CN1221568C - 检测和治疗获得性免疫缺陷综合症的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及免疫学和病毒学领域，特别涉及从哺乳类胸腺细胞获取的组合物，这些组合物可用于诊断、接种和治疗人类免疫缺损病毒(HIV)的感染及相关的疾病，如获得性免疫缺损综合症(AIDS)和爱滋病相关综合症(ARC)。本发明也公开了使用这些组合物进行诊断、接种和治疗的方法和装置。

Description

检测和治疗获得性免疫缺陷 综合症的组合物和方法
这是一项部分继续的专利申请，是于1995年六月七日提交的美国专利申请号为08/485,548的专利的继续，后者依次是1995年五月一日提交的美国专利申请号为08/431,883的专利申请的部分继续。
技术领域
这项发明涉及免疫学和病毒学的领域，特别与可从哺乳类动物胸腺细胞获得的组合物有关，这种组合物可用于作为人类免疫缺陷型病毒(HIV)的感染和相关疾病，如获得性免疫缺损综合症(爱滋病，AIDS)和爱滋病相关综合症(ARC)的诊断用品，疫苗，和治疗用品。这项发明也公开了使用这些组合物进行诊断、接种和治疗的方法和装置。
背景技术
骨髓产生最终会转变成免疫细胞的细胞。这些细胞变成淋巴细胞或吞噬细胞。淋巴细胞是小型白血细胞，它在实现免疫系统的功能中承担主要的责任。淋巴细胞的两大类是B细胞和T细胞。B细胞在骨髓中成熟(因此称之为B细胞)。T细胞来自于胸腺(因此称之为T细胞)，它们在胸腺增殖成熟成能够进行免疫反应的细胞。一旦离开骨髓和胸腺，B细胞和T细胞广泛地并连续地在整个身体中迁移。
T细胞有两种类型，调节型和细胞毒型T细胞，它们在两种主要的免疫防御途径中起作用。T细胞中首要的是“辅助/诱导”细胞。辅助T细胞与T4细胞具有一致的标志，是激活B细胞和其它T细胞以及自然杀伤细胞和巨噬细胞所必须的。细胞毒型T细胞是杀伤细胞，例如，它直接侵袭和除去已被病毒感染或被肿瘤转化了的细胞本身。
重要的吞噬细胞是单核细胞和巨噬细胞。单核细胞在血液中循环，然后迁移至组织发育成为巨噬细胞(“豪食者”)。巨噬细胞存在于全身的组织中，是多能的细胞，起多种作用。巨噬细胞可行使清洁工的作用，清除死细胞的胞体和其它的碎片。巨噬细胞是在所有呈递抗原给T细胞的细胞中首先消化和处理抗原，在启动免疫反应中所起的关键作用。作为分泌细胞，单核细胞和巨噬细胞是调节免疫反应所必需的。它们也携带有淋巴因子的受体，从而使它们被激活去找寻微生物和肿瘤细胞。
获得性免疫缺损综合症(爱滋病)是由一种病毒，人类免疫缺损病毒(HIV)引起的。HIV损坏辅助T细胞并且寄居在巨噬细胞和单核细胞中。爱滋病的特征是多种不寻常的感染，否则为稀有的癌症。HIV也损害脑组织和脊髓，导致渐进性痴呆。
当HIV感染了病人，它使自身与免疫细胞中的脱氧核糖核酸(DNA)结合，在从3个月到7年的不等长的阶段中，病人可不表现任何免疫缺损症状。有时不能产生达到可检测水平的抗爱滋病抗体。由于最初的HIV感染也许并不立刻导致可检测的临床病症或可检测的抗体水平，因此在这里“HIV感染”这一名称包括感染和任何由此导致的疾病，后者被称为“HIV相关疾病”。HIV相关疾病的例子是爱滋病和爱滋病相关综合症。在上述的潜伏期之后，HIV在感染的细胞中增殖，并且最终摧毁宿主细胞，释放出新合成的病毒。由于在这一过程中寄生的细胞被损坏，病人的免疫系统被损害，其易于感染具有正常免疫系统的人不易感染的少见的疾病。在人类，爱滋病病毒通常要增殖，并最终死于严重的免疫缺损。有趣的是，只有人类才能受到爱滋病的损害。当给非人类哺乳动物，如兔子、小鼠、大鼠或牛注射HIV，这些动物可暂时有一些T细胞的损害。然而，感染14至21天后，这些动物将达到一个抗体攻击作用，并且不会死于爱滋病。因此，没有爱滋病的动物模型。
目前，即没法治愈也没有有效治疗爱滋病的方法。在这一领域的研究正在进行。
同样也有持续的研究探索在爱滋病的早期准确诊断这一疾病的方法。目前，商业上可提供的诊断检验通常直接检测病人的抗HIV抗体。这种检验有一段从病人受到感染到病人产生抗病毒抗体的14到21天的检测盲区。因此，如果病人在这一育盲区的时间内进行检验，检验将产生错误的阴性结果。另一方面，一些这类的检验也会由于非特异性的抗体结合而产生错误的阳性结果。检测病毒感染的另一种方法是通过核酸杂交。
除非另有注明，下面的叙述是根据Stein，D.S.等，传感病杂志(Infeet.Diseases)，165：352(1992)。与HIV感染阶段最为相关的代替标志是CD4-或T辅助细胞的细胞计数。HIV-1的外壳糖蛋白，gp120，特异性地结合CD4受体。CD4受体在一种T淋巴细胞的亚型上最大浓度地表达，而在单核细胞和巨噬细胞中少量表达。表达CD4受体的细胞称为“辅助/诱导”亚型，反映了它们既能作为B细胞对带有人类的细胞抗原(HLA)II类受体的细胞表达的抗原反应时的辅助细胞，又能作为诱导细胞引起T细胞抑制免疫反应。有选择地去除CD4 +细胞会导致严重的免疫缺损，其和作为爱滋病标志的对机会感染的易感性相关。
HIV核心抗原P24能在出现HIV抗体之前被检测到。当HIV抗体的存在能通过扫描酶联免疫吸附测试时，P24抗原通常变得无法检测到，尽管它在发病阶段能偶尔地持续表达并且经常地在随后重新表达。在血浆和外周血单核细胞培养中发现当特异的抗体可检测到时，HIV-I的滴度会迅速下降，这说明宿主的免疫反应至少具有短暂的效果。免疫刺激的标志包括β2-微球蛋白。
当病人在血清转型之后，CD4 +细胞的下降是与爱滋病病情的发展相关的。β2微球蛋白的血清水平和血液中P24抗原的检测都是分别与病情发展的程度相关。采用检测β2微球蛋白和P24抗原结合CD4 +细胞计数比仅用CD4 +细胞计数能增加爱滋病发展的预后的准确性。
然而，对于血清阳转者而言，在随后的三年里，CD4 +细胞的百分数的持续下降是很少见的。在两次查诊之间，有38％的病例，其CD4 +细胞的百分数呈现稳定或下降水平，同时有12％的发生着下降并随后伴有CD4 +细胞丢失率的调整。总的来说，有62％的在随后的三年内发生过CD4 +细胞比例的下降。
在一项研究306个不知其血清转变时间的HIV感染血清阳性的同性恋男子中。CD4 +细胞计数小于500/ml和P24抗原检测都断定了在30月内发生的爱滋病。
CD8 +细胞计数的增加在一定程度上可断定随后的爱滋病的发生。
为了更好地确定临床终点，如爱滋病的存在和进展，与抗病毒治疗效果的替代指标的相关性，分析其他一些指标如新喋呤和β2 -微球蛋白已与CD4 +细胞计数P24抗原结合起来。
在对患有爱滋病和爱滋病相关综合症，而又耐受一种抗爱滋病药物，齐多夫定，并且存活了12周的病人的有限研究中(Jacobson，M.A.，BNJ，302：73(1991))，有如下发现。
对照三种因素(年龄、基本的爱滋病诊断，基础血清新喋呤浓度的对数值)后，8至12周的CD4 +细胞计数的对数值，而不是随时间的变化，能最准确地预测以后的存活。8至12周时β2微球蛋白浓度的下降能显著地预测存活，结合CD4 +细胞计数的对数值，则提供了最好诊断模式。P24抗原、血清新喋呤浓度的下降和Karnofsky表现状态(一种测定正常活动中功能的方法)都与治疗后的存活无明显的相关。
Stein，D.S.等人综合上述认为：在研究早期HIV感染的病人的药物或治疗的抗逆转录活性，CD4 +细胞计数和其它替代标志的变化可能更多地作为单独的终点。
发明内容
本发明的第一个方面提供了可用于诊断和治疗HIV感染，例如爱滋病和爱滋病相关综合症的组合物。
这项发明的另一方面提供了使用上述组合物检测HIV感染的方法。
这项发明的另一方面提供了使用上述组合物治疗HIV感染的方法。
这项发明的另一方面提供了从非人类的哺乳动物胸腺中制备上述组合物的方法。
这项发明的另一方面提供了用上述组合物进行体外检测HIV感染的装置。
更具体地说，本发明涉及以下内容：
(1)一种胸腺因子(TF)蛋白组合物，所述TF蛋白从哺乳动物胸腺细胞核的赖氨酸富集的组蛋白组分中提取得到，所述提取方式使所述蛋白：
(a)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
(b)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线。
(2).(1)所述的组合物，当其去甲基化时，包含一种用11％非还原的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定的35千道尔顿的蛋白质。
(3).(1)所述的组合物，当它甲基化时，包含一种用11％非还原的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定的28千道尔顿的蛋白质。
(4).(1)所述的组合物，其蛋白质的等电点为5.6。
(5).(4)所述的组合物，其pH值介于7.4和8.6之间。
(6).一种TF蛋白的组合物，用包括如下的步骤的方法制备：
a)从哺乳动物胸腺细胞核纯化一种赖氨酸富集的组蛋白组分；并且
