CN118302422A - 具有作为usp30抑制剂的活性的取代的n-氰基吡咯烷 - Google Patents

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本发明涉及一类具有作为去泛素化酶USP30的抑制剂活性的取代的N‑氰基吡咯烷，其可用于多种治疗领域，包括涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化。

Description

具有作为USP30抑制剂的活性的取代的N-氰基吡咯烷
发明领域
本发明涉及一类具有作为去泛素化酶泛素C-端水解酶30(也称作泛素特异性肽酶30(USP30))的抑制剂活性的N-氰基吡咯烷类、其用途、其制备方法和含有所述抑制剂的组合物。这些抑制剂在多种治疗领域，包括涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化中具有效用。
以下引用或依赖的所有文件明确地通过引用并入本文。
发明背景
泛素是由76个氨基酸组成的小蛋白，其对于细胞中蛋白功能的调节是重要的。泛素化和去泛素化是酶促介导的过程，通过该过程泛素共价结合靶蛋白或通过去泛素化酶(DUB)从靶蛋白切割，其中在人细胞中存在大约100种DUB，它们基于序列同源性被分成亚家族。USP家族的特征在于其共同的Cys和His盒，该盒含有对于其DUB活性至关重要的Cys和His残基。泛素化和去泛素化过程已经牵涉许多细胞功能的调节，包括细胞周期进程、细胞凋亡、细胞表面受体修饰、DNA转录和DNA修复的调节。因此，泛素系统已经牵涉许多疾病状态的发病机制，所述疾病状态包括炎症、病毒感染、代谢功能障碍、CNS障碍和肿瘤发生。
泛素是线粒体动力学的主要调节剂。线粒体是动态细胞器，其生物发生、融合和裂变事件经由许多关键因子(诸如线粒体融合蛋白)的泛素化受到翻译后调控的调节。在人类中，USP30是在线粒体外膜中发现的517个氨基酸的蛋白(Nakamura等人,2008,Mol Biol19:1903-11)。它是具有线粒体寻址信号的唯一去泛素化酶，并且已经被证实使许多线粒体蛋白去泛素化。已经证实，USP30抵抗parkin介导的线粒体自噬，并且USP30活性的下降可以拯救parkin介导的线粒体自噬中的缺陷(Bingol等人,2015,Nature 510:370-5；Gersch等人,2017,Nat Struct Mol Biol 24(11):920-930；Cunningham等人,2015,Nat CellBiol17(2):160-169)。USP30失活也可以增加线粒体蛋白输入，可能通过TOM蛋白的泛素化(Jacoupy等人,2019,Sci Rep 9(1):11829)。USP30的一小部分已定位于过氧化物酶体，所述过氧化物酶体通过线粒体和ER囊泡的融合产生，其中USP30可能拮抗Pex2/过氧化物酶体自噬途径(Riccio等人,2019,J Cell Biol 218(3):798-807)。E3 Ub连接酶March5和去泛素酶USP30与移位酶结合并调节线粒体输入，而March5抵抗线粒体输入并指导底物的降解，USP30去泛素化底物以促进其输入(Phu等人,2020,Molecular Cell 77,1107-1123)。
线粒体功能障碍可以被定义为线粒体含量减少(线粒体自噬或线粒体生物发生)、线粒体活性和氧化磷酸化降低，但是也可以被定义为活性氧物质(ROS)产生的调节。因此，线粒体功能障碍在非常众多的老化过程和病理学中有作用。
例如，帕金森病影响全世界约1000万人(帕金森病基金会)，且其特征在于黑质中多巴胺能神经元的丧失。作为PD基础的确切机制尚不清楚；但是，线粒体功能障碍逐渐被认为是PD中多巴胺能神经元易感性的关键决定因素，并且是家族性和散发性疾病以及毒素诱导的帕金森症的特征。Parkin是已经牵涉早发型PD的许多蛋白之一。虽然大多数PD病例与α-突触核蛋白中的缺陷相关，但10％的帕金森病病例与特定的遗传缺陷有关，其中之一是在泛素E3连接酶parkin中。Parkin和蛋白激酶PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)协同使受损线粒体的线粒体膜蛋白泛素化，从而导致线粒体自噬。线粒体自噬的失调导致氧化性应激增加，这已经被描述为PD的特征。因此，USP30的抑制可能是治疗PD的潜在策略。例如，具有导致活性降低的parkin突变的PD患者可以通过USP30的抑制得到治疗性代偿。
已经报道，USP30的耗竭会增强线粒体的线粒体自噬清除率，并且还增强parkin诱导的细胞死亡。还已经证实USP30调节BAX/BAK依赖性的细胞凋亡，与parkin过表达无关。USP30的耗竭使癌细胞对BH-3模拟物诸如ABT-737敏感，而不需要parkin过表达。因此，已经证明了USP30的抗细胞凋亡作用，且因此USP30是抗癌疗法的潜在靶标。
在批准蛋白酶体抑制剂硼替佐米(万珂)用于治疗多发性骨髓瘤以后，泛素-蛋白酶体系统作为癌症治疗靶标已经受到关注。用硼替佐米的延长治疗受限于其相关毒性和抗药性。但是，预期靶向蛋白酶体的泛素-蛋白酶体途径上游的特定方面(例如，DUB)的治疗策略被更好地耐受(Bedford等人,2011,Nature Rev 10:29-46)。
纤维化疾病(包括肾、肝和肺纤维化)是发病率和死亡率的主要原因，并且可以影响所有组织和器官系统。纤维化被视为对组织或器官的急性或慢性应激的结果，其特征在于细胞外基质沉积、血管/小管/导管/气道通畅性降低和功能受损，最终导致器官衰竭。许多纤维化病症是由生活方式或环境因素促成；但是，一部分纤维化病症可以通过遗传触发物引发或确实被视为特发性的(即没有已知原因)。某些纤维化疾病诸如特发性肺纤维化(IPF)可以用非特异性激酶抑制剂(尼达尼布)或没有充分表征的作用机理的药物(吡非尼酮)治疗。器官纤维化(诸如肾或肝纤维化)的其它治疗会减轻对器官本身的压力(例如用于肝硬化的β阻滞剂，用于慢性肾脏疾病的血管紧张素受体阻滞剂)。对生活方式因素的注意(诸如葡萄糖和饮食控制)也可以影响疾病的进程和严重程度。
线粒体功能障碍已经牵涉许多纤维化疾病，其中在功能障碍下游的氧化性应激是关键的致病介体，同时ATP产生减少。在临床前模型中，线粒体自噬途径的破坏(通过parkin或PINK1的突变或敲除)会加重肺纤维化和肾纤维化，并有证据表明氧化性应激增加。
Kurita等人,2017,Respiratory Research 18:114公开了促纤维化肌成纤维细胞的积累是IPF中纤维化重塑的关键过程。据称近期的发现表明自噬/线粒体自噬(溶酶体降解机制的组成部分)参与IPF发病机制，并且线粒体自噬通过调节线粒体活性氧物质(ROS)介导的血小板来源的生长因子受体(PDGFR)活化已经牵涉进肌成纤维细胞分化。Kurita的结果表明，吡非尼酮诱导PARK2介导的线粒体自噬，并在线粒体自噬不足的情况下抑制肺纤维化发展，这可以至少部分地解释IPF治疗的抗纤维化机制。
Williams等人,2015,Pharmacol Res.12月；102:264-269讨论了PINK1-Parkin介导的自噬通过经线粒体自噬除去受损的线粒体在保护酒精和对乙酰氨基酚诱导的肝损伤中的作用。有人提出，USP8的药理学稳定性或USP15和USP30的失活可能是上调Parkin诱导的线粒体自噬并进而保护免于药物诱导的肝损伤的潜在治疗靶标。但是，应当指出，DUB在转录和翻译后都受到调节，这可能使靶向这些特异性酶的药物开发具有挑战性，并且此外，证实了磷酸化的泛素对DUB具有抗性。作者得出的结论是，上调PINK1稳定化或激酶活性可能是比抑制DUB更有效的靶标。
Williams等人,2015,Biomolecules 5,2619-2642，和Williams等人,2015,Am JPhysiol Gastrointest Liver Physiol 309:G324-G340综述了牵涉进肝脏线粒体稳态的调节中的机制以及这些机制可以如何保护免于酒精诱导的肝疾病。
Luciani等人,2020,Nat.Commun.11,970报道了终末分化细胞中线粒体网络的失调促成广泛的障碍，包括甲基丙二酸血症(MMA)。MMA是最常见的遗传性代谢障碍之一，其归因于线粒体甲基丙二酰基-辅酶A变位酶(MMUT)的缺乏。MMUT缺乏会诱导代谢和线粒体改变，所述改变因PINK1/Parkin介导的线粒体自噬中的异常而加重，从而造成功能失调的线粒体的积累，其触发上皮应激并最终导致细胞损伤。提示原发性MMUT缺乏、线粒体病变、线粒体自噬功能障碍和上皮应激之间的联系，并提供了MMA的潜在治疗前景。
