CN118497276A - 腺相关病毒载体用于在内耳中的毛细胞和支持细胞中校正基因缺陷/表达蛋白质的用途 - Google Patents
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Abstract
本文提供了包含至少两种不同的核酸载体的组合物，所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的重组核酸。还提供了包含单一AAV载体的组合物，所述单一AAV载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，在支持细胞靶基因的基因座处产生了编码全长靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的核酸，并且所述灵长类动物表达靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)。
Description
本申请是优先权日2018年11月7日，申请日2019年11月7日，申请号201980082439.4，发明名称为“腺相关病毒载体用于在内耳中的毛细胞和支持细胞中校正基因缺陷/表达蛋白质的用途”的中国发明专利申请的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年11月7日提交的的序列号为62/756,953的美国临时专利申请和2019年8月16日提交的序列号为62/888,093的美国临时专利申请的优先权，所述申请的全部内容通过引用并入本文。
技术领域
本公开总体上涉及核酸治疗灵长类动物的听力损失的用途。
发明背景
听力损失可以是传导性的(从耳道或中耳引起的)、感音神经性的(从内耳或听觉神经引起)或混合性的。大多数形式的非综合征性耳聋都与内耳结构受损引起的永久性听力损失(感音神经性耳聋)相关联，尽管一些形式可能涉及中耳的变化(传导性听力损失)。人的大部分感音神经性听力损失是由耳蜗中Corti器的毛细胞异常(毛细胞功能差)引起的。毛细胞在出生时可能是异常的，或者在个体的一生中可能会受到损害(例如，由于噪音创伤或感染所致)。
发明内容
本发明基于以下发现：包含至少两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述至少两种不同的腺相关病毒(AAV)载体中的每一种均包含编码序列，所述编码序列编码支持细胞靶蛋白的不同部分，所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码全长支持细胞靶蛋白；所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺乏内含子序列；以及所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组核酸。
本文提供了包含至少两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述至少两种不同的腺相关病毒(AAV)载体中的每一种均包含编码序列，所述编码序列编码支持细胞靶蛋白的不同部分，所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码全长支持细胞靶蛋白；所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺乏内含子序列；以及所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组核酸。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码的部分之一的氨基酸序列与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列重叠。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列与不同的编码的部分的氨基酸序列部分地重叠。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，重叠氨基酸序列的长度为30个氨基酸残基至约390个氨基酸残基。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述至少两种不同的载体中的每一种包含内含子的不同区段，其中所述内含子包含存在于支持细胞靶基因组DNA中的内含子的核苷酸序列，并且其中两个不同的区段在序列上重叠至少100个核苷酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述两个不同的区段在序列上重叠约30个核苷酸至约390个核苷酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述至少两种不同的载体中的每一种的核苷酸序列的长度为约30个核苷酸至约390个核苷酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述至少两种不同的载体中的每一种的核苷酸序列的长度为30个核苷酸至340个核苷酸。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述组合物中不同载体的数目为2。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述两种不同的载体中的第一载体包含编码所述支持细胞靶蛋白的N末端部分的编码序列。在本文描述的任何组合物的一些实施方案中，支持细胞靶蛋白的N-末端部分的长度为约30个氨基酸至约390个氨基酸。在本文描述的任何组合物的一些实施方案中，支持细胞靶蛋白的N-末端部分的长度为约30个氨基酸至约340个氨基酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，第一载体还包含启动子和Kozak序列之一者或两者。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，第一载体包含启动子，所述启动子为诱导型启动子、组成型启动子或组织特异性启动子。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，两种不同的载体中的第二载体包含编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的编码序列。在本文描述的任何组合物的一些实施方案中，支持细胞靶蛋白的C-末端部分的长度为约30个氨基酸至约390个氨基酸。在本文描述的任何组合物的一些实施方案中，支持细胞靶蛋白的C-末端部分的长度为约30个氨基酸至约340个氨基酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，第二载体还包含poly(dA)序列。
本文还提供了包含两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述两种不同的核酸载体中的第一核酸载体包含启动子、位于所述启动子的3’的编码支持细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列和位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列；以及所述两种不同的核酸载体中的第二核酸载体包含剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3'末端的编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多聚腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的氨基酸序列不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长支持细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组RNA分子。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在相邻外显子之间缺乏内含子序列。
本文还提供了组合物，其包含：第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3'的编码支持细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列，和位于所述剪接供体信号序列的3’的第一可检测标记基因；以及第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二可检测标记基因、位于所述第二可检测标记基因的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长支持细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组RNA分子。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在相邻外显子之间缺乏内含子序列。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述第一可检测标记基因或所述第二可检测标记基因是碱性磷酸酶。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述第一可检测标记基因和所述第二可检测标记基因是相同的。
本文还提供了组合物，其包含：第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3'的编码支持细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列，和位于所述剪接供体信号序列的3’的F1噬菌体重组发生区；和第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二F1噬菌体重组发生区、位于所述第二F1噬菌体重组发生区的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长支持细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组RNA分子。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺乏内含子序列。
本文还提供了包含单一腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述单一AAV载体包含编码支持细胞靶蛋白的核酸序列；以及当被引入到灵长类动物细胞中时，在支持细胞靶基因的基因座处产生编码全长支持细胞靶蛋白的核酸，并且所述灵长类动物表达所述支持细胞靶蛋白。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述支持细胞靶基因是缝隙连接蛋白β2(GJB2)。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述支持细胞靶基因是溶质运载蛋白家族26成员4(SLC26A4)。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，第二核酸载体还包含失稳序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，第二核酸载体还包含FKBP12失稳序列。
本文还提供了包括本文所述的任何组合物的试剂盒。在本文所述的任何试剂盒的一些实施方案中，试剂盒还包括包含所述组合物的预装式注射器。
本文还提供了校正灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶基因缺陷的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用修复所述灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶基因缺陷。
本文还提供了升高灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶蛋白的表达水平的方法，所述方法包括向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用使得所述灵长类动物内耳的支持细胞中的所述支持细胞靶蛋白的表达水平升高。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述灵长类动物先前已被确定具有缺陷型支持细胞靶基因。
本文还提供了治疗被鉴定为具有缺陷型支持细胞靶基因的灵长类动物的非综合征性感音神经性听力损失的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述方法还包括在施用步骤之前，确定灵长类动物具有缺陷型毛细胞靶基因。
本文还提供了恢复被鉴定或诊断为患有听力损失的灵长类动物的听力的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的如本文所述的任何组合物。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述方法还包括在施用步骤之前，确定灵长类动物具有缺陷型支持细胞靶基因。
本文还提供了恢复被鉴定或诊断为患有内耳病症的灵长类动物的突触并且/或者保留其螺旋神经节神经的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述方法还包括在施用步骤之前，确定灵长类动物具有缺陷型支持细胞靶基因。
本文还提供了包括向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物的方法。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述灵长类动物先前已被鉴定为具有缺陷型支持细胞靶基因。
本文还提供了包含至少两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述至少两种不同的腺相关病毒(AAV)载体中的每一种均包含编码序列，所述编码序列编码毛细胞靶蛋白的不同部分，所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码全长毛细胞靶蛋白；所述编码序列中的至少一个包含跨越毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺少内含子序列；以及所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组核酸。
本文提供了包含至少两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述至少两种不同的腺相关病毒(AAV)载体中的每一种均包含编码毛细胞靶蛋白的不同部分的编码序列，所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码全长蛋白质；所述编码序列中的至少一个包含跨越毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺乏内含子序列；并且当被引入到灵长类动物细胞时，所述至少两种不同的载体经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组核酸。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码的部分之一的氨基酸序列与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列重叠。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列与不同的编码的部分的氨基酸序列部分地重叠。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，重叠氨基酸序列的长度为30个氨基酸残基至约390个氨基酸残基。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述至少两种不同的载体中的每一种包含内含子的不同区段，其中所述内含子包含存在于毛细胞靶基因组DNA中的内含子的核苷酸序列，并且其中两个不同的区段在序列上重叠至少100个核苷酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述两个不同的区段在序列上重叠约30个核苷酸至约390个核苷酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述至少两种不同的载体中的每一种的核苷酸序列的长度为约30个核苷酸至约390个核苷酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述至少两种不同的载体中的每一种的核苷酸序列的长度为30个核苷酸至340个核苷酸。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述组合物中不同载体的数目为2。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述两种不同的载体中的第一载体包含编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的编码序列。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，毛细胞靶蛋白的N末端部分的长度为约30个氨基酸至约390个氨基酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，毛细胞靶蛋白的N末端部分的长度为约30个氨基酸至约340个氨基酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，第一载体还包含启动子和Kozak序列之一者或两者。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，第一载体包含启动子，所述启动子为诱导型启动子、组成型启动子或组织特异性启动子。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述两种不同的载体中的第二载体包括编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的编码序列。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述毛细胞靶蛋白的C-末端部分的长度为约30个氨基酸至约390个氨基酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，毛细胞靶蛋白的C-末端部分的长度为约30个氨基酸至约340个氨基酸。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，第二载体还包含poly(dA)序列。
本文还提供了包含两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述两种不同的核酸载体中的第一核酸载体包含启动子、位于所述启动子3’的编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列和位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列；以及所述两种不同的核酸载体中的第二核酸载体包含剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3'末端的编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多聚腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的氨基酸序列不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组RNA分子。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码序列中的至少一个包含跨越毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在相邻外显子之间缺乏内含子序列。
本文还提供了组合物，其包含：第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3'的编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列，和位于所述剪接供体信号序列的3’的第一可检测标记基因；和第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二可检测标记基因、位于所述第二可检测标记基因的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组RNA分子。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码序列中的至少一个包含跨越毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在相邻外显子之间缺乏内含子序列。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述第一可检测标记基因或所述第二可检测标记基因是碱性磷酸酶。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述第一可检测标记基因和所述第二可检测标记基因是相同的。
本文还提供了组合物，其包含：第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3’的编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列和位于所述剪接供体信号序列的3’的F1噬菌体重组发生区；和第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二F1噬菌体重组发生区、位于所述第二F1噬菌体重组发生区的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的剪接供体信号与另一个转录物上的剪接受体信号之间发生剪接，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组RNA分子。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述编码序列中的至少一个包含跨越毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在两个相邻外显子之间缺乏内含子序列。
本文还提供了包含单一腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述单一AAV载体包含编码毛细胞靶蛋白的核酸序列；当被引入到灵长类动物细胞时，在所述毛细胞靶基因的基因座处产生编码全长毛细胞靶蛋白的核酸，并且所述灵长类动物表达所述毛细胞靶蛋白。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
本文还提供了包括本文所述的任何组合物的试剂盒。在本文所述的任何试剂盒的一些实施方案中，试剂盒还包括包含所述组合物的预装式注射器。
本文还提供了校正灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶基因缺陷的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用修复所述灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶基因缺陷。
本文还提供了升高灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶蛋白的表达水平的方法，所述方法包括向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用使得所述灵长类动物内耳的所述毛细胞中的所述毛细胞靶蛋白的表达水平升高。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述灵长类动物先前已被确定具有缺陷型毛细胞靶基因。
本文还提供了治疗被鉴定为具有缺陷型毛细胞靶基因的灵长类动物的非综合征性感音神经性听力损失的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述方法还包括在所述施用步骤之前，确定所述灵长类动物具有缺陷型毛细胞靶基因。
本文还提供了恢复被鉴定或诊断为患有听力损失的灵长类动物的听力的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的如本文所述的任何组合物。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述方法还包括在施用步骤之前，确定灵长类动物具有缺陷型毛细胞靶基因。
本文还提供了恢复被鉴定或诊断为患有内耳病症的灵长类动物的突触并且/或者保留其螺旋神经节神经的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述方法还包括在施用步骤之前，确定灵长类动物具有缺陷型毛细胞靶基因。
本文还提供了包括向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物的方法。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述灵长类动物先前已被鉴定为具有缺陷型毛细胞靶基因。
术语“一个/种(a)”和“一个/种(an)”是指一个/种或不止一个/种(即，至少一个/种)该冠词的语法对象。举例来说，“一个(an)元件”涵盖一个元件和不止一个元件。
术语“支持细胞靶蛋白”意指在灵长类动物的支持细胞中表达并且在功能上至少部分有助于灵长类动物的听力的蛋白质。支持细胞靶蛋白的非限制性实例包括GJB2和SLC26A4。
术语“支持细胞靶基因中的突变”是指野生型支持细胞靶基因中的修饰，所述修饰导致产生与野生型支持细胞靶蛋白相比具有：一个或多个氨基酸的缺失、一个或多个氨基酸取代和一个或多个氨基酸插入中的一者或多者的支持细胞靶蛋白，并且/或者导致与不具有突变的灵长类动物细胞中的所述编码的支持细胞靶蛋白的表达水平相比，灵长类动物细胞中的编码的支持细胞靶蛋白的表达水平降低。在一些实施方案中，突变可导致在一个或多个氨基酸(例如，2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、1516个、17个、18个、19个或20个氨基酸)处具有缺失的支持细胞靶蛋白产生。在一些实施方案中，所述突变可在支持细胞靶基因中导致移码。
术语“毛细胞靶蛋白”意指在灵长类动物的毛细胞中表达，并且在功能上至少部分有助于灵长类动物的听力的蛋白质。毛细胞靶蛋白的非限制性实例包括覆膜蛋白α(tectorin alpha)(TECTA)、非常规肌球蛋白-15(MYO15A)、肌球蛋白IIIA(MYO3A)、肌球蛋白VI(MYO6)、肌球蛋白VIIA(MYO7A)、钙粘蛋白相关23(CDH23)、胶原XIα2型链(COL11A2)、脂氧合酶同源结构域1(LOXHD1)、原钙粘蛋白相关15(PCDH15)、旋蛋白(whirlin)(WHRN)、耳畸蛋白(OTOF)基因、trio rho鸟嘌呤核苷酸交换因子(TRIO)和f-肌动蛋白结合蛋白(TRIOBP)基因、硬纤毛蛋白(stereocilin)(STRC)基因、pejvakin(PJVK)基因、norrin半胱氨酸结生长因子(NDP)基因、clarin 1(CLRN1)基因、跨膜通道样1(TMC1)基因、血管内皮生长因子(VEGF)基因和热休克蛋白家族A(Hsp70)成员1A(HSPA1A)基因。
术语“毛细胞靶基因中的突变”是指野生型毛细胞靶基因中的修饰，所述修饰导致产生与野生型毛细胞靶蛋白相比具有：一个或多个氨基酸的缺失、一个或多个氨基酸取代和一个或多个氨基酸插入中的一者或多者的毛细胞靶蛋白，并且/或者导致与不具有突变的灵长类动物细胞中的编码的毛细胞靶蛋白的表达水平相比，灵长类动物细胞中的所述编码的毛细胞靶蛋白的表达水平降低。在一些实施方案中，突变可导致在一个或多个氨基酸(例如，2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15 16个、17个、18个、19个或20个氨基酸)处具有缺失的毛细胞靶蛋白产生。在一些实施方案中，所述突变可在毛细胞靶基因中导致移码。
已知术语“移码”在本领域中涵盖编码序列中导致编码序列的阅读框中的移位的任何突变。在一些实施方案中，移码可导致无功能的蛋白质。在一些实施方案中，点突变可以是无义突变(即，在基因的外显子中导致提前终止密码子)。无义突变可导致产生可以具有或可以不具有功能的截短的蛋白质(与相应的野生型蛋白质相比)。在一些实施方案中，所述突变可导致毛细胞靶mRNA或毛细胞靶蛋白或mRNA和蛋白两者的表达损失(或水平降低)。在一些实施方案中，与野生型毛细胞靶蛋白相比，所述突变可导致改变的毛细胞靶蛋白的产生，所述改变的毛细胞靶蛋白的一种或多种生物活性(功能)损失或降低。在一些实施方案中，所述突变可导致支持细胞靶mRNA或支持细胞靶蛋白或mRNA和蛋白两者的表达损失(或水平降低)。在一些实施方案中，与野生型支持细胞靶蛋白相比，所述突变可导致改变的支持细胞靶蛋白产生，所述改变的支持细胞靶蛋白的一种或多种生物活性(功能)损失或降低。
在一些实施方案中，所述突变是一个或多个核苷酸至毛细胞靶基因中的插入。在一些实施方案中，所述突变存在于毛细胞靶基因的调控序列(即，该基因的非编码序列的一部分)中。在一些实施方案中，调控序列中的突变可存在于启动子或增强子区域中，并阻止或减少毛细胞靶基因的适当转录。在一些实施方案中，所述突变是一个或多个核苷酸至支持细胞靶基因中的插入。在一些实施方案中，所述突变位于支持细胞靶基因的调控序列(即，该基因的非编码序列的一部分)。在一些实施方案中，调控序列中的突变可存在于启动子或增强子区域中，并阻止或减少支持细胞靶基因的适当转录。术语“保守突变”是指不改变在突变位点处编码的氨基酸的突变(由于密码子简并性)。
可通过本领域已知的标准技术诸如定点诱变和PCR介导的诱变将修饰引入核苷酸序列中。保守氨基酸取代是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替代的氨基酸取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如。天冬氨酸和谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸和色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸和蛋氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸和异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和组氨酸)的氨基酸。
除非另外规定，否则“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括是彼此的简并形式并因此编码相同的氨基酸序列的所有核苷酸序列。
术语“内源的”是指源自生物体、细胞或组织内的任何材料。
术语“外源的”是指从生物体、细胞或组织的外部引入或源自外部的任何材料，所述材料不从将引入其的同一生物体、细胞或组织产生，或者不源自所述同一生物体、细胞或组织。
术语“分离的”意指从天然状态改变或去除。例如，天然存在于活的动物中的核酸或肽不是“分离的”，但与共存材料部分或完全分开的相同核酸或肽是“分离的”。分离的核酸或蛋白质可以以基本上纯化的形式存在，或者可以存在于非天然环境例如宿主细胞中。
术语“转染的”、“转化的”或“转导的”是指将外源性核酸转移或引入细胞的过程。“转染的”、“转化的”或“转导的”灵长类动物细胞是已用外源性核酸转染、转化或转导的细胞。
术语“表达”是指编码蛋白质的特定核苷酸序列的转录和/或翻译。
术语“瞬时表达”是指非整合编码序列在短时间段(例如，数小时或数天)中的表达。在细胞(例如，灵长类动物细胞)中瞬时表达的编码序列在多轮细胞分裂后丢失。
术语“灵长类动物”意图包括任何灵长类动物(例如，人类、非人灵长类动物(例如，猿猴(例如，猴子(例如狨猴、狒狒或猕猴)或猿(例如，大猩猩、长臂猿、猩猩或黑猩猩)。在一些实施方案中，灵长类动物患有听力损失或有患听力损失的风险。在一些实施方案中，灵长类动物先前已经被鉴定为在毛细胞靶基因(例如，OTOF基因、TRIOBP基因、STRC基因、PJVK基因、NDP基因、CLRN1基因、TMC1基因、VEGF基因或HSPA1A基因)中具有突变。在一些实施方案中，灵长类动物先前已经被鉴定为在支持细胞靶基因(例如，GJB2基因或SLC26A4基因)中具有突变。在一些实施方案中，灵长类动物先前已被鉴定为在GJB2基因中具有突变。在一些实施方案中，灵长类动物先前已被鉴定为在SLC26A4基因中具有突变。在一些实施方案中，灵长类动物已被鉴定为在毛细胞靶基因(例如，OTOF基因、TRIOBP基因、STRC基因、PJVK基因、NDP基因、CLRN1基因、TMC1基因、VEGF基因或HSPA1A基因)中具有突变，并已被诊断为患有听力损失。在一些实施方案中，灵长类动物已经被鉴定为在支持细胞靶基因(例如，GBJ2基因或SLC26A4基因)中具有突变，并且已经被诊断患有听力损失。在一些实施方案中，灵长类动物已被鉴定为患有听力损失。
当治疗导致灵长类动物的疾病状态(听力损失，例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)的一种或多种症状的数量、严重程度和频率中的一种或多种降低时，所述治疗是“治疗有效的”。在一些实施方案中，治疗有效量的组合物可导致活性靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白(例如，具有所需活性的野生型全长支持细胞靶蛋白或支持细胞靶蛋白的变体))(例如，与用该组合物处理之前的表达水平相比)或毛细胞靶蛋白(例如，具有所需活性的野生型全长毛细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白的变体))(例如，与用该组合物处理之前的表达水平相比)的表达水平升高。在一些实施方案中，治疗有效量的组合物可导致靶细胞(例如，支持细胞或毛细胞)中活性靶蛋白(例如，活性支持细胞靶蛋白(例如，野生型全长支持细胞靶蛋白或活性变体)或活性毛细胞靶蛋白(例如，野生型全长毛细胞靶蛋白或活性变体))的表达水平升高。在一些实施方案中，治疗有效量的组合物可导致靶细胞中活性靶蛋白(例如，活性支持细胞靶蛋白(例如，野生型全长支持细胞靶蛋白或活性变体)或活性毛细胞靶蛋白(例如，野生型全长毛细胞靶蛋白或活性变体)的表达水平升高和/或靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的一种或多种活性增强(例如，与参考水平，诸如治疗前的灵长类动物中的一个或多个水平、在靶基因(例如，支持细胞靶基因或毛细胞靶基因)中具有突变的灵长类动物中的一个或多个水平或患有听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)的灵长类动物或灵长类动物群中的一个或多个水平相比)。
术语“核酸”或“多核苷酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)或其组合。除非特别限制，否则所述术语涵盖含有已知的天然核苷酸类似物的核酸，所述天然核苷酸类似物具有与参考核苷酸相似的结合特性。除非另有说明，否则特定的核酸序列也隐含地涵盖互补序列以及明确指示的序列。在本文所述的任何核酸的一些实施方案中，核酸为DNA。在本文所述的任何核酸的一些实施方案中，核酸为RNA。
术语“活性毛细胞靶蛋白”意指由这样的DNA编码的蛋白质，所述DNA，如果取代原本属于野生型灵长类动物的毛细胞中两个编码全长毛细胞靶蛋白的野生型等位基因，并且如果在该灵长类动物的毛细胞中表达，会导致该灵长类动物的听力水平接近为完全野生型的类似灵长类动物的正常听力水平。活性毛细胞靶蛋白的非限制性实例是全长毛细胞靶蛋白(例如，本文所述的任何全长毛细胞靶蛋白)。
术语“活性支持细胞靶蛋白”是指由这样的DNA编码的蛋白质，所述DNA，如果取代原本属于野生型灵长类动物的支持细胞中两个编码全长支持细胞靶蛋白的野生型等位基因，并且如果在该灵长类动物的支持细胞中表达，会导致该灵长类动物的听力水平接近为完全野生型的类似灵长类动物的正常听力水平。活性支持细胞靶蛋白的非限制性实例是全长支持细胞靶蛋白(例如，本文所述的任何全长支持细胞靶蛋白)。
例如，活性靶蛋白(例如，活性支持细胞靶蛋白或活性毛细胞靶蛋白)可包含野生型全长靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白(例如，野生型人全长支持细胞靶蛋白)或毛细胞靶蛋白(例如，野生型人全长毛细胞靶蛋白))的序列，所述野生型全长靶蛋白的序列包含1个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约15个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约10个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约9个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约8个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约7个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约6个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约5个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约4个氨基酸取代、1个氨基酸取代至约3个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约15个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约10个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约9个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约8个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约7个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约6个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约5个氨基酸取代、约2个氨基酸取代至约4个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约15个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约10个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约9个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约8个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约7个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约6个氨基酸取代、约3个氨基酸取代至约5个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约15个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约10个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约9个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约8个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约7个氨基酸取代、约4个氨基酸取代至约6个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约15个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约10个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约9个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约8个氨基酸取代、约5个氨基酸取代至约7个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约15个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约10个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约9个氨基酸取代、约6个氨基酸取代至约8个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约15个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约10个氨基酸取代、约7个氨基酸取代至约9个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约15个氨基酸取代、约8个氨基酸取代至约10个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、约10个氨基酸取代至约15个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约15个氨基酸取代至约20个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约20个氨基酸取代至约25个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约25个氨基酸取代至约30个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约30个氨基酸取代至约35个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约35个氨基酸取代至约40个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约40个氨基酸取代至约45个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约45个氨基酸取代至约50个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约60个氨基酸取代、约50个氨基酸取代至约55个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约70个氨基酸取代、约60个氨基酸取代至约65个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约80个氨基酸取代、约70个氨基酸取代至约75个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约90个氨基酸取代、约80个氨基酸取代至约85个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约100个氨基酸取代、约90个氨基酸取代至约95个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约110个氨基酸取代、约100个氨基酸取代至约105个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约120个氨基酸取代、约110个氨基酸取代至约115个氨基酸取代、约120个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约120个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约120个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约120个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约120个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约120个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约120个氨基酸取代至约130个氨基酸取代、约120个氨基酸取代至约125个氨基酸取代、约130个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约130个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约130个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约130个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约130个氨基酸取代至约140个氨基酸取代、约130个氨基酸取代至约135个氨基酸取代、约140个氨基酸取代至约160个氨基酸取代、约140个氨基酸取代至约155个氨基酸取代、约140个氨基酸取代至约150个氨基酸取代、约140个氨基酸取代至约145个氨基酸取代、约150个氨基酸取代至约160个氨基酸取代或约150个氨基酸取代至约155个氨基酸取代。本领域技术人员将理解，可对在不同物种的野生型支持细胞靶蛋白或不同物种的野生型毛细胞靶蛋白之间保守的氨基酸进行突变而不会损失活性，然而不应对在不同物种的野生型支持细胞靶蛋白或不同物种的野生型毛细胞靶蛋白之间不保守的那些氨基酸进行突变，因为它们更可能(相较于在不同物种之间不保守的氨基酸)参与活性。
