CN1198774A - 测试亲石蜡性微生物对抗微生物剂的敏感性的方法和装置 - Google Patents

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Abstract

一种测定得自患者样品的至少一种亲石蜡性微生物对不同抗微生物剂及其预定量的敏感性的方法,该方法包括:提供至少一个含有一种水溶液的容器,然后用样品接种该溶液。于是本方法包括将(i)用于引诱至少一种亲石蜡性微生物、石蜡涂覆的载玻片和(ii)预定量的待测抗微生物剂放入该容器。然后观察该载玻片上亲石蜡性微生物生长与否,以确定预定量的抗微生物剂在抑制载玻片上亲石蜡性微生物的生长方面是否有效。还提供了一种相关的装置。

Description

测试亲石蜡性微生物对抗微生物剂 的敏感性的方法和装置
本申请是于1992.6.18递交的美国专利申请系列号07/900,275的部分接续申请，后者是于1992.2.25递交的美国专利申请系列号07/841,937的分案申请，后者反过来又是于1989.10.24递交的美国专利申请系列号07/426,573的部分接续申请。
本发明涉及测试亲石蜡性微生物(paraffinophilic microorganisms)对于抗微生物剂的敏感性的方法和装置。
鉴定和治疗机会感染常常涉及对于涉及的微生物性质作合理推测，而且一经鉴定，就需要弄清楚有效处理该微生物的抗微生物剂的量。有些抗微生物剂相当昂贵，所以只应用治疗该感染所需的量将大为有益。此外更重要的是，抗微生物剂可能具有不希望的副作用，所以应谨慎地只用有效治疗该感染所需的量。然而遗憾的是，目前还没有一种方法能使医师迅速确定哪种抗微生物剂将在保证有效抑制微生物的生长方面表现最佳。这就会产生如下后果：更大的费用、更低的效果和可能招致更多的损害性副作用。存在这种情况的原因是，医护人员不了解有关抗微生物剂敏感性方面的信息，也就不能更准确地选择抗微生物剂；因此一旦选择了适当的抗微生物剂，有利于确定更准确的应用浓度。
已知有很多种非典型的分枝杆菌(Mycobacteria)生长在缺乏除石蜡外的任何碳源的基础盐培养基上，可以石蜡涂覆的杆的形式将它们引入该培养基。Fuhs，G.W.，“Der Mikrobielle Abbau VonKohlenwasserstoffen”，Arch.Mikrobiol.，39：374-422(1961)。Mishra，S.K.等，“Observations on Paraffin Baiting As A Laboratory DiagnosticProcedure In Nocardiosis”，Mycopathologica And MycologiaApplicata，51(2-3)：147-157(1973)应用石蜡涂覆的杆和基础盐培养基而从临床样品例如唾液、支气管灌洗液和脑脊髓液中分离星状诺卡氏菌(Nocardia asteroides)。
用石蜡涂覆的载玻片代替杆可进一步改进本技术，因而有可能对于在石蜡涂覆的载玻片上生长的有机体原位应用金杨氏(Kinyoun)耐冷酸染色法。Ollar，R.A.，“A Paraffin Baiting Technique That Enables ADirect Microscopic View of“in situ”Morphology of Nocardiaasteroides With The Acid-Fast or Fluorescence Staining Procedures”，Zb1.Bakt.Hyg.，Abt.Orig.A，234：81-90(1976)。运用该分析法，阳性反应立即告诉使用者存在除结核分枝杆菌(M.tuberculosis)之外的分枝杆菌有机体。
至于抗微生物敏感性试验，美国专利No.3,826,717提供了一种抗生物敏感性试验容器，它包括很多其中含有固体营养培养基的孔。这些孔排成行，每一排都包括一种抗生剂，且同一排中不同的孔中浓度各不相同。还提供一个其中只有培养基而没有抗生剂的对照孔。
尽管有上述启示，但仍然需要有效而经济的方法和花费不多的装置以测试亲石蜡性微生物对抗微生物剂的敏感性。
本发明满足或超过了上述要求和其它要求。测定得自患者样品的至少一种亲石蜡性微生物对不同抗微生物剂及其预定量的敏感性的方法包括：提供至少一个含有一种水溶液的容器，然后用样品接种该溶液。于是本方法包括将(i)用于引诱至少一种亲石蜡性微生物、石蜡涂覆的载玻片和(ii)预定量的待测抗微生物剂放入该容器。然后观察该载玻片上亲石蜡性微生物生长与否，以确定预定量的抗微生物剂在抑制载玻片上亲石蜡性微生物的生长方面是否有效。