Kluge等人,Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2018,282655-2659报道了USP30的选择性抑制剂加速线粒体自噬。
在PCT申请WO 2016/046530(US15/513125、US15/894025、US 16/448066)、WO2016/156816(US15/558632、US16/297937、US16/419558、US 16/419747、US 16/788446)、WO2017/009650(US 15/738900)、WO 2017/093718(US 15/776149)、WO 2017/103614(US 15/781615)、WO 2017/149313(US 16/078518)、WO 2017/109488(US 16/060299)、WO 2017/141036(US 16/070936)、WO 2017/163078(US 16/087515)、WO 2017/158381(US 16/080229)、WO 2017/158388(US 16/080506)、WO 2018/065768(US 16/336685)、WO 2018/060742(US 16/336202)、WO 2018/060689(US 16/334836)、WO 2018/060691(US 16/336363)、WO 2018/220355(US 16/615040)、WO 2018/234755(US 16/615709)、WO 2020/212350、WO 2020/212351、WO 2021/043870、WO 2021/204856、WO 2021/239863、WO 2021/245186、WO 2021/249909和WO 2022/084479中公开了多个系列的N-氰基-取代的杂环的衍生物作为去泛素化酶抑制剂，它们中的每一篇明确地通过引用并入本文。PCT申请WO 2019/171042(US16/977019)(其明确地通过引用并入本文)公开了N-氰基吡咯烷类作为USP30的抑制剂用于治疗纤维化疾病的用途。
Falgueyret等人,2001,J.Med.Chem.44,94-104,和PCT申请WO 01/77073涉及作为组织蛋白酶K和L的抑制剂的氰基吡咯烷类，其在治疗骨质疏松症和其它骨吸收相关病症方面具有潜在效用。PCT申请WO 2015/179190涉及N-酰基乙醇胺水解酸性酰胺酶抑制剂，其在治疗溃疡性结肠炎和克罗恩氏病方面具有潜在效用。PCT申请WO 2013/030218涉及作为泛素特异性蛋白酶(诸如USP7)的抑制剂的喹唑啉-4-酮化合物，其在治疗癌症、神经变性疾病、炎症性障碍和病毒感染方面具有潜在效用。PCT申请WO 2015/017502和WO 2016/019237涉及布鲁顿氏酪氨酸激酶的抑制剂，其在治疗疾病诸如自身免疫性疾病、炎性疾病和癌症中具有潜在效用。PCT申请WO 2009/026197、WO 2009/129365、WO 2009/129370和WO 2009/129371涉及作为组织蛋白酶C的抑制剂的氰基吡咯烷类，其在治疗COPD中具有潜在效用。美国专利申请US2008/0300268涉及作为酪氨酸激酶受体PDGFR的抑制剂的多芳族化合物。PCT申请WO 2019/222468、WO 2019/071073、WO 2020/036940和WO 2020/072964、Rusilowicz-Jones等人,2020,bioRxiv2020.04.16.044206(2020年4月20日)、和Tsefou等人,bioRxiv2021.02.02.429344(2021年2月2日)涉及作为USP30抑制剂的含有氰胺的化合物。Yue等人,2014,Cell Research,24,482-496涉及作为USP30抑制剂的二萜类衍生物15-氧代绣线菊内酯，其诱导线粒体融合。
PCT申请WO 2015/183987涉及在治疗癌症、纤维化、自身免疫性疾病或病症、炎性疾病或病症、神经变性疾病或病症或感染的方法中的包含去泛素酶抑制剂和人血清白蛋白的药物组合物。应当指出，据称去泛素酶(包括UCHL5/UCH37、USP4、USP9X、USP11和USP15)已经牵涉TGF-β信号传递途径的调节，该途径的中断会导致神经变性和纤维化疾病、自身免疫功能障碍和癌症。
PCT申请WO 2006/067165涉及使用吲哚啉酮激酶抑制剂治疗纤维化疾病的方法。PCT申请WO 2007/119214涉及使用内皮缩血管肽受体拮抗剂治疗早期肺纤维化的方法。PCT申请WO 2012/170290涉及使用THC酸治疗纤维化疾病的方法。PCT申请WO 2018/213150涉及磺酰胺USP30抑制剂，其在治疗涉及线粒体缺陷的病症中具有潜在效用。Larson-Casey等人,2016,Immunity 44,582-596涉及巨噬细胞Akt1激酶介导的线粒体自噬、细胞凋亡抗性和肺纤维化。Tang等人,2015,Kidney Diseases 1,71-79综述了线粒体自噬在肾脏病理生理学中的潜在作用。
需要用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化以及与其相关的各种症状和病症的安全的、可替代的和/或改进的方法和组合物。尽管不希望受任何特定理论或机制约束，据信，本发明的化合物起作用以抑制酶USP30，这又上调Parkin诱导的线粒体自噬。
将急性肾损伤(AKI)定义为在7天或更短时间内发生的肾功能突然下降，损伤的严重程度基于在肾脏疾病改善全球结果(Kidney Disease Improving Global Outcomes(KDIGO))指南中所述的血清肌酸酐(SCr)升高和尿输出减少进行分级。每年约1330万人发生AKI，其中85％生活在发展中国家，并且认为每年会导致约170万人死亡(Mehta等人,2015,Lancet 385(9987):2616-2643)。AKI很可能导致永久性肾损伤(即慢性肾脏疾病；CKD)，并且也可能导致对非肾器官的损伤。AKI是一个重要的公共卫生问题，特别是当考虑到发生偶然性CKD、进行性CKD、终末期肾脏疾病和心血管事件的患者的绝对数目时。已发现AKI在因为COVID-19住院的患者中普遍存在，并且与住院死亡率密切相关，据报道线粒体损伤和功能障碍是一种潜在的病理生理学机制和治疗靶标(Kellum等人,Nephrol DialTransplant(2020)35:1652-1662)。
AKI和CKD被视为同一疾病谱的连续统一体(Chawla等人,2017,Nat Rev Nephrol13(4):241-257)。经历冠状动脉旁路移植术(CABG)的患者处于肾损伤的高风险。在用于治疗和/或预防AKI的医学产品的开发方面存在明显未得到满足的医疗需求。
肾脏是一个高代谢需求的部位，在体内表现出高线粒体自噬率(McWilliams等人,2018,Cell Metab 27(2):439-449e435)。肾近端小管上皮细胞(RPTEC)(一种为了溶质/离子交换具有显著ATP需求的细胞类型)富含线粒体，并且是肾脏中急性肾损伤(AKI)的主要效应细胞。线粒体功能障碍已经牵涉AKI/CKD机制，这既通过来自临床前AKI和CKD模型的多个系列证据，也通过在患者活组织检查中显示异常线粒体表型的数据(Emma等人,2016,NatRev Nephrol 12(5):267-280；Eirin等人,2017,Handb Exp Pharmacol 240:229-250)证明。此外，原发性线粒体疾病经常表现为肾脏症状，诸如在具有MELAS/MIDD的患者中的局灶性节段性肾小球硬化症(Kawakami等人,2015,J Am Soc Nephrol 26(5):1040-1052)，以及在具有辅酶Q缺乏的患者中的原发性肾小管病变。mtDNA中的突变可以造成母系遗传性小管间质性疾病(Connor等人,2017,PLoS Genet 13(3):e1006620)。
