AF-1诱导的生长恢复到其原来的水平，明显高于由肌苷单独诱导的生长水平(参见图7A，线10比6)。所以，肌苷和6-TG似乎在细胞内信号水平以竞争方式起作用，这种信号也被AF-1利用来刺激突出生长。而且两种物质以其EC50水平组合时，他们显示加合作用，然而在饱和浓度时，生长饱和在单独高AF-1水平刺激的水平，这种观察证明肌苷可激活AF-1信号所利用的相同途径(参见图7C，线9)。因为6-TG具有游离的巯基，它可用作还原剂而不是嘌呤类似物。但，其它两种还原剂，30μM的α-生育酚或100μM谷胱甘肽α-甲基酯(MEG)对AF-1刺激的突出生长没有影响(参见图7D)。另一种可能性是肌苷可能通过干扰其转运进入细胞来阻断6-TG对突出生长的抑制作用。然而，两种阻断肌苷活性的转运抑制剂，NBTI和潘生丁不能阻止6-TG阻断AF-1刺激的突出生长(参见图7D)。实施例Ⅺ哺乳动物视网膜神经节细胞对肌苷产生延伸轴突的反应
按Barres等人在Neuron，1：791-803，1988中描述的方法通过免疫淘选从8天龄大鼠中分离视网膜神经节细胞，所述文献的内容引入本文供参考，并使其在特定培养基中生长。25或50μM的肌苷刺激细胞数目增加50％，使轴突长度延伸5个细胞直径(参见图8)。睫状神经营养因子(CNTF)在突出生长方面诱导多的多的增加(参见图8)并且增加细胞存活。在10μM时，6-TG阻断CNTF诱导的突出生长。加入50μM的肌苷使CNTF诱导的突出生长恢复到近似其原来水平(参见图8)。等同替换
本领域技术人员会意识到或者能够利用至多是常规实验确定许多等同替换物用于本文所描述的本发明的具体实施方案。这些等同替换打算包括在下列权利要求书所述的范围之内。

Claims (62)

1、一种调节中枢神经系统神经元轴突突出生长的方法，该方法包括将中枢神经系统神经元与药物组合物接触，所述药物组合物基本上由有效量的嘌呤核苷或其类似物组成，从而调节轴突的突出生长。
2、权利要求1的方法，其中刺激了突出生长。
3、权利要求2的方法，其中嘌呤核苷是肌苷。
4、权利要求2的方法，其中嘌呤核苷是鸟苷。
5、权利要求1的方法，其中抑制了突出生长。
6、权利要求5的方法，其中嘌呤核苷是6-硫代鸟嘌呤。
7、权利要求1的方法，其中所述中枢神经系统神经元是哺乳动物的。
8、一种刺激损伤后中枢神经系统神经元的轴突突出生长的方法，包括给予受治疗者嘌呤核苷或其类似物，从而刺激轴突的突出生长。
9、权利要求8的方法，其中损伤是由于中风发作。
10、权利要求8的方法，其中损伤是由于脑外伤(TBI)发生。
11、权利要求8的方法，其中损伤是由于脑动脉瘤。
12、权利要求8的方法，其中损伤是脊髓损伤。
13、权利要求12的方法，其中脊髓损伤选自单瘫、双瘫、截瘫、偏瘫和四肢瘫。
14、权利要求8的方法，其中嘌呤核苷是肌苷。
15、权利要求8的方法，其中嘌呤核苷是鸟苷。
16、权利要求14的方法，其中与中枢神经系统神经元接触的肌苷浓度大约为25μM。
17、权利要求14的方法，其中以5μM-1000μM的浓度给予肌苷。
18、权利要求14的方法，其中以10μM-500μM的浓度给予肌苷。
19、权利要求15的方法，其中与中枢神经系统神经元接触的鸟苷浓度大约为100μM。
20、权利要求15的方法，其中以5μM-1000μM的浓度给予鸟苷。
21、权利要求15的方法，其中以10μM-500μM的浓度给予鸟苷。
22、一种在遭受或者易于遭受以增加中枢神经系统神经元的轴突突出生长为特征的疾病的受治疗者中抑制中枢神经系统神经元轴突突出生长的方法，包括给予所述受治疗者嘌呤核苷或其类似物，从而抑制轴突突出生长。
23、权利要求22的方法，其中所述疾病是癫痫。
24、权利要求23的方法，其中所述的癫痫是脑外伤后的癫痫。
25、权利要求22的方法，其中所述疾病是神经病性疼痛综合征。
26、权利要求22的方法，其中嘌呤核苷或其类似物是6-硫代鸟嘌呤。
27、权利要求26的方法，其中与中枢神经系统神经元接触的6-硫代鸟嘌呤浓度约为50μM。
28、权利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其类似物通过引入受治疗者的中枢神经系统来给药。
29、权利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其类似物被引入受治疗者的脑脊液中。
30、权利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其类似物经鞘内引入。
31、权利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其类似物被引入脑室中。
32、权利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其类似物被引入腰区中。
33、权利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其类似物被引入小脑延髓池中。
34、权利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其类似物以可药用制剂的形式给药。
35、权利要求34的方法，其中可药用制剂为分散系统。
36、权利要求34的方法，其中可药用制剂包括基于类脂的制剂。
37、权利要求34的方法，其中可药用制剂包括脂质体制剂。
38、权利要求34的方法，其中可药用制剂包括多泡脂质体制剂。
39、权利要求34的方法，其中可药用制剂包括聚合物基料。
40、权利要求34的方法，其中可药用制剂被装在小泵中。
41、权利要求34的方法，其中可药用制剂使嘌呤核苷或其类似物持续释放给受治疗者，在将可药用制剂给予受治疗者之后，持续释放至少一周。
42、权利要求34的方法，其中可药用制剂使嘌呤核苷或其类似物持续释放给受治疗者，在将可药用制剂给予受治疗者之后，持续释放至少一个月。
43、权利要求1、8、或22的方法，其中受治疗者是哺乳动物。
44、权利要求43的方法，其中哺乳动物为人。
45、权利要求1、8、或22的方法，其中中枢神经系统神经元是视网膜神经节细胞。
46、嘌呤核苷或其类似物在制备用于调节哺乳动物中枢神经系统神经元的轴突突出生长的药物中的应用。
47、权利要求46的用途，其中嘌呤核苷是肌苷。
48、权利要求46的用途，其中嘌呤核苷是鸟苷。
49、权利要求46的用途，其中嘌呤核苷是6-硫代鸟嘌呤。
50、权利要求46-49的用途，其中药物除含有嘌呤核苷或其类似物外不含有任何其它神经生长调节剂。
51、权利要求46-49的用途，其中药物适于给予选自受治疗者中枢神经系统、脑脊液、鞘内、脑室、腰区和小脑延髓池的部位。
52、权利要求47的用途，其中肌苷约以25μM的浓度存在。
53、权利要求48的用途，其中鸟苷约以100μM的浓度存在。
54、权利要求49的用途，其中6-硫代鸟嘌呤约以50μM的浓度存在。
55、权利要求46-49的用途，其中药物在受治疗者中持续释放嘌呤核苷或其类似物。
56、权利要求46的用途，其中药物刺激轴突突出生长。
57、权利要求56的用途，其中药物适于治疗损伤，所述损伤选自中风发作致损伤、脑外伤(TBI)致损伤、脑动脉瘤致损伤和脊髓损伤。
58、权利要求46的用途，其中药物抑制轴突突出生长。
59、权利要求58的用途，其中药物适于治疗选自癫痫、外伤后癫痫和神经病性疼痛综合征的疾病。
60、一种包装制剂，它包含含有肌苷和可药用载体的药物组合物并包装有该药物组合物用于治疗中枢神经系统疾病的说明书。
61、一种包装制剂，它包含含有鸟苷和可药用载体的药物组合物并包装有该药物组合物用于治疗中枢神经系统疾病的说明书。