还提供了一种相关的装置，它包括适于盛一种水溶液、一定量的待测抗微生物剂和患者样品的一个容器以及适于放入所述容器的石蜡涂覆的载玻片。这样，通过观察载玻片上来自样品的亲石蜡性微生物生长情况，就能确定抗亲石蜡性微生物在载玻片上生长所需的抗微生物剂浓度。
图1示出了将石蜡涂覆的载玻片保持于无菌水溶液中的试管正视图，该溶液用胞内鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium-intracellulare)(“MAI”)接种。
图2示出了耐酸-醇分析的示意图。
图3示出了亚碲酸盐还原分析。
图4示出了硝酸盐还原分析。
图5示出脲水解分析。
图6示出了Tween80水解分析。
图7示出了本发明的抗微生物剂敏感性测试分析。
本文提到的术语“非典型的分枝杆菌”表示除了结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌(M.leprae)和副结核分枝杆菌(M.paratuberculosis)之外的所有分枝杆菌。
本文应用的术语“患者”表示包括人类的动物界中的一员，它的机体样品用本发明的方法和装置进行处理。
参照图1，示出了MAI分离和物种形成盒10的部分。图1示出的标准试管12包括无菌水溶液14(例如蔡氏培养基)和用于密封试管12的棉塞16。应用时，将需测试是否存在MAI的样品引入试管12，接着分析石蜡涂覆的载玻片18。样品可以是患者的一定量血液、粪或唾液。后两种样品可直接接种入MAI分离和物种形成盒而不需某种血培养液体培养基。
最好是首先纵向切割标准的显微镜载玻片而制备载玻片18，使它们适于放入试管12因而可轻易拔出。塞好试管12并用高压灭菌法灭菌。
在载玻片上涂覆石蜡时，优选先在沸水浴中熔化几试管无菌的组织级含有蜡的石蜡，同时另外在电热板上加热盛有一载玻片支持体的玻璃培养皿至足以熔化石蜡的温度。然后将熔化的石蜡倾入热培养皿中，倾入的量应足以覆盖支持体上的载玻片。
优选应用在乙醇-火焰上灭过菌的镊子把原先未涂覆的载玻片转移到含有已熔化蜡的热培养皿中载玻片支持体上。将该载玻片浸入熔化的蜡中达数秒使它覆盖上一薄层石蜡。以同样方法制备许多载玻片，制备好6-10片载玻片之后加入一试管熔化的石蜡以保证总有足够的蜡覆盖支持的载玻片。
蔡氏液体培养基14可配有抗细菌的和抗真菌的/抗生的混合物例如由Becton Dickenson/Johnston Labs Division制备的、以商品名“PANTA”出售的那种。这种产品能耐可能的污染因子例如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)或热带假丝酵母(Candidatropicalis)。该产品对MAI没影响，因为MAI能耐“PANTA”中常用的抗生素。
试剂盒10还可起这种作用：它一方面可区别非典型的分枝杆菌和诺卡氏菌类有机体(nocardioform organisms)，而另一方面可区别非典型的分枝杆菌和结核分枝杆菌，因为后者不能利用石蜡作为唯一碳源。已知在石蜡和能利用石蜡作为它的碳源的有机体如非典型的分枝杆菌与诺卡氏菌类有机体之间可产生向性。该向性的外在表现或者引诱是石蜡表面出现细菌生长。
一旦确定载玻片上出现除结核分枝杆菌之外的分枝杆菌或诺卡氏菌类有机体，就可应用耐醇-酸试验40(图2)以进一步区别非典型的分枝杆菌和诺卡氏菌类有机体。已知非典型的分枝杆菌能耐醇-酸；诺卡氏菌类有机体能耐酸；而铜绿假单胞菌或热带假丝酵母既不耐酸又不耐醇-酸。因此，通过耐醇-酸测试盒40可排除后两组(诺卡氏菌类和铜绿假单胞菌或热带假丝酵母)的可能性。
参照图2，示出了耐酸-醇测试装置40。该测试装置40包括多个其中含有不同溶液的试管。这些溶液给载玻片上的MAI染色以供后续的显微镜下分析。
将生长有可见的MAI、石蜡涂覆的载玻片培养物42从图1的试管12中取出，先浸入盛有蒸馏水的两支相邻试管50、51；然后浸入金杨氏卡宝品红的试管52中达15分钟。再将载玻片42浸入盛有蒸馏水的试管53中，然后置于含有由97ml绝对乙醇和3.0ml浓HCl构成的酸-醇的试管54中达5分钟。此后，将该载玻片置于第4支盛蒸馏水的试管55中洗涤，再置于1.0％(v/v)亚甲蓝水溶液的试管56中达1分钟。最后，将该载玻片于第5支蒸馏水的试管57中洗涤。
