CN1211489C - 一种从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法 - Google Patents
一种从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1211489C CN1211489C CN 02130725 CN02130725A CN1211489C CN 1211489 C CN1211489 C CN 1211489C CN 02130725 CN02130725 CN 02130725 CN 02130725 A CN02130725 A CN 02130725A CN 1211489 C CN1211489 C CN 1211489C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pha
- extracting solution
- cell
- extraction
- alcohol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- -1 fatty acid ester Chemical class 0.000 title claims description 19
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title description 9
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 title 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 title 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 57
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 39
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 30
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 13
- 239000005014 poly(hydroxyalkanoate) Substances 0.000 claims description 112
- 229920000903 polyhydroxyalkanoate Polymers 0.000 claims description 112
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 35
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 30
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 27
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 24
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 24
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 17
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 17
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 11
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 11
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 11
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 claims description 7
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 claims description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 4
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 4
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical class CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical class CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 abstract description 2
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 abstract 1
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 description 15
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 15
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 7
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 3
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 3
- 241000589614 Pseudomonas stutzeri Species 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 3
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 3
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229920000704 biodegradable plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
Abstract
本发明公开了一种从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法，以便能够有效地从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯。本发明的技术方案是用五和/或四碳醇中的一种或几种自形成聚羟基脂肪酸酯的湿/干细胞菌体破壁提取聚羟基脂肪酸酯。为了提高湿细胞中PHA的提取效率，提取前对湿细胞用既亲水又亲油的双亲试剂进行预处理。本发明的方法使提取PHA的工艺流程得到了简化，减少了生产设备投资，能耗大大降低，缩短了生产时间，加强了生产过程中的安全性，产率提高、成本下降，更加适合工业化大规模生产的要求。
Description
技术领域
本发明属于生物工程下游后处理技术领域，涉及从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法。
背景技术
聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoate，简称PHA)是由细菌合成的一种胞内聚酯，在细菌胞内以内含物形式呈颗粒状存在。PHA所具备的热成塑性，力学性能与目前大量应用的以石油化工原料得到的塑料相似，但PHA具有生物可降解性，被认为是一种“新型生物可降解材料”而倍受重视。PHA存在于细菌体内，成分复杂，提取极其困难。已有的下游后处理提取工艺，或者利用有机溶剂(如氯仿，二氯甲烷等)进行抽提，或者采用高温加热结合使用多种价格昂贵的酶类分解细胞中的非聚羟基脂肪酸酯成分以达到提纯的目的，生产工艺复杂，设备投资高，原料成本昂贵，导致聚羟基脂肪酸酯产品价格过高，使这种大有前途的生物可降解塑料难以推广使用。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够有效地从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法。
对于湿细胞来说，本发明的方法包括以下步骤：
1)细菌发酵生产PHA；
2)先后加入3-20g/L CaCl2，10-65g/L Na2HPO4·12H2O和10-200ppm的聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞；
3)收集絮凝后的湿细胞；
4)将丙酮或乙醇与湿细胞在0℃至丙酮或乙醇沸点之间的温度条件下进行搅拌，其中湿细胞与丙酮或乙醇的重量体积比g/ml为1∶0.1-2；
5)使用五和/或四碳醇中的一种或几种破坏细胞壁并提取PHA，菌体细胞与五和/或四碳醇的重量体积比g/ml为1∶1.5-10；所述破壁和提取是在85℃至溶剂的沸点之间条件下同时进行的，或者破壁是在0-85℃之间；提取是在85℃至溶剂的沸点之间条件下进行的，破壁提取时间为0.5-10小时；
6)保持PHA不析出的温度分离除去细胞残渣，保留溶有PHA的有机溶剂上清液；
7)从上清提取液中冷却析出PHA或用溶剂沉淀出PHA；
8)将上清提取液中析出或沉淀出的PHA分离出来；
9)用乙醇和/或丙醇洗涤PHA；
10)干燥得到PHA产品。
对于干细胞来说，本发明的方法，包括以下步骤：
1)细菌发酵生产PHA；
2)先后加入3-20g/L CaCl2，10-65g/L Na2HPO4·12H2O和10-200ppm的聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞；
3)收集絮凝后的湿细胞；
4)干燥湿细胞；
5)使用五和/或四碳醇中的一种或几种破坏细胞壁并提取PHA，菌体细胞与五和/或四碳醇的重量体积比g/ml为1∶1.5-10；所述破壁和提取是在85℃至溶剂的沸点之间条件下同时进行的，或者破壁是在0-85℃之间；提取是在85℃至溶剂的沸点之间条件下进行的，破壁提取时间为0.5-10小时；
6)保持PHA不析出的温度分离除去细胞残渣，保留溶有PHA的有机溶剂上清液；
7)从上清提取液中冷却析出PHA或用溶剂沉淀出PHA；