关于肾损伤中的线粒体质量控制，(Tang等人,2018,Autophagy14(5):880-897)证实了PINK1 KO和PARK2 KO小鼠在缺血性AKI后肾损伤加重，从而提示，PINK1/PARKIN介导的线粒体自噬在IRI后在肾脏中起保护作用。另外，parkin/PINK1线粒体自噬会保护免于顺铂诱导的肾损伤(Wang等人,2018,Cell Death Dis 9(11):1113)。有限的CKD模型可用于线粒体自噬研究，纤维化中线粒体质量控制的支持性证据来自对纤维化肺病症诸如COPD和IPF的研究。Parkin敲除的动物显示响应于博来霉素的加重的肺纤维化(Kobayashi等人,2016,J Immunol,197:504-516)。类似地，来自parkin敲除的(KO)动物的气道上皮细胞显示对香烟烟气的加重纤维化和衰老应答(Araya等人,2019,Autophagy 15(3):510-526)。
通过临床前模型模拟与人病症一致的纤维化病理学(例如胶原沉积)的能力，该临床前模型可用于研究潜在的新治疗剂。临床前模型可以是毒素介导的(例如用于肺和皮肤纤维化的博来霉素)、外科手术的(例如用于急性小管间质性纤维化的缺血/再灌注损伤模型和单侧输尿管阻塞模型)和遗传性的(例如用于糖尿病性肾病的糖尿病性(db/db)小鼠)。例如，先前针对指定IPF治疗(尼达尼布和吡非尼酮)给出的两个实例在博来霉素肺纤维化模型中显示出效力。
Leigh综合征是一种罕见的影响中枢神经系统的遗传性神经代谢障碍。这种进行性障碍开始于3个月至2岁之间的婴儿。它罕见地发生在青少年和成人中。Leigh综合征可以由编码线粒体蛋白的核DNA中的突变、线粒体DNA中的突变(母系遗传性Leigh综合征-MILS)造成，或由位于X染色体的短臂上的称作丙酮酸脱氢酶的酶的缺乏造成(X-连锁的Leigh综合征)。Leigh综合征的症状通常迅速进展。最早的征象可能是吸吮能力差，以及头部控制和运动技能的丧失。这些症状可能伴有食欲不振、呕吐、易怒、持续哭闹和癫痫发作。随着障碍进展，症状还可能包括全身无力、肌张力缺乏和乳酸性酸中毒发作，其可以导致呼吸和肾功能受损。
在母系遗传性Leigh综合征(MILS)中，线粒体DNA中的基因突变(以>90％的高比例)干扰在运动移动中发挥作用的脑区域中的运行细胞的能量来源。线粒体DNA中的基因突变导致这些细胞中长期缺乏能量，这又影响中枢神经系统并导致运动功能进行性退化。当导致MILS的线粒体DNA中的基因突变较不丰富(低于90％)时，这种病症称作神经病共济失调和色素性视网膜炎(NARP)。还存在Leigh氏病的一种形式(被称作X-连锁的Leigh氏病)，其为产生另一组对细胞代谢重要的物质的基因中的突变的结果。存在Leigh综合征的另一种变体，其被称作法国-加拿大变体，其特征在于称作LRPPRC的基因中的突变。类似的神经学症状表达为Leigh综合征的症状，尽管在法国-加拿大变体中通常也观察到肝脂肪变性。
肌营养不良的特征是在患者的肌肉活组织检查中的特定异常(例如，肌纤维大小的变化、肌纤维坏死、瘢痕组织形成和炎症)。大约三十种不同的遗传条件构成了肌营养不良。杜兴肌营养不良(DMD)被归类为抗肌萎缩蛋白病，这是一系列肌肉疾病(每种由肌养蛋白基因中的改变引起)中的一种。DMD的临床标志包括身体的各块随意肌的虚弱和萎缩。在疾病的最晚期阶段，心脏和肠道肌肉会受到影响，心肌病和随后的心力衰竭是死亡的主要原因。
Reid，等人，“The Interplay of Mitophagy and Inflammation in DuchenneMuscular Dystrophy.”Life 2021,11,648报道称，线粒体功能障碍是在肌肉明显崩溃之前在营养不良性肌肉中首先出现的特征之一，这表明它可能是该疾病的病理学的重要促成因素，而不是肌肉坏死的后来后果。在健康的组织中，这些受损的线粒体被标记为线粒体自噬，但是，已经证实，在DMD中的线粒体自噬明显受损。
Vila等人,Cell Death and Differentiation(2017)24,330-342发现，健康肌纤维中肌膜损伤的修复需要活跃的线粒体，并且在缺乏肌养蛋白的mdx小鼠中，促进线粒体功能、钙稳态和肌膜稳定性的蛋白在疾病发作时发生显著改变。据推测，营养不良性肌纤维和线粒体中增加的钙过载会造成线粒体功能障碍，这又会降低营养不良性肌纤维的修复能力并导致其死亡，且因此，增强的自噬可能有助于清除这些线粒体。
Luan等人,Science Translational Medicine(2021)13,1-12证实，动物DMD模型和DMD患者组织含有减少的参与线粒体自噬的基因的表达，这促成线粒体功能障碍。尿石素A(一种能够刺激线粒体自噬、增加的肌肉代谢和干细胞再生能力的天然化合物)的施用可使DMD的mdx小鼠模型的肌肉功能恢复。尿石素A还减少TA肌肉中的CD45阳性炎症细胞，这表明潜在的抗炎机制可能有助于在mdx小鼠模型中的益处。
因此，需要作为USP30抑制剂的化合物，其用于治疗或预防其中指示USP30抑制的病症。特别地，需要USP30抑制剂，其具有合适的和/或改进的性能以便最大化针对目标疾病的效力。
发明概述
本发明涉及式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
(a)X1是N；且
X2、X3和X4是CR6；或
(b)X1是N；
X2、X3和X4中的一个是N；且
X2、X3和X4中的两个是CR6；或
(c)X1和X4是CR6；且
X2和X3是N；
环A选自：
(i)包含1至3个杂原子的5元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N和O；
(ii)包含1至3个杂原子的6元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；
(iii)包含1至3个杂原子的4至6元饱和的或部分饱和的单环杂环基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；和
(iv)苯基或萘基；
环A是未被取代的或被1或2个R7取代基取代；
环B选自：
(i)苯基或萘基；
(ii)包含1至3个杂原子的5至6元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；和
(iii)包含1至4个杂原子的9至10元二环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；
环B是未被取代的或被1至5个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、O(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、氧杂环丁基氧基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、NH(C1-C6)烷基、N((C1-C6)烷基)2、C(O)NH(C1-C6)烷基、C(O)N((C1-C6)烷基)2、NHC(O)(C1-C6)烷基、N(C1-C6)烷基)C(O)(C1-C6)烷基)、C(O)(C1-C6)烷基、C(O)O(C1-C6)烷基、CO2H、CONH2、SO2NH(C1-C6)烷基和SO2N((C1-C6)烷基)2；
R1选自氢、(C1-C6)烷基和(C3-C6)环烷基；
R2和R3各自独立地选自氢、卤素、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基；
R4和R5各自独立地选自氢和(C1-C4)烷基；
R6是氢或(C1-C4)烷基；且
每个R7独立地选自卤素、(C1-C6)烷基和(C1-C6)烷氧基；
前提条件是，当环A是未被取代的噁唑基或噁二唑基、且环B是苯基、且R1、R2、R3、R4和R5各自是氢、且X1、X2、X3和X4中的两个是N时，则环B在相对于环A的间位没有被CF3取代。
本发明还涉及式(I)的化合物的用途，特别是在治疗涉及线粒体功能障碍的病症，癌症和纤维化中的用途，还涉及其制备方法和含有所述化合物的药物组合物。
发明详述
本发明涉及USP30抑制剂，其具有合适的和/或改善的性能以便最大化对目标疾病的效力。这样的性能包括，例如，效能、选择性、物理化学性能、ADME(吸收、分布、代谢和排泄)性能(包括PK(药代动力学)特性)和安全性谱。
通常需要在有关测定中使药物分子对靶酶的效能最大化以便降低要施用给患者的有效/起效剂量。使用本文描述的体外生化荧光偏振(FP)测定，可以测试本发明的化合物的USP30亲和力。
USP30是位于线粒体的外膜中的跨膜蛋白，线粒体是存在于细胞内的产生能量的细胞器。因此，能够在体外证明细胞活性是有利的，因为这是可能指示在其生理环境中结合靶标的更大能力的许多组分之一，即其中USP30抑制剂化合物能够穿透细胞。USP30细胞蛋白质印迹(WB)测定旨在使用不可逆活性探针监测USP30活性以测试化合物对细胞中USP30的活性。与细胞蛋白质印迹测定类似，靶标结合评估(离体)可以在来自施用化合物的动物的脑或肾组织样品中进行。