62、一种包装制剂，它包含含有6-硫代鸟嘌呤和可药用载体的药物组合物并包装有该药物组合物用于治疗中枢神经系统疾病的说明书。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020140730A1 (zh) * 2018-12-30 2020-07-09 广州君赫生物科技有限公司 硫鸟嘌呤在制备治疗adsl缺陷症药物中应用

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6440455B1 (en) * 1997-09-02 2002-08-27 Children's Medical Center Corporation Methods for modulating the axonal outgrowth of central nervous system neurons
US20090297602A1 (en) * 1998-11-02 2009-12-03 Devane John G Modified Release Loxoprofen Compositions
CA2653839A1 (en) * 1998-11-02 2000-05-11 John G. Devane Multiparticulate modified release composition
US7582680B1 (en) 1998-11-12 2009-09-01 Purdue Research Foundation Methods and compositions for treating mammalian spinal cord injuries
US7172871B1 (en) * 2000-09-07 2007-02-06 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions for modulating axonal outgrowth of central nervous system neurons
FR2814077A1 (fr) * 2000-09-20 2002-03-22 Inst Nat Sante Rech Med Utilisation de modulateurs de recepteurs a l'adenosine pour reguler la fonction des netrines et/ou de leurs recepteurs
WO2002051438A2 (en) 2000-12-22 2002-07-04 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Use of repulsive guidance molecule (rgm) and its modulators
AU2002314758B2 (en) 2001-04-24 2006-06-01 Purdue Research Foundation Method and composition for treating mammalian nerve tissue injuries
US7147647B2 (en) * 2002-04-26 2006-12-12 Medtronic, Inc. Sintered titanium tube for the management of spinal cord injury
US20040106896A1 (en) * 2002-11-29 2004-06-03 The Regents Of The University Of California System and method for forming a non-ablative cardiac conduction block
US7813473B2 (en) * 2002-07-23 2010-10-12 General Electric Company Method and apparatus for generating temporally interpolated projections
US6904118B2 (en) * 2002-07-23 2005-06-07 General Electric Company Method and apparatus for generating a density map using dual-energy CT
WO2004022039A2 (en) * 2002-09-03 2004-03-18 Neurological Technologies Inc. Use of guanosine or inosine as anti-apoptotic agents in the treatment of i. a. neurodegenerative diseases or injuries at the nervous system
WO2004032980A1 (en) * 2002-10-04 2004-04-22 Elan Pharma International Limited Gamma irradiation of solid nanoparticulate active agents
GB0228723D0 (en) 2002-12-09 2003-01-15 Cambridge Biotechnology Ltd Treatment of pain
CN1732011A (zh) * 2002-12-30 2006-02-08 泊达研究基金会 中枢神经系统损伤的治疗方法
JP2007501683A (ja) * 2003-05-22 2007-02-01 エラン ファーマ インターナショナル リミテッド γ線照射によるナノ粒子活性物質分散体の滅菌法
GB0312844D0 (en) * 2003-06-04 2003-07-09 Paradigm Therapeutics Ltd Use of compounds in medicine
WO2005016359A1 (en) * 2003-08-19 2005-02-24 Neurological Technologies Inc. Method of promoting remyelination
US8912144B2 (en) * 2003-12-16 2014-12-16 Children's Medical Center Corporation Method for treating stroke via administration of NEP1-40 and inosine
US20080113016A1 (en) * 2004-07-26 2008-05-15 Gary Steven Firestein Method for Prevention or Treatment of Inflammatory Disease
US20060104969A1 (en) * 2004-08-16 2006-05-18 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for enhancing structural and functional nervous system reorganization and recovery
EP1855651A4 (en) * 2005-03-03 2011-06-15 Elan Pharma Int Ltd NANOPARTICULAR COMPOSITIONS OF HETEROCYCLIC AMIDE DERIVATIVES