8)将上清提取液中析出或沉淀出的PHA分离出来；
9)用乙醇和/或丙醇洗涤PHA；
10)干燥得到PHA产品。
在本发明的工艺中，五或四碳醇具体可以是异戊醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、异丁醇、1-丁醇或2-丁醇。为了达到分离细胞残渣的目的，加入五和/或四碳醇提取液并搅拌提取后，控制温度使PHA不析出，静置至分层，收取上清液分离得到产品。所述用以将PHA从上清提取液中沉淀出来的溶剂有甲醇、乙醇、戊烷、己烷、庚烷和/或辛烷；所述收集絮凝后湿细胞及从上清提取液中分离出PHA的方法均为离心或过滤。
破壁和提取可以同时进行，也可以先在较低的温度下破壁，然后在较高的温度下提取。破壁提取时间为0.5-10小时，可以根据具体情况分配。
提取前对湿细胞用既亲水又亲油的丙酮或乙醇进行预处理，可以提高湿细胞中PHA的提取效率。预处理试剂的作用有两点：其一是预处理试剂能将细胞的结合水置换出来，将湿细胞周围的水环境转变成有机相环境，以利于五和/或四碳醇破壁提取溶剂能接触到细胞，破壁提取PHA；其二是预处理试剂本身就有脱脂的功能，对细胞壁和细胞膜有一定的破坏作用。预处理后，五和/或四碳醇破壁提取溶剂破壁提取PHA更加容易。
五或四碳醇不易挥发，有醇香味，在较高温度下能溶解PHA，较低温度下则使PHA析出，集破坏细胞壁功能和提取PHA功能于一身，使破壁和提取能同时进行。同时在预处理试剂的帮助下，五和/或四碳醇能直接作用于湿细胞。本发明的发明人巧妙地运用了这些有机溶剂的特性，使提取PHA的工艺流程得到了简化，减少了生产设备投资，能耗大大降低，缩短了生产时间，加强了生产过程中的安全性，更加适合工业化大规模生产的要求。所用试剂价格均较低廉，产品纯度及产率均较高，使产品的价格更加易于接受。
具体实施方式
实施例1：使用异戊醇从Aeromonas hydrophila的湿细胞菌体中提取聚羟基脂肪酸酯(丙酮预处理)
菌种：Aeromonas hydrophila
破壁提取溶剂：异戊醇
破壁提取温度：90℃
破壁提取时间：4h
预处理试剂：丙酮
具体步骤如下：
使用细菌Aeromonas hydrophila发酵，培养过程同时以
月桂酸和大豆油和/或者花生油为碳源来提高PHA的产率
↓
发酵结束，发酵液60℃加热搅拌，然后静置30min，
待残余碳源充分浮于发酵液表面后除去或者重复使用
(残余碳源即是月桂酸和大豆油和/或者花生油)
↓
量取发酵液总体积
↓
使用5g/L CaCl2，16g/L Na2HPO4·12H2O
和100ppm聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞
↓
离心收集湿细胞
↓
取湿细胞30g
↓
加入20ml丙酮(bp：55-56℃)常温搅拌预处理5分钟
↓
50℃搅拌预处理5分钟
↓
加入异戊醇150ml，50℃搅拌30分钟，破壁
(50℃防止丙酮挥发，搅拌使异戊醇与细胞充分接触)
↓
90℃充分搅拌，提取3.5小时
↓
保温，静置30min分层
↓
将上清提取液(异戊醇)全部倒出
↓
上清提取液充分冷却析出PHA
↓
离心收集PHA
↓
乙醇洗涤PHA
↓
干燥得到PHA产品
结果：
PHA产品纯度为93％；提取率为81％，其中提取率＝(提取分离得到的PHA质量/细胞中PHA质量)×100％。
实施例2：使用异戊醇从Aeromonas hydrophila的湿细胞菌体中提取聚羟基脂肪酸酯(乙醇预处理)
菌种：Aeromonas hydrophila
破壁提取溶剂：异戊醇
破壁提取温度：130℃
破壁提取时间：1h
预处理试剂：乙醇
具体步骤如下：
使用菌株Aeromonas hydrophila发酵
↓
发酵结束，发酵液60℃加热搅拌，然后静置30min，
待残余碳源充分浮于发酵液表面后除去或者重复使用
↓
量取发酵液总体积
↓
使用7g/L CaCl2，23g/L Na2HPO4·12H2O
和80ppm聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞
↓
离心收集湿细胞
↓
取湿细胞30g
↓
加入50ml乙醇(bp：78℃)常温搅拌预处理5分钟
↓
50℃搅拌预处理5分钟
↓
加入异戊醇200ml，50℃搅拌15分钟，破壁
↓
130℃充分搅拌，提取35分钟
↓
保温，静置30min分层
↓
将上清提取液“(异戊醇)”全部倒出
↓
上清提取液充分冷却析出PHA
↓
离心收集PHA
↓
乙醇洗涤PHA
↓
干燥得到PHA产品
结果：
PHA产品纯度为95％；提取率为74％。
实施例3：使用1-戊醇(正戊醇)从Aeromonas hydrophila的湿细胞菌体中提取聚羟基脂肪酸酯(丙酮预处理)
菌种：Aeromonas hydrophila
破壁提取溶剂：正戊醇
破壁提取温度：86℃
破壁提取时间：9h
预处理试剂：丙酮
具体步骤如下：
使用菌株Aeromonas hydrophila发酵
↓
发酵结束，发酵液60℃加热搅拌，然后静置30min，
待残余碳源充分浮于发酵液表面后除去或者重复使用
↓
量取发酵液总体积
↓
使用10g/L CaCl2，32g/L Na2HPO4·12H2O
和150ppm聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞
↓
离心收集湿细胞
↓
取湿细胞30g
↓
加入30ml丙酮(bp：55-56℃)常温搅拌预处理5分钟
↓
加入正戊醇250ml，86℃充分搅拌，破壁提取9小时
↓
保温，静置30min分层
↓
将上清提取液(正戊醇)全部倒出
↓
上清提取液充分冷却析出PHA
↓
离心收集PHA
↓
乙醇洗涤PHA
↓
干燥得到PHA产品
结果：
PHA产品纯度为80％；提取率为64.5％。
实施例4：使用异戊醇和异丁醇的混合物从Aeromonas hydrophila的湿细胞菌体中提取聚羟基脂肪酸酯(丙酮预处理)
菌种：Aeromonas hydrophila
破壁提取溶剂：异戊醇和异丁醇的混合物
破壁提取温度：95℃
破壁提取时间：6h
预处理试剂：丙酮
具体步骤如下：
使用菌株Aeromonas hydrophila发酵
↓
发酵结束，发酵液60℃加热搅拌，然后静置30min，
待残余碳源充分浮于发酵液表面后除去或者重复使用
↓
量取发酵液总体积
↓
使用6g/L CaCl2，19g/L Na2HPO4·12H2O
和120ppm聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞
↓
离心收集湿细胞
↓
取湿细胞30g
↓
加入15ml丙酮(bp：55-56℃)常温搅拌预处理5分钟
↓
入异戊醇和异丁醇的混合物180ml(异戊醇50ml，异丁醇130ml)，
45℃搅拌10分钟，95℃充分搅拌，破壁提取6小时
↓
保温，静置30min分层
↓
将上清提取液(异戊醇和异丁醇)全部倒出
↓
上清提取液充分冷却析出PHA
↓
离心收集PHA
↓
乙醇洗涤PHA
↓
干燥得到PHA产品
结果：
PHA产品纯度为83％；提取率为78.5％。
实施例5：使用异戊醇、2-戊醇和3-戊醇的混合物从Pseudomonas stutzeri的湿细胞菌体中提取聚羟基脂肪酸酯(丙酮预处理)
菌种：Pseudomonas stutzeri
破壁提取溶剂：异戊醇、2-戊醇和3-戊醇的混合物
破壁提取温度：90℃
破壁提取时间：3h
预处理试剂：丙酮
具体步骤如下：
使用细菌Pseudomonas stutzeri发酵生产PHA
↓
发酵结束，量取发酵液总体积
↓
使用5g/L CaCl2，16g/L Na2HPO4·12H2O
和100ppm聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞
↓
离心收集湿细胞
↓
取用湿细胞30g
↓
加入20ml丙酮(bp：55-56℃)常温搅拌预处理10分钟
↓
加入异戊醇、2-戊醇和3-戊醇的混合物共130ml
(三种有机溶剂体积份数相等)，常温搅拌5分钟
↓
90℃充分搅拌，破壁提取3小时
↓
保温，静置30min分层
↓
将上清提取液(异戊醇)全部倒出
↓
上清提取液充分冷却析出PHA
↓
离心收集PHA
↓
乙醇洗涤PHA
↓
干燥得到PHA产品
结果：
PHA产品纯度为73.5％；提取率为55.6％。
实施例6、使用异戊醇从Aeromonas hydrophila的湿细胞菌体中提取聚羟基脂肪酸酯(无预处理)
菌种：Aeromonas hydrophila
破壁提取溶剂：异戊醇
破壁提取温度：90℃
破壁提取时间：2h
具体步骤如下：
使用细菌Aeromonas hydrophila发酵
↓
发酵结束，发酵液60℃加热搅拌，然后静置30min，
待残余碳源充分浮于发酵液表面后除去或者重复使用
↓
量取发酵液总体积
↓
使用8g/L CaCl2，26g/L Na2HPO4·12H2O
和100ppm聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞
↓
离心收集湿细胞
↓
取湿细胞30g
↓
加入异戊醇100ml，90℃充分搅拌，破壁提取2小时
↓
保温，静置30min分层
↓
将上清提取液(异戊醇)全部倒出
↓
上清提取液充分冷却析出PHA
↓
离心收集PHA
↓
乙醇洗涤PHA
↓
干燥得到PHA产品
结果：PHA产品纯度为92％；提取率为68％。
实施例7、使用异戊醇从Aeromonas hydrophila的干细胞菌体中提取聚羟基脂肪酸酯
菌种：Aeromonas hydrophila
破壁提取溶剂：异戊醇
破壁提取温度：90℃
破壁提取时间：3h
具体步骤如下：
使用细菌Aeromonas hydrophila发酵，培养过程同时以
月桂酸和大豆油和/或者花生油为碳源来提高PHA的产率
↓
发酵结束，发酵液60℃加热搅拌，然后静置30min，
待残余碳源充分浮于发酵液表面后除去或者重复使用
↓
量取发酵液总体积
↓
使用9g/L CaCl2，29g/L Na2HPO4·12H2O
和90ppm聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞
↓
离心收集湿细胞
↓
干燥湿细胞
↓
取用干细胞10g
↓
加入异戊醇60ml，90℃，破壁提取3小时
↓
保温，静置30min分层
↓
将上清提取液(异戊醇)全部倒出
↓
上清提取液充分冷却析出PHA
↓
离心收集PHA
↓
乙醇洗涤PHA
↓
干燥得到PHA产品
结果：
PHA产品纯度为96％；提取率为91％。
Claims (8)