随后从第5支蒸馏水的试管57中取出该载玻片培养物，并轻轻地用干净的吸水纸吸干。然后在显微镜下在250×、450×和1000×油浸物镜中观察该载玻片培养物。
图3示出了亚碲酸盐还原分析，它包括其中优选盛有蔡氏培养基加上一定量亚碲酸钾试剂62的试管60。将培养的载玻片43浸入试管60并进行培养。如果载玻片上存在MAI，则在载玻片43的弯月面膜65处形成深黑色沉淀64。该试验提醒使用者可能存在MAI。在下文中讨论的分析法中分析结果出来后就能确证MAI的存在。
图4示出硝酸盐还原分析70。对于生长稠密的载玻片培养物44分析把硝酸盐还原成亚硝酸盐的能力。是这样分析的：往含有无菌培养基的试管71中加入硝酸盐。在37℃下培养12-24小时后，从无菌硝酸盐培养基72中取出载玻片44并先后往试管71中加入5滴磺胺酸试剂溶液和5滴α萘胺试剂溶液。硝酸盐还原为亚硝酸盐时表现为变成红色的培养基73。正如已知的那样，如果硝酸盐被还原为亚硝酸盐，则表明载玻片上没有MAI。
图5示出脲水解反应分析80。将载玻片培养物45放入含有4.5ml无菌脲培养基82的带塞试管81中。在37℃下培养该培养物，并在3天后检查。阳性反应表现为3天之后培养基82的颜色变为粉红或红色。已知如果溶液变色，就表明载玻片45上没有MAI。
图6示出乳化剂水解分析90。所用的乳化剂为“Tween 80”，它是Atlas Chemical Industries，Inc.的商标，通常称它为山梨糖醇酐部分脂肪酸酯的聚氧乙烯衍生物。将载玻片培养物46放入含有Tween 80介质92的无菌带塞试管91并在37℃下培养。阳性反应表现为，在5天内载玻片46的弯月面膜94处出现红色着色物93。已知载玻片中若出现红色着色物就指示载玻片上没有MAI。
应懂得应进行至少一种MAI鉴定试验(亚碲酸盐还原、硝酸盐还原、脲水解或“Tween 80”水解)，其中亚碲酸盐还原试验是四种试验中最重要的。优选应进行所有这四种试验以更准确地物种形成和鉴定MAI。
图7示出本发明的抗微生物剂敏感性测试分析100。本方法和相关装置测试了MAI对不同抗微生物剂和/或抗微生物剂的剂量的敏感性。该分析优选包括六支试管110-115，每支含有一定量蔡氏培养液120-125和一定量含待测MAI的样品。培养液121-125含有均匀递增浓度的待测抗微生物剂。培养基120不含抗微生物剂，因为试管110将作为“对照”试管。试管110优选含有一定量盐水。
按前述方法制备石蜡载玻片培养物130-135。分别将这些载玻片培养物130-135放入相应试管110-115中。然后在37℃下培养试管110-115中的载玻片培养物130-135并在第6天、第7天、第8天和第10天检查。通过观测各载玻片培养物130-135的石蜡表面上MAI生长情况140-144，就能确定防止在石蜡培养物载玻片130-135上MAI生长所需抗微生物剂的最小抑菌浓度(“MIC”)。对于图7来说，试管115中的是MIC浓度，因为在载玻片135上未生长MAI。
由此可见，本发明的方法和装置提供了测定MAI对不同抗微生物剂及其预定量的敏感性的高效、经济的手段。然而，本发明并不限于MAI，还对任何亲石蜡性微生物有效。本文应用的术语“亲石蜡性”表示这种有机体，即它可用石蜡为基本盐培养基中的碳源，其中没有其它形式的碳。该有机体可以是细菌或真菌。
应懂得，虽然示出的装置50具有多个容器和多个载玻片80-85，但本发明不限于多个容器和多个载玻片，而是还包括单个容器和单个载玻片。
本发明的方法可用于测定下组亲石蜡性微生物中至少一种的抗生敏感性：石蜡微球菌(Micrococcus Paraffinae)；单纯棒状杆菌(Corynebacterium Simplex)；Ahnl；丹砂枝球菌(红球菌)(Mycococcus(Rhodococcus)Cinnabareus)；Ahnl.绛红枝球菌(紫红红球菌)(Mycococcus(Rhodoc)Rhodochrous)；崎岖分枝杆菌Athanicum变种(Mycobact.Perrugosum Var.Athanicum)；红色分枝杆菌Propanicum变种(Mycobact.Rubrum Var.Propanicum)；透明分枝杆菌(Mycobacterium Hyalinum)；乳生分枝杆菌(MycobacteriumLacticola)；白色分枝杆菌(Mycobacterium Album)，藤黄分枝杆菌(M.Luteum)；田鼠分枝杆菌(Mycobacterium Microti)；红色分枝杆菌(Mycobacterium Rubrum)，草分枝杆菌(MycobacteriumPhlei.)