CN118526513A - 紫花前胡苷在制备减轻铂类药物肌毒性的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

提供了紫花前胡苷在制备减轻铂类药物肌毒性的药物中的应用。本发明首次发现紫花前胡苷可以缓解顺铂的毒副作用，如体重减轻、摄食量减少、骨骼肌重量减轻、肾脏重量减轻、附睾脂肪重量减轻等；同时下调骨骼肌中泛素‑蛋白酶体通路相关蛋白Atrogin1和Murf1的表达，减轻泛素‑蛋白酶体途径的骨骼肌蛋白降解，减轻肌萎缩，非常适合用于制备减轻铂类药物肌毒性的药物。

Description

紫花前胡苷在制备减轻铂类药物肌毒性的药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及紫花前胡苷在制备减轻铂类药物肌毒性的药物中的应用。

背景技术

铂类药物作为应用较广泛的一类化疗药物，适用于肺癌、卵巢癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、多种消化道肿瘤等。但是，铂类药物的很多毒副作用，如肾毒性、骨骼肌毒性等严重限制了铂类药物的临床应用。这些毒副作用降低了肿瘤患者的耐受度，削弱了铂类药物的综合疗效，弱化了患者的受益。当前预防铂类药物导致的机体损伤的方法有限，以铂类药物用药前水化为主，而这一方法主要用于预防或减轻肾毒性，铂类而药物的肌毒性常被忽略。铂类药物导致的骨骼肌萎缩会严重影响肿瘤病人的生活质量并增加摔倒等意外风险。在老年肿瘤患者群体，骨骼肌萎缩所导致的平衡能力衰退可直接威胁生命。但目前临床上没有针对减轻铂类药物相关骨骼肌萎缩的治疗措施，预防与治疗铂类药物导致的骨骼肌萎缩具有重大需求。寻求减轻铂类药物毒性的方法或者治疗药物可提高基于铂类药物的化疗方案的疗效，增加肿瘤患者的治疗收益。

当前已存在很多铂类药物毒性的体内外模型可用于开发减轻铂类药物毒性的药物。奥沙利铂作用于结肠癌C26细胞荷瘤小鼠确实可以抑制肿瘤生长，但也导致肌肉萎缩。这一过程与自噬的启动、线粒体损伤和蛋白质合成被抑制有关(Wijler LA,Raats DAE,Elias SG,et al.Specialized nutrition improves muscle function and physicalactivity without affecting chemotherapy efficacy in C26 tumour-bearing mice.JCachexia Sarcopenia Muscle.2021；12(3):796-810.)。顺铂(DDP)在多种癌症模型中可以引起厌食、骨骼肌萎缩等症状，并且显著上调血浆皮质酮水平，顺铂相关的肌肉萎缩与激活NF-kappaB信号通路诱导炎症有关(Sakai H,Sagara A,Arakawa K,et al.Mechanisms ofcisplatin-induced muscle atrophy.Toxicol Appl Pharmacol.2014；278(2):190-199.)。顺铂与小鼠C2C12肌管细胞共培养会使得C2C12肌管细胞发生萎缩，这一过程与泛素-蛋白酶体通路的激活有关(Sakai H,Ikeno Y,Tsukimura Y,et al.Upregulation ofubiquitinated proteins and their degradation pathway in muscle atrophyinduced by cisplatin in mice.Toxicol Appl Pharmacol.2020；403:115165.)。将小分子化合物作用于以上体内外模型可以对该小分子化合物的减轻铂类药物毒性的药理作用进行初步评价。

发明内容

本发明的目的是提供紫花前胡苷(Nodakenin，NOD，C20H24O9)在制备减轻铂类药物肌毒性的药物中的应用。

本发明第一方面，提供了紫花前胡苷、或其药学上可接受的盐、或其互变异构体、立体异构体、水合物、其前药或代谢产物中的一种或多种在制备减轻铂类药物肌毒性的药物组合物中的应用。

在另一优选例中，所述药物组合物的活性成分为紫花前胡苷。

在另一优选例中，所述铂类药物选自下组：顺铂、卡铂、洛铂、奈达铂、奥沙利铂，或其组合。

在另一优选例中，所述减轻铂类药物肌肉毒性包括肌肉疼痛、肌肉萎缩(包括肌肉无力和肌肉体积缩小或重量减轻)。

在另一优选例中，所述减轻铂类药物肌肉毒性为抑制泛素-蛋白酶体通路导致的肌肉萎缩。

在另一优选例中，所述减轻铂类药物肌肉毒性为减轻铂类药物对骨骼肌分化的抑制和对蛋白降解的促进作用。

在另一优选例中，所述减轻铂类药物肌肉毒性为下调骨骼肌中泛素-蛋白酶体通路相关蛋白Atrogin1和Murf1的表达进而抑制泛素-蛋白酶体通路导致的肌肉萎缩。

在另一优选例中，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。

进一步地，所述药物组合物的给药途径为口服、透皮、肌肉、皮下或静脉注射。

在另一优选例中，所述中药组合物的剂型选自下组：固体制剂和液体制剂。

在另一优选例中，所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。

在另一优选例中，所述药物组合物的剂型为胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂或膏剂。

在另一优选例中，所述赋形剂选自下组：粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、湿润剂，或其组合。

在另一优选例中，所述填充剂为纤维素、甘露糖醇、乳糖中的一种或几种。

在另一优选例中，所述崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉衍生物中的一种或几种。

在另一优选例中，所述淀粉衍生物为羟基乙酸淀粉钠。

在另一优选例中，所述润滑剂为硬脂酸镁或十二烷基硫酸钠。

本发明第二方面，提供了一种药物组合物，其中所述药物组合物包括：

(a)铂类药物；和

(b)紫花前胡苷、或其药学上可接受的盐、或其互变异构体、立体异构体、水合物、前药或代谢产物中的一种或多种。

在另一优选例中，所述中药组合物还包括药学上可接受的载体。

本发明第三方面，提供了一种药盒，其特征在于，所述药盒包括:

(a)第一容器，以及包含在所述第一容器内的铂类药物；和

(b)第二容器，以及包含在所述第二容器内的药物组合物，所述药物组合物的活性成分包括紫花前胡苷、或其药学上可接受的盐、或其互变异构体、立体异构体、水合物、前药或代谢产物中的一种或多种。

本发明第四方面，提供了如本发明第二方面所述的药物组合物或本发明第三方面所述的药盒在制备毒性降低的预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途。

在另一优选例中，所述肿瘤选自下组：睾丸癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、头颈部癌、消化道癌、胃癌、软组织肿瘤及骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、肺癌(非小细胞肺癌、小细胞肺癌)、食管癌、胚系肿瘤、头颈部肿瘤、食管癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胆管细胞癌、白血病，或其组合。

本发明第五方面，提供了一种降低铂类药物肌肉毒性的方法，包括步骤给予正在、将要或已经经受过铂类药物化疗的对象本发明的活性成分或包含其的药物组合物，从而降低所述铂类药物导致的肌肉毒性。

本发明第六方面，提供了一种治疗癌症的方法，包括步骤：给予有需要的对象如本发明第二方面所述的药物组合物或本发明第三方面所述的药盒，从而治疗癌症。

在另一优选例中，所述对象为人或非人哺乳动物。

在另一优选例中，所述非人哺乳动物为大鼠或小鼠。

在另一优选例中，所述对象还可以接受了其他药物化疗或放疗。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1为本发明一实施例中不同浓度的紫花前胡苷分别在干预24h、48h、72h后对小鼠C2C12成肌细胞(C2C12 myoblast)、C2C12肌管细胞(C2C12 myotube)、小鼠肺癌LLC细胞增殖的影响结果图；

图2为本发明一实施例中不同浓度的紫花前胡苷对经顺铂刺激的小鼠C2C12肌管细胞分化的影响结果图；

图3为本发明一实施例中不同浓度的紫花前胡苷对经顺铂刺激的小鼠C2C12肌管细胞MyHC、MyoG、Atrogin1、Murf1蛋白表达的影响结果图；

图4为本发明一实施例中紫花前胡苷对顺铂治疗下的LLC荷瘤小鼠的体重、瘤块体积、瘤块重量、摄食量的影响结果图；

图5为本发明一实施例中紫花前胡苷对顺铂治疗下的LLC荷瘤小鼠的腓肠肌形态(照片)与重量、前肢抓力、肾脏重量、附睾脂肪重量的影响结果图；

图6为本发明一实施例中紫花前胡苷对顺铂治疗下的LLC荷瘤小鼠的腓肠肌肌纤维横截面积(crosssectionalarea，CSA)的影响结果图；

图7为发明一实施例中紫花前胡苷对顺铂治疗下的LLC荷瘤小鼠的腓肠肌肌纤维类型(Myh7高表达即深染为I型肌纤维，浅染为II型肌纤维)的影响结果图；

图8为本发明一实施例中紫花前胡苷对顺铂治疗下的LLC荷瘤小鼠的腓肠肌中MyHC、Atrogin1、MuRF1蛋白表达的影响结果图。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，通过大量筛选和测试，提供了紫花前胡苷在制备减轻铂类药物肌毒性的药物中的应用。本发明首次发现，紫花前胡苷可以缓解顺铂的毒副作用，如体重减轻、摄食量减少、骨骼肌重量减轻、肾脏重量减轻、附睾脂肪重量减轻等；同时下调骨骼肌中泛素-蛋白酶体通路相关蛋白Atrogin1和Murf1的表达，减轻泛素-蛋白酶体途径的骨骼肌蛋白降解，减轻肌萎缩，非常适合用于制备减轻铂类药物肌毒性的药物。在此基础上完成了本发明。

术语

除非另有定义，否则本文中所用的全部技术术语和科学术语均具有如本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同含义。

如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”、或“由…构成”。

如本文所用，术语“室温”或“常温”是指温度为4-40℃，较佳地，25±5℃。

活性成分

本发明的活性成分为紫花前胡苷(Nodakenin，NOD)，或其或其互变异构体、立体异构体、水合物、前药或代谢物。其中，紫花前胡苷的结构式如下：

本发明提供了紫花前胡苷在制备减轻铂类药物毒性的药物中的应用，该药物或组合物的活性成分可以为紫花前胡苷、紫花前胡苷的水合物、紫花前胡苷药学上可接受的盐、紫花前胡苷的互变异构体、紫花前胡苷的立体异构体、紫花前胡苷的前体化合物中的一种或几种。

所述的活性成分可以以包含紫花前胡苷的提取物形式提供，如紫花前胡(Angelica decursiva(Miq.)Franch.et Sav.)提取物。

术语“药学上可接受的盐”是指化合物与药学上可接受的酸或碱所形成的盐，可与本发明的化合物形成药学上可接受的无机酸包括但不限于：盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸；有机酸包括但不限于：甲酸、乙酸、丙酸、丁二酸、1,5-萘二磺酸、亚细亚酸、草酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、庚二酸、己二酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯丙酸、葡糖酸、抗坏血酸、烟酸、异烟酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸，以及氨基酸；典型的与碱形成的盐包括铵盐、碱金属盐如钠、锂、钾盐，碱土金属盐如钙、镁盐；和有机碱形成的盐，如有机胺，如N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺、叔丁基胺，以及和氨基酸如精氨酸、赖氨酸等等形成的盐。

所述“药学上可接受的”是指适用于人而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。

术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体，例如：烯醇与相应的酮。

术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，例如：顺反异构体、对映异构体、构象异构体等。

术语“前药”是指在体外无活性，但能够在生物体内进行代谢或化学反应转化为本发明的活性成分，从而发挥其药理作用的化合物。

术语“代谢产物”指分子经身体代谢，结构被修改后仍继续对身体造成所期望的影响的活性代谢产物。

如本文所用，术语“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。

药物组合物、用途

本发明的药物组合物包括上述活性成分，以及药学上可接受的载体。

本发明首次意外地发现，紫花前胡苷可以显著减轻化疗药物，尤其是铂类药物的肌毒性，可用于铂类药物肌肉毒性的预防与治疗，如作为铂类药物在癌症治疗过程中的辅助药物。典型的铂类药物包括顺铂、卡铂、洛铂、奈达铂、奥沙利铂，或其组合，及它们的各自药用形式，如药学上可接受的盐、酯、以及各种形式的制剂。

进一步地，所述减轻铂类药物肌肉毒性包括抑制泛素-蛋白酶体通路导致的肌肉萎缩。

进一步地，所述减轻铂类药物肌肉毒性包括减轻铂类药物对骨骼肌分化的抑制和对蛋白降解的促进作用。

进一步地，所述减轻铂类药物肌肉毒性为下调骨骼肌中泛素-蛋白酶体通路相关蛋白Atrogin1和Murf1的表达进而抑制泛素-蛋白酶体通路导致的肌肉萎缩。

本发明的组合物包含安全有效量范围内的本发明的活性成分，以及药学上可接受的赋形剂或载体。

如本文所用，术语“有效量”，是指对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。本领域的普通技术人员应该理解，所述的“有效量”可随着药物组合物的形式、所用的辅料、疾病的严重程度以及与其他药物联合等情况的不同而有所不同。

本发明所述的“预防”、“治疗”、“减轻”、“降低”、“改善”等术语，包括在一定程度上减轻铂类药物肌毒性副作用的一个或多个指标或方面(如体重减轻、摄食量减少、骨骼肌重量减轻、肾脏重量减轻、附睾脂肪重量减轻)，但并不必需要100％治愈。在一些实施方案中，与不存在的所述活性成分时相比，本发明活性成分或组合物将患者的肌毒性副作用的一个或多个症状的严重程度或持续时间、发作频次降低了例如至少约10％、至少约30％、至少约50％、或至少约80％。

通常，本发明的组合物含有1-2000mg本发明活性成分/剂，更佳地，含有10-500mg本发明活性成分/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。药学上或可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明的活性成分或药物组合物可以与铂类药物联合使用，用于制备预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，在发挥铂类药物的治疗效果之外，减轻其药物毒副作用。典型地，所述肿瘤包括(但不限于)：睾丸癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、头颈部癌、消化道癌、胃癌、软组织肿瘤及骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、肺癌(非小细胞肺癌、小细胞肺癌)、食管癌、胚系肿瘤、头颈部肿瘤、食管癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胆管细胞癌、白血病，或其组合。

典型地，所述铂类药物和所述活性成分的用量比为1:(0.1-20)(w/w)，较佳地1:(0.5-10)，更佳地1:(1-5)，如1:2，1:2.5，1:3，1:3.5等。

进一步地，所述药物组合物还可包含一种或多种另外的治疗剂，如维生素D；钙补充剂，抗癌剂或免疫抑制剂如奥拉帕尼、卢卡帕尼、尼拉帕尼、甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特；如纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、度伐单抗(durvalumab)、阿特朱单抗(atezolizumab)或皮地利珠单抗(pidilizumab)，或其组合。

本发明活性成分可以以单独的药剂给药，或者与铂类药物等其他治疗剂制备在同一药剂中给药。本发明的活性成分可以与其他治疗剂同时给药，或在其他治疗剂之前或之后顺序给药。如本发明活性成分或包含其的药物组合物在铂类药物施用前7天、6天、5天、4天、3天、2天、1天、18h、12h、10h、8h、6h、4h、2h、1h或0.5h内预防性的施用，或与铂类药物基本上同时施用，或在铂类药物施用后0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、18h、1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天内施用。

“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。

本发明活性成分或组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明活性成分的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

在某些实施方式中，向患癌对象联合给予本发明的活性成分或组合物和其它传统癌治疗物，例如，放疗或手术。放疗是本领域熟知的并且包括X射线治疗，例如伽马放射，和放射药物治疗。

本发明的活性成分或包含其的组合物的治疗有效剂量的一般范围将是(干重计)：约1mg-200g/天、约10mg-约100g/天、约100mg-约50g/天、约1g-约20mg/天、约10g-约15g/天。治疗有效剂量将以一个或多个剂量给予。然而，应理解，对于任何特定患者的本发明化合物的特定剂量将取决于多种因素，例如，待治疗的患者的年龄、性别、体重、一般健康状况、饮食、个体响应，给予时间、待治疗的疾病的严重性、施用的具体化合物的活性、剂型、应用模式和伴用药物。给定情况的治疗有效量能用常规实验测定，并在临床医生或医师能力和判断范围内。在任何情况中，所述化合物或组合物将基于患者的个体情况以多个剂量给予并以允许递送治疗有效量的方式给予。

本发明还提供了一种降低铂类药物肌肉的方法，给正在、将要或已经经受过铂类药物化疗的对象本发明的所述药物组合物，从而降低铂类药物导致的肌肉毒性。

进一步地，本发明还提供了一种治疗癌症的方法，包括步骤：给予有需要的对象一药盒，所述药盒包括铂类药物和本发明所述药物组合物，从而治疗癌症。

适用于本发明的对象包括人或非人哺乳动物(如大鼠、小鼠、猴等)。

本发明的主要优点包括：

本发明提供了紫花前胡苷的新应用，本发明的研究结果显示：在体外实验中，紫花前胡苷对小鼠C2C12成肌细胞和C2C12肌管细胞无明显的增殖抑制作用，而对小鼠肺癌LLC细胞具有相对更强的抑制作用。紫花前胡苷可以减轻顺铂诱导的C2C12肌管细胞萎缩，表明紫花前胡苷可以减轻化疗药物对骨骼肌分化的抑制和对蛋白降解的促进作用。在体内实验中，紫花前胡苷可以缓解顺铂的毒副作用，如体重减轻、摄食量减少、骨骼肌重量减轻、肾脏重量减轻、附睾脂肪重量减轻等；同时下调骨骼肌中泛素-蛋白酶体通路相关蛋白Atrogin1和Murf1的表达，减轻泛素-蛋白酶体途径的骨骼肌蛋白降解，减轻肌萎缩。

综上所述，紫花前胡苷可以减轻铂类药物对骨骼肌分化的抑制作用，并且可以下调骨骼肌降解相关蛋白，减轻肌萎缩，改善小鼠模型恶病质症状，具备制备为减轻铂类药物毒性的药物的潜力。

下面结合具体实施，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

实施例1

本实施例提供紫花前胡苷对小鼠C2C12成肌细胞、小鼠C2C12肌管细胞、小鼠结肠癌CT26细胞、小鼠肺癌LLC细胞增殖的抑制作用的探究实验，具体的实验内容和结果如下：

用不同浓度紫花前胡苷分别与小鼠C2C12成肌细胞、小鼠C2C12肌管细胞、小鼠结肠癌CT26细胞、小鼠肺癌LLC细胞共培育24h、48h、72h，采用CCK8法检测细胞活力，结果如图1所示。

紫花前胡苷对C2C12成肌细胞在24h、48h、72h的抑制率过低，IC50无法计算。紫花前胡苷对C2C12肌管细胞在24h、48h的抑制率过低，IC50无法计算，72h的IC50为450.8μM。紫花前胡苷对LLC细胞在24h的抑制率过低，IC50无法计算，48h的IC50为552.9μM，72h的IC50为250.3μM。紫花前胡苷对C2C12成肌细胞和C2C12肌管细胞的细胞活力的影响较小。对小鼠肺癌LLC细胞的活力抑制作用相对更强，72h的IC50值最低。

实施例2

本实施例验证紫花前胡苷对经顺铂刺激的小鼠C2C12肌管细胞分化的抑制作用，具体的实验内容和结果如下：

小鼠C2C12成肌细胞经2％马血清诱导分化为肌管细胞，紫花前胡苷纯度>95％，以不同浓度紫花前胡苷(25μM、50μM、100μM)及40μM顺铂(DDP)单用或同时使用与C2C12肌管细胞共培育24h，经固定、透膜、封闭后，孵育MyHC一抗4℃过夜，弃去一抗后经清洗孵育同型荧光二抗2小时，二抗孵育完成并清洗后孵育DAPI进行细胞核染色，孵育10min，加入抗荧光淬灭剂后荧光显微镜拍照，结果如图2所示，对图2荧光区域MyHC荧光阳性面积及肌管内外细胞核数量进行统计，计算荧光区域占比及融合指数(肌管内细胞核数量与总细胞核数量的比值)，C2C12肌管细胞经DDP处理24h后，肌管面积明显减小，发生萎缩，融合指数也出现下降。随紫花前胡苷浓度增大，MyHC标记的肌管细胞面积逐渐增大，融合指数上升，反映了紫花前胡苷可以减轻DDP诱导的C2C12肌管细胞萎缩(与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001)。

实施例3

本实施例验证紫花前胡苷对经顺铂刺激的小鼠C2C12肌管细胞MyHC、Atrogin1、MuRF1、MyoG蛋白表达的调控作用，具体的实验内容和结果如下：

小鼠C2C12成肌细胞经2％马血清诱导分化为肌管细胞，以不同浓度紫花前胡苷(25μM、50μM、100μM)及40μM顺铂(DDP)单用或同时使用与C2C12肌管细胞共培育24h，RIPA裂解液提取总蛋白，BCA法测定蛋白浓度后调平各样本蛋白浓度，western blot法检测肌分化与降解相关蛋白MyHC、MyoG、Atrogin1、MuRF1的表达，结果如图3所示。C2C12肌管细胞经DDP处理24h后，MyHC、MyoG蛋白表达水平明显下降，肌蛋白降解相关的Atrogin1、MuRF1蛋白表达水平显著上升，在紫花前胡苷的干预下，MyHC、MyoG的蛋白表达水平被上调，而Atrogin1、MuRF1蛋白的表达水平被显著下调(与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001)。

实施例4

本实施例验证紫花前胡苷对顺铂治疗下的LLC荷瘤小鼠的肌肉毒性及恶病质相关症状体征的减轻作用，具体的实验内容和结果如下：

将LLC细胞(2x106个细胞/只)在day 1皮下接种于20只C57BL/6小鼠的右上侧背部，30只荷瘤鼠分为5组，每组6只，分别是荷瘤对照组(LLC组)、顺铂治疗组(LLC+DDP组)、低剂量紫花前胡苷联合治疗组(LLC+DDP+NOD(L)组)、中剂量紫花前胡苷联合治疗组(LLC+DDP+NOD(M)组)、高剂量紫花前胡苷联合治疗组(LLC+DDP+NOD(H)组)，另有同批次6只C57小鼠作为正常对照组(NC组)。待肿瘤长径达5mm后(约day 5)开始给药，顺铂给药方式为腹腔注射，紫花前胡苷给药方式为灌胃。给药方案：NC组(生理盐水)、LLC组(生理盐水)、LLC+DDP组(DDP 4mg/kg)、LLC+DDP+NOD(L)组(DDP 4mg/kg+DAI 5mg/kg)、LLC+DDP+NOD(M)组(DDP4mg/kg+NOD 10mg/kg)、LLC+DDP+NOD(H)组(DDP 4mg/kg+NOD 20mg/kg)，顺铂给药周期均为3天1次，紫花前胡苷为每天1次。每次给药前检测体重、瘤块大小，体重、瘤块与摄食量趋势如图4所示。DDP可以明显减轻小鼠体重、抑制肿瘤生长、降低摄食量，紫花前胡苷的干预可以减轻顺铂对体重和摄食量的影响，而对DDP的抑瘤作用没有影响(与LLC+DDP组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001)。