1、一种从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法，包括以下步骤：
1)细菌发酵生产PHA；
2)先后加入3-20g/L CaCl2，10-65g/L Na2HPO4·12H2O和10-200ppm的聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞；
3)收集絮凝后的湿细胞；
4)将丙酮或乙醇与湿细胞在0℃至丙酮或乙醇沸点之间的温度条件下进行搅拌，其中湿细胞与丙酮或乙醇的重量体积比g/ml为1∶0.1-2；
5)使用五和/或四碳醇中的一种或几种破坏细胞壁并提取PHA，菌体细胞与五和/或四碳醇的重量体积比g/ml为1∶1.5-10；所述破壁和提取是在85℃至溶剂的沸点之间条件下同时进行的，或者破壁是在0-85℃之间；提取是在85℃至溶剂的沸点之间条件下进行的，破壁提取时间为0.5-10小时；
6)保持PHA不析出的温度分离除去细胞残渣，保留溶有PHA的有机溶剂上清液；
7)从上清提取液中冷却析出PHA或用溶剂沉淀出PHA；
8)将上清提取液中析出或沉淀出的PHA分离出来；
9)用乙醇和/或丙醇洗涤PHA；
10)干燥得到PHA产品。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述五或四碳醇为异戊醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、异丁醇、1-丁醇或2-丁醇。
3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：加入五和/或四碳醇提取液并搅拌提取后，控制温度使PHA不析出，静置至分层，收取上清液分离得到产品。
4、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述用以将PHA从上清提取液中沉淀出来的溶剂有甲醇、乙醇、戊烷、己烷、庚烷和/或辛烷；所述收集絮凝后湿细胞及从上清提取液中分离出PHA的方法均为离心或过滤。
5、一种从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法，包括以下步骤：
1)细菌发酵生产PHA；
2)先后加入3-20g/L CaCl2，10-65g/L Na2HPO4·12H2O和10-200ppm的聚丙烯酰胺沉淀发酵液中的细胞；
3)收集絮凝后的湿细胞；
4)干燥湿细胞；
5)使用五和/或四碳醇中的一种或几种破坏细胞壁并提取PHA，菌体细胞与五和/或四碳醇的重量体积比g/ml为1∶1.5-10；所述破壁和提取是在85℃至溶剂的沸点之间条件下同时进行的，或者破壁是在0-85℃之间；提取是在85℃至溶剂的沸点之间条件下进行的，破壁提取时间为0.5-10小时；
6)保持PHA不析出的温度分离除去细胞残渣，保留溶有PHA的有机溶剂上清液；
7)从上清提取液中冷却析出PHA或用溶剂沉淀出PHA；
8)将上清提取液中析出或沉淀出的PHA分离出来；
9)用乙醇和/或丙醇洗涤PHA；
10)干燥得到PHA产品。
6、根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述五或四碳醇为异戊醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、异丁醇、1-丁醇或2-丁醇。
7、根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：加入五和/或四碳醇提取液并搅拌提取后，控制温度使PHA不析出，静置至分层，收取上清液分离得到产品。
8、根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述用以将PHA从上清提取液中沉淀出来的溶剂有甲醇、乙醇、戊烷、己烷、庚烷和/或辛烷；所述收集絮凝后湿细胞及从上清提取液中分离出PHA的方法均为离心或过滤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02130725 CN1211489C (zh) | 2002-09-18 | 2002-09-18 | 一种从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02130725 CN1211489C (zh) | 2002-09-18 | 2002-09-18 | 一种从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1483824A CN1483824A (zh) | 2004-03-24 |
| CN1211489C true CN1211489C (zh) | 2005-07-20 |
Family
ID=34144587