为了将靶标结合知识扩展到下游药效动力学，可以进行TOM20(一种线粒体外膜蛋白)泛素化的评估。
一般而言，重要的是，药物对其期望的靶酶尽可能具有选择性；额外的活性产生副作用的可能性。许多DUB的确切生理作用尚未完全确定，但是，无论这些DUB可能发挥或不发挥什么作用，合理的药物化学规则是确保任何药物相对于未知生理功能的相关机制靶标具有选择性。可以针对其筛选本发明化合物的DUB酶的代表性例子是UCHL1、UCHL3、UCHL5、YOD1、SENP2、SENP6、TRABID、BAP1、Cezanne、MINDY2/FAM63B、OTUD1、OTUD3、OTUD5、OTUD6A、OTUD6B、OTUB1/UBCH5B、OTUB2、CYLD、VCPIP、AMSH-LP、JOSD1、JOSD2、USP1/UAF1、USP2、USP4、USP5、USP6、USP7、USP8、USP9x、USP10、USP11、USP12/UAF1、USP13、USP14、USP15、USP16、USP19、USP20、USP21、USP22、USP24、USP25、USP28、USP32、USP34、USP35、USP36、USP45、USP46/UAF1、USP47和USP48。优选地，本发明的化合物相对于这些DUB酶中的一种或多种对USP30具有良好选择性。
除了相对于其它DUB酶的选择性外，药物对其它靶标的低亲和力也是重要的，并且可以针对多组靶标进行药理性能分析以评估潜在脱靶效应的可能性并使潜在脱靶效应最小化。可以针对其筛选本发明化合物的靶标的例子是工业标准Eurofins-CerepSafetyScreen44组的那些，其包括44种靶标作为GPCR受体、转运蛋白、离子通道、核受体和激酶和非激酶酶的代表性选择。优选地，本发明的化合物对该筛选组的靶标具有不显著的亲和力。可以针对其筛选本发明化合物的靶标的其它例子是Thermo Fisher SelectScreen激酶谱分析组的激酶，其包括39种靶标作为激酶酶的代表性选择。优选地，本发明的化合物对该筛选组的靶标具有不显著的亲和力。此外，可以针对其筛选本发明化合物的特定酶类别的例子是组织蛋白酶(例如，组织蛋白酶A、B、C、H、K、L、S、V和Z)。优选地，本发明的化合物相对于这些酶中的一种或多种对USP30具有良好选择性。
对具有有利药代动力学性能使得它们适合于口服施用的化合物也存在需求。口服施用的药物应当具有良好的生物利用度；这是一种容易穿过胃肠(GI)道并且在其通过胃肠道进入体循环时不经受广泛代谢的能力。一旦药物进入体循环，代谢速率在确定药物在体内的停留时间方面也是重要的。
因此，药物分子具有能轻易穿过胃肠道并且仅在体内缓慢代谢的性能显然是有利的。Caco-2测定是一种被广泛接受的用于预测给定分子穿过胃肠道的能力的模型。药物分子的代谢的大部分通常发生在肝脏中，并且使用全细胞肝细胞(动物或人)的体外测定是被广泛接受的用于测量给定分子对肝脏中代谢的敏感性的方法。这样的测定旨在由肝细胞计算清除率值预测体内清除率。
预计具有良好Caco-2通量且对肝细胞稳定的化合物具有良好的口服生物利用度(通过胃肠道的良好吸收和在它穿过肝脏时化合物的最少提取)和在体内的长停留时间，该时间对于药物有效而言是足够的。
化合物的溶解度是为了预期的药理学应答在体循环中实现期望的药物浓度的一个重要因素。低水溶性是新化学实体的制剂开发遇到的一个问题，并且为了被吸收，药物必须以溶液的形式存在于吸收部位处。可以使用比浊溶解度测定测量化合物的动力学溶解度，来自该测定的数据还可以与Caco-2渗透性数据结合使用以预测剂量依赖性的人肠吸收。
可以使用指示化合物的暴露性能的标准测定来测量的其它参数包括例如血浆稳定性(半衰期测量)、血液AUC、Cmax、Cmin和Tmax值。
CNS障碍(包括阿尔茨海默氏病、帕金森病和本文描述的其它障碍)的治疗需要药物分子靶向脑，这需要适当穿透血脑屏障。因此，需要具有有效血脑穿透性能并在脑中提供合适的停留时间以有效的USP30抑制剂。通过利用MDR1-MDCK细胞单层(用MDR-1转染的Madin-Darby犬肾细胞，MDR-1导致人外流转运蛋白P-糖蛋白的过表达)体外通量测定，可以测量化合物能够穿过血脑屏障的概率。此外，也可以使用体内动物模型直接在脑和血浆中测量暴露。
对具有有利安全性谱的化合物也存在需求，可以通过多种标准体外和体内方法测量安全性谱。可以使用细胞毒性反向筛选来测定在特定细胞系(例如HCT116)中的抗增殖/细胞毒性作用，这通过响应于线粒体活性的rezasurin(alamarBlueTM)至resofurin的荧光检测实现。
还可以进行毒理学和安全性研究以鉴定不良作用的潜在靶器官，并定义治疗指数以设定在临床试验中的初始起始剂量。监管要求通常要求在至少两种实验动物物种中进行研究，一种啮齿动物(大鼠或小鼠)和一种非啮齿动物(兔、狗、非人灵长类动物或其它合适的物种)。
细菌逆向突变测定(埃姆斯试验)可以用于评价本发明化合物的致突变性能，其通常使用细菌菌株鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)进行，该菌株是氨基酸组氨酸的生物合成的突变体。
通过评价微核的存在，微核测定可以用于确定化合物是否具有遗传毒性。微核可以含有由DNA断裂(染色体断裂剂)产生的染色体片段或由有丝分裂器(非整倍体诱发剂)的破坏产生的完整染色体。
hERG预测器测定提供了关于试验化合物与钾通道的可能结合以及在超声心动图上的潜在QT延长的有价值信息。hERG电流的抑制造成QT间期延长，从而导致潜在致死性室性快速型心律失常(尖端扭转型室性心动过速)。通常，测定数据可以从自动化膜片箝测定平台产生。
根据第一方面，本发明提供了式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
(a)X1是N；且
X2、X3和X4是CR6；或
(b)X1是N；
X2、X3和X4中的一个是N；且
X2、X3和X4中的两个是CR6；或
(c)X1和X4是CR6；且
X2和X3是N；
环A选自：
(i)包含1至3个杂原子的5元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N和O；
(ii)包含1至3个杂原子的6元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；
(iii)包含1至3个杂原子的4至6元饱和的或部分饱和的单环杂环基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；和
(iv)苯基或萘基；
环A是未被取代的或被1或2个R7取代基取代；
环B选自：
(i)苯基或萘基；
(ii)包含1至3个杂原子的5至6元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；和
(iii)包含1至4个杂原子的9至10元二环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；
环B是未被取代的或被1至5个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、O(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、氧杂环丁基氧基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、NH(C1-C6)烷基、N((C1-C6)烷基)2、C(O)NH(C1-C6)烷基、C(O)N((C1-C6)烷基)2、NHC(O)(C1-C6)烷基、N(C1-C6)烷基)C(O)(C1-C6)烷基)、C(O)(C1-C6)烷基、C(O)O(C1-C6)烷基、CO2H、CONH2、SO2NH(C1-C6)烷基和SO2N((C1-C6)烷基)2；
R1选自氢、(C1-C6)烷基和(C3-C6)环烷基；
R2和R3各自独立地选自氢、卤素、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基；
R4和R5各自独立地选自氢和(C1-C4)烷基；
R6是氢或(C1-C4)烷基；且
每个R7独立地选自卤素、(C1-C6)烷基和(C1-C6)烷氧基；