b)将所述赖氨酸富集的组蛋白组分与一种阳离子交换色谱材料接触足够的时间以便TF蛋白与这种材料结合；
c)通过使色谱材料与一种有效的盐的水溶液接触以从阳离子色谱材料中洗脱TF蛋白，所述洗脱方式导致所述TF蛋白：
(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线。
(7).(6)所述的组合物，进一步包括收集能够沉淀健康哺乳动物的β、α1和α2巨球蛋白的洗脱物的步骤。
(8).(7)所述的组合物，其阳离子交换色谱材料是一种羧甲基柱色谱，洗涤羧甲基柱和洗脱TF蛋白是用线性梯度的氯化钠的0.05M乙酸钠的溶液，pH 6.8。
(9).(7)所述的组合物，其中的赖氨酸富集的组蛋白组分的获得是通过用胃蛋白酶处理以解聚细胞核，并从得到的解聚混合物中分离而进行的。
(10).一种检测人类受试者的感染的方法，包含的步骤有：
a)提供受试者的生物样品，并，
b)检测血清与TF蛋白的2-D凝胶沉淀模式，所述TF蛋白从哺乳动物胸腺细胞核的赖氨酸富集的组蛋白组分中提取得到，所述提取方式使所述蛋白：
(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线。
(11).(10)所述的方法，其中的TF在去甲基化状态为35千道尔顿，在甲基化状态为28千道尔顿，这是用11％非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定的，所述电泳中用到牛血清白蛋白、猪心延胡索酸酶、牛红细胞碳酸酐酶、牛乳β-乳球蛋白和牛乳α-乳清蛋白作为分子量标志物。
(12).(11)所述的方法，其中的生物标本选自：血清、血液或血浆。
(13).一种检测人类受试者HIV感染的方法，包括步骤：
a)提供受试者生物标本，所述的生物标本选自：血清、血浆或血液；
b)将生物标本与从非哺乳类胸腺细胞核中赖氨酸富集的组蛋白组分纯化得到的TF蛋白混合，和
c)确定TF和来自HIV感染的生物标本中的β、α1和α2和α2巨球蛋白在沉淀模式上的相关性；
其中所述TF蛋白经纯化后，
(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线。
(14).(13)所述的方法，其包括将生物标本和TF施加于凝胶电泳，以及确定TF和HIV感染的生物标本间的与凝胶上β、α1和α2巨球蛋白位置相关的沉淀模式。
(15).(14)所述的方法，其中的TF进一步甲基化并由11％非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳确定分子量为28千道尔顿，且等电点为5.6，所述电泳中用到牛血清白蛋白、猪心延胡索酸酶、牛红细胞碳酸酐酶、牛乳β-乳球蛋白和牛乳α-乳清蛋白作为分子量标志物。
(16).(15)所述的方法，其中的凝胶电泳是双向凝胶电泳。
(17).(16)所述的方法，其中在凝胶上紧邻从β、α1至α2巨球蛋白位置发出的连续的沉淀支线的缺失表明受试人受到HIV的感染。
(18).(17)所述的方法，其中在没发现连续的沉淀支线而发现有断裂的沉淀支线的情况下，当第一位受试人的沉淀支线比第二位受试人的沉淀线弱或分子量小时，则说明第一位受试人比第二位感染了HIV的受试人有更严重的HIV感染或HIV相关疾病。
(19).一种用于体外检测受试人HIV感染的装置，所述的装置包括一固体支持物，其中含有一可放置取自受试人的生物流体标本的区域，及放置TF蛋白组合物的区域；所述的TF是能从非人哺乳类胸腺细胞核的赖氨酸富集组分中提取，所述提取方式使所述TF蛋白(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；且(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；所述的固体支持物允许生物标本与TF接触并形成沉淀，且允许检测这种沉淀支线。
(20).(19)所述的装置，即所述的固体支持物是一种双向电泳凝胶，而所述的接触和沉淀是通过双向凝胶电泳来实现的，所述的生物标本是选自：血液、血清和血浆。
(21).一种用于体外检测受试人HIV感染的试剂盒，该试剂盒包括：
a)一种含有TF蛋白组合物的容器，该TF蛋白从非人哺乳类胸腺细胞核的赖氨酸富集组分中提取，所述提取方式使所述TF蛋白(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；且(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
b)一种适用于进行双向电泳的电泳凝胶的装置。
(22).一种纯化蛋白质TF的方法，包含的步骤有：
a)从哺乳类胸腺中提取细胞核；
b)从细胞核中获取赖氨酸富集部分；和
c)基于TF(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；且(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线的能力，从赖氨酸富集部分纯化TF。
(23).一种TF蛋白，它是从哺乳类胸腺细胞核的赖氨酸富集的组蛋白组分中提取，所述提取方式导致所述蛋白：
a)在双向电泳的凝胶上，于邻近来源于健康人血清的β、α1和α2巨球蛋白处，能形成单一的连续的沉淀支线；和
b)在双向电泳的凝胶上，在邻近来源于爱滋病病人血清的β、α1和α2巨球蛋白处，不能形成单一的连续的沉淀支线。
(24).(23)所述的TF蛋白，它可用胃蛋白酶降解的方法从哺乳类胸腺细胞核中提取。
(25).(1)的TF蛋白组合物或(23)的TF蛋白在制备用于治疗HIV感染的药物组合物中的用途。
(26).(25)所述的用途，其中的HIV感染选自爱滋病和爱滋病相关疾病；所述TF蛋白可用胃蛋白酶降解的方法从哺乳类胸腺细胞核中提取，而哺乳类胸腺细胞核是非人类的。
(27).(1)的TF蛋白组合物或(23)的TF蛋白在制备用于接种人以抗HIV感染的疫苗组合物中的用途。
附图说明
图1示胸腺因子(“TF”)制备的色谱。
图2图示双向凝胶中第一维的位置。
图3图示双向凝胶中第二维的位置。
图4至11是双向凝胶显示的HIV阳性或爱滋病人病例和正常健康人的血清样品的TF沉淀模式的照片。
图12图7的图示，分析时的距离测定。
图13双向电泳的凝胶的照片，显示HIV阴性人的血清样品中的TF沉淀模式。
图14双向电泳的凝胶照片，显示HIV阳性人的血清样品的TF沉淀模式。
图15是双向电泳凝胶的照片，血清样品取自样本3的测试病人，1995年，5月4日。
图16是双向电泳凝胶的照片，血清样品取自样本3的测试病人，1995年，5月11日。
图17是双向电泳凝胶照片，血清样品取自样本3的测试病人，1995年，5月18日。
图18是双向电泳凝胶照片，血清样品取自样本3的测试病人，1995年，5月24日。
图19是双向电泳凝胶照片，血清样品取自样本3的测试病人，1995年，5月31日。
具体实施方式
本发明提供了一种蛋白质，这里称之为胸腺因子(“TF”)，它可用于检测HIV爱滋病，HIV可引起另一种蛋白质的断裂，这里称之为aTF，它能够与TF结合。
可以推测HIV引起aTF的断裂，因此，一个未被感染的人将有完整的aTF，而一个被HIV感染的人将有aTF的片段。进一步推测在感染的早期，断裂的aTF的总量是少于感染的晚期。同样的，在感染的晚期，片断将更小。因此，检测aTF的片段可显示HIV的感染。aTF片段的数量和大小显示感染的阶段。aTF和aTF的片段可通过与TF的沉淀模式，特别是通过确定与β-，α1-，α2-巨球蛋白相应的沉淀位置来检测，如下述样本2中描述的凝胶电泳。
在双向电泳胶中发现，TF与未受HIV感染的人的血清相互作用形成与血清中β-、α-、α2巨球蛋白的连续的沉淀支线。当TF与取自HIV感染病人的血清相互作用时，沉淀支线沿着一个或多个巨球蛋白中断或消失。推测TF能沉淀aTF，aTF发现于健康人的β-、α1-、α2-巨球蛋白，与β-、α1-、α2-巨球蛋白相联并导致沉淀支线连续地沿着β-α1-α2巨球蛋白出现。在HIV感染人时，aTF片段化，因此引起中断的沉淀支线或在巨球蛋白处无沉淀支线。
因此，在人类生物学样本中发现TF能与aTF沉淀。生物等样本的例子是体液，如血液，血清和血浆。除了实施例2描述的双向凝脉电泳外，沉淀方式可用一些本领域的熟练技术人员已知的技术来检测，包括用于检测抗体和抗原的免疫沉淀的模式的方法。这类技术的例子由如下文章所描述。Oudin，J，科学院会议报告(C.R.Acad Sci)，222：115(1946)；Oudin，J.，医学研究的方法(Methods in Medical Reerrch).V335-78 Corcoran A.C.编，Year
