CN1260347C

CN1260347C - 一株产乙内酰脲酶系的节杆菌

Info

Publication number: CN1260347C
Application number: CN 02116788
Authority: CN
Inventors: 张惟材
Original assignee: Institute of Bioengineering Chinese Academy of Military Medical Sciences
Current assignee: Institute of Bioengineering Chinese Academy of Military Medical Sciences
Priority date: 2002-05-13
Filing date: 2002-05-13
Publication date: 2006-06-21
Anticipated expiration: 2022-05-13
Also published as: CN1458276A

Abstract

本发明公开了一株产乙内酰脲酶系的节杆菌。本发明所提供的节杆菌是节杆菌(Arthrobacter sp.)BT801 CGMCC No0734，它能产生由具有序列表中序列2的氨基酸残基序列的乙内酰脲消旋酶、具有序列表中序列3的氨基酸残基序列的乙内酰脲水解酶，具有序列表中序列4的氨基酸残基序列的N-氨甲酰氨基酸水解酶组成的乙内酰脲酶系。本发明的节杆菌(Arthrobactersp.)BT801 CGMCC No0734及其所产生的乙内酰脲酶系具有生产氨基酸等广泛的实际应用价值。

Description

一株产乙内酰脲酶系的节杆菌

技术领域

本发明涉及一种产乙内酰脲酶系的节杆菌。

背景技未

乙内酰脲酶系是一类催化5-单取代乙内酰脲类化合物水解产生氨基酸的酶，它的作用可以用下述反应式表示：

乙内酰脲酶系由乙内酰脲水解酶、N-氨甲酰氨基酸水解酶及乙内酰脲消旋酶组成。三种酶协同作用可以使外消旋底物完全转化为特定的手性氨基酸。

乙内酰脲酶系在动物、植物和微生物中分布广泛，尤其以在微生物种群中分布较为广泛。乙内酰脲酶系的主要应用是进行各种氨基酸的酶法生产，不仅可用于各种天然氨基酸的酶法生产，还可用来生产D-型氨基酸以及各种D-或L-型的非天然氨基酸。

发明内容

本发明的目的是提供一株乙内酰脲酶系的高效生产菌。

本发明提供的乙内酰脲酶系的生产菌是节杆菌(Arthrobactersp.)BT801 CGMCC№0734。

节杆菌(Arthrobacter sp.)BT801已于2002年03月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，保藏编号为CGMCC №0734。

本发明的节杆菌从沈阳市浑河地区污泥中分离得到，为革兰氏染色阳性菌，不抗酸，不分解纤维素，接触酶阳性，于脱脂牛奶中加热至63℃ 15分钟不存活。菌体在生长过程中经历一个球状-杆状-球状的周期性变化。菌株在GYP或LB平板上生长良好，菌落为圆形且边缘整齐。在暗培养条件下菌落呈乳白色，在光照条件下转为乳黄至深黄色。

乙内酰脲酶系产生菌Arthrobacter BT801的染色体DNA，经Sau3A I部分酶切后分离30kb左右的片段，与经Hpa I和Pst I酶切的黏粒载体pKC505进行连接，将连接产物用包装蛋白包装，转染大肠杆菌DH5α，得到转化子。利用薄层层析的方法从转化子中筛选得到阳性克隆，通过亚克隆得到了序列表中序列1的乙内酰脲酶系的完整基因，该基因能利用自身的启动子在大肠杆菌中进行表达产生有活性的序列表中序列2、序列3、序列4的蛋白，具有序列表中序列2的氨基酸残基序列的是乙内酰脲消旋酶、具有序列表中序列3的氨基酸残基序列的是乙内酰脲水解酶，具有序列表中序列4的氨基酸残基序列的是N-氨甲酰氨基酸水解酶，它们组成了乙内酰脲酶系。

本发明的乙内酰脲酶系具有广泛的实际应用价值。光学活性氨基酸在医药和食品行业应用非常广泛，氨基酸的酶法生产是目前生产氨基酸的主要手段之一。乙内酰脲酶系能够将5-位单取代乙内酰脲类化合物特异水解为氨基酸。例如，L-色氨酸可作为氨基酸输液的成份和饲料添加剂，市场潜力很大，有关L-色氨酸酶法生产的报道很多，其中利用乙内酰脲酶系以5-吲哚甲基乙内酰脲为生产原料的路线颇受关注。尤其是利用本发明的酶系生产苯丙氨酸具有重要的经济实用意义。又如，L-苯丙氨酸是二肽甜味剂天冬甜精的主要原料，在这种甜味剂的生产成本中占相当比重，由5-苄基乙内酰脲酶法生产，方法新颖，前景乐观。此外一些难于发酵生产的脂肪族氨基酸如L-缬氨酸、L-丙氨酸和L-异亮氨酸等亦可望通过本发明的乙内酰脲酶系进行酶法生产。本发明的乙内酰脲酶具有L-和D-两种不同立体选择性，相应水解产物也可为L-或D-型的手性氨基酸，尤其对于一些不能直接通过发酵生产的D-型氨基酸和非蛋白质氨基酸，乙内酰脲酶更独具优势。

利用乙内酰脲酶酶法生产氨基酸的另一个优势还在于，酶促水解过程不仅仅是选择性水解外消旋底物中的一种异构体，而且能够利用乙内酰脲类化合物的消旋作用将其对映体不断转化为可被酶解的那种异构体，因此在理论上乙内酰脲酶酶法生产氨基酸的转化率可达100％，而且消旋作用与酶促水解可以在同一个体系中同时进行，使工艺大大简化。碱性条件可以催化乙内酰脲的消旋，但通常这种化学消旋是一个非常缓慢的过程。例如在室温和pH8.5的条件下，20h只有10％L-吲哚甲基乙内酰脲(L-IMH)转化为D-IMH。而乙内酰脲消旋酶可以在生理条件下高效率地催化乙内酰脲类化合物的消旋，在乙内酰脲酶酶法生产氨基酸中具有重要作用。此外，根据对地球原始环境的推测和分析，原始水圈的氨基酸可能多以对应的N-氨甲酰氨基酸或乙内酰脲类化合物的形式存在。乙内酰脲酶还被认为是在微生物三界系统形成之前就已经存在的一种将N-氨甲酰氨基酸或乙内酰脲转化为游离氨基酸的原始酶类，因此乙内酰脲酶及其产生菌是研究生命起源和进化的重要生物材料。

下面结合附图及具体实施例对本发明做进一步说明。

附图说明

图1为酶转化产物的紫外光谱分析。

图2为酶转化产物的红外光谱图。

图3为酶解产物的质谱图。

具体实施方式

实施例1、用本发明乙内酰脲酶系对DL-5-苄基乙内酰脲进行酶法转化

1、产酶菌体的制备

将保存在GYP培养基斜面上的产酶菌株节杆菌(Arthrobacter sp.)BT801 CGMCC№0734接种到含5ml GYP液体培养基的试管中，30℃振荡培养24h，再接种到含30mlGYPBH液体培养基的250ml三角瓶中，接种量为5％，于30℃恒温摇床上200r/min振荡培养24h，5000r/min离心10min，收集菌体，用PBS洗涤2次，得到产酶菌体。

2、转化反应及转化产物的分离精制

将5g DL-5-苄基乙内酰脲(可以按照水野正.JP.1985，60-11473和段々英则，水野正.JP.1985，60-11457的方法合成)和由上述步骤中100ml培养液得到的BT801菌体与含0.5mmol/L CoCl2的PBS混合，于45℃保温搅拌反应24小时，待不溶的底物消失且用Ehrlish试剂检测中间产物显色反应微弱时停止转化反应。将反应混合物于10000r/min离心15min，上清液通过732阳离子交换树脂柱，用蒸馏水洗2次，再用0.2mmol/L NH₄OH洗脱，收集紫外吸收强的组分，减压浓缩，调pH至5.48，加2倍乙醇，冷却使结晶。收集析出的结晶，再溶于水，用乙醇重结晶，得到约2g精制产物。

3、转化产物的鉴定

对该酶转化产物进行了薄层层析、熔点、元素分析、旋光等理化分析及紫外、红外和质谱等光谱学分析，结果如表1、图1、图2及图3所示。

表1 酶转化产物物理常数的测定结果

	转化产物	标准品
	转化产物	标准品	薄层层析R_f比旋光度[α]₂₀ ^D熔点℃元素分析C∶H∶N	0.65-34.223565.36∶6.79∶8.31	0.65-34.523765.45∶6.66∶8.48

图1中，A为L-苯丙氨酸标准品(日本味之素公司产品)；B为转化产物；所用仪器为Shimadzu UV-2201，样品浓度为0.82mg/ml。图2中，曲线A为L-苯丙氨酸标准品(日本味之素公司产品)；曲线B为转化产物。图3中，A为L-苯丙氨酸标准品(日本味之素公司产品)；B为转化产物；轰击电子能量为70ev，加速电压为6KV。

从表1及图1-3中的结果可以看出BT801转化DL-5-苄基乙内酰脲所得产物确为L-苯丙氨酸。

序列表

<160>4

<210>1

<211>4261

<212>DNA

<213>人工序列

<400>1

gatctacacc tattgggcag gattcaactg gccggcactc ggcgtgtatg tcgccgcgct 60

gctgttgtcc ctgctcacgc ccgatctcat gtttgtcaca ggtctcgttg catccggaat 120

tctgcattat ctagtgatga agttctgggt ctcgaagacg aatcccctgt cctcaagtac 180

cgaggacctg aacgcgaagt accttgttcc ggcagatgcg caggagcgcg ccccggaaac 240

cacaccaccg gctgtacagg agtaaacgat gcgaattcat atcatcaacc cgaacagctc 300

gtcggagttg accgaggcgg tagccgagac tgcacgaagc gttgtctcag ctggcaccgc 360

ggtcaccgca gtcaatccat cttcggggcc ggccgttatc gaaggcagct acgatgaggc 420

actggccacg taccaccttg tacaggaggt gatgcgtgcg gaacgggaag acaggccgga 480

cgcttacgta attgcctgtt tcggtgatcc aggcctgaat gcagtgaggg agctgacaga 540

gaagcctgtc gttggaatcg ccgaggctgc catccaactg tcatcgttta tcggcgcaac 600

tttctccata gtgagcacgc ttccacgcgt gcgaagccac ctccacgggc tcgttcgccg 660

cgcgggagca acaaaccgcc ttgcctcagt caaaacgccg gatctcggtg taatggcatt 720

ccatgaagac gccggcagcg cccaagccac cctcgaacag gccgctaaag aagccgtgca 780

agaagacggc gccgaagtcg ttgttcttgg atgcgccggc atggccggtc tggcaagacg 840

attgagcgaa gaactgcagg tgcctgtcat cgaccccgtt gaagcagcct gccgtgtagc 900

cgaaagcttg tccgcgctgg gttatggaac gagcaaagcc aatacgtacg agaaacccac 960

cgaaaaggtc tacaactagc aaggagtcag cagtgtttga cgtaatcgtg aagaattgcc 1020

gcatcgtttc cagtgaggga atcactgagg cagatattct ggtcaaggaa ggcaaggtcg 1080

ccgccatcag ctccgagggg ctcaacgacg aggtgcagga gacgattgat gctggcggaa 1140

aattcgtcct tcccggagtg gttgacgagc acgtgcatat catcgatatg gacctcaaag 1200

atcagaacgg gcgcttcgag ttcgactctg aatcagctgc cgtcggcggc atcaccacca 1260

tcatcgagat gccgatcacc tccccgccca ccacgacctt ggaagctttc ctcgcgaaga 1320

agaaagaagc gggcgacagg ctcaaagtag atttcgccct ttacggcgga ggggtgcctg 1380

gaaaccttag tgaaatccga aaaatgcacg aagcgggcgc cgtgggtttc aagtccatga 1440

tggcggcatc cgtgcctggg atgttcgaag ccgtgaccga cggtgaactg ttcgaaatct 1500

tccaggaaat cgccacctgc ggctcggtca tcgtcgtaca cgcggaaaac gagacgataa 1560

tccagtccct gcaaaggcag ctcaaagaag ccggccgcac tgacatggct gcatatgaag 1620

catcccagcc ggcgttccag gagaacgaag cgatccagcg cgcgcttgcg ctgcagaaag 1680

aaaccggatg ccgcctcatc gttctgcacg tcagcaaccc ggacggcgtc cagctcatcc 1740

atcaggcgca gtcctccgga caggacgtgc actgcgaatc gggcccgcag tacctgaaca 1800

tcactgccga agatgcttca cgtatcggcc cctacatgaa gatcgcgccg cccgtccggt 1860

cggctgagat gaatgccagg ctgtgggagc aactggagaa aggcctcatc gacaccctgg 1920

ggtccgacca tggcggtcac cccaaagaga acaaggaaag aggctgggac aacgtctggg 1980

atgccagcaa tggcgcactg ggcctggaga catctctgcc gatgatgctg accaacggcg 2040

tcaatagggg acggctttcg ctggagcgcc tcgttgaggt gatgtgcgaa aaccctgcca 2100

aactctttgg aatttacccg cagaagggaa cccttcaggt agggtcggac gccgacttgg 2160

taatcgtcga ccttgaggtc gatgacaagg tagacgcatc ggagttccgg tcgctcctga 2220

agcacagccc ctttgacggt atgccggtca cgggcaagcc ggtccttaca atggtgcgcg 2280

gaactgtagt agccgaaaac ggcaaaattc tcgttgagcc cggattcggt caattcgtca 2340

cctgtcgtga aagccaggat cccaaatgat gacgtcgctt agagcacaag cggaccgcat 2400

agagaaagac atccgggacc tggcccggtt ctcggccggc ggcccaggtg ttacacgcct 2460

ttcctacaca ccggagcatg ctgcagcgag agacctcatc attgcggcga tgcagcaagc 2520

cggactcgac gtccgcgaag acggcctggg caatatcacc gggagacggg aaggaagcga 2580

tccggatctt ccggcgattg cagtcggatc gcatttcgac tcggttcgta atggcggaat 2640

gttcgacggg acagccggcg tggtctgcgc attggaggcc gcccgagtgg tgaacgaatc 2700

cgagtatgtg aacagacacc cgttcgaatt cattgccata gttgaggaag aaggctcccg 2760

ctttaatagc ggcatgctcg gcggcagagc cctcgcaggc ctggtcacgg atgaagacct 2820

cgacaagctc aaggacgaag acggcatatc agtgcgggac gcagccacgg aattcgggct 2880

acagcccggt aatcttcaaa cttctgtacg ttcccgcctc gatcttcgtg ccttcataga 2940

gccccatatt gagcaaggac cggttcttga gcaggaaggg attgagattg gcgtcgtcac 3000

ttccatcgtg gggatccgca ctctgcgcgt cgctgtccta ggacgaagtg atcacgcagg 3060

aacgactccc atgcatctgc gccaagatgc cctcatccct tccgcgctca tggtcagaga 3120

agtcaaccgt ttggtcaacg agctcggcga tgaaacggtg gcaactgtcg gtcatctgac 3180

tgtcgccccc ggcggtatca accaggttcc cggggaggtg aacttcactc tggatttgcg 3240

gtcaccgcac gaggaatctc tgaaacaaat cgtcaaacag atcactgtca tgatccaaga 3300

ggtcgcttcc caggccgagg taacagcgaa tgttgaagag ttcttctcat tggatccggt 3360

gcctctggcg ccttcagttg tcgacgctgt aagacaggct gcctccaact tgcggttctc 3420

gcatcgtgac atgccgagcg gtgccgggca cgactccatg ttcatctctc aggttactga 3480

tgttggtatg gtgtttgtac cgagcaggga cggtcgcagt cacgttccag aagaatggag 3540

cgacttcgac gaccttcgaa aagggacgga tgttgtgctc ggagtcatga cggcgctcga 3600

taagtgagta ctcggaaaca gtgaactagg agagcggtgg caagagaaga cgttctcgac 3660

cgggcagaaa aactcttcgc cgagcatggg tacaccgcaa cgtcgatggc cgacatcgca 3720

gcagccgtcg gcatccgcaa agcctcgctg tactcacatt tctccgccaa atccgatctc 3780

tatttcgaag tgatcgaccg tgtgcatgaa cggttccgtg aggggattcg ggatctggcg 3840

gcgcaggagt tgccgcccaa ggaacacctg caccgccaga tgcagcggat atgtacccac 3900

gcaccggtaa atcacttcag gttcactttg tttccaccgc aggatctgct tgaccgcgcc 3960

gtaccggtct tcaccgaatt tgaccggtac ttccggggtg taattcaagg cgtgcttcgt 4020

gagtatctcg atgaagacgt cactgacgaa cggctcgctg ctttagtggg catgtacata 4080

tacctcatga acgggcttct atcgatcgaa aagttcgtgt caggggagca gctggcagac 4140

cgagtcgaag aaacgttcgc actcttctgg gagctcgtag agaagaacgc tagcagcagt 4200

tagcttttcc cagttcgaat cgttccgaaa gtaaaacggc tcggccctca agagagggat 4260

c 4261

<210>2

<211>236

<212>PRT

<213>人工序列

<400>2

Met Arg Ile His Ile Ile Asn Pro Asn Ser Ser Ser Glu Leu Thr

1 5 10 15

Glu Ala Val Ala Glu Thr Ala Arg Ser Val Val Ser Ala Gly Thr

20 25 30

Ala Val Thr Ala Val Asn Pro Ser Ser Gly Pro Ala Val Ile Glu

35 40 45

Gly Ser Tyr Asp Glu Ala Leu Ala Thr Tyr His Leu Val Gln Glu

50 55 60

Val Met Arg Ala Glu Arg Glu Asp Arg Pro Asp Ala Tyr Val Ile

65 70 75

Ala Cys Phe Gly Asp Pro Gly Leu Ash Ala Val Arg Glu Leu Thr

80 85 90

G1u Lys Pro Val Val Gly Ile Ala Glu Ala Ala Ile Gln Leu Ser

95 100 105

Ser Phe Ile Gly Ala Thr Phe Ser Ile Val Ser Thr Leu Pro Arg

110 115 120

Val Arg Ser His Leu His Gly Leu Val Arg Arg Ala Gly Ala Thr

125 130 135

Asn Arg Leu Ala Ser Val Lys Thr Pro Asp Leu Gly Val Met Ala

140 145 150

Phe His Glu Asp Ala Gly Ser Ala Gln Ala Thr Leu Glu Gln Ala

155 160 165

Ala Lys Glu Ala Val Gln Glu Asp Gly Ala Glu Val Val Val Leu

170 175 180

Gly Cys Ala Gly Met Ala Gly Leu Ala Arg Arg Leu Ser Glu Glu

185 190 195

Leu Gln Val Pro Val Ile Asp Pro Val Glu Ala Ala Cys Arg Val

200 205 210

Ala Glu Ser Leu Ser Ala Leu Gly Tyr Gly Thr Ser Lys Ala Asn

215 220 225

Thr Tyr Glu Lys Pro Thr Glu Lys Val Tyr Asn

230 235 236

<210>3

<211>458

<212>PRT

<213>人工序列

<400>3

Val Phe Asp Val Ile Val Lys Asn Cys Arg Ile Val Ser Ser Glu

1 5 10 15

Gly Ile Thr Glu Ala Asp Ile Leu Val Lys Glu Gly Lys Val Ala

20 25 30

Ala Ile Ser Ser Glu Gly Leu Asn Asp Glu Val Gln Glu Thr Ile

35 40 45

Asp Ala Gly Gly Lys Phe Val Leu Pro Gly Val Val Asp Glu His

50 55 60

Val His Ile Ile Asp Met Asp Leu Lys Asp Gln Asn Gly Arg Phe

65 70 75

Glu Phe Asp Ser Glu Ser Ala Ala Val Gly Gly Ile Thr Thr Ile

80 85 90

Ile Glu Met Pro Ile Thr Ser Pro Pro Thr Thr Thr Leu Glu Ala

95 100 105

Phe Leu Ala Lys Lys Lys Glu Ala Gly Asp Arg Leu Lys Val Asp

110 115 120

Phe Ala Leu Tyr Gly Gly Gly Val Pro Gly Asn Leu Ser Glu Ile

125 130 135

Arg Lys Met His Glu Ala Gly Ala Val Gly Phe Lys Ser Met Met

140 145 150

Ala Ala Ser Val Pro Gly Met Phe Glu Ala Val Thr Asp Gly Glu

155 160 165

Leu Phe Glu Ile Phe Gln Glu Ile Ala Thr Cys Gly Ser Val Ile

170 175 180

Val Val His Ala Glu Asn Glu Thr Ile lle Gln Ser Leu Gin Arg

185 190 195

Gln Leu Lys Glu Ala Gly Arg Thr Asp Met Ala Ala Tyr Glu Ala

200 205 210

Ser Gln Pro Ala Phe Gin Glu Asn Glu Ala Ile Gln Arg Ala Leu

215 220 225

Ala Leu Gln Lys Glu Thr Gly Cys Arg Leu Ile Val Leu His Val

230 235 240

Ser Asn Pro Asp Gly Val Gln Leu Ile His Gln Ala Gln Ser Ser

245 250 255

Gly Gln Asp Val His Cys Glu Ser Gly Pro Gln Tyr Leu Asn Ile

260 265 270

Thr Ala Glu Asp Ala Ser Arg Ile Gly Pro Tyr Met Lys Ile Ala

275 280 285

Pro Pro Val Arg Ser Ala Glu Met Asn Ala Arg Leu Trp Glu Gln

290 295 300

Leu Glu Lys Gly Leu Ile Asp Thr Leu Gly Ser Asp His Gly Gly

305 310 315

His Pro Lys Glu Asn Lys Glu Arg Gly Trp Asp Asn Val Trp Asp

320 325 330

Ala Ser Asn Gly Ala Leu Gly Leu Glu Thr Ser Leu Pro Met Met

335 340 345

Leu Thr Asn Gly Val Asn Arg Gly Arg Leu Ser Leu Glu Arg Leu

350 355 360

Val Glu Val Met Cys Glu Asn Pro Ala Lys Leu Phe Gly Ile Tyr

365 370 375

Pro Gln Lys Gly Thr Leu Gln Val Gly Ser Asp Ala Asp Leu Val

380 385 390

Ile Val Asp Leu Glu Val Asp Asp Lys Val Asp Ala Ser Glu Phe

395 400 405

Arg Ser Leu Leu Lys His Ser Pro Phe Asp Gly Met Pro Val Thr

410 415 420

Gly Lys Pro Val Leu Thr Met Val Arg Gly Thr Val Val Ala Glu

425 430 435

Asn Gly Lys Ile Leu Val Glu Pro Gly Phe Gly Gln Phe Val Thr

440 445 450

Cys Arg Glu Ser G1n Asp Pro Lys

455 458

<210>4

<211>412

<212>PRT

<213>人工序列

<400>4

Met Thr Ser Leu Arg Ala Gln Ala Asp Arg Ile Glu Lys Asp Ile

1 5 10 15

Arg Asp Leu Ala Arg Phe Ser Ala Gly Gly Pro Gly Val Thr Arg

20 25 30

Leu Ser Tyr Thr Pro Glu His Ala Ala Ala Arg Asp Leu Ile Ile

35 40 45

Ala Ala Met Gln Gln Ala Gly Leu Asp Val Arg Glu Asp Gly Leu

50 55 60

Gly Asn Ile Thr Gly Arg Arg Glu Gly Ser Asp Pro Asp Leu Pro

65 70 75

Ala Ile Ala Val Gly Ser His Phe Asp Ser Val Arg Asn Gly Gly

80 85 90

Met Phe Asp Gly Thr Ala Gly Val Val Cys Ala Leu Glu Ala Ala

95 100 105

Arg Val Val Asn Glu Ser Glu Tyr Val Asn Arg His Pro Phe Glu

110 115 120

Phe Ile Ala Ile Val Glu Glu Glu Gly Ser Arg Phe Asn Ser Gly

125 130 135

Met Leu Gly Gly Arg Ala Leu Ala Gly Leu Val Thr Asp Glu Asp

140 145 150

Leu Asp Lys Leu Lys Asp Glu Asp Gly Ile Ser Val Arg Asp Ala

155 160 165

Ala Thr Glu Phe Gly Leu Gln Pro Gly Asn Leu Gln Thr Ser Val

170 175 180

Arg Ser Arg Leu Asp Leu Arg Ala Phe Ile Glu Pro His Ile Glu

185 190 195

Gln Gly Pro Val Leu Glu Gln Glu Gly Ile Glu Ile Gly Val Val

200 205 210

Thr Ser Ile Val Gly Ile Arg Thr Leu Arg Val Ala Val Leu Gly

215 220 225

Arg Ser Asp His Ala Gly Thr Thr Pro Met His Leu Arg Gln Asp

230 235 240

Ala Leu Ile Pro Ser Ala Leu Met Val Arg Glu Val Asn Arg Leu

245 250 255

Val Asn Glu Leu Gly Asp Glu Thr Val Ala Thr Val Gly His Leu

260 265 270

Thr Val Ala Pro Gly Gly Ile Asn Gln Val Pro Gly Glu Val Asn

275 280 285

Phe Thr Leu Asp Leu Arg Ser Pro His Glu Glu Ser Leu Lys Gln

290 295 300

Ile Val Lys Gln Ile Thr Val Met Ile Gln Glu Val Ala Ser Gln

305 310 315

Ala Glu Val Thr Ala Asn Val Glu Glu Phe Phe Ser Leu Asp Pro

320 325 330

Val Pro Leu Ala Pro Ser Val Val Asp Ala Val Arg Gln Ala Ala

335 340 345

Ser Asn Leu Arg Phe Ser His Arg Asp Met Pro Ser Gly Ala Gly

350 355 360

His Asp Ser Met Phe Ile Ser Gln Val Thr Asp Val Gly Met Val

365 370 375

Phe Val Pro Ser Arg Asp Gly Arg Ser His Val Pro Glu Glu Trp

380 385 390

Ser Asp Phe Asp Asp Leu Arg Lys Gly Thr Asp Val Val Leu Gly

395 400 405

Val Met Thr Ala Leu Asp Lys

410 412

Claims

1、节杆菌(Arthrobacter sp.)BT801 CGMCC №0734。