前提条件是，当环A是未被取代的噁唑基或噁二唑基、且环B是苯基、且R1、R2、R3、R4和R5各自是氢、且X1、X2、X3和X4中的两个是N时，则环B在相对于环A的间位没有被CF3取代。
放弃声明涉及WO 2021/239863，其包括实施例4，其为被CH2-三唑基取代的N-氰基吡咯烷。
除非另外指出，否则烷基和烷氧基基团可以是直链或支链并且含有1至6个碳原子，且更一般而言，1至4个碳原子。烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、戊基和己基。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丁氧基和正丁氧基。烷氧基烷基的例子包括甲氧基甲基、甲氧基乙氧基和乙氧基甲氧基。
除非另外指出，否则环烷基和环烷氧基(O-环烷基)基团含有3至6个碳原子，且更一般而言，3至4个碳原子。环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。环烷氧基的例子包括环丙氧基和环丁氧基。
卤素是指氟、氯、溴或碘，并且具体地是氟或氯。卤代烷基和卤代烷氧基基团可以含有一个或多个卤素取代基。例子是氟甲基、二氟甲基、三氟甲基和三氟甲氧基。
杂环基环可以是单环的或稠合的二环，其为饱和的或部分饱和的，并且包含1至4个杂原子，优选1、2或3个杂原子，所述杂原子各自独立地选自氮、氧和硫。杂环基基团的例子包括氮杂环丁基、氧杂环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、吡咯啉基、二氢呋喃基、二氢噻吩基、二氢噁唑基、噻唑啉基、二氧杂环戊烷基、氧杂硫杂环戊烷基、二硫杂环戊烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑啉基、噻唑烷基、吡喃基、哌啶基、二氧杂环己烷基、吗啉代、二硫杂环己烷基、硫代吗啉代、哌嗪基和四氢吡唑并吡嗪基。
杂芳基环可以是单环的或二环的并且包含1至4个杂原子，优选1、2或3个杂原子，所述杂原子各自独立地选自氮、氧和硫，例外是关于环A，其中每个杂原子独立地(单独地)选自氮和氧。单环杂芳基环是芳族的，且二环杂芳基环是稠合环，其中两个环是芳族的或环中的一个是芳族的且另一个环是饱和的或部分饱和的。杂芳基基团的例子包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基(具体地，1,3,4-噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基和1,2,5-噁二唑基)、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基(具体地，1,3,4-噻二唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基和1,2,5-噻二唑基)、咪唑基、吡唑基、三唑基(具体地，1,2,3-三唑基和1,2,4-三唑基)、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基(具体地，1,2,3-三嗪基、1,2,4-三嗪基和1,3,4-三嗪基)、吲唑基、吲哚基、吲哚啉基、吲嗪基、异吲哚基、异吲哚啉基、嘌呤基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并三唑基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、二氢吡咯并吡啶基、噁唑并吡啶基、萘啶基、蝶啶基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、苯并噻嗪基、二氢苯并噁嗪基、二氢喹唑啉基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基。
除非另有说明，否则术语“被取代”是指被一个或多个所定义的基团取代。在其中基团可以选自超过一个可替代基团的情况下，所选择的基团可以相同或不同。术语“独立地”是指，在超过一个取代基选自超过一个可能的取代基的情况下，那些取代基可以相同或不同。
在下面定义式(I)的化合物的优选方面和实施方案。
在本发明的一个优选方面，(a)，X1是N，且X2、X3和X4是CR6。
在本发明的另一个优选方面，(b)，X1是N，X2、X3和X4中的一个是N，且X2、X3和X4中的两个是CR6。
在本发明的另一个优选方面，(c)，X1和X4是CR6；且X2和X3是N。
在本发明的一个优选实施方案中，环B选自：
(i)苯基或萘基；
(ii)5至6元单环杂芳基环，其选自呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基(具体地，1,3,4-噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基和1,2,5-噁二唑基)、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基(具体地，1,3,4-噻二唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基和1,2,5-噻二唑基)、咪唑基、吡唑基、三唑基(具体地，1,2,3-三唑基和1,2,4-三唑基)、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基和三嗪基；和
(iii)9至10元二环杂芳基环，其选自吲唑基、吲哚基、吲哚啉基、吲嗪基、异吲哚基、异吲哚啉基、嘌呤基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并三唑基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、二氢吡咯并吡啶基、噁唑并吡啶基、萘啶基、蝶啶基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、苯并噻嗪基、二氢苯并噁嗪基、二氢喹唑啉基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基。
更优选地，环B选自苯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基和二氢喹唑啉基。
更优选地，环B选自苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、吲唑基、吲哚基和异吲哚基。
最优选地，环B选自苯基、吡啶基和吲唑基。
在本发明的一个优选实施方案中，环B是未被取代的或被1至5个取代基、更优选1至3个取代基、且最优选1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、O(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、氧杂环丁基氧基、氮杂环丁基、吡咯烷基和哌啶基。
更优选地，环B是未被取代的或被1至5个取代基、优选1至3个取代基、且最优选1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、卤代(C1-C3)烷基、卤代(C1-C3)烷氧基、(C3-C4)环烷基、O(C3-C4)环烷基、(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基、氧杂环丁基氧基、氮杂环丁基、吡咯烷基和哌啶基。
更优选地，环B是未被取代的或被1至5个取代基、优选1至3个取代基、且最优选1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁基氧基。
甚至更优选地，环B是未被取代的或被1至5个取代基、优选1至3个取代基、且最优选1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自氯、氟、CN、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
最优选地，环B是未被取代的或被1至5个取代基、优选1至3个取代基、且最优选1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自氯、氟、CN、甲基、乙基、甲氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
