CN1220315A - 1－盖基－α－D－吡喃葡萄糖苷的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供不必使用昂贵的催化剂和采用多步骤工序、而以高收率制备薄荷醇配糖物1－基－α－D－吡喃葡萄糖苷的方法,即在糖类的存在下,使具有1－薄荷醇配糖化能力的微生物作用于1－薄荷醇。

Description

1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法
本发明涉及1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法。
薄荷醇以其所伴的特殊清凉感的薄荷香味而广泛地作药用、食用、牙粉、其它口含清凉剂等。然而，薄荷醇因其升华性而具有随时间的推移而薄荷香味减少等问题。而且，因为难溶于水，以往都是将固体颗粒直接混合或用乳化剂混悬后加以使用，或必须用乙醇等有机溶剂溶解后使用等方法。
为了克服这些问题，有人提出使用薄荷醇配糖物(特公昭51-105)，该薄荷醇配糖物具有在薄荷醇上加成低聚糖的结构，其水溶性高、本身并不显示薄荷醇特有的香味，但经各种糖酶或酸等水解，分离成薄荷醇和糖，则出现伴随薄荷醇特有的清凉感的薄荷香味(Agric.Biol.Chem.第43卷，第307页(1979)；《香料》，No.130,79,(1981))。
这样的薄荷醇配糖物是水溶性的，且无升华性，因此无须象薄荷醇那样密封保管，而且是极稳定的物质，任意放置也完全不发生变化。此外，通过适当地调节其分解速度，薄荷醇特有的清凉感和药理作用也可呈持续性的或短暂的。
这些薄荷醇配糖物在各种食物及口含清凉剂、香烟的香味改良剂方面，可用作清凉剂的持续、稳定化剂。实际上，特开昭62-161716号公报中揭示了在牙膏组合物上的应用，特开平6-329528号公报中揭示了在使清凉感持续长时间的化妆品上的应用，而特开平5-219929号公报中揭示了在香烟香味改良剂上的应用。
关于薄荷醇配糖物的制备方法，在特公昭51-105号公报上揭示了从葡萄糖和薄荷醇制备葡糖苷的有机合成方法，及用乙酰葡萄糖和溴乙酰葡萄糖的有机合成方法。在上述Agric.Biol.Chem.，第43卷，第101页(1979)和《香料》No.130,79(1981)中，报告了将基四乙酰-β-吡喃葡萄糖苷异构化为α型、合成1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷的方法以及各种薄荷醇配糖物的有机合成方法。
然而，这些方法使用昂贵的催化剂且需要多步反应工序等，因此造价高。而且，为了将所得的薄荷醇配糖物使用于食物，出于安全，必须完全除去有机合成试剂。
因此，本发明者在无须高价催化剂和多步反应工序且可得到安全性高的薄荷醇配糖物的制备方法上进行了刻意研究，发现以蔗糖和麦芽糖等为底物、以薄荷醇为糖接受体、用α-葡糖苷酶进行酶促反应的制备薄荷醇配糖物的方法(特开平9-224693)。该发明可以一步反应工序制备配糖物且无需对人体有害的有机合成试剂，是一个好的方法，但相对于所使用的薄荷醇，薄荷醇配糖物的收率在不添加表面活性剂的情况下约为5％(换算成摩尔)，在添加表面活性剂的情况下约为9％，存在收率低的问题，达不到实用化的目的。
因此，本发明的目的是提供无须使用高价催化剂和多步反应工序而以高收率制备薄荷醇配糖物1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷的方法。
本发明者进而反复进行锐意研究的结果，发现黄单孢菌属、Stenotrophomonas属和节细菌属细菌具有薄荷醇配糖化能力，利用这些具有配糖化能力的微生物，与使用α-葡糖苷酶的制备方法相比，可制备极多量的薄荷醇配糖物，从而完成了本发明。利用微生物的高收率制备薄荷醇配糖物的方法是迄今未知的全新的制备方法。
薄荷醇有4种立体异构体及各有3种旋光异构体，共计存在12种异构体，但在本发明中，薄荷醇指具有香味的一种薄荷醇，而薄荷醇配糖物指1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷。
所使用的微生物是具有使薄荷醇配糖化能力的微生物，并无特别限定。在麦芽糖、蔗糖、糊精、淀粉等溶液中加入薄荷醇，在其中加入微生物菌体进行反应后，用TLC、HPLC等检出配糖物的有无，可容易地查出具有使薄荷醇配糖化能力的微生物。这样的具有使薄荷醇配糖化能力的微生物可列举如黄单孢菌属、Stenotrophomonas属和节细菌属细菌。这些属的细菌可从财团法人发酵研究所、财团法人物理化学研究所等细菌分让机构容易地得到。此外，本发明者从土壤中分离、鉴定的微生物甘蓝黑腐病黄单孢菌(Xanthomonas campestris)WU9701(FERM BP-6578)、Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579)也具有高的配糖化能力，这些微生物也可使用。这些菌株在国立生命科学和人体技术研究所以上述编号保藏。特别是黄单孢菌属，是应用于食品制造的增粘多糖黄原胶的生产菌，从安全的观点来看，使用该属菌较好。
所用微生物的形态，除了活菌体、冻干菌体、经紫外线等照射失去增殖能力的死菌体、菌体破碎液之外，也可使用将该微生物的活菌体固定在褐藻酸、聚丙烯酰胺、玻璃珠、壳聚糖等载体上的固定化菌体、菌体破碎液以及从菌体破碎液制成的粗制酶、将粗制酶固定于载体上的固定化酶。
薄荷醇配糖物合成中，反应系统可以是在加了薄荷醇的糖类溶液中加入菌体或粗制酶进行配糖化反应的方法，也可用通常用于微生物的培养基培养菌体，在此培养基中加入薄荷醇等糖类，使微生物的培养和薄荷醇的配糖化同时进行。而且，也可在薄荷醇和微生物的混合液中少量多次添加糖类，使配糖化连续进行。
本发明的薄荷醇配糖物合成中使用的糖类可适当地使用麦芽糖、糊精、可溶性淀粉、蔗糖等，作为构成糖，可适当地使用含葡萄糖的物质。
本发明的反应中，可将薄荷醇溶解在适当溶剂中供反应用。此处所用的有机溶剂可用己烷、乙酸乙酯、乙醚、油脂等与水不相溶的溶剂，丙酮、乙醇等与水相混合的溶剂，或它们的组合。必要时，可添加表面活性剂进行反应。
反应生成物基葡糖苷可从反应系统中分离精制，但也可将反应液不经处理或浓缩干燥后使用。
用本发明的方法制备的1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷及含此化合物的混合物可广泛地用作安全稳定的薄荷醇制剂，或在口中缓慢分解产生薄荷醇特有清凉感的食品材料、化妆材料、香烟等嗜好品的香料、防虫材料、防菌材料等。
所得的反应生成物1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷作为糖接受体，在具有糖转移活性的酶的作用下，在基葡糖苷的葡萄糖残基上再加若干个糖，提高水溶性和酸、酶、热分解性，这是采用现有的糖转移酶技术容易达到的。例如，由本发明所得的1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷作为糖接受体，在糊精或淀粉等存在下，在环糊精葡糖转移酶(CGTase)作用下，可制得在1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷的葡萄糖残基上再有若干个葡萄糖α-1,4结合的化合物。
下面列举实施例对本发明作更详细的说明，但这并不限制本发明技术的范围。
实施例1用各种微生物制备薄荷醇的配糖物
在含有1M麦芽糖的10mM柠檬酸-磷酸缓冲液(pH7.0)10ml中，加入1-薄荷醇50mg，在其中加入各种微生物的冻干菌体50mg，以180rpm振荡及30℃温度下反应24小时。反应结束后，用薄层色谱法(TLC)检测薄荷醇配糖物。其结果见表1。
                 表1   薄荷醇配糖物的检测结果
                 微生物     薄荷醇配糖物
甘蓝黑腐病黄单孢菌IFO 13551     检出
甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)     检出
大豆斑疹病黄单孢菌IFO 13553     检出
大豆斑疹病黄单孢菌IFO 13554     检出
豌豆疫病黄单孢菌IFO 13556     检出
稻白叶枯病黄单孢菌IFO 3312     检出
稻白叶枯病黄单孢菌IFO 3995     检出
Xanthomonas arboricola IFO 3780     检出
Xanthomonas arboricola IFO 13557     检出
南叶斑病黄单孢菌IFO 13552     检出
甘桔溃疡病黄单孢菌IFO 3781     检出
甘桔溃疡病黄单孢菌IFO 3829     检出
甘桔溃疡病黄单孢菌IFO 12213     检出
Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579)     检出
Stenotrophomonas maltophilia JCM 1984     检出
Stenotrophomonas maltophilia JCM 1987     检出
Arthrobacter viscosus IFO 13497     检出
绿脓杆菌IFO 14160     未检出
Pseudomonas potida IFO 14164     未检出
发状根病农杆菌IFO 15202     未检出
辐射状农杆菌IFO 13532     未检出
Flateuria aurantia IFO 3245     未检出
Aoreobasidium pullolans IFO 7757     未测出
产气肠杆菌JCM 1235     未检出
黑曲霉ATCC 20611     未检出
黑曲霉var.usamii JCM 2262     未检出
土曲霉IFO 6123     未检出
黄青霉IFO 4626     未检出
平滑青霉IFO 7919     未检出
普通青霉IFO 5763     未检出
木霉IFO 31329     未检出
小孢根霉var oligosporus IFO 8631     未检出
啤酒酵母JCM 7255     检出
Kluyveromyces fragills(Sigma制  冷冻干燥菌体)     未检出
产蛋白假丝酵母(Sigma制  冷冻干燥菌体)     未检出
表中的简称：IFO为财团法人发醇研究所，JCM为财团法人物理化学研究所，ATCC为美国典型培养物保藏中心。
如上面的表1所示，黄单孢菌属、Stenotrophomonas属、节细菌属和醇母属微生物具有薄荷醇配糖化能力。
薄层色谱法(TLC)采用硅胶板，用苯/甲醇(3∶1)展开后，喷以硫酸茴香醛，于160℃加热1分钟，进行薄荷醇配糖物的检出。在本条件下，在Rf值为0.6-0.7附近检出薄荷醇配糖物。
实施例2反应生成物的确认
为了进行反应生成物的确认，用以下方法制备配糖物。将甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)用表2的培养基于30℃培养24小时，离心分离(10000g、30分钟)，分离成培养上清液和菌体。所得的菌体用10mM柠檬酸-磷酸缓冲液(pH7.0)洗涤后，冷冻干燥，制成冻干菌体。
虽然使用了表2所示的培养基，但其它适用培养基也可以。
 表2 培养基的组成
薄荷醇         50g
酵母提取物     2g
胨             10g
MgSO4-7H2O   1g
蒸馏水         1L
        pH7.0
在含有1M麦芽糖的10mM柠檬酸-磷酸缓冲液(pH7.0)10ml中，加入1-薄荷醇50mg，在其中加入上述冻干菌体50mg，以180rpm振荡及30℃温度下反应24小时。用乙酸乙酯萃取反应液。蒸去萃取液的溶剂后，溶解于正丁醇/2-丙醇/水(10∶5∶4)混合溶剂中，上硅胶柱(ヮコ-ゲル C200、φ25×400mm)、用同样的溶剂洗脱，分取洗脱液。用TLC确认洗脱成分，选择被确认为反应生成物的部分，蒸去溶剂后，再用己烷洗涤、干燥。所得的精制物(31.3mg)在TLC上显示单一的点后，供13C-NMR分析。分析结果与用Agric.Biol.Chem.，第43卷，第307页(1979年)记载的方法有机合成、精制所得的标准品1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷的分析结果一致。其光谱见图1。
实施例3反应精制物的定量
对于实施例1中在TLC上被确认较大生成物点的7株菌株甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)，甘蓝黑腐病黄单孢菌IFO 13551，大豆斑疹病黄单孢菌IFO 13554，豌豆疫病黄单孢菌IFO 13556,Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579),Stenotrophomonas maltophilia JCM 1984及Stenotrophomonasmaltophilia JCM 1987，按Biosci.Biotech.Biochem.,60(11)，第1914-1915页(1996年)记载的方法，用HPLC对反应液中生成的薄荷醇配糖物的量进行定量。定量结果，生成了15.9-35.8mg薄荷醇配糖物，收率按摩尔换算约为16-35％。此定量结果见表3。
表3薄荷醇配糖物的生成量
    微生物 薄荷醇配糖物生成量(mg)
甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)     35.8
甘蓝黑腐病黄单孢菌IFO 13551     29.4
大豆斑疹病黄单孢菌IFO 13554     27.2
豌豆疫病黄单孢菌IFO 13556     27.6
Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579)     26.6
Stenotrophomonas maltophilia JCM 1984     15.9
Stenotrophomonas maltophilia JCM 1987     31.2
实施例4反应pH对薄荷醇配糖物生成量的影响
为了研究反应pH对薄荷醇配糖物生成量的影响，在含1M麦芽糖的所定pH的10mM缓冲液(磷酸-柠檬酸缓冲液或硼酸-NaOH缓冲液)10ml中，加入1-薄荷醇50mg，在其中加入与实施例2同样配制的甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)冻干菌体50mg，在180rpm往复振荡下、于30℃反应24小时。反应结束后，用HPLC对合成的薄荷醇配糖物进行定量。
结果如图2所示，在pH4-10时可见薄荷醇配糖物的生成，在pH8时为最大。这时，得到49.3mg薄荷醇配糖物，收率以摩尔换算，为44％。