第18天所有小鼠处死取材，检测瘤重(图4)、腓肠肌重量、肾脏重量、附睾脂肪重量，在处死前检测前肢抓力，结果如图5所示。经紫花前胡苷干预后，小鼠腓肠肌重量、胫骨前肌重量、肾脏重量、附睾脂肪重量以及前肢抓力显著提升(与LLC+DDP组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001)。经紫花前胡苷干预后小鼠腓肠肌肌纤维横截面面积显著提升，如图6所示(与LLC+DDP组相比，**P＜0.01，***P＜0.001)。免疫组化检测Myh7的表达以明确肌纤维类型，深染为I型肌纤维，浅染为II型肌纤维，DDP的干预使得小鼠骨骼肌中II型肌纤维比重下降，而紫花前胡苷的干预使得II型肌纤维比重上调，如图7所示。取腓肠肌采用qPCR法检测I型肌纤维标志Myh7以及II型肌纤维Myh2、Myh4的mRNA表达量，腓肠肌中与II型肌纤维相关的Myh2和Myh4 mRNA的表达水平也被DDP显著下调，紫花前胡苷的干预也部分恢复了Myh2和Myh4 mRNA的表达水平，如图7所示(与LLC+DDP组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001)。取腓肠肌提取总蛋白，western blot法检测MyHC、Atrogin1、Murf1蛋白的表达，DDP的干预使得MyHC的表达下调，Atrogin1、MuRF1的表达上调，而紫花前胡苷上调了MyHC的表达，下调了Atrogin1、Murf1的表达，如图8所示(与LLC+DDP组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001)。

由上述实施例可知，紫花前胡苷可以减轻铂类药物对骨骼肌分化的抑制作用，并且可以下调骨骼肌降解相关蛋白的表达，这为制备减轻铂类药物肌毒性的药物提供了新策略。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.紫花前胡苷、或其药学上可接受的盐、或其互变异构体、立体异构体、水合物、其前药或代谢产物中的一种或多种在制备减轻铂类药物肌毒性的药物组合物中的应用。

2.如权利要求1的应用，其特征在于，所述药物组合物的活性成分为紫花前胡苷。

3.如权利要求1的应用，其特征在于，所述铂类药物选自下组：顺铂、卡铂、洛铂、奈达铂、奥沙利铂，或其组合。

4.如权利要求1的应用，其特征在于，所述减轻铂类药物肌肉毒性包括减轻肌肉疼痛或肌肉萎缩(包括肌肉无力和肌肉体积缩小或重量减轻)。

5.如权利要求1的应用，其特征在于，所述减轻铂类药物肌肉毒性为减轻铂类药物对骨骼肌分化的抑制和对蛋白降解的促进作用。

6.如权利要求1的应用，其特征在于，所述减轻铂类药物肌肉毒性为下调骨骼肌中泛素-蛋白酶体通路相关蛋白Atrogin1和Murf1的表达进而抑制泛素-蛋白酶体通路导致的肌肉萎缩。

7.如权利要求1的应用，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体或赋形剂，优选地，所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。

8.一种药物组合物，其中所述药物组合物包括：

(a)铂类药物；和

(b)紫花前胡苷、或其药学上可接受的盐、或其互变异构体、立体异构体、水合物、前药或代谢产物中的一种或多种。

9.一种药盒，其特征在于，所述药盒包括:

(a)第一容器，以及包含在所述第一容器内的铂类药物；和

(b)第二容器，以及包含在所述第二容器内的药物组合物，所述药物组合物的活性成分包括紫花前胡苷、或其药学上可接受的盐、或其互变异构体、立体异构体、水合物、或其前药或代谢产物中的一种或多种。

10.如权利要求8所述的药物组合物或如权利要求9所述的药盒在制备毒性降低的预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途。