WO2006111348A1 (de) * 2005-04-18 2006-10-26 Abbott Gmbh & Co. Kg Verwendung von heparin und heparinderivaten zur modulation des neuritenwachstum-kontrollierenden nogo-rezeptors
CA2624562A1 (en) 2005-09-30 2007-04-12 Abbott Gmbh & Co. Kg Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (rgm) protein family and functional fragments thereof, and their use
EP2004139A1 (en) * 2006-03-31 2008-12-24 Adenobio N.V. Compositions, methods, and kits using adenosine and inosine in combination for diagnosis and treatment
CA2657409A1 (en) * 2006-07-12 2008-01-17 Elan Corporation, Plc Nanoparticulate formulations of modafinil
WO2008070769A1 (en) * 2006-12-06 2008-06-12 Medtronic, Inc. Intrathecal catheter
US20080270686A1 (en) * 2007-04-26 2008-10-30 Grannan Michael F Methods and system to cache content on a vehicle
EP2259677A4 (en) * 2008-02-29 2011-11-02 Alseres Pharmaceuticals Inc SYSTEMIC PURINARY ADMINISTRATION FOR MODULATING THE AXONAL GROWTH OF THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
AU2009255973B2 (en) 2008-06-06 2013-08-15 Children's Medical Center Corporation Promoting axon regeneration in the adult CNS through control of protein translation
WO2011070045A1 (en) 2009-12-08 2011-06-16 Abbott Gmbh & Co. Kg Monoclonal antibodies against the rgm a protein for use in the treatment of retinal nerve fiber layer degeneration
NZ714482A (en) 2012-01-27 2017-08-25 Abbvie Inc Composition and method for diagnosis and treatment of diseases associated with neurite degeneration
US20140179741A1 (en) * 2012-10-10 2014-06-26 Massachusetts Institute Of Technology Use of chelators of divalent cations to promote nerve regeneration
WO2014096958A1 (en) * 2012-11-02 2014-06-26 Academisch Medisch Centrum Inosine monophosphate and salts thereof for use in the treatment of complement-related disorders
RU2517117C2 (ru) * 2012-11-26 2014-05-27 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО Казанский ГМУ Минздравсоцразвития России) Способ стимулирования регенерации нерва с помощью наноструктурированного матрикса и генетических конструкций
EP3342414B1 (en) * 2015-08-26 2022-04-06 Stagen Co., Ltd. Agent for enhancing atp in cells
EP3797764A1 (en) 2019-09-27 2021-03-31 Janusz Chupty Contissi Pharmacological composition for treatment of nervous tissue dysfunction, in particular viral latency, and the use of j05 atc group substances in treatment of nervous tissue dysfunction, in particular viral latency
CA3183346C (en) * 2020-06-25 2024-01-02 Rajaram Samant Synergistic nutritional compositions for promoting axonal regeneration
EP4408531A1 (en) * 2021-09-28 2024-08-07 University of Pittsburgh - of the Commonwealth System of Higher Education Methods for treating peripheral neuropathy

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3808027A (en) 1972-03-29 1974-04-30 Du Pont Silica surfaced films
US4341868A (en) * 1978-08-18 1982-07-27 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method and test composition for the determination of the substrate for xanthine oxidase
US4883666A (en) * 1987-04-29 1989-11-28 Massachusetts Institute Of Technology Controlled drug delivery system for treatment of neural disorders
AU1727188A (en) 1987-05-26 1988-12-21 Paul Gordon Polymorphs of inosine and methods of making and using them
US5250414A (en) * 1988-11-04 1993-10-05 Erziehungsdirektion Of The Canton Zurich Diagnostic methods using neurite growth regulatory factors
US5187162A (en) 1989-09-15 1993-02-16 Gensia Pharmaceuticals Methods of treating neurodegenerative conditions
JPH05506842A (ja) * 1989-09-15 1993-10-07 ジェンシア・ファーマシュウティカルズ・インコーポレイテッド 神経変性状態の処置方法
FR2692784B1 (fr) * 1992-06-24 1995-06-30 Pf Medicament Utilisation de la guanosine, de ses precurseurs et ses derives pour la fabrication de medicaments destines a traiter les deficits fonctionnels cerebraux.
US5483130A (en) * 1992-09-09 1996-01-09 Axelerator, Inc. Structure for accelerating heavy ions with uniformly spaced quadrupole focusing (USQF)
US5422343A (en) * 1992-12-21 1995-06-06 Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc. Prophylactic and therapeutic composition for MRSA infection
US5438130A (en) * 1993-01-15 1995-08-01 Cambridge Neuroscience, Inc. Fucosylated guanosine disulfates as excitatory amino acid antagonists
RU2063753C1 (ru) 1993-04-22 1996-07-20 Василий Владимирович Афанасьев Способ лечения экстрапирамидного синдрома при остром отравлении галоперидолом
NZ269847A (en) * 1993-08-13 1996-11-26 Seikagaku Kogyo Co Ltd 2-alkylamino-3-morpholino-1-propanol derivative in a composition for neuronal disease treatment
US5587384A (en) 1994-02-04 1996-12-24 The Johns Hopkins University Inhibitors of poly(ADP-ribose) synthetase and use thereof to treat NMDA neurotoxicity
US5447939A (en) * 1994-07-25 1995-09-05 Glasky; Alvin J. Carbon monoxide dependent guanylyl cyclase modifiers and methods of use
US5931809A (en) 1995-07-14 1999-08-03 Depotech Corporation Epidural administration of therapeutic compounds with sustained rate of release
EP0944382A1 (en) * 1996-09-30 1999-09-29 Brigham & Women's Hospital Methods and compounds for treatment of abnormal uterine bleeding
US6440455B1 (en) * 1997-09-02 2002-08-27 Children's Medical Center Corporation Methods for modulating the axonal outgrowth of central nervous system neurons
US6855690B2 (en) * 2000-06-01 2005-02-15 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions for treating ocular disorders
GB2379797A (en) * 2001-09-15 2003-03-19 Zarlink Semiconductor Ab Surface Emitting Laser

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020140730A1 (zh) * 2018-12-30 2020-07-09 广州君赫生物科技有限公司 硫鸟嘌呤在制备治疗adsl缺陷症药物中应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20020137721A1 (en) 2002-09-26
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US20020128223A1 (en) 2002-09-12
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CA2302156A1 (en) 1999-03-11
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JP2001516695A (ja) 2001-10-02
KR20010023578A (ko) 2001-03-26
DE69825292D1 (de) 2004-09-02
US7935680B2 (en) 2011-05-03
US20070213294A1 (en) 2007-09-13
US20040014710A1 (en) 2004-01-22
US7338666B2 (en) 2008-03-04
EP1009412B1 (en) 2004-07-28
AU6656898A (en) 1999-03-22
EP1466606A2 (en) 2004-10-13
US6551612B2 (en) 2003-04-22
JP4601816B2 (ja) 2010-12-22
WO1999011274A1 (en) 1999-03-11
AU748961B2 (en) 2002-06-13
EP1009412A1 (en) 2000-06-21
CA2302156C (en) 2006-11-21
DE69825292T2 (de) 2005-05-25
US6440455B1 (en) 2002-08-27
NZ503073A (en) 2002-11-26
US20020055484A1 (en) 2002-05-09
ATE271874T1 (de) 2004-08-15
HK1029916A1 (en) 2001-04-20

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