活性靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)可包含野生型全长靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白(例如，野生型人全长支持细胞靶蛋白)或毛细胞靶蛋白(例如，野生型人全长毛细胞靶蛋白))的序列，所述野生型全长靶蛋白的序列删除了1个氨基酸至约50个氨基酸、1个氨基酸至约45个氨基酸、1个氨基酸至约40个氨基酸、1个氨基酸至约35个氨基酸、1个氨基酸至约30个氨基酸、1个氨基酸至约25个氨基酸、1个氨基酸至约20个氨基酸、1个氨基酸至约15个氨基酸、1个氨基酸至约10个氨基酸、1个氨基酸至约9个氨基酸、1个氨基酸至约8个氨基酸、1个氨基酸至约7个氨基酸、1个氨基酸至约6个氨基酸、1个氨基酸至约5个氨基酸、1个氨基酸至约4个氨基酸、1个氨基酸至约3个氨基酸、约2个氨基酸至约50个氨基酸、约2个氨基酸至约45个氨基酸、约2个氨基酸至约40个氨基酸、约2个氨基酸至约35个氨基酸、约2个氨基酸至约30个氨基酸、约2个氨基酸至约25个氨基酸、约2个氨基酸至约20个氨基酸、约2个氨基酸至约15个氨基酸、约2个氨基酸至约10个氨基酸、约2个氨基酸至约9个氨基酸、约2个氨基酸至约8个氨基酸、约2个氨基酸至约7个氨基酸、约2个氨基酸至约6个氨基酸、约2个氨基酸至约5个氨基酸、约2个氨基酸至约4个氨基酸、约3个氨基酸至约50个氨基酸、约3个氨基酸至约45个氨基酸、约3个氨基酸至约40个氨基酸、约3个氨基酸至约35个氨基酸、约3个氨基酸至约30个氨基酸、约3个氨基酸至约25个氨基酸、约3个氨基酸至约20个氨基酸、约3个氨基酸至约15个氨基酸、约3个氨基酸至约10个氨基酸、约3个氨基酸至约9个氨基酸、约3个氨基酸至约8个氨基酸、约3个氨基酸至约7个氨基酸、约3个氨基酸至约6个氨基酸、约3个氨基酸至约5个氨基酸、约4个氨基酸至约50个氨基酸、约4个氨基酸至约45个氨基酸、约4个氨基酸至约40个氨基酸、约4个氨基酸至约35个氨基酸、约4个氨基酸至约30个氨基酸、约4个氨基酸至约25个氨基酸、约4个氨基酸至约20个氨基酸、约4个氨基酸至约15个氨基酸、约4个氨基酸至约10个氨基酸、约4个氨基酸至约9个氨基酸、约4个氨基酸至约8个氨基酸、约4个氨基酸至约7个氨基酸、约4个氨基酸至约6个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约45个氨基酸、约5个氨基酸至约40个氨基酸、约5个氨基酸至约35个氨基酸、约5个氨基酸至约30个氨基酸、约5个氨基酸至约25个氨基酸、约5个氨基酸至约20个氨基酸、约5个氨基酸至约15个氨基酸、约5个氨基酸至约10个氨基酸、约5个氨基酸至约9个氨基酸、约5个氨基酸至约8个氨基酸、约5个氨基酸至约7个氨基酸、约6个氨基酸至约50个氨基酸、约6个氨基酸至约45个氨基酸、约6个氨基酸至约40个氨基酸、约6个氨基酸至约35个氨基酸、约6个氨基酸至约30个氨基酸、约6个氨基酸至约25个氨基酸、约6个氨基酸至约20个氨基酸、约6个氨基酸至约15个氨基酸、约6个氨基酸至约10个氨基酸、约6个氨基酸至约9个氨基酸、约6个氨基酸至约8个氨基酸、约7个氨基酸至约50个氨基酸、约7个氨基酸至约45个氨基酸、约7个氨基酸至约40个氨基酸、约7个氨基酸至约35个氨基酸、约7个氨基酸至约30个氨基酸、约7个氨基酸至约25个氨基酸、约7个氨基酸至约20个氨基酸、约7个氨基酸至约15个氨基酸、约7个氨基酸至约10个氨基酸、约7个氨基酸至约9个氨基酸、约8个氨基酸至约50个氨基酸、约8个氨基酸至约45个氨基酸、约8个氨基酸至约40个氨基酸、约8个氨基酸至约35个氨基酸、约8个氨基酸至约30个氨基酸、约8个氨基酸至约25个氨基酸、约8个氨基酸至约20个氨基酸、约8个氨基酸至约15个氨基酸、约8个氨基酸至约10个氨基酸、约10个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约45个氨基酸、约10个氨基酸至约40个氨基酸、约10个氨基酸至约35个氨基酸、约10个氨基酸至约30个氨基酸、约10个氨基酸至约25个氨基酸、约10个氨基酸至约20个氨基酸、约10个氨基酸至约15个氨基酸、约15个氨基酸至约50个氨基酸、约15个氨基酸至约45个氨基酸、约15个氨基酸至约40个氨基酸、约15个氨基酸至约35个氨基酸、约15个氨基酸至约30个氨基酸、约15个氨基酸至约25个氨基酸、约15个氨基酸至约20个氨基酸、约20个氨基酸至约50个氨基酸、约20个氨基酸至约45个氨基酸、约20个氨基酸至约40个氨基酸、约20个氨基酸至约35个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约20个氨基酸至约25个氨基酸、约25个氨基酸至约50个氨基酸、约25个氨基酸至约45个氨基酸、约25个氨基酸至约40个氨基酸、约25个氨基酸至约35个氨基酸、约25个氨基酸至约30个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约30个氨基酸至约45个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸、约30个氨基酸至约35个氨基酸、约35个氨基酸至约50个氨基酸、约35个氨基酸至约45个氨基酸、约35个氨基酸至约40个氨基酸、约40个氨基酸至约50个氨基酸、约40个氨基酸至约45个氨基酸、约45个氨基酸至约50个氨基酸。在从野生型全长毛细胞靶蛋白的序列中删除两个或更多个氨基酸的一些实施方案中，所述两个或更多个删除的氨基酸在野生型全长蛋白质的序列中可以是连续的。在从野生型全长毛细胞靶蛋白序列中删除两个或更多个氨基酸的其它实例中，所述两个或更多个删除的氨基酸在野生型全长蛋白序列中不是连续的。本领域技术人员将理解，可删除在不同物种的野生型全长毛细胞靶蛋白之间不保守的氨基酸而不会损失活性，然而不应删除在不同物种的野生型全长毛细胞靶蛋白之间保守的那些氨基酸进行突变，因为它们更可能(相较于在不同物种之间不保守的氨基酸)参与活性。
在从野生型全长支持细胞靶蛋白的序列中删除两个或更多个氨基酸的一些实施方案中，所述两个或更多个删除的氨基酸在野生型全长蛋白质的序列中可以是连续的。在从野生型全长支持细胞靶蛋白的序列中删除两个或更多个氨基酸的其它实例中，所述两个或更多个删除的氨基酸在野生型全长蛋白质的序列中不是连续的。本领域技术人员将会理解，可删除在不同物种的野生型全长支持细胞靶蛋白之间不保守的氨基酸而不会损失活性，然而不应删除在不同物种的野生型全长支持细胞靶蛋白之间保守的那些氨基酸，因为它们更有可能(相较于在不同物种之间不保守的氨基酸)参与活性。
在一些实例中，活性靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)可以例如包含野生型全长靶蛋白(例如，野生型全长支持细胞靶蛋白或野生型全长毛细胞靶蛋白)的序列，所述野生型全长靶蛋白的序列从其N末端除去了1个氨基酸至约100个氨基酸、1个氨基酸至约95个氨基酸、1个氨基酸至约90个氨基酸、1个氨基酸至约85个氨基酸、1个氨基酸至约80个氨基酸、1个氨基酸至约75个氨基酸、1个氨基酸至约70个氨基酸、1个氨基酸至约65个氨基酸、1个氨基酸至约60个氨基酸、1个氨基酸至约55个氨基酸、1个氨基酸至约50个氨基酸、1个氨基酸至约45个氨基酸、1个氨基酸至约40个氨基酸、1个氨基酸至约35个氨基酸、1个氨基酸至约30个氨基酸、1个氨基酸至约25个氨基酸、1个氨基酸至约20个氨基酸、1个氨基酸至约15个氨基酸、1个氨基酸至约10个氨基酸、1个氨基酸至约9个氨基酸、1个氨基酸至约8个氨基酸、1个氨基酸至约7个氨基酸、1个氨基酸至约6个氨基酸、1个氨基酸至约5个氨基酸、1个氨基酸至约4个氨基酸、1个氨基酸至约3个氨基酸、约2个氨基酸至约100个氨基酸、约2个氨基酸至约95个氨基酸、约2个氨基酸至约90个氨基酸、约2个氨基酸至约85个氨基酸、约2个氨基酸至约80个氨基酸、约2个氨基酸至约75个氨基酸、约2个氨基酸至约70个氨基酸、约2个氨基酸至约65个氨基酸、约2个氨基酸至约60个氨基酸、约2个氨基酸至约55个氨基酸、约2个氨基酸至约50个氨基酸、约2个氨基酸至约45个氨基酸、约2个氨基酸至约40个氨基酸、约2个氨基酸至约35个氨基酸、约2个氨基酸至约30个氨基酸、约2个氨基酸至约25个氨基酸、约2个氨基酸至约20个氨基酸、约2个氨基酸至约15个氨基酸、约2个氨基酸至约10个氨基酸、约2个氨基酸至约9个氨基酸、约2个氨基酸至约8个氨基酸、约2个氨基酸至约7个氨基酸、约2个氨基酸至约6个氨基酸、约2个氨基酸至约5个氨基酸、约2个氨基酸至约4个氨基酸、约3个氨基酸至约100个氨基酸、约3个氨基酸至约95个氨基酸、约3个氨基酸至约90个氨基酸、约3个氨基酸至约85个氨基酸、约3个氨基酸至约80个氨基酸、约3个氨基酸至约75个氨基酸、约3个氨基酸至约70个氨基酸、约3个氨基酸至约65个氨基酸、约3个氨基酸至约60个氨基酸、约3个氨基酸至约55个氨基酸、约3个氨基酸至约50个氨基酸、约3个氨基酸至约45个氨基酸、约3个氨基酸至约40个氨基酸、约3个氨基酸至约35个氨基酸、约3个氨基酸至约30个氨基酸、约3个氨基酸至约25个氨基酸、约3个氨基酸至约20个氨基酸、约3个氨基酸至约15个氨基酸、约3个氨基酸至约10个氨基酸、约3个氨基酸至约9个氨基酸、约3个氨基酸至约8个氨基酸、约3个氨基酸至约7个氨基酸、约3个氨基酸至约6个氨基酸、约3个氨基酸至约5个氨基酸、约4个氨基酸至约100个氨基酸、约4个氨基酸至约95个氨基酸、约4个氨基酸至约90个氨基酸、约4个氨基酸至约85个氨基酸、约4个氨基酸至约80个氨基酸、约4个氨基酸至约75个氨基酸、约4个氨基酸至约70个氨基酸、约4个氨基酸至约65个氨基酸、约4个氨基酸至约60个氨基酸、约4个氨基酸至约55个氨基酸、约4个氨基酸至约50个氨基酸、约4个氨基酸至约45个氨基酸、约4个氨基酸至约40个氨基酸、约4个氨基酸至约35个氨基酸、约4个氨基酸至约30个氨基酸、约4个氨基酸至约25个氨基酸、约4个氨基酸至约20个氨基酸、约4个氨基酸至约15个氨基酸、约4个氨基酸至约10个氨基酸、约4个氨基酸至约9个氨基酸、约4个氨基酸至约8个氨基酸、约4个氨基酸至约7个氨基酸、约4个氨基酸至约6个氨基酸、约5个氨基酸至约100个氨基酸、约5个氨基酸至约95个氨基酸、约5个氨基酸至约90个氨基酸、约5个氨基酸至约85个氨基酸、约5个氨基酸至约80个氨基酸、约5个氨基酸至约75个氨基酸、约5个氨基酸至约70个氨基酸、约5个氨基酸至约65个氨基酸、约5个氨基酸至约60个氨基酸、约5个氨基酸至约55个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约45个氨基酸、约5个氨基酸至约40个氨基酸、约5个氨基酸至约35个氨基酸、约5个氨基酸至约30个氨基酸、约5个氨基酸至约25个氨基酸、约5个氨基酸至约20个氨基酸、约5个氨基酸至约15个氨基酸、约5个氨基酸至约10个氨基酸、约5个氨基酸至约9个氨基酸、约5个氨基酸至约8个氨基酸、约5个氨基酸至约7个氨基酸、约6个氨基酸至约100个氨基酸、约6个氨基酸至约95个氨基酸、约6个氨基酸至约90个氨基酸、约6个氨基酸至约85个氨基酸、约6个氨基酸至约80个氨基酸、约6个氨基酸至约75个氨基酸、约6个氨基酸至约70个氨基酸、约6个氨基酸至约65个氨基酸、约6个氨基酸至约60个氨基酸、约6个氨基酸至约55个氨基酸、约6个氨基酸至约50个氨基酸、约6个氨基酸至约45个氨基酸、约6个氨基酸至约40个氨基酸、约6个氨基酸至约35个氨基酸、约6个氨基酸至约30个氨基酸、约6个氨基酸至约25个氨基酸、约6个氨基酸至约20个氨基酸、约6个氨基酸至约15个氨基酸、约6个氨基酸至约10个氨基酸、约6个氨基酸至约9个氨基酸、约6个氨基酸至约8个氨基酸、约7个氨基酸至约100个氨基酸、约7个氨基酸至约95个氨基酸、约7个氨基酸至约90个氨基酸、约7个氨基酸至约85个氨基酸、约7个氨基酸至约80个氨基酸、约7个氨基酸至约75个氨基酸、约7个氨基酸至约70个氨基酸、约7个氨基酸至约65个氨基酸、约7个氨基酸至约60个氨基酸、约7个氨基酸至约55个氨基酸、约7个氨基酸至约50个氨基酸、约7个氨基酸至约45个氨基酸、约7个氨基酸至约40个氨基酸、约7个氨基酸至约35个氨基酸、约7个氨基酸至约30个氨基酸、约7个氨基酸至约25个氨基酸、约7个氨基酸至约20个氨基酸、约7个氨基酸至约15个氨基酸、约7个氨基酸至约10个氨基酸、约7个氨基酸至约9个氨基酸、约8个氨基酸至约100个氨基酸、约8个氨基酸至约95个氨基酸、约8个氨基酸至约90个氨基酸、约8个氨基酸至约85个氨基酸、约8个氨基酸至约80个氨基酸、约8个氨基酸至约75个氨基酸、约8个氨基酸至约70个氨基酸、约8个氨基酸至约65个氨基酸、约8个氨基酸至约60个氨基酸、约8个氨基酸至约55个氨基酸、约8个氨基酸至约50个氨基酸、约8个氨基酸至约45个氨基酸、约8个氨基酸至约40个氨基酸、约8个氨基酸至约35个氨基酸、约8个氨基酸至约30个氨基酸、约8个氨基酸至约25个氨基酸、约8个氨基酸至约20个氨基酸、约8个氨基酸至约15个氨基酸、约8个氨基酸至约10个氨基酸、约10个氨基酸至约100个氨基酸、约10个氨基酸至约95个氨基酸、约10个氨基酸至约90个氨基酸、约10个氨基酸至约85个氨基酸、约10个氨基酸至约80个氨基酸、约10个氨基酸至约75个氨基酸、约10个氨基酸至约70个氨基酸、约10个氨基酸至约65个氨基酸、约10个氨基酸至约60个氨基酸、约10个氨基酸至约55个氨基酸、约10个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约45个氨基酸、约10个氨基酸至约40个氨基酸、约10个氨基酸至约35个氨基酸、约10个氨基酸至约30个氨基酸、约10个氨基酸至约25个氨基酸、约10个氨基酸至约20个氨基酸、约10个氨基酸至约15个氨基酸、约20个氨基酸至约100个氨基酸、约20个氨基酸至约95个氨基酸、约20个氨基酸至约90个氨基酸、约20个氨基酸至约85个氨基酸、约20个氨基酸至约80个氨基酸、约20个氨基酸至约75个氨基酸、约20个氨基酸至约70个氨基酸、约20个氨基酸至约65个氨基酸、约20个氨基酸至约60个氨基酸、约20个氨基酸至约55个氨基酸、约20个氨基酸至约50个氨基酸、约20个氨基酸至约45个氨基酸、约20个氨基酸至约40个氨基酸、约20个氨基酸至约35个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约20个氨基酸至约25个氨基酸、约30个氨基酸至约100个氨基酸、约30个氨基酸至约95个氨基酸、约30个氨基酸至约90个氨基酸、约30个氨基酸至约85个氨基酸、约30个氨基酸至约80个氨基酸、约30个氨基酸至约75个氨基酸、约30个氨基酸至约70个氨基酸、约30个氨基酸至约65个氨基酸、约30个氨基酸至约60个氨基酸、约30个氨基酸至约55个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约30个氨基酸至约45个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸、约30个氨基酸至约35个氨基酸、约40个氨基酸至约100个氨基酸、约40个氨基酸至约95个氨基酸、约40个氨基酸至约90个氨基酸、约40个氨基酸至约85个氨基酸、约40个氨基酸至约80个氨基酸、约40个氨基酸至约75个氨基酸、约40个氨基酸至约70个氨基酸、约40个氨基酸至约65个氨基酸、约40个氨基酸至约60个氨基酸、约40个氨基酸至约55个氨基酸、约40个氨基酸至约50个氨基酸、约40个氨基酸至约45个氨基酸、约50个氨基酸至约100个氨基酸、约50个氨基酸至约95个氨基酸、约50个氨基酸至约90个氨基酸、约50个氨基酸至约85个氨基酸、约50个氨基酸至约80个氨基酸、约50个氨基酸至约75个氨基酸、约50个氨基酸至约70个氨基酸、约50个氨基酸至约65个氨基酸、约50个氨基酸至约60个氨基酸、约50个氨基酸至约55个氨基酸、约60个氨基酸至约100个氨基酸、约60个氨基酸至约95个氨基酸、约60个氨基酸至约90个氨基酸、约60个氨基酸至约85个氨基酸、约60个氨基酸至约80个氨基酸、约60个氨基酸至约75个氨基酸、约60个氨基酸至约70个氨基酸、约60个氨基酸至约65个氨基酸、约70个氨基酸至约100个氨基酸、约70个氨基酸至约95个氨基酸、约70个氨基酸至约90个氨基酸、约70个氨基酸至约85个氨基酸、约70个氨基酸至约80个氨基酸、约70个氨基酸至约75个氨基酸、约80个氨基酸至约100个氨基酸、约80个氨基酸至约95个氨基酸、约80个氨基酸至约90个氨基酸、约80个氨基酸至约85个氨基酸、约90个氨基酸至约100个氨基酸、约90个氨基酸至约95个氨基酸或约95个氨基酸至约100个氨基酸并且/或者从其C末端除去了1个氨基酸至100个氨基酸(或本文所述的该范围的任何子范围)。
在一些实施方案中，活性靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)可以例如包括野生型全长靶蛋白(例如，野生型全长支持细胞靶蛋白或野生型全长毛细胞靶蛋白)的序列，在所述野生型全长靶蛋白的序列中插入了1个氨基酸至50个氨基酸、1个氨基酸至45个氨基酸、1个氨基酸至40个氨基酸、1个氨基酸至35个氨基酸、1个氨基酸至30个氨基酸、1个氨基酸至25个氨基酸、1个氨基酸至20个氨基酸、1个氨基酸至15个氨基酸、1个氨基酸至10个氨基酸、1个氨基酸至9个氨基酸、1个氨基酸至8个氨基酸、1个氨基酸至7个氨基酸、1个氨基酸至6个氨基酸、1个氨基酸至5个氨基酸、1个氨基酸至4个氨基酸、1个氨基酸至3个氨基酸、约2个氨基酸至50个氨基酸、约2个氨基酸至45个氨基酸、约2个氨基酸至40个氨基酸、约2个氨基酸至35个氨基酸、约2个氨基酸至30个氨基酸、约2个氨基酸至25个氨基酸、约2个氨基酸至20个氨基酸、约2个氨基酸至15个氨基酸、约2个氨基酸至10个氨基酸、约2个氨基酸至9个氨基酸、约2个氨基酸至8个氨基酸、约2个氨基酸至7个氨基酸、约2个氨基酸至6个氨基酸、约2个氨基酸至5个氨基酸、约2个氨基酸至4个氨基酸、约3个氨基酸至50个氨基酸、约3个氨基酸至45个氨基酸、约3个氨基酸至40个氨基酸、约3个氨基酸至35个氨基酸、约3个氨基酸至30个氨基酸、约3个氨基酸至25个氨基酸、约3个氨基酸至20个氨基酸、约3个氨基酸至15个氨基酸、约3个氨基酸至10个氨基酸、约3个氨基酸至9个氨基酸、约3个氨基酸至8个氨基酸、约3个氨基酸至7个氨基酸、约3个氨基酸至6个氨基酸、约3个氨基酸至5个氨基酸、约4个氨基酸至50个氨基酸、约4个氨基酸至45个氨基酸、约4个氨基酸至40个氨基酸、约4个氨基酸至35个氨基酸、约4个氨基酸至30个氨基酸、约4个氨基酸至25个氨基酸、约4个氨基酸至20个氨基酸、约4个氨基酸至15个氨基酸、约4个氨基酸至10个氨基酸、约4个氨基酸至9个氨基酸、约4个氨基酸至8个氨基酸、约4个氨基酸至7个氨基酸、约4个氨基酸至6个氨基酸、约5个氨基酸至50个氨基酸、约5个氨基酸至45个氨基酸、约5个氨基酸至40个氨基酸、约5个氨基酸至35个氨基酸、约5个氨基酸至30个氨基酸、约5个氨基酸至25个氨基酸、约5个氨基酸至20个氨基酸、约5个氨基酸至15个氨基酸、约5个氨基酸至10个氨基酸、约5个氨基酸至9个氨基酸、约5个氨基酸至8个氨基酸、约5个氨基酸至7个氨基酸、约6个氨基酸至50个氨基酸、约6个氨基酸至45个氨基酸、约6个氨基酸至40个氨基酸、约6个氨基酸至35个氨基酸、约6个氨基酸至30个氨基酸、约6个氨基酸至25个氨基酸、约6个氨基酸至20个氨基酸、约6个氨基酸至15个氨基酸、约6个氨基酸至10个氨基酸、约6个氨基酸至9个氨基酸、约6个氨基酸至8个氨基酸、约7个氨基酸至50个氨基酸、约7个氨基酸至45个氨基酸、约7个氨基酸至40个氨基酸、约7个氨基酸至35个氨基酸、约7个氨基酸至30个氨基酸、约7个氨基酸至25个氨基酸、约7个氨基酸至20个氨基酸、约7个氨基酸至15个氨基酸、约7个氨基酸至10个氨基酸、约7个氨基酸至9个氨基酸、约8个氨基酸至50个氨基酸、约8个氨基酸至45个氨基酸、约8个氨基酸至40个氨基酸、约8个氨基酸至35个氨基酸、约8个氨基酸至30个氨基酸、约8个氨基酸至25个氨基酸、约8个氨基酸至20个氨基酸、约8个氨基酸至15个氨基酸、约8个氨基酸至10个氨基酸、约10个氨基酸至50个氨基酸、约10个氨基酸至45个氨基酸、约10个氨基酸至40个氨基酸、约10个氨基酸至35个氨基酸、约10个氨基酸至30个氨基酸、约10个氨基酸至25个氨基酸、约10个氨基酸至20个氨基酸、约10个氨基酸至15个氨基酸、约15个氨基酸至50个氨基酸、约15个氨基酸至45个氨基酸、约15个氨基酸至40个氨基酸、约15个氨基酸至35个氨基酸、约15个氨基酸至30个氨基酸、约15个氨基酸至25个氨基酸、约15个氨基酸至20个氨基酸、约20个氨基酸至50个氨基酸、约20个氨基酸至45个氨基酸、约20个氨基酸至40个氨基酸、约20个氨基酸至35个氨基酸、约20个氨基酸至30个氨基酸、约20个氨基酸至25个氨基酸、约25个氨基酸至50个氨基酸、约25个氨基酸至45个氨基酸、约25个氨基酸至40个氨基酸、约25个氨基酸至35个氨基酸、约25个氨基酸至30个氨基酸、约30个氨基酸至50个氨基酸、约30个氨基酸至45个氨基酸、约30个氨基酸至40个氨基酸、约30个氨基酸至35个氨基酸、约35个氨基酸至50个氨基酸、约35个氨基酸至45个氨基酸、约35个氨基酸至40个氨基酸、约40个氨基酸至50个氨基酸、约40个氨基酸至45个氨基酸或约45个氨基酸至约50个氨基酸。在一些实例中，可以将1个氨基酸至50个氨基酸(或其任何子范围)作为连续序列插入野生型全长蛋白质的序列中。在一些实例中，不将1个氨基酸至50个氨基酸(或其任何子范围)作为连续序列插入野生型全长蛋白质的序列中。如本领域中可以理解的，可以将1个氨基酸至50个氨基酸插入野生型全长蛋白质的序列的一部分中，所述野生型全长蛋白质在物种之间不是非常保守的。
本文还提供了以下实施方案：
1.一种包含至少两种不同的核酸载体的组合物，其中：
所述至少两种不同的腺相关病毒(AAV)载体中的每一种都包含编码序列，所述编码序列编码支持细胞靶蛋白的不同部分，所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；
所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码全长支持细胞靶蛋白；
所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺少内含子序列；以及
所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组核酸。
2.如实施方案1所述的组合物，其中所述编码的部分之一的氨基酸序列与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列重叠。
3.如实施方案2所述的组合物，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列与不同的编码的部分的氨基酸序列部分地重叠。
4.如实施方案2所述的组合物，其中所述重叠氨基酸序列的长度为30个氨基酸残基至约390个氨基酸残基。
5.如实施方案1-4中任一项所述的组合物，其中所述至少两种不同的载体中的每一种包含内含子的不同区段，其中所述内含子包含存在于支持细胞靶基因组DNA中的内含子的核苷酸序列，并且其中所述两个不同的区段在序列上重叠至少100个核苷酸。
6.如实施方案5所述的组合物，其中所述两个不同的区段在序列上重叠约30个核苷酸至约390个核苷酸。
7.如实施方案1-6中任一项所述的组合物，其中所述至少两种不同的载体中的每一种的核苷酸序列的长度为约30个核苷酸至约390个核苷酸。
8.如实施方案7中所述的组合物，其中所述至少两种不同的载体中的每一种的核苷酸序列的长度为30个核苷酸至340个核苷酸。
9.如实施方案1-8中任一项所述的组合物，其中所述组合物中不同载体的数目为2。
10.如实施方案9所述的组合物，其中所述两种不同的载体中的第一载体包含编码所述支持细胞靶蛋白的N末端部分的编码序列。
11.如实施方案10所述的组合物，其中所述支持细胞靶蛋白的N-末端部分的长度为约30个氨基酸至约390个氨基酸。
12.如实施方案11所述的组合物，其中所述支持细胞靶蛋白的N-末端部分的长度为约30个氨基酸至约340个氨基酸。
13.如实施方案10-12中任一项所述的组合物，其中所述第一载体还包含启动子和Kozak序列之一者或两者。
14.如实施方案13所述的方法，其中所述第一载体包含启动子，所述启动子为诱导型启动子、组成型启动子或组织特异性启动子。
15.如实施方案10-14中任一项所述的组合物，其中所述两种不同的载体中的第二载体包含编码所述支持细胞靶蛋白的C末端部分的编码序列。
16.如实施方案15所述的组合物，其中所述支持细胞靶蛋白的C-末端部分的长度为约30个氨基酸至约390个氨基酸。
17.如实施方案16所述的组合物，其中所述支持细胞靶蛋白的C-末端部分的长度为约30个氨基酸至约340个氨基酸。
18.如实施方案15-17中任一项所述的组合物，其中所述第二载体还包含poly(dA)序列。
19.一种包含两种不同的核酸载体的组合物，其中：
所述两种不同的核酸载体中的第一核酸载体包含启动子、位于所述启动子3’的编码支持细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列和位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列；以及
所述两种不同的核酸载体中的第二核酸载体包含剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3'末端的编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多聚腺苷酸化序列；
其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的氨基酸序列不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长支持细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组RNA分子。
20.如实施方案19所述的组合物，其中所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述相邻外显子之间缺乏内含子序列。
21.一种组合物，其包含：
第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3'的编码支持细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列，和位于所述剪接供体信号序列的3’的第一可检测标记基因；以及
第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二可检测标记基因、位于所述第二可检测标记基因的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；
其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长支持细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组RNA分子。
22.如实施方案21所述的组合物，其中所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述相邻外显子之间缺乏内含子序列。
23.如实施方案21所述的组合物，其中所述第一可检测标记基因或所述第二可检测标记基因是碱性磷酸酶。
24.如实施方案21或23所述的组合物，其中所述第一可检测标记基因和所述第二可检测标记基因是相同的。
25.一种组合物，其包含：
第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3’的编码支持细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列和位于所述剪接供体信号序列的3’的F1噬菌体重组发生区；和
第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二F1噬菌体重组发生区、位于所述第二F1噬菌体重组发生区的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多聚腺苷酸化序列；
其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长支持细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号与另一个转录物上的所述剪接受体信号之间发生剪接，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组RNA分子。
26.如实施方案25所述的组合物，其中所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺乏内含子序列。
27.一种包含单一腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述单一AAV载体包含编码支持细胞靶蛋白的核酸序列；以及
当被引入到灵长类动物细胞中时，在支持细胞靶基因的基因座处产生编码全长支持细胞靶蛋白的核酸，并且所述灵长类动物表达所述支持细胞靶蛋白。
28.如实施方案1-27中任一项所述的组合物，其中所述支持细胞靶基因是缝隙连接蛋白β2(GJB2)。
29.如实施方案1-27中任一项所述的组合物，其中所述支持细胞靶基因是溶质运载蛋白家族26成员4(SLC26A4)。
30.一种包含至少两种不同的核酸载体的组合物，其中：
所述至少两种不同腺相关病毒(AAV)载体中的每一种都包含编码毛细胞靶蛋白的不同部分的编码序列，所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；
所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白；
所述编码序列中的至少一个包含跨越所述毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺乏内含子序列；以及
所述至少两种不同的载体当被引入所述灵长类动物细胞时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组核酸。
31.如实施方案30所述的组合物，其中所述编码的部分中的一个的氨基酸序列与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列重叠。
32.如实施方案31所述的组合物，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列与不同的编码的部分的氨基酸序列部分地重叠。
33.如实施方案31所述的组合物，其中所述重叠的氨基酸序列的长度为30个氨基酸残基至约390个氨基酸残基。
34.如实施方案30-33中任一项所述的组合物，其中所述至少两种不同的载体中的每一种包含内含子的不同区段，其中所述内含子包含存在于毛细胞靶基因组DNA中的内含子的核苷酸序列，并且其中所述两个不同区段在序列上重叠至少100个核苷酸。
35.如实施方案34所述的组合物，其中所述两个不同的区段在序列上重叠约30个核苷酸至约390个核苷酸。
36.如实施方案30-35中任一项所述的组合物，其中所述至少两种不同的载体中的每一种的核苷酸序列的长度为约30个核苷酸至约390个核苷酸。
37.如实施方案36所述的组合物，其中所述至少两种不同的载体中的每一种的核苷酸序列的长度为30个核苷酸至340个核苷酸。
38.如实施方案30-37中任一项所述的组合物，其中所述组合物中不同载体的数量为2。
39.如实施方案38所述的组合物，其中所述两种不同的载体中的第一载体包含编码所述毛细胞靶蛋白的N末端部分的编码序列。
40.如实施方案39所述的组合物，其中所述毛细胞靶蛋白的N末端部分的长度为约30个氨基酸至约390个氨基酸。
41.如实施方案40所述的组合物，其中所述毛细胞靶蛋白的N末端部分的长度为约30个氨基酸至约340个氨基酸。
42.如实施方案39-41中任一项所述的组合物，其中所述第一载体还包含启动子和Kozak序列之一者或两者。
43.如实施方案42所述的组合物，其中所述第一载体包含启动子，所述启动子为诱导型启动子、组成型启动子或组织特异性启动子。
44.如实施方案39-41中任一项所述的组合物，其中所述两种不同的载体中的所述第二载体包含编码所述毛细胞靶蛋白的C末端部分的编码序列。
45.如实施方案44所述的组合物，其中所述毛细胞靶蛋白的C末端部分的长度为30个氨基酸至约390个氨基酸。
46.如实施方案45所述的组合物，其中所述毛细胞靶蛋白的C末端部分的长度为30个氨基酸至约340个氨基酸。
47.如实施方案44-46中任一项所述的组合物，其中所述第二载体还包含poly(dA)序列。
48.一种包含两种不同的核酸载体的组合物，其中：
所述两种不同的核酸载体中的第一核酸载体包含启动子、位于所述启动子的3’的编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列和位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列；以及
所述两种不同的核酸载体中的第二核酸载体包含剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；
其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的氨基酸序列不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组RNA分子。
49.如实施方案48所述的组合物，其中所述编码序列中的至少一个包含跨越毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述相邻外显子之间缺乏内含子序列。
50.一种组合物，其包含：
第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3’的编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列和位于所述剪接供体信号序列的3’的第一可检测标记基因；和
第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二可检测标记基因、位于所述第二可检测标记基因的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；
其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组RNA分子。
51.如实施方案50所述的组合物，其中所述编码序列中的至少一个包含跨越毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述相邻外显子之间缺乏内含子序列。
52.如实施方案50所述的组合物，其中所述第一可检测标记基因或所述第二可检测标记基因是碱性磷酸酶。
53.如实施方案50或52所述的组合物，其中所述第一可检测标记基因和所述第二可检测标记基因是相同的。
54.一种组合物，其包含：
第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3’的编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列和位于所述剪接供体信号序列的3’的F1噬菌体重组发生区；和
第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二F1噬菌体重组发生区、位于所述第二F1噬菌体重组发生区的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；
其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组RNA分子。
55.如实施方案54所述的组合物，其中所述编码序列中的至少一个包含跨越毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺乏内含子序列。
56.如实施方案30-55中任一项所述的组合物，其中所述毛细胞靶基因是OTOF基因、TRIOBP基因或STRC基因。
57.一种包含单一腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述单一AAV载体包含编码毛细胞靶蛋白的核酸序列；以及
当被引入到灵长类动物细胞时，在所述毛细胞靶基因的基因座处产生编码全长毛细胞靶蛋白的核酸，并且所述灵长类动物表达所述毛细胞靶蛋白。
58.如实施方案57所述的组合物，其中所述毛细胞靶基因是PJVK基因、OTOF基因、NDP基因、CLRN1基因、TRIOBP基因、STRC基因、TMC1基因、VEGF基因或HSPA1A基因。
59.如实施方案1-58中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
60.一种试剂盒，其包含实施方案1-59中任一项所述的组合物。
61.如实施方案60所述的试剂盒，所述试剂盒还包括包含所述组合物的预装式注射器。
62.一种校正灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶基因缺陷的方法，所述方法包括：
向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案1-29中任一项所述的组合物，
其中所述施用修复所述灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶基因缺陷。
63.一种升高灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶蛋白的表达水平的方法，所述方法包括向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案1至29中任一项所述的组合物，
其中所述施用使得所述灵长类动物内耳的所述支持细胞中的所述支持细胞靶蛋白的表达水平升高。
64.如实施方案63所述的方法，其中所述灵长类动物先前已被确定具有缺陷型支持细胞靶基因。
65.一种治疗被鉴定为具有缺陷型支持细胞靶基因的灵长类动物的非综合征性感音神经性听力损失的方法，所述方法包括：
向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案1-29中任一项所述的组合物。
66.如实施方案65所述的方法，所述方法还包括在所述施用步骤之前，确定所述灵长类动物具有缺陷型支持细胞靶基因。
67.一种恢复被鉴定或诊断为患有听力损失的灵长类动物的听力的方法，所述方法包括：
向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案1-29中任一项所述的组合物。
68.如实施方案67所述的方法，所述方法还包括在所述施用步骤之前，确定所述灵长类动物具有缺陷型支持细胞靶基因。
69.一种恢复被鉴定或诊断为患有内耳病症的灵长类动物的突触并且/或者保留其螺旋神经节神经的方法，所述方法包括：
向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案1-29中任一项所述的组合物。
70.如实施方案69所述的方法，所述方法还包括在所述施用步骤之前，确定所述灵长类动物具有缺陷型支持细胞靶基因。
71.一种方法，所述方法包括向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案1-29中任一项所述的组合物。
72.如实施方案71所述的方法，其中所述灵长类动物先前已被鉴定为具有缺陷型支持细胞靶基因。
73.一种校正灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶基因缺陷的方法，所述方法包括：
向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案30-59中任一项所述的组合物，
其中所述施用修复所述灵长类动物内耳的毛细胞中的所述毛细胞靶基因缺陷。
74.一种升高灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶蛋白的表达水平的方法，所述方法包括向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案30-59中任一项所述的组合物，
其中所述施用使得所述灵长类动物内耳的毛细胞中的所述毛细胞靶蛋白的表达水平升高。
75.如实施方案74所述的方法，其中所述灵长类动物先前已被确定具有缺陷型毛细胞靶基因。
76.一种治疗被鉴定为具有缺陷型毛细胞靶基因的灵长类动物的非综合征性感音神经性听力损失的方法，所述方法包括：
向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案30-59中任一项所述的组合物。
77.如实施方案76所述的方法，所述方法还包括在所述施用步骤之前，确定所述灵长类动物具有缺陷型毛细胞靶基因。
78.一种恢复被鉴定或诊断为患有听力损失的灵长类动物的听力的方法，所述方法包括：
向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案30-59中任一项所述的组合物。
79.如实施方案78所述的方法，所述方法还包括，在所述施用步骤之前，确定所述灵长类动物具有缺陷型毛细胞靶基因。
80.一种恢复被鉴定或诊断为患有内耳病症的灵长类动物的突触并且/或者保留其螺旋神经节神经的方法，所述方法包括：
向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案30-59中任一项所述的组合物。
81.如实施方案80所述的方法，所述方法还包括，在所述施用步骤之前，确定所述灵长类动物具有缺陷型毛细胞靶基因。
82.一种方法，所述方法包括向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的实施方案30-59中任一项所述的组合物。
83.如实施方案82所述的方法，其中所述灵长类动物先前已被鉴定为具有缺陷型毛细胞靶基因。
84.如实施方案1-26或30-56中任一项所述的组合物，其中所述第二核酸载体还包含去稳定序列。
85.如实施方案84所述的组合物，其中所述第二核酸载体还包含FKBP12去稳定序列。
86.如实施方案27-29或57-59中任一项所述的组合物，其中所述核酸载体还包含去稳定序列。
87.如实施方案86所述的组合物，其中所述核酸载体包含FKBP12去稳定序列。
除非另有限定，否则本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属的领域内的普通技术人员通常理解的意义相同的意义。本文描述了用于本发明的方法和材料；还可使用本领域已知的其他合适的方法和材料。所述材料、方法和实例仅是说明性的而不是意图进行限制。本文引用的所有公布、专利申请、专利、序列、数据库条目和其它参考文献通过引用以其整体并入本文。在有冲突的情况下，将以本说明书(包括定义)为准。
附图说明
图1A是在通过圆形窗口将单个Anc80-GFP AAV载体直接施用于内耳后，食蟹猕猴(非人灵长类动物)的耳蜗组织的Myo7a/Iba-1免疫荧光染色的代表性图像。
图1B是与图1A中相同的食蟹猕猴的耳蜗组织的Anc80-GFP免疫荧光染色的代表性图像。
图1C是与图1A中相同的食蟹猕猴的耳蜗组织的Myo7a/Iba-1和Anc80-GFP的合并的免疫荧光染色的代表性图像。
具体实施方式
本文提供了包含至少两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述至少两种不同的腺相关病毒(AAV)载体中的每一种均包含编码序列，所述编码序列编码支持细胞靶蛋白的不同部分，所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码全长支持细胞靶蛋白；所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺乏内含子序列；以及所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组核酸。
本文提供了包含两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述两种不同的核酸载体中的第一核酸载体包含启动子、位于所述启动子的3’的编码支持细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列和位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列；以及所述两种不同的核酸载体中的第二核酸载体包含剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3'末端的编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多聚腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的氨基酸序列不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长支持细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组RNA分子。
本文提供了组合物，其包含：第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3'的编码支持细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列，和位于所述剪接供体信号序列的3’的第一可检测标记基因；和第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二可检测标记基因、位于所述第二可检测标记基因的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长支持细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组RNA分子。
本文还提供了组合物，其包含：第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3'的编码支持细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列，和位于所述剪接供体信号序列的3’的F1噬菌体重组发生区；和第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二F1噬菌体重组发生区、位于所述第二F1噬菌体重组发生区的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码支持细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长支持细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组RNA分子。
本文提供了包含单一腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述单一AAV载体包含编码支持细胞靶蛋白的核酸序列；以及当被引入到灵长类动物细胞中时，在支持细胞靶基因的基因座处产生编码全长支持细胞靶蛋白的核酸，并且所述灵长类动物表达所述支持细胞靶蛋白。
本文提供了包含至少两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述至少两种不同的腺相关病毒(AAV)载体中的每一种均包含编码序列，所述编码序列编码毛细胞靶蛋白的不同部分，所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码全长毛细胞靶蛋白；所述编码序列中的至少一个包含跨越毛细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺乏内含子序列；以及所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组核酸。
本文提供了包含两种不同的核酸载体的组合物，其中：所述两种不同的核酸载体中的第一核酸载体包含启动子、位于所述启动子的3’的编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列和位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列；以及所述两种不同的核酸载体中的第二核酸载体包含剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3'末端的编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多聚腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的氨基酸序列不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组RNA分子。
本文提供了组合物，其包含：第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3’的编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列，和位于所述剪接供体信号序列的3’的第一可检测标记基因；和第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二可检测标记基因、位于所述第二可检测标记基因的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的所述剪接供体信号序列与另一个转录物上的所述剪接受体信号序列之间发生剪接，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组RNA分子。
本文提供了组合物，其包含：第一核酸载体，其包含启动子、位于所述启动子的3’的编码毛细胞靶蛋白的N末端部分的第一编码序列、位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列和位于所述剪接供体信号序列的3’的F1噬菌体重组发生区；和第二核酸载体，其与所述第一核酸载体不同，包含第二F1噬菌体重组发生区、位于所述第二F1噬菌体重组发生区的3’的剪接受体信号序列、位于所述剪接受体信号序列的3’末端的编码毛细胞靶蛋白的C末端部分的第二编码序列和位于所述第二编码序列的3’末端的多腺苷酸化序列；其中所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分的各自的氨基酸序列彼此不重叠，其中所述两种不同的载体中单一载体均不编码所述全长毛细胞靶蛋白，并且当所述编码序列在灵长类动物细胞中转录以产生RNA转录物时，在一个转录物上的剪接供体信号与另一个转录物上的剪接受体信号之间发生剪接，从而形成编码全长毛细胞靶蛋白的重组RNA分子。
本文还提供了包含单一腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述单一AAV载体包含编码毛细胞靶蛋白的核酸序列；并且当被引入到灵长类动物细胞时，在所述毛细胞靶基因的基因座处产生编码全长毛细胞靶蛋白的核酸，并且所述灵长类动物表达所述毛细胞靶蛋白。
还提供了包括本文所述的任何组合物的试剂盒。本文还提供了包括向哺乳动物的耳蜗施用治疗有效量的本文所述的任何组合物的方法。
还提供了校正灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶基因缺陷的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用修复所述灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶基因缺陷。
还提供了校正灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶基因缺陷的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用修复所述灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶基因缺陷。
本文还提供了升高灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶蛋白的表达水平的方法，所述方法包括向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用使得所述灵长类动物内耳的支持细胞中的所述支持细胞靶蛋白的表达水平升高。
本文还提供了升高灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶蛋白的表达水平的方法，所述方法包括向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用使得所述灵长类动物内耳的所述毛细胞中的所述毛细胞靶蛋白的表达水平升高。
本文还提供了治疗被鉴定为具有缺陷型支持细胞靶基因的灵长类动物的听力损失，例如非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失的方法，所述方法包括：向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
本文还提供了治疗被鉴定为具有缺陷型毛细胞靶基因的灵长类动物的听力损失(例如非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)的方法，所述方法包括：向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
本文还提供了恢复被鉴定或诊断为听力损失的灵长类动物的听力的方法，所述方法包括：向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
本文还提供了恢复被鉴定或诊断为患有内耳病症的灵长类动物的突触并且/或者保存其螺旋神经节神经的方法，所述方法包括：向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
本文还提供了包括向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物的方法。
组合物、试剂盒和方法的其它非限制性方面在本文中进行了描述，并且可以以任意组合使用而不受限制。
缝隙连接蛋白β2(GJB2)
GJB2基因编码缝隙连接蛋白β2(缝隙连接蛋白家族的成员)。缝隙连接蛋白是参与细胞内通讯的专门蛋白，也称为连结蛋白。GJB2中的突变已与听力损失和耳聋相关联(Amorini等人，Ann.Hum.Genet.79(5):341-349,2015；Qing等人，Genet.TestMol.Biomarkers19(1):52-58,2015)。
人GJB2基因位于染色体13q12上。其包含2个外显子，涵盖约5千碱基(kb)(NCBI登录号NG008358.1)。从人GJB2基因表达的全长野生型GJB2蛋白的长度为226个氨基酸。
GJB2基因中的各种突变与听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)相关联。例如，在65.5％的来自西西里岛东部的患者中发现c.35delG等位基因(Amorini等人，Ann.Hum.Genet.79(5):341-349,2015)。
在患有非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失的受试者中检测到的GJB2基因中的其它示例性突变，以及对编码GJB2的核酸进行测序的方法描述于例如Snoeckx等人，Am.J.Hum.Genet 77:945-957,2005；Welch等人，Am.J.Med.Genet A143:1567-1573,2007；和Zelante等人，Hum.Mol.Genet.6:1605-1609,1997中。检测基因中的突变的方法是本领域公知的。此类技术的非限制性实例包括：实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、PCR、测序、Southern印迹和Northern印迹。
示例性人野生型GJB2蛋白为或包括SEQ ID NO:1的序列。编码野生型GJB2蛋白的核酸的非限制性实例为或包括SEQ ID NO:2。如在本领域中可以理解的，可对SEQ ID NO:2中的至少一些或全部密码子进行密码子优化以允许在非人哺乳动物中的最佳表达。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，GJB2蛋白包含与SEQ ID NO:1具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
人全长野生型GJB2蛋白(SEQ ID NO:1)
人野生型GJB2 cDNA(SEQ ID NO:2)
人野生型GJB2基因组DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:3。SEQ ID NO:3中的外显子是：核苷酸位置1-156(外显子1)和核苷酸位置3336-5469(外显子2)。内含子位于SEQID NO:3中的这些外显子中的每一个之间，即，在核苷酸位置157-3335处(内含子1)。人野生型GJB2基因序列(SEQ ID NO:3)(NCBI参考序列：NG_008358.1)
溶质载体家族26成员4(SLC26A4)
SLC26A4基因编码Pendred蛋白，并且与硫酸盐转运蛋白具有同源性。SLC26A4中的突变与听力损失和耳聋相关联(Albert等人，Eur.J.Hum.Genet.14:773-779,2006；和Qing等人，Genet.Test Mol.Biomarkers 19(1):52-58,2015)。
人SLC26A4基因位于染色体7q22上。其包含21个外显子，涵盖约57千碱基(kb)(NCBI登录号NG_008489.1)。从人SLC26A4基因表达的全长野生型SLC26A4蛋白的长度为780个氨基酸。
SLC26A4基因的各种突变与听力损失相关联。例如，在患有非综合征性听力损失的中国和美国患者中，已经报道了点突变V250A、D266N、E303Q、F345S、D697、K715N和E737D(Dai等人，Physiol Genomics 38(3):281-290,2015)。
在患有非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失的受试者中检测到的SLC26A4基因的其它示例性突变，以及对编码SLC26A4的核酸进行测序的方法描述于例如Albert等人，Eur.J.Hum.Genet.14:773-779,2006；和Qing等人，Genet.TestMol.Biomarkers 19(1):52-58,2015中。检测基因中的突变的方法是本领域公知的。此类技术的非限制性实例包括：实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、PCR、测序、Southern印迹和Northern印迹。
示例性人野生型SLC26A4蛋白为或包括SEQ ID NO:4的序列。编码野生型SLC26A4蛋白的核酸的非限制性实例为或包括SEQ ID NO:5或6.如在本领域中可理解的，可对SEQID NO:5或6中的至少一些或全部密码子进行密码子优化以允许在非人哺乳动物中的最佳表达。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述SLC26A4蛋白包含与SEQ IDNO:4具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
人全长野生型SLC26A4蛋白(SEQ ID NO:4)
示例性人野生型SLC26A4 cDNA(SEQ ID NO:5)
示例性人野生型SLC26A4 cDNA(SEQ ID NO:6)
人野生型SLC26A4基因组的非限制性实例是SEQ ID NO:7。SEQ ID NO:7中的外显子是：核苷酸位置1-221(外显子1)、核苷酸位置1005-1171(外显子2)、核苷酸位置2262-2801(外显子3)、核苷酸位置11504-11614(外显子4)、核苷酸位置13530-13714(外显子5)、核苷酸位置14311-14475(外显子6)、核苷酸位置22568-22720(外显子7)、核苷酸位置22821-22903(外显子8)、核苷酸位置28419-28566(外显子9)、核苷酸位置29490-29603(外显子10)、核苷酸位置33769-33846(外显子11)、核苷酸位置33987-34082(外显子12)、核苷酸位置35299-35405(外显子13)、核苷酸位置37408-37477(外显子14)、核苷酸位置39449-39541(外显子15)、核苷酸位置40467-40562(外显子16)、核苷酸位置41193-41423(外显子17)、核苷酸位置43697-43751(外显子18)、核苷酸位置49420-49565(外显子19)、核苷酸位置51905-51988(外显子20)和核苷酸位置56348-57175(外显子21)。内含子位于SEQ ID NO:7中的这些外显子中的每一个外显子之间，即，处于核苷酸位置222-1004(内含子1)、核苷酸位置1172-2261(内含子2)、核苷酸位置2802-11503(内含子3)、核苷酸位置11615-13529(内含子4)、核苷酸位置13715-14310(内含子5)、核苷酸位置14476-22567(内含子6)、核苷酸位置22721-22820(内含子7)、核苷酸位置22904-28418(内含子8)、核苷酸位置28567-29489(内含子9)、核苷酸位置29604-33768(内含子10)、核苷酸位置33847-33986(内含子11)、核苷酸位置34083-35298(内含子12)、核苷酸位置35406-37407(内含子13)、核苷酸位置37478-39448(内含子14)、核苷酸位置39542-40466(内含子15)、核苷酸位置40563-41192(内含子16)、核苷酸位置41424-43696(内含子17)、核苷酸位置43752-49419(内含子18)、核苷酸位置49566-51904(内含子19)和核苷酸位置51989-56347(内含子20)。
人野生型SLC26A4基因序列(SEQ ID NO:7)(NCBI参考序列：NG_008489.1)
耳畸蛋白
迄今为止，已经鉴定出人OTOF基因中的数百个突变引起了严重的语前性耳聋DFNB9。此类突变是导致不同人群中2-8％的先天具有常染色体隐性遗传性非综合征性聋人耳聋的原因(Rodríguez-Ballesteros等人(2008)Hum.Mutat.29 823–831；Choi等人(2009)Clinical Genetics 75 237–243；Duman等人(2011)Genet Test Mol Biomarkers 15 29–33；Varga等人(2006)J Med Genet 43576–581；Iwasa等人(2013)BMC Med.Genet.14 95)。例如，耳畸蛋白的保守C2C结构域中位置490和515处的外显子15中的两个取代导致DFNB9(Mirqhomizadeh等人(2002)Neurobiol.Dis.10(2):157-164)。Migliosi等人在患有语前聋非综合征性听力损失的西班牙患者中发现了OTOF中的新型突变Q829X(Migliosi等人(2002)J.Med.Genet.39(7):502-506)。
患有听力损失的受试者中检测到的耳畸蛋白基因中的其它示例性突变和编码耳畸蛋白的核酸的测序方法描述于例如Rodriguez-Ballesteros等人(2003)Hum Mutat.22:451-456；Wang等人(2010)BMC Med Genet.11:79；Yildirim-Baylan等人(2014)Int.J.Pediatr.Otorhinolaryngol 78:950-953；Choi等人(2009)Clin.Genet.75(3):237-243和Marlin等人(2010)Biochem Biophys Res Commun394:737-742中。
至少在生命的最初十年，DFNB9患者的耳声发射正常，表明内耳的形态完整性和外毛细胞的正常功能。除了缺乏突触传递和随后的突触损失以外，至少在人生命的最初十年中，DFNB9中保留了内耳的形态学和生理学。
对小鼠模型的研究表明，突触在结构上是正常的，并且IHC在出生后第一周内在小鼠中保持正常的突触数量。在P6与P15之间，约有一半的突触丢失(Roux等人(2006)Cell127 277–289)。动物模型允许通过记录囊泡融合后质膜电容的变化和听神经的活性来研究耳畸蛋白中的突变对突触传递的影响。在耳畸蛋白敲除(Otof-/-)小鼠中，通过去极化诱导的Ca2+通过电压门控的Ca2+通道流入，IHC中几乎没有胞吐作用被触发(Roux等人(2006)Cell 127 277–289)。在C2F结构域中存在随机点突变的严重听力受损的pachanga(OtofPga /Pga)小鼠中，IHC的短(<10ms)去极化引起了与野生型小鼠相似大小的囊泡融合，但持续刺激发现向容易释放的池补充囊泡存在严重缺陷(Pangrsic等人(2010)Nat.Neurosci.13869–876)。在具有仅轻度提高的听力阈值，但语音理解能力严重降低并伴有温度依赖性耳聋的人患者中发现的p.Ile515Thr突变(Varga等人(2006)J Med Genet 43 576–581)在小鼠模型中进行研究时发现了中间表型(Strenzke等人(2016)EMBO J.35:2519–2535)。当通过ABR评估时，这些OtofI515T/I515T小鼠显示出适度的听力阈值升高，I波振幅减小，但在行为测试和单个听觉神经单位记录中听觉阈值正常。RRP的胞吐作用仍然完整，但持续的胞吐作用减少了，尽管不如OtofPga/Pga中严重。在室温下在野生型小鼠中，在持续刺激过程中，每个活性区每秒可融合750个囊泡，在OtofI515T/I515T小鼠中，该速率下降至350个囊泡/秒/活性区，在OtofPga/Pga IHC中，该速率下降至200个囊泡/秒/活性区(Pangrsic等人(2010)Nat.Neurosci.13 869–876；Strenzke等人(2016)EMBO J.352519–2535)。这与IHC的质膜上的较低的耳畸蛋白水平相关，表明耳畸蛋白的量随胞吐作用和听力而变化(Strenzke等人(2016)EMBO J.35 2519–2535)。
检测基因中的突变的方法是本领域公知的。此类技术的非限制性实例包括：实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、PCR、测序、Southern印迹和Northern印迹。
OTOF基因编码耳畸蛋白，一种在耳蜗毛细胞中参与突触囊泡胞吐作用的蛋白质(参见，例如，Johnson和Chapman(2010)J.Cell Biol.191(1):187-198；和Heidrych等人(2008)Hum.Mol.Genet.17:3814-3821)。
人OTOF基因位于染色体2p23.3上。其包含48个外显子，涵盖约132千碱基(kb)(NCBI登录号NG009937.1)。编码在大脑中表达的耳畸蛋白的长形式的mRNA包含48个外显子(Yasunaga等人，Am.J.Hum.Genet.67:591-600,2000)。Yasunaga等人，Am.J.Hum.Genet.67:591-600,2000的表2中描述了可用于扩增OTOF基因中的48个外显子中的每一个的正向和反向引物。在一些实例中，全长OTOF蛋白是全长野生型OTOF蛋白。从人OTOF基因表达的全长野生型OTOF蛋白的长度为1997个氨基酸。
示例性人野生型耳畸蛋白为或包括SEQ ID NO:8-12中的任一个的序列。人耳畸蛋白的异型体e(SEQ ID NO:12)由mRNA编码，所述mRNA包含耳畸蛋白基因的外显子48，并且不包含其外显子47(Yasunaga等人，Am.J.Hum.Genet.67:591-600,2000)。在一些实施方案中，活性耳畸蛋白具有SEQ ID NO:12的序列，但缺失包括Strenzke等人，EMBO J.35(23):2499-2615,2016)中鉴定的RXR基序的20个氨基酸。编码野生型耳畸蛋白的核酸的非限制性实例为或包括SEQ ID NO:13-17中的任一个。如本领域中可理解的，可对SEQ ID NO:13-17中的至少一些或全部密码子进行密码子优化以允许在非人类哺乳动物或人中的最佳表达。人耳畸蛋白的直向同源物是本领域已知的。人规范(长)异型体序列(耳畸蛋白)(SEQ ID NO:8)(也称为耳畸蛋白异型体a)(NCBI登录号AAD26117.1)
人异型体2(短1)(耳畸蛋白)(SEQ ID NO:9)(也称为耳畸蛋白异型体d)(NCBI登录号NP_919304.1)
人异型体3(短2)(耳畸蛋白)(SEQ ID NO:10)(也称为耳畸蛋白异型体c)(NCBI登录号NP_919303.1)
人异型体4(短3)(耳畸蛋白)(SEQ ID NO:11)(也称为耳畸蛋白异型体b)(NCBI登录号NP_004793.2)
人异型体5(短4)(耳畸蛋白)(SEQ ID NO:12)(也称为耳畸蛋白异型体e)(NCBI登录号NP_001274418.1)
完整cds(耳畸蛋白cDNA)(SEQ ID NO:13)(编码SEQ ID NO:8的蛋白质)
人耳畸蛋白转录变体1(SEQ ID NO:14)(编码SEQ ID NO:8的蛋白质)
人耳畸蛋白转录变体2(SEQ ID NO:15)(编码SEQ ID NO:11的蛋白质)
人耳畸蛋白转录变体3(SEQ ID NO:16)(编码SEQ ID NO:8的蛋白质)
人耳畸蛋白转录变体4(SEQ ID NO:17)(编码SEQ ID NO:9的蛋白质)
人耳畸蛋白转录变体5(SEQ ID NO:18)(编码SEQ ID NO:12的蛋白质)
人野生型硬纤毛蛋白基因组DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:19。SEQ IDNO:19中的外显子是：核苷酸位置5001-5206(外显子1)、核苷酸位置25925-25983(外显子2)、核苷酸位置35779-35867(外显子3)、核苷酸位置44590-44689(外显子4)、核苷酸位置47100-47281(外显子5)、核苷酸位置59854-59927(外显子6)、核苷酸位置61273-61399(外显子7)、核苷酸位置61891-61945(外显子8)、核苷酸位置68626-68757(外显子9)、核苷酸位置73959-74021(外显子10)、核苷酸位置74404-74488(外显子11)、核苷酸位置79066-79225(外显子12)、核苷酸位置80051-80237(外显子13)、核苷酸位置81107-81293(外显子14)、核苷酸位置82690-82913(外显子15)、核苷酸位置83388-83496(外显子16)、核苷酸位置84046-84226(外显子17)、核苷酸位置84315-84435(外显子18)、核苷酸位置85950-86050(外显子19)、核苷酸位置86193-86283(外显子20)、核苷酸位置86411-86527(外显子21)、核苷酸位置86656-86808(外显子22)、核苷酸位置87382-87571(外显子23)、核苷酸位置87661-87785(外显子24)、核苷酸位置88206-88340(外显子25)、核苷酸位置89025-89186(外显子26)、核苷酸位置89589-89708(外显子27)、核苷酸位置90132-90293(外显子28)、核苷酸位置90405-90567(外显子29)、核苷酸位置91050-91180(外显子30)、核苷酸位置92549-92578(外显子31)、核苷酸位置92978-93106(外显子32)、核苷酸位置95225-95291(外显子33)、核苷酸位置96198-96334(外显子34)、核苷酸位置96466-96600(外显子35)、核苷酸位置96848-96985(外显子36)、核苷酸位置97623-97750(外显子37)、核苷酸位置97857-98027(外显子38)、核苷酸位置98670-98830(外显子39)、核苷酸位置99593-99735(外显子40)、核苷酸位置100128-100216(外显子41)、核苷酸位置101518-101616(外显子42)、核苷酸位置101762-102003(外显子43)、核苷酸位置102669-102847(外显子44)、核苷酸位置102952-103052(外显子45)、核苷酸位置103494-103691(外显子46)、核苷酸位置105479-106496(外显子47)和外显子48(以CCGGCCCGAC起始的序列(SEQ ID NO:89)；另请参见Yasunaga等人，Am.J.Hum.Genet.67:591-600,2000中对该外显子的描述)。
内含子位于SEQ ID NO:19中每个相邻的外显子对之间，即，处于核苷酸位置100-5001(内含子1)、核苷酸5207-25924(内含子2)、核苷酸位置25984-35778(内含子3)、核苷酸位置35868-44589(内含子4)、核苷酸位置44690-47099(内含子5)、核苷酸位置47282-59853(内含子6)、核苷酸位置59928-61272(内含子7)、核苷酸位置61400-61890(内含子8)、核苷酸位置61946-68625(内含子9)、核苷酸位置68758-73958(内含子10)、核苷酸位置74022-74403(内含子11)、核苷酸位置74489-79065(内含子12)、核苷酸位置79226-80050(内含子13)、核苷酸位置80238-81106(内含子14)、核苷酸位置81294-82689(内含子15)、核苷酸位置82914-83387(内含子16)、核苷酸位置83497-84045(内含子17)、核苷酸位置84227-84314(内含子18)、核苷酸位置84436-85949(内含子19)、核苷酸位置86051-86192(内含子20)、核苷酸位置86284-86410(内含子21)、核苷酸位置86528-86655(内含子22)、核苷酸位置86809-87381(内含子23)、核苷酸位置87572-87660(内含子24)、核苷酸位置87786-88205(内含子25)、核苷酸位置88341-89024(内含子26)、核苷酸位置89187-89588(内含子27)、核苷酸位置89709-90131(内含子28)、核苷酸位置90294-90404(内含子29)、核苷酸位置90568-91049(内含子30)、核苷酸位置91181-92548(内含子31)、核苷酸位置92579-92977(内含子32)、核苷酸位置93107-95224(内含子33)、核苷酸位置95292-96197(内含子34)、核苷酸位置96335-96465(内含子35)、核苷酸位置96601-96847(内含子36)、核苷酸位置96986-97622(内含子37)、核苷酸位置97751-97856(内含子38)、核苷酸位置98028-98669(内含子39)、核苷酸位置98831-99592(内含子40)、核苷酸位置99736-100127(内含子41)、核苷酸位置100217-101517(内含子42)、核苷酸位置101617-101761(内含子43)、核苷酸位置102004-102668(内含子44)、核苷酸位置102848-102951(内含子45)、核苷酸位置103053-103494(内含子46)、核苷酸位置103692-105478(内含子47)和核苷酸位置106497-108496(内含子48)。
人耳畸蛋白基因序列(SEQ ID NO:19)(NCBI登录号NG_009937.1)
Norrin胱氨酸结生长因子(NDP)
NDP基因编码“norrin胱氨酸结生长因子”(NDP)。人ND基因位于染色体Xp11.3上。其包含3个外显子，涵盖约千碱基(kb)(NCBI登录号NG_009832.1)。NDP编码分泌的norrin蛋白，所述蛋白在通过(FZDA)和(LRP5)共受体的Wnt信号传导路径的视网膜血管生成中发挥作用。NDP中的突变与诺里病(Norrie disease)假性神经胶质瘤(一种特征在于儿童早期视网膜病变的X连锁隐性综合征性听力损失)相关联。约有三分之一的诺里病患者会发展为进行性听力损失，超过一半的人会经历运动技能的发育迟缓。
NDP基因中的各种突变与听力损失(例如，诺里病假性神经胶质瘤)相关联。例如，p.His4ArgfsX21、p.Asp23GlufsX9、p.Arg38Cys、p.Ile48ValfsX55、p.His50Asp、p.Ser57*、p.Cys93Arg、p.Lys104Gln、p.Gly113Asp、p.Arg121Gln和p.Cys126Arg突变各自均与诺里病假性神经胶质瘤相关联。参见，例如，Musada等人，Mol.Vis.22:491-502,2016；Chamney等人，Eye(Lond)25(12):1658,2011；Liu等人，J Chin.Med.Assoc.79(11):633-638,2016；和Parzefall等人，Audiol.Neurootol.19(3):203-209,2014。
检测基因中的突变的方法是本领域公知的。此类技术的非限制性实例包括：实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、PCR、测序、Southern印迹和Northern印迹。
示例性人野生型NDP蛋白为或包括SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27的序列。编码野生型NDP蛋白的核酸的非限制性实例为或包括SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:24。如本领域中可以理解的，可对SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:24中的至少一些或全部密码子进行密码子优化以允许在非人类哺乳动物中的最佳表达。
人成熟NDP蛋白(SEQ ID NO:20)(NCBI登录号NP_000257.1)
人成熟NDP cDNA(SEQ ID NO:21)
人野生型NDP基因组DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:22。SEQ ID NO:22中的外显子是：核苷酸位置1-87(外显子1)；核苷酸位置88-468(外显子2)和核苷酸位置469-1719(外显子3)。
人NDP基因序列(SEQ ID NO:22)(NCBI参考序列：NG_009832.1)
小鼠成熟NDP蛋白(SEQ ID NO:23)(NCBI登录号NP_035013.1)
小鼠成熟NDP cDNA(SEQ ID NO:24)
恒河猴成熟NDP蛋白(SEQ ID NO:25)(NCBI登录号NP_001253901.1)
大鼠成熟NDP蛋白(SEQ ID NO:26)(NCBI登录号NP_001102284.1)
黑猩猩NDP蛋白(SEQ ID NO:27)(NCBI登录号XP_016799622.1)
Trio Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子(TRIO)和F-肌动蛋白结合蛋白(TRIOBP)
TRIOBP基因编码“trio Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子(TRIO)和F-肌动蛋白结合蛋白”(TRIOBP)(一种沿静纤毛肌动蛋白丝的长度并在内部毛细胞的静纤毛小根中表达的蛋白)。TRIOBP对于内耳中特化毛细胞的静纤毛的稳定性和刚度很重要(参见，例如，Kitajiri等人(2010)Cell 141:786-798；和Zhao等人(2015)Curr.Opin.Neurobiol.34:172-179)。
长度为约10-50μm的静纤毛对于听力和平衡是重要的。静纤毛在听力中起着机械感应作用。通过响应于声音而弯曲，它们形成了机械接收声音刺激的结构。
人TRIOBP基因位于染色体22q13.1上。其包含24个外显子，涵盖约80千碱基(kb)(Hirosawa等人(2001)DNARes 8:1-9；NCBI登录号NG_012857.1)。迄今为止，存在三个已知的TRIOBP剪接异型体家族：TRIOBP-5、TRIOBP-4和TRIOBP-1(参见，例如，Kitajiri等人(2010)Cell 141:786-798)。TRIOBP-1被普遍表达，而TRIOBP-5和TRIOBP-4主要在内耳和眼中表达。最长的异型体TRIOBP-5基因(NCBI登录号NM_001039141)包含24个外显子，TRIOBP-5异型体的翻译起始位点是在外显子3中发现的。TRIOBP-5蛋白的分子量约为218kDa。TRIOBP-4是由外显子1-6编码的基因，并与TRIOBP-5由相同的启动子表达。TRIOBP-4蛋白的分子量约为107kDa。TRIOBP-1(NCB1登录号NM-007032)由外显子11a-24编码，分子量约为72kDa，并从外显子11a中的起始位点翻译而来(参见，例如，Siepel等人(2001)J.Cell.Sci.114:389-399)。
TRIOBP基因中的各种突变已与非综合征性听力损失相关联(例如，严重的语前聋DFNB28(MIM#609761)(参见，例如，Riazuddin等人(2006)Am J Hum Genet 78:137-143)和年龄相关听力损伤(参见，例如，Hoffmann等人(2016)PLoS Genet 12(10):e1006371))。导致DFNB28的突变主要发现于TRIOBP的外显子6(一种在TRIOBP-4mRNA和TRIOBP-5mRNA中都存在的外显子)中。DFNB28-耳聋可通过产生TRIOBP-4/5缺陷型小鼠来建模，其中将小鼠外显子8(人TRIOBP-4和TRIOBP-5的外显子6的直向同源物)突变/删除(参见，例如，Kitajiri等人(2010)Cell 141:786-798)。无义突变(TRIOBP-5的外显子9中的c.5014G>T(p.Gly1672*))和移码突变(外显子6中的c.2653del(p.Arg885Alafs*120)、c.3460_3461del(p.Leu1154Alafs*29)和c.3232dup(p.Arg1078Profs*6))是在患有先天性和中度听力损伤的荷兰家族中发现的(参见，例如，Wesdorp等人(2017)Hearing Research 347:56-62)。在外显子9中发现的无义突变是仅在TRIOBP-5中存在的第一个疾病相关突变。
已在患有听力损失的受试者中检测到的TRIOBP基因中的其它示例性突变和编码TRIOBP的核酸的测序方法描述于例如Shahin等人(2006)Am J Hum Genet 78:144-152；Diaz-Horta等人(2012)PLoS One 7:e50628；Gu等人(2005)Clin.Genet.87:588-593以及Wesdorp等人(2017)Hearing Research 347:56-62中的表1中。检测基因中的突变的方法是本领域公知的。此类技术的非限制性实例包括：实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、PCR、测序、Southern印迹和Northern印迹。
示例性人野生型TRIOBP蛋白为或包括SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30或SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32的序列。编码野生型TRIOBP蛋白的核苷酸序列的非限制性实例为或包括SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:33。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述TRIOBP蛋白包含与SEQ ID NO:28具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述TRIOBP蛋白包含与SEQ ID NO:30具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述TRIOBP蛋白包含与SEQ ID NO:31具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述TRIOBP蛋白包含与SEQ ID NO:32具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
人全长野生型TRIOBP蛋白异型体5(SEQ ID NO:28)
人野生型TRIOBP异型体5cDNA(SEQ ID NO:29)
人全长野生型TRIOBP蛋白异型体1(SEQ ID NO:30)
人全长野生型TRIOBP蛋白异型体4(SEQ ID NO:31)
人全长野生型TRIOBP蛋白异型体6(SEQ ID NO:32)
人野生型TRIOBP基因DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:33。SEQ ID NO:33中的外显子是：核苷酸位置1-102(外显子1)、核苷酸位置601-709(外显子2)、核苷酸位置4319-4492(外显子3)、核苷酸位置13440-13579(外显子4)、核苷酸位置16223-16424(外显子5)、核苷酸位置18776-18947(外显子6)、核苷酸位置26198-29516(外显子7)、核苷酸位置36311-36425(外显子8)、核苷酸位置37412-38455(外显子9)、核苷酸位置41655-41732(外显子10)、核苷酸位置43908-44045(外显子11)、核苷酸位置54785-54841(外显子12)、核苷酸位置57890-57997(外显子13)、核苷酸位置58114-58203(外显子14)、核苷酸位置58563-58672(外显子15)、核苷酸位置60626-61151(外显子16)、核苷酸位置62167-62277(外显子17)、核苷酸位置68683-68830(外显子18)、核苷酸位置71087-71189(外显子19)、核苷酸位置72041-72200(外显子20)、核苷酸位置72275-72388(外显子21)、核苷酸位置74663-74749(外显子22)、核苷酸位置75614-75777(外显子23)和核苷酸位置76796-79569(外显子24)。内含子位于SEQ ID NO:33中的这些外显子的每一对之间，即处于核苷酸位置103-600(内含子1)、核苷酸位置710-4318(内含子2)、核苷酸位置4493-13439(内含子3)、核苷酸位置13580-16222(内含子4)、核苷酸位置16425-18775(内含子5)、核苷酸位置18948-26197(内含子6)、核苷酸位置29517-36310(内含子7)、核苷酸位置36426-37411(内含子8)、核苷酸位置38456-41654(内含子9)、核苷酸位置41733-43907(内含子10)、核苷酸位置44046-54784(内含子11)、核苷酸位置54842-57889(内含子12)、核苷酸位置57998-58113(内含子13)、核苷酸位置58204-58562(内含子14)、核苷酸位置58673-60625(内含子15)、核苷酸位置61152-62166(内含子16)、核苷酸位置62278-6862(内含子17)、核苷酸位置68831-71086(内含子18)、核苷酸位置71190-72040(内含子19)、核苷酸位置72201-72274(内含子20)、核苷酸位置72389-74662(内含子21)、核苷酸位置74750-75613(内含子22)和核苷酸位置75778-76795(内含子23)。
人野生型TRIOBP基因组序列(SEQ ID NO:33)(NCBI登录号NG_012857.1)
硬纤毛蛋白
STRC基因编码硬纤毛蛋白，一种通常在内耳中表达并与内耳中特化的毛细胞的静纤毛相关联的蛋白(参见，例如，Verpy等人，Nature456:255-258,2008；和Zhang等人，J.Med.Genet.44:233-240,2007)。长度为约10-50μm的静纤毛对于听力和平衡是重要的。静纤毛在听力中起着机械感应作用。通过响应于声音而弯曲，它们形成了机械接收声音刺激的结构。
人STRC基因位于染色体15q15上。其包含29个外显子，涵盖约19千碱基(kb)(Verpy等人，Nature Genetics 29(3):345-349,2001；NCBI登录号NG011636.1)。所述基因以端粒至着丝粒的取向在染色体15q15上串联复制，其中串联拷贝在染色体上的间隔小于100kb。第二拷贝的编码序列间杂有外显子20中的终止密码子，这意味着其是编码非功能性截短蛋白的“假基因”。(此后，提及“STRC基因”意指在外显子20中没有终止密码子的基因，而提及“假基因”或“STRC假基因”则表示在外显子20中具有终止密码子的基因)。在一些实例中，全长STRC蛋白是全长野生型STRC蛋白。从人STRC基因表达的全长野生型STRC蛋白的长度为1775个残基，并包含信号肽和几个疏水区段。当信号肽在野生型蛋白的加工过程中被切割掉时，所得的成熟野生型硬纤毛蛋白的长度为1719个残基。在一些实施方案中，全长STRC蛋白可包含位于成熟野生型硬纤毛蛋白的氨基酸序列的N-末端的异源信号肽。
STRC基因中的各种突变已与听力损失(例如，非症状性感音神经性听力损失)相关联。例如，在具有常染色体隐性非综合征性感音神经性耳聋-16(DFNB16)的近亲巴基斯坦家族中的外显子13中鉴定出纯合的1bp插入(Verpy等人(2001)。在具有DFNB16的家族中发现的另一个实例包括外显子5中的4bp缺失和涵盖外显子17-29的较大缺失。这两个缺失分别遗传自父亲和母亲。预测4bp缺失会导致5个框外氨基酸的翻译和外显子5中的提前终止密码子。
在具有非症状性感音神经性听力损失的受试者中检测到的硬纤毛蛋白基因中的其它示例性突变以及编码硬纤毛蛋白的核酸的测序方法描述于例如Verpy等人，Nature456:255-259,2008；Verpy等人，Res.Systems Neurosci.519:194-210,2011；Hofrichter等人，Clinical Genetics 87:49-55,2015和Mandelker等人，J.Mol.Diagnostics16:639-647,2014中。检测基因中的突变的方法是本领域公知的。此类技术的非限制性实例包括：实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、PCR、测序、Southern印迹和Northern印迹。
示例性人野生型硬纤毛蛋白为或包括SEQ ID NO:34的序列。编码野生型硬纤毛蛋白的核酸的非限制性实例为或包括SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36。如在本领域中可理解的，可对SEQ ID NO:35中的至少一些或全部密码子进行密码子优化以允许在非人哺乳动物中或人中的最佳表达。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，STRC蛋白包含与SEQ ID NO:34具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
人全长野生型硬纤毛蛋白(SEQ ID NO:34)(信号序列以粗体显示)
人野生型硬纤毛蛋白cDNA(SEQ ID NO:35)
人野生型硬纤毛蛋白cDNA-经密码子优化的(SEQ ID NO:36)
人野生型硬纤毛蛋白(Stereocilin)基因DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:37。SEQ ID NO:37中的外显子是：核苷酸位置1-142(外显子1)、核苷酸位置445-1230(外显子2)、核苷酸位置1319-1343(外显子3)、核苷酸位置2111-3368(外显子4)、核苷酸位置4325-4387(外显子5)、核苷酸位置4489-4605(外显子6)、核苷酸位置4748-4914(外显子7)、核苷酸位置5570-5756(外显子8)、核苷酸位置5895-6010(外显子9)、核苷酸位置6292-6424(外显子10)、核苷酸位置6777-6959(外显子11)、核苷酸位置7264-7302(外显子12)、核苷酸位置7486-7653(外显子13)、核苷酸位置7817-7882(外显子14)、核苷酸位置8364-8489(外显子15)、核苷酸位置9467-9525(外显子16)、核苷酸位置10598-10721(外显子17)、核苷酸位置10826-10938(外显子18)、核苷酸位置13402-13537(外显子19)、核苷酸位置13955-14151(外显子20)、核苷酸位置14350-14440(外显子21)、核苷酸位置14649-14805(外显子22)、核苷酸位置15390-15559(外显子23)、核苷酸位置17250-17405(外显子24)、核苷酸位置17787-17929(外显子25)、核苷酸位置18119-18267(外显子26)、核苷酸位置18509-18605(外显子27)、核苷酸位置18694-18841(外显子28)和核苷酸位置19041-19238(外显子29)。内含子位于SEQ ID NO:37中的这些外显子中的每一个外显子之间，即，处于核苷酸位置143-444(内含子1)、核苷酸位置1231至1318(内含子2)、核苷酸位置1344-2110(内含子3)、核苷酸位置3369-4324(内含子4)、核苷酸位置4388-4488(内含子5)、核苷酸位置4606-4747(内含子6)、核苷酸位置4915-5569(内含子7)、核苷酸位置5757-5894(内含子8)、核苷酸位置6011-6291(内含子9)、核苷酸位置6425-6776(内含子10)、核苷酸位置6960-7263(内含子11)、核苷酸位置7303-7485(内含子12)、核苷酸位置7654-7816(内含子13)、核苷酸位置7883-8363(内含子14)、核苷酸位置8490-9466(内含子15)、核苷酸位置9526-10597(内含子16)、核苷酸位置10722-10825(内含子17)、核苷酸位置10939-13401(内含子18)、核苷酸位置13538-13954(内含子19)、核苷酸位置14152-14349(内含子20)、核苷酸位置14441-14648(内含子21)、核苷酸位置14806-15389(内含子22)、核苷酸位置15560-17249(内含子23)、核苷酸位置17406-17786(内含子24)、核苷酸位置17930-18118(内含子25)、核苷酸位置18268-18508(内含子26)、核苷酸位置18606-18693(内含子27)和核苷酸位置18842-19040(内含子28)。
人野生型硬纤毛蛋白基因(SEQ ID NO:37)(NCBI登录号NG_011636.1)
人STRC假基因的核苷酸序列示于SEQ ID NO:38。人硬纤毛蛋白假基因1(STRCP1)(SEQ ID NO:38)
Clarin 1(CLRN1)
CLRN1基因编码“clarin 1”(CLRN1)(一种在内耳的毛细胞(例如，内耳毛细胞、外耳毛细胞)和视网膜中表达的蛋白质)。
人CLRN1基因位于染色体3q25.1上。其包含7个外显子，涵盖约47千碱基(kb)(Vastinsalo等人(2011)Eur J Hum Genet 19(1):30-35；NCBI登录号NG_009168.1)。
CLRN1基因中的各种突变与III型Usher综合征(例如，IIIA型Usher综合征(MIM#606397))(参见，例如，Fields等人(2002)Am JHum Genet 71:607-617和Joensuu等人(2001)Am J Hum Genet 69:673-684)和色素性视网膜炎(参见，例如，Khan等人(2011)Ophthalmology 118:1444-1448)相关联。主要在CLRN1的外显子3中发现了导致III型Usher综合征的突变。可通过产生CLRN1缺陷型小鼠来对III型Usher综合征耳聋进行建模(参见，例如，Geng等人(2017)Sci Rep 7(1):13480)。与III型Usher综合征相关联的示例性突变CLRN1包括：T528G、M120K、M44K、N48K和C40G。
与色素性视网膜炎相关联的示例性突变CLRN1包括L154W和P31L(参见，例如，Khan等人(2011)Ophthalmology 118:1444-1448).。
在患有听力损失的受试者中检测到的CLRN1基因中的其它示例性突变以及编码CLRN1的核酸的测序方法描述于例如Fields等人(2002)Am J Hum Genet 71:607-617、Joensuu等人(2001)Am J Hum Genet 69:673-684、Adato等人(2002)Europ J Hum Genet10:339-350、Aller等人(2004),Clin Genet 66:525-529中。检测基因中的突变的方法是本领域公知的。此类技术的非限制性实例包括：实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、PCR、测序、Southern印迹和Northern印迹。
示例性人野生型CLRN1蛋白为或包括SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:45的序列。编码野生型CLRN1蛋白的核苷酸序列的非限制性实例为或包括SEQID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:46。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述CLRN1蛋白包含与SEQ ID NO:39具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述CLRN1蛋白包含与SEQ ID NO:41具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述CLRN1蛋白包含与SEQ ID NO:43具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述CLRN1蛋白包含与SEQ ID NO:45具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
人全长野生型CLRN1蛋白异型体D(SEQ ID NO:39)
人野生型CLRN1异型体D cDNA(SEQ ID NO:40)
人全长野生型CLRN1蛋白异型体A(SEQ ID NO:41)
人野生型CLRN1异型体A cDNA(SEQ ID NO:42)
人全长野生型CLRN1蛋白异型体C(SEQ ID NO:43)
人野生型CLRN1异型体C cDNA(SEQ ID NO:44)
人全长野生型CLRN1蛋白异型体E(SEQ ID NO:45)
人野生型CLRN1异型体E cDNA(SEQ ID NO:46)
人野生型CLRN1基因组序列(SEQ ID NO:47)(NCBI登录号NG_009168.1)
第901章
人野生型CLRN1基因组DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:47。SEQ ID NO:47中的外显子是：核苷酸位置1-544(外显子1)、核苷酸位置28764-29180(外显子2)、核苷酸位置31239-31418(外显子3)、核苷酸位置32481-32519(外显子4)、核苷酸位置44799-46433(外显子5)、核苷酸位置44799-44935(外显子6)和核苷酸位置46128-46837(外显子7)。内含子位于SEQ ID NO:47中的这些外显子的每一对之间，即在核苷酸位置545-28763(内含子1)、核苷酸位置29181-31238(内含子2)、核苷酸位置31419-32480(内含子3)、核苷酸位置32520-44798(内含子4)和核苷酸位置44936-46127(内含子7)处。
跨膜通道样1(TMC1)
TMC1基因编码“跨膜通道样1”(TMC1)。TMC1是钙依赖性氯离子通道，并且可与毛细胞的硬纤毛蛋白中的跨膜O-甲基转移酶同系物相互作用。TMC1中的突变可导致非综合征性感觉神经性听力损失。例如，TMC1中的D572N突变已与耳聋相关联(Kurima等人，Nat Genet30:277-284,2002和Wei等人，J Transl Med 12:311,2014)。
人TMC1基因位于染色体9q21上。其包含24个外显子，涵盖约314千碱基(kb)(NCBI登录号NG008213.1)。从人TMC1基因表达的全长野生型TMC1蛋白的长度为760个氨基酸。
示例性人野生型TMC1蛋白为或包括SEQ ID NO:48的序列。编码野生型TMC1蛋白的核酸的非限制性实例为或包括SEQ ID NO:49。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述TMC1蛋白包含与SEQ ID NO:48具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
人TMC1蛋白(SEQ ID NO:48)(NCBI登录号NP_619636.2)
人TMC1 cDNA(SEQ ID NO:49)
人野生型TMC1基因组DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:50。SEQ ID NO:50中的外显子是：核苷酸位置1-113(外显子1)、核苷酸位置56102-56223(外显子2)、核苷酸位置94568-94677(外显子3)、核苷酸位置106121-106263(外显子4)、核苷酸位置126797-126864(外显子5)、核苷酸位置166909-166956(外显子6)、核苷酸位置172743-172914(外显子7)、核苷酸位置178718-178843(外显子8)、核苷酸位置218319-218409(外显子9)、核苷酸位置220644-220725(外显子10)、核苷酸位置230050-230156(外显子11)、核苷酸位置232986-233084(外显子12)、核苷酸位置250613-250755(外显子13)、核苷酸位置266539-266683(外显子14)、核苷酸位置267323-267517(外显子15)、核苷酸位置270086-270265(外显子16)、核苷酸位置270391-270552(外显子17)、核苷酸位置283582-283710(外显子18)、核苷酸位置294343-294410(外显子19)、核苷酸位置299042-299281(外显子20)、核苷酸位置305069-305194(外显子21)、核苷酸位置308651-308729(外显子22)、核苷酸位置308831-30882(外显子23)和核苷酸位置314151-314551(外显子24)。SEQ ID NO:50中的内含子是：核苷酸位置114-56101(内含子1)、核苷酸位置56224-94567(内含子2)、核苷酸位置94678-106120(内含子3)、核苷酸位置106264-126796(内含子4)、核苷酸位置126865-166908(内含子5)、核苷酸位置166957-172742(内含子6)、核苷酸位置172915-178717(内含子7)、核苷酸位置178844-218318(内含子8)、核苷酸位置218410-220643(内含子9)、核苷酸位置220726-230049(内含子10)、核苷酸位置230157-232985(内含子11)、核苷酸位置233085-250612(内含子12)、核苷酸位置250756-266538(内含子13)、核苷酸位置266684-267322(内含子14)、核苷酸位置267518-270085(内含子15)、核苷酸位置270266-270390(内含子16)、核苷酸位置270553-283581(内含子17)、核苷酸位置283711-294342(内含子18)、核苷酸位置294411-299041(内含子19)、核苷酸位置299282-305068(内含子20)、核苷酸位置305195-308650(内含子21)、核苷酸位置308730-308830(内含子22)和核苷酸位置30883-314150(内含子23)。
人TMC1基因序列(SEQ ID NO:50)(NCBI参考序列：NG_008213.1)
Pejvakin(PJVK)
PJVK基因编码“pejvakin”(PJVK)。PJVK是gasdermin家族的成员，是听觉通路神经元正常功能所必需的。PJVK中的突变可导致非综合征性感音神经性听力损失。例如，PJVK中的v.930_931del AC移码突变已与耳聋相关联(Zhang等人，Acta Otolaryngol 135(3):211-216,2015)。
人PJVK基因位于染色体2q231上。其包含8个外显子，涵盖约17千碱基(kb)(NCBI登录号NG_012186.1)。从人PJVK基因表达的全长野生型PJVK蛋白的长度为352个氨基酸。
示例性人野生型PJVK蛋白为或包括SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:61的序列。编码野生型PJVK蛋白的核酸的非限制性实例为或包括SEQ ID NO:52,SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ IDNO:60和SEQ ID NO:62。
人PJVK蛋白异型体1(SEQ ID NO:51)(NCBI登录号NP_001036167.1)
人PJVK异型体1cDNA(SEQ ID NO:52)
人PJVK蛋白异型体2(SEQ ID NO:53)(NCBI登录号NP_001340704.1)
人PJVK异型体2cDNA(SEQ ID NO:54)
人PJVK蛋白异型体3(SEQ ID NO:55)(NCBI登录号NP_001340705.1)
人PJVK异型体3cDNA(SEQ ID NO:56)
人PJVK蛋白异型体4(SEQ ID NO:57)(NCBI登录号NP_001340706.1)
人PJVK异型体4cDNA(SEQ ID NO:58)
人PJVK蛋白异型体5(SEQ ID NO:59)(NCBI登录号NP_001340707.1)
人PJVK异型体5cDNA(SEQ ID NO:60)
人PJVK蛋白异型体6(SEQ ID NO:61)(NCBI登录号NP_001356841.1)
人PJVK异型体6cDNA(SEQ ID NO:62)
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，PJVK蛋白包含与SEQ ID NO:51具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，PJVK蛋白包含与SEQ ID NO:53具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，PJVK蛋白包含与SEQ ID NO:55具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，PJVK蛋白包含与SEQ ID NO:57具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，PJVK蛋白包含与SEQ ID NO:59具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，PJVK蛋白包含与SEQ ID NO:61具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
人野生型PJVK基因组DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:63。SEQ ID NO:63中的外显子是：核苷酸位置5001-5334(外显子1)、核苷酸位置6953-7185(外显子2)和核苷酸位置7897-8092(外显子3)、核苷酸位置8281-9208(外显子4)、核苷酸位置9575-9716(外显子5)、核苷酸位置12075-12192(外显子6)、核苷酸位置13913-14011(外显子7)和核苷酸位置14547-15131(外显子8)。SEQ ID NO:63中的内含子是：核苷酸位置1-5000(内含子1)、核苷酸位置5335-6952(内含子2)、核苷酸位置7186-7896(内含子3)；核苷酸位置8093-8280(内含子4)、核苷酸位置9209-9574(内含子5)、核苷酸位置9717-12074(内含子6)、核苷酸位置12193-13912(内含子7)和核苷酸位置14012-14546(内含子8)。
人PJVK基因序列(SEQ ID NO:63)(NCBI参考序列：NG_012186.1)
热休克蛋白家族A(Hsp70)成员1A(HSPA1A)
HSPA1A基因编码“热激蛋白家族A成员1A”(HSPA1A)。人HSPA1A基因位于染色体6p21.33上。其包含1个外显子，涵盖约2400bp(NCBI登录号NC_000006.12)。HSPA1A编码70kDa的热激蛋白，所述蛋白可稳定蛋白质使其免于蛋白质聚集，并参与蛋白质折叠。
示例性野生型HSPA1A蛋白序列为或包括SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:93。编码NDP蛋白的示例性DNA序列如下所示。
人成熟HSPA1A蛋白(SEQ ID NO:64)(NCBI登录号NP_005336.3)
人成熟HSPA1A cDNA(SEQ ID NO:65)
人成熟HSPA1A cDNA(SEQ ID NO:94)
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述HSPA1A蛋白包含与SEQ ID NO:64具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述HSPA1A蛋白包含与SEQ ID NO:66具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述HSPA1A蛋白包含与SEQ ID NO:68具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述HSPA1A蛋白包含与SEQ ID NO:69具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述HSPA1A蛋白包含与SEQ ID NO:70具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，所述HSPA1A蛋白包含与SEQ ID NO:94具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
小鼠成熟的HSPA1A蛋白(SEQ ID NO:66)(NCBI登录号NP_034609.2)
小鼠成熟HSPA1A cDNA(SEQ ID NO:67)
恒河猴成熟HSPA1A蛋白(SEQ ID NO:68)(NCBI登录号XP_014991489.2)
大鼠成熟HSPA1A蛋白(SEQ ID NO:69)(NCBI登录号NP_114177.2)
牛HSPA1A蛋白(SEQ ID NO:70)(NCBI登录号NP_976067.3)
人成熟HSPA1A蛋白(SEQ ID NO:93)
人野生型NDP基因组DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:71。
人HSPA1A基因序列(SEQ ID NO:71)(NCBI参考序列NC_000006.12)
人HSPA1A基因序列(SEQ ID NO:94)
血管内皮生长因子(VEGF)
VEGF基因编码血管内皮生长因子(VEGF)，以前称为fms样酪氨酸激酶(Flt-1)。VEGF蛋白是诱导血管内皮细胞迁移和增殖的肝素抑制蛋白。
人VEGF基因位于染色体6p21上。其包含8个外显子，涵盖约16千碱基(kb)(NCBI登录号NG_008732.1)。从人VEGF基因表达的全长野生型VEGF蛋白的长度为412个氨基酸。
示例性人野生型VEGF蛋白为或包括SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79的序列。编码野生型VEGF蛋白的核酸的非限制性实例为或包括SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:75。
下面示出编码野生型VEGF蛋白的蛋白质和核苷酸序列的非限制性实例。
人VEGF转录变体1蛋白质序列(SEQ ID NO:72)
人VEGF转录变体1cDNA(SEQ ID NO:73)
人VEGF转录变体3蛋白质序列(SEQ ID NO:74)
人VEGF转录变体3cDNA(SEQ ID NO:75)
成熟人VEGF-A(SEQ ID NO:76)
成熟人VEGF-B(SEQ ID NO:77)
成熟人VEGF-C(SEQ ID NO:78)
成熟人VEGF-D(SEQ ID NO:79)
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，VEGF蛋白包含与SEQ ID NO:72具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，VEGF蛋白包含与SEQ ID NO:74具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，VEGF蛋白包含与SEQ ID NO:76具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，VEGF蛋白包含与SEQ ID NO:77具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，VEGF蛋白包含与SEQ ID NO:78具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，VEGF蛋白包含与SEQ ID NO:79具有至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的序列。
人野生型VEGF基因组DNA序列的非限制性实例是SEQ ID NO:80。SEQ ID NO:80中的外显子是：核苷酸位置1-1104(外显子1)、核苷酸位置4133-4184(外显子2)和核苷酸位置7261-7457(外显子3)、核苷酸位置8252-8328(外显子4)、核苷酸位置8681-8710(外显子5)、核苷酸位置10524-10646(外显子6)、核苷酸位置11748-11879(外显子7)和核苷酸位置14333-16279(外显子8)。SEQ ID NO:80中的内含子是：核苷酸位置1105-4132(内含子1)、核苷酸位置4185-7260(内含子2)、核苷酸位置7458-8251(内含子3)；核苷酸位置8329-8680(内含子4)、核苷酸位置8711-10523(内含子5)、核苷酸位置10647-11747(内含子6)和核苷酸位置11880-14332(内含子7)。
人VEGF-A基因(SEQ ID NO:80)(NCBI登录号NG_008732.1)
人VEGF-B基因(SEQ ID NO:81)(NCBI登录号NG_029823.1)
人VEGF-C基因(SEQ ID NO:82)(NCBI登录号NG_034216.1)
人VEGF-D基因(SEQ ID NO:83)(NCBI登录号NG_012509.1)
在本文所述的任何载体的一些实施方案中，载体包含编码可以特异性结合VEGF的抗体或抗原结合抗体片段的序列。在一些实施方案中，抗体或抗原结合抗体片段可包括人IgG Fc结构域(例如，SEQ ID NO:113)。在一些实施方案中，编码抗体或抗原结合片段的序列还可包含编码分泌信号序列的序列(例如，SEQ ID NO:92)。在本文所述的任何载体的一些实施方案中，载体包含T2A肽酶的序列(例如，SEQ ID NO:99)。
在一些实施方案中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体或多价抗体。在一些实施方案中，抗体或抗原结合抗体片段可以是scFv-Fc、VHH结构域、VNAR结构域、(scFv)2、微抗体或BiTE。在一些实施方案中，抗体或抗原结合抗体片段可以是DVD-Ig和双亲和重靶向抗体(dual-affinity re-targeting antibody)(DART)、三功能抗体(triomab)、具有共同LC的kih IgG、crossmab、正交Fab IgG、二合一IgG(2-in-1-IgG)、IgG-ScFv、scFv2-Fc、双-纳米抗体、串联抗体、DART-Fc、scFv-HAS-scFv、DNL-Fab3、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼结构共有LC(knobs-in-holes common LC)、杵臼结构组件(knobs-in-holesassembly)、电荷对抗体、Fab臂交换抗体、SEEDbody、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体、纳米抗体-HSA、双抗体(diabody)、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联体(Triple Body)、微型抗体(miniantibody)、微抗体(minibody)、TriBi微抗体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、细胞内抗体、对接和锁定(dock and lock)双特异性抗体、ImmTAC、HSAbody、scDiabody-HAS、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-Body和scFv1-PEG-scFv2。
抗体或抗原结合抗体片段的其它实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段和Fab'片段。抗体或抗原结合抗体片段的其它实例包括：IgG的抗原结合片段(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如，人或人源化IgG(例如，人或人源化IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如，IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如，人或人源化IgA(例如，人或人源化IgA1或IgA2)的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如，人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如，人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如，人或人源化IgM的抗原结合片段)。
本文所述的任何抗体或抗原结合抗体片段可与VEGF特异性结合。
VHH结构域是可在骆驼中发现的单一单体可变抗体结构域。VNAR结构域是可在软骨鱼中发现的单一单体可变抗体结构域。VHH结构域和VNAR结构域的非限制性方面描述于例如，Cromie等人，Curr.Top.Med.Chem.15:2543-2557,2016；De Genst等人，Dev.Comp.Immunol.30:187-198,2006；De Meyer等人，Trends Biotechnol.32:263-270,2014；Kijanka等人，Nanomedicine 10:161-174,2015；Kovaleva等人，Expert.Opin.Biol.Ther.14:1527-1539,2014；Krah等人，Immunopharmacol.Immunotoxicol.38:21-28,2016；Mujic-Delic等人，Trends Pharmacol.Sci.35:247-255,2014；Muyldermans,J.Biotechnol.74:277-302,2001；Muyldermans等人，TrendsBiochem.Sci.26:230-235,2001；Muyldermans,Ann.Rev.Biochem.82:775-797,2013；Rahbarizadeh等人，Immunol.Invest.40:299-338,2011；Van Audenhove等人，EBioMedicine 8:40-48,2016；Van Bockstaele等人，Curr.Opin.Investig.Drugs 10:1212-1224,2009；Vincke等人，Methods Mol.Biol.911:15-26,2012；以及Wesolowski等人，Med.Microbiol.Immunol.198:157-174,2009。
“Fv”片段包括一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的非共价连接的二聚体。
除了Fv片段的重链可变结构域和轻链可变结构域之外，“Fab”片段还包括轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)。
“F(ab')2”片段包括在铰链区附近通过二硫键连接的两个Fab片段。
“双重可变结构域免疫球蛋白”或“DVD-Ig”是指多价和多特异性结合蛋白，如例如，DiGiammarino等人，Methods Mol.Biol.899:145-156,2012；Jakob等人，MABs 5:358-363,2013；以及美国专利第7,612,181号、第8,258,268号、第8,586,714号、第8,716,450号、第8,722,855号、第8,735,546号和第8,822,645号中所描述的，所述参考文献各自通过引用以其整体并入。
DART描述于例如Garber,Nature Reviews Drug Discovery 13:799-801,2014中。
抗体和抗原结合抗体片段的其它方面在本领域中是已知的。
在一些实施方案中，本文所述的任何抗体或抗原结合抗体片段具有的解离常数(KD)小于1x10-5M(例如，小于0.5x10-5M、小于1x10-6M、小于0.5x10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x10-7M、小于1x10-8M、小于0.5x10-8M、小于1x10-9M、小于0.5x10-9M、小于1x10-10M、小于0.5x10-10M、小于1x10-11M、小于0.5x10-11M或小于1x10-12M)，例如，如在磷酸盐缓冲盐水中使用表面等离子体共振(SPR)针对VEGF蛋白(例如，本文所述的任何VEGF蛋白，例如，成熟人VEGF-A、成熟人VEGF-B、成熟人VEGF-C和成熟人VEGF-D中的一种或多种)所测量的。
在一些实施方案中，本文所述的任何抗体或抗原结合抗体片段具有的KD为约1x10-12M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M、约1x10-7M、约0.5x10-7M、约1x10-8M、约0.5x10-8M、约1x10-9M、约0.5x10-9M、约1x10-10M、约0.5x10-10M、约1x10-11M或约0.5x10-11M(包括端值)；约0.5x10-11M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M、约1x10-7M、约0.5x10-7M、约1x10-8M、约0.5x10-8M、约1x10-9M、约0.5x10-9M、约1x10-10M、约0.5x10-10M或约1x10-11M(包括端值)；约1x10-11M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M、约1x10-7M、约0.5x10-7M、约1x10-8M、约0.5x10-8M、约1x10-9M、约0.5x10-9M、约1x10-10M或约0.5x10- 10M(包括端值)；约0.5x10-10M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M、约1x10-7M、约0.5x10-7M、约1x10-8M、约0.5x10-8M、约1x10-9M、约0.5x10-9M或约1x10-10M(包括端值)；约1x10-10M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M、约1x10-7M、约0.5x10-7M、约1x10-8M、约0.5x10-8M、约1x10-9M或约0.5x10-9M(包括端值)；约0.5x10-9M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M、约1x10-7M、约0.5x10-7M、约1x10-8M、约0.5x10-8M或约1x10-9M(包括端值)；约1x10-9M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M、约1x10- 7M、约0.5x10-7M、约1x10-8M或约0.5x10-8M(包括端值)；约0.5x10-8M至约1x10-5M、约0.5x10- 5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M、约1x10-7M、约0.5x10-7M或约1x10-8M(包括端值)；约1x10-8M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M、约1x10-7M或约0.5x10-7M(包括端值)；约0.5x10-7M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M、约0.5x10-6M或约1x10-7M(包括端值)；约1x10-7M至约1x10-5M、约0.5x10-5M、约1x10-6M或约0.5x10-6M(包括端值)；约0.5x10-6M至约1x10-5M、约0.5x10-5M或约1x10-6M(包括端值)；约1x10-6M至约1x10-5M或约0.5x10-5M(包括端值)；或约0.5x10-5M至约1x10-5M(包括端值)，例如，如在磷酸盐缓冲盐水中使用表面等离子体共振(SPR)针对VEGF蛋白(例如，本文所述的任何VEGF蛋白，例如，成熟人VEGF-A、成熟人VEGF-B、成熟人VEGF-C和成熟人VEGF-D中的一个或多个)所测量的。
可使用本领域已知的多种不同方法(例如，电泳迁移率变动测定、滤膜结合测定、表面等离子体共振和生物分子结合动力学测定等)来测定本文所述的任何抗体或抗原结合抗体片段的KD值。
在本文所述的任何抗体和/或抗原结合抗体片段的一些实施方案中，与类似受试者中的对照抗体和/或对照抗原结合抗体片段(例如，本文所述的任何对照抗体和/或对照抗原结合抗体片段)的半衰期相比，受试者(例如，人)中的抗体和/或抗原结合抗体片段的半衰期缩短约0.5倍至约4倍(例如，约0.5倍至约3.5倍、约0.5倍至约3倍、约0.5倍至约2.5倍、约0.5倍至约2倍、约0.5倍至约1.5倍、约0.5倍至约1倍、约1倍至约4倍、约1倍至约3.5倍、约1倍至约3倍、约1倍至约2.5倍、约1倍至约2倍、约1.5倍至约4倍、约1.5倍至约3.5倍、约1.5倍至约3倍、约1.5倍至约2.5倍、约1.5倍至约2倍、约2倍至约4倍、约2倍至约3.5倍、约2倍至约3倍、约2倍至约2.5倍、约2.5倍至约4倍、约2.5倍至约3.5倍、约2.5倍至约3倍、约3倍至约4倍、约3倍至约3.5倍或约3.5倍至约4倍)。参见，例如，Leabman等人，MAbs.5(6):896-903,2013。在一些实施方案中，本文所述的抗体或抗原结合抗体片段在Fc区中具有缩短其在哺乳动物中的半衰期的一个或多个氨基酸取代，并且对照抗体缺乏Fc区中的这些一个或多个氨基酸取代中的至少一个(例如，缺乏全部)。
在本文所述的任何抗体及其抗原结合片段的一些实例中，抗体和抗原结合片段可结合到VEGF抗原(例如，本文所述的任何示例性VEGF蛋白，例如，成熟人VEGF-A、成熟人VEGF-B、成熟人VEGF-C和成熟人VEGF-D中的一种或多种)(例如，本文所述的任何结合亲和力)。
在本文所述的一些实施方案中，抗体或抗原结合抗体片段可降低VEGF(例如，本文所述的任何示例性VEGF蛋白中的一种或多种，例如，成熟人VEGF-A、成熟人VEGF-B、成熟人VEGF-C和成熟人VEGF-D中的一种或多种)的活性。在一些实施方案中，抗体或抗原结合抗体片段可阻断VEGF(例如，本文所述的任何示例性VEGF蛋白中的一种或多种，例如，成熟人VEGF-A、成熟人VEGF-B、成熟人VEGF-C和成熟人VEGF-D中的一种或多种)与其受体中的一种或多种(例如，一种或多种VEGF受体)的结合。参见，例如，WO 1998/045331、US 9,079,953、US 2015/0147317、US2016/0289314、Plotkin等人，Otology&Neurotology 33:1046-1052(2012)；和Ferrara等人，(2005)Biochem Biophys Res Commun 333(2):328-335。在一些实施方案中，抗体或抗原结合抗体可减弱下游信号传导(例如，VEGF受体(例如，本文所述的任何示例性VEGF受体中的一种或多种，例如，人VEGFR-1(SEQ ID NO:111)、人VEGFR-2(SEQ IDNO:112)和人VEGFR-3中的一种或多种)的下游信号传导)。在一些实施方案中，可以，例如通过分别与施用本文所述的任何AAV载体之前的哺乳动物的听力水平或听神经瘤、前庭神经鞘瘤或II型神经纤维瘤病的大小相比，哺乳动物的听力增强(例如，1％至约400％(或本文所述的该范围的任何子范围)的听力增强)、听神经瘤、前庭神经鞘瘤或II型神经纤维瘤病的一个或多个症状的大小或严重程度的降低(例如，1％至99％、1％至95％、1％至90％、1％至85％、1％至80％、1％至75％、1％至70％、1％至65％、1％至60％、1％至55％、1％至50％、1％至45％、1％至40％、1％至35％、1％至30％、1％至25％、1％至20％、1％至15％、1％至10％、1％至5％、5％至99％、5％至95％、5％至90％、5％至85％、5％至80％、5％至75％、5％至70％、5％至65％、5％至60％、5％至55％、5％至50％、5％至45％、5％至40％、5％至35％、5％至30％、5％至25％、5％至20％、5％至15％、5％至10％、10％至99％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至65％、10％至60％、10％至55％、10％至50％、10％至45％、10％至40％、10％至35％、10％至30％、10％至25％、10％至20％、10％至15％、15％至99％、15％至95％、15％至90％、15％至85％、15％至80％、15％至75％、15％至70％、15％至65％、15％至60％、15％至55％、15％至50％、15％至45％、15％至40％、15％至35％、15％至30％、15％至25％、15％至20％、20％至99％、20％至95％、20％至90％、20％至85％、20％至80％、20％至75％、20％至70％、20％至65％、20％至60％、20％至55％、20％至50％、20％至45％、20％至40％、20％至35％、20％至30％、20％至25％、25％至99％、25％至95％、25％至90％、25％至85％、25％至80％、25％至75％、25％至70％、25％至65％、25％至60％、25％至55％、25％至50％、25％至45％、25％至40％、25％至35％、25％至30％、30％至99％、30％至95％、30％至90％、30％至85％、30％至80％、30％至75％、30％至70％、30％至65％、30％至60％、30％至55％、30％至50％、30％至45％、30％至40％、30％至35％、35％至99％、35％至95％、35％至90％、35％至85％、35％至80％、35％至75％、35％至70％、35％至65％、35％至60％、35％至55％、35％至50％、35％至45％、35％至40％、40％至99％、40％至95％、40％至90％、40％至85％、40％至80％、40％至75％、40％至70％、40％至65％、40％至60％、40％至55％、40％至50％、40％至45％、45％至99％、45％至95％、45％至90％、45％至85％、45％至80％、45％至75％、45％至70％、45％至65％、45％至60％、45％至55％、45％至50％、50％至99％、50％至95％、50％至90％、50％至85％、50％至80％、50％至75％、50％至70％、50％至65％、50％至60％、50％至55％、55％至99％、55％至95％、55％至90％、55％至85％、55％至80％、55％至75％、55％至70％、55％至65％、55％至60％、60％至99％、60％至95％、60％至90％、60％至85％、60％至80％、60％至75％、60％至70％、60％至65％、65％至99％、65％至95％、65％至90％、65％至85％、65％至80％、65％至75％、65％至70％、70％至99％、70％至95％、70％至90％、70％至85％、70％至80％、70％至75％、75％至99％、75％至95％、75％至90％、75％至85％、75％至80％、80％至99％、80％至95％、80％至90％、80％至85％、85％至99％、85％至95％、85％至90％、90％至99％、90％至95％或95％至99％的降低)间接地检测到VEGF活性的降低。在一些实施方案中，可在体外测定中检测到VEGF活性的降低。
在一些实施方案中，与VEGF特异性结合的抗体是贝伐单抗(SEQ IDNO:103)或其抗原结合片段。贝伐单抗(全长抗体约150kDa)抑制VEGF-A的所有异型体。贝伐单抗于2004年获得食品和药物管理局(FDA)批准用于结肠癌，静脉内(IV)剂量为4.0-7.5mg/kg，2-3周(血浆半衰期为21天)，玻璃体内(IVT)剂量为1.25mg/0.05mL(半衰期为5.6天)。贝伐单抗对于VEGF 165(VEGF-A)的KD为58pM。参见，例如，WO 2017/050825。贝伐单抗的前导序列是SEQ ID NO:104，贝伐单抗的重链可变域是SEQ ID NO:105，贝伐单抗的重链恒定区是SEQ ID NO:106，贝伐单抗的轻链可变域是SEQ ID NO:107，贝伐单抗的轻链恒定区是SEQ ID NO:108。编码贝伐单抗的示例性cDNA序列是SEQ ID NO:109。
在一些实施方案中，与VEGF特异性结合的抗体是雷珠单抗(SEQ IDNO:95)或其抗原结合片段。雷珠单抗(约50kDa)抑制VEGF-A的所有异型体。贝伐单抗于2006年获得FDA批准用于眼部用途，静脉内(IV)剂量为4.0-7.5mg/kg，2-3周(血浆半衰期为0.5天)，玻璃体内(IVT)剂量为0.5mg/0.05mL(半衰期为3.2天)。雷珠单抗对于VEGF 165(VEGF-A)的KD为46pM。参见，例如，WO2014/178078。雷珠单抗的前导序列具有SEQ ID NO:96的序列，雷珠单抗的重链可变域具有SEQ ID NO:97的序列，雷珠单抗的重链恒定区具有SEQ IDNO:98的序列，雷珠单抗的轻链可变结构域具有SE QID NO:100的序列，雷珠单抗的轻链恒定区具有SEQ ID NO:101的序列。编码雷珠单抗的示例性cDNA序列是SEQ ID NO:102。
在一些实施方案中，特异性结合到VEGF的抗体是sevacizumab(APX003/SIM-BD0801)或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，与VEGF特异性结合的抗体或其抗原结合片段是阿柏西普(SEQID NO:110)。编码阿柏西普的示例性cDNA序列是SEQ ID NO:114。