实施例5
用Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579)冻干菌体50mg代替甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)冻干菌体50mg，与实施例4同样操作，对生成的薄荷醇配糖物进行定量。
结果如图3所示，在pH4-10时可见薄荷醇配糖物的生成，在pH9时为最大。这时，得到45mg薄荷醇配糖物，收率以摩尔换算，为44％。
实施例6反应温度对薄荷醇配糖物生成量的影响
为了研究反应温度对薄荷醇配糖物生成量的影响，在含1M麦芽糖的pH8的10mM硼酸-NaOH缓冲液10ml中，加入1-薄荷醇50mg或100mg，在其中加入与实施例2同样配制的甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)冻干菌体50mg，在180rpm往复振荡下、于所定的温度下反应24小时。反应结束后，用HPLC对薄荷醇配糖物的生成量进行定量。
结果如图4所示，在反应温度为25-50℃时，可见薄荷醇配糖物的生成，在加入1-薄荷醇50mg的情况下，35℃以上收率为100％，所加入的薄荷醇全部配糖化。在加入100mg的情况下，在反应温度为40℃时，配糖物的生成量最大，这时生成154.7mg配糖物，收率以摩尔换算，为75.8％。
实施例7
用Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579)冻干菌体50mg代替甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)冻干菌体50mg，用pH7的柠檬酸-磷酸缓冲液代替pH8的硼酸-NaOH缓冲液，与实施例6同样操作，对生成的薄荷醇配糖物进行定量。
结果如图5所示，在反应温度为20-50℃时可见薄荷醇配糖物的生成，35-40℃为最适。在反应温度为40℃时，生成50mg薄荷醇配糖物，收率以摩尔换算，为49％。
实施例8麦芽糖浓度对薄荷醇配糖物生成量的影响
为了研究作为糖供体的麦芽糖的浓度对薄荷醇配糖物生成量的影响，在含所定浓度麦芽糖的pH8的10mM硼酸-NaOH缓冲液10ml中，加入1-薄荷醇100mg，在其中加入与实施例2同样配制的甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERMBP-6578)冻干菌体50mg，在180rpm往复振荡下、于40℃反应24小时。反应结束后，用HPLC对薄荷醇配糖物的生成量进行定量。
结果如图6所示，在麦芽糖的浓度为0.1-1.8M时，可见薄荷醇配糖物的生成，麦芽糖浓度在0.4-1.2M时，得到140mg以上配糖物，麦芽糖浓度在1M时配糖物生成量最大，得到154mg配糖(收率以摩尔换算，约为75％)。
实施例9
用Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579)冻干菌体50mg代替甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)冻干菌体50mg，用pH7的柠檬酸-磷酸缓冲液，与实施例8同样操作，对生成的薄荷醇配糖物进行定量。
结果如图7所示，在麦芽糖的浓度为0.2-1.0M时，可见薄荷醇配糖物的生成，在此范围内，薄荷醇配糖物的收率完全无变化，得到29-34mg薄荷醇配糖物。
实施例10薄荷醇加入量对薄荷醇配糖物生成量的影响
为了研究薄荷醇加入量对薄荷醇配糖物生成量的影响，在含1M麦芽糖的pH8的10mM硼酸-NaOH缓冲液10ml中，加入所定量的1-薄荷醇，在其中加入与实施例2同样配制的甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)冻干菌体50mg，在180rpm往复振荡下、于40℃反应24小时。反应结束后，用HPLC对薄荷醇配糖物的生成量进行定量。
结果如图8所示，在薄荷醇加入量为50mg-1563mg时，可见薄荷醇配糖物的生成，在加入薄荷醇100mg时，生成的薄荷醇配糖物量最大，在此以上即使添加薄荷醇也未见配糖物的生成量增加。所得配糖物的收率在薄荷醇添加量为50mg时达到100％，在添加该量以上的薄荷醇时收率缓缓降低。
实施例11反应时间对薄荷醇配糖物生成量的影响
为了研究反应时间对薄荷醇配糖物生成量的影响，在含1M麦芽糖的pH8的10mM硼酸-NaOH缓冲液10ml中，加入100mg 1-薄荷醇，在其中加入与实施例2同样配制的甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)冻干菌体50mg，在180rpm往复振荡下、于40℃反应5-72小时。用HPLC对薄荷醇配糖物的经时生成量进行定量。
结果如图9所示，在反应开始后0.5小时，可见薄荷醇配糖物的生成，其量经时性增加，在反应开始后48小时全部薄荷醇配糖化。
比较例用α-葡糖苷酶制备薄荷醇配糖物
在含有1M麦芽糖的10mM柠檬酸-磷酸缓冲液(pH7.0)10ml中，加入薄荷醇50mg，在其中加入来自酵母的α-葡糖苷酶(Biozyme Labotatory Limited制，英国)20单位或100单位，于30℃反应24小时，制成薄荷醇配糖物，α-葡糖苷酶的效价以37℃、1分钟内使1微摩尔麦芽糖水解的酶量作为1个单位。反应结束后，用HPLC对生成的配糖物进行定量，结果见表4。
表4薄荷醇配糖物的定量结果
    α-葡糖苷酶     薄荷醇配糖物的生成量(摩尔换算收率*)
    20单位     4.8mg(4.7％)
    100单位     1.9mg(1.9％)
*摩尔换算收率=生成的薄荷醇配糖物摩尔数/使用的薄荷醇摩尔数
在加入20单位α-葡糖苷酶的情况下，生成4.8mg薄荷醇配糖物，其收率非常低，按摩尔换算为4.7％。而且，将加入的酶量提高5倍，为100单位，配糖物的生成量反而降低。
实施例12用从微生物菌体制成的粗制酶制备配糖物
将甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)在表2的培养基中于30℃培养24小时，用离心分离法(4℃、10000g、30分钟)从30ml培养液中分离得到菌体。所得的菌体用10mM柠檬酸-磷酸缓冲液(pH7.0)洗涤两次后，悬浮于10mM柠檬酸-磷酸缓冲液10ml中，以1分钟的间隔进行10次超声波处理(20kHz、200W、2分钟)，将细胞破碎。所得的菌体破碎液通过离心分离(4℃、15000g、30分钟)分离成上清液和残渣，以上清液作为粗制酶用于配糖物的制备。在粗制酶液(约10ml)中加入1M麦芽糖和薄荷醇50mg，于40℃反应24小时，用HPLC将生成的配糖物定量。
薄荷醇配糖物的生成量为89.3mg，摩尔换算收率为88.2％。其结果见表5。
表5用粗制酶制备薄荷醇配糖物
            薄荷醇配糖物
    生成量(mg)     收率(摩尔换算％)
    89.3     88.2
由此看来，本发明中使用从具有薄荷醇配糖化能力的微生物所得的酶也可以高收率制备配糖物。
该酶的酶学分类和底物特异性等酶学特性不明确，但与比较例中所用的来自酵母的α-葡糖苷酶相比，配糖物的收率极高，因此认定是与来自酵母的α-葡糖苷酶不同的酶。
实施例13薄荷醇配糖物的合成中糖供体种类的影响
与实施例12同样地制备甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)粗制酶。在此菌体的粗制酶液10ml中加入各种糖1g和薄荷醇50mg，于30℃反应24小时，测定生成的薄荷醇配糖物的量。结果如表6所示，在使用麦芽糖、可溶性淀粉、蔗糖的情况下，生成了配糖物，但在使用葡萄糖的情况下未生成配糖物。
表6糖的种类与薄荷醇配糖物的生成量
           薄荷醇配糖物
  生成量(mg)     收率(摩尔换算％)     相对比(％)
麦芽糖     69.7     68.3     100.0
可溶性淀粉     8.4     8.2     12.0
蔗糖     1.4     1.4     2.0
葡萄糖     0.0     0.0     0.0
*相对比系将使用麦芽糖的反应中的生成量作为100％。实施例14 口香糖的配制按照如下处方，用实施例6中所得的薄荷醇配糖物按常规方法试制口香糖。
胶基质        20.0％
砂糖          55.0
麦芽糖        14.0
葡萄糖        10.4
香料          0.1
薄荷醇配糖物  0.5实施例15  小点心的制备按照如下处方，用实施例5中所得的薄荷醇配糖物，按常规方法试制小点心。
砂糖            75.0％
乳糖            19.5
精制水          4.3
香料            0.5
脂肪酸甘油酯    0.2
薄荷醇配糖物    0.5
实施例16  冰淇淋的制备
按照如下处方，用实施例6中所得的薄荷醇配糖物按常规方法试制冰淇淋。
奶油(脂肪部分45％)      25.0％
牛奶(脂肪部分3.7％)     35.0
脱脂奶粉                24.3
砂糖                    10.2
玉米糖浆                4.7
稳定剂                  0.3
薄荷醇配糖物            0.5
实施例17 巧克力的制备
按照如下处方，用实施例6中所得的薄荷醇配糖物按常规方法试制巧克力。
可可粒            15.0％
全脂奶粉          25.0
椰子脂            18.0
砂糖              41.0
乳化剂            0.3
香料              0.1
薄荷醇配糖物      0.6
实施例18  清凉饮料的配制
按照如下处方，用实施例6中所得的薄荷醇配糖物按常规方法试制清凉饮料。
果糖葡萄糖液    5.0％
砂糖            4.0
酸味料          1.2
香料            0.3
精制水          89.0
薄荷醇配糖物    0.5实施例19  牙膏的配制按照如下处方，用实施例6中所得的薄荷醇配糖物按常规方法试制牙膏。
十二烷基硫酸钠    1.0％
氢氧化铝          35.0
硅酸酐            15.0
糖精钠            0.2
山梨醇            0.5
香料              0.7
精制水            47.1
薄荷醇配糖物      0.5实施例20  漱口水的配制按照如下处方，用实施例6中所得的薄荷醇配糖物按常规方法试制漱口水。
十二烷基硫酸钠    1.5％
甘油              10.0
乙醇              5.0
糖精钠            0.2
香料              0.5
精制水            82.3
薄荷醇配糖物      0.5实施例21  化妆水的配制按照如下处方，用实施例6中所得的薄荷醇配糖物按常规方法试制化妆水。
乙醇           30.0％
1-薄荷醇       0.1
乳化剂         0.5
精制水         68.9
薄荷醇配糖物   0.5
按照本发明的方法，不必象以往的有机合成法那样使用昂贵的催化剂和采用多步骤工序，而且与采用α-葡糖苷酶的制备方法相比，为使以极高的收率制备1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷成为可能而提供廉价的薄荷醇配糖物。
图1为实施例中生成的1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷的13C-NMR谱。
图2显示用甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)干燥菌体时反应pH与1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷生成量的关系。
图3显示用Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579)干燥菌体时反应pH与1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷生成量的关系。
图4显示用甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)干燥菌体时反应温度与1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷生成量的关系。
图5显示用Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579)干燥菌体时反应温度与1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷生成量的关系。
图6显示用甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)干燥菌体时麦芽糖浓度与1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷生成量的关系。
图7显示用Stenotrophomonas maltophilia D1(FERM BP-6579)干燥菌体时麦芽糖浓度与1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷生成量的关系。
图8显示用甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)干燥菌体时薄荷醇加入量与1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷生成量的关系。
图9显示用甘蓝黑腐病黄单孢菌WU9701(FERM BP-6578)干燥菌体时反应时间与1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷生成量的关系。

Claims (2)

1．1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：在糖类存在下，使具有1-薄荷醇配糖化能力的微生物作用于1-薄荷醇。
2．如权利要求1所述的1-基-α-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，其中使用的微生物是选自黄单孢菌属、Stenotrophomonas属和节细菌属的细菌。
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