在一个优选方面，本发明涉及具有式(I)(A)的式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
Z是N或CR11；
R8、R11和R12各自独立地选自氢、卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、O(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、氧杂环丁基氧基、氮杂环丁基、吡咯烷基和哌啶基；
R9和R10各自独立地选自氢、卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、O(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、氧杂环丁基氧基、氮杂环丁基、吡咯烷基和哌啶基；
或R9和R10一起形成包含1至2个杂原子的5至6元饱和的、部分饱和的或芳族的环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S，其中所述环是未被取代的或被1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基和卤代(C1-C6)烷氧基；
前提条件是，当环A是未被取代的噁唑基或噁二唑基、且R1、R2、R3、R4和R5各自是氢、且X1、X2、X3和X4中的两个是N、且Z是CR11且R11是氢或卤素时，则R9不是CF3。
在一个实施方案中，Z是CR11，其提供了具有式(I)(B)的式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。这对应于式(I)的化合物，其中环B是苯基或9至10元二环杂芳基环(R9和R10一起形成杂环基或杂芳基环)。
在另一个实施方案中，Z是N，其提供了具有式(I)(C)的式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。这对应于式(I)的化合物，其中环B是吡啶基(6元单环杂芳基环)。
在本发明的另一个优选方面，环A是包含1至3个杂原子的5元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N和O。更优选地，环A是选自呋喃基、吡咯基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基(具体地，1,3,4-噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基和1,2,5-噁二唑基)、咪唑基、吡唑基和三唑基(具体地，1,2,3-三唑基和1,2,4-三唑基)的杂芳基环。更优选地，环A选自噁唑基和噁二唑基。最优选地，环A选自噁唑基和1,3,4-噁二唑基。
在另一个优选方面，当环A选自噁唑基和噁二唑基时，本发明涉及具有式(I)(D)的式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中X5选自N、CH和CR7。在一个优选的实施方案中，X5选自CH和CR7且Z是CR11。在另一个优选的实施方案中，X5是N，且Z是CR11。在另一个优选的实施方案中，X5选自CH和CR7，且Z是N。在另一个优选的实施方案中，X5是N，且Z是N。最优选地，在每个实施方案中，X5是CH。
在本发明的另一个优选方面，环A是包含1至3个杂原子的6元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S。更优选地，环A是选自吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基和三嗪基的杂芳基环。最优选地，环A是吡啶基。
在另一个优选方面，当环A是吡啶基时，本发明涉及具有式(I)(E)的式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。在一个优选的实施方案中，Z是CR11。在另一个优选的实施方案中，Z是N。所述吡啶基环是未被取代的或被1或2个R7取代基取代。优选地，所述吡啶基环是未被取代的。
在本发明的另一个优选方面，环A是包含1至3个杂原子的4至6元饱和的或部分饱和的单环杂环基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S。更优选地，环A是选自氮杂环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、吡咯啉基、二氢呋喃基、二氢噻吩基、二氢噁唑基、噻唑啉基、二氧杂环戊烷基、氧杂硫杂环戊烷基、二硫杂环戊烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑啉基、噻唑烷基、吡喃基、哌啶基、二氧杂环己烷基、吗啉代、二硫杂环己烷基、硫代吗啉代和哌嗪基的杂环基环。最优选地，环A是吡咯烷基。
在另一个优选方面，当环A是吡咯烷基时，本发明涉及具有式(I)(F)的式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。在一个优选的实施方案中，Z是CR11。在另一个优选的实施方案中，Z是N。所述吡咯烷基环是未被取代的或被1或2个R7取代基取代。优选地，所述吡咯烷基环是未被取代的。
在本发明的另一个优选方面，环A是苯基。
在另一个优选方面，当环A是苯基时，本发明涉及具有式(I)(G)的式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。在一个优选的实施方案中，Z是CR11。在另一个优选的实施方案中，Z是N。所述苯基环是未被取代的或被1或2个R7取代基取代。优选地，所述苯基环是未被取代的或被氟取代。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R1选自氢、甲基和环丙基。最优选地，R1选自氢和环丙基。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R2、R3、R4和R5各自是氢。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R6是氢或甲基。最优选地，R6是氢。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，环A是未被取代的。
在本发明的所有方面的另一个优选实施方案中，环A被1或2个R7基团取代，所述R7基团独立地选自氟、氯、甲基和甲氧基。优选地，环A被1个R7基团取代，所述R7基团选自氟、氯、甲基和甲氧基。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R8和R11各自独立地选自氢、卤素、CN、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基、环丙氧基、CF3和OCF3。更优选地，R8和R11各自独立地选自氢、卤素和CN。更优选地，R8和R11各自独立地选自氢、氟和CN。最优选地，R8和R11各自是氢。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R9选自氢、卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C3)烷基、卤代(C1-C3)烷氧基、(C3-C4)环烷基、O(C3-C4)环烷基和氧杂环丁基氧基。更优选地，R9选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。更优选地，R9选自氢、氟、氯、CN、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基、环丙氧基、CF3和OCF3。最优选地，R9选自氢、氯、CN、乙基、环丙基、CF3和OCF3。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R10选自氢、卤素、CN、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基、环丙氧基、CF3和OCF3。更优选地，R10选自氢、氟、氯和CN。最优选地，R10是氢。