在本文所述的与VEGF特异性结合的抗体及其抗原结合片段的一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含可变轻链结构域，所述可变轻链结构域为或包括与贝伐单抗的可变轻链结构域具有至少80％同一性(例如，至少82％、至少84％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少96％、至少98％或至少99％同一性)的序列；并且/或者包含可变重链结构域，所述可变重链结构域为或包括与贝伐单抗的可变重链结构域具有至少80％同一性(例如，至少82％、至少84％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少96％、至少98％或至少99％同一性)的序列。
在本文所述的与VEGF特异性结合的抗体及其抗原结合片段的一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含可变轻链结构域，所述可变轻链结构域为或包括贝伐单抗的可变轻链结构域；和/或可变重链结构域，所述可变重链结构域为或包括贝伐单抗的可变重链结构域。在本文所述的与VEGF特异性结合的抗体及其抗原结合片段的一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含可变轻链结构域，所述可变轻链结构域为或包括贝伐单抗的可变轻链结构域的序列，不同之处在于其包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或十五个氨基酸取代；并且/或者包含可变重链结构域，所述可变重链结构域为或包括贝伐单抗的可变重链的序列，不同之处在于其包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或十五个氨基酸取代。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域包含贝伐单抗的轻链可变结构域中的三个CDR和/或贝伐单抗的重链可变结构域中的三个CDR。
在本文所述的与VEGF特异性结合的抗体及其抗原结合片段的一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含可变轻链结构域，所述可变轻链结构域为或包括与雷珠单抗的可变轻链结构域具有至少80％同一性(例如，至少82％、至少84％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少96％、至少98％或至少99％同一性)的序列；并且/或者包含可变重链结构域，所述可变重链结构域为或包括与雷珠单抗的可变重链结构域具有至少80％同一性(例如，至少82％、至少84％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少96％、至少98％或至少99％同一性)的序列。
在本文所述的与VEGF特异性结合的抗体及其抗原结合片段的一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含可变轻链结构域，所述可变轻链结构域为或包括雷珠单抗的可变轻链结构域；和/或可变重链结构域，所述可变重链结构域为或包括雷珠单抗的可变重链结构域。在本文所述的与VEGF特异性结合的抗体及其抗原结合片段的一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括可变轻链结构域，所述可变轻链结构域为或包括雷珠单抗的可变轻链结构域的序列，不同之处在于其包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或十五个氨基酸取代；并且/或者包含可变重链结构域，所述可变重链结构域为或包含雷珠单抗的可变重链的序列，不同之处在于其包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或十五个氨基酸取代。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域包括雷珠单抗的轻链可变结构域中的三个CDR和/或雷珠单抗的重链可变结构域中的三个CDR。
载体
本文提供的组合物包含至少两种(例如，两种、三种、四种、五种或六种)核酸载体，其中：所述至少两种不同的载体中的每一种包含编码靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的不同部分的编码序列，所述编码的部分中的每一部分至少为30个氨基酸(例如，约30个氨基酸至约800个氨基酸、约30个氨基酸至约750个氨基酸、约30个氨基酸至约700个氨基酸、约30个氨基酸至约650个氨基酸、约30个氨基酸至约600个氨基酸、约30个氨基酸至约550个氨基酸、约30个氨基酸至约500个氨基酸、约30个氨基酸至约450个氨基酸、约30个氨基酸至约400个氨基酸、约30个氨基酸至约350个氨基酸、约30个氨基酸至约300个氨基酸、约30个氨基酸至约250个氨基酸、约30个氨基酸至约200个氨基酸、约30个氨基酸至约150个氨基酸、约30个氨基酸至约100个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约50个氨基酸至约800个氨基酸、约50个氨基酸至约750个氨基酸、约50个氨基酸至约700个氨基酸、约50个氨基酸至约650个氨基酸、约50个氨基酸至约600个氨基酸、约50个氨基酸至约550个氨基酸、约50个氨基酸至约500个氨基酸、约50个氨基酸至约450个氨基酸、约50个氨基酸至约400个氨基酸、约50个氨基酸至约350个氨基酸、约50个氨基酸至约300个氨基酸、约50个氨基酸至约250个氨基酸、约50个氨基酸至约200个氨基酸、约50个氨基酸至约150个氨基酸、约50个氨基酸至约100个氨基酸、约100个氨基酸至约1600个氨基酸、约100个氨基酸至约800个氨基酸、约100个氨基酸至约750个氨基酸、约100个氨基酸至约700个氨基酸、约100个氨基酸至约650个氨基酸、约100个氨基酸至约600个氨基酸、约100个氨基酸至约550个氨基酸、约100个氨基酸至约500个氨基酸、约100个氨基酸至约450个氨基酸、约100个氨基酸至约400个氨基酸、约100个氨基酸至约350个氨基酸、约100个氨基酸至约300个氨基酸、约100个氨基酸至约250个氨基酸、约100个氨基酸至约200个氨基酸、约100个氨基酸至约150个氨基酸、约150个氨基酸至约800个氨基酸、约150个氨基酸至约750个氨基酸、约150个氨基酸至约700个氨基酸、约150个氨基酸至约650个氨基酸、约150个氨基酸至约600个氨基酸、约150个氨基酸至约550个氨基酸、约150个氨基酸至约500个氨基酸、约150个氨基酸至约450个氨基酸、约150个氨基酸至约400个氨基酸、约150个氨基酸至约350个氨基酸、约150个氨基酸至约300个氨基酸、约150个氨基酸至约250个氨基酸、约150个氨基酸至约200个氨基酸、约200个氨基酸至约800个氨基酸、约200个氨基酸至约750个氨基酸、约200个氨基酸至约700个氨基酸、约200个氨基酸至约650个氨基酸、约200个氨基酸至约600个氨基酸、约200个氨基酸至约550个氨基酸、约200个氨基酸至约500个氨基酸、约200个氨基酸至约450个氨基酸、约200个氨基酸至约400个氨基酸、约200个氨基酸至约350个氨基酸、约200个氨基酸至约300个氨基酸、约200个氨基酸至约250个氨基酸、约250个氨基酸至约800个氨基酸、约250个氨基酸至约750个氨基酸、约250个氨基酸至约700个氨基酸、约250个氨基酸至约650个氨基酸、约250个氨基酸至约600个氨基酸、约250个氨基酸至约550个氨基酸、约250个氨基酸至约500个氨基酸、约250个氨基酸至约450个氨基酸、约250个氨基酸至约400个氨基酸、约250个氨基酸至约350个氨基酸、约250个氨基酸至约300个氨基酸、约300个氨基酸至约800个氨基酸、约300个氨基酸至约750个氨基酸、约300个氨基酸至约700个氨基酸、约300个氨基酸至约650个氨基酸、约300个氨基酸至约600个氨基酸、约300个氨基酸至约550个氨基酸、约300个氨基酸至约500个氨基酸、约300个氨基酸至约450个氨基酸、约300个氨基酸至约400个氨基酸、约300个氨基酸至约350个氨基酸、约350个氨基酸至约800个氨基酸、约350个氨基酸至约750个氨基酸、约350个氨基酸至约700个氨基酸、约350个氨基酸至约650个氨基酸、约350个氨基酸至约600个氨基酸、约350个氨基酸至约550个氨基酸、约350个氨基酸至约500个氨基酸、约350个氨基酸至约450个氨基酸、约350个氨基酸至约400个氨基酸、约400个氨基酸至约800个氨基酸、约400个氨基酸至约750个氨基酸、约400个氨基酸至约700个氨基酸、约400个氨基酸至约650个氨基酸、约400个氨基酸至约600个氨基酸、约400个氨基酸至约550个氨基酸、约400个氨基酸至约500个氨基酸、约400个氨基酸至约450个氨基酸、约450个氨基酸至约800个氨基酸、约450个氨基酸至约750个氨基酸、约450个氨基酸至约700个氨基酸、约450个氨基酸至约650个氨基酸、约450个氨基酸至约600个氨基酸、约450个氨基酸至约550个氨基酸、约450个氨基酸至约500个氨基酸、约500个氨基酸至约800个氨基酸、约500个氨基酸至约750个氨基酸、约500个氨基酸至约700个氨基酸、约500个氨基酸至约650个氨基酸、约500个氨基酸至约600个氨基酸、约500个氨基酸至约550个氨基酸、约550个氨基酸至约800个氨基酸、约550个氨基酸至约750个氨基酸、约550个氨基酸至约700个氨基酸、约550个氨基酸至约650个氨基酸、约550个氨基酸至约600个氨基酸、约600个氨基酸至约800个氨基酸、约600个氨基酸至约750个氨基酸、约600个氨基酸至约700个氨基酸、约600个氨基酸至约650个氨基酸、约650个氨基酸至约800个氨基酸、约650个氨基酸至约750个氨基酸、约650个氨基酸至约700个氨基酸、约700个氨基酸至约800个氨基酸、约700个氨基酸至约750个氨基酸或约750个氨基酸至约800个氨基酸)，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码活性靶蛋白(例如，活性支持细胞靶蛋白(例如，全长支持细胞靶蛋白(例如，全长野生型支持细胞靶蛋白))或活性毛细胞靶蛋白(例如，全长毛细胞靶蛋白(例如，全长野生型毛细胞靶蛋白)))；并且，当被引入到灵长类动物细胞时，所述至少两种不同的载体经历彼此同源重组，其中所述重组核酸编码活性靶蛋白(例如，活性支持细胞靶蛋白(例如，全长支持细胞靶蛋白)或活性毛细胞靶蛋白(例如，全长毛细胞靶蛋白))。在一些实施方案中，所述核酸载体之一可包含编码靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的一部分的编码序列，其中所述编码的部分的长度为例如约30个氨基酸至约800个氨基酸、约30个氨基酸至约750个氨基酸、约30个氨基酸至约700个氨基酸、约30个氨基酸至约650个氨基酸、约30个氨基酸至约600个氨基酸、约30个氨基酸至约550个氨基酸、约30个氨基酸至约500个氨基酸、约30个氨基酸至约450个氨基酸、约30个氨基酸至约400个氨基酸、约30个氨基酸至约350个氨基酸、约30个氨基酸至约300个氨基酸、约30个氨基酸至约250个氨基酸、约30个氨基酸至约200个氨基酸、约30个氨基酸至约150个氨基酸、约30个氨基酸至约100个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约50个氨基酸至约800个氨基酸、约50个氨基酸至约750个氨基酸、约50个氨基酸至约700个氨基酸、约50个氨基酸至约650个氨基酸、约50个氨基酸至约600个氨基酸、约50个氨基酸至约550个氨基酸、约50个氨基酸至约500个氨基酸、约50个氨基酸至约450个氨基酸、约50个氨基酸至约400个氨基酸、约50个氨基酸至约350个氨基酸、约50个氨基酸至约300个氨基酸、约50个氨基酸至约250个氨基酸、约50个氨基酸至约200个氨基酸、约50个氨基酸至约150个氨基酸、约50个氨基酸至约100个氨基酸、约100个氨基酸至约1600个氨基酸、约100个氨基酸至约800个氨基酸、约100个氨基酸至约750个氨基酸、约100个氨基酸至约700个氨基酸、约100个氨基酸至约650个氨基酸、约100个氨基酸至约600个氨基酸、约100个氨基酸至约550个氨基酸、约100个氨基酸至约500个氨基酸、约100个氨基酸至约450个氨基酸、约100个氨基酸至约400个氨基酸、约100个氨基酸至约350个氨基酸、约100个氨基酸至约300个氨基酸、约100个氨基酸至约250个氨基酸、约100个氨基酸至约200个氨基酸、约100个氨基酸至约150个氨基酸、约150个氨基酸至约800个氨基酸、约150个氨基酸至约750个氨基酸、约150个氨基酸至约700个氨基酸、约150个氨基酸至约650个氨基酸、约150个氨基酸至约600个氨基酸、约150个氨基酸至约550个氨基酸、约150个氨基酸至约500个氨基酸、约150个氨基酸至约450个氨基酸、约150个氨基酸至约400个氨基酸、约150个氨基酸至约350个氨基酸、约150个氨基酸至约300个氨基酸、约150个氨基酸至约250个氨基酸、约150个氨基酸至约200个氨基酸、约200个氨基酸至约800个氨基酸、约200个氨基酸至约750个氨基酸、约200个氨基酸至约700个氨基酸、约200个氨基酸至约650个氨基酸、约200个氨基酸至约600个氨基酸、约200个氨基酸至约550个氨基酸、约200个氨基酸至约500个氨基酸、约200个氨基酸至约450个氨基酸、约200个氨基酸至约400个氨基酸、约200个氨基酸至约350个氨基酸、约200个氨基酸至约300个氨基酸、约200个氨基酸至约250个氨基酸、约250个氨基酸至约800个氨基酸、约250个氨基酸至约750个氨基酸、约250个氨基酸至约700个氨基酸、约250个氨基酸至约650个氨基酸、约250个氨基酸至约600个氨基酸、约250个氨基酸至约550个氨基酸、约250个氨基酸至约500个氨基酸、约250个氨基酸至约450个氨基酸、约250个氨基酸至约400个氨基酸、约250个氨基酸至约350个氨基酸、约250个氨基酸至约300个氨基酸、约300个氨基酸至约800个氨基酸、约300个氨基酸至约750个氨基酸、约300个氨基酸至约700个氨基酸、约300个氨基酸至约650个氨基酸、约300个氨基酸至约600个氨基酸、约300个氨基酸至约550个氨基酸、约300个氨基酸至约500个氨基酸、约300个氨基酸至约450个氨基酸、约300个氨基酸至约400个氨基酸、约300个氨基酸至约350个氨基酸、约350个氨基酸至约800个氨基酸、约350个氨基酸至约750个氨基酸、约350个氨基酸至约700个氨基酸、约350个氨基酸至约650个氨基酸、约350个氨基酸至约600个氨基酸、约350个氨基酸至约550个氨基酸、约350个氨基酸至约500个氨基酸、约350个氨基酸至约450个氨基酸、约350个氨基酸至约400个氨基酸、约400个氨基酸至约800个氨基酸、约400个氨基酸至约750个氨基酸、约400个氨基酸至约700个氨基酸、约400个氨基酸至约650个氨基酸、约400个氨基酸至约600个氨基酸、约400个氨基酸至约550个氨基酸、约400个氨基酸至约500个氨基酸、约400个氨基酸至约450个氨基酸、约450个氨基酸至约800个氨基酸、约450个氨基酸至约750个氨基酸、约450个氨基酸至约700个氨基酸、约450个氨基酸至约650个氨基酸、约450个氨基酸至约600个氨基酸、约450个氨基酸至约550个氨基酸、约450个氨基酸至约500个氨基酸、约500个氨基酸至约800个氨基酸、约500个氨基酸至约750个氨基酸、约500个氨基酸至约700个氨基酸、约500个氨基酸至约650个氨基酸、约500个氨基酸至约600个氨基酸、约500个氨基酸至约550个氨基酸、约550个氨基酸至约800个氨基酸、约550个氨基酸至约750个氨基酸、约550个氨基酸至约700个氨基酸、约550个氨基酸至约650个氨基酸、约550个氨基酸至约600个氨基酸、约600个氨基酸至约800个氨基酸、约600个氨基酸至约750个氨基酸、约600个氨基酸至约700个氨基酸、约600个氨基酸至约650个氨基酸、约650个氨基酸至约800个氨基酸、约650个氨基酸至约750个氨基酸、约650个氨基酸至约700个氨基酸、约700个氨基酸至约800个氨基酸、约700个氨基酸至约750个氨基酸或约750个氨基酸至约800个氨基酸。
在这些组合物的一些实施方案中，编码序列中的至少一个包含跨越靶基因组DNA(例如，支持细胞靶基因组DNA或毛细胞靶基因组DNA)的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且缺乏天然存在于两个相邻的外显子之间的内含子序列。
在一些实施方案中，所述编码的部分中没有一个部分的氨基酸序列与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列甚至部分地重叠。在一些实施方案中，所述编码的部分中的一个或多个部分的氨基酸序列与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠。在一些实施方案中，所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠。
在一些实施方案中，重叠的氨基酸序列的长度为约30个氨基酸残基至约800个氨基酸(例如，或本文所述的该范围的任何子范围)。
在一些实例中，所述载体包括两种不同的载体，其中的每一种包含内含子的不同区段，其中所述内含子包含存在于靶基因组DNA(例如，支持细胞靶基因组DNA(例如，SLC26A4基因组DNA或GJB2基因组DNA)(例如，本文所述的SEQ ID NO:3中的任何示例性内含子)或毛细胞靶基因组DNA(例如，OTOF基因组DNA、TRIOBP基因组DNA、PJVK基因组DNA、NDP基因组DNA、CLRN1基因组DNA、TMC1基因组DNA、VEGF基因组DNA、HSPA1A基因组DNA或STRC基因组DNA(例如，本文所述的SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37、SEQID NO:47、SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:80中的任何示例性内含子)中的内含子的核苷酸序列，并且其中所述两个不同区段在序列上重叠的长度为至少100个核苷酸(例如，约100个核苷酸至约3,000个核苷酸、约100个核苷酸至约2,500个核苷酸、约100个核苷酸至约2,000个核苷酸、约100个核苷酸至约1,500个核苷酸、约100个核苷酸至约1,000个核苷酸、约100个核苷酸至约800个核苷酸、约100个核苷酸至约600个核苷酸、约100个核苷酸至约400个核苷酸、约100个核苷酸至约200个核苷酸、约200个核苷酸至约3,000个核苷酸、约200个核苷酸至约2,500个核苷酸、约200个核苷酸至约2,000个核苷酸、约200个核苷酸至约1,500个核苷酸、约200个核苷酸至约1,000个核苷酸、约200个核苷酸至约800个核苷酸、约200个核苷酸至约600个核苷酸、约200个核苷酸至约400个核苷酸、约400个核苷酸至约3,000个核苷酸、约400个核苷酸至约2,500个核苷酸、约400个核苷酸至约2,000个核苷酸、约400个核苷酸至约1,500个核苷酸、约400个核苷酸至约1,000个核苷酸、约400个核苷酸至约800个核苷酸、约400个核苷酸至约600个核苷酸、约600个核苷酸至约3,000个核苷酸、约600个核苷酸至约2,500个核苷酸、约600个核苷酸至约2,000个核苷酸、约600个核苷酸至约1,500个核苷酸、约600个核苷酸至约1,000个核苷酸、约600个核苷酸至约800个核苷酸、约800个核苷酸至约3,000个核苷酸、约800个核苷酸至约2,500个核苷酸、约800个核苷酸至约2,000个核苷酸、约800个核苷酸至约1,500个核苷酸、约800个核苷酸至约1,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约3,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约2,500个核苷酸、约1,000个核苷酸至约2,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约1,500个核苷酸、约1,500个核苷酸至约3,000个核苷酸、约1,500个核苷酸至约2,500个核苷酸、约1,500个核苷酸至约2,000个核苷酸、约2,000个核苷酸至约3,000个核苷酸、约2,000个核苷酸至约2,500个核苷酸或约2,500个核苷酸至约3,000个核苷酸)。
在任何两种不同的载体中的重叠核苷酸序列可包含靶基因(例如，支持细胞靶基因(例如，SLC26A4基因或GJB2基因)(例如，本文所述的SEQ ID NO:3中的示例性外显示中的任一个或多个)或毛细胞靶基因(例如，OTOF基因、TRIOBP基因、PJVK基因、NDP基因、CLRN1基因、TMC1基因或STRC基因)(例如，本文所述的SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:80中的示例性外显子中的任一个或多个))的一个或多个外显子的部分或全部。
在一些实施方案中，组合物中不同载体的数目为2、3、4或5。在其中组合物中不同载体的数目为2的组合物中，两种不同的载体中的第一载体可以包含编码靶蛋白的N末端部分(例如，支持细胞靶蛋白的N末端部分或毛细胞靶蛋白的N末端部分)的编码序列。在一些实例中，靶基因的N末端部分(例如，支持细胞靶基因的N末端部分或毛细胞靶基因的N末端部分)的长度为约30个氨基酸至约800个氨基酸(例如，约30个氨基酸至约790个氨基酸、约30个氨基酸至约780个氨基酸、约30个氨基酸至约770个氨基酸、约30个氨基酸至约760个氨基酸、约30个氨基酸至约750个氨基酸、约30个氨基酸至约740个氨基酸、约30个氨基酸至约730个氨基酸、约30个氨基酸至约720个氨基酸、约30个氨基酸至约710个氨基酸、约30个氨基酸至约700个氨基酸、约30个氨基酸至约690个氨基酸、约30个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约30个氨基酸至约660个氨基酸、约30个氨基酸至约650个氨基酸、约30个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约30个氨基酸至约620个氨基酸、约30个氨基酸至约610个氨基酸、约30个氨基酸至约600个氨基酸、约30个氨基酸至约590个氨基酸、约30个氨基酸至约580个氨基酸、约30个氨基酸至约570个氨基酸、约30个氨基酸至约560个氨基酸、约30个氨基酸至约550个氨基酸、约30个氨基酸至约540个氨基酸、约30个氨基酸至约530个氨基酸、约30个氨基酸至约520个氨基酸、约30个氨基酸至约510个氨基酸、约30个氨基酸至约500个氨基酸、约30个氨基酸至约490个氨基酸、约30个氨基酸至约480个氨基酸、约30个氨基酸至约470个氨基酸、约30个氨基酸至约460个氨基酸、约30个氨基酸至约450个氨基酸、约30个氨基酸至约440个氨基酸、约30个氨基酸至约430个氨基酸、约30个氨基酸至约420个氨基酸、约30个氨基酸至约410个氨基酸、约30个氨基酸至约400个氨基酸、约30个氨基酸至约390个氨基酸、约30个氨基酸至约380个氨基酸、约30个氨基酸至约370个氨基酸、约30个氨基酸至约360个氨基酸、约30个氨基酸至约350个氨基酸、约30个氨基酸至约340个氨基酸、约30个氨基酸至约330个氨基酸、约30个氨基酸至约320个氨基酸、约30个氨基酸至约310个氨基酸、约30个氨基酸至约300个氨基酸、约30个氨基酸至约290个氨基酸、约30个氨基酸至约280个氨基酸、约30个氨基酸至约270个氨基酸、约30个氨基酸至约260个氨基酸、约30个氨基酸至约250个氨基酸、约30个氨基酸至约240个氨基酸、约30个氨基酸至约230个氨基酸、约30个氨基酸至约220个氨基酸、约30个氨基酸至约210个氨基酸、约30个氨基酸至约200个氨基酸、约30个氨基酸至约190个氨基酸、约30个氨基酸至约180个氨基酸、约30个氨基酸至约170个氨基酸、约30个氨基酸至约160个氨基酸、约30个氨基酸至约150个氨基酸、约30个氨基酸至约140个氨基酸、约30个氨基酸至约130个氨基酸、约30个氨基酸至约120个氨基酸、约30个氨基酸至约110个氨基酸、约30个氨基酸至约100个氨基酸、约30个氨基酸至约90个氨基酸、约30个氨基酸至约80个氨基酸、约30个氨基酸至约70个氨基酸、约30个氨基酸至约60个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸、约50个氨基酸至约800个氨基酸、约50个氨基酸至约790个氨基酸、约50个氨基酸至约780个氨基酸、约50个氨基酸至约770个氨基酸、约50个氨基酸至约760个氨基酸、约50个氨基酸至约750个氨基酸、约50个氨基酸至约740个氨基酸、约50个氨基酸至约730个氨基酸、约50个氨基酸至约720个氨基酸、约50个氨基酸至约710个氨基酸、约50个氨基酸至约700个氨基酸、约50个氨基酸至约690个氨基酸、约50个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约50个氨基酸至约660个氨基酸、约50个氨基酸至约650个氨基酸、约50个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约50个氨基酸至约620个氨基酸、约50个氨基酸至约610个氨基酸、约50个氨基酸至约600个氨基酸、约50个氨基酸至约590个氨基酸、约50个氨基酸至约580个氨基酸、约50个氨基酸至约570个氨基酸、约50个氨基酸至约560个氨基酸、约50个氨基酸至约550个氨基酸、约50个氨基酸至约540个氨基酸、约50个氨基酸至约530个氨基酸、约50个氨基酸至约520个氨基酸、约50个氨基酸至约510个氨基酸、约50个氨基酸至约500个氨基酸、约50个氨基酸至约490个氨基酸、约50个氨基酸至约480个氨基酸、约50个氨基酸至约470个氨基酸、约50个氨基酸至约460个氨基酸、约50个氨基酸至约450个氨基酸、约50个氨基酸至约440个氨基酸、约50个氨基酸至约430个氨基酸、约50个氨基酸至约420个氨基酸、约50个氨基酸至约410个氨基酸、约50个氨基酸至约400个氨基酸、约50个氨基酸至约390个氨基酸、约50个氨基酸至约380个氨基酸、约50个氨基酸至约370个氨基酸、约50个氨基酸至约360个氨基酸、约50个氨基酸至约350个氨基酸、约50个氨基酸至约340个氨基酸、约50个氨基酸至约330个氨基酸、约50个氨基酸至约320个氨基酸、约50个氨基酸至约310个氨基酸、约50个氨基酸至约300个氨基酸、约50个氨基酸至约290个氨基酸、约50个氨基酸至约280个氨基酸、约50个氨基酸至约270个氨基酸、约50个氨基酸至约260个氨基酸、约50个氨基酸至约250个氨基酸、约50个氨基酸至约240个氨基酸、约50个氨基酸至约230个氨基酸、约50个氨基酸至约220个氨基酸、约50个氨基酸至约210个氨基酸、约50个氨基酸至约200个氨基酸、约50个氨基酸至约190个氨基酸、约50个氨基酸至约180个氨基酸、约50个氨基酸至约170个氨基酸、约50个氨基酸至约160个氨基酸、约50个氨基酸至约150个氨基酸、约50个氨基酸至约140个氨基酸、约50个氨基酸至约130个氨基酸、约50个氨基酸至约120个氨基酸、约50个氨基酸至约110个氨基酸、约50个氨基酸至约100个氨基酸、约50个氨基酸至约90个氨基酸、约50个氨基酸至约80个氨基酸、约50个氨基酸至约70个氨基酸、约50个氨基酸至约60个氨基酸、约80个氨基酸至约800个氨基酸、约80个氨基酸至约790个氨基酸、约80个氨基酸至约780个氨基酸、约80个氨基酸至约770个氨基酸、约80个氨基酸至约760个氨基酸、约80个氨基酸至约750个氨基酸、约80个氨基酸至约740个氨基酸、约80个氨基酸至约730个氨基酸、约80个氨基酸至约720个氨基酸、约80个氨基酸至约710个氨基酸、约80个氨基酸至约700个氨基酸、约80个氨基酸至约690个氨基酸、约80个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约80个氨基酸至约660个氨基酸、约80个氨基酸至约650个氨基酸、约80个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约80个氨基酸至约620个氨基酸、约80个氨基酸至约610个氨基酸、约80个氨基酸至约600个氨基酸、约80个氨基酸至约590个氨基酸、约80个氨基酸至约580个氨基酸、约80个氨基酸至约570个氨基酸、约80个氨基酸至约560个氨基酸、约80个氨基酸至约550个氨基酸、约80个氨基酸至约540个氨基酸、约80个氨基酸至约530个氨基酸、约80个氨基酸至约520个氨基酸、约80个氨基酸至约510个氨基酸、约80个氨基酸至约500个氨基酸、约80个氨基酸至约490个氨基酸、约80个氨基酸至约480个氨基酸、约80个氨基酸至约470个氨基酸、约80个氨基酸至约460个氨基酸、约80个氨基酸至约450个氨基酸、约80个氨基酸至约440个氨基酸、约80个氨基酸至约430个氨基酸、约80个氨基酸至约420个氨基酸、约80个氨基酸至约410个氨基酸、约80个氨基酸至约400个氨基酸、约80个氨基酸至约390个氨基酸、约80个氨基酸至约380个氨基酸、约80个氨基酸至约370个氨基酸、约80个氨基酸至约360个氨基酸、约80个氨基酸至约350个氨基酸、约80个氨基酸至约340个氨基酸、约80个氨基酸至约330个氨基酸、约80个氨基酸至约320个氨基酸、约80个氨基酸至约310个氨基酸、约80个氨基酸至约300个氨基酸、约80个氨基酸至约290个氨基酸、约80个氨基酸至约280个氨基酸、约80个氨基酸至约270个氨基酸、约80个氨基酸至约260个氨基酸、约80个氨基酸至约250个氨基酸、约80个氨基酸至约240个氨基酸、约80个氨基酸至约230个氨基酸、约80个氨基酸至约220个氨基酸、约80个氨基酸至约210个氨基酸、约80个氨基酸至约200个氨基酸、约80个氨基酸至约190个氨基酸、约80个氨基酸至约180个氨基酸、约80个氨基酸至约170个氨基酸、约80个氨基酸至约160个氨基酸、约80个氨基酸至约150个氨基酸、约80个氨基酸至约140个氨基酸、约80个氨基酸至约130个氨基酸、约80个氨基酸至约120个氨基酸、约80个氨基酸至约110个氨基酸、约80个氨基酸至约100个氨基酸、约100个氨基酸至约800个氨基酸、约100个氨基酸至约790个氨基酸、约100个氨基酸至约780个氨基酸、约100个氨基酸至约770个氨基酸、约100个氨基酸至约760个氨基酸、约100个氨基酸至约750个氨基酸、约100个氨基酸至约740个氨基酸、约100个氨基酸至约730个氨基酸、约100个氨基酸至约720个氨基酸、约100个氨基酸至约710个氨基酸、约100个氨基酸至约700个氨基酸、约100个氨基酸至约690个氨基酸、约100个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约100个氨基酸至约660个氨基酸、约100个氨基酸至约650个氨基酸、约100个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约100个氨基酸至约620个氨基酸、约100个氨基酸至约610个氨基酸、约100个氨基酸至约600个氨基酸、约100个氨基酸至约590个氨基酸、约100个氨基酸至约580个氨基酸、约100个氨基酸至约570个氨基酸、约100个氨基酸至约560个氨基酸、约100个氨基酸至约550个氨基酸、约100个氨基酸至约540个氨基酸、约100个氨基酸至约530个氨基酸、约100个氨基酸至约520个氨基酸、约100个氨基酸至约510个氨基酸、约100个氨基酸至约500个氨基酸、约100个氨基酸至约490个氨基酸、约100个氨基酸至约480个氨基酸、约100个氨基酸至约470个氨基酸、约100个氨基酸至约460个氨基酸、约100个氨基酸至约450个氨基酸、约100个氨基酸至约440个氨基酸、约100个氨基酸至约430个氨基酸、约100个氨基酸至约420个氨基酸、约100个氨基酸至约410个氨基酸、约100个氨基酸至约400个氨基酸、约100个氨基酸至约390个氨基酸、约100个氨基酸至约380个氨基酸、约100个氨基酸至约370个氨基酸、约100个氨基酸至约360个氨基酸、约100个氨基酸至约350个氨基酸、约100个氨基酸至约340个氨基酸、约100个氨基酸至约330个氨基酸、约100个氨基酸至约320个氨基酸、约100个氨基酸至约310个氨基酸、约100个氨基酸至约300个氨基酸、约100个氨基酸至约290个氨基酸、约100个氨基酸至约280个氨基酸、约100个氨基酸至约270个氨基酸、约100个氨基酸至约260个氨基酸、约100个氨基酸至约250个氨基酸、约100个氨基酸至约240个氨基酸、约100个氨基酸至约230个氨基酸、约100个氨基酸至约220个氨基酸、约100个氨基酸至约210个氨基酸、约100个氨基酸至约200个氨基酸、约100个氨基酸至约190个氨基酸、约100个氨基酸至约180个氨基酸、约100个氨基酸至约170个氨基酸、约100个氨基酸至约160个氨基酸、约100个氨基酸至约150个氨基酸、约100个氨基酸至约140个氨基酸、约100个氨基酸至约130个氨基酸、约100个氨基酸至约120个氨基酸、约100个氨基酸至约110个氨基酸、约120个氨基酸至约800个氨基酸、约120个氨基酸至约790个氨基酸、约120个氨基酸至约780个氨基酸、约120个氨基酸至约770个氨基酸、约120个氨基酸至约760个氨基酸、约120个氨基酸至约750个氨基酸、约120个氨基酸至约740个氨基酸、约120个氨基酸至约730个氨基酸、约120个氨基酸至约720个氨基酸、约120个氨基酸至约710个氨基酸、约120个氨基酸至约700个氨基酸、约120个氨基酸至约690个氨基酸、约120个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约120个氨基酸至约660个氨基酸、约120个氨基酸至约650个氨基酸、约120个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约120个氨基酸至约620个氨基酸、约120个氨基酸至约610个氨基酸、约120个氨基酸至约600个氨基酸、约120个氨基酸至约590个氨基酸、约120个氨基酸至约580个氨基酸、约120个氨基酸至约570个氨基酸、约120个氨基酸至约560个氨基酸、约120个氨基酸至约550个氨基酸、约120个氨基酸至约540个氨基酸、约120个氨基酸至约530个氨基酸、约120个氨基酸至约520个氨基酸、约120个氨基酸至约510个氨基酸、约120个氨基酸至约500个氨基酸、约120个氨基酸至约490个氨基酸、约120个氨基酸至约480个氨基酸、约120个氨基酸至约470个氨基酸、约120个氨基酸至约460个氨基酸、约120个氨基酸至约450个氨基酸、约120个氨基酸至约440个氨基酸、约120个氨基酸至约430个氨基酸、约120个氨基酸至约420个氨基酸、约120个氨基酸至约410个氨基酸、约120个氨基酸至约400个氨基酸、约120个氨基酸至约390个氨基酸、约120个氨基酸至约380个氨基酸、约120个氨基酸至约370个氨基酸、约120个氨基酸至约360个氨基酸、约120个氨基酸至约350个氨基酸、约120个氨基酸至约340个氨基酸、约120个氨基酸至约330个氨基酸、约120个氨基酸至约320个氨基酸、约120个氨基酸至约310个氨基酸、约120个氨基酸至约300个氨基酸、约120个氨基酸至约290个氨基酸、约120个氨基酸至约280个氨基酸、约120个氨基酸至约270个氨基酸、约120个氨基酸至约260个氨基酸、约120个氨基酸至约250个氨基酸、约120个氨基酸至约240个氨基酸、约120个氨基酸至约230个氨基酸、约120个氨基酸至约220个氨基酸、约120个氨基酸至约210个氨基酸、约120个氨基酸至约200个氨基酸、约120个氨基酸至约190个氨基酸、约120个氨基酸至约180个氨基酸、约120个氨基酸至约170个氨基酸、约120个氨基酸至约160个氨基酸、约120个氨基酸至约150个氨基酸、约120个氨基酸至约140个氨基酸、约120个氨基酸至约130个氨基酸、约150个氨基酸至约800个氨基酸、约150个氨基酸至约790个氨基酸、约150个氨基酸至约780个氨基酸、约150个氨基酸至约770个氨基酸、约150个氨基酸至约760个氨基酸、约150个氨基酸至约750个氨基酸、约150个氨基酸至约740个氨基酸、约150个氨基酸至约730个氨基酸、约150个氨基酸至约720个氨基酸、约150个氨基酸至约710个氨基酸、约150个氨基酸至约700个氨基酸、约150个氨基酸至约690个氨基酸、约150个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约150个氨基酸至约660个氨基酸、约150个氨基酸至约650个氨基酸、约150个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约150个氨基酸至约620个氨基酸、约150个氨基酸至约610个氨基酸、约150个氨基酸至约600个氨基酸、约150个氨基酸至约590个氨基酸、约150个氨基酸至约580个氨基酸、约150个氨基酸至约570个氨基酸、约150个氨基酸至约560个氨基酸、约150个氨基酸至约550个氨基酸、约150个氨基酸至约540个氨基酸、约150个氨基酸至约530个氨基酸、约150个氨基酸至约520个氨基酸、约150个氨基酸至约510个氨基酸、约150个氨基酸至约500个氨基酸、约150个氨基酸至约490个氨基酸、约150个氨基酸至约480个氨基酸、约150个氨基酸至约470个氨基酸、约150个氨基酸至约460个氨基酸、约150个氨基酸至约450个氨基酸、约150个氨基酸至约440个氨基酸、约150个氨基酸至约430个氨基酸、约150个氨基酸至约420个氨基酸、约150个氨基酸至约410个氨基酸、约150个氨基酸至约400个氨基酸、约150个氨基酸至约390个氨基酸、约150个氨基酸至约380个氨基酸、约150个氨基酸至约370个氨基酸、约150个氨基酸至约360个氨基酸、约150个氨基酸至约350个氨基酸、约150个氨基酸至约340个氨基酸、约150个氨基酸至约330个氨基酸、约150个氨基酸至约320个氨基酸、约150个氨基酸至约310个氨基酸、约150个氨基酸至约300个氨基酸、约150个氨基酸至约290个氨基酸、约150个氨基酸至约280个氨基酸、约150个氨基酸至约270个氨基酸、约150个氨基酸至约260个氨基酸、约150个氨基酸至约250个氨基酸、约150个氨基酸至约240个氨基酸、约150个氨基酸至约230个氨基酸、约150个氨基酸至约220个氨基酸、约150个氨基酸至约210个氨基酸、约150个氨基酸至约200个氨基酸、约150个氨基酸至约190个氨基酸、约150个氨基酸至约180个氨基酸、约150个氨基酸至约170个氨基酸、约150个氨基酸至约160个氨基酸、约180个氨基酸至约800个氨基酸、约180个氨基酸至约790个氨基酸、约180个氨基酸至约780个氨基酸、约180个氨基酸至约770个氨基酸、约180个氨基酸至约760个氨基酸、约180个氨基酸至约750个氨基酸、约180个氨基酸至约740个氨基酸、约180个氨基酸至约730个氨基酸、约180个氨基酸至约720个氨基酸、约180个氨基酸至约710个氨基酸、约180个氨基酸至约700个氨基酸、约180个氨基酸至约690个氨基酸、约180个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约180个氨基酸至约660个氨基酸、约180个氨基酸至约650个氨基酸、约180个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约180个氨基酸至约620个氨基酸、约180个氨基酸至约610个氨基酸、约180个氨基酸至约600个氨基酸、约180个氨基酸至约590个氨基酸、约180个氨基酸至约580个氨基酸、约180个氨基酸至约570个氨基酸、约180个氨基酸至约560个氨基酸、约180个氨基酸至约550个氨基酸、约180个氨基酸至约540个氨基酸、约180个氨基酸至约530个氨基酸、约180个氨基酸至约520个氨基酸、约180个氨基酸至约510个氨基酸、约180个氨基酸至约500个氨基酸、约180个氨基酸至约490个氨基酸、约180个氨基酸至约480个氨基酸、约180个氨基酸至约470个氨基酸、约180个氨基酸至约460个氨基酸、约180个氨基酸至约450个氨基酸、约180个氨基酸至约440个氨基酸、约180个氨基酸至约430个氨基酸、约180个氨基酸至约420个氨基酸、约180个氨基酸至约410个氨基酸、约180个氨基酸至约400个氨基酸、约180个氨基酸至约390个氨基酸、约180个氨基酸至约380个氨基酸、约180个氨基酸至约370个氨基酸、约180个氨基酸至约360个氨基酸、约180个氨基酸至约350个氨基酸、约180个氨基酸至约340个氨基酸、约180个氨基酸至约330个氨基酸、约180个氨基酸至约320个氨基酸、约180个氨基酸至约310个氨基酸、约180个氨基酸至约300个氨基酸、约180个氨基酸至约290个氨基酸、约180个氨基酸至约280个氨基酸、约180个氨基酸至约270个氨基酸、约180个氨基酸至约260个氨基酸、约180个氨基酸至约250个氨基酸、约180个氨基酸至约240个氨基酸、约180个氨基酸至约230个氨基酸、约180个氨基酸至约220个氨基酸、约180个氨基酸至约210个氨基酸、约180个氨基酸至约200个氨基酸、约180个氨基酸至约190个氨基酸、约200个氨基酸至约800个氨基酸、约200个氨基酸至约790个氨基酸、约200个氨基酸至约780个氨基酸、约200个氨基酸至约770个氨基酸、约200个氨基酸至约760个氨基酸、约200个氨基酸至约750个氨基酸、约200个氨基酸至约740个氨基酸、约200个氨基酸至约730个氨基酸、约200个氨基酸至约720个氨基酸、约200个氨基酸至约710个氨基酸、约200个氨基酸至约700个氨基酸、约200个氨基酸至约690个氨基酸、约200个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约200个氨基酸至约660个氨基酸、约200个氨基酸至约650个氨基酸、约200个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约200个氨基酸至约620个氨基酸、约200个氨基酸至约610个氨基酸、约200个氨基酸至约600个氨基酸、约200个氨基酸至约590个氨基酸、约200个氨基酸至约580个氨基酸、约200个氨基酸至约570个氨基酸、约200个氨基酸至约560个氨基酸、约200个氨基酸至约550个氨基酸、约200个氨基酸至约540个氨基酸、约200个氨基酸至约530个氨基酸、约200个氨基酸至约520个氨基酸、约200个氨基酸至约510个氨基酸、约200个氨基酸至约500个氨基酸、约200个氨基酸至约490个氨基酸、约200个氨基酸至约480个氨基酸、约200个氨基酸至约470个氨基酸、约200个氨基酸至约460个氨基酸、约200个氨基酸至约450个氨基酸、约200个氨基酸至约440个氨基酸、约200个氨基酸至约430个氨基酸、约200个氨基酸至约420个氨基酸、约200个氨基酸至约410个氨基酸、约200个氨基酸至约400个氨基酸、约200个氨基酸至约390个氨基酸、约200个氨基酸至约380个氨基酸、约200个氨基酸至约370个氨基酸、约200个氨基酸至约360个氨基酸、约200个氨基酸至约350个氨基酸、约200个氨基酸至约340个氨基酸、约200个氨基酸至约330个氨基酸、约200个氨基酸至约320个氨基酸、约200个氨基酸至约310个氨基酸、约200个氨基酸至约300个氨基酸、约200个氨基酸至约290个氨基酸、约200个氨基酸至约280个氨基酸、约200个氨基酸至约270个氨基酸、约200个氨基酸至约260个氨基酸、约200个氨基酸至约250个氨基酸、约200个氨基酸至约240个氨基酸、约200个氨基酸至约230个氨基酸、约200个氨基酸至约220个氨基酸、约200个氨基酸至约210个氨基酸、约250个氨基酸至约800个氨基酸、约250个氨基酸至约790个氨基酸、约250个氨基酸至约780个氨基酸、约250个氨基酸至约770个氨基酸、约250个氨基酸至约760个氨基酸、约250个氨基酸至约750个氨基酸、约250个氨基酸至约740个氨基酸、约250个氨基酸至约730个氨基酸、约250个氨基酸至约720个氨基酸、约250个氨基酸至约710个氨基酸、约250个氨基酸至约700个氨基酸、约250个氨基酸至约690个氨基酸、约250个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约250个氨基酸至约660个氨基酸、约250个氨基酸至约650个氨基酸、约250个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约250个氨基酸至约620个氨基酸、约250个氨基酸至约610个氨基酸、约250个氨基酸至约600个氨基酸、约250个氨基酸至约590个氨基酸、约250个氨基酸至约580个氨基酸、约250个氨基酸至约570个氨基酸、约250个氨基酸至约560个氨基酸、约250个氨基酸至约550个氨基酸、约250个氨基酸至约540个氨基酸、约250个氨基酸至约530个氨基酸、