Book出版公司。(1952)；Ouchterlony O，斯堪的纳维亚病理微生物学报(Acta.Path.Microbiol.Scond.)，25：186(1948)；Ouchterlony，O.，变态反应进展(Progrars in Allergy.)，V.1-78，Kallos P.&Wakeman B.H，Baseland Karger，New York(1958)；Oucherlony，O.，变态反应进展(Progrars in Allergy)，VI 30-154 Kallos P.&Wakeman，编，Basel and Karger，New York.(1962)；Mancini，G.等第11届生物流体学术讨论会记要(Prot.Biol.Fluids th 11 Colloqn，Bruges)，pp 370-3，Peters 12 ed.(1964)mancini，G，等免疫化学(Immunochemistry)，2：235(1965)。
TF也可用于治疗HIV的感染，如爱滋病和爱滋病相关综合症。TF可以甲基化或非甲基化状态存在。这里所用的“TF”，除非另有修饰，如“甲基化的TF”，包括所有的甲基化和非甲基化TF。
这一发明同样也提供获得TF的方法，尤其是从胸腺细胞获得。胸腺细胞最好取自非人类哺乳动物，尽管HIV感染过的非人哺乳动物有较高滴度的TF，但是否被HIV感染并不重要。非人哺乳动物包括有：猴子，猿，大猩猩，豚鼠，牛，兔子，狗，小鼠和大鼠。
甲基化和非甲基化的TF都能与aTF结合，因此可用于诊断HIV感染，特别是爱滋病。然而，至可对于人类的测试对象的血清来说，甲基化的TF比去甲基化的TF受到其它蛋白非特异性结合的影响较小。因此，甲基化的TF是较好的。非甲基化的TF可以适用文献中所述的方法，用化学的方法使之甲基化，如下述实施例1中所述的那样。甲基化的TF可用于HIV感染的治疗。特别是爱滋病。
TF最好从新鲜获取的胸腺中纯化，即新鲜取得4小时内。新鲜宰杀的哺乳类动物如猴子、猩猩、猿、豚鼠、牛、兔子、狗、小鼠和大鼠。用文献中的方法从胸腺细胞中分离细胞核。部分细胞核中赖氨酸丰富的组蛋白组分用美国专利号4,415,553的胃蛋白酶降解的方法获取。其它的降解方法如胰酶降解、木瓜蛋白酶降解，溴化氰降解在提取TF时不是有效的。分离的蛋白质富集组合物用离子交换层析的方法纯化。TF(甲基化和非甲基化)那部分蛋白质可用文献中已熟知的多种方法之一浓缩，包括高盐沉淀，如硫酸铵或通过超滤。如果TF是用沉淀的方法浓缩，将能较适于在随后重新溶于含有蛋白酶抑制剂的适当的生理平衡盐溶液。
TF用于抗HIV感染的治疗。
申请者发现非人哺乳动物，如牛被HIV感染但并不发展成爱滋病，其TF不受损伤。这一发现可推测TF在阻止HIV的感染，特别是爱滋病的发展具有作用。因此，对HIV感染的病人可用TF进行治疗。TF最好从被HIV感染但未发展成爱滋病的非人哺乳类动物取得。甲基化的非哺乳类来源的TF是最好的。进而，最好能在感染病人的治疗中激发免疫反应。最后，TF最好能与佐剂一同给予或者TF用化学的方法与免疫原载体连接，免疫原载体可引起病人的抗体反应。免疫原载体的例子是：钉形贝血蓝蛋白(keyholelimpet)和牛血清白蛋白。
这一发明的一个方面是TF用于接种预防，治疗或治愈HIV的感染，特别是爱滋病和爱滋病相关综合症。例如，TF通过以所需的纯度与佐剂或生理上可接受的载体(即应用的剂量和浓度的载体对受者来说是无毒的)。混和进行制备以给药。尽管TF最好与佐剂一同给药，但在最初即用TF接种的情况下，用TF作为加强剂时不需要佐剂。
对于这项发明作为疫苗的治疗给药来说，注射(肌肉注射或皮下注射)将是首选的途径。然而，静脉给药，通过导管或其它的外科管给药也是可行的。其它的途径包括片剂和类似剂型，液体制剂和冻干的或雾化的吸入剂。液体制剂也可用粉制剂重溶而成。
TF的给药方式也可以是通过微球体，脂质体及其它的微颗粒运输系统，或者通过将药物置于有血管的组织处持续释放的方式。
TF给药的剂量取决于给药方式的性质，即其结合活性和体内的血浆半衰期，剂型中TF的浓度，给药途径，剂量的作用位点和剂量率，病人的临床耐受性，包括使病人感到痛苦的病理状况及类似情况，也包括内科医生的技术。在一系列的连续的预防接种中，应用不同剂量，医生给予最初的接种后以相对较小剂量的TF加强刺激。
下面是一个TF制剂配方、剂量和给药方案的例子。病人通过肌肉注射或皮下注射给予8毫克的TF(估选配方是2毫升生理可接受溶液中含有每毫升4毫克的TF)或者病人每一公斤体重给予57微克的TF蛋白。每一疗程包括16次注射，每周连续两天注射两次共八周。病人病情的监测通过下面进一步描述的方法进行。最后一次注射后三个月，如果病人仍然受到病情的折磨，治疗程序将重复一次。治疗程序可以不断重复直至获得满意的结果，即中或延缓病情的发展，减轻疾病的痛苦或治愈。TF优选地与氢氧化铝这种佐剂配伍。最后的一毫升TF的配方含有：4毫克TF，0.016M.的磷酸铝(或0.5毫克Al3 +)，0.14M氯化钠，0.004M乙酸钠，0.004M氯化钾，pH值6.2。
另一种方案是，HIV感染的病人或未感染的受试者可在5个月后免疫接种，6个月至两年后再次接种，8个月至一年后再次接种增强病人的免疫记忆。见于Anderson等人，传染病杂志(J.Infeetious Diseases.)，160(6)：960-969(1989)总的说来，用TF在相对较长的时间间隔后不经常地免疫比经常性地免疫在引起最强的免疫反应和保护作用方面具有更好的效果。
TF能够以多种的方式给药并且给不同类型的受者。TF也可作为疫苗给予那些可能或不可能有接触HIV危险的人。另外，这种疫苗应给予血清阳性的人或以前接触过HIV的人。
TF可以与其它的抗原组成一种“鸡尾酒”接种物给药。TF也可作为一系列长期接种给药的之一，这种系列给药可包括接种同样或不同的HIV抗原或其它疫苗的制剂。
适当的治疗参数的选择，例如剂量，时间方案，佐剂选择以及类似的参数的选择是通过获取病人血清样和在整个一个疗程中抗体和/或T细胞滴度的测定而确定的。T细胞滴度可用常规的方法来测定。如T淋巴细胞可用E-玫瑰花结的形成来检测，如下述文献描述Bach，J.F，当代免疫学课题(Comp temporary Topic in Immunology)，Vol.2：胸腺依赖性，P.189.PlenumPress.New York，1973；Hoffman，T.&Kunkel，H.G.，and Kaplan，M.，E.等，两篇文章都出自细胞介导和肿瘤免疫中的体外方法(In Vitro Method in Cellmediated and Tumor Immunity)，B.R.Bloom&J.R.David编，Academic Press，New York(1976)。例如，T细胞政瑰花结形成的数量的分析可在TF治疗三周后，十周前进行。若形成的政瑰花结超过百分之六十五，则显示病人具有良好的细胞介导的免疫反应。进一步的检验的指标是病人aTF的形成，这可用下面进一步描述的双向电泳的方法检测。
另外，病人临床状况可作为预期效果的检测指标，如抗感染效应。如果未取得足够的抗感染效果，病人可用进一步的TF治疗激发而且治疗参数可以调整。如通过增加TF和/或佐剂的量，将TF与载体混和或与一种免疫原性蛋白结合，或改变给药途径以增强免疫反应。
TF可任意地与其它药剂一起给药用以治疗诸如爱滋病和爱滋病相关综合症类HIV感染。这类药物有：AZT，抗生素，免疫调节剂，如干扰素，抗炎药和抗肿瘤药。
检测HIV感染的诊断装置
这项发明的另一方面是提供可用于体外检测HIV感染的诊断装置。这种装置设计成可检测生物样品中TF和aTF之间的相互作用。更优选地，当生物样品是血液、血清或血浆的情况下，这种装置可检测TF与样品中β-，α1-和α2巨球蛋白相关的沉淀模式。因此，最好这种装置包括有一TF位点和一测试样品位点。因为如实施例2中描述的双向凝胶电泳是优选的，这种装置最优选地由一个分别带有TF和诸如血清样品的测试样品槽的凝胶组成。这种装置优选地包装成一个试剂盒，其中含有测试操作必要的试剂，诸如缓冲溶液和TF。优选地，该测试装置有自备的电源，如电池，以便能进行双向电泳。否则，优选地设计成能与外接电源连接。
已描述了申请人所称的发明，下面的实施例用以阐明这一发明，但并不可认为是对这项发明范围的限制。
                           实施例
实施例一：胸腺因子的提取和纯化
下面的实验显示了从宰杀后4小时的牛胸腺中提取TF并纯化和分析其特征。
用胃蛋白酶降解的方法从胸腺细胞中分离赖氨酸富集的组蛋白片段。
这一部分所用的所有的缓冲液和其它溶液已经过滤除菌。如果需要，n缓冲液的pH值可用0.2N氢氧化钠或0.1N的盐酸调节。所有的化学试剂，包括制备缓冲液和其它溶液的蒸馏水都是USP级的。
新鲜宰杀的牛在4小时内将胸腺组织及相连的结缔组织分离。组织用含有0.14M氯化钠和0.005M乙二胺四乙酸钠的溶液在4℃洗5分钟。弃去洗涤溶液，再用同样的条件洗第二遍。组织在弃去洗涤液后称重。组织在匀浆器(Brinkman Polytron匀浆器Brinkman仪器公司，Westbury，New York)中匀浆以去除细胞核。匀浆缓冲液含0.14M氯化钠，0.05M氯化钾，0.005M氯化镁，0.003M氯化钙，0.15M TRIS-HCl，pH 7.6，0.25M蔗糖。4℃，每分钟的转数和时间按匀浆器操作手册上的推荐值。组织与缓冲液的重量比为1∶4。
