发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的不足之处,而提供制造方便、效果好的肽奶(商品名:昕太肽奶)及其制备工艺。
本发明目的可以通过如下措施来实现的:
肽奶,是由下列原料和配方组成:
纯牛奶 94-96%
白砂糖 0.5-3%
骨髓肽 0-3%
胎盘肽 0-0.5%
胶原肽 0-1%
稳定剂C-9001 0-0.2%,0除外
食用香精 0-0.04%
余量用水调节,以上各组份重量百分比的含量之和为100%,含少许纯碱,其用量忽略不计。骨髓肽、胎盘肽、胶原肽三种肽,在本发明中至少有一种不为0。
制备工艺,是按如下步骤进行:
A、收奶
从牧场收回鲜牛奶,经脱气、过滤、冷却、入奶罐冷藏。
B、预处理
1)骨髓肽、胎盘肽、胶原肽三种肽粉pH的调整
将肽粉准确计量,用水溶解,调pH到7,冷却至20℃待用。
2)小料的配制
将稳定剂C-9001加少许白砂糖,用热牛奶溶解,呈糊状,过胶体磨,将剩余的白砂糖用水溶解完全冷却至20℃。
3)纯奶的预处理
将冷藏的纯奶打入平衡槽,加热至35-40℃,杀菌、冷却,进入调配罐。
4)肽奶的调配
将配好的稳定剂C-9001、肽粉、小料、食用香精和纯碱依次加入纯奶中,搅拌均匀。
C、超高温
肽奶经过滤、预热至65℃脱气,均质机均质,压力1.8-2.0×107帕,均质奶经过90℃蛋白保护进入140℃超高温灭菌,再冷却至25℃灌装、除泡、喷入蒸汽、反封膨胀、封口、喷码、贴吸管后,装箱。
三种活性肽粉介绍:
1、从牛羊鲜骨肉组织提取的骨髓肽
颐宁多肽是我公司从牛羊鲜骨肉组织提取的骨髓肽,1997年被国家卫生部批准生产,具有“调节免疫”功能的保健食品。将这种活性肽产品加入奶中,制成的肽奶无疑具有免疫调节的作用。
2、从羊胎盘组织提取的胎盘肽
胎盘具有丰富的营养和特殊的生理作用,胎盘中的有效成份具有美容的功能已被广泛认可。我公司采用生物工程技术,将胎盘内营养物质分离提纯,并将其大分子的优质蛋白质经过蛋白酶降解成活性肽,再经过滤、超滤、浓缩、干燥而成胎盘肽粉。将这种肽粉加入奶中制成的液肽奶,具有促进细胞新陈代谢、平衡细胞营养、美容养顔、延缓衰老的效果。
3、从动物皮肤、蹄筋中提取的胶原肽
动物皮肤、蹄筋具有丰富的胶原蛋白和弹性蛋白,经高压蒸煮,将组织中的蛋白质溶于水中,利用生物蛋白酶降解成活性肽,再经过滤、超滤、浓缩、干燥而成胶原肽粉,将这种肽粉加入奶中制成的肽奶,能为皮肤中细胞新陈代谢过程中胶原蛋白和弹性蛋白的合成提供很好的活性基础物质。长期饮用,使皮肤光洁有弹性。
三种肽粉质量标准见下表1:
表1
将骨髓肽样品送到北京医科大学营养与食品卫生教研室,该教研室作了保健食品免疫调节作用检验报告,现将检验结果陈述如下:
检验指标:
小鼠的脾脏和胸腺重;抗体形成细胞(PFC)的测定,用Jerne改良玻片法;迟发型变态反应(DTH),用足跖肿胀法测定;巨噬细胞吞噬功能的检测,采用碳粒廓清法测定,统计方法:用两组均数检验。
实验动物:
昆明种雌雄小鼠,6-8周龄、18-22克,北京医科大学科学实验动物部提供,合格证号为:医动字01-3049。
实验设计:
动物分对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。上述三个实验组的剂量分别为0.25g/Kg、1.0g/Kg和3.0g/Kg体重。分别相当于人每日用量的2.5、10和30倍,共连续灌胃14天。
测定结果:
1、各剂量组小鼠的胸腺重量与对照组比较均有明显的增加,小鼠脾脏重量与对照组比较未见有明显变化(表2。
2、中、高剂量组小鼠IgM-PFC数/全脾与对照组比较明显增高(表3)。
3、高剂量组小鼠的迟发型变态反应(DTH)与对照组比较有明显增强,低、中剂量组与对照组比较未见明显变化(表4)。