约250个氨基酸至约520个氨基酸、约250个氨基酸至约510个氨基酸、约250个氨基酸至约500个氨基酸、约250个氨基酸至约490个氨基酸、约250个氨基酸至约480个氨基酸、约250个氨基酸至约470个氨基酸、约250个氨基酸至约460个氨基酸、约250个氨基酸至约450个氨基酸、约250个氨基酸至约440个氨基酸、约250个氨基酸至约430个氨基酸、约250个氨基酸至约420个氨基酸、约250个氨基酸至约410个氨基酸、约250个氨基酸至约400个氨基酸、约250个氨基酸至约390个氨基酸、约250个氨基酸至约380个氨基酸、约250个氨基酸至约370个氨基酸、约250个氨基酸至约360个氨基酸、约250个氨基酸至约350个氨基酸、约250个氨基酸至约340个氨基酸、约250个氨基酸至约330个氨基酸、约250个氨基酸至约320个氨基酸、约250个氨基酸至约310个氨基酸、约250个氨基酸至约300个氨基酸、约250个氨基酸至约290个氨基酸、约250个氨基酸至约280个氨基酸、约250个氨基酸至约270个氨基酸、约250个氨基酸至约260个氨基酸、约280个氨基酸至约800个氨基酸、约280个氨基酸至约790个氨基酸、约280个氨基酸至约780个氨基酸、约280个氨基酸至约770个氨基酸、约280个氨基酸至约760个氨基酸、约280个氨基酸至约750个氨基酸、约280个氨基酸至约740个氨基酸、约280个氨基酸至约730个氨基酸、约280个氨基酸至约720个氨基酸、约280个氨基酸至约710个氨基酸、约280个氨基酸至约700个氨基酸、约280个氨基酸至约690个氨基酸、约280个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约280个氨基酸至约660个氨基酸、约280个氨基酸至约650个氨基酸、约280个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约280个氨基酸至约620个氨基酸、约280个氨基酸至约610个氨基酸、约280个氨基酸至约600个氨基酸、约280个氨基酸至约590个氨基酸、约280个氨基酸至约580个氨基酸、约280个氨基酸至约570个氨基酸、约280个氨基酸至约560个氨基酸、约280个氨基酸至约550个氨基酸、约280个氨基酸至约540个氨基酸、约280个氨基酸至约530个氨基酸、约280个氨基酸至约520个氨基酸、约280个氨基酸至约510个氨基酸、约280个氨基酸至约500个氨基酸、约280个氨基酸至约490个氨基酸、约280个氨基酸至约480个氨基酸、约280个氨基酸至约470个氨基酸、约280个氨基酸至约460个氨基酸、约280个氨基酸至约450个氨基酸、约280个氨基酸至约440个氨基酸、约280个氨基酸至约430个氨基酸、约280个氨基酸至约420个氨基酸、约280个氨基酸至约410个氨基酸、约280个氨基酸至约400个氨基酸、约280个氨基酸至约390个氨基酸、约280个氨基酸至约380个氨基酸、约280个氨基酸至约370个氨基酸、约280个氨基酸至约360个氨基酸、约280个氨基酸至约350个氨基酸、约280个氨基酸至约340个氨基酸、约280个氨基酸至约330个氨基酸、约280个氨基酸至约320个氨基酸、约280个氨基酸至约310个氨基酸、约280个氨基酸至约300个氨基酸、约300个氨基酸至约800个氨基酸、约300个氨基酸至约790个氨基酸、约300个氨基酸至约780个氨基酸、约300个氨基酸至约770个氨基酸、约300个氨基酸至约760个氨基酸、约300个氨基酸至约750个氨基酸、约300个氨基酸至约740个氨基酸、约300个氨基酸至约730个氨基酸、约300个氨基酸至约720个氨基酸、约300个氨基酸至约710个氨基酸、约300个氨基酸至约700个氨基酸、约300个氨基酸至约690个氨基酸、约300个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约300个氨基酸至约660个氨基酸、约300个氨基酸至约650个氨基酸、约300个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约300个氨基酸至约620个氨基酸、约300个氨基酸至约610个氨基酸、约300个氨基酸至约600个氨基酸、约300个氨基酸至约590个氨基酸、约300个氨基酸至约580个氨基酸、约300个氨基酸至约570个氨基酸、约300个氨基酸至约560个氨基酸、约300个氨基酸至约550个氨基酸、约300个氨基酸至约540个氨基酸、约300个氨基酸至约530个氨基酸、约300个氨基酸至约520个氨基酸、约300个氨基酸至约510个氨基酸、约300个氨基酸至约500个氨基酸、约300个氨基酸至约490个氨基酸、约300个氨基酸至约480个氨基酸、约300个氨基酸至约470个氨基酸、约300个氨基酸至约460个氨基酸、约300个氨基酸至约450个氨基酸、约300个氨基酸至约440个氨基酸、约300个氨基酸至约430个氨基酸、约300个氨基酸至约420个氨基酸、约300个氨基酸至约410个氨基酸、约300个氨基酸至约400个氨基酸、约300个氨基酸至约390个氨基酸、约300个氨基酸至约380个氨基酸、约300个氨基酸至约370个氨基酸、约300个氨基酸至约360个氨基酸、约300个氨基酸至约350个氨基酸、约300个氨基酸至约340个氨基酸、约300个氨基酸至约330个氨基酸、约300个氨基酸至约320个氨基酸、约300个氨基酸至约310个氨基酸、约350个氨基酸至约800个氨基酸、约350个氨基酸至约790个氨基酸、约350个氨基酸至约780个氨基酸、约350个氨基酸至约770个氨基酸、约350个氨基酸至约760个氨基酸、约350个氨基酸至约750个氨基酸、约350个氨基酸至约740个氨基酸、约350个氨基酸至约730个氨基酸、约350个氨基酸至约720个氨基酸、约350个氨基酸至约710个氨基酸、约350个氨基酸至约700个氨基酸、约350个氨基酸至约690个氨基酸、约350个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约350个氨基酸至约660个氨基酸、约350个氨基酸至约650个氨基酸、约350个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约350个氨基酸至约620个氨基酸、约350个氨基酸至约610个氨基酸、约350个氨基酸至约600个氨基酸、约350个氨基酸至约590个氨基酸、约350个氨基酸至约580个氨基酸、约350个氨基酸至约570个氨基酸、约350个氨基酸至约560个氨基酸、约350个氨基酸至约550个氨基酸、约350个氨基酸至约540个氨基酸、约350个氨基酸至约530个氨基酸、约350个氨基酸至约520个氨基酸、约350个氨基酸至约510个氨基酸、约350个氨基酸至约500个氨基酸、约350个氨基酸至约490个氨基酸、约350个氨基酸至约480个氨基酸、约350个氨基酸至约470个氨基酸、约350个氨基酸至约460个氨基酸、约350个氨基酸至约450个氨基酸、约350个氨基酸至约440个氨基酸、约350个氨基酸至约430个氨基酸、约350个氨基酸至约420个氨基酸、约350个氨基酸至约410个氨基酸、约350个氨基酸至约400个氨基酸、约350个氨基酸至约390个氨基酸、约350个氨基酸至约380个氨基酸、约350个氨基酸至约370个氨基酸、约350个氨基酸至约360个氨基酸、约380个氨基酸至约800个氨基酸、约380个氨基酸至约790个氨基酸、约380个氨基酸至约780个氨基酸、约380个氨基酸至约770个氨基酸、约380个氨基酸至约760个氨基酸、约380个氨基酸至约750个氨基酸、约380个氨基酸至约740个氨基酸、约380个氨基酸至约730个氨基酸、约380个氨基酸至约720个氨基酸、约380个氨基酸至约710个氨基酸、约380个氨基酸至约700个氨基酸、约380个氨基酸至约690个氨基酸、约380个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约380个氨基酸至约660个氨基酸、约380个氨基酸至约650个氨基酸、约380个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约380个氨基酸至约620个氨基酸、约380个氨基酸至约610个氨基酸、约380个氨基酸至约600个氨基酸、约380个氨基酸至约590个氨基酸、约380个氨基酸至约580个氨基酸、约380个氨基酸至约570个氨基酸、约380个氨基酸至约560个氨基酸、约380个氨基酸至约550个氨基酸、约380个氨基酸至约540个氨基酸、约380个氨基酸至约530个氨基酸、约380个氨基酸至约520个氨基酸、约380个氨基酸至约510个氨基酸、约380个氨基酸至约500个氨基酸、约380个氨基酸至约490个氨基酸、约380个氨基酸至约480个氨基酸、约380个氨基酸至约470个氨基酸、约380个氨基酸至约460个氨基酸、约380个氨基酸至约450个氨基酸、约380个氨基酸至约440个氨基酸、约380个氨基酸至约430个氨基酸、约380个氨基酸至约420个氨基酸、约380个氨基酸至约410个氨基酸、约380个氨基酸至约400个氨基酸、约380个氨基酸至约390个氨基酸、约400个氨基酸至约800个氨基酸、约400个氨基酸至约790个氨基酸、约400个氨基酸至约780个氨基酸、约400个氨基酸至约770个氨基酸、约400个氨基酸至约760个氨基酸、约400个氨基酸至约750个氨基酸、约400个氨基酸至约740个氨基酸、约400个氨基酸至约730个氨基酸、约400个氨基酸至约720个氨基酸、约400个氨基酸至约710个氨基酸、约400个氨基酸至约700个氨基酸、约400个氨基酸至约690个氨基酸、约400个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约400个氨基酸至约660个氨基酸、约400个氨基酸至约650个氨基酸、约400个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约400个氨基酸至约620个氨基酸、约400个氨基酸至约610个氨基酸、约400个氨基酸至约600个氨基酸、约400个氨基酸至约590个氨基酸、约400个氨基酸至约580个氨基酸、约400个氨基酸至约570个氨基酸、约400个氨基酸至约560个氨基酸、约400个氨基酸至约550个氨基酸、约400个氨基酸至约540个氨基酸、约400个氨基酸至约530个氨基酸、约400个氨基酸至约520个氨基酸、约400个氨基酸至约510个氨基酸、约400个氨基酸至约500个氨基酸、约400个氨基酸至约490个氨基酸、约400个氨基酸至约480个氨基酸、约400个氨基酸至约470个氨基酸、约400个氨基酸至约460个氨基酸、约400个氨基酸至约450个氨基酸、约400个氨基酸至约440个氨基酸、约400个氨基酸至约430个氨基酸、约400个氨基酸至约420个氨基酸、约400个氨基酸至约410个氨基酸、约450个氨基酸至约800个氨基酸、约450个氨基酸至约790个氨基酸、约450个氨基酸至约780个氨基酸、约450个氨基酸至约770个氨基酸、约450个氨基酸至约760个氨基酸、约450个氨基酸至约750个氨基酸、约450个氨基酸至约740个氨基酸、约450个氨基酸至约730个氨基酸、约450个氨基酸至约720个氨基酸、约450个氨基酸至约710个氨基酸、约450个氨基酸至约700个氨基酸、约450个氨基酸至约690个氨基酸、约450个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约450个氨基酸至约660个氨基酸、约450个氨基酸至约650个氨基酸、约450个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约450个氨基酸至约620个氨基酸、约450个氨基酸至约610个氨基酸、约450个氨基酸至约600个氨基酸、约450个氨基酸至约590个氨基酸、约450个氨基酸至约580个氨基酸、约450个氨基酸至约570个氨基酸、约450个氨基酸至约560个氨基酸、约450个氨基酸至约550个氨基酸、约450个氨基酸至约540个氨基酸、约450个氨基酸至约530个氨基酸、约450个氨基酸至约520个氨基酸、约450个氨基酸至约510个氨基酸、约450个氨基酸至约500个氨基酸、约450个氨基酸至约490个氨基酸、约450个氨基酸至约480个氨基酸、约450个氨基酸至约470个氨基酸、约450个氨基酸至约460个氨基酸、约480个氨基酸至约800个氨基酸、约480个氨基酸至约790个氨基酸、约480个氨基酸至约780个氨基酸、约480个氨基酸至约770个氨基酸、约480个氨基酸至约760个氨基酸、约480个氨基酸至约750个氨基酸、约480个氨基酸至约740个氨基酸、约480个氨基酸至约730个氨基酸、约480个氨基酸至约720个氨基酸、约480个氨基酸至约710个氨基酸、约480个氨基酸至约700个氨基酸、约480个氨基酸至约690个氨基酸、约480个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约480个氨基酸至约660个氨基酸、约480个氨基酸至约650个氨基酸、约480个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约480个氨基酸至约620个氨基酸、约480个氨基酸至约610个氨基酸、约480个氨基酸至约600个氨基酸、约480个氨基酸至约590个氨基酸、约480个氨基酸至约580个氨基酸、约480个氨基酸至约570个氨基酸、约480个氨基酸至约560个氨基酸、约480个氨基酸至约550个氨基酸、约480个氨基酸至约540个氨基酸、约480个氨基酸至约530个氨基酸、约480个氨基酸至约520个氨基酸、约480个氨基酸至约510个氨基酸、约480个氨基酸至约500个氨基酸、约480个氨基酸至约490个氨基酸、约50个氨基酸至约800个氨基酸、约50个氨基酸至约790个氨基酸、约50个氨基酸至约780个氨基酸、约50个氨基酸至约770个氨基酸、约50个氨基酸至约760个氨基酸、约50个氨基酸至约750个氨基酸、约50个氨基酸至约740个氨基酸、约50个氨基酸至约730个氨基酸、约50个氨基酸至约720个氨基酸、约50个氨基酸至约710个氨基酸、约50个氨基酸至约700个氨基酸、约50个氨基酸至约690个氨基酸、约50个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约50个氨基酸至约660个氨基酸、约50个氨基酸至约650个氨基酸、约50个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约50个氨基酸至约620个氨基酸、约50个氨基酸至约610个氨基酸、约50个氨基酸至约600个氨基酸、约50个氨基酸至约590个氨基酸、约50个氨基酸至约580个氨基酸、约50个氨基酸至约570个氨基酸、约50个氨基酸至约560个氨基酸、约50个氨基酸至约550个氨基酸、约50个氨基酸至约540个氨基酸、约50个氨基酸至约530个氨基酸、约50个氨基酸至约520个氨基酸、约50个氨基酸至约510个氨基酸、约550个氨基酸至约800个氨基酸、约550个氨基酸至约790个氨基酸、约550个氨基酸至约780个氨基酸、约550个氨基酸至约770个氨基酸、约550个氨基酸至约760个氨基酸、约550个氨基酸至约750个氨基酸、约550个氨基酸至约740个氨基酸、约550个氨基酸至约730个氨基酸、约550个氨基酸至约720个氨基酸、约550个氨基酸至约710个氨基酸、约550个氨基酸至约700个氨基酸、约550个氨基酸至约690个氨基酸、约550个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约550个氨基酸至约660个氨基酸、约550个氨基酸至约650个氨基酸、约550个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约550个氨基酸至约620个氨基酸、约550个氨基酸至约610个氨基酸、约550个氨基酸至约600个氨基酸、约550个氨基酸至约590个氨基酸、约550个氨基酸至约580个氨基酸、约550个氨基酸至约570个氨基酸、约550个氨基酸至约560个氨基酸、约580个氨基酸至约800个氨基酸、约580个氨基酸至约790个氨基酸、约580个氨基酸至约780个氨基酸、约580个氨基酸至约770个氨基酸、约580个氨基酸至约760个氨基酸、约580个氨基酸至约750个氨基酸、约580个氨基酸至约740个氨基酸、约580个氨基酸至约730个氨基酸、约580个氨基酸至约720个氨基酸、约580个氨基酸至约710个氨基酸、约580个氨基酸至约700个氨基酸、约580个氨基酸至约690个氨基酸、约580个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约580个氨基酸至约660个氨基酸、约580个氨基酸至约650个氨基酸、约580个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约580个氨基酸至约620个氨基酸、约580个氨基酸至约610个氨基酸、约580个氨基酸至约600个氨基酸、约580个氨基酸至约590个氨基酸、约600个氨基酸至约800个氨基酸、约600个氨基酸至约790个氨基酸、约600个氨基酸至约780个氨基酸、约600个氨基酸至约770个氨基酸、约600个氨基酸至约760个氨基酸、约600个氨基酸至约750个氨基酸、约600个氨基酸至约740个氨基酸、约600个氨基酸至约730个氨基酸、约600个氨基酸至约720个氨基酸、约600个氨基酸至约710个氨基酸、约600个氨基酸至约700个氨基酸、约600个氨基酸至约690个氨基酸、约600个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约600个氨基酸至约660个氨基酸、约600个氨基酸至约650个氨基酸、约600个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约600个氨基酸至约620个氨基酸、约600个氨基酸至约610个氨基酸、约650个氨基酸至约800个氨基酸、约650个氨基酸至约790个氨基酸、约650个氨基酸至约780个氨基酸、约650个氨基酸至约770个氨基酸、约650个氨基酸至约760个氨基酸、约650个氨基酸至约750个氨基酸、约650个氨基酸至约740个氨基酸、约650个氨基酸至约730个氨基酸、约650个氨基酸至约720个氨基酸、约650个氨基酸至约710个氨基酸、约650个氨基酸至约700个氨基酸、约650个氨基酸至约690个氨基酸、约650个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约650个氨基酸至约660个氨基酸、约680个氨基酸至约800个氨基酸、约680个氨基酸至约790个氨基酸、约680个氨基酸至约780个氨基酸、约680个氨基酸至约770个氨基酸、约680个氨基酸至约760个氨基酸、约680个氨基酸至约750个氨基酸、约680个氨基酸至约740个氨基酸、约680个氨基酸至约730个氨基酸、约680个氨基酸至约720个氨基酸、约680个氨基酸至约710个氨基酸、约680个氨基酸至约700个氨基酸、约680个氨基酸至约690个氨基酸、约700个氨基酸至约800个氨基酸、约700个氨基酸至约790个氨基酸、约700个氨基酸至约780个氨基酸、约700个氨基酸至约770个氨基酸、约700个氨基酸至约760个氨基酸、约700个氨基酸至约750个氨基酸、约700个氨基酸至约740个氨基酸、约700个氨基酸至约730个氨基酸、约700个氨基酸至约720个氨基酸、约700个氨基酸至约710个氨基酸、约750个氨基酸至约800个氨基酸、约750个氨基酸至约790个氨基酸、约750个氨基酸至约780个氨基酸、约750个氨基酸至约770个氨基酸、约750个氨基酸至约760个氨基酸或约780个氨基酸至约800个氨基酸)。在一些实例中，第一载体还包含启动子(例如，本文所述的或本领域已知的任何启动子)和Kozak序列(例如，本文所述的或本领域已知的任何示例性Kozak序列)之一者或两者。在一些实例中，第一载体包含启动子，所述启动子为诱导型启动子、组成型启动子或组织特异性启动子。在一些实例中，所述两种不同的载体中的第二载体包含编码靶蛋白的C末端部分(例如，支持细胞靶蛋白的C末端部分或毛细胞靶蛋白的C末端部分)的编码序列。在一些实例中，靶蛋白的C末端部分(例如，支持细胞靶蛋白的C末端部分或毛细胞靶蛋白的C末端部分)的长度为约30个氨基酸至约800个氨基酸(例如，约30个氨基酸至约790个氨基酸、约30个氨基酸至约780个氨基酸、约30个氨基酸至约770个氨基酸、约30个氨基酸至约760个氨基酸、约30个氨基酸至约750个氨基酸、约30个氨基酸至约740个氨基酸、约30个氨基酸至约730个氨基酸、约30个氨基酸至约720个氨基酸、约30个氨基酸至约710个氨基酸、约30个氨基酸至约700个氨基酸、约30个氨基酸至约690个氨基酸、约30个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约30个氨基酸至约660个氨基酸、约30个氨基酸至约650个氨基酸、约30个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约30个氨基酸至约620个氨基酸、约30个氨基酸至约610个氨基酸、约30个氨基酸至约600个氨基酸、约30个氨基酸至约590个氨基酸、约30个氨基酸至约580个氨基酸、约30个氨基酸至约570个氨基酸、约30个氨基酸至约560个氨基酸、约30个氨基酸至约550个氨基酸、约30个氨基酸至约540个氨基酸、约30个氨基酸至约530个氨基酸、约30个氨基酸至约520个氨基酸、约30个氨基酸至约510个氨基酸、约30个氨基酸至约500个氨基酸、约30个氨基酸至约490个氨基酸、约30个氨基酸至约480个氨基酸、约30个氨基酸至约470个氨基酸、约30个氨基酸至约460个氨基酸、约30个氨基酸至约450个氨基酸、约30个氨基酸至约440个氨基酸、约30个氨基酸至约430个氨基酸、约30个氨基酸至约420个氨基酸、约30个氨基酸至约410个氨基酸、约30个氨基酸至约400个氨基酸、约30个氨基酸至约390个氨基酸、约30个氨基酸至约380个氨基酸、约30个氨基酸至约370个氨基酸、约30个氨基酸至约360个氨基酸、约30个氨基酸至约350个氨基酸、约30个氨基酸至约340个氨基酸、约30个氨基酸至约330个氨基酸、约30个氨基酸至约320个氨基酸、约30个氨基酸至约310个氨基酸、约30个氨基酸至约300个氨基酸、约30个氨基酸至约290个氨基酸、约30个氨基酸至约280个氨基酸、约30个氨基酸至约270个氨基酸、约30个氨基酸至约260个氨基酸、约30个氨基酸至约250个氨基酸、约30个氨基酸至约240个氨基酸、约30个氨基酸至约230个氨基酸、约30个氨基酸至约220个氨基酸、约30个氨基酸至约210个氨基酸、约30个氨基酸至约200个氨基酸、约30个氨基酸至约190个氨基酸、约30个氨基酸至约180个氨基酸、约30个氨基酸至约170个氨基酸、约30个氨基酸至约160个氨基酸、约30个氨基酸至约150个氨基酸、约30个氨基酸至约140个氨基酸、约30个氨基酸至约130个氨基酸、约30个氨基酸至约120个氨基酸、约30个氨基酸至约110个氨基酸、约30个氨基酸至约100个氨基酸、约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氨基酸至约150个氨基酸、约120个氨基酸至约140个氨基酸、约120个氨基酸至约130个氨基酸、约150个氨基酸至约800个氨基酸、约150个氨基酸至约790个氨基酸、约150个氨基酸至约780个氨基酸、约150个氨基酸至约770个氨基酸、约150个氨基酸至约760个氨基酸、约150个氨基酸至约750个氨基酸、约150个氨基酸至约740个氨基酸、约150个氨基酸至约730个氨基酸、约150个氨基酸至约720个氨基酸、约150个氨基酸至约710个氨基酸、约150个氨基酸至约700个氨基酸、约150个氨基酸至约690个氨基酸、约150个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约150个氨基酸至约660个氨基酸、约150个氨基酸至约650个氨基酸、约150个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约150个氨基酸至约620个氨基酸、约150个氨基酸至约610个氨基酸、约150个氨基酸至约600个氨基酸、约150个氨基酸至约590个氨基酸、约150个氨基酸至约580个氨基酸、约150个氨基酸至约570个氨基酸、约150个氨基酸至约560个氨基酸、约150个氨基酸至约550个氨基酸、约150个氨基酸至约540个氨基酸、约150个氨基酸至约530个氨基酸、约150个氨基酸至约520个氨基酸、约150个氨基酸至约510个氨基酸、约150个氨基酸至约500个氨基酸、约150个氨基酸至约490个氨基酸、约150个氨基酸至约480个氨基酸、约150个氨基酸至约470个氨基酸、约150个氨基酸至约460个氨基酸、约150个氨基酸至约450个氨基酸、约150个氨基酸至约440个氨基酸、约150个氨基酸至约430个氨基酸、约150个氨基酸至约420个氨基酸、约150个氨基酸至约410个氨基酸、约150个氨基酸至约400个氨基酸、约150个氨基酸至约390个氨基酸、约150个氨基酸至约380个氨基酸、约150个氨基酸至约370个氨基酸、约150个氨基酸至约360个氨基酸、约150个氨基酸至约350个氨基酸、约150个氨基酸至约340个氨基酸、约150个氨基酸至约330个氨基酸、约150个氨基酸至约320个氨基酸、约150个氨基酸至约310个氨基酸、约150个氨基酸至约300个氨基酸、约150个氨基酸至约290个氨基酸、约150个氨基酸至约280个氨基酸、约150个氨基酸至约270个氨基酸、约150个氨基酸至约260个氨基酸、约150个氨基酸至约250个氨基酸、约150个氨基酸至约240个氨基酸、约150个氨基酸至约230个氨基酸、约150个氨基酸至约220个氨基酸、约150个氨基酸至约210个氨基酸、约150个氨基酸至约200个氨基酸、约150个氨基酸至约190个氨基酸、约150个氨基酸至约180个氨基酸、约150个氨基酸至约170个氨基酸、约150个氨基酸至约160个氨基酸、约180个氨基酸至约800个氨基酸、约180个氨基酸至约790个氨基酸、约180个氨基酸至约780个氨基酸、约180个氨基酸至约770个氨基酸、约180个氨基酸至约760个氨基酸、约180个氨基酸至约750个氨基酸、约180个氨基酸至约740个氨基酸、约180个氨基酸至约730个氨基酸、约180个氨基酸至约720个氨基酸、约180个氨基酸至约710个氨基酸、约180个氨基酸至约700个氨基酸、约180个氨基酸至约690个氨基酸、约180个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约180个氨基酸至约660个氨基酸、约180个氨基酸至约650个氨基酸、约180个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约180个氨基酸至约620个氨基酸、约180个氨基酸至约610个氨基酸、约180个氨基酸至约600个氨基酸、约180个氨基酸至约590个氨基酸、约180个氨基酸至约580个氨基酸、约180个氨基酸至约570个氨基酸、约180个氨基酸至约560个氨基酸、约180个氨基酸至约550个氨基酸、约180个氨基酸至约540个氨基酸、约180个氨基酸至约530个氨基酸、约180个氨基酸至约520个氨基酸、约180个氨基酸至约510个氨基酸、约180个氨基酸至约500个氨基酸、约180个氨基酸至约490个氨基酸、约180个氨基酸至约480个氨基酸、约180个氨基酸至约470个氨基酸、约180个氨基酸至约460个氨基酸、约180个氨基酸至约450个氨基酸、约180个氨基酸至约440个氨基酸、约180个氨基酸至约430个氨基酸、约180个氨基酸至约420个氨基酸、约180个氨基酸至约410个氨基酸、约180个氨基酸至约400个氨基酸、约180个氨基酸至约390个氨基酸、约180个氨基酸至约380个氨基酸、约180个氨基酸至约370个氨基酸、约180个氨基酸至约360个氨基酸、约180个氨基酸至约350个氨基酸、约180个氨基酸至约340个氨基酸、约180个氨基酸至约330个氨基酸、约180个氨基酸至约320个氨基酸、约180个氨基酸至约310个氨基酸、约180个氨基酸至约300个氨基酸、约180个氨基酸至约290个氨基酸、约180个氨基酸至约280个氨基酸、约180个氨基酸至约270个氨基酸、约180个氨基酸至约260个氨基酸、约180个氨基酸至约250个氨基酸、约180个氨基酸至约240个氨基酸、约180个氨基酸至约230个氨基酸、约180个氨基酸至约220个氨基酸、约180个氨基酸至约210个氨基酸、约180个氨基酸至约200个氨基酸、约180个氨基酸至约190个氨基酸、约200个氨基酸至约800个氨基酸、约200个氨基酸至约790个氨基酸、约200个氨基酸至约780个氨基酸、约200个氨基酸至约770个氨基酸、约200个氨基酸至约760个氨基酸、约200个氨基酸至约750个氨基酸、约200个氨基酸至约740个氨基酸、约200个氨基酸至约730个氨基酸、约200个氨基酸至约720个氨基酸、约200个氨基酸至约710个氨基酸、约200个氨基酸至约700个氨基酸、约200个氨基酸至约690个氨基酸、约200个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约200个氨基酸至约660个氨基酸、约200个氨基酸至约650个氨基酸、约200个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约200个氨基酸至约620个氨基酸、约200个氨基酸至约610个氨基酸、约200个氨基酸至约600个氨基酸、约200个氨基酸至约590个氨基酸、约200个氨基酸至约580个氨基酸、约200个氨基酸至约570个氨基酸、约200个氨基酸至约560个氨基酸、约200个氨基酸至约550个氨基酸、约200个氨基酸至约540个氨基酸、约200个氨基酸至约530个氨基酸、约200个氨基酸至约520个氨基酸、约200个氨基酸至约510个氨基酸、约200个氨基酸至约500个氨基酸、约200个氨基酸至约490个氨基酸、约200个氨基酸至约480个氨基酸、约200个氨基酸至约470个氨基酸、约200个氨基酸至约460个氨基酸、约200个氨基酸至约450个氨基酸、约200个氨基酸至约440个氨基酸、约200个氨基酸至约430个氨基酸、约200个氨基酸至约420个氨基酸、约200个氨基酸至约410个氨基酸、约200个氨基酸至约400个氨基酸、约200个氨基酸至约390个氨基酸、约200个氨基酸至约380个氨基酸、约200个氨基酸至约370个氨基酸、约200个氨基酸至约360个氨基酸、约200个氨基酸至约350个氨基酸、约200个氨基酸至约340个氨基酸、约200个氨基酸至约330个氨基酸、约200个氨基酸至约320个氨基酸、约200个氨基酸至约310个氨基酸、约200个氨基酸至约300个氨基酸、约200个氨基酸至约290个氨基酸、约200个氨基酸至约280个氨基酸、约200个氨基酸至约270个氨基酸、约200个氨基酸至约260个氨基酸、约200个氨基酸至约250个氨基酸、约200个氨基酸至约240个氨基酸、约200个氨基酸至约230个氨基酸、约200个氨基酸至约220个氨基酸、约200个氨基酸至约210个氨基酸、约250个氨基酸至约800个氨基酸、约250个氨基酸至约790个氨基酸、约250个氨基酸至约780个氨基酸、约250个氨基酸至约770个氨基酸、约250个氨基酸至约760个氨基酸、约250个氨基酸至约750个氨基酸、约250个氨基酸至约740个氨基酸、约250个氨基酸至约730个氨基酸、约250个氨基酸至约720个氨基酸、约250个氨基酸至约710个氨基酸、约250个氨基酸至约700个氨基酸、约250个氨基酸至约690个氨基酸、约250个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约250个氨基酸至约660个氨基酸、约250个氨基酸至约650个氨基酸、约250个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约250个氨基酸至约620个氨基酸、约250个氨基酸至约610个氨基酸、约250个氨基酸至约600个氨基酸、约250个氨基酸至约590个氨基酸、约250个氨基酸至约580个氨基酸、约250个氨基酸至约570个氨基酸、约250个氨基酸至约560个氨基酸、约250个氨基酸至约550个氨基酸、约250个氨基酸至约540个氨基酸、约250个氨基酸至约530个氨基酸、约250个氨基酸至约520个氨基酸、约250个氨基酸至约510个氨基酸、约250个氨基酸至约500个氨基酸、约250个氨基酸至约490个氨基酸、约250个氨基酸至约480个氨基酸、约250个氨基酸至约470个氨基酸、约250个氨基酸至约460个氨基酸、约250个氨基酸至约450个氨基酸、约250个氨基酸至约440个氨基酸、约250个氨基酸至约430个氨基酸、约250个氨基酸至约420个氨基酸、约250个氨基酸至约410个氨基酸、约250个氨基酸至约400个氨基酸、约250个氨基酸至约390个氨基酸、约250个氨基酸至约380个氨基酸、约250个氨基酸至约370个氨基酸、约250个氨基酸至约360个氨基酸、约250个氨基酸至约350个氨基酸、约250个氨基酸至约340个氨基酸、约250个氨基酸至约330个氨基酸、约250个氨基酸至约320个氨基酸、约250个氨基酸至约310个氨基酸、约250个氨基酸至约300个氨基酸、约250个氨基酸至约290个氨基酸、约250个氨基酸至约280个氨基酸、约250个氨基酸至约270个氨基酸、约250个氨基酸至约260个氨基酸、约280个氨基酸至约800个氨基酸、约280个氨基酸至约790个氨基酸、约280个氨基酸至约780个氨基酸、约280个氨基酸至约770个氨基酸、约280个氨基酸至约760个氨基酸、约280个氨基酸至约750个氨基酸、约280个氨基酸至约740个氨基酸、约280个氨基酸至约730个氨基酸、约280个氨基酸至约720个氨基酸、约280个氨基酸至约710个氨基酸、约280个氨基酸至约700个氨基酸、约280个氨基酸至约690个氨基酸、约280个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约280个氨基酸至约660个氨基酸、约280个氨基酸至约650个氨基酸、约280个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约280个氨基酸至约620个氨基酸、约280个氨基酸至约610个氨基酸、约280个氨基酸至约600个氨基酸、约280个氨基酸至约590个氨基酸、约280个氨基酸至约580个氨基酸、约280个氨基酸至约570个氨基酸、约280个氨基酸至约560个氨基酸、约280个氨基酸至约550个氨基酸、约280个氨基酸至约540个氨基酸、约280个氨基酸至约530个氨基酸、约280个氨基酸至约520个氨基酸、约280个氨基酸至约510个氨基酸、约280个氨基酸至约500个氨基酸、约280个氨基酸至约490个氨基酸、约280个氨基酸至约480个氨基酸、约280个氨基酸至约470个氨基酸、约280个氨基酸至约460个氨基酸、约280个氨基酸至约450个氨基酸、约280个氨基酸至约440个氨基酸、约280个氨基酸至约430个氨基酸、约280个氨基酸至约420个氨基酸、约280个氨基酸至约410个氨基酸、约280个氨基酸至约400个氨基酸、约280个氨基酸至约390个氨基酸、约280个氨基酸至约380个氨基酸、约280个氨基酸至约370个氨基酸、约280个氨基酸至约360个氨基酸、约280个氨基酸至约350个氨基酸、约280个氨基酸至约340个氨基酸、约280个氨基酸至约330个氨基酸、约280个氨基酸至约320个氨基酸、约280个氨基酸至约310个氨基酸、约280个氨基酸至约300个氨基酸、约300个氨基酸至约800个氨基酸、约300个氨基酸至约790个氨基酸、约300个氨基酸至约780个氨基酸、约300个氨基酸至约770个氨基酸、约300个氨基酸至约760个氨基酸、约300个氨基酸至约750个氨基酸、约300个氨基酸至约740个氨基酸、约300个氨基酸至约730个氨基酸、约300个氨基酸至约720个氨基酸、约300个氨基酸至约710个氨基酸、约300个氨基酸至约700个氨基酸、约300个氨基酸至约690个氨基酸、约300个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约300个氨基酸至约660个氨基酸、约300个氨基酸至约650个氨基酸、约300个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约300个氨基酸至约620个氨基酸、约300个氨基酸至约610个氨基酸、约300个氨基酸至约600个氨基酸、约300个氨基酸至约590个氨基酸、约300个氨基酸至约580个氨基酸、约300个氨基酸至约570个氨基酸、约300个氨基酸至约560个氨基酸、约300个氨基酸至约550个氨基酸、约300个氨基酸至约540个氨基酸、约300个氨基酸至约530个氨基酸、约300个氨基酸至约520个氨基酸、约300个氨基酸至约510个氨基酸、约300个氨基酸至约500个氨基酸、约300个氨基酸至约490个氨基酸、约300个氨基酸至约480个氨基酸、约300个氨基酸至约470个氨基酸、约300个氨基酸至约460个氨基酸、约300个氨基酸至约450个氨基酸、约300个氨基酸至约440个氨基酸、约300个氨基酸至约430个氨基酸、约300个氨基酸至约420个氨基酸、约300个氨基酸至约410个氨基酸、约300个氨基酸至约400个氨基酸、约300个氨基酸至约390个氨基酸、约300个氨基酸至约380个氨基酸、约300个氨基酸至约370个氨基酸、约300个氨基酸至约360个氨基酸、约300个氨基酸至约350个氨基酸、约300个氨基酸至约340个氨基酸、约300个氨基酸至约330个氨基酸、约300个氨基酸至约320个氨基酸、约300个氨基酸至约310个氨基酸、约350个氨基酸至约800个氨基酸、约350个氨基酸至约790个氨基酸、约350个氨基酸至约780个氨基酸、约350个氨基酸至约770个氨基酸、约350个氨基酸至约760个氨基酸、约350个氨基酸至约750个氨基酸、约350个氨基酸至约740个氨基酸、约350个氨基酸至约730个氨基酸、约350个氨基酸至约720个氨基酸、约350个氨基酸至约710个氨基酸、约350个氨基酸至约700个氨基酸、约350个氨基酸至约690个氨基酸、约350个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约350个氨基酸至约660个氨基酸、约350个氨基酸至约650个氨基酸、约350个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约350个氨基酸至约620个氨基酸、约350个氨基酸至约610个氨基酸、约350个氨基酸至约600个氨基酸、约350个氨基酸至约590个氨基酸、约350个氨基酸至约580个氨基酸、约350个氨基酸至约570个氨基酸、约350个氨基酸至约560个氨基酸、约350个氨基酸至约550个氨基酸、约350个氨基酸至约540个氨基酸、约350个氨基酸至约530个氨基酸、约350个氨基酸至约520个氨基酸、约350个氨基酸至约510个氨基酸、约350个氨基酸至约500个氨基酸、约350个氨基酸至约490个氨基酸、约350个氨基酸至约480个氨基酸、约350个氨基酸至约470个氨基酸、约350个氨基酸至约460个氨基酸、约350个氨基酸至约450个氨基酸、约350个氨基酸至约440个氨基酸、约350个氨基酸至约430个氨基酸、约350个氨基酸至约420个氨基酸、约350个氨基酸至约410个氨基酸、约350个氨基酸至约400个氨基酸、约350个氨基酸至约390个氨基酸、约350个氨基酸至约380个氨基酸、约350个氨基酸至约370个氨基酸、约350个氨基酸至约360个氨基酸、约380个氨基酸至约800个氨基酸、约380个氨基酸至约790个氨基酸、约380个氨基酸至约780个氨基酸、约380个氨基酸至约770个氨基酸、约380个氨基酸至约760个氨基酸、约380个氨基酸至约750个氨基酸、约380个氨基酸至约740个氨基酸、约380个氨基酸至约730个氨基酸、约380个氨基酸至约720个氨基酸、约380个氨基酸至约710个氨基酸、约380个氨基酸至约700个氨基酸、约380个氨基酸至约690个氨基酸、约380个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约380个氨基酸至约660个氨基酸、约380个氨基酸至约650个氨基酸、约380个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约380个氨基酸至约620个氨基酸、约380个氨基酸至约610个氨基酸、约380个氨基酸至约600个氨基酸、约380个氨基酸至约590个氨基酸、约380个氨基酸至约580个氨基酸、约380个氨基酸至约570个氨基酸、约380个氨基酸至约560个氨基酸、约380个氨基酸至约550个氨基酸、约380个氨基酸至约540个氨基酸、约380个氨基酸至约530个氨基酸、约380个氨基酸至约520个氨基酸、约380个氨基酸至约510个氨基酸、约380个氨基酸至约500个氨基酸、约380个氨基酸至约490个氨基酸、约380个氨基酸至约480个氨基酸、约380个氨基酸至约470个氨基酸、约380个氨基酸至约460个氨基酸、约380个氨基酸至约450个氨基酸、约380个氨基酸至约440个氨基酸、约380个氨基酸至约430个氨基酸、约380个氨基酸至约420个氨基酸、约380个氨基酸至约410个氨基酸、约380个氨基酸至约400个氨基酸、约380个氨基酸至约390个氨基酸、约400个氨基酸至约800个氨基酸、约400个氨基酸至约790个氨基酸、约400个氨基酸至约780个氨基酸、约400个氨基酸至约770个氨基酸、约400个氨基酸至约760个氨基酸、约400个氨基酸至约750个氨基酸、约400个氨基酸至约740个氨基酸、约400个氨基酸至约730个氨基酸、约400个氨基酸至约720个氨基酸、约400个氨基酸至约710个氨基酸、约400个氨基酸至约700个氨基酸、约400个氨基酸至约690个氨基酸、约400个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约400个氨基酸至约660个氨基酸、约400个氨基酸至约650个氨基酸、约400个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约400个氨基酸至约620个氨基酸、约400个氨基酸至约610个氨基酸、约400个氨基酸至约600个氨基酸、约400个氨基酸至约590个氨基酸、约400个氨基酸至约580个氨基酸、约400个氨基酸至约570个氨基酸、约400个氨基酸至约560个氨基酸、约400个氨基酸至约550个氨基酸、约400个氨基酸至约540个氨基酸、约400个氨基酸至约530个氨基酸、约400个氨基酸至约520个氨基酸、约400个氨基酸至约510个氨基酸、约400个氨基酸至约500个氨基酸、约400个氨基酸至约490个氨基酸、约400个氨基酸至约480个氨基酸、约400个氨基酸至约470个氨基酸、约400个氨基酸至约460个氨基酸、约400个氨基酸至约450个氨基酸、约400个氨基酸至约440个氨基酸、约400个氨基酸至约430个氨基酸、约400个氨基酸至约420个氨基酸、约400个氨基酸至约410个氨基酸、约450个氨基酸至约800个氨基酸、约450个氨基酸至约790个氨基酸、约450个氨基酸至约780个氨基酸、约450个氨基酸至约770个氨基酸、约450个氨基酸至约760个氨基酸、约450个氨基酸至约750个氨基酸、约450个氨基酸至约740个氨基酸、约450个氨基酸至约730个氨基酸、约450个氨基酸至约720个氨基酸、约450个氨基酸至约710个氨基酸、约450个氨基酸至约700个氨基酸、约450个氨基酸至约690个氨基酸、约450个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约450个氨基酸至约660个氨基酸、约450个氨基酸至约650个氨基酸、约450个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约450个氨基酸至约620个氨基酸、约450个氨基酸至约610个氨基酸、约450个氨基酸至约600个氨基酸、约450个氨基酸至约590个氨基酸、约450个氨基酸至约580个氨基酸、约450个氨基酸至约570个氨基酸、约450个氨基酸至约560个氨基酸、约450个氨基酸至约550个氨基酸、约450个氨基酸至约540个氨基酸、约450个氨基酸至约530个氨基酸、约450个氨基酸至约520个氨基酸、约450个氨基酸至约510个氨基酸、约450个氨基酸至约500个氨基酸、约450个氨基酸至约490个氨基酸、约450个氨基酸至约480个氨基酸、约450个氨基酸至约470个氨基酸、约450个氨基酸至约460个氨基酸、约480个氨基酸至约800个氨基酸、约480个氨基酸至约790个氨基酸、约480个氨基酸至约780个氨基酸、约480个氨基酸至约770个氨基酸、约480个氨基酸至约760个氨基酸、约480个氨基酸至约750个氨基酸、约480个氨基酸至约740个氨基酸、约480个氨基酸至约730个氨基酸、约480个氨基酸至约720个氨基酸、约480个氨基酸至约710个氨基酸、约480个氨基酸至约700个氨基酸、约480个氨基酸至约690个氨基酸、约480个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约480个氨基酸至约660个氨基酸、约480个氨基酸至约650个氨基酸、约480个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约480个氨基酸至约620个氨基酸、约480个氨基酸至约610个氨基酸、约480个氨基酸至约600个氨基酸、约480个氨基酸至约590个氨基酸、约480个氨基酸至约580个氨基酸、约480个氨基酸至约570个氨基酸、约480个氨基酸至约560个氨基酸、约480个氨基酸至约550个氨基酸、约480个氨基酸至约540个氨基酸、约480个氨基酸至约530个氨基酸、约480个氨基酸至约520个氨基酸、约480个氨基酸至约510个氨基酸、约480个氨基酸至约500个氨基酸、约480个氨基酸至约490个氨基酸、约50个氨基酸至约800个氨基酸、约50个氨基酸至约790个氨基酸、约50个氨基酸至约780个氨基酸、约50个氨基酸至约770个氨基酸、约50个氨基酸至约760个氨基酸、约50个氨基酸至约750个氨基酸、约50个氨基酸至约740个氨基酸、约50个氨基酸至约730个氨基酸、约50个氨基酸至约720个氨基酸、约50个氨基酸至约710个氨基酸、约50个氨基酸至约700个氨基酸、约50个氨基酸至约690个氨基酸、约50个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约50个氨基酸至约660个氨基酸、约50个氨基酸至约650个氨基酸、约50个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约50个氨基酸至约620个氨基酸、约50个氨基酸至约610个氨基酸、约50个氨基酸至约600个氨基酸、约50个氨基酸至约590个氨基酸、约50个氨基酸至约580个氨基酸、约50个氨基酸至约570个氨基酸、约50个氨基酸至约560个氨基酸、约50个氨基酸至约550个氨基酸、约50个氨基酸至约540个氨基酸、约50个氨基酸至约530个氨基酸、约50个氨基酸至约520个氨基酸、约50个氨基酸至约510个氨基酸、约550个氨基酸至约800个氨基酸、约550个氨基酸至约790个氨基酸、约550个氨基酸至约780个氨基酸、约550个氨基酸至约770个氨基酸、约550个氨基酸至约760个氨基酸、约550个氨基酸至约750个氨基酸、约550个氨基酸至约740个氨基酸、约550个氨基酸至约730个氨基酸、约550个氨基酸至约720个氨基酸、约550个氨基酸至约710个氨基酸、约550个氨基酸至约700个氨基酸、约550个氨基酸至约690个氨基酸、约550个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约550个氨基酸至约660个氨基酸、约550个氨基酸至约650个氨基酸、约550个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约550个氨基酸至约620个氨基酸、约550个氨基酸至约610个氨基酸、约550个氨基酸至约600个氨基酸、约550个氨基酸至约590个氨基酸、约550个氨基酸至约580个氨基酸、约550个氨基酸至约570个氨基酸、约550个氨基酸至约560个氨基酸、约580个氨基酸至约800个氨基酸、约580个氨基酸至约790个氨基酸、约580个氨基酸至约780个氨基酸、约580个氨基酸至约770个氨基酸、约580个氨基酸至约760个氨基酸、约580个氨基酸至约750个氨基酸、约580个氨基酸至约740个氨基酸、约580个氨基酸至约730个氨基酸、约580个氨基酸至约720个氨基酸、约580个氨基酸至约710个氨基酸、约580个氨基酸至约700个氨基酸、约580个氨基酸至约690个氨基酸、约580个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约580个氨基酸至约660个氨基酸、约580个氨基酸至约650个氨基酸、约580个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约580个氨基酸至约620个氨基酸、约580个氨基酸至约610个氨基酸、约580个氨基酸至约600个氨基酸、约580个氨基酸至约590个氨基酸、约600个氨基酸至约800个氨基酸、约600个氨基酸至约790个氨基酸、约600个氨基酸至约780个氨基酸、约600个氨基酸至约770个氨基酸、约600个氨基酸至约760个氨基酸、约600个氨基酸至约750个氨基酸、约600个氨基酸至约740个氨基酸、约600个氨基酸至约730个氨基酸、约600个氨基酸至约720个氨基酸、约600个氨基酸至约710个氨基酸、约600个氨基酸至约700个氨基酸、约600个氨基酸至约690个氨基酸、约600个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约600个氨基酸至约660个氨基酸、约600个氨基酸至约650个氨基酸、约600个氨基酸至约640个氨基酸、约30个氨基酸至约630个氨基酸、约600个氨基酸至约620个氨基酸、约600个氨基酸至约610个氨基酸、约650个氨基酸至约800个氨基酸、约650个氨基酸至约790个氨基酸、约650个氨基酸至约780个氨基酸、约650个氨基酸至约770个氨基酸、约650个氨基酸至约760个氨基酸、约650个氨基酸至约750个氨基酸、约650个氨基酸至约740个氨基酸、约650个氨基酸至约730个氨基酸、约650个氨基酸至约720个氨基酸、约650个氨基酸至约710个氨基酸、约650个氨基酸至约700个氨基酸、约650个氨基酸至约690个氨基酸、约650个氨基酸至约680个氨基酸、30个氨基酸至约670个氨基酸、约650个氨基酸至约660个氨基酸、约680个氨基酸至约800个氨基酸、约680个氨基酸至约790个氨基酸、约680个氨基酸至约780个氨基酸、约680个氨基酸至约770个氨基酸、约680个氨基酸至约760个氨基酸、约680个氨基酸至约750个氨基酸、约680个氨基酸至约740个氨基酸、约680个氨基酸至约730个氨基酸、约680个氨基酸至约720个氨基酸、约680个氨基酸至约710个氨基酸、约680个氨基酸至约700个氨基酸、约680个氨基酸至约690个氨基酸、约700个氨基酸至约800个氨基酸、约700个氨基酸至约790个氨基酸、约700个氨基酸至约780个氨基酸、约700个氨基酸至约770个氨基酸、约700个氨基酸至约760个氨基酸、约700个氨基酸至约750个氨基酸、约700个氨基酸至约740个氨基酸、约700个氨基酸至约730个氨基酸、约700个氨基酸至约720个氨基酸、约700个氨基酸至约710个氨基酸、约750个氨基酸至约800个氨基酸、约750个氨基酸至约790个氨基酸、约750个氨基酸至约780个氨基酸、约750个氨基酸至约770个氨基酸、约750个氨基酸至约760个氨基酸、或约780个氨基酸至约800个氨基酸)。