组织匀浆液用纱布块真空过滤。滤液在1000g 4℃条件下离心90分钟，弃去上清。沉淀用含0.008M氯化钠，0.003M氯化钙，0.003M氯化镁，0.08M磷酸二氢钠，0.002M TRIS-HCl，0.25M氯化钙，pH 5.2的缓冲液垂悬，沉淀与缓冲液的重量比为1∶4。垂悬液置于有磁力搅拌子的烧杯中混匀，200rpm，4℃，5分钟。匀浆液再在4℃，以3500g离心60分钟。弃去上清。沉淀垂悬于含0.014M氯化钠，0.001M氯化钙，0.002M氯化镁，0.001M乙二胺四乙酸钠，0.002M TRIS-HCl，0.25M蔗糖，pH 4.2的缓冲液中，沉淀与缓冲液的重量比为1∶4。垂悬液再置于有磁力搅拌子的烧杯中混匀，200rpm-4℃，5分钟。匀浆液再以8000g，4℃离心60分钟，弃上清。沉淀以预先制备的缓冲液，按重量比1∶4垂悬。缓冲液包括：1份溶液1，2分溶液2，17份缓冲液4(体积/体积)。溶液1为：10％的十二烷基磺酸钠的水/乙醇溶液(55∶45，体积/体积)。溶液2为：10％吐温80(溶于蒸馏水)。缓冲液4为：0.011M磷酸二氢钠和0.19M磷酸氢二钠，pH 7.4。
垂悬液置于有磁力搅拌子的烧杯中匀浆，以200g，4℃，15分钟。匀浆液再以12000g，4℃离心60分钟。弃上清。沉淀称重并垂悬于含0.05MNa3C6H5O7，0.05M乙酸钠，0.1N盐酸，pH 2.8的缓冲液，沉淀与缓冲液的重量比为1∶4。垂悬液置于组织匀浆器中以1000rpm，4℃匀浆1分钟。
将每毫克800-2500活力单位的胃蛋白酶(目录号P7000，SigmaChemical Company，St.Louis，Missouri)按1∶10,000稀释于蒸馏水。按胃蛋白酶(干粉)与匀浆后的沉淀重量比100∶1.8加胃蛋白酶于匀浆液中。混合物置于烧杯中搅拌。充氮气，45rpm，4℃下磁力搅拌12小时。搅拌后的混合物在12,000g，4℃下离心60分钟。弃沉淀，转移上清并用含饱和硫酸铵的溶液沉淀。一部分上清与一部分溶液混合，用磁力搅拌器搅拌600rmp，4℃，6小时。然后将混合物以12,000g，4℃离心60分钟。弃上清，沉淀以最少量的含0.1M氯化钠，0.1M乙酸钠，0.02M硫二甘醇的溶液溶解。得到的溶液用0.01M氯化钠，0.01M乙醇钠pH 6.4的溶液透析，直到硫酸铵从透析液中去除。
透析液中的蛋白质用Lowry法定量。溶液稀释至每毫升2毫克蛋白质。用0.1N氢氧化钠调溶液的pH值至7.2。另将溴乙酸溶于10毫升或更少的水中配成0.2M溴乙酸溶液，用0.1N的氢氧化钠调pH值至7.0。得到的溴乙酸溶液加入蛋白溶液中，混合物用磁力搅拌器充氮搅拌48小时。在反应过程中，混合溶液的pH值维持在7.2。反应结束时，重复硫酸铵沉淀的步骤到用Lowry法测定蛋白质的浓度。最终的溶液按需要稀释或浓缩，从200克牛胸腺细胞获得浓度为每毫升4毫克的蛋白质TF。
羧甲基柱色谱
一毫升上述含有4毫克蛋白的TF溶液加入用0.05M乙酸钠平衡的0.9×14cm的羧甲基柱。柱子用氯化钠溶于0.05M的乙酸钠，pH 6.8的线性梯度溶液洗涤并洗脱。为了形成梯度，两个同样大小和形状的烧瓶用虹吸管连接。一个烧瓶中装有50毫升0.05M的乙酸钠，pH 6.8的溶液，另一烧瓶中装有50毫升0.05M乙酸钠、0.5M氯化钠，pH 6.8的溶液。只有有0.5M氯化钠的烧瓶才与柱子相连。氯化钠的梯度从0到0.5M。两个烧瓶必须剧烈地搅拌以确保完全混匀。1毫升收集1份。洗脱液用流式分光光度计在280nm处的光吸收读数检测。洗脱组分45号被确定为含有蛋白质。(见图1)。TF组分以10,000rpm离心，发现有两条沉降带。收集第45号组分并用硫酸铵沉淀法浓缩。
所得的浓缩的组分进一步分析如下：
i)测定分子量
收集的TF组分的分子量通过银染的11％非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳确定。该电泳是使用Laemmli方法(Laemmli，U.K.Datrue，227：680(1970))和Sigma技术公告MWS-877L所提供的指南(SigmaChemical Company，St.Louis，Missouri)而进行的。快速银染(RSK-1，SigmaChemical Company)用于染蛋白质。所用的低分子量标准品(M 5630，SigmaChemical Company)包括5种蛋白质的混合物(总的蛋白质浓度是1mg/ml)：牛血清白蛋白(66,000分子量，MW)；猪心延胡索酸酶(48,500MW)；牛红细胞碳酸酐酶，(29,000MW)；牛乳β-乳球蛋白(18,400MW)；和牛乳α-乳清蛋白(14,200MW)。
凝胶上有两条带。较大的带是非甲基化TF，占TF组分的98％。较小的带是甲基化的TF，占TF组分余下的2％。
根据蛋白质的标准曲线，非甲基化的TF的分子量约为35千道尔顿(Kd)，甲基化的TF分子量约为28Kd。
TF混合物(包括甲基化和非甲基化的TF)用pH滴定测定其pH值在7.64和8.6之间。用免疫电聚焦的方法确定其等电点约为5.6±0.1。
TF组分中发现的蛋白质的甲基化。
TF可通过甲基化制备成甲基化的TF以供下例使用。甲基化的操作如下。
TF与足够量的溴乙酸混合成终浓度为0.2M的溴乙酸溶液。例如，2.78克溴乙酸溶于10毫升蒸馏水中并加入TF至100毫升，含TF 700毫克(7mg/ml)。混合物的pH值用0.1M的氢氧化钠调节并维持在7.24。混合物可孵育6至8小时。所获得的水相中的TF蛋白质可用文献中的技术用硫酸铵沉淀的方法浓缩。10毫升甲基化的TF组分加入等量的饱和硫酸铵溶液。混和物冷藏12小时，然后以20,000rpm离心60分钟。转移沉淀并溶于含0.1M氯化钠，0.1M柠檬酸钠，0.02M硫二甘醇的缓冲液中。混合物再以同样的缓冲液透析24小时，以去除硫酸铵。
                          实施例2
                        HIV感染的诊断
从实施例1中获得的甲基化的TF用于测定取自病人的血清样品是否感染HIV。实验操作如下。
本例中的人血清样品由加利弗尼亚洛杉矶爱滋病健康基金会提供。该基金会已用商品化的酶联免疫沉淀测试(ELISA)和检测病人抗HIV抗体的Western印迹法测试过该样品。首先用ELISA测试，如果ELISA显示HIV感染(HIV阳性)，Western印迹法用作确定。
使用本发明，上述样品用双向电泳检测。检测装置是用水浸没的小型凝胶电泳装置。(目录号E 0638，Sigma Chemical Company)。这套装置包括一可容纳800ml缓冲液的缓冲液槽。装置也装有一蠕动泵用于缓冲液的循环。该电源的输出范围为20至240V，0至100mA，包括稳流和稳压输出。
凝胶用1％琼脂糖(目录号A 4679，Sigma Chemical Company)制备。该凝胶缓冲液包含：0.0257M TRIS-HCl，0.009M十水合硼酸钠，0.067M甘氨酸，0.0034M三水乙酸钠，0.015M 2-巯基乙醇和0.015M硫二甘醇，pH 7.64。将14.25ml熔化的1％的琼脂糖置于电泳胶板上。凝固的凝胶有0.2cm厚，大小为7.5cm×7.5cm。凝胶用同样的缓冲液覆盖。用注射针在凝胶上刺了直径0.9mm可容纳5μl血清样品的槽。在走第一相电泳分离血清蛋白时，电压用9V/cm，电泳是27mA/cm2，14℃，通电90分钟，图2图示了第一向胶的排布，1指示血清样品槽。为进行第二相电泳，胶盘需转90°，并且在新的阴极端去掉一个0.9×45mm的槽，这个槽位于新的阴极端和血清样槽之间，垂直于阴极-阳极线。图3图示了第二向的排布，2指示槽，槽中加满100μl实施例1中的甲基化的TF。同样的电压和电流条件下，14℃电泳50分钟。在双向电泳时，电泳缓冲液以25ml/min的速率循环。最后一次电泳后，关闭电源，数秒钟后移开凝胶。然后将凝脉同时固定和染色，45分钟，所用溶液为：3份甲醇，1份乙醇，12％乙醇和0.1％的溴酚蓝(目录号B-8026，Sigma Chemical Company)。凝胶再浸没于蒸馏水中脱色3至4小时然后干燥。
为测定分子量，在同样的条件下做一个对照的双向电泳，采用银染的方法，用小分子量的标记物代替血清和例1中所述的TF。
双向电泳凝胶上血清蛋白质的位置如图4所显示。图4中，免疫球蛋白的斑点3紧邻含有病人血清样品的血清槽1。β聚球蛋白4也同样。距血清槽较远的是α2巨球蛋白5，α1聚球蛋白6和血清白蛋白7。
TF与血清中的aTF的沉淀通过显示的细的乳白线(沉淀支线)来检测。这些沉淀的方式显示测试对象是否有HIV感染。
图4中显示的沿着β和α1巨球蛋白直至α2巨球蛋白的连续的沉淀支线8表明测试对象未被HIV感染。不连续的(即中断的)沉β-，α1，和α2巨球蛋白的沉淀支线和/或不沿着任何或所有巨球蛋白的沉淀支线表明有HIV感染。