4、各剂量组小鼠碳粒廓清率(K)和廓清指数(a)与对照组比较未见明显变化(表5)。
表2 骨髓肽对小鼠免疫器官重量的影响(X±S)
组别 |
n |
脾脏相对重 |
胸腺相对重 |
溶剂对照 |
12 |
5.82±1.31 |
3.70±0.68 |
低剂量组 |
12 |
5.81±1.56 |
4.58±1.10* |
中剂量组 |
12 |
5.71±1.13 |
4.54±1.27* |
高剂量组 |
12 |
5.54±1.16 |
4.48±1.02* |
相对重=脏器重(mg)/体重(g)
与对照组比较*P<0.05
表3 骨髓肽对小鼠IgM-PFC/脾的影响(X±S)
组别 |
n |
IgM-PFC/全脾 |
溶剂对照 |
12 |
91,201 2.24 |
低剂量组 |
12 |
117,490 1.41 |
中剂量组 |
10 |
234,423 1.40** |
高剂量组 |
12 |
213,796 1.44** |
与对照组比较**P<0.01
表4 骨髓肽对小鼠DTH反应的影响(X±S)
组别 |
n |
足跖增加厚度(mm) |
溶剂对照 |
12 |
0.52±0.14 |
低剂量组 |
12 |
0.52±0.17 |
中剂量组 |
12 |
0.63±0.18 |
高剂量组 |
12 |
0.66±0.18* |
与对照组比较*P<0.05
表5 骨髓肽对小鼠碳粒廓清的影响(X±S)
组别 |
n |
K |
α |
溶剂对照 |
11 |
0.0436±0.0180 |
6.80±0.77 |
低剂量组 |
11 |
0.0471±0.0077 |
6.94±0.62 |
中剂量组 |
11 |
0.0559±0.0202 |
6.88±0.73 |
高剂量组 |
12 |
0.0380±0.0082 |
6.81±0.49 |
结果小结:
小鼠经口给予骨髓肽14天后,检测结果表明,骨髓肽有明显增加小鼠胸腺重量,增强体液免疫功能(IgM-PFC)和细胞免疫功能(DTH)的作用,未见对巨噬细胞吞噬功能明显的影响。
根据卫生部监督司1996年颁布的《保健食品功能学评价和检验方法》进行延缓衰老作用中果蝇生存试验的检测和评价,现将胎盘肽进行检测和评价。
实验动物及受试物:黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)。按照常规方法进行繁殖,收集10小时内羽化的成虫,乙醚麻醉喜爱,区分雌雄。由三盛国际(上海/张家口)生物工程有限公司提供,产品批号:970418。
试剂与仪器:暗温箱、培养指管、乙醚、苯甲酸、玉料粉、红糖、酵母粉、琼脂等。
动物分组与受试物给予:将实验动物随机分为正常对照(NC)、低剂量(LD)、中剂量(MD)和高剂量(HD)4个组,每组雌雄果蝇约100只,将胎盘肽加入熔化的果蝇基础饲料中,充分调匀,LD、MD和HD组分别以含0.2、1.0和5.0%胎盘肽的果蝇基础饲料饲养,NC组用普通饲料饲养,持续到实验结束。
实验步骤和方法:将实验动物每25只称重并放在一培养管(3×13cm)中,在28±1℃、相对湿度55%左右的暗温箱内饲养。每支培养管内培养基厚度为0.5-1.0cm。每3-4天更换一次培养基,每日定时3次统计果蝇死亡数并排除因其他原因死亡的果蝇,直到全部死亡。试验结束后,计算最高寿命,平均寿命及半数死亡时间,最高寿命即每组最后死亡的10只果蝇成虫存活天数的平均数,平均寿命以不同存活时间果蝇的死亡数按加权平均法计算,半数死亡时间以累计死亡率与存活天数的直线回归法求得。
结果
胎盘肽对果蝇平均寿命的影响:
从表6可以看出,低、中剂量的胎盘肽对果蝇平均寿命无延长作用,高剂量的胎盘肽对果蝇平均寿命均显著延长。
表6、胎盘肽对果蝇平均寿命的影响
组别 | 性别 | 样本数 |
平均体重(μg) |
平均寿命(d)n | P值 |
对照组 |
雄 |
95 |
780 |
30.2±9.2 | |
|
雌 |
97 |
920 |
32.7±9.0 | |
低剂量组 |
雄 |
82 |
780 |
30.8±11.6 |
>0.05 |
|
雌 |
93 |
920 |
32.6±12.6 |
>0.05 |
中剂量组 |
雄 |
83 |
780 |
32.1±10.7 |
>0.05 |
|
雌 |
103 |
920 |
34.6±10.7 |
>0.05 |
高剂量组 |
雄 |
93 |
780 |
34.0±9.7 |
<0.05 |
|
雌 |
96 |
920 |
35.4±10.0 |
<0.05 |
a:X±SD
2、胎盘肽对果蝇半数死亡时间的影响:
从表7可以看,低剂量组的胎盘肽对果蝇的半数死亡时间没有延长作用,中剂量的胎盘肽以雌雄果蝇半数死亡时间显著延长,高剂量胎盘肽对雌雄果蝇半数死亡时间均显著延长。
表7、胎盘肽对果蝇半数死亡时间的影响
组别 | 性别 | 样本数 |
平均体重(μg) |
半数死亡时间(d)n | P值 |
对照组 |
雄 |
95 |
780 |
29.0±10.3 | |
|
雌 |
97 |
920 |
31.2±9.0 | |
低剂量组 |
雄 |
82 |
780 |
29.3±10.9 |
>0.05 |
|
雌 |
93 |
920 |
32.0±11.3 |
>0.05 |
中剂量组 |
雄 |
83 |
780 |
31.1±9.8 |
>0.05 |
|
雌 |
103 |
920 |
33.8±9.0 |
<0.05 |
高剂量组 |
雄 |
93 |
780 |
32.7±10.9 |
<0.05 |
|
雌 |
96 |
920 |
34.2±12.0 |
<0.01 |
a:X±SD
3、胎盘肽对果蝇最高寿命的影响:
从表8可以看出:低剂量的胎盘肽对果蝇的最高寿命无延长作用,中和高剂量的胎盘肽对雌性果蝇的最高寿命均有显著延长。
表8 胎盘肽对果蝇最高寿命的影响
组别 | 性别 | 样本数 |
平均体重(μg) | 最高寿命(d)n | P值 |
对照组 |
雄 |
95 |
780 |
44.8±2.7(n=10) | |
|
雌 |
97 |
920 |
47.6±2.1(n=10) | |
低剂量组 |
雄 |
82 |
780 |
44.9±2.9(n=10) |
>0.05 |
|
雌 |
93 |
920 |
47.4±3.9(n=10) |
>0.05 |
中剂量组 |
雄 |
83 |
780 |
45.8±2.0(n=10) |
>0.05 |
|
雌 |
103 |
920 |
49.6±2.0(n=10) |
<0.05 |
高剂量组 |
雄 |
93 |
780 |
46.5±2.0(n=10) |
>0.05 |
|
雌 |
96 |
920 |
52.2±2.9(n=10) |
<0.01 |
a:X±SD
评价:
从以上三个指标的结果可以看出,所试剂量的胎盘肽均有一个以上的剂量对果蝇寿命的延长有明显效果,可以判定胎盘肽的果蝇生存试验結果为阳性。
根据卫生部监督司1996年颁布的《保健食品功能学评价和检验方法》利用D-半乳糖衰老模型动物进行小鼠过氧化脂质含量和老化相关酶的检测和评价,将胎盘肽进行检测和评价,其结果如下:
1、动物:
6周龄左右的昆明种雌性小鼠,体重范围18-22g,购自解放军总医院实验动物中心。
2、试剂:
分析纯D-半乳糖、硫代巴比妥酸(TBA),购自上海试剂二厂、四乙氧基丙烷(TEP)为Difico分装,购自北京化学试剂商店、叠氨钠、还原型谷胱甘肽购自华美生物工程公司、二硫对硝基苯甲酸(DTNB),购自北京百泰生化技术公司,其它普通试剂均购自军事医学科学院药品器材库。