在一些实例中，第二载体还包含poly(A)序列。
在其中组合物中不同载体的数目为2的一些实例中，由所述两种载体之一编码的N末端部分可包括这样的部分，所述部分包含野生型毛细胞靶蛋白(例如，SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79)的氨基酸位置1至约氨基酸位置800、约氨基酸位置790、约氨基酸位置780、约氨基酸位置770、约氨基酸位置760、约氨基酸位置750、约氨基酸位置740、约氨基酸位置730、约氨基酸位置720、约氨基酸位置710、约氨基酸位置700、约氨基酸位置690、约氨基酸位置680、约氨基酸位置670、约氨基酸位置660、约氨基酸位置650、约氨基酸位置640、约氨基酸位置630、约氨基酸位置620、约氨基酸位置610、约氨基酸位置600、约氨基酸位置590、约氨基酸位置580、约氨基酸位置570、约氨基酸位置560、约氨基酸位置550、约氨基酸位置540、约氨基酸位置530、约氨基酸位置520、约氨基酸位置510、约氨基酸位置500、约氨基酸位置490、约氨基酸位置480、约氨基酸位置470、约氨基酸位置460、约氨基酸位置450、约氨基酸位置440、约氨基酸位置430、约氨基酸位置420、约氨基酸位置410、约氨基酸位置400、约氨基酸位置390、约氨基酸位置380、约氨基酸位置370、约氨基酸位置360、约氨基酸位置350、约氨基酸位置340、约氨基酸位置330、约氨基酸位置320、约氨基酸位置310、约氨基酸位置300、约氨基酸位置290、约氨基酸位置280、约氨基酸位置270、约氨基酸位置260、约氨基酸位置250、约氨基酸位置240、约氨基酸位置230、约氨基酸位置220、约氨基酸位置210、约氨基酸位置200、约氨基酸位置190、约氨基酸位置180、约氨基酸位置170、约氨基酸位置160、约氨基酸位置150、约氨基酸位置140、约氨基酸位置130、约氨基酸位置120、约氨基酸位置110、约氨基酸位置100、约氨基酸位置90、约氨基酸位置80、约氨基酸位置70、约氨基酸位置60、约氨基酸位置50或约氨基酸位置40。
在其中组合物中不同载体的数目为2的一些实例中，前体毛细胞靶蛋白的N末端部分可包括这样的部分，所述部分包含野生型毛细胞靶蛋白(例如，SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ IDNO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ IDNO:79)的氨基酸位置1至氨基酸位置300、氨基酸位置1至氨基酸位置310、氨基酸位置1至约氨基酸位置320、氨基酸位置1至约氨基酸位置330、氨基酸位置1至约氨基酸位置340、氨基酸位置1至约氨基酸位置350、氨基酸位置1至约氨基酸位置360、氨基酸位置1至约氨基酸位置370、氨基酸位置1至约氨基酸位置380、氨基酸位置1至约氨基酸位置390、氨基酸位置1至约氨基酸位置400、氨基酸位置1至约氨基酸位置410、氨基酸位置1至约氨基酸位置420、氨基酸位置1至约氨基酸位置430、氨基酸位置1至约氨基酸位置440、氨基酸位置1至约氨基酸位置450、氨基酸位置1至约氨基酸位置460、氨基酸位置1至约氨基酸位置470、氨基酸位置1至约氨基酸位置480、氨基酸位置1至约氨基酸位置490、氨基酸位置1至约氨基酸位置500、氨基酸位置1至约氨基酸位置510、氨基酸位置1至约氨基酸位置520、氨基酸位置1至约氨基酸位置530、氨基酸位置1至约氨基酸位置540、氨基酸位置1至约氨基酸位置550、氨基酸位置1至约氨基酸位置560、氨基酸位置1至约氨基酸位置570、氨基酸位置1至约氨基酸位置580、氨基酸位置1至约氨基酸位置590、氨基酸位置1至约氨基酸位置600、氨基酸位置1至约氨基酸位置610、氨基酸位置1至约氨基酸位置620、氨基酸位置1至约氨基酸位置630、氨基酸位置1至约氨基酸位置640、氨基酸位置1至约氨基酸位置650、氨基酸位置1至约氨基酸位置660、氨基酸位置1至约氨基酸位置670、氨基酸位置1至约氨基酸位置680、氨基酸位置1至约氨基酸位置690、氨基酸位置1至约氨基酸位置700、氨基酸位置1至约氨基酸位置710、氨基酸位置1至约氨基酸位置720、氨基酸位置1至约氨基酸位置730、氨基酸位置1至约氨基酸位置740、氨基酸位置1至约氨基酸位置750、氨基酸位置1至约氨基酸位置760、氨基酸位置1至约氨基酸位置770、氨基酸位置1至约氨基酸位置780、氨基酸位置1至约氨基酸位置790、氨基酸位置1至约氨基酸位置800。
在其中组合物中不同载体的数目为2的一些实例中，由所述两种载体之一编码的N末端部分可包括这样的部分，所述部分包含野生型支持细胞靶蛋白(例如，SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:4)的氨基酸位置1至约氨基酸位置800、约氨基酸位置790、约氨基酸位置780、约氨基酸位置770、约氨基酸位置760、约氨基酸位置750、约氨基酸位置740、约氨基酸位置730、约氨基酸位置720、约氨基酸位置710、约氨基酸位置700、约氨基酸位置690、约氨基酸位置680、约氨基酸位置670、约氨基酸位置660、约氨基酸位置650、约氨基酸位置640、约氨基酸位置630、约氨基酸位置620、约氨基酸位置610、约氨基酸位置600、约氨基酸位置590、约氨基酸位置580、约氨基酸位置570、约氨基酸位置560、约氨基酸位置550、约氨基酸位置540、约氨基酸位置530、约氨基酸位置520、约氨基酸位置510、约氨基酸位置500、约氨基酸位置490、约氨基酸位置480、约氨基酸位置470、约氨基酸位置460、约氨基酸位置450、约氨基酸位置440、约氨基酸位置430、约氨基酸位置420、约氨基酸位置410、约氨基酸位置400、约氨基酸位置390、约氨基酸位置380、约氨基酸位置370、约氨基酸位置360、约氨基酸位置350、约氨基酸位置340、约氨基酸位置330、约氨基酸位置320、约氨基酸位置310、约氨基酸位置300、约氨基酸位置290、约氨基酸位置280、约氨基酸位置270、约氨基酸位置260、约氨基酸位置250、约氨基酸位置240、约氨基酸位置230、约氨基酸位置220、约氨基酸位置210、约氨基酸位置200、约氨基酸位置190、约氨基酸位置180、约氨基酸位置170、约氨基酸位置160、约氨基酸位置150、约氨基酸位置140、约氨基酸位置130、约氨基酸位置120、约氨基酸位置110、约氨基酸位置100、约氨基酸位置90、约氨基酸位置80、约氨基酸位置70、约氨基酸位置60、约氨基酸位置50或约氨基酸位置40。
在其中组合物中不同载体的数目为2的一些实例中，前体支持细胞靶蛋白的N末端部分包括这样的部分，所述部分包含野生型支持细胞靶蛋白(例如，SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:4)的氨基酸位置1至氨基酸位置300、氨基酸位置1至氨基酸位置310、氨基酸位置1至约氨基酸位置320、氨基酸位置1至约氨基酸位置330、氨基酸位置1至约氨基酸位置340、氨基酸位置1至约氨基酸位置350、氨基酸位置1至约氨基酸位置360、氨基酸位置1至约氨基酸位置370、氨基酸位置1至约氨基酸位置380、氨基酸位置1至约氨基酸位置390、氨基酸位置1至约氨基酸位置400、氨基酸位置1至约氨基酸位置410、氨基酸位置1至约氨基酸位置420、氨基酸位置1至约氨基酸位置430、氨基酸位置1至约氨基酸位置440、氨基酸位置1至约氨基酸位置450、氨基酸位置1至约氨基酸位置460、氨基酸位置1至约氨基酸位置470、氨基酸位置1至约氨基酸位置480、氨基酸位置1至约氨基酸位置490、氨基酸位置1至约氨基酸位置500、氨基酸位置1至约氨基酸位置510、氨基酸位置1至约氨基酸位置520、氨基酸位置1至约氨基酸位置530、氨基酸位置1至约氨基酸位置540、氨基酸位置1至约氨基酸位置550、氨基酸位置1至约氨基酸位置560、氨基酸位置1至约氨基酸位置570、氨基酸位置1至约氨基酸位置580、氨基酸位置1至约氨基酸位置590、氨基酸位置1至约氨基酸位置600、氨基酸位置1至约氨基酸位置610、氨基酸位置1至约氨基酸位置620、氨基酸位置1至约氨基酸位置630、氨基酸位置1至约氨基酸位置640、氨基酸位置1至约氨基酸位置650、氨基酸位置1至约氨基酸位置660、氨基酸位置1至约氨基酸位置670、氨基酸位置1至约氨基酸位置680、氨基酸位置1至约氨基酸位置690、氨基酸位置1至约氨基酸位置700、氨基酸位置1至约氨基酸位置710、氨基酸位置1至约氨基酸位置720、氨基酸位置1至约氨基酸位置730、氨基酸位置1至约氨基酸位置740、氨基酸位置1至约氨基酸位置750、氨基酸位置1至约氨基酸位置760、氨基酸位置1至约氨基酸位置770、氨基酸位置1至约氨基酸位置780、氨基酸位置1至约氨基酸位置790、氨基酸位置1至约氨基酸位置800。
如本文所用，术语“载体”意指包括能够携带至少一个外源核酸片段的多核苷酸在内的组合物，例如质粒载体、转座子、粘粒、人工染色体(例如，人的人工染色体(HAC)、酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1衍生的人工染色体(PAC))或病毒载体(例如，任何腺病毒载体(例如，pSV或pCMV载体)，如本文所述的任何逆转录病毒载体)和任何载体。载体可以例如包含足够的用于表达的顺式作用元件；用于表达的其它表达元件可以由宿主灵长类动物细胞提供或在体外表达系统中提供。术语“载体”包括当与适当的控制元件结合时能够复制的任何遗传元件(例如，质粒、转座子、粘粒、人工染色体或病毒载体等)。因此，所述术语包括克隆性载体和表达载体，以及病毒载体(例如，腺相关病毒(AAV)载体、腺病毒载体、慢病毒载体或逆转录病毒载体)。
载体包括本领域已知的所有载体，包括并入了重组多核苷酸的粘粒、质粒(例如，裸露的或包含在脂质体中)和病毒(例如，慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。技术人员将能够选择合适的载体和灵长类动物细胞来制备本文所述的任何核酸。
在一些实施方案中，载体是质粒(即可以在细胞内部自主复制的环状DNA分子)。在一些实施方案中，载体可以是粘粒(例如，pWE和sCos系列(Wahl等人(1987)，Evans等人(1989))。
在一些实施方案中，一种或多种载体是病毒载体(例如，腺相关病毒、腺病毒、慢病毒和逆转录病毒)。本文描述了病毒载体的非限制性实例。在一些实施方案中，一种或多种载体是腺相关病毒载体(AAV)(参见，例如，Asokan等人，Mol.Ther.20:699-7080,2012)。“重组AAV载体”或“rAAV”通常至少由转基因或其一部分和调控序列、以及任选地5'和3'AAV反向末端重复序列(ITR)组成。这样的重组AAV载体被包装到衣壳中并且被递送到选定的靶细胞(例如，外毛细胞)。
载体的AAV序列通常包含顺式作用的5'和3’ITR序列(参见，例如，B.J.Carter，"Handbook of Parvoviruses"，编辑，P.Tijsser,CRC Press，第155至168页，1990)。典型的AAV ITR序列的长度约为145个核苷酸。在一些实施方案中，将至少75％(例如，至少80％、至少85％、至少90％或至少95％)的典型ITR序列整合到AAV载体中。修饰这些ITR序列的能力在本领域技术人员的能力范围内。(参见，例如，教科书诸如Sambrook等人，"MolecularCloning.A Laboratory Manual"，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory,New York,1989；和K.Fisher等人，J Virol.70:520 532,1996)。在一些实施方案中，本文所述的任何编码序列在AAV载体中侧接有5'和3’AAV ITR序列。AAV ITR序列可以从任何已知的AAV，包括目前鉴定的AAV类型中获得。
如本文所述的AAV载体可包括本文所述的任何调控元件(例如，启动子、polyA序列和IRES中的一者或多者)。
在一些实施方案中，AAV载体选自由以下组成的组：AAV1载体、AAV2载体、AAV3载体、AAV4载体、AAV5载体、AAV6载体、AAV7载体、AAV8载体、AAV9载体、AAV2.7m8载体、AAV8BP2载体和AAV293载体。可在本文中使用的其它示例性AAV载体是本领域已知的。参见，例如，Kanaan等人，Mol.Ther.Nucleic Acids 8:184-197,2017；Li等人，Mol.Ther.16(7):1252-1260；Adachi等人，Nat.Commun.5:3075,2014；Isgrig等人，Nat.Commun.10(1):427,2019和Gao等人，J.Virol.78(12):6381-6388。
在一些实施方案中，所述一种或多种载体为腺病毒(参见，例如，Dmitriev等人，(1998)J.Virol.72:9706-9713；和Poulin等人，J.Virol8:10074-10086,2010)。在一些实施方案中，所述一种或多种载体为逆转录病毒(参见，例如，Maier等人，(2010)FutureMicrobiol 5:1507-23)。
本文提供的载体可具有不同的大小。在本文所述的任何组合物、试剂盒和方法中使用的载体的选择可取决于载体的大小。
在一些实施方案中，所述一种或多种载体是质粒，并且可包括多达约1kb、多达约2kb、多达约3kb、多达约4kb、多达约5kb、多达约6kb、多达约7kb、多达约8kb、多达约9kb、多达约10kb、多达约11kb、多达约12kb、多达约13kb、多达约14kb或多达约15kb的总长度。在一些实施方案中，所述一种或多种载体是质粒，并且可具有在约1kb至约2kb、约1kb至约3kb、约1kb至约4kb、约1kb至约5kb、约1kb至约6kb、约1kb至约7kb、约1kb至约8kb、约1kb至约9kb、约1kb至约10kb、约1kb至约11kb、约1kb至约12kb、约1kb至约13kb、约1kb至约14kb或约1kb至约15kb的范围内的总长度。
在一些实施方案中，所述一种或多种载体是病毒载体并且可具有多达10kb的核苷酸总数。在一些实施方案中，所述一种或多种病毒载体可具有在以下范围内的核苷酸总数：约1kb至约2kb,1kb至约3kb、约1kb至约4kb、约1kb至约5kb、约1kb至约6kb、约1kb至约7kb、约1kb至约8kb、约1kb至约9kb、约1kb至约10kb、约2kb至约3kb、约2kb至约4kb、约2kb至约5kb、约2kb至约6kb、约2kb至约7kb、约2kb至约8kb、约2kb至约9kb、约2kb至约10kb、约3kb至约4kb、约3kb至约5kb、约3kb至约6kb、约3kb至约7kb、约3kb至约8kb、约3kb至约9kb、约3kb至约10kb、约4kb至约5kb、约4kb至约6kb、约4kb至约7kb、约4kb至约8kb、约4kb至约9kb、约4kb至约10kb、约5kb至约6kb、约5kb至约7kb、约5kb至约8kb、约5kb至约9kb、约5kb至约10kb、约6kb至约7kb、约6kb至约8kb、约6kb至约9kb、约6kb至约10kb、约7kb至约8kb、约7kb至约9kb、约7kb至约10kb、约8kb至约9kb、约8kb至约10kb或约9kb至约10kb。
在一些实施方案中，所述一种或多种载体是慢病毒并且可具有多达8kb的核苷酸总数。在一些实施方案中，所述一种或多种病毒载体可具有在以下范围内的核苷酸总数：约1kb至约2kb、约1kb至约3kb、约1kb至约4kb、约1kb至约5kb、约1kb至约6kb、约1kb至约7kb、约1kb至约8kb、约2kb至约3kb、约2kb至约4kb、约2kb至约5kb、约2kb至约6kb、约2kb至约7kb、约2kb至约8kb、约3kb至约4kb、约3kb至约5kb、约3kb至约6kb、约3kb至约7kb、约3kb至约8kb、约4kb至约5kb、约4kb至约6kb、约4kb至约7kb、约4kb至约8kb、约5kb至约6kb、约5kb至约7kb、约5kb至约8kb、约6kb至约8kb、约6kb至约7kb或约7kb至约8kb。
在一些实施方案中，所述一种或多种载体是腺病毒并且可具有多达8kb的核苷酸总数。在一些实施方案中，所述一种或多种腺病毒可具有在以下范围内的核苷酸总数：约1kb至约2kb、约1kb至约3kb、约1kb至约4kb、约1kb至约5kb、约1kb至约6kb、约1kb至约7kb、约1kb至约8kb、约2kb至约3kb、约2kb至约4kb、约2kb至约5kb、约2kb至约6kb、约2kb至约7kb、约2kb至约8kb、约3kb至约4kb、约3kb至约5kb、约3kb至约6kb、约3kb至约7kb、约3kb至约8kb、约4kb至约5kb、约4kb至约6kb、约4kb至约7kb、约4kb至约8kb、约5kb至约6kb、约5kb至约7kb、约5kb至约8kb、约6kb至约7kh、约6kb至约8kb或约7kb至约8kb。
在一些实施方案中，所述一种或多种载体是腺相关病毒(AAV载体)，并且可以包含多达5kb的核苷酸总数。在一些实施方案中，所述一种或多种AAV载体可包含在以下范围内的核苷酸总数：约1kb至约2kb、约1kb至约3kb、约1kb至约4kb、约1kb至约5kb、约2kb至约3kb、约2kb至约4kb、约2kb至约5kb、约3kb至约4kb、约3kb至约5kb或约4kb至约5kb。
在本文提供的任何组合物、试剂盒和方法的一些实施方案中，至少两种不同的载体可以是基本上相同类型的载体并且可以在大小上不同。在一些实施方案中，至少两种不同的载体可以是不同类型的载体，并且可具有基本相同的大小或具有不同的大小。
在一些实施方案中，所述至少两种载体中的任一种可具有在以下范围内的核苷酸总数：约500个核苷酸至约10,000个核苷酸、约500个核苷酸至约9,500个核苷酸、约500个核苷酸至约9,000个核苷酸、约500个核苷酸至约8,500个核苷酸、约500个核苷酸至约8,000个核苷酸、约500个核苷酸至约7,800个核苷酸、约500个核苷酸至约7,600个核苷酸、约500个核苷酸至约7,400个核苷酸、约500个核苷酸至约7,200个核苷酸、约500个核苷酸至约7,000个核苷酸、约500个核苷酸至约6,800个核苷酸、约500个核苷酸至约6,600个核苷酸、约500个核苷酸至约6,400个核苷酸、约500个核苷酸至约6,200个核苷酸、约500个核苷酸至约6,000个核苷酸、约500个核苷酸至约5,800个核苷酸、约500个核苷酸至约5,600个核苷酸、约500个核苷酸至约5,400个核苷酸、约500个核苷酸至约5,200个核苷酸、约500个核苷酸至约5,000个核苷酸、约500个核苷酸至约4,800个核苷酸、约4,600个核苷酸、约500个核苷酸至约4,400个核苷酸、约500个核苷酸至约4,200个核苷酸、约500个核苷酸至约4,000个核苷酸、约500个核苷酸至约3,800个核苷酸、约500个核苷酸至约3,600个核苷酸、约500个核苷酸至约3,400个核苷酸、约500个核苷酸至约3,200个核苷酸、约500个核苷酸至约3,000个核苷酸、约500个核苷酸至约2,800个核苷酸、约500个核苷酸至约2,600个核苷酸、约500个核苷酸至约2,400个核苷酸、约500个核苷酸至约2,200个核苷酸、约500个核苷酸至约2,000个核苷酸、约500个核苷酸至约1,800个核苷酸、约500个核苷酸至约1,600个核苷酸、约500个核苷酸至约1,400个核苷酸、约500个核苷酸至约1,200个核苷酸、约500个核苷酸至约1,000个核苷酸、约500个核苷酸至约800个核苷酸、约800个核苷酸至约10,000个核苷酸、约800个核苷酸至约9,500个核苷酸、约800个核苷酸至约9,000个核苷酸、约800个核苷酸至约8,500个核苷酸、约800个核苷酸至约8,000个核苷酸、约800个核苷酸至约7,800个核苷酸、约800个核苷酸至约7,600个核苷酸、约800个核苷酸至约7,400个核苷酸、约800个核苷酸至约7,200个核苷酸、约800个核苷酸至约7,000个核苷酸、约800个核苷酸至约6,800个核苷酸、约800个核苷酸至约6,600个核苷酸、约800个核苷酸至约6,400个核苷酸、约800个核苷酸至约6,200个核苷酸、约800个核苷酸至约6,000个核苷酸、约800个核苷酸至约5,800个核苷酸、约800个核苷酸至约5,600个核苷酸、约800个核苷酸至约5,400个核苷酸、约800个核苷酸至约5,200个核苷酸、约800个核苷酸至约5,000个核苷酸、约800个核苷酸至约4,800个核苷酸、约800个核苷酸至约4,600个核苷酸、约800个核苷酸至约4,400个核苷酸、约800个核苷酸至约4,200个核苷酸、约800个核苷酸至约4,000个核苷酸、约800个核苷酸至约3,800个核苷酸、约800个核苷酸至约3,600个核苷酸、约800个核苷酸至约3,400个核苷酸、约800个核苷酸至约3,200个核苷酸、约800个核苷酸至约3,000个核苷酸、约800个核苷酸至约2,800个核苷酸、约800个核苷酸至约2,600个核苷酸、约800个核苷酸至约2,400个核苷酸、约800个核苷酸至约2,200个核苷酸、约800个核苷酸至约2,000个核苷酸、约800个核苷酸至约1,800个核苷酸、约800个核苷酸至约1,600个核苷酸、约800个核苷酸至约1,400个核苷酸、约800个核苷酸至约1,200个核苷酸、约800个核苷酸至约1,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约10,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约9,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约8,500个核苷酸、约1,000个核苷酸至约8,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约7,800个核苷酸、约1,000个核苷酸至约7,600个核苷酸、约1,000个核苷酸至约7,400个核苷酸、约1,000个核苷酸至约7,200个核苷酸、约1,000个核苷酸至约7,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约6,800个核苷酸、约1,000个核苷酸至约6,600个核苷酸、约1,000个核苷酸至约6,400个核苷酸、约1,000个核苷酸至约6,200个核苷酸、约1,000个核苷酸至约6,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约5,800个核苷酸、约1,000个核苷酸至约5,600个核苷酸、约1,000个核苷酸至约5,400个核苷酸、约1,000个核苷酸至约5,200个核苷酸、约1,000个核苷酸至约5,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约4,800个核苷酸、约1,000个核苷酸至约4,600个核苷酸、约1,000个核苷酸至约4,400个核苷酸、约1,000个核苷酸至约4,200个核苷酸、约1,000个核苷酸至约4,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约3,800个核苷酸、约1,000个核苷酸至约3,600个核苷酸、约1,000个核苷酸至约3,400个核苷酸、约1,000个核苷酸至约3,200个核苷酸、约1,000个核苷酸至约3,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约2,600个核苷酸、约1,000个核苷酸至约2,400个核苷酸、约1,000个核苷酸至约2,200个核苷酸、约1,000个核苷酸至约2,000个核苷酸、约1,000个核苷酸至约1,800个核苷酸、约1,000个核苷酸至约1,600个核苷酸、约1,000个核苷酸至约1,400个核苷酸、约1,000个核苷酸至约1,200个核苷酸、约1,200个核苷酸至约10,000个核苷酸、约1,200个核苷酸至约9,500个核苷酸、约1,200个核苷酸至约9,000个核苷酸、约1,200个核苷酸至约8,500个核苷酸、约1,200个核苷酸至约8,000个核苷酸、约1,200个核苷酸至约7,800个核苷酸、约1,200个核苷酸至约7,600个核苷酸、约1,200个核苷酸至约7,400个核苷酸、约1,200个核苷酸至约7,200个核苷酸、约1,200个核苷酸至约7,000个核苷酸、约1,200个核苷酸至约6,800个核苷酸、约1,200个核苷酸至约6,600个核苷酸、约1,200个核苷酸至约6,400个核苷酸、约1,200个核苷酸至约6,200个核苷酸、约1,200个核苷酸至约6,000个核苷酸、约1,200个核苷酸至约5,800个核苷酸、约1,200个核苷酸至约5,600个核苷酸、约1,200个核苷酸至约5,400个核苷酸、约1,200个核苷酸至约5,000个核苷酸、约1,200个核苷酸至约4,800个核苷酸、约1,200个核苷酸至约4,600个核苷酸、约1,200个核苷酸至约4,400个核苷酸、约1,200个核苷酸至约4,200个核苷酸、约1,200个核苷酸至约4,000个核苷酸、约1,200个核苷酸至约3,800个核苷酸、约1,200个核苷酸至约3,600个核苷酸、约1,200个核苷酸至约3,400个核苷酸、约1,200个核苷酸至约3,200个核苷酸、约1,200个核苷酸至约3,000个核苷酸、约1,200个核苷酸至约2,800个核苷酸、约1,200个核苷酸至约2,600个核苷酸、约1,200个核苷酸至约2,400个核苷酸、约1,200个核苷酸至约2,200个核苷酸、约1,200个核苷酸至约2,000个核苷酸、约1,200个核苷酸至约1,800个核苷酸、约1,200个核苷酸至约1,600个核苷酸、约1,200个核苷酸至约1,400个核苷酸、约1,400个核苷酸至约10,000个核苷酸、约1,400个核苷酸至约9,500个核苷酸、约1,400个核苷酸至约9,000个核苷酸、约1,400个核苷酸至约8,500个核苷酸、约1,400个核苷酸至约8,000个核苷酸、约1,400个核苷酸至约7,800个核苷酸、约1,400个核苷酸至约7,600个核苷酸、约1,400个核苷酸至约7,400个核苷酸、约1,400个核苷酸至约7,200个核苷酸、约1,400个核苷酸至约7,000个核苷酸、约1,400个核苷酸至约6,800个核苷酸、约1,400个核苷酸至约6,600个核苷酸、约1,400个核苷酸至约6,400个核苷酸、约1,400个核苷酸至约6,200个核苷酸、约1,400个核苷酸至约6,000个核苷酸、约1,400个核苷酸至约5,800个核苷酸、约1,400个核苷酸至约5,600个核苷酸、约1,400个核苷酸至约5,400个核苷酸、约1,400个核苷酸至约5,200个核苷酸、约1,400个核苷酸至约5,000个核苷酸、约1,400个核苷酸至约4,800个核苷酸、约1,400个核苷酸至约4,600个核苷酸、约1,400个核苷酸至约4,400个核苷酸、约1,400个核苷酸至约4,200个核苷酸、约1,400个核苷酸至约4,000个核苷酸、约1,400个核苷酸至约3,800个核苷酸、约1,400个核苷酸至约3,600个核苷酸、约1,400个核苷酸至约3,400个核苷酸、约1,400个核苷酸至约3,200个核苷酸、约1,400个核苷酸至约3,000个核苷酸、约1,400个核苷酸至约2,600个核苷酸、约1,400个核苷酸至约2,400个核苷酸、约1,400个核苷酸至约2,200个核苷酸、约1,400个核苷酸至约2,000个核苷酸、约1,400个核苷酸至约1,800个核苷酸、约1,400个核苷酸至约1,600个核苷酸、约1,600个核苷酸至约10,000个核苷酸、约1,600个核苷酸至约9,500个核苷酸、约1,600个核苷酸至约9,000个核苷酸、约1,600个核苷酸至约8,500个核苷酸、约1,600个核苷酸至约8,000个核苷酸、约1,600个核苷酸至约7,800个核苷酸、约1,600个核苷酸至约7,600个核苷酸、约1,600个核苷酸至约7,400个核苷酸、约1,600个核苷酸至约7,200个核苷酸、约1,600个核苷酸至约7,000个核苷酸、约1,600个核苷酸至约6,800个核苷酸、约1,600个核苷酸至约6,400个核苷酸、约1,600个核苷酸至约6,200个核苷酸、约1,600个核苷酸至约6,000个核苷酸、约1,600个核苷酸至约5,800个核苷酸、约1,600个核苷酸至约5,600个核苷酸、约1,600个核苷酸至约5,400个核苷酸、约1,600个核苷酸至约5,200个核苷酸、约1,600个核苷酸至约5,000个核苷酸、约1,600个核苷酸至约4,800个核苷酸、约1,600个核苷酸至约4,600个核苷酸、约1,600个核苷酸至约4,400个核苷酸、约1,600个核苷酸至约4,200个核苷酸、约1,600个核苷酸至约4,000个核苷酸、约1,600个核苷酸至约3,800个核苷酸、约1,600个核苷酸至约3,600个核苷酸、约1,600个核苷酸至约3,400个核苷酸、约1,600个核苷酸至约3,200个核苷酸、约1,600个核苷酸至约3,000个核苷酸、约1,600个核苷酸至约2,800个核苷酸、约1,600个核苷酸至约2,600个核苷酸、约1,600个核苷酸至约2,400个核苷酸、约1,600个核苷酸至约2,200个核苷酸、约1,600个核苷酸至约2,000个核苷酸、约1,600个核苷酸至约1,800个核苷酸、约1,800个核苷酸至约10,000个核苷酸、约1,800个核苷酸至约9,500个核苷酸、约1,800个核苷酸至约9,000个核苷酸、约1,800个核苷酸至约8,500个核苷酸、约1,800个核苷酸至约8,000个核苷酸、约1,800个核苷酸至约7,800个核苷酸、约1,800个核苷酸至约7,600个核苷酸、约1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核苷酸、约5,400个核苷酸至约9,500个核苷酸、约5,400个核苷酸至约9,000个核苷酸、约5,400个核苷酸至约8,500个核苷酸、约5,400个核苷酸至约8,000个核苷酸、约5,400个核苷酸至约7,800个核苷酸、约5,400个核苷酸至约7,600个核苷酸、约5,400个核苷酸至约7,400个核苷酸、约5,400个核苷酸至约7,200个核苷酸、约5,400个核苷酸至约7,000个核苷酸、约5,400个核苷酸至约6,800个核苷酸、约5,400个核苷酸至约6,600个核苷酸、约5,400个核苷酸至约6,400个核苷酸、约5,400个核苷酸至约6,200个核苷酸、约5,400个核苷酸至约6,000个核苷酸、约5,400个核苷酸至约5,800个核苷酸、约5,400个核苷酸至约5,600个核苷酸、约5,600个核苷酸至约10,000个核苷酸、约5,600个核苷酸至约9,500个核苷酸、约5,600个核苷酸至约9,000个核苷酸、约5,600个核苷酸至约8,500个核苷酸、约5,600个核苷酸至约8,000个核苷酸、约5,600个核苷酸至约7,800个核苷酸、约5,600个核苷酸至约7,600个核苷酸、约5,600个核苷酸至约7,400个核苷酸、约5,600个核苷酸至约7,200个核苷酸、约5,600个核苷酸至约7,000个核苷酸、约5,600个核苷酸至约6,800个核苷酸、约5,600个核苷酸至约6,600个核苷酸、约5,600个核苷酸至约6,400个核苷酸、约5,600个核苷酸至约6,200个核苷酸、约5,600个核苷酸至约6,000个核苷酸、约5,600个核苷酸至约5,800个核苷酸、约5,800个核苷酸至约10,000个核苷酸、约5,800个核苷酸至约9,500个核苷酸、约5,800个核苷酸至约9,000个核苷酸、约5,800个核苷酸至约8,500个核苷酸、约5,800个核苷酸至约8,000个核苷酸、约5,800个核苷酸至约7,800个核苷酸、约5,800个核苷酸至约7,600个核苷酸、约5,800个核苷酸至约7,400个核苷酸、约5,800个核苷酸至约7,200个核苷酸、约5,800个核苷酸至约7,000个核苷酸、约5,800个核苷酸至约6,800个核苷酸、约5,800个核苷酸至约6,600个核苷酸、约5,800个核苷酸至约6,400个核苷酸、约5,800个核苷酸至约6,200个核苷酸、约5,800个核苷酸至约6,000个核苷酸、约6,000个核苷酸至约10,000个核苷酸、约6,000个核苷酸至约9,500个核苷酸、约6,000个核苷酸至约9,000个核苷酸、约6,000个核苷酸至约8,500个核苷酸、约6,000个核苷酸至约8,000个核苷酸、约6,000个核苷酸至约7,800个核苷酸、约6,000个核苷酸至约7,600个核苷酸、约6,000个核苷酸至约7,400个核苷酸、约6,000个核苷酸至约7,200个核苷酸、约6,000个核苷酸至约7,000个核苷酸、约6,000个核苷酸至约6,800个核苷酸、约6,000个核苷酸至约6,600个核苷酸、约6,000个核苷酸至约6,400个核苷酸、约6,000个核苷酸至约6,200个核苷酸、约6,200个核苷酸至约10,000个核苷酸、约6,200个核苷酸至约9,000个核苷酸、约6,200个核苷酸至约8,500个核苷酸、约6,200个核苷酸至约8,000个核苷酸、约6,200个核苷酸至约7,800个核苷酸、约6,200个核苷酸至约7,600个核苷酸、约6,200个核苷酸至约7,400个核苷酸、约6,200个核苷酸至约7,200个核苷酸、约6,200个核苷酸至约7,000个核苷酸、约6,200个核苷酸至约6,800个核苷酸、约6,200个核苷酸至约6,600个核苷酸、约6,200个核苷酸至约6,400个核苷酸、约6,400个核苷酸至约10,000个核苷酸、约6,400个核苷酸至约9,500个核苷酸、约6,400个核苷酸至约9,000个核苷酸、约6,400个核苷酸至约8,500个核苷酸、约6,400个核苷酸至约8,000个核苷酸、约6,400个核苷酸至约7,800个核苷酸、约6,400个核苷酸至约7,600个核苷酸、约6,400个核苷酸至约7,400个核苷酸、约6,400个核苷酸至约7,200个核苷酸、约6,400个核苷酸至约7,000个核苷酸、约6,400个核苷酸至约6,800个核苷酸、约6,400个核苷酸至约6,600个核苷酸、约6,600个核苷酸至约10,000个核苷酸、约6,600个核苷酸至约9,500个核苷酸、约6,600个核苷酸至约9,000个核苷酸、约6,600个核苷酸至约8,500个核苷酸、约6,600个核苷酸至约8,000个核苷酸、约6,600个核苷酸至约7,800个核苷酸、约6,600个核苷酸至约7,600个核苷酸、约6,600个核苷酸至约7,400个核苷酸、约6,600个核苷酸至约7,200个核苷酸、约6,600个核苷酸至约7,000个核苷酸、约6,600个核苷酸至约6,800个核苷酸、约6,800个核苷酸至约10,000个核苷酸、约6,800个核苷酸至约9,500个核苷酸、约6,800个核苷酸至约9,000个核苷酸、约6,800个核苷酸至约8,500个核苷酸、约6,800个核苷酸至约8,000个核苷酸、约6,800个核苷酸至约7,800个核苷酸、约6,800个核苷酸至约7,600个核苷酸、约6,800个核苷酸至约7,400个核苷酸、约6,800个核苷酸至约7,200个核苷酸、约6,800个核苷酸至约7,000个核苷酸、约7,000个核苷酸至约10,000个核苷酸、约7,000个核苷酸至约9,500个核苷酸、约7,000个核苷酸至约9,000个核苷酸、约7,000个核苷酸至约8,500个核苷酸、约7,000个核苷酸至约8,000个核苷酸、约7,000个核苷酸至约7,800个核苷酸、约7,000个核苷酸至约7,600个核苷酸、约7,000个核苷酸至约7,400个核苷酸、约7,000个核苷酸至约7,200个核苷酸、约7,200个核苷酸至约10,000个核苷酸、约7,200个核苷酸至约9,500个核苷酸、约7,200个核苷酸至约9,000个核苷酸、约7,200个核苷酸至约8,500个核苷酸、约7,200个核苷酸至约8,000个核苷酸、约7,200个核苷酸至约7,800个核苷酸、约7,200个核苷酸至约7,600个核苷酸、约7,200个核苷酸至约7,400个核苷酸、约7,400个核苷酸至约10,000个核苷酸、约7,400个核苷酸至约9,500个核苷酸、约7,400个核苷酸至约9,000个核苷酸、约7,400个核苷酸至约8,500个核苷酸、约7,400个核苷酸至约8,000个核苷酸、约7,400个核苷酸至约7,800个核苷酸、约7,400个核苷酸至约7,600个核苷酸、约7,600个核苷酸至约10,000个核苷酸、约7,600个核苷酸至约9,500个核苷酸、约7,600个核苷酸至约9,000个核苷酸、约7,600个核苷酸至约8,500个核苷酸、约7,600个核苷酸至约8,000个核苷酸、约7,600个核苷酸至约7,800个核苷酸、约7,800个核苷酸至约10,000个核苷酸、约7,800个核苷酸至约9,500个核苷酸、约7,800个核苷酸至约9,000个核苷酸、约7,800个核苷酸至约8,500个核苷酸、约7,800个核苷酸至约8,000个核苷酸、约8,000个核苷酸至约10,000个核苷酸、约8,000个核苷酸至约9,500个核苷酸、约8,000个核苷酸至约9,000个核苷酸、约8,000个核苷酸至约8,500个核苷酸、约8,500个核苷酸至约10,000个核苷酸、约8,500个核苷酸至约9,500个核苷酸、约8,500个核苷酸至约9,000个核苷酸、约9,000个核苷酸至约10,000个核苷酸、约9,000个核苷酸至约9,500个核苷酸或约9,500个核苷酸至约10,000个核苷酸(包括端值)。
可使用本领域中已知的多种不同方法将本文公开的任何载体引入灵长类动物细胞(例如，支持耳蜗外毛细胞或毛细胞(例如，内毛细胞或外毛细胞))。用于将核酸引入灵长类动物细胞的方法的非限制性实例包括：脂质转染、转染(例如，磷酸钙转染、使用高度支化的有机化合物的转染、使用阳离子聚合物的转染、基于树状聚合物的转染、光学转染、基于颗粒的转染(例如，纳米颗粒转染)或使用脂质体(例如，阳离子脂质体)的转染)、显微注射、电穿孔、细胞挤压、声致穿孔、原生质体融合、穿刺转染、流体动力学递送、基因枪、磁转染、病毒转染和核转染。
本领域技术人员将理解，本文所述的任何载体可通过例如脂质转染法引入灵长类动物细胞。
可用于将一个或多个突变和/或一个或多个缺失引入内源基因的各种分子生物学技术在本领域中也是已知的。此类技术的非限制性示例包括定点诱变、CRISPR(例如，CRISPR/Cas9诱导的敲入突变和CRISPR/Cas9诱导的敲除突变)、TALEN和碱基编辑(Rees和Lui，Nature Rev.Genetics 19:770-788,2018；Eid等人，Biochem J.475(11):1955-1964,2018)。这些方法可用于校正存在于靶细胞染色体中的缺陷型内源基因的序列。
本文所述的任何载体还可包括控制序列，例如，选自由以下组成的组的控制序列：转录起始序列、转录终止序列、启动子序列、增强子序列、RNA剪接序列、多聚腺苷酸化(polyA)信号和Kozak共有序列。本文描述了这些控制序列的非限制性实例。在一些实施方案中，启动子可以是天然启动子、组成型启动子、诱导型启动子和/或组织特异性启动子。
本文所述的任何组合物和试剂盒的一些实施方案可包括本文所述的AAV载体的任意组合。本文所述的任何方法的一些实施方案可包括使用本文所述的AAV载体的任意组合。
