CN1279058C - 用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗cd44的工程抗体及其载体和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体及其载体和用途，能使多种类型的白血病细胞分化成熟，细胞功能趋向成熟，并可诱导白血病细胞凋亡，细胞原癌基因表达减少。本发明涉及抗CD44单克隆抗体HI44a重链和轻链可变区基因，由所述基因编码的多肽，含有所述基因的载体及所述的基因和多肽在制备用于白血病的诊断和治疗药物中的应用。重链和轻链可变区基因来自抗CD44单克隆抗体HI44a。本发明采用基因工程技术成功制备人源化抗CD44基因工程抗体，为白血病的治疗提供了一种新的有效药物。

Description

用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体及其载体和用途

技术领域

本发明涉及一种治疗白血病的抗体，尤其是用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体及其载体和用途。

背景技术

急性白血病是威胁人类生命健康的主要几种疾病之一，在美国，100,000成人中每年就有2.7人患AML，而在年龄超过65岁的成人中此数字达到了14.1。它是一类起源于造血(或淋巴)干细胞的恶性疾病。由于干细胞受损，白血病细胞失去进一步分化成熟的能力，或者增殖与分化能力不平衡，而停滞在细胞发育的不同阶段，具体表现为细胞在体内无限增殖，而其分化成熟和凋亡受阻。因此白血病的治疗可从三个方面着手：诱导细胞凋亡、诱导细胞分化及干细胞移植重建造血功能。

自20世纪70年代起，科研工作者开始了白血病细胞诱导分化治疗的研究。自Collins等首先报道二甲基亚砜(DMSO)对人早幼粒白血病细胞系HL-60的诱导分化作用以来，关于诱导分化剂的研究迄今已取得很大的进展；其中某些药物已经用于临床，并取得较满意的疗效，如全反式维甲酸(ATRA)已成为治疗急性早幼粒性白血病的常规方法，但传统的ATRA为口服制剂，难于在分子水平上诱导缓解或维持长期的血液学缓解。还可引起维甲酸综合征等不良反应；除急性早幼粒细胞白血病以外，全反式维甲酸对AML和其它实体瘤治疗均未获成功。因此白血病的诱导分化治疗仍是目前研究的一个重要方向。制备一种可以应用于临床治疗多种类型的白血病药物并建立相关的制备技术则具有特别重要的临床意义。

已知CD44是广泛存在单基因编码的I型跨膜糖蛋白，与细胞黏附有关，可与多种细胞外基质成分如透明质酸、纤粘蛋白、胶原蛋白、层粘蛋白等结合，这将对表达它的细胞产生某种作用。并且CD44表达水平的提高与肿瘤细胞在体内的生长和转移相关(Naor，D.，R.V.Sionov，and D.Ish-Shalom.1997.CD44：structure，function，and association with the malignant process.Adv.Cancer Res.71：241-319.)。研究发现CD44在所有急性白血病(AML)亚型的白血病原始细胞均有表达：(1)CD44与正常髓系分化有关(功能阻断性抗CD44抗体在长期骨髓培养中可显著抑制骨髓细胞的生成)；(2)当与特异的抗体或受体透明质酸结合时CD44可作为信号分子活化细胞功能；(3)CD44分子位于细胞表面，比较容易接近。这些因素使CD44成为诱导急性白血病原始细胞分化的一个可能的靶点。已有文献报道应用抗CD44抗体A3D8，H90或透明质酸能逆转AML各亚型的髓系分化阻滞(Charrad RS，Li Y，Delpech B，Balitrand N，Clay D，Jasmin C，Chomienne C，Smadja-Joffe F.Ligation of the CD44 adhesion molcule reverseblockage of differentiation in human acute myeloid leukemia.Nat Med，1999；5(6)：669-676.)。

由于白血病治疗主要采用控制增殖、诱导凋亡的化疗药物，包括烷化剂、抗代谢药物等。这些药物在杀死白血病细胞的同时，对正常造血细胞也有严重损伤，故对机体存在严重的毒副作用。此外，白血病细胞常会对化疗药物产生耐药，同时化疗后复发率较高，严重影响临床化疗药物治疗的有效性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体及其载体和用途，提供的单克隆抗体HI44a可以有效的诱导急性髓性白血病分化及凋亡；提供的抗CD44单克隆抗体轻链可变区基因和重链可变区基因及其表达产物，两者重组后表达产生的抗CD44ScFv片断，能够降低鼠源性抗CD44抗体的免疫源性。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体，由SEQ ID NO.2重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO.4轻链可变区氨基酸序列组成。

所述SEQ ID NO.2重链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述SEQ ID NO.3轻链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

含有所述编码的工程抗体的核苷酸序列的载体，含有SEQ ID NO.1所述的重链可变区VH基因核苷酸序列和SEQ ID NO.3所述的轻链可变区VL基因核苷酸序列的cDNA的PUC18载体。

所构建的载体为PET22b(+)载体。

所述的抗CD44的工程抗体及所述的载体在制备治疗白血病的药物中的应用。

抗CD44抗体HI44a是中国医学科学院血液学研究所协和基因干细胞公司所有的一种抗CD44鼠源性单克隆抗体，属于IgG2a亚型，该抗体能有效逆转多种类型的急性髓性白血病原始细胞的分化阻滞，促使白血病细胞功能成熟，并能诱导白血病细胞凋亡，为白血病的治疗提供了一种新的药物。人体对鼠源性抗体的免疫反应(HAMA反应)是鼠源性抗体应用于临床治疗的主要障碍，而基因工程抗体较好的解决了这个问题，它既保留了鼠源单抗的特异亲和力，又大大降低了鼠单抗的异源性，因而具有广阔的应用前景。

我们应用RT-PCR技术，成功的从杂交瘤细胞中克隆到抗CD44抗体的轻重链可变区基因，并将抗CD44抗体的轻重链可变区基因克隆到原核表达载体，构建抗CD44抗体的单链抗体，降低鼠源性抗CD44抗体的免疫原性，并在大肠杆菌中进行高效分泌性表达，从而提高其产量，降低生产成本。单链抗体的优势在于：较全抗分子量小，穿透能力强，构建周期短，抗原性低，易于基因工程操作，为进一步研究其它工程抗体奠定基础。可在大肠杆菌中表达，易于大量生产，生产成本低。

附图说明

图1是HI44a对白血病细胞形态的影响。

图2是HI44a对各亚型白血病细胞NBT还原能力的影响。

图3是HI44a降低原癌基因c-myc的表达，而增强M-CSF的表达。

图4是PCR扩增VH，VL基因片段电泳图。A：Marker B：VL C：VH。

图5是PCR扩增单链抗体(ScFv)基因片段图谱。A：Marker B：ScFv。

图6是抗CD44ScFv表达载体PET22b(+)ScFv结构示意图。

图7是ScFv表达产物的SDS-PAGE(12％)图谱。A：Marker；B：未诱导菌体蛋白；C：诱导后菌体蛋白 D：纯化后ScFv蛋白。

图8是抗CD44 ScFv的Western blot分析。

图9是竞争性免疫荧光抑制实验。(1)阴性对照：PBS+抗CD44ScFv；(2)：阳性对照：HI44a+PBS；(3)：HI44a+抗CD44ScFv。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明的用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体及其载体和用途作进一步的详细说明：

一种用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体，由SEQ IDNO.2重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO.4轻链可变区氨基酸序列组成。

所述SEQ ID NO.2重链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述SEQ ID NO.3轻链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

含有所述编码的工程抗体的核苷酸序列的载体，含有SEQ ID NO.1所述的重链可变区VH基因核苷酸序列和SEQ ID NO.3所述的轻链可变区VL基因核苷酸序列的cDNA的PUC18载体。

所构建的载体为PET22b(+)载体。

所述的抗CD44的工程抗体及所述的载体在制备治疗白血病的药物中的应用。

实施例1：HI44a可以有效诱导白血病细胞分化

取初治急性髓系白血病人骨髓5ml，分离提取单个核细胞，以2×10⁵/ml接种于24孔板中，和诱导分化剂HI44a共同培养，培养条件为RPMI 1640(含体积分数为10％的胎牛血清)，37℃、5％CO₂、饱和湿度培养4-6天。此后，收集细胞，检测分化指标的变化。

(1)细胞形态变化。白血病细胞与HI44a共培养后，可明显表现出细胞形态向成熟方向转化，细胞表现出核固缩，核浆比降低，核仁减少等特征。其中以M3和M5亚型的白血病细胞最为明显，见图1。

(2)NBT还原能力的测定。HI44a可显著增高各亚型白血病细胞的NBT还原能力，其中M3亚型变化最为显著，NBT阳性细胞从对照组的10％升高至55％，而在M2，M4及M5亚型，NBT阳性率分别为31％(对照9％)，25％(对照12％)，32％(对照11％)。P值均＜0.01，见图2。

(3)HI44a作用后细胞表面特异性分化抗原的变化。我们分别检测了31例，24例，21例病人白血病细胞表面CD11b，CD14，CD15的表达，发现HI44a作用后，白血病细胞表面CD11b，CD14，CD15表达均明显增高，见表1、2、3。

表1  HI44a对各亚型白血病细胞分化抗原CD11b表达的影响

FAB亚型	例数	CD11b阳性率		P
					对照组	HI44a组
		AML2AML3AML4AML5	8788				10.426.609.2512.40	19.6416.7916.8723.31	0.0150.0590.0260.006
合计	31			9.74	19.22	0.000

表2  HI44a对各亚型白血病细胞分化抗原CD14表达的影响

FAB亚型	例数	CD14阳性率		P
					对照组	HI44a组
		AML2AML3AML4AML5	7566				25.4318.1532.5232.28	37.2029.8551.9642.18	0.0370.1460.0570.022
合计	24			27.40	40.60	0.000

表3  HI44a对各亚型白血病细胞分化抗原CD15表达的影响

FAB亚型	例数	CD15阳性率		P
					对照组	HI44a组
		AML2AML3	66				46.4762.92	54.7768.58	0.0180.073

AML4AML5	45	61.0061.00	72.0475.00	0.1620.007
					合计	21	57.40	66.82	0.000

实施例2  HI44a可以有效诱导白血病细胞凋亡

将分离的白血病细胞与HI44a共同培养，培养条件为RPMI 1640(含体积分数为10％的胎牛血清)，37℃、5％CO₂、饱和湿度培养48-72小时，收集细胞，PBS洗涤，Annexin-V试剂盒(Annexin-V-FLOUS staining Kit；ROCHE)检测细胞早期凋亡。经检测，HI44a对10例病人的白血病细胞作用48-72小时后，白血病细胞的早期凋亡率明显增高，见表4。

表4  HI44a对各亚型白血病细胞早期凋亡的影响

FAB亚型	例数	Annexin-v阳性率(％)		P
					对照组	HI44a组
		AML2，n＝2AML3，n＝3AML4，n＝2AML5，n＝3	1212312123				8.182.457.392.1459.544.1937.0663.9369.777.44	13.1340.119.9826.8475.776.8965.6777.9983.1912.25
合计	10			26.21	41.18	0.003

实施例3  HI44a可以抑制白血病细胞中原癌基因c-myc的表达，而增强特异性分化诱导因子M-CSF的表达

RT-PCR检测c-myc，G-CSF及M-CSF表达变化。白血病细胞与HI44a共同培养24小时后，收集细胞。Trizol(GIBCO)一步法提取细胞总RNA，以Oligod(T)为引物，经M-MLV逆转录酶逆转录为cDNA。管家基因β-actin作为内参。PCR扩增的引物为：c-myc，5＇-CCC GAC GCG GGG AGG CTA TT-3＇和5＇-TCT CCA GCT GGT CGG CCG TG-3＇；G-CSF，5’-TTG GAC ACACTG CAG CTG GAC GTC GCC GAC TT-3’和5’-ATT GCA GAG CCA GGGCTG GGG AGC AGT CAT AGT-3’；M-CSF，5＇-CAG TCA GAT GGA GACCTC GT-3＇和5＇-GGT GTC TCA TAG AAA GTT CG-3′。(引物由上海Sangon公司合成)。PCR反应条件为：c-myc，94℃变性45s，60℃退火1min，72℃延伸1.5min，共32个循环。M-CSF，94℃变性45s，61℃退火45s，72℃延伸1.5min，共32个循环。在所检测的培养后8例病人白血病细胞中(M2，3；M3，1；M4，1；M5，3)，未检测到G-CSF的表达，而M-CSF在两例M2及两例M5病人的白血病细胞中表达增高。在检测的所有8例病人中，c-myc表达均降低，见图3。

实施例4：抗CD44抗体的轻重链可变区基因克隆

应用RT-PCR方法从抗CD44抗体杂交瘤细胞中克隆抗CD44抗体的轻重链可变区基因：

(1)RNA提取：采用Trizol一步法，1)取杂交瘤细胞约-10⁶，加入1mlTrizol，吹打混匀，室温静置5分钟。2)加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温静置2-3分钟。3)12000rpm，4℃，离心15分钟。4)取上清，加入0.5ml异丙醇室温静置15分钟。5)12000rpm，4℃，离心15分钟。6)弃上清，加入1ml75％的乙醇洗，7500rpm，4℃，离心5分钟。7)弃上清，沉淀晾干，加入30μLDEPC水溶解。

(2)逆转录为CDNA(40μl)：取2.5mMdNTP4μl，5×first strandbuffer 8μl，DTT4μl，OligodT2μl，水16.6μl，混匀后加入RNA约2μg，65℃水浴5分钟，快速冰浴2-3分钟。加入50u/μlRNasinO.4μl，Superscript II(200u/μl)1μl混匀后37℃水浴＞1小时。取出后70℃水浴10分钟。-20℃保存。

(3)PCR扩增抗CD44抗体的轻重链可变区基因

轻链可变区基因PCR扩增反应体系(50μl)：设计引用通用简并引物，上游引物5’-GAC ATT CAG CTG ACC CAG WCT SMH-3’；下游引物5’-CCG TTA GAT CTC CAR BTT KGT SCS-3’。以CDNA为模板，高保真PfuDNA聚合酶扩增。PCR循环程序为94℃5min；94℃45S，64℃1min，72℃1min；最后72℃延伸10min，共35个循环。

重链可变区基因PCR扩增反应体系(50μl)：上游引物5’-CAG GTSMAR CTG CAG SAG TCW GG-3’；下游引物5’-TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGTCCC TTG GCC CC-3’。以cDNA为模板，高保真PfuDNA聚合酶扩增。PCR循环程序为94℃5min；94℃，45S，58℃，1min，72℃，1min；最后72℃延伸7min，共35个循环。

(4)测序载体的构建：PUC18载体为本实验室所保存。将PUC18载体用Sma I单酶切，轻重链可变区基因PCR产物回收，与切后的载体平端连接后，按常规方法氯化钙转化，以蓝/白斑方法挑选阳性克隆，以EcoR I/SalI双酶切鉴定后，送测序，该基因完全符合蛋白数据库中抗体所具有的若干保守的框架氨基酸的特点，该序列为抗体基因序列。分别命名为PUC18-VH及PUC18-VL，见图4。

实施例5：单链抗体基因表达载体PET22b(+)ScFv的构建

根据轻、重链可变区的酶切图谱及构建载体pAYZ的酶切位点，设计并合成了用于VH，VL基因扩增和拼接的引物。

VL上游引物

5’-GACTCG CCATGGACATTCAGCTGACCCAG-3’：

VL下游引物

5’-ACCACCAGATCCACCTCCACCCGAGCCACCGCCACCCCGTTTGATCTCCAGTTTTGT-3’。

VH上游引物

5’-GGCTCGGGTGGAGGTGGATCTGGTGGTGGCGGTTCGCAGGTGAAGCTGCAGGAGTCT-3’；

VH下游引物

5’-CATGGG CTCGAGTGAGGAGACGGTGACCGT-3’。

引入克隆用的Nco I/Xho I限制性酶切位点及单链抗体的linker序列(采用最广泛的(GGGGS)₃为linker)。从所构建的PUC18-VH及PUC18-VL载体中PCR扩增VH，VL片段，回收后，经重叠延伸拼接法(SOE)通过PCR直接合成ScFv基因，见图5。将PET22b(+)载体及回收的ScFv基因分别用Nco I/Xho I双酶切，回收后按常规方法进行连接和转化构建抗CD44 ScFv表达载体PET22b(+)ScFv。阳性克隆用Nco I/Xho I双酶切鉴定后测序确定。正确的克隆用于表达。测序结果表明正确，按氨基酸序列推测732bp，ScFv约为26.1KD的蛋白，见图6。

实施例6：抗CD44ScFv抗体片段的表达、纯化

(1)抗CD44单链抗体(ScFv)在大肠杆菌中的表达及SDS-PAGE分析：在3ml含氨苄青霉素的LB培养基中接种一阳性单菌落，37℃震荡培养过夜后，接种30μl于3ml含氨苄青霉素的LB培养基中，28℃震荡培养约4h后，加IPTG至终浓度为0.8mmol/L，IPTG诱导8h后收获1ml的菌液，离心加入50μl 2XSDS上样buffer，100℃煮沸10min。取5μl上样，12％SDS-PAGE检测表达蛋白，考马斯亮蓝染色。实验证明实现了重组质粒pET22b(+)ScFv在大肠杆菌中的表达，732bp片段表达出约28Kd的带(His)6的蛋白，见图7。

(2)抗CD44单链抗体(ScFv)纯化：将表达的菌体沉淀重悬于1/10培养体积的冰预冷20mmol/L Tris-HCl(PH 7.2)，超声破碎细胞，13000rpm，4℃离心30min，取上清用于纯化。

蛋白采用Pharmacia公司的Chelating Sepharose Fast Flow进行纯化，按操作手册平衡镍柱，挂镍，清洗。将粗分离的样品加入镍离子亲合层析柱，使目的蛋白结合到柱子上，洗涤后，用6倍柱床体积的用含150mM咪唑的Tris-HCl缓冲液洗脱，洗脱液用PBS缓冲液透析48小时。

(3)Western blot鉴定：主要参考分子克隆方法进行Western印迹，结果证明条带为表达产物，见图8。

实施例7：抗CD44ScFv抗体活性测定

竞争性免疫荧光抑制试验：取THP-1细胞系制成1×10⁶细胞悬液，加样于40孔细胞培养板，5×10⁵细胞/孔，抗CD44单克隆抗体HI44a20μl(1mg/ml)，阴性对照组加20μl PBS，4℃孵育1h，3000rpm，4℃离心8min，弃上清液，PBS洗细胞2次，加纯化后抗CD44 ScFv 100μl(1mg/ml)，阳性对照组加PBS，4℃孵育1h，3000rpm，4℃离心8min，弃上清液，PBS洗细胞2次，将细胞重悬于PBS中，加入20μl羊抗鼠IgG-FITC二抗，4℃孵育45min，PBS洗去未结合的荧光抗体，流式细胞仪测定鼠源性单克隆抗体HI44a与THP-1细胞系结合的阳性率。

单抗HI44a与CD44表达阳性THP-1细胞系结合阳性率为51.03％，经抗CD44ScFv竞争后，HI44a与THP-1细胞系结合的阳性率为27.10％，实验证明抗CD44ScFv可竞争性抑制HI44a与THP-1细胞系结合，即抗CD44 ScFv能够与THP-1细胞系表面CD44抗原特异性结合，见图9。

                  SEQUENCE LISTING(序列表)

<110>中国医学科学院血液学研究所

<120>用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体及其载体和用途

<130>

<160>4

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>363

<212>DNA

<213>小鼠(musculus)

<220>

<221>V_segment

<222>(1)..(363)

<400>1

caggtgaaac tgcaggagtc aggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg   60

acttgttcta tttctgggtt ttcactgaac acctctggta tgggtgtgag ctggattcgt  120

cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tggcaagcgt  180

tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccag aaaccaggta  240

ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactggca catactactg tgctcgaaga  300

gcctacggta ttaacttcgc ctttgactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc    360

tca                                                                  363

<210>2

<211>121

<212>PRT

<213>小鼠(musculus)

<220>

<221>mat_peptide

<222>(1)..(121)

<400>2

Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln

1               5                   10                  15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Ile Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Ser

            20                  25                  30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu

        35                  40                  45

Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Gly Lys Arg Tyr Asn Pro Ser

    50                  55                  60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val

65                  70                  75                  80

Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr

                85                  90                  95

Cys Ala Arg Arg Ala Tyr Gly Ile Asn Phe Ala Phe Asp Tyr Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>3

<211>324

<212>DNA

<213>小鼠(musculus)

<220>

<221>V_segment

<222>(1)..(324)

<400>3

gacattcagc tgacccagac tgccgccatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt     60

ttctcctgca ggaccagtca gagtattggc acaagcattc actggtatca ccaaagaaca    120

aatggttctc caaggcttct cataaagtct gcttctgagt ctatgtctgg gatcccttcc    180

aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttaccctta gcatcaatag tgtggagtct    240

gaagatattg catattatta ctgtcaacaa agtaatagtt ggccgctcac gttcggtgct    300

ggcacaaaac tggagatcaa acgg                                          324

<210>4

<211>108

<212>PRT

<213>小鼠(musculus)

<220>

<221>mat_peptide

<222>(1)..(108)

<400>4

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Thr Ala Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser

            20                  25                  30

Ile His Trp Tyr His Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Lys Ser Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser

65                  70                  75                  80

Glu Asp Ile Ala Tyr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

            100                 105

Claims (5)

1、一种用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体，其特征是由SEQ ID NO.2重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO.4轻链可变区氨基酸序列组成。

2、根据权利要求1所述的用于诱导白血病细胞分化及凋亡的抗CD44的工程抗体，其特征是所述SEQ ID NO.2重链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述SEQ ID NO.3轻链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3、含有编码权利要求1所述的工程抗体的核苷酸序列的载体，其特征是含有SEQ ID NO.1所述的重链可变区VH基因核苷酸序列和SEQ ID NO.3所述的轻链可变区VL基因核苷酸序列的cDNA的PUC18载体。

4、根据权利要求3所述的载体，其特征是所构建的载体为PET22b(+)载体。

5、根据权利要求1、2中任一项所述的抗CD44的工程抗体或3、4中任一项所述的载体在制备治疗白血病的药物中的应用。

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