可替换地，在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R9和R10一起形成包含1至2个杂原子的5至6元部分饱和或芳族环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S。更优选地，R9和R10一起形成包含1至2个氮原子的5至6元部分饱和或芳族环。最优选地，R9和R10一起形成包含1至2个氮原子的5元部分饱和或芳族环。在本发明的所有方面的一个特别优选的实施方案中，R9和R10与它们所连接的苯基环一起形成吲唑基环。
优选地，由R9和R10形成的环是未被取代的或被1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基、环丙氧基、CF3和OCF3。更优选地，由R9和R10形成的环是未被取代的或被1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自氟、氯、甲基和甲氧基。最优选地，由R9和R10形成的环是未被取代的或被1个取代基取代。在R9和R10与它们所连接的苯基环一起形成吲唑基环的情况下，所述环优选地是1-甲基-1H-吲唑基。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R12选自氢、卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、卤代(C1-C3)烷基、卤代(C1-C3)烷氧基、(C3-C4)环烷基、O(C3-C4)环烷基和氧杂环丁基氧基。更优选地，R12选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。更优选地，R12选自氢、氟、氯、CN、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。最优选地，R12选自氢、甲氧基、环丙基、环丙氧基、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
在一个优选方面，其中所述式(I)的化合物是式(I)(D)的化合物：
R8选自氢、卤素、CN、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基、环丙氧基、CF3和OCF3；
R9选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基；
R10选自氢、卤素、CN、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基、环丙氧基、CF3和OCF3；
R11选自氢、卤素、CN、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基、环丙氧基和OCF3；且
R12选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R8、R9、R10、R11和R12取代基中的2个是氢且其余3个取代基如在本文实施方案中所定义。最优选地，R8、R9、R10、R11和R12取代基中的3个是氢且其余2个取代基如在本文实施方案中所定义。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，R8和R11是氢，且R9、R10和R12如在本文实施方案中所定义。更优选地，R8和R11是氢，R10选自氢、氟和CN，且R9和R12如在本文实施方案中所定义。最优选地，R8、R10和R11是氢，且R9和R12如在本文实施方案中所定义。
例如，在本发明的所有方面的一个优选的实施方案中：
R8、R10和R11是氢；且
R9和R12各自独立地选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
式(I)的化合物含有两个或更多个不对称的碳原子(手性中心)并且可以作为四种或更多种立体异构体存在。
式(I)的化合物含有在被NR1C(O)和CR4R5-环基团取代的吡咯烷环的碳原子处的两个手性中心，并且所述立体中心可以以(R)或(S)构型存在。根据IUPAC命名法，立体异构体的绝对构型(R)和(S)的指定取决于取代基的性质和顺序法则程序的应用。式(I)的化合物可以含有其它手性中心，例如其中R2或R3不是氢或其中R4和R5是不同的。在本发明范围内包括式(I)的化合物的所有立体异构体和它们的组合。
关于NR1C(O)和CR4R5-环基团的手性中心，式(I)的化合物因而可以以下述构型中的任一种存在：
本发明的式(I)的化合物、及其所有方面和优选实施方案优选地作为具有以下绝对构型的单一立体异构体存在：
在基团R2、R3、R4和R5都是氢的情况下，本发明的式(I)的化合物、及其所有方面和优选实施方案优选地作为具有以下绝对构型(3R,5S)的单一立体异构体存在：
在式(I)的化合物是单一立体异构体的情况下，它优选地以至少60％、更优选地至少80％、更优选地至少90％、且最优选地至少95％、例如96％、97％、98％、99％或100％的立体异构体过量存在。
用于制备/分离各对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯的前体手性合成，或使用例如手性高效液相色谱法(HPLC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。可替换地，外消旋体(或外消旋的前体)可以与合适的光学活性化合物例如醇反应，或者在式(I)的化合物含有酸性或碱性部分的情况下，与碱或酸诸如1-苯基乙胺或酒石酸反应。得到的非对映异构体混合物可以通过色谱法和/或分步结晶分离，并且将一种或两种非对映异构体通过技术人员众所周知的方式转化为相应的纯对映异构体。本发明的手性化合物(及其手性前体)可以使用色谱法(通常是HPLC)以对映异构体富集形式获得，在不对称树脂上使用由烃、通常是庚烷或己烷组成的流动相，所述流动相含有0-50体积％的丙烷-2-醇(通常是2％至20％)和0-5体积％的烷基胺(通常是0.1％二乙胺)。浓缩洗脱液，得到富集的混合物。本发明包括式(I)的化合物的所有晶体形式，包括其外消旋体和外消旋混合物(混合体)。通过本领域技术人员已知的常规技术，可以分离立体异构体混合体-参见，例如，E.L.Eliel和S.H的“Stereochemistry of Organic Compounds”.Wilen(Wiley,New York,1994)。
在本发明涉及式(I)的化合物的情况下，优选地所述化合物具有式(I)(i)的绝对立体化学构型：
在本发明涉及式(I)(A)的化合物的情况下，优选地所述化合物具有式(I)(A)(i)的绝对立体化学构型：
在本发明涉及式(I)(B)的化合物的情况下，优选地所述化合物具有式(I)(B)(i)的绝对立体化学构型：
在本发明涉及式(I)(C)的化合物的情况下，优选地所述化合物具有式(I)(C)(i)的绝对立体化学构型：
在本发明涉及式(I)(D)的化合物的情况下，优选地所述化合物具有式(I)(D)(i)的绝对立体化学构型：
在本发明涉及式(I)(E)的化合物的情况下，优选地所述化合物具有式(I)(E)(i)的绝对立体化学构型：
在本发明涉及式(I)(F)的化合物的情况下，优选地所述化合物具有式(I)(F)(i)的绝对立体化学构型：
在本发明涉及式(I)(G)的化合物的情况下，优选地所述化合物具有式(I)(G)(i)的绝对立体化学构型：
在本发明的式(I)和式(I)(i)的每种化合物的一个特别优选的方面：
环B选自苯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基和二氢喹唑啉基，并且优选地选自苯基、吡啶基和吲唑基；
环B是未被取代的或被1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁基氧基；
环A选自呋喃基、吡咯基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、吡咯烷基和苯基，且优选地选自噁唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、吡咯烷基和苯基；
环A是未被取代的或被1个R7基团取代，所述R7基团选自氟、氯、甲基和甲氧基；
R1选自氢、甲基和环丙基；
R2、R3、R4和R5各自是氢；且
R6是氢或甲基。
在本发明的式(I)和式(I)(i)的每种化合物的一个更特别优选的方面：