；草分枝杆菌，包皮垢分枝杆菌(M.Smegmatis)；龟分枝杆菌(Mycobacterium Testudo)；胞内鸟分枝杆菌(Mycobacterium-Avium-Intracellulare)；诺卡氏菌(Nocardia Spp.)；放线菌属(Actinomyces)；解脂假丝酵母(Candida Lipolytica)；热带假丝酵母，球拟酵母(Torulopsis Colliculosa)；丛梗孢菌(Monila Sp.)，汉逊酵母菌(Hansenula Sp.)，Torula rossa；青霉菌(PenicilliumSp.)；IHNL.黄曲霉(IHNL.Aspergillus Flavus)；曲霉菌(AspergillusSp.)，青霉菌(Penicillum Sp.)；桔霉菌(Citromyces Sp.)，帚霉菌(Scopulariopsis Sp.)；荧光假单胞菌Liquefaciens(PseudomonasFluorescens Liquefaciens)；Ahnl，Pem.Fluorescens Denitrificans；铜绿假单胞菌。
应明白在临床医疗应用中，有些场合既有携带单种亲石蜡性微生物(例如MAI)的患者，又有携带多种亲石蜡性微生物(例如MAI和堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium Kansasii))的患者。很有必要处理所有亲石蜡性微生物，因为每一种都可能成为患者的致病原因。因此，如果免疫受损害的患者患有肺、肝或肾脓肿，则医师对于能抑制所有细菌在载玻片上生长的抗微生物剂感兴趣，不管生长的细菌包括一种还是多种亲石蜡性微生物。
实验结果
A.原料
1.菌株
下列实验中应用的MAI株最初是从下列单位的AIDS患者分离而得到的：St.Vincent’s Hospital and Medical Center of New York和Memorial Sloan-Kettering Cancer Center。得自两个研究机构的菌株通过惯常的形态方法和微生物方法鉴定，由DNA杂交(Gene Probe Kit：Biogen)确证为鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌(M.intracellulare)。在St.Vincent’s Hospital分离的菌株为10,000；1762；1516；15113；8515；6475；5097；8197；和4861。得自Memorial Sloan-KetteringCancer Center的那些是SK015；SK016；SK095；SK069；SK034；SK060；和SK024。所有菌株都分离自患AIDS病的患者并被鉴定为鸟分枝杆菌种；只有SK069是胞内分枝杆菌，它是从患空洞肺病(cavitarypulmonary disease)的免疫活性患者分离而得的。
2.抗微生物剂
制备化疗剂贮备液。将阿米卡星(Bristol-Myers)溶于蒸馏水并过滤除菌；将阿齐红霉素(Pfizer)溶于95％乙醇并过滤除菌；还将环丙氟哌酸(Miles Laboratories)溶于蒸馏水并过滤除菌。
B.石蜡载玻片培养物分析
按本发明的方法，用图7所示装置，针对前述菌株和前述抗微生物剂进行石蜡载玻片培养物分析以分析抗生敏感性。
将标准的显微镜载玻片纵向割开、消毒、并涂覆一薄层Paraplast化合物(组织级石蜡加塑性聚合物-Monoject Scientific Division ofSherwood Medical，St.Louis，Missouri 63103，USA)。最佳石蜡涂层是极薄的涂层。这可通过将载玻片迅速浸入熔化的石蜡中并迅速取出而形成。当石蜡涂层太厚时，则在37℃下长期培养后石蜡层常会脱落。涂覆后，将载玻片贮存于无菌的封有棉塞的试管内备用。
1.环丙氟哌酸-HCL
应用图7的装置，往试管111-115中各加入0.5ml感染接种物，初始抗微生物工作液，石蜡涂覆的载玻片131-135和4.5ml蔡氏培养基。对照试管110中含有0.5ml感染接种物，0.5ml生理盐水和4.5ml蔡氏培养基。对照试管110还包含石蜡涂覆的载玻片130。试管111-115中各含有递增浓度的抗微生物剂，其中试管111含有3.6微克/ml；试管112含有7.3微克/ml；试管113含有10.9微克/ml；试管114含有14.5微克/ml；而试管115含有18.2微克/ml。
对每种菌株作实验，构成一组实验。同样的实验又重复一组。一般在37℃下培养5-10天后读出每个实验中石蜡对照载玻片上的培养物，以8天为优选的培养期。
表1列出了菌株并报告了MIC和每种菌株在每组实验中铺满的天数。MIC定义为抑制载玻片上细菌生长所需抗微生物剂的最低浓度。测得的MIC以微克/ml为单位。
表1
       实验I组           实验II组菌株    MIC  铺满的天数    MIC  铺满的天数10.000  3.6     9         3.6     71762    18.2    9         14.5    81516    NG*    NG        3.6     815113   3.6     10        3.6     98515    7.3     9         7.3     86475    3.6     10        7.3     95097    3.6     10        7.3     88197    3.6     9         3.6     84861    3.6     10        3.6     8SK015   14.5    7         14.5    6SK016   7.3     7         7.3     6SK095   10.9    7         7.3     6SK069   18.2    8       ＞18.2    7SK037   18.2    7         14.5    7SK060   7.3     7         7.3     7SK024   7.3     7         3.6     6*NG＝未生长
用环丙氟哌酸-HCL从实验I组推知本发明的基本方法。正如所料，对照试管显示在石蜡表面生出的菌最多。当对照试管中见到细菌铺满石蜡载玻片表面时，就检验含不同量稀释剂或环丙氟哌酸的试管111-115。可清楚见到递增浓度的环丙氟哌酸-HCL对石蜡载玻片上MAI生长的影响。在含有最低抗微生物剂浓度的试管中，其中未见到石蜡涂覆的载玻片上生长菌落，该试管中的环丙氟哌酸浓度定义为该系统的最小抑菌浓度(“MIC”)。该浓度下未长菌是通过在显微镜下检查用金杨氏抗酸染色法染过色的载玻片而确证的。本方法用于测定后续所有抗微生物敏感性试验组中的MIC。
关于环丙氟哌酸-HCL的II组和III组没有明显的统计上的变化(连续性修正常态近似值＝0.419，常态近似的两尾p值＝0.68)。这就证实本方法在两实验组之间的重复性。这些实验组中得到的MIC值与其他研究人员得到的很相似。例如参见Heifets，L.和Lindholm-Levy，P.“Comparison of Bactericical Activities of Streptomycin，Amikacin，Kanamycin And Capreomycin Against Mycobacteriumavium and M.tuberculosis”，Antimicrob，Ag.Chemother.1989：33：1298-1301。
2.阿齐红霉素试验
也应用图7的装置，往试管111-115中各加入0.5ml感染接种物、初始抗微生物工作液，石蜡涂覆的载玻片131-135和4.5ml蔡氏培养基。阿齐红霉素的对照试管110含有于4.5ml蔡氏培养基中的0.5ml 95％乙醇和0.5ml感染接种物以及载玻片130。试管111-115各含有递增浓度的抗微生物剂，其中试管111含有2.6微克/ml；试管112含有5.3微克/ml；试管113含有7.9微克/ml；试管114含有10.6微克/ml；而试管115含有13.2微克/ml。
对每种菌株作实验，构成一组实验。同样的实验重复第二组，再重复第三组。一般在37℃下培养5-10天后读出每个实验中石蜡涂覆的载玻片上的培养物，以8天为优选的培养期。
表2列出了菌株并报告了MIC(以微克/ml表示)和每种菌株分别在实验组I、II和III中铺满的天数。
表2
    实验I组            实验II组            实验III组菌株    MIC   铺满的天数   MIC    铺满的天数  MIC   铺满的天数10.000  2.6    6           2.6    6           2.6    61762    5.3    7           2.6    6           5.3    61516    2.6    8           2.6    8           5.3    815113   5.3    8           5.3    10          2.6    68515    5.3    8           2.6    6           2.6    66475    2.6    8           2.6    8           2.6    65097    7.9    6           2.6    6           5.3    68197    5.3    7           2.6    6           2.6    64861    5.3    10          2.6    6           2.6    6SK015   7.9    7           5.3    6           5.3    7SK016   7.9    10          10.6   6           5.3    8SK095   2.6    7           5.3    6           5.3    7SK069   2.6    7           2.6    6           5.3    8SK037   5.3    7           7.9    6           5.3    8SK060   2.6    7           7.9    6           2.6    6SK024   5.3    7           7.9    6           2.2    7
在实验组之间没有明显的变化(对关系项作过修正的Friedman统计＝20.95，p＝0.14，样本规模＝3，df＝15)。
对于阿齐红霉素得到的MIC值不同于其他研究人员得到的值。例如参见，Inderlied，C.B.，Kolonoski，P.T.，Wu，M.和Young，L.S.，“In vitroand in vivo Activity of Azithromycin(CP62.993)Against theMycobacterium avium Complex”，J.Infect.Dis.，1989：159：994-997。关于这一点的一种解释是，阿齐红霉素对于pH变化很敏感。上述实验是在pH＝7.5时进行的。在较低pH下，属于大环内酯抗生素的阿齐红霉素被完全离子化，因此很难穿过胞质膜。这转化为要求更高浓度的阿齐红霉素，于是导致更高的MIC值。此外，有关MAI对阿齐红霉素的抗微生物敏感性没有公认的标准。
3.阿米卡星试验
应用图7的装置，往试管111-115中各加入0.5ml感染接种物，初始抗微生物工作液，石蜡涂覆的载玻片131-135和4.5ml蔡氏培养基。试管110是对照试管，不含任何阿米卡星但含有于4.5ml蔡氏培养基中的0.5ml 95％乙醇和0.5ml感染接种物以及载玻片130。试管111-115各含有递增浓度的阿米卡星抗微生物剂，其中试管111含有3.2微克/ml；试管112含有6.4微克/ml；试管113含有9.6微克/ml；试管114含有12.8微克/ml；而试管115含有16微克/ml。
对每种菌株做实验，构成一组实验。同样的实验重复第二组，再重复第三组。一般在37℃下培养5-10天后读出每个实验中石蜡载玻片上的培养物，以8天为优选的培养期。
表3列出了菌株并报告了MIC和每种菌株在各组实验中铺满的天数。
表3
               实验I组        实验II组       实验III组
菌株        MIC 铺满的天数   MIC 铺满的天数 MIC   铺满的天数
10.000    ＞16.0    7     ＞16.0    7      3.2      5
1762      ＞16.0    7       12.0    7      3.2      5
1516        6.4     8       6.4     9      6.4      12