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 02130725 Expired - Fee Related CN1211489C (zh) | 2002-09-18 | 2002-09-18 | 一种从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1211489C (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11155483B1 (en) | 2020-06-30 | 2021-10-26 | Nutrition & Health Research Institute, COFCO Corporation | Method for efficiently producing PHA |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BRPI0501844B1 (pt) * | 2005-03-04 | 2019-12-24 | Phb Ind S/A | processo para extração e recuperação de polihidroxialcanoatos (phas) a partir de uma biomassa celular bacteriana |
| CN101591575A (zh) | 2008-05-30 | 2009-12-02 | 汕头大学 | 羟基脂肪酸衍生物作为燃料添加剂的应用 |
| CN101709310B (zh) * | 2009-12-24 | 2012-04-25 | 哈尔滨工业大学 | 一种同步提取聚羟基烷酸脂和回收溶剂的方法及其装置 |
| CN111019108B (zh) * | 2020-01-07 | 2021-03-05 | 清华大学 | 一种提取并纯化聚羟基脂肪酸酯的方法 |
-
2002
- 2002-09-18 CN CN 02130725 patent/CN1211489C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11155483B1 (en) | 2020-06-30 | 2021-10-26 | Nutrition & Health Research Institute, COFCO Corporation | Method for efficiently producing PHA |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1483824A (zh) | 2004-03-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1133642C (zh) | 核苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物 | |
| CN1122036C (zh) | 用于制备奥氮平的中间体和方法 | |
| CN1496359A (zh) | 乙交酯制备方法和乙醇酸组合物 | |
| CN101050157A (zh) | 一种联苯类化合物的制备方法 | |
| CN1283780C (zh) | 一种无桔霉素红曲霉基因工程菌的构建方法 | |
| CN1229346C (zh) | 丁苯哌丁醇的非对映体盐 | |
| CN1022407C (zh) | 苯氧基烷基羧酸衍生物及其制备方法 | |
| CN1211489C (zh) | 一种从细菌菌体内分离提取聚羟基脂肪酸酯的方法 | |
| CN1425655A (zh) | 制备嘧啶衍生物的方法 | |
| CN1297534C (zh) | 用于制备烯烃聚合催化剂的二醇酯化合物 | |
| CN1065866C (zh) | 转化非手性内消旋型柄型金属茂配合物成手性外消旋形式的方法 | |
| CN1653081A (zh) | 甾族化合物的c－17螺甾内酯化和6,7氧化 | |
| CN1279104C (zh) | 纳米羟基磷灰石/聚乙烯醇复合水凝胶制备方法 | |
| CN1323300A (zh) | 制备新的抗糖尿病剂的改进方法 | |
| CN1094476C (zh) | 利用粉煤灰及其它工业废渣生产混凝土彩瓦的原料组份及工艺 | |
| CN100335531C (zh) | 一种两维规整聚合物纳微米孔阵列模板的制备方法 | |
| CN1957907A (zh) | 一种粉底液 | |
| CN1112350C (zh) | β－羟基结构的季铵盐复合相转移催化剂及其制备 | |
| CN1131410A (zh) | 矿物纤维组合物 | |
| CN1534036A (zh) | 喜树碱类似物的衍生物及其制备方法 | |
| CN1084175A (zh) | 新型磷脂衍生物 | |
| CN1893949A (zh) | 酸性喹啉衍生物和它们预防和/或治疗高血糖症相关性病变的用途 | |
| CN1911866A (zh) | 废显影液、废定影液的生物处理方法 | |
| CN1260347C (zh) | 一株产乙内酰脲酶系的节杆菌 | |
| CN101056978A (zh) | 凝集性酒精发酵酵母的生产方法及凝集性酒精发酵酵母 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20050720 Termination date: 20140918 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |