CN1281728A - 鸽用免疫球蛋白注射液 - Google Patents
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Abstract
鸽用免疫球蛋白注射液,涉及应用生物技术制备动物生物制品,其技术特征是:采用鸽复合病毒抗原接种单蹄兽动物后,诱导其体液免疫系统产生高效价免疫球蛋白。通过酶切、盐析、滤过、压干、透析等生物技术精制免疫球蛋白,使免疫球蛋白的浓缩与精制工艺规范化、产业化,对鸽痘、鸽新城疫、鸽喉气管炎、鸽马立克、鸽法氏囊、鸽霍乱、鸽伤寒热等疫病的应急预防与紧急治疗,在发病初期,其有效率达93%、治愈率达88%以上。
Description
本发明涉及应用生物技术制备动物生物制品。
动物病毒性传染病发病率与死亡率高达50-100%,疫苗对健康动物传染病的预防是根本,但对临床上一定比例发病群体的治疗至今是一个难题。免疫球蛋白的精制与浓缩在国外仅限于微量或小型实验阶段,多为单一抗病毒免疫球蛋白。规范化、产业化浓缩与精制抗多病毒免疫球蛋白的制作工艺,在国内外几乎无一家涉足。人类医学方面曾在破伤风的临床上采用盐析沉淀法提取精破抗。目前,国内外浓缩、精制提取免疫球蛋白(Ig)主要采用:①离心法;②盐析沉淀法;③分子筛法;④有机物沉淀法;这四种方法均处于小中型试制阶段。
本发明采用鸽痘、鸽新城疫、鸽喉气管炎、鸽马立克、鸽法氏囊、鸽霍乱、鸽伤寒热等复合病毒抗原接种单蹄兽动物后,诱导其体液免疫系统产生高效价免疫球蛋白。通过酶切、盐析、滤过、压干、透析等生物技术精制免疫球蛋白。因而,其制备免疫球蛋白的方法较以往的要简单、快速、易于掌握,提取回收率理想,经济效益可观,适于产业化制作。
本发明的优点:
1.制备免疫球蛋白所用的动物资源-关中大毛驴,较马匹与骆驼等其它动物有疫病少,抗病力强,易于饲养,血浆产量高,每月采两次血后,体质容易恢复,对动物的变态反应低等优点,易于规范化、产业化生产生物制品。
2.本发明生物制品呈透明状液体,免疫球蛋白含量可检测、可量化。通过除菌器处理后,可在常温(2-10℃)存放两年,不析出、不沉淀、不变质。
3.制备方法中采用酶切-盐析法,使制剂中平均免疫球蛋白含量提高1-2倍左右,单位体积内的效价稳定。临床疗效显著,患病动物通过三天救治,基本上可康复,无后遗症,亦无毒副作用。对如鸽痘、鸽新城疫、鸽喉气管炎、鸽马立克、鸽法氏囊、鸽霍乱、鸽伤寒热等疫病的应急预防与紧急治疗,在发病初期,其治愈率达90%以上。
本发明的技术方案:
采用鸽痘、鸽新城疫、鸽喉气管炎、鸽马立克、鸽法氏囊、鸽霍乱、鸽伤寒热等复合病毒抗原接种单蹄兽动物后,诱导其体液免疫系统产生高效价免疫球蛋白。酶切切除免疫球蛋白结构中的Fc片段(无意义可结晶片段),以防止对接种动物产生过敏性休克,保留其具有抗病毒与中和病毒的Fab片段(有意义病原结合片段),通过盐析、滤过、压干、透析等生物技术精制免疫球蛋白。
本发明在制备方法中提供了以酶切与盐析相结合的新工艺,使单位体积内的效价提高2倍,既避免了异源血浆的变态性反应,又减少了提纯过程中免疫球蛋白的丢失(回收量由原来的1500g/10000mL提高到1800g/10000ml)。
本发明在制备方法中还提供了对免疫动物的基础免疫与强化免疫的抗原组合比例配方,以及接种时机与采血时机,这对充分利用供浆动物、加大采血次数、减少原料投入有一定的意义。
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说明:
制作免疫球蛋白针剂时,采用鸽痘、鸽新城疫、鸽喉气管炎、鸽马立克、鸽法氏囊、鸽霍乱、鸽伤寒热等复合病毒抗原,人工多点免疫接种关中大毛驴。
第一阶段基础免疫(6针):对检疫合格的关中驴,方可免疫。免疫途径为颈背皮下或肌肉注射,一般注射抗原6次,间隔时间为3-4天。第一次注射抗原全量的1/4;第二次注射全量的1/3;第三次注射全量的1/3;第四次注射全量的1/2;第五次注射全量的1/2;第六次注射全量。于第六次注射后14天试血,测定免疫球蛋白效价,供以后强化免疫时参考。
第二阶段强化免疫(2针):一般注射抗原2次(抗原30毫升/头·次),间隔时间为3-4天。免疫后试血测效价。强化免疫后6-7天,即可大量采血(采血两次)。采血的毛驴休息半月后,即可进行下程常规高免。
常规高免(2针):一般注射2次(抗原30毫升/头·次),每次间隔9天(±1天)。免疫结束的第六天进行第一次采血,隔日进行第二次采血。采血量为14-16ml/Kg体重,第二次采血较第一次减少约1/5,均由颈静脉采血。待采取的血液沉淀形成澄清黄层后,收集吸取血浆。
免疫球蛋白(Ig)的提纯:
将血浆稀释,按血浆量1∶2加入蒸馏水,置于容器内;对稀释的血浆水浴加温至29-31℃。用2mol/L盐酸调整pH值为3.3-3.4,然后按总量每毫升加入6-9个活力的胃蛋白酶和0.2%的甲苯,搅拌均匀,以水浴加温30℃±1℃消化2小时。消化期间提纯的血浆要不断搅拌。消化完毕后按血浆总量加入15%的硫酸铵,溶解后用2N NaOH溶液调整pH值为5.3-5.4,用水浴法加温,以每分钟升1℃为宜,并不断搅拌,直至升温至57-58℃时,再搅拌30min,静置30min,待血浆冷却至45℃以下时进行下一步工艺处理。
第一次沉淀滤过,将上述液体用滤布在滤槽内过滤,直至清亮,收集滤液,弃去沉淀物。二次沉淀,收集首次沉淀的滤液,用2N NaOH溶液调整pH值至7.2-7.3,按总量加入21%的硫酸铵,充分搅拌,溶解后静置30min,然后用25支纯棉滤布在不锈钢滤槽内过滤,收集沉淀,弃去滤液。
将收集的沉淀压干,称重,装入透析袋内,每袋约装200-250g,放置流水槽内透析24-72小时。收集袋内免疫球蛋白,按180mg/mL稀释,并按总量加入0.5%氯仿,0.85%氯化钠和0.5%硫酸庆大霉素粉,充分搅拌溶解后,用2N NaOH溶液矫正pH为6.6-6.8。置5-15℃静置沉淀48小时,最后以正压形式用直径为0.3um硝酸纤维微孔滤膜除菌过滤,所得滤液经半成品检验合格后即可组批分装。经成品检验合格后即可。
Claims (3)
1.鸽用免疫球蛋白注射液,其技术特征是:采用鸽痘、鸽新城疫、鸽喉气管炎、鸽马立克、鸽法氏囊、鸽霍乱、鸽伤寒热等复合病毒抗原接种单蹄兽动物后,诱导其体液免疫系统产生高效价免疫球蛋白,酶切切除免疫球蛋白结构中的Fc片段,保留其具有抗病毒与中和病毒能力的Fab片段,通过盐析、滤过、压干、透析等生物技术精制免疫球蛋白。
2.根据权利1要求所述的鸽用免疫球蛋白注射液,其特征是:在制备方法中提供了以酶切与盐析相结合的新工艺(酶切→热处理→盐析→纯化)。
3.根据权利要求1或2所述的鸽用免疫球蛋白注射液,其特征是:在制备方法中,还提供了对免疫动物的基础免疫与强化免疫的抗原比例配方(卡介苗/抗原:10mg/30ml),以及接种时机(基础/强化/常规:3/4/7)与采血时机(13天)。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 99110858 CN1281728A (zh) | 1999-07-22 | 1999-07-22 | 鸽用免疫球蛋白注射液 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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CN 99110858 CN1281728A (zh) | 1999-07-22 | 1999-07-22 | 鸽用免疫球蛋白注射液 |
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Publication Number | Publication Date |
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CN1281728A true CN1281728A (zh) | 2001-01-31 |
Family
ID=5274746
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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CN 99110858 Pending CN1281728A (zh) | 1999-07-22 | 1999-07-22 | 鸽用免疫球蛋白注射液 |
Country Status (1)
Country | Link |
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CN (1) | CN1281728A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101020054B (zh) * | 2007-03-06 | 2011-04-06 | 广东省家禽科学研究所 | 防制鸽禽i型副粘病毒病新型灭活疫苗及其制备方法 |
-
1999
- 1999-07-22 CN CN 99110858 patent/CN1281728A/zh active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN101020054B (zh) * | 2007-03-06 | 2011-04-06 | 广东省家禽科学研究所 | 防制鸽禽i型副粘病毒病新型灭活疫苗及其制备方法 |
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