进一步，当测试对象的HIV感染(如爱滋病)加剧，沉淀会变少，沉淀支线也变得不清楚。
上述的发现提示，健康血清中aTF在HIV感染时被断裂，导致TF和断裂的αTF沉淀形成的中断的沉淀支线。αTF片段的分子量小于整个分子，因此在电泳场中迁移得更远。因而沉淀支线离TF槽更远。可以假设，但不必受这种假设的约束，当爱滋病，HIV相关疾病或HIV感染相当严重时，αTF将会断裂成更多的片段，因此，将会有较多的不连续的沉淀支线在距离含TF的沟较远的位置上。因而，沉淀的方式也能显示疾病发展的程度。
所以，显示在图上的凝胶可作如下解释：
图5显示断裂的沉淀支线9表明测试对象是HIV阳性。这个受试者的血清用ELISA和本发明的方法都为HIV阳性。在取血样时，受试者并未显示任何临床的爱滋病症状。
图6至9显示位置10，β巨球蛋白定位于此，健康受试者的沉淀支线紧邻于此，并且沉淀支线沿β-，α-、α2巨球蛋白的位置(图4)连续展开。相对的是，在图6至9受试样的沉淀支线11是中断的(即不是沿着β-、α-和α2巨球蛋白的位置连续的)并且低于位置10。受试样的沉淀支线的位置表明它们比健康受试样的沉淀支线有较小的分子量。断裂的片段和支线以及较小的分子量表明受试样是HIV阳性的。在本测试进行之前3至6个月，这些样品用ELISA检测为HIV-阳性。本检测所用的血清是与做ELISA检测时同时取的。在进行本检测时，受试者显示出爱滋病的临床症状。受试者病情的严重程度依次为图6(爱滋病最严重的病例)，图7，图8和图9(爱滋病最轻的病例)。临床观察的疾病的严重程度与图中显示的沉淀模式是一致的。首先，凝胶上的沉淀支线比预计的健康样品的沉淀支线在距离上较远的与较近相比表明aTF的片段较小因而爱滋病的病情更严重。例如，这一距离可以与第一条沉淀支线的相对距离来确定，即从预计的健康样品的沉淀支线算起，离血清样品孔垂直距离最近的沉淀支线。从健康样品的沉淀支线的位置算起，无论水平方向还是垂直方向，相对距离越远，则病情越严重。第二，如果上述的因素在两个爱滋病样品的凝胶中不能明显区分，则凝胶上显示沉淀支线颜色深而数量少的样品，病情较轻。沉淀支线数量少且沉淀作用强表明aTF较少断裂并且水平较高，因而爱滋病的病情较轻。
第一个分析的应用的例子是用于分析图6至10。为了使这些图的比较标准化。所有的图应有一固定的点，这里选血清样品孔1作为基线14。第一个沉淀支线是在垂直距离上15，最靠近基线14。由于健康样品的沉淀支线从β和α1巨球蛋白的附近延伸至α2巨球蛋白(见图4)，因而可以从β、α1或α2巨球蛋白中任一点来计数相对距离。在这里选择β巨球蛋白的位置10。这一系列的图中，沉淀支线到β巨球蛋白的位置10的垂直17和水平16距离都测定和比较。那些血清在凝胶上形成沉淀支线与β巨球蛋白的位置具有相对较大的垂直17和水平16距离的受试者比那些具较小距离的受试者病情更为严重。比较显示如下：图6(爱滋病最严重的病例)，图7，图8和图9(爱滋病病情最轻的病例)。这是第一种分析应用的实例。本领域的熟练技术人员会认识到基线可作为另一个对所有凝胶照片都是标准的位置，相对距离可从另一血清样品延伸的点上计算。只要所有用于比较的照片上的这些点是一致的并且可始终用于测定相对距离。其它只要不偏离第一种分析的主旨的改变都是可行的。
图10的重要意义在于用血清进行这次检测的同时，样品用ELISA检测为阴性。而本发明的检测表明样品显示有断裂的沉淀支线11，是HIV阳性的。血清检测二个月后，ELISA检测的结果HIV阳性。因此，这一图示确认了本发明的检测比常规的ELISA更适于早期诊断HIV的感染。
图11的重要意义在于血清样品取自临床已诊断为爱滋病且接受了健康供体的输血的病人。由健康供体血清引起的沉淀支线，表明如箭头12所指在较高分子量的位置，这倾向于显示最初来自健康供体的全部aTF的少量断裂片段，所以沉淀支线的位置接近于预计的健康样品的分子量，其与图10中沉淀支线显示的相对相似的位置更表明感染的早期阶段。由爱滋病患者血清导致的沉淀支线如箭头13所指，位于低分子量的位置，表明来自病人和HIV感染的断裂而致的小的aTF。
这里显示的双向凝胶电泳可作为一种体外装置的批量生产，用以检测生物流体样品以确定受试样品中HIV感染的存在。凝胶可进行干燥处理以易于包装和运输。包装好的凝胶可包括预先制好的用以放样品的图形孔和放TF的槽。TF可以置于一容器内分开出售或与凝胶一起作为一试剂盒出售。另外，试剂盒也可包括放电泳缓冲液的容器，染色剂和/或分子量标准。为了做对照，试剂盒更可包括来源于健康受试者的血清样品。
除了上述的检测，本发明还包括上述检测的改进方法和任何用aTF进行测定生物流体样品沉淀模式的方法，特别是与β、α1和α2巨球蛋白有关的。含有这一检测需要的试剂和材料的试剂盒也属于本发明。
                         实施例3
本实施例描述的是用本发明的TF组合物治疗爱滋病人(在本实施例3中也称为受试者)的研究。在研究过程中病人未接受任何其它治疗或服用药物。
病人为一名27岁的白种同性恋男子，治疗开始时体重为138磅。8个月前，病人的血清检测为HIV抗体阳性。其基于临床症状的诊断也为HIV阳性，如下表1中所显示的开始TF治疗前2周，即1995年4月22日所取病人血样的检验结果，指标包括：P24抗体计数，C4 +和CD8 +全部细胞的计数(细胞数/微升)，和淋巴细胞亚型所占的百分率。在接受TF治疗的前后，病人都未有爱滋病的症状。
治疗从1995年4月27日开始。病人每周接受两次肌肉注射共14mg的TF。一次在周二，另一次在周三。每次注射含7mg的TF(2ml，按3.5mg/mlTF的配方)。该TF是按上述实施例1所述方法纯化，无菌的TF配方含有：3.5mg/ml甲基化的TF，8.1mg/ml氯化钠，1.9mg/ml乙酸钠，2.6mg/ml三磷酸钠，2.1mg/ml氯化铝，pH 6.2。
                                                                    表1
检测指标                                                        取样日期
    95年4月12日     95年4月27日     95年5月4日     95年5月11日     95年5月18日 95年5月24日
红细胞计数     4.94     4.62     4.77     4.85     4.79 4.66
血红蛋白     15.3     16.6     14.5     15.5     14.8 14.7
血小板计数     233     221     236     206     186 208
白细胞计数     4.3     4.5     6.2     6     5.7 5.5
嗜中性细胞计数占白细胞计数的百分数     53     61     58     52     64 57
淋巴细胞百分计数     32     27     33     24     26 27
单核细胞百分计数     12     10     7     12     8 10
嗜曙红细胞百分计数     2     1     1     11     2 4
嗜碱性细胞     1     1     1     1     0 2
CD4％     33     32     25     31     31 33
CD4绝对数     468     397     531     446     459 498
CD8％     52     56     52 56
CD8绝对数     1108     806     979 848
辅助细胞/抑制细胞比率     0.47     0.6     0.6 0.6
全部血清蛋白     7.7     7.4     7.6     8     7.3 7.2
血清白蛋白     4.8；62％     3.8；51.3     3.9；513％     4.3；53.7％     3.9；53.3％ 3.6
α-1球蛋白     0.1；1.35％     0.2；2.63％     0.2；1.9％     0.1；1.7％ 0.1
α-2球蛋白     0.7；9.45％     0.7；9.21％     0.8；10.1％     0.5；7.3％ 0.7
β-球蛋白     2.9；38％     0.9；12.5％     0.9；11.84％     0.8；10.0％     0.8；11.4％ 0.9
γ-球蛋白     1.9；25.66％     1.9；25.00％     1.9；24.3％     1.9；26.3％ 1.9
P24核心抗原     阳性     阳性     未检测     阴性     阴性 阴性
表1显示了实验结果，日期为取病人血样的日期。测试是由Unilab公司(Tarzana，California)，用普遍接受的临床检验方法完成的。
测试指标如下：
“RBC”和“WBC”分别代表红细胞和白细胞的计数(×103/mm3)。
“HEMOGLOBIN”和“PLATELET COUNT”分别代表血红蛋白计数(以g/dl计)和血小板计数(×103mm3)。
“POLYS”代表嗜中性细胞计数占白细胞计数的百分率。
“LYMPHOCYTES”，“MONOCYTES”，“EOSINOPHILS”，和“BASOPHILS”的计数分别是占白细胞计数的百分率。上述所有的血液计数是用血液分析仪完成的。
“CD4％”和“CD8％”分别代表淋巴细胞亚型CD4 +和CD8 +的百分率。“CD4 ABS”和“CD8 ABS”分别代表CD4 +和CD8 +细胞的绝对细胞数(按细胞数/微升计)。CD4 +和CD8 +细胞计数用流式细胞仪完成。
“RATIO H/S”代表辅助细胞对抑制细胞的比率，由“CD4 ABS”数除以“CD8 ABS”数获得。
“TOTAL PROT”代表病人血样中全部血清蛋白的量，以g/dL计。用Olympus All 5000仪器(Olympus Co.Ltd，Tokyo，Japan)采样比色法获得。
“ALB”代表血清白蛋白；“ALPHA-1”代表alpha-1球蛋白；“ALPHA-2”代表alpha-2球蛋白；“BETA”代表beta球蛋白；“GAMMA”代表gamma球蛋白。这些血清蛋白通过血清蛋白电泳测定。对每一栏的对某一种血清蛋白的每一列而言，左边的数据是以g/dl计，右边的数据显示每一种血清球蛋白在全部的血清球蛋白中所占的百分比例。
“P/24”代表P24病毒核心抗原，用P24抗原的EIA检测试剂盒(AbbottLaboratories，Abbotl Park，Illinois)测定。
还有，在表1所示时间所取的血样用Organon Technica(Roleigh，NorthCarolina)的HIV ELISA试剂盒检测结果为HIV-1抗体阳性。从第一次注射TF到1995年5月24日，病人体重增加了7磅。
上述的检测结果显示了在开始TF治疗后，CD4 +细胞计数上升和CD8 +细胞计数下降的趋势。另外，在开始TF治疗后，P24抗原检测显示阳性结果，而在TF治疗之前和开始时受试样为阳性。因受试样中仍存在残留的抗体，所以HIV抗体分析仍为阳性。这些检测结果提示，TF治疗对于抵抗HIV感染和由HIV感染引起的疾病的发展是有效的。
除了由Unilab公司进行的上述检测外，申请人也对表1中显示时间取的血清样品进行了上述实施例2中所述的双向电泳HIV诊断检测。
图13和14是两个对照血清样品的双向电泳凝胶的照片：一个受试者的血清样品在Organon Technica进行的ELISA检测中HIV抗体阴性，另一个受试者的血清样品在同样的ELISA检测中呈阳性，从图13可见，沉淀支线9是一个沿着β、α1和α2巨球蛋白延伸的连续的支线，表明健康的HIV阴性的受试者。相对的是，图14中的沉淀支线9是不连续的，表明受试者是受HIV感染的。
图15至19显示的是分别在1995年5月11日，5月18日，5月24日和5月31日采集的受试者血清样品的双向电泳凝胶的结果照片。
如图15所示，在接受了上述的于1995年5月4日的TF治疗一周后，受试者血清样品HIV感染检测为阴性，如沿着β、α1和α2巨球蛋白的位置的连续的沉淀支线9所示的那样。
如图16所示，在治疗的第二周，即1995年5月11日，受试者的血清形成沿β、α1巨球蛋白位置沉淀支线9，这比图14中HIV阳性病人对照连续性好。
如图17和18所示，在治疗的第三和第四周，即1995年5月18日和24日。受试者血清形成不很连续的沉淀支线9。然而在第5周，1995年5月31日，又能发现沿β、α1和α2巨球蛋白位置的连续的沉淀支线9(如图19所示)，表明HIV阴性状况。双向电泳检测有助于提示本发明的TF治疗对抵抗HIV感染和/或病情的发展的有效性。
                            实施例4
本实施例提供有关6个病人用本发明的TF组合物进行治疗的进一步资料。这些病人在治疗过程中和治疗后6周内未接受任何其它的治疗和药物。下表也显示病人在治疗期结束后9个月(第1-5号病人)和2个月(第6号病人)的资料。
在连续的6周里，每个病人接受每周2次肌肉注射共14mg TF，一次注射在周二，另一次在周三。每次注射含7mg的TF(2ml，配方为3.5mg/ml的TF)。TF按上述实施例1中所述纯化，无菌的TF配方包含：3.5mg/ml甲基化TF，8.1mg/ml氯化钠，1.9mg/ml乙酸钠，2.6mg/ml三磷酸钠，2.1mg/ml氯化铝，pH 6.2。
表2至7显示对每个病人研究的结果。检测是由实验室用普遍接受的临床分析方法完成。表中“HIV_Ab，ELISA”表示HIV-1抗体用ELISA来测定。“CD4 abs”和“CD8.abs”分别表示CD4和CD8细胞的绝对细胞数(按细胞数/微升计)。“P24 Ag”表示P24病毒核心抗原用P24抗原免疫复合物分解(ICD)EIA测定。这种用于HIV-1抗原的EIA在分解免疫复合物后检测P24核心蛋白。“HIV-1 RNA，PCR”表示用聚合酶链式反应(PCR)扩增的方法定量检测每毫升血浆中HIV-1核糖核酸(RNA)的拷贝数。检测的病毒RNA拷贝数的增加/减少是与血浆中病毒的增加/减少有关。“HIV-1Plasma Culture”表示在血浆和外周血单核细胞培养中HIV-1的滴度。“HIV-1 Plasma Quantitative”表示HIV-1病毒感染率，以每毫升感染单位表示(Iu/ml)。“Poly Cells”表示白细胞的绝对计数(细胞数/微升)。α1巨球蛋白(以alpha-1 macro表示)，α-2巨球蛋白(以alpha-2 Macro表示)和γ免疫球蛋白(IgG)由血清蛋白电泳测定。数据(％)表明的是某一血清球蛋白在全部血清球蛋白中所占的百分率。表7中“IgA”和“IgM”分别表示免疫球蛋白A和M。表7中，IgG，IgA和IgM以mg/DL血清表示。“HLA-DR”代表位于染色体6上的人类主要组织相容性抗原复合物的一种产物。
表2-7中使用的其它的定义有：
inc.：健康人的正常水平
pos.：阳性
+阳性，阳性水平的上升以增加的“+”表示
neg.阴性
-未检测
nt未检测
x健康人正常水平的倍数，如“2x”表示正常水平的两倍。
下面是对每人病人情况的详细描述。
1号病人
下面的表2概括了对1号病人所做临床检测的结果。
治疗开始时，1号病人(-21岁的女性)已完全发展为爱滋病，伴有大脑的损伤和神智失常，CD4计数为36，预计寿命6至12个月。她的CD4计数从36(在治疗开始时)到108(在结束疗程后9个月)。在治疗第四周开始时，P24核心抗原为阴性，即低于5μg/ml。这一阴性的P24核心抗原的结果表明，在治疗的第四周，已无病毒的活动。当治疗4个月时，血浆HIV-1培养检测为阴性。阴性的血浆HIV培养结果表明分离自该病人血浆的T细胞当与未感染的对照血液混合，在体外进行检测时是无感染活力的，即阴性血浆培养。相反，当来自HIV-1感染的对照血液的T细胞与未感染的对照血液混合进行体外检测时产生阳性血浆培养。在TF治疗中和治疗后，IgG，α-1和α-2巨球蛋白的活性上升。治疗后4个月，病人不再有充分发展的爱滋病(即不会再有得病的机会)，尽管她仍然是HIV阳性。(即ELISA检测抗HIV抗体阳性)。
                                                                 表2
病例1               人的临床和实验室检验结果
检测指标   治疗前      治疗中的结果肌内注射2×/周                      治疗后的结果未进行其它治疗-月
  2   4     6 1   2   4     5     6    7     9
HIV-Ab，ELISACD4绝对数CD8绝对数P24抗原HIV-1RNA，PCR每ml拷贝数HIV-1血浆培养HIV-1定量培养白细胞×103α-1巨球蛋白α-2巨球蛋白γ免疫球蛋白δ/γ链HLA-DR   +36672pos.88200pos.-2.231.35％8.12％14.20％   ++23237pos.---2.81.24％7.91％23.60％2x2x   +++34775neg.---4.762.66％5.22％25.00％2x2x     +++49537neg.17300neg.-5.72.70％11.1％26.2％1.5x2x -------------   -------------   ++++531209neg.11900neg.-6.62.70％9.30％26.00％inc.inc.     ++++611162neg.---6.42.70％8.80％25.20％inc.inc.     -------------    -------------     ++++108983neg.6500neg.-6.91.9％8.80％22.00％inc.inc.
第2号病人
下面的表3概括了2号病人所做临床检测的结果。
治疗开始时，2号病人(30岁男子)是HIV阳性(即ELISA检测抗HIV抗体阳性)，但没有所有的爱滋病症状。他的CD4细胞计数从193(治疗前)上升至305(治疗结束后9个月)。他的P24核心抗原在TF治疗前、治疗中和治疗后保持阴性，表明低病毒活力。他的血浆培养在治疗4个月后转变为阴性，表明他的血浆在体外检测中无感录活性。IgG，α1和α2巨球蛋白水平的上升表明他体液免疫力上升。在治疗结束后4个月，病人仍未显示任何爱滋病的症征兆。
                                                                 表3
病例2             人的临床和实验室检验结果
检测指标   治疗前        治疗中的结果肌内注射2×/周                        治疗后的结果未进行其它治疗-月
    2     4     6 1   2     4     5 6     7     9
HIV-Ab，ELISACD4绝对数CD8绝对数P24抗原HIV-1RNA，PCR每ml拷贝数HIV-1血浆培养HIV-1定量培养白细胞×103α-1巨球蛋白α-2巨球蛋白γ免疫球蛋白δ/γ链HLA-DR   ++1931348neg.43200pos.-4.91.37％2.7％13.0％     +++50298neg.---3.81.4％4.2％13.5％1.5x1.2x     +++144755neg.---6.12.4％8.4％15.0％1.4x1.2x     +++173840neg.21100neg.-6.22.5％8.7％17.0％1.2x1.2x -------------   -------------     +++1931533neg.9000neg.-6.02.5％8.8％20.0％inc.inc.     ++++2881312neg.---6.92.3％8.3％18.0％inc.inc. -------------     -------------     ++++3051291neg.7000neg-6.12.1％8.5％18.8％inc.inc.
3号病人
下面的表4概括了3号病人进行临床检测的结果。
治疗开始时，3号病人(24岁女子)是HIV阳性(即ELISA检测抗HIV抗体阳性)，但并未有所有爱滋病症状。CD4细胞计数从404(治疗前)上升到636(治疗结束后9个月)。在整个研究过程中她的P24核心抗原检测为阴性。她的血浆培养在治疗后4个月时转为阳性。她的IgG，α1和α2巨球蛋白的上升表明病人体液免疫力的增强。治疗结束后9个月，病人未显示爱滋病征兆。
                                                                     表4
病例3             人的临床和实验室检验结果
检测指标   治疗前        治疗中的结果肌内注射2×/周                          治疗后的结果未进行其它治疗-月
    2     4     6 1     2     4     5   6     7     9
HIV-Ab，ELISACD4绝对数CD8绝对数P24抗原HIV-1RNA，PCR每ml拷贝数HIV-1血浆培养HIV-1定量培养白细胞×103γ免疫球蛋白α-1巨球蛋白α-2巨球蛋白δ/γ链HLA-DR   ++4041544neg.51210pos.-3.712.24％1.2％4.1％     ++2171054neg.---2.914.4％1.4％4.1％1.2x1.8x     +++5381587neg.---5.117.7％2.6％5.3％1.4x1.4x     +++375898neg.14240neg.-6.921.0％2.7％8.3％inc.1.2x -------------     -------------     +++4461496neg.-neg.-6.819.8％2.7％8.1％inc.inc.     +++5801381neg.---6.618.01％2.4％8.2％inc.inc.   -------------     -------------     +++6361191neg.8840neg.-6.718.0％2.4％8.2％inc.inc.
4号病人
下面的表5概括了4号病人所做临床检验的结果。
治疗前，病人(27岁男子)是HIV阳性(即ELISA检测抗HIV抗体阳性)，并且有成熟的爱滋病症状(3级伴随喉和肺上部的机会感染)。他的CD4细胞计数从389(治疗前)增加至599(治疗结束后9个月)。他的P24核心抗原在治疗4周后转阴并维持下去。他的HIV血浆感染力在治疗6周后转变成无感染力并维持下去。他的IgG，α1和α2巨球蛋白上升表明病人体液免疫力增强。治疗结束后12个月时，病人不表现任何爱滋病征兆。
                                                               表5
病例4             人的临床和实验室检验结果
检测指标   治疗前     治疗中的结果肌内注射2×/周                   治疗后的结果未进行其它治疗-月
    2     4   6 1 2     4     5     6   7     9
HIV-Ab，ELISACD4绝对数CD8绝对数P24抗原HIV-1RNA，PCR每ml拷贝数HIV-1血浆培养HIV-1定量培养白细胞×103α-1巨球蛋白α-2巨球蛋白γ免疫球蛋白δ/γ链HLA-DR   +389850pos.116000pos.-4.31.7％9.1％14.8％     ++322752pos.-pos.-3.81.8％9.0％12.6％2x2x     +++507839neg.---6.34.0％7.8％23.0％2x2x   +++394540neg.30000neg.-6.74.4％10.2％23.0％1.5x2x ------------- -------------     ++++393563neg.-neg.-6.63.3％10.2％19.8％inc.inc.     ++++573607neg.---6.32.4％9.8％21.0％inc.inc.     -------------   -------------     ++++599802neg.6600neg.-6.41.6％10.1％19.3％inc.inc.
5号病人
此病人是与上述实施例3中的为同一人。
下面的表6概括了5号病人所做的临床检验的结果。
治疗前，病人是HIV阳性(即ELISA检测抗HIV抗体为阳性)，有肺炎、呕吐和无便血的腹泻症状。但没有成熟的爱滋病症状。他的CD4细胞计数在治疗后保持不变。他的P24核心抗原在治疗4周时转阴并在治疗后7个月保持不变。HIV-1的RNA的PCR结果显示病毒的拷贝数维持在大约6000-7000拷贝/ml。他的血浆培养在治疗后无感染力。他的免疫系统使IgG，α1和α2巨球蛋白上升。他体重增加了10-12磅。治疗结束后10个月，他不显示任何爱滋病征兆。
                                                             表6
病例5           人的临床和实验室检验结果
检测指标   治疗前           治疗中的结果肌内注射2×/周                             治疗后的结果未进行其它治疗-月
    2     4     6     1     2     4     5     6     7     9
HIV-Ab，ELISACD4绝对数CD8绝对数P24抗原HIV-1RNAPCR，每ml拷贝数HIV-1血浆培养HIV-1定培养量白细胞×103α-1巨球蛋白α-2巨球蛋白γ免疫球蛋白δ/γ链HLA-DR   +528ntpos.70000pos.nt4.31.3％9.4％18.6％     +5311108pos.-pos.nt6.22.6％9.2％25.0％1.2x1.2x     ++502979neg.-pos.-5.71.9％7.3％26.3％1.6x1.8x     +++420803neg.-neg.-5.92.0％8.0％25.1％2.0x2.0x     ++++470810neg.7870neg.nt602.8％10.3％24.7％1.5x2.0x     ++++5961220neg.30920neg.nt5.92.6％----     ++++4341004neg.-neg.nt7.32.1％10.1％24.6％--     ++++4151150neg.-neg.nt6.52.4％11.8％23.9％--     ++++438926neg.-neg.nt5.62.4％11.8％22.8％inc.1.2x     ++++438909neg.6317neg.nt5.82.4％----     ++++669890neg.-neg.nt6.02.4％11.2％23.3％inc.inc.
6号病人
下面的表7概括了6号病人所做的临床检验的结果。
在疗程开始时，病人有成熟的爱滋病征状(介于3至4级，有诸如视网膜炎，细胞肥大病毒感染，喉、肺、气管和支气管的真菌感染、以及卧床不起等病症)。他的CD4细胞计数在2个月治疗后略有上升。他的P24核心抗原在4周治疗后转阴并维持下去。他的血浆培养在治疗前是阳性，治疗后转阴成无感染力。通常，病人外周血细胞培养为阳性伴有CD4计数低于100，病毒数量为5×105但对于6号病人，在治疗1个和2个月时外周血细胞中检测不到HIV。重要的是，病人的病毒数从5×105下降至3×104病毒RNA拷贝，这接近于病毒RNA下降1.5个对数值。6号病人从治疗开始后体重也增加了15磅。治疗结束的3个月，病人未患爱滋病。
                                                           表7
病例6                 人的临床和实验室检验结果
检测指标     治疗前     治疗期间肌肉注射2×/周                        治疗后的结果未进行其它治疗的时期
    2周     4周     6周   1月   2月   3月   4月   5月   6月   7月   9月
HIV-Ab，ELISA     +     +     +     +   +   +
CD4绝对数     70   79   90
CD8绝对数     624   700   685
P24抗原     +     +     neg     neg   neg   neg(＜5pg/ml)
HIV-1血浆培养     +     nt     nt     nt   neg   neg
HIV定量培养     nt     nt     nt     nt   neg   neg
HIV-1RNA，PCR     5×105     nt     nt     nt   30924   31795
lgG     nt     nt     nt     nt   1413   1323
lgA     nt     nt     nt     nt   768   802
lgM     nt     nt     nt     nt   210   244
nt＝未检测；neg＝阴性
结论：
本实施例显示当P24核心抗原变得低于测试方法的测检低限，5μg/ml时，HIV病毒的活性被中止。在HIV病人中也显示令人注目的CD4计数的上升。比之那些诸如AZT和其它的在美国可购买到的抗病毒产品，这种上升在时间上更引人注目。本实施例也显示用定量RNA聚合酶链式反应的方法检测到病人病毒数量的令人注目的下降。病人的血浆培养转阴。在体外体系中，病人的血浆是无感染力的。病人的T细胞是不能在体外感染未感染(正常)的病人的T细胞。上述可能也表明血浆中无病毒。也可能表明病人可能已受到免疫，因此不能够感染其它未感染的病人。
外周血单核细胞(PBMC)检测呈HIV阴性。治疗使成熟的爱滋病人变成其血浆和外周血细胞都检测不到HIV的病人。显然，病人的体液免疫和细胞免疫都参与了破坏和中和病毒。
本发明已参照具体的实施方案来描述。然而，本申请意图包括那些不超出附加的权利要求书的精神和范围的并由那些本领域的熟练技术人员作做出的改更和替代。

Claims (27)

1.一种胸腺因子(TF)蛋白组合物，所述TF蛋白从哺乳动物胸腺细胞核的赖氨酸富集的组蛋白组分中提取得到，所述提取方式使所述蛋白：
(a)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
(b)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线。
2.根据权利要求1所述的组合物，当其去甲基化时，包含一种用11％非还原的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定的35千道尔顿的蛋白质。
3.根据权利要求1所述的组合物，当它甲基化时，包含一种用11％非还原的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定的28千道尔顿的蛋白质。
4.根据权利要求1所述的组合物，其蛋白质的等电点为5.6。
5.根据权利要求4所述的组合物，其pH值介于7.4和8.6之间。
6.一种TF蛋白的组合物，用包括如下的步骤的方法制备：
a)从哺乳动物胸腺细胞核纯化一种赖氨酸富集的组蛋白组分；并且
b)将所述赖氨酸富集的组蛋白组分与一种阳离子交换色谱材料接触足够的时间以便TF蛋白与这种材料结合；
c)通过使色谱材料与一种有效的盐的水溶液接触以从阳离子色谱材料中洗脱TF蛋白，所述洗脱方式导致所述TF蛋白：
(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线。
7.根据权利要求6所述的组合物，进一步包括收集能够沉淀健康哺乳动物的β、α1和α2巨球蛋白的洗脱物的步骤。
8.根据权利要求7所述的组合物，其阳离子交换色谱材料是一种羧甲基柱色谱，洗涤羧甲基柱和洗脱TF蛋白是用线性梯度的氯化钠的0.05M乙酸钠的溶液，pH6.8。
9.根据权利要求7所述的组合物，其中的赖氨酸富集的组蛋白组分的获得是通过用胃蛋白酶处理以解聚细胞核，并从得到的解聚混合物中分离而进行的。
10.一种检测人类受试者的感染的方法，包含的步骤有：
a)提供受试者的生物样品，并，
b)检测血清与TF蛋白的2-D凝胶沉淀模式，所述TF蛋白从哺乳动物胸腺细胞核的赖氨酸富集的组蛋白组分中提取得到，所述提取方式使所述蛋白：
(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和β2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线。
11.根据权利要求10所述的方法，其中的TF在去甲基化状态为35千道尔顿，在甲基化状态为28千道尔顿，这是用11％非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定的，所述电泳中用到牛血清白蛋白、猪心延胡索酸酶、牛红细胞碳酸酐酶、牛乳β-乳球蛋白和牛乳α-乳清蛋白作为分子量标志物。
12.根据权利要求11所述的方法，其中的生物标本选自：血清、血液或血浆。
13.一种检测人类受试者HIV感染的方法，包括步骤：
a)提供受试者生物标本，所述的生物标本选自：血清、血浆或血液；
b)将生物标本与从非哺乳类胸腺细胞核中赖氨酸富集的组蛋白组分纯化得到的TF蛋白混合，和
c)确定TF和来自HIV感染的生物标本中的β、α1和α2和α2巨球蛋白在沉淀模式上的相关性；
其中所述TF蛋白经纯化后，
(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线。
14.根据权利要求13所述的方法，其包括将生物标本和TF施加于凝胶电泳，以及确定TF和HIV感染的生物标本间的与凝胶上β、α1和α2巨球蛋白位置相关的沉淀模式。
15.根据权利要求14所述的方法，其中的TF进一步甲基化并由11％非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳确定分子量为28千道尔顿，且等电点为5.6，所述电泳中用到牛血清白蛋白、猪心延胡索酸酶、牛红细胞碳酸酐酶、牛乳β-乳球蛋白和牛乳α-乳清蛋白作为分子量标志物。
16.根据权利要求15所述的方法，其中的凝胶电泳是双向凝胶电泳。
17.根据权利要求16所述的方法，其中在凝胶上紧邻从β、α1至α2巨球蛋白位置发出的连续的沉淀支线的缺失表明受试人受到HIV的感染。
18.根据权利要求17所述的方法，其中在没发现连续的沉淀支线而发现有断裂的沉淀支线的情况下，当第一位受试人的沉淀支线比第二位受试人的沉淀线弱或分子量小时，则说明第一位受试人比第二位感染了HIV的受试人有更严重的HIV感染或HIV相关疾病。
19.一种用于体外检测受试人HIV感染的装置，所述的装置包括一固体支持物，其中含有一可放置取自受试人的生物流体标本的区域，及放置TF蛋白组合物的区域；所述的TF是能从非人哺乳类胸腺细胞核的赖氨酸富集组分中提取，所述提取方式使所述TF蛋白(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；且(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、β1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；所述的固体支持物允许生物标本与TF接触并形成沉淀，且允许检测这种沉淀支线。
20.根据权利要求19所述的装置，即所述的固体支持物是一种双向电泳凝胶，而所述的接触和沉淀是通过双向凝胶电泳来实现的，所述的生物标本是选自：血液、血清和血浆。
21.一种用于体外检测受试人HIV感染的试剂盒，该试剂盒包括：
a)一种含有TF蛋白组合物的容器，该TF蛋白从非人哺乳类胸腺细胞核的赖氨酸富集组分中提取，所述提取方式使所述TF蛋白(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；且(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、β1和β2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；和
b)一种适用于进行双向电泳的电泳凝胶的装置。
22.一种纯化蛋白质TF的方法，包含的步骤有：
a)从哺乳类胸腺中提取细胞核；
b)从细胞核中获取赖氨酸富集部分；和
c)基于TF(i)能在双向电泳凝胶上，邻近健康人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线；且(ii)不能在双向电泳凝胶上，邻近AIDS人血清β、α1和α2巨球蛋白之处，沉淀出单个连续沉淀线的能力，从赖氨酸富集部分纯化TF。
23.一种TF蛋白，它是从哺乳类胸腺细胞核的赖氨酸富集的组蛋白组分中提取，所述提取方式导致所述蛋白：
a)在双向电泳的凝胶上，于邻近来源于健康人血清的β、α1和α2巨球蛋白处，能形成单一的连续的沉淀支线；和
b)在双向电泳的凝胶上，在邻近来源于爱滋病病人血清的β、α1和β2巨球蛋白处，不能形成单一的连续的沉淀支线。
24.根据权利要求23所述的TF蛋白，它可用胃蛋白酶降解的方法从哺乳类胸腺细胞核中提取。
25.权利要求1的TF蛋白组合物或权利要求23的TF蛋白在制备用于治疗HIV感染的药物组合物中的用途。
26.根据权利要求25所述的用途，其中的HIV感染选自爱滋病和爱滋病相关疾病；所述TF蛋白可用胃蛋白酶降解的方法从哺乳类胸腺细胞核中提取，而哺乳类胸腺细胞核是非人类的。
27.权利要求1的TF蛋白组合物或权利要求23的TF蛋白在制备用于接种人以抗HIV感染的疫苗组合物中的用途。
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