启动子
术语“启动子”意指启动特定基因(例如，支持细胞靶基因或毛细胞靶基因)的转录所需的由灵长类动物细胞中的酶/蛋白质识别的DNA序列。启动子通常是指例如，与RNA聚合酶和/或任何相关因子结合并在其下启动转录的核苷酸序列。本文描述了启动子的非限制性实例。启动子的其它实例是本领域中已知的。
在一些实施方案中，编码毛细胞靶蛋白(例如，人毛细胞靶蛋白)或毛细胞靶蛋白的N-末端部分的载体可包含启动子和/或增强子。编码毛细胞靶蛋白的N-末端部分或毛细胞靶蛋白的载体可包含本文所述或本领域已知的任何启动子和/或增强子。
在一些实施方案中，编码支持细胞靶蛋白(例如，人支持细胞靶蛋白)的N-末端部分或支持细胞靶蛋白的载体可包含启动子和/或增强子。编码支持细胞靶蛋白的N末端部分或支持细胞靶蛋白的载体可包含本文所述或本领域已知的任何启动子和/或增强子。
在一些实施方案中，启动子是诱导型启动子、组成型启动子、灵长类动物细胞启动子、病毒启动子、嵌合启动子、工程启动子、组织特异性启动子或本领域已知的任何其它类型的启动子。在一些实施方案中，启动子为RNA聚合酶II启动子，诸如灵长类动物RNA聚合酶II启动子。在一些实施方案中，启动子是RNA聚合酶III启动子，包括但不限于H1启动子、人U6启动子、小鼠U6启动子或猪U6启动子。所述启动子通常是能够在诸如毛细胞等的耳蜗细胞中促进转录的启动子。在一些实例中，启动子为耳蜗特异性启动子或耳蜗定向的启动子。
可在本文中使用的多种启动子是本领域已知的。可用于本文的启动子的非限制性实例包括：人EF1a、人巨细胞病毒(CMV)(美国专利第5,168,062号)、人遍在蛋白C(UBC)、小鼠磷酸甘油酸激酶1、多瘤腺病毒、猿猴病毒40(SV40)、β-珠蛋白、β-肌动蛋白、α-甲胎蛋白、γ-珠蛋白、β-干扰素、γ-谷氨酰基转移酶、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)、劳斯肉瘤病毒、大鼠胰岛素、3-磷酸甘油醛脱氢酶、金属硫蛋白II(MT II)、淀粉酶、组织蛋白酶、MI毒蕈碱受体、逆转录病毒LTR(例如人T细胞白血病病毒HTLV)、AAV ITR、白介素-2、胶原酶、血小板衍生生长因子、腺病毒5E2、基质降解因子(stromelysin)、鼠MX基因、葡萄糖调节蛋白(GRP78和GRP94)、α-2-巨球蛋白、波形蛋白、MHC I类基因H-2κb、HSP70、增殖蛋白、肿瘤坏死因子、甲状腺刺激激素α基因、免疫球蛋白轻链、T细胞受体、HLA DQα和DQβ、白介素-2受体、II类MHC、II类MHC HLA-DRα、肌肉肌酸激酶、前白蛋白(转甲状腺素蛋白)、弹性蛋白酶I、白蛋白基因、c-fos、c-HA-ras、神经细胞粘附分子(NCAM)、H2B(TH2B)组蛋白、大鼠生长激素、人血清淀粉样蛋白(SAA)、肌钙蛋白I(TN I)、杜氏肌营养不良症、人免疫缺陷病毒和长臂猿白血病病毒(GALV)启动子。启动子的其它实例是本领域已知的。参见，例如，Lodish,Molecular CellBiology,Freeman and Company,New York 2007。在一些实施方案中，启动子是CMV立即早期启动子。在一些实施方案中，启动子是CAG启动子或CAG/CBA启动子。
术语“组成型”启动子是指当与编码靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白、毛细胞靶蛋白)的核酸可操作地连接时，在大多数或所有生理条件下致使RNA从灵长类动物细胞中的核酸转录的核苷酸序列。
组成型启动子的实例包括但不限于逆转录病毒劳斯肉瘤病毒(RSV)LTR启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子(参见，例如，Boshart等人，Cell 41:521-530,1985)、SV40启动子、二氢叶酸还原酶启动子、β-肌动蛋白启动子、磷酸甘油激酶(PGK)启动子和EF1-α启动子(Invitrogen)。
诱导型启动子允许调控基因表达，并且可以通过外源提供的化合物、环境因素(诸如温度)或特定生理状态(例如，急性期，细胞的特定分化状态)的存在或仅在复制细胞中来调控。诱导型启动子和诱导型系统可从多种商业来源获得，包括但不限于Invitrogen、Clontech和Ariad。诱导型启动子的其它实例是本领域中已知的。
由外源化合物调节的诱导型启动子的实例包括锌诱导型绵羊金属硫蛋白(MT)启动子、地塞米松(Dex)诱导型小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、T7聚合酶启动子体系(WO98/10088)、蜕皮激素昆虫启动子(No等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:3346-3351,1996)、四环素抑制型体系(Gossen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89:5547-5551,1992)、四环素诱导型体系(Gossen等人，Science268:1766-1769,1995,也参见Harvey等人，Curr.Opin.Chem.Biol.2:512-518,1998)、RU486诱导型体系(Wang等人，Nat.Biotech.15:239-243,1997)和Wang等人，Gene Ther.4:432-441,1997)以及雷帕霉素诱导型体系(Magari等人，J.Clin.Invest.100:2865-2872,1997)。
术语“组织特异性”启动子是指仅在某些特定细胞类型和/或组织中有活性(例如，特定基因的转录仅在表达与组织特异性启动子结合的转录调控蛋白的细胞内发生)的启动子。
在一些实施方案中，调控序列赋予组织特异性基因表达能力。在一些情况下，组织特异性调控序列结合以组织特异性方式诱导转录的组织特异性转录因子。
示例性的组织特异性启动子包括但不限于以下启动子：肝特异性甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子、胰岛素启动子、胰高血糖素启动子、生长抑素启动子、胰多肽(PPY)启动子、突触蛋白-1(Syn)启动子、肌酸激酶(MCK)启动子、灵长类动物结蛋白(DES)启动子、α-肌球蛋白重链(a-MHC)启动子和心脏肌钙蛋白T(cTnT)启动子。另外的示例性启动子包括β-肌动蛋白启动子、乙型肝炎病毒核心启动子(Sandig等人，Gene Ther.3:1002-1009,1996)、甲胎蛋白(AFP)启动子(Arbuthnot等人，Hum.Gene Ther.7:1503-1514,1996)、骨骨钙素启动子(Stein等人，Mol.Biol.Rep.24:185-196,1997)；骨唾液蛋白启动子(Chen等人，J.BoneMiner.Res.11:654-664,1996)、CD2启动子(Hansal等人，J.Immunol.161:1063-1068,1998)、免疫球蛋白重链启动子、T细胞受体α链启动子、神经元诸如神经元特异性烯醇化酶(NSE)启动子(Andersen等人，Cell.Mol.Neurobiol.13:503-515,1993)、神经丝轻链基因启动子(Piccioli等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.88:5611-5615,1991)和神经元特异性vgf基因启动子(Piccioli等人，Neuron15:373-384,1995)。
在一些实施方案中，组织特异性启动子是耳蜗特异性启动子。在一些实施方案中，组织特异性启动子是耳蜗毛细胞特异性启动子。耳蜗毛细胞特异性启动子的非限制性实例包括但不限于：ATOH1启动子、POU4F3启动子、LHX3启动子、MYO7A启动子、MYO6启动子、α9ACHR启动子和α10ACHR启动子。在一些实施方案中，启动子是外毛细胞特异性启动子，诸如PRESTIN启动子或ONCOMOD启动子。参见，例如，Zheng等人，Nature 405:149-155,2000；Tian等人Dev.Dyn.231:199-203,2004；和Ryan等人，Adv.Otorhinolaryngol.66:99-115,2009。
在本文描述的任何AAV载体的一些实施方案中，AAV载体包含人ATOH1增强子-启动子(SEQ ID NO:84)。
人ATOH1增强子-启动子(SEQ ID NO:84)
增强子和5'帽
在一些情况下，载体可包含启动子序列和/或增强子序列。术语“增强子”是指可以升高编码目标蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的核酸的转录水平的核苷酸序列。增强子序列(长度为50-1500个碱基对)通常通过为转录相关蛋白(例如，转录因子)提供额外的结合位点来升高转录水平。在一些实施方案中，在内含子序列内发现增强子序列。与启动子序列不同，增强子序列可以在距转录起始位点大得多的距离处起作用(例如，与启动子相比)。增强子的非限制性实例包括RSV增强子、CMV增强子和SV40增强子。
去稳定结构域(DD)
本文提供的任何AAV载体可以任选地包含编码去稳定结构域的序列(“去稳定序列”)，用于蛋白质表达的时间控制。去稳定序列的非限制性实例包括编码：FK506序列、二氢叶酸还原酶(DHFR)序列的序列。
示例性DHFR去稳定序列(SEQ ID NO:85):
示例性DHFR去稳定结构域序列(SEQ ID NO:86)
在本文所述的任何AAV载体的一些实施方案中，AAV载体包含去稳定结构域(SEQID NO:87)。
示例性去稳定结构域(SEQ ID NO:87)
去稳定序列的其它实例是本领域已知的。在一些实施方案中，去稳定序列是FK506和雷帕霉素结合蛋白(FKBP12)序列，并且稳定配体是Shield-1(Shld1)(Banaszynski等人，(2012)Cell 126(5):995-1004)。示例性FKBP12去稳定序列(SEQ ID NO:88)
在一些实施方案中，去稳定序列是DHFR序列，并且稳定配体是甲氧苄啶(TMP)(Iwamoto等人(2010)Chem Biol 17:981-988)。
在稳定配体不存在的情况下，与去稳定序列可操作地连接的蛋白质序列被泛遍在蛋白降解。相反，在稳定配体存在的情况下，蛋白质降解被抑制，从而使得与去稳定序列可操作地连接的蛋白质序列被主动表达。作为稳定蛋白质表达的阳性对照，蛋白质表达可通过常规手段检测，包括酶促测定法、放射照相测定法、比色测定法、荧光测定法或其它光谱测定法；荧光激活细胞分选(FACS)测定；免疫测定(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和免疫组织化学)。
在一些实施方案中，去稳定序列是FKBP12序列，并且通过蛋白质印迹检测在灵长类动物细胞(例如，支持性耳蜗外毛细胞)中携带FKBP12基因的AAV载体的存在。在一些实施方案中，去稳定序列可用于验证本文所述的任何AAV载体的时间特异性活性。
Poly(A)序列
在一些实施方案中，本文提供的任何载体可包含poly(A)序列。大多数新生的真核mRNA在其3’末端具有在复杂过程中添加的poly(A)尾，所述过程包括对初始转录物的切割以及偶联的多聚腺苷酸化反应(参见，例如，Proudfoot等人，Cell 108:501-512,2002)。Poly(A)尾赋予mRNA稳定性和可转移性(Molecular Biology of the Cell，第三版，B.Alberts等人，Garland Publishing,1994)。在一些实施方案中，poly(A)序列位于编码毛细胞靶蛋白的C末端的核酸序列的3'。在一些实施方案中，poly(A)序列位于编码支持细胞靶蛋白或目标蛋白(例如，Cas9内切核酸酶，例如，SaCas9内切核酸酶(例如，本文所述的任何SaCas9内切核酸酶)、报道蛋白(例如，GFP蛋白、mScarlet蛋白))的C末端的核酸序列的3’。
如本文所用，“多聚腺苷酸化”是指多聚腺苷酸基部分或其经修饰的变体与信使RNA分子的共价键联。在真核生物中，大多数信使RNA(mRNA)分子在3’末端被多腺苷酸化。3'poly(A)尾是通过酶聚腺苷酸聚合酶的作用添加到pre-mRNA上的长腺嘌呤核苷酸序列(例如，50、60、70、100、200、500、1000、2000、3000、4000或5000)。在高级真核生物中，将poly(A)尾添加到包含特定序列多腺苷酸化信号或“poly(A)序列”的转录物上。poly(A)尾和与其结合的蛋白质有助于保护mRNA免受外切核酸酶的降解。多腺苷酸化对于转录终止、mRNA从细胞核的输出以及翻译也很重要。DNA转录成RNA后，多腺苷酸化立即在细胞核中发生，但随后也可在细胞质中发生。转录终止后，mRNA链通过与RNA聚合酶相关联的内切核酸酶复合物的作用被切割。切割位点通常以在切割位点附近存在碱基序列AAUAAA为特征。切割mRNA后，腺苷残基被添加到切割位点处的游离3'末端。
如本文中所用，“poly(A)序列”是触发mRNA的内切核酸酶切割以及一系列腺苷在切割的mRNA的3'末端处的添加的序列。
可以使用几种poly(A)序列，包括那些源自牛生长激素(bgh)(Woychik等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81(13):3944-3948,1984；美国专利第5,122,458号)、小鼠β-珠蛋白、小鼠α-珠蛋白(Orkin等人，EMBO J.4(2):453-456,1985；Thein等人，Blood 71(2):313-319,1988)、人胶原蛋白、多瘤病毒(Batt等人，Mol.Cell Biol.15(9):4783-4790,1995)、单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV TK)、IgG重链基因多腺苷酸化信号(US2006/0040354)、人生长激素(hGH)(Szymanski等人，Mol.Therapy 15(7):1340-1347,2007)、SV40poly(A)位点的组，诸如SV40晚期和早期的poly(A)位点(Schek等人，Mol.Cell Biol.12(12):5386-5393,1992)的序列。
poly(A)序列可以是AATAAA的序列。AATAAA序列可被能够发出进行多腺苷酸化的信号的与AATAAA同源的其它六核苷酸序列取代，所述其它六核苷酸序列包括ATTAAA、AGTAAA、CATAAA、TATAAA、GATAAA、ACTAAA、AATATA、AAGAAA、AATAAT、AAAAAA、AATGAA、AATCAA、AACAAA、AATCAA、AATAAC、AATAGA、AATTAA或AATAAG(参见，例如，WO 06/12414)。
在一些实施方案中，poly(A)序列可以是合成多腺苷酸化位点(参见，例如，Promega的pCl-neo表达载体，其基于Levitt等人，Genes Dev.3(7):1019-1025,1989)。在一些实施方案中，poly(A)序列为可溶性神经菌毛素-1(sNRP)(AAATAAAATACGAAATG,SEQ IDNO:90)的多聚腺苷酸化信号(参见，例如，WO 05/073384)。poly(A)序列的其它实例是本领域已知的。
内部核糖体进入位点(IRES)
在一些实施方案中，编码毛细胞靶蛋白的C末端或毛细胞靶蛋白的载体可包括多核苷酸内部核糖体进入位点(IRES)。在一些实施方案中，编码支持细胞靶蛋白的C末端或支持细胞靶蛋白的载体可包含多核苷酸内部核糖体进入位点(IRES)。IRES序列用于由单一基因转录物产生不止一种多肽。IRES形成复杂的二级结构，所述二级结构允许从紧接IRES所在位置下游的mRNA中的任何位置进行翻译起始(参见，例如，Pelletier和Sonenberg,Mol.Cell.Biol.8(3):1103-1112,1988)。
存在本领域技术人员已知的几种IRES序列，包括来自例如口蹄疫病毒(FMDV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、人鼻病毒(HRV)、蟋蟀麻痹病毒，人免疫缺陷病毒(HIV)、甲型肝炎病毒(HAV)、丙型肝炎病毒(HCV)和脊髓灰质炎病毒(PV)的那些IRES序列。参见，例如，Alberts,Molecular Biology of the Cell,Garland Science,2002；和Hellen等人，Genes Dev.15(13):1593-612,2001。
在一些实施方案中，整合到编码毛细胞靶蛋白的C-末端或毛细胞靶蛋白的载体中的IRES序列是口蹄疫病毒(FMDV)。在一些实施方案中，整合到编码支持细胞靶蛋白的C末端或支持细胞靶蛋白的载体中的IRES序列是口蹄疫病毒(FMDV)2A序列。在一些实施方案中，整合到编码目标蛋白质(例如，Cas9内核酸切酶，例如SaCas9内切核酸酶(例如，本文所述的任何SaCas9内切核酸酶))的C-末端部分的载体中的IRES序列是FMDV 2A序列。口蹄疫病毒2A序列为小肽(长度为约18个氨基酸)，已证明其介导多蛋白的裂解(Ryan,M D等人，EMBO4:928-933,1994；Mattion等人，J.Virology 70:8124-8127,1996；Furler等人，GeneTherapy 8:864-873,2001；和Halpin等人，Plant Journal 4:453-459,1999)。先前已在包括质粒和基因治疗载体(AAV和逆转录病毒)的人工体系中证明了2A序列的切割活性(Ryan等人，EMBO 4:928-933,1994；Mattion等人，J.Virology 70:8124-8127,1996；Furler等人，Gene Therapy 8:864-873,2001；和Halpin等人，Plant Journal 4:453-459,1999；deFelipe等人，Gene Therapy 6:198-208,1999；de Felipe等人，Human Gene Therapy 11:1921-1931,2000；和Klump等人，Gene Therapy 8:811-817,2001)。
报告基因序列/可检测标记基因
本文提供的任何载体可以任选地包含编码报告蛋白或可检测标记的序列(“报告序列”或“可检测标记基因”)。报告序列或可检测标记基因的非限制性实例包括DNA序列，所述DNA序列编码：β-内酰胺酶、β-半乳糖苷酶(LacZ)、碱性磷酸酶、胸苷激酶、绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白、mCherry荧光蛋白、黄色荧光蛋白、氯霉素乙酰基转移酶(CAT)和萤光素酶。报告序列和可检测标记基因的其它实例是本领域已知的。当与驱动其表达的调控元件缔合时，报告序列和可检测标记基因可提供可通过常规手段检测的信号，所述常规手段包括酶促测定、放射摄影测定、比色测定、荧光测定或其它光谱测定；荧光激活细胞分选(FACS)测定；免疫测定(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和免疫组织化学)。
在一些实施方案中，报告序列或可检测标记基因是LacZ基因，并且通过测定β-半乳糖苷酶活性来检测灵长类动物细胞(例如，支持耳蜗外毛细胞或毛细胞(例如，耳蜗外毛细胞或耳蜗内毛细胞))中携带LacZ基因的载体的存在。在其它实施方案中，报告子或可检测标记是荧光蛋白(例如，绿色荧光蛋白)或萤光素酶，灵长类动物细胞(例如，支持耳蜗外毛细胞或毛细胞(例如，耳蜗外毛细胞或耳蜗内毛细胞))中携带荧光蛋白或萤光素酶的载体的存在可通过荧光技术(例如，荧光显微镜检查或FACS)或光度计(例如，分光光度计或IVIS成像仪)中的光产生来测量。在一些实施方案中，可使用报告序列或可检测标记来验证本文所述的任何载体的组织特异性靶向能力和组织特异性启动子调控活性。
侧翼区非翻译区(UTR)
在一些实施方案中，本文所述的任何载体(例如，所述至少两种不同的载体中的任一种)可包括非翻译区。在一些实施方案中，载体可包含5'UTR或3’UTR。
基因的非翻译区(UTR)被转录但未被翻译。5’UTR从转录起始位点开始，并继续至起始密码子，但不包括起始密码子。3'UTR在终止密码子之后立即开始，并且继续直到转录终止信号。越来越多的证据表明，UTR在核酸分子的稳定性和翻译方面起调控作用。可将UTR的调控特征整合到本文所述的任何载体、组合物、试剂盒或方法中，以增强支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白或目标蛋白(例如，Cas9内切核酸酶，例如SaCas9内切核酸酶(例如，本文所述的任何SaCas9内切核酸酶)、报告蛋白(例如，GFP蛋白、mScarlet蛋白))的稳定性。
天然的5'UTR包括在翻译起始中起作用的序列。它们带有类似Kozak序列的标签(signature)，众所周知，所述序列参与核糖体籍以启动许多基因翻译的过程。Kozak序列具有共有序列CCR(A/G)CCAUGG，其中R是起始密码子(AUG)上游三个碱基的嘌呤(A或G)，其后紧接另一个“G”。还已知5’UTR例如形成参与伸长因子结合的二级结构。
例如，在一些实施方案中，5'UTR包含在本文所述的任何载体中。包括来自以下基因的那些在内的5'UTR的非限制性实例：白蛋白、血清淀粉样蛋白A、载脂蛋白A/B/E、转铁蛋白、甲胎蛋白、促红细胞生成素和因子VIII，可用于增强诸如mRNA等的核酸分子的表达。
在一些实施方案中，来自由耳蜗中的细胞转录的mRNA的5'UTR可包括在本文所述的任何载体、组合物、试剂盒和方法中。
已知3'UTR在其中嵌入了腺苷段和尿苷段。这些富含AU的标签在具有高周转率的基因中特别普遍。基于序列特征和功能特性，富含AU的元件(ARE)可以分为三类(Chen等人，Mol.Cell.Biol.15:5777-5788,1995；Chen等人，Mol.Cell Biol.15:2010-2018,1995)：I类ARE在富含U的区域中包含几个分散的AUUUA基序拷贝。例如，c-Myc和MyoD mRNA包含I类ARE。II类ARE具有两个或多个重叠的UUAUUUA(U/A)(U/A)九聚体。GM-CSF和TNF-αmRNA是含有II类ARE的实例。III类ARE的定义不太明确。这些富含U的区域不含AUUUA基序。该类的两个经过充分研究的实例是c-Jun和肌细胞生成素mRNA。
已知大多数与ARE结合的蛋白质都会使信使不稳定，然而ELAV家族的成员(尤其是HuR)已被证明增强mRNA的稳定性。HuR与所有这三个类别的ARE结合。将HuR特异性结合位点工程化到核酸分子的3'UTR内将导致HuR结合，并因此在体内稳定信息。
在一些实施方案中，3’UTR ARE的引入、去除或修饰可用于调节编码毛细胞靶蛋白的mRNA的稳定性。在一些实施方案中，3’UTR ARE的引入、去除或修饰可用于调节编码支持细胞靶蛋白的mRNA的稳定性。在其它实施方案中，ARE可被去除或突变以增强细胞内稳定性，并因此增加毛细胞靶蛋白的翻译和产生。在其它实施方案中，ARE可以被去除或突变以增强细胞内稳定性，从而增加支持细胞靶蛋白的翻译和产生。
在其它实施方案中，可将非UTR序列可整合到5'或3'UTR中。在一些实施方案中，内含子或内含子序列的一部分可并入本文提供的任何载体、组合物、试剂盒和方法中的多核苷酸的侧翼区中。内含子序列的并入可增加蛋白质产生以及mRNA水平。
灵长类动物细胞
本文还提供了细胞(例如，灵长类动物细胞)，其包含核酸、载体(例如，本文所述的至少两种不同的载体)或本文所述的组合物中的任一者。在一些实施方案中，灵长类动物细胞是人细胞(例如，人支持细胞或人毛细胞)。在其它实施方式中，灵长类动物是非人灵长类动物(例如，猿猴细胞(例如，猴细胞(例如，狨猴细胞、狒狒细胞、猕猴细胞)或猿类细胞(例如，大猩猩细胞、长臂猿细胞、猩猩细胞、黑猩猩细胞))。技术人员将理解，可以将本文所述的核酸和载体引入任何灵长类动物细胞(例如，灵长类动物支持细胞或灵长类动物毛细胞)中。本文描述了载体和用于将载体引入灵长类动物细胞的方法的非限制性实例。
在一些实施方案中，灵长类动物细胞可以是哺乳动物内耳的支持毛细胞。例如，支持细胞可以是亨森氏细胞、Deiters氏细胞、内柱细胞、外柱细胞、Claudius细胞、内边界细胞、内指细胞或血管纹细胞。
在一些实施方案中，灵长类动物细胞是耳蜗的特化细胞。在一些实施方案中，灵长类动物细胞是毛细胞。在一些实施方案中，灵长类动物细胞是耳蜗内毛细胞或耳蜗外毛细胞。在一些实施方案中，灵长类动物细胞是耳蜗内毛细胞。在一些实施方案中，灵长类动物细胞是耳蜗外毛细胞。
在一些实施方案中，灵长类动物细胞是体外的。在一些实施方案中，灵长类动物细胞存在于灵长类动物中。在一些实施方案中，灵长类动物细胞是获自灵长类动物并且离体培养的自体细胞。
方法
本文还提供了校正灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶基因缺陷的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用修复所述灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶基因缺陷。
本文还提供了升高灵长类动物内耳的毛细胞中的毛细胞靶蛋白的表达水平的方法，所述方法包括向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用使得所述灵长类动物内耳的所述毛细胞中的所述毛细胞靶蛋白的表达水平升高。
本文还提供了治疗被鉴定为具有缺陷型毛细胞靶基因的灵长类动物的听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)的方法，所述方法包括：向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
在这些方法中的任一种的一些实施方案中，灵长类动物先前已被鉴定为具有缺陷型毛细胞靶基因(例如，具有突变的毛细胞靶基因，所述突变导致由所述基因编码的毛细胞靶蛋白的表达和/或活性降低)。这些方法中的任一种的一些实施方案还包括，在引入或施用步骤之前，确定灵长类动物具有缺陷型毛细胞靶基因。这些方法中的任一种的一些实施方案还可包括检测灵长类动物的毛细胞靶基因中的突变。所述方法中的任一种的一些实施方案还可包括将灵长类动物鉴定或诊断为患有非综合征性感音神经性听力损失。所述方法中的任一种的一些实施方案还可包括将灵长类动物鉴定或诊断为患有综合征性感音神经性听力损失。
本文还提供了校正灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶基因缺陷的方法，所述方法包括：向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用修复所述灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶基因缺陷。
本文还提供了升高灵长类动物内耳的支持细胞中的支持细胞靶蛋白的表达水平的方法，所述方法包括向所述灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物，其中所述施用使得所述灵长类动物内耳的支持细胞中的所述支持细胞靶蛋白的表达水平升高。
本文还提供了治疗被鉴定为具有缺陷型支持细胞靶基因的灵长类动物的听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)的方法，所述方法包括：向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
本文还提供了恢复被鉴定或诊断为患有听力损失的灵长类动物的听力的方法，所述方法包括：向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
本文还提供了恢复被鉴定或诊断为患有内耳病症的灵长类动物的突触并且/或者保存其螺旋神经节神经的方法，所述方法包括：向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物。
本文还提供了包括向灵长类动物的内耳施用治疗有效量的本文所述的任何组合物的方法。
在这些方法中的任一种的一些实施方案中，灵长类动物先前已经被鉴定为具有缺陷型支持细胞靶基因(例如，具有突变的支持细胞靶基因，所述突变导致由所述基因编码的支持细胞靶蛋白的表达和/或活性降低)。这些方法中的任一种的一些实施方案还包括在引入或施用步骤之前，确定灵长类动物具有缺陷型支持细胞靶基因。这些方法中的任一种的一些实施方案还可包括检测灵长类动物中的支持细胞靶基因中的突变。所述方法中的任一种的一些实施方案还可包括将灵长类动物鉴定或诊断为患有非综合征性感音神经性听力损失。所述方法中的任一种的一些实施方案还可包括将灵长类动物鉴定或诊断为患有综合征性感音神经性听力损失。
在这些方法中的任一种的一些实施方案中，将两个或更多个剂量的本文所述的任何组合物引入或施用到灵长类动物的耳蜗中。这些方法中的任一种的一些实施方案可包括将第一剂量的组合物引入或施用到灵长类动物的耳蜗中，在引入或施用第一剂量后评估灵长类动物的听力功能，并且向发现在正常范围内没有听力功能(例如，如使用本领域已知的任何听力测试所确定的)的灵长类动物的耳蜗中施用额外剂量的组合物。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，组合物可被配制成用于耳蜗内施用。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，可通过耳蜗内施用或局部施用来施用本文所述的组合物。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，通过使用医疗装置(例如，本文所述的任何示例性医疗装置)来施用组合物。
在一些实施方案中，可使用本文所述或本领域已知的任何方法来进行耳蜗内施用。例如，可使用以下手术技术将组合物施用或引入到耳蜗中：首先使用0度、2.5mm的刚性内窥镜进行可视化，清理外耳道并使用圆刀清晰划定约5mm的鼓膜瓣。然后，将鼓膜瓣抬高，并向后进入中耳。识别并分离鼓索神经，并使用刮匙去除缝骨(scutal bone)，从而暴露圆窗膜。为了增强所施用或引入的组合物的顶端分布，可使用手术激光在椭圆窗口中做一个小的2mm的开窗，以允许组合物的经圆窗膜输注过程中的外淋巴移位。然后，准备好微输注装置并带入手术区域。将装置移动到圆窗，并且将尖端放置在骨状圆窗悬垂物内，以允许一个或多个微针穿透膜。接合踏板以允许对组合物进行测量、稳定地输注。然后，取出装置并使用明胶海绵贴片密封圆窗和镫骨足板。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，灵长类动物患有非综合征性感音神经性听力损失或有发展非综合征性感音神经性听力损失的风险。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述灵长类动物先前已被鉴定为在毛细胞靶基因中具有突变。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述灵长类动物先前已被鉴定为在支持细胞靶基因中具有突变。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，灵长类动物在毛细胞靶基因具有任何突变，所述突变在本文中被描述成或在本领域中已知与非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失相关联。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，灵长类动物在支持细胞靶基因中具有任何突变，所述突变在本文中被描述成或在本领域已知与非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失相关联。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，所述灵长类动物已被鉴定为毛细胞靶基因中的突变的携带者(例如，通过遗传测试)。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，灵长类动物已被鉴定为支持细胞靶基因中的突变的携带者(例如，通过遗传测试)。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，灵长类动物已被鉴定为在毛细胞靶基因中具有突变并且已被诊断患有听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，灵长类动物已被鉴定为在支持细胞靶基因中具有突变，并已被诊断为患有听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，灵长类动物已被鉴定为患有听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)。
在一些实施方案中，可使用本领域已知的任何常规功能性听力测试在灵长类动物中确定听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)的成功治疗。功能性听力测试的非限制性实例是各种类型的听力测定(例如，纯音测试、语音测试、中耳测试、听觉脑干反应和耳声发射)。
在这些方法的一些实施方案中，灵长类动物细胞是体外的。在这些方法的一些实施方案中，灵长类动物细胞最初获自灵长类动物并且是离体培养的。在一些实施方案中，灵长类动物细胞先前已被确定具有缺陷型毛细胞靶基因。在一些实施方案中，灵长类动物细胞先前已被确定具有缺陷型支持细胞靶基因。
用于将本文所述的任何组合物引入灵长类动物细胞中的方法(例如，通过脂质转染或通过使用病毒载体，例如，本文所述的任何病毒载体)是本领域已知的。
如本文所述的活性靶蛋白(例如，活性支持细胞靶蛋白(例如，全长支持细胞靶蛋白)或活性毛细胞靶蛋白(例如，全长毛细胞靶蛋白)的表达增加是例如与对照或与引入一种或多种载体之前的活性靶蛋白(例如，活性支持细胞靶蛋白(例如，全长支持细胞靶蛋白)或活性毛细胞靶蛋白(例如，全长毛细胞靶蛋白)的表达水平相比的。
检测靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的表达和/或活性的方法是本领域已知的。在一些实施方案中，可以直接检测毛细胞靶蛋白的表达水平(例如，检测毛细胞靶蛋白或检测毛细胞靶mRNA)。在一些实施方案中，可以直接检测支持细胞靶蛋白的表达水平(例如，检测支持细胞靶蛋白或检测支持细胞靶mRNA)。可用于检测靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的表达和/或活性的技术的非限制性示例直接包括：实时PCR、蛋白质印迹、免疫沉淀、免疫组织化学或免疫荧光。在一些实施方案中，可以间接检测毛细胞靶蛋白的表达(例如，通过功能性听力测试)。在一些实施方案中，可以间接检测支持细胞靶蛋白的表达(例如，通过功能性听力测试)。
药物组合物和试剂盒
在一些实施方案中，本文所述的任何组合物还可包含一种或多种促进本文所述的核酸或任何载体进入灵长类动物细胞的剂(例如，脂质体或阳离子脂质)。
在一些实施方案中，可使用天然和/或合成聚合物来配制本文所述的任何载体。可包含在本文所述的任何组合物中的聚合物的非限制性实例可包括但不限DYNAMIC(Arrowhead Research Corp.,Pasadena,Calif.)、来自MirusBio(Madison,Wis.)和Roche Madison(Madison,Wis.)的制剂、PhaseRX聚合物制剂，诸如但不限于SMARTT POLYMER(PhaseRX,Seattle,Wash.)、DMRI/DOPE、泊洛沙姆、来自Vical(San Diego,Calif.)的佐剂、壳聚糖、来自CalandoPharmaceuticals(Pasadena,Calif.)的环糊精、树状聚合物和聚(乳酸-共-羟基乙酸)(PLGA)聚合物、RONDELTM(RNAi/寡核苷酸纳米颗粒递送)聚合物(Arrowhead ResearchCorporation,Pasadena,Calif.)和pH响应性共嵌段聚合物，诸如但不限于PhaseRX(Seattle,Wash.)生产的那些pH响应性共嵌段聚合物。这些聚合物中的许多已证明了在体内将寡核苷酸递送至灵长类动物细胞中的功效(参见，例如，deFougerolles,Human GeneTher.19:125-132,2008；Rozema等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.104:12982-12887,2007；Rozema等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.104:12982-12887,2007；Hu-Lieskovan等人，Cancer Res.65:8984-8982,2005；Heidel等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.104:5715-5721,2007)。
本文所述的任何组合物可以是例如药物组合物。药物组合物可包含本文所述的任何组合物和一种或多种药学上或生理上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。此类组合物可包含一种或多种缓冲剂，诸如中性缓冲盐溶液、磷酸盐缓冲盐溶液等；一种或多种碳水化合物，诸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖和葡聚糖；甘露醇；一种或多种蛋白质、多肽或氨基酸，诸如甘氨酸；一种或多种抗氧化剂；一种或多种螯合剂，诸如EDTA或谷胱甘肽；和/或一种或多种防腐剂。
在一些实施方案中，组合物包含药学上可接受的载体(例如，磷酸盐缓冲盐水、盐水或抑菌水)。当配制时，溶液以与剂量制剂相容的方式和以治疗有效的量施用。制剂以诸如可注射溶液、可注射凝胶、药物释放胶囊剂等多种剂型容易地施用。
如本文中所用，术语“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂、抗真菌剂等。还可将补充性活性化合物掺入本文所述的任何组合物中。
在一些实施方案中，本文所述的任何组合物的单剂量可在例如缓冲液中包含以下量的合计量的至少两种不同的载体：至少1ng、至少2ng、至少4ng、约6ng、约8ng、至少10ng、至少20ng、至少30ng、至少40ng、至少50ng、至少60ng、至少70ng、至少80ng、至少90ng、至少100ng、至少200ng、至少300ng、至少400ng、至少500ng、至少1μg、至少2μg、至少4μg、至少6μg、至少8μg、至少10μg、至少12μg、至少14μg、至少16μg、至少18μg、至少20μg、至少22μg、至少24μg、至少26μg、至少28μg、至少30μg、至少32μg、至少34μg、至少36μg、至少38μg、至少40μg、至少42μg、至少44μg、至少46μg、至少48μg、至少50μg、至少52μg、至少54μg、至少56μg、至少58μg、至少60μg、至少62μg、至少64μg、至少66μg、至少68μg、至少70μg、至少72μg、至少74μg、至少76μg、至少78μg、至少80μg、至少82μg、至少84μg、至少86μg、至少88μg、至少90μg、至少92μg、至少94μg、至少96μg、至少98μg、至少100μg、至少102μg、至少104μg、至少106μg、至少108μg、至少110μg、至少112μg、至少114μg、至少116μg、至少118μg、至少120μg、至少122μg、至少124μg、至少126μg、至少128μg、至少130μg、至少132μg、至少134μg、至少136μg、至少138μg、至少140μg、至少142μg、至少144μg、至少146μg、至少148μg、至少150μg、至少152μg、至少154μg、至少156μg、至少158μg、至少160μg、至少162μg、至少164μg、至少166μg、至少168μg、至少170μg、至少172μg、至少174μg、至少176μg、至少178μg、至少180μg、至少182μg、至少184μg、至少186μg、至少188μg、至少190μg、至少192μg、至少194μg、至少196μg、至少198μg或至少200μg。
可以例如将本文提供的组合物配制成与其预期的施用途径相容。预期施用途径的非限制性实例是局部施用(例如，耳蜗内施用)。
在一些实施方案中，所述治疗性组合物被配制成包含脂质纳米颗粒。在一些实施方案中，所述治疗性组合物被配制成包含聚合物纳米颗粒。在一些实施方案中，所述治疗性组合物被配制成包含小环DNA。在一些实施方案中，治疗性组合物被配制成包含CELiD DNA。在一些实施方案中，治疗性组合物被配制成包含合成外淋巴液。一种示例性合成淋巴溶液包括20-200mM NaCl；1-5mM KCl；0.1-10mM CaCl2；1-10mM葡萄糖；2-50mM HEPES，pH值在约6与约9之间。
本文还提供了包括本文所述的任何组合物的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒可包括固体组合物(例如，包含本文所述的至少两种不同的载体的冻干组合物)和用于增溶冻干组合物的液体。在一些实施方案中，试剂盒可包括预装式注射器，所述预装式注射器包含本文所述的任何组合物。
在一些实施方案中，试剂盒包括小瓶，所述小瓶包含本文所述的任何组合物(例如，配制成水性组合物，例如，水性药物组合物)。
在一些实施方案中，试剂盒可包括用于进行本文所述的任何方法的说明书。
装置和手术方法
本文提供了用于治疗听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)的治疗性递送系统。一方面，所述治疗性递送体系包括i)能够在有需要的灵长类动物的内耳的圆窗膜中产生一个或多个切口的医疗装置，和ii)有效剂量的组合物(例如，本文所述的任何组合物)。在一些实施方案中，所述医疗装置包括多个微针。
本文还提供了用于治疗听力损失(例如，非综合征性感音神经性听力损失或综合征性感音神经性听力损失)的手术方法。在一些实施方案中，所述方法包括以下步骤：在第一切口点处将第一切口引入灵长类动物的耳蜗中；以及耳蜗内施用治疗有效量的本文提供的任何组合物。在一些实施方案中，将组合物在第一切口点处施用于灵长类动物。在一些实施方案中，将组合物施用于灵长类动物，进入或通过第一切口。
在本文所述的任何方法的一些实施方案中，将本文所述的任何组合物施用于灵长类动物，进入或通过耳蜗椭圆形窗膜。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，将本文所述的任何组合物施用于灵长类动物，进入或通过耳蜗圆窗膜。在本文描述的任何方法的一些实施方案中，使用能够在圆窗膜上产生多个切口的医疗装置来施用组合物。在一些实施方案中，所述医疗装置包括多个微针。在一些实施方案中，所述医疗装置包括多个微针，所述多个微针包括一般圆形的第一方面，其中每个微针的直径至少约为10微米。在一些实施方案中，所述医疗装置包括能够容纳所述组合物的基座和/或储器。在一些实施方案中，医疗装置包括多个空心微针，所述多个空心微针各自包括能够转移组合物的内腔。在一些实施方案中，医疗装置包括用于产生至少部分真空的工具。
通过参考以下实验实施例进一步详细描述本发明。这些实施例仅出于说明的目的而提供，并且除非另有说明，否则不意图进行限制。因此，本发明决不应解释为限于以下实施例，而应解释为涵盖由于本文提供的教导而变得显而易见的任何和所有变型。
无需进一步描述，相信本领域普通技术人员可以使用前述的描述和以下说明性实施例，制备和利用本发明的化合物并实践所要求保护的方法。以下工作实施例特别指出本发明的各个方面，并且不应当被解释为以任何方式限制本公开的其余部分。
实施例
实施例1.AAV单一载体注射至内耳中
在通过圆形窗口将单一的Anc80-GFP AAV载体直接施用到内耳中后，对食蟹猕猴(非人灵长类动物)的耳蜗组织进行免疫荧光染色。
使用Myo7a作为毛细胞的标志物以及Iba-1作为巨噬细胞的标志物，对来自处理过的猕猴的耳蜗组织进行免疫荧光分析。中周(middle turn)代表整个感觉上皮。图1A-图1C中的数据显示毛细胞和支持细胞中都有清晰的GFP表达，所述支持细胞包括以下支持细胞亚型：亨森氏细胞(HC)、Claudius细胞(CC)、Dieter细胞(DC)、内和外柱细胞(OPC/IPC)、内边界细胞和内指细胞(IPHC/IBC)。这些数据证明了Anc80-GFP AAV载体成功地转导到内耳感觉上皮的不同细胞类型中，以及由此得到的编码的报告基因(GFP)在这些不同细胞类型中的表达。这些数据表明，包含单一AAV载体或者两种或更多种AAV载体的本发明要求保护的组合物可用于在毛细胞和支持细胞中表达基因，并且可用于修复毛细胞和支持细胞中的基因突变。
其它实施方案
应当理解，尽管已经结合本发明的详细描述来描述了本发明，但前述描述意图进行说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其它方面、有利方面和修改在所附权利要求的范围内。
本文提及的所有公布、专利申请、专利和其它参考文献通过引用以其整体并入本文。在有冲突的情况下，将以本说明书(包括定义)为准。另外，部分的标题、材料、方法和实例仅是说明性的而不是意图进行限制。
Claims (1)
1.一种包含至少两种不同的核酸载体的组合物，其中：
所述至少两种不同的腺相关病毒(AAV)载体中的每一种都包含编码序列，所述编码序列编码支持细胞靶蛋白的不同部分，所述编码的部分中的每一个的长度至少为30个氨基酸残基，其中所述编码的部分中的每一个的氨基酸序列可以任选地与所述编码的部分中的不同的一个部分的氨基酸序列部分地重叠；
所述至少两种不同的载体中单一载体均不编码全长支持细胞靶蛋白；
所述编码序列中的至少一个包含跨越支持细胞靶基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且在所述两个相邻外显子之间缺少内含子序列；以及
所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长支持细胞靶蛋白的重组核酸。
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