15113       3.2     8       6.4     5      3.2      6
8515        6.4     7       3.2     5      3.2      5
6475        12.0    7       3.2     5      3.2      5
5097        NG*    NG      6.4     5      6.4      5
8197      ＞16.0    7     ＞16.0    7      3.2      5
4861        12.0    8       3.2     6      3.2      7
SK015       6.4     6       6.4     6      3.2      5
SK016       7.3     5       9.6     6      6.4      5
SK095       3.2     5       6.4     6      6.4      5
SK069       3.2     6       9.6     6      6.4      6
SK037       9.6     5     ＞16.0    6      6.4      5
SK060    6.4    5    6.4    7    3.2    5
SK024    6.4    5    9.6    6    3.2    5*NG＝未生长
实验I、II和III组没有明显的统计变化(对关系项作过修正的Friedman统计＝14.79，p＝0.39，样品间隔＝3，df＝14)。这就证实了本实验组之间的重复性。这些实验组中得到的MIC值与其他研究人员得到的很相似。例如参见，Inderlied，C.B.，Young，L.S.和Yamanda，J.K.，“Determination of in vivo Susceptibility ofMycobacterium avium Complex Isolates To Antimycobacterial AgentsBy Various Methods”，Antimicrob，Ag.Chemother，，1987：32：1697-1702。
可见本发明提供了测试MAI对抗微生物剂敏感性的方法和装置。该装置易于使用且价廉，本方法准确而有效。
鉴于本文上面描述的本发明的具体实施方案是为了阐述本发明，本领域技术人员应懂得，细节上可作很多改变而不会偏离后续权利要求限定的本发明范围。

Claims (5)

1.测定得自患者样品的至少一种亲石蜡性微生物对不同抗微生物剂及其预定量的敏感性的方法，该方法包括：
提供至少一个含一种水溶液的容器；
用所述样品接种该溶液；
将(i)用于引诱该亲石蜡性微生物、石蜡涂覆的载玻片和(ii)预定量的待测抗微生物剂放入该容器；和
观察该载玻片上亲石蜡性微生物生长与否，以确定预定量的该抗微生物剂在抑制载玻片上亲石蜡性微生物的生长方面是否有效。
2.权利要求1的方法，它包括
应用该方法测定下列微生物中的至少一种的抗生素敏感性：石蜡微球菌；单纯棒状杆菌；Ahnl；丹砂枝球菌(红球菌)；Ahnl.绛红枝球菌(紫红红球菌)；崎岖分枝杆菌Athanicum变种；红色分枝杆菌Propanicum变种；透明分枝杆菌；乳生分枝杆菌；白色分枝杆菌，藤黄分枝杆菌；田鼠分枝杆菌；红色分枝杆菌；草分枝杆菌；草分枝杆菌，包皮垢分枝杆菌；龟分枝杆菌；胞内鸟分枝杆菌；诺卡氏菌；放线菌属；解脂假丝酵母；热带假丝酵母，球拟酵母；丛梗孢菌，汉逊酵母菌，Torularossa；青霉菌；IHNL.黄曲霉；曲霉属，青霉菌；桔霉菌，帚霉菌；荧光假单胞菌Liquefaciens；Ahnl，Pem.Fluorescens Denitrificans；铜绿假单胞菌。
3.权利要求1的方法，它包括
提供多个各含有一种水溶液的容器；
用一定量所述样品接种各容器；
将(i)分别用石蜡涂覆的载玻片和(ii)一定量待测抗微生物剂放入各容器，所述每个所述容器含有不同预定量的所述抗微生物剂；和
观察所述载玻片上该亲石蜡性微生物生长与否，以确定所述抗微生物剂抑制所述亲石蜡性微生物生长的最小抑菌浓度。
4.测定得自患者样品的至少一种亲石蜡性微生物对不同抗微生物剂及其预定量的敏感性的装置，该装置包括：
适于盛装水溶液、一定量的待测抗微生物剂和所述样品的容器；和
适于放入所述容器的石蜡涂覆的载玻片，于是通过观察所述载玻片上得自所述样品的亲石蜡性微生物的生长情况就可确定抗所述亲石蜡性微生物在所述载玻片上生长所需的抗微生物剂浓度。
5.权利要求4的装置，它包括
每一个都适于盛装水溶液、一定量的待测抗微生物剂和所述样品的多个容器；和
每一个都适于放入所述容器之一的多个石蜡涂覆的载玻片。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5153119A (en) * 1989-10-24 1992-10-06 Infectech Inc. Method for speciating and identifying mai (mycobacterium avium-intracellulare)
US5698414A (en) * 1989-10-24 1997-12-16 Infectech, Inc. Method and apparatus for testing paraffinophilic microorganisms for antimicrobial agent sensitivity
US5854013A (en) * 1995-09-14 1998-12-29 Infectech, Inc. Method of determining the presence or absence of a nonparaffinophilic microorganism in a specimen
US5891662A (en) * 1997-11-13 1999-04-06 Infectech, Inc. Method for determining the antimicrobial agent sensitivity of a nonparaffinophilic hydrophobic microorganism
CN102010886B (zh) * 2010-06-02 2016-08-17 湖南省天骑医学新技术股份有限公司 结核分枝杆菌药敏试验方法及指示剂的应用及固体培养基
JP6504834B2 (ja) 2015-01-27 2019-04-24 株式会社日立ハイテクノロジーズ 検査装置
US11662564B2 (en) * 2017-06-15 2023-05-30 Shenzhen Prs Limited Paraffin shield coating for microscope slide

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3826717A (en) * 1973-02-26 1974-07-30 V Gilbert Quantitative antibiotic test container
US5316918A (en) * 1989-10-24 1994-05-31 Infectech, Inc. Method and apparatus for testing MAI (mycobacterium avium-intracellulare) for antimicrobial agent sensitivity
US5153119A (en) * 1989-10-24 1992-10-06 Infectech Inc. Method for speciating and identifying mai (mycobacterium avium-intracellulare)
US5698414A (en) * 1989-10-24 1997-12-16 Infectech, Inc. Method and apparatus for testing paraffinophilic microorganisms for antimicrobial agent sensitivity
US5637501A (en) * 1995-09-28 1997-06-10 Infectech, Inc. Apparatus for automatically testing the antibiotic sensitivity of a paraffinophilic microorganism

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