3、动物分组及给药:
将动物随机分为正常对照(NC)、D-半乳糖模型对照(DC),胎盘肽低剂量(LD)、中剂量(MD)和高剂量(HD)5个组。每组10只动物。NC和DC组每天分别颈后皮下注射生理盐水0.2ml,DC、LD、MD和HD组每日颈后皮下注射D-半乳糖水溶液0.2ml(60mg/kg体重),LD、MD和HD组动物每日灌服胎盘肽内容物悬浮液,剂量分别为20.8(含硒8.33μg)和125.0(含硒25.0μg)mg硒旺粉剂/kg。相当于正常成人日口服最低推荐剂量1粒胶囊,即250mg(含硒50μg)60/kg体重的5、10和30倍,持续30天后活杀。
4、观察指标及方法:
小鼠全血中MDA含量,采用TBA荧光法:小鼠全血中GSH-PX活力,采用GSH-DTNB比色法。
5、统计处理:所有数据用SAS软件进行方差分析(ANOVA)
结果
1、胎盘肽对小鼠全血中MDA含量的影响:
从表9所示结果可以看出,与对照组相比多试剂量的胎盘肽均能明显降低小鼠的过氧化脂质含量。
表9、胎盘肽对小鼠全血中MDA含量的影响
组别 |
剂量(mg/kg) |
鼠数(只) |
MDA(mnol/ml全血)n |
模型对照组 |
0 |
12 |
3.63±0.17 |
正常对照组 |
0 |
11 |
3.80±0.15* |
低剂量组 |
20.8 |
11 |
3.63±0.082## |
中剂量组 |
41.7 |
9 |
3.45±0.15*## |
高剂量组 |
125.0 |
11 |
3.40±0.057**## |
#:与DC组比较,P<0.05:##:P<0.01
*:与NC组比较,P<0.05:**:P<0.01
a:X±SD
2、胎盘肽对小鼠全血GSH-PX活力的影响:
表10所示结果表明,所试剂量的胎盘肽均能升高小鼠全血中GSH-PX活力,其中,中、高剂量组与对照组相比显著升高。
表10、胎盘肽对小鼠全血GSH-PX活力的影响
组别 |
剂量(mg/kg) |
鼠数(只) |
活力(U/ml全血)n |
模型对照组 |
0 |
12 |
41.2±3.27 |
正常对照组 |
0 |
11 |
33.1±3.74** |
低剂量组 |
20.8 |
11 |
35.6±4.70** |
中剂量组 |
41.7 |
9 |
39.2±4.29## |
高剂量组 |
125.0 |
11 |
42.0±3.78## |
#:与DC组比较,P<0.05:##:P<0.01
*:与NC组比较,P<0.05:**:P<0.01
小结:
本检测结果表明,胎盘肽能显著降低小鼠全血中MDA的含量,中、高剂量能明显升高小鼠全血中GSH-PX活力,因此,可以判定胎盘肽具有延缓衰老作用。
技术关键点是肽的pH值,用酶解技术生产的肽粉最终pH值为6.0,而鲜牛奶的pH值一般为6.5~6.8。若直接将肽粉配制成溶液加入纯奶中,将会破坏鲜奶原有体系的平衡,结果是液态肽奶出现分层现象;若制成肽奶粉,冲溶后,液面上漂浮大量难溶的团状物,放置室温后,杯底形成白色沉淀。若将肽液pH值调整到与鲜奶相同的pH值,这种现象仍然存在。为了解决这一问题,对液态奶采用了很多措施,终于找到肽与奶的结合最佳的结合点,这个点就是pH值7.0,将肽液pH值调整到7.0,加入纯奶中,既不影响口味,也不影响整个混合体系的稳定性。
稳定剂C-9001是一种复合型纯牛奶稳定剂,包括单硬酸甘油酯,硬脂酸钾、卡拉胶、瓜尔胶、黄原胶、羧甲基纤维素钠、阿拉伯胶、聚葡萄糖。
本发明相比现有技术的奶具有如下优点:本发明产品对人体具有调节功能,促进细胞新陈代谢,平衡细胞营养,提高肌体免疫力,促进牛奶成分的吸收,对女士更能美容养顔。