环B选自苯基、吡啶基和吲唑基；
环B是未被取代的或被1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁基氧基；
环A选自噁唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、吡咯烷基和苯基；
环A是未被取代的或被甲基取代；
R1选自氢和环丙基；
R2、R3、R4和R5各自是氢；且
R6是氢或甲基。
在本发明的式(I)(A)、(I)(B)、(I)(C)、(I)(D)、(I)(E)、(I)(F)、(I)(G)、(I)(A)(i)、(I)(B)(i)、(I)(C)(i)、(I)(D)(i)、(I)(E)(i)、(I)(F)(i)和(I)(G)(i)的每种化合物的一个特别优选的方面：
R1选自氢、甲基和环丙基；
R2、R3、R4和R5各自是氢；
R6是氢或甲基；
环A是未被取代的或被1或2个R7基团取代，所述R7基团独立地选自氟、氯、甲基和甲氧基；
R8和R11各自是氢；
R9选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基；
R10选自氢、氟和CN，且优选地是氢；且
R12选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
在本发明的式(I)(A)、(I)(B)、(I)(C)、(I)(D)、(I)(E)、(I)(F)、(I)(G)、(I)(A)(i)、(I)(B)(i)、(I)(C)(i)、(I)(D)(i)、(I)(E)(i)、(I)(F)(i)和(I)(G)(i)的每种化合物的一个更特别优选的方面：
R1选自氢和环丙基；
R2、R3、R4、R5、R8、R10和R11各自是氢；
R6是氢或甲基；
环A是未被取代的或被甲基取代；
R9选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基；且
R12选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
在本发明的式(I)(A)、(I)(B)、(I)(C)、(I)(D)、(I)(E)、(I)(F)、(I)(G)、(I)(A)(i)、(I)(B)(i)、(I)(C)(i)、(I)(D)(i)、(I)(E)(i)、(I)(F)(i)和(I)(G)(i)的每种化合物的另一个特别优选的方面：
R1选自氢、甲基和环丙基；
R2、R3、R4、R5、R8和R11各自是氢；
R6是氢或甲基；
环A是未被取代的或被1或2个R7基团取代，所述R7基团独立地选自氟、氯、甲基和甲氧基；
R9和R10一起形成包含1至2个氮原子的5至6元部分饱和或芳族环，所述环是未被取代的或被1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自氟、氯、甲基和甲氧基；且
R12选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基，且优选地是氢。
在本发明的式(I)(A)、(I)(B)、(I)(C)、(I)(D)、(I)(E)、(I)(F)、(I)(G)、(I)(A)(i)、(I)(B)(i)、(I)(C)(i)、(I)(D)(i)、(I)(E)(i)、(I)(F)(i)和(I)(G)(i)的每种化合物的一个更特别优选的方面：
R1选自氢和环丙基；
R2、R3、R4、R5、R8、R11和R12各自是氢；
R6是氢或甲基；
环A是未被取代的或被甲基取代；且
R9和R10与它们所连接的苯基环一起形成吲唑环，所述环是未被取代的或被1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自氟和甲基，并且优选地被甲基取代。
用在本发明中的优选的式(I)的化合物选自：
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-环丙基苯基)噁唑2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基)吡啶甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡啶甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)(3(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺；
(S)-N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺；
(R)-N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺；和
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-6-(1H-吲唑-4-基)烟酰胺；
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
式(I)的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐(包括二盐)。
合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。例子包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、羟苯酰苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、氢磷酸盐、羟乙基磺酸盐、D-和L-乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、棕榈油酸盐、磷酸盐、蔗糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐硫酸盐、D-和L-酒石酸盐和甲苯磺酸盐。
合适的碱盐由形成无毒盐的碱形成。例子包括铝盐、铵盐、精氨酸盐、苄星青霉素盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐和锌盐。
关于合适的盐的综述，参见Stahl和Wermuth,Handbook of PharmaceuticalSalts:Properties,Selection,and Use,Wiley-VCH，魏因海姆，德国(2002)。
通过将式(I)的化合物的溶液与期望的酸或碱(根据需要)混合在一起，可以容易地制备式(I)的化合物的药学上可接受的盐。所述盐可以从溶液中沉淀并可以通过过滤收集或可以通过溶剂的蒸发来回收。
根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括水合物和溶剂化物，其中结晶的溶剂可以被同位素取代，例如D2O、丙酮-d6、DMSO-d6。
笼形包合物、药物-宿主包合络合物也在本发明的范围内，其中与上述溶剂化物相反，药物和宿主以非化学计量的量存在。关于这样的复合物的综述，参见Haleblian的J.Pharm Sci,64(8),1269-1288(1975年8月)。
在下文中所有对式(I)的化合物的提及包括对其盐的提及以及对式(I)的化合物及其盐的溶剂化物和笼形包合物的提及。
本发明包括如上文所定义的式(I)的化合物的所有多晶型物。
式(I)的化合物的所谓“前药”也在本发明的范围内。因此，某些本身几乎没有药理活性或没有药理活性的式(I)的化合物的衍生物在施用至身体内或身体上时，可以产生具有期望活性的式(I)的化合物。这样的衍生物被称作“前药”。
例如，可以如下制备根据本发明的前药：用例如H Bundgaard的“Design ofProdrugs”(Elsevier,1985)中所述的某些本领域技术人员已知作为“前-部分”的部分替代在式(I)的化合物中存在的适合官能团。最后，某些式(I)的化合物自身可以充当式(I)的其它化合物的前药。
式(I)的化合物的代谢物，即在式(I)的化合物施用后在体内形成的化合物，也在本发明范围内。这样的代谢物本身可以是式(I)的化合物，其被特别包括在本发明的范围内。
在本发明的范围内包括式(I)的化合物的所有互变异构形式。
含有氮原子的式(I)的化合物的某些衍生物还可以形成相应的N-氧化物，并且这样的化合物也在本发明的范围内。
本发明还包括式(I)的化合物的所有药学上可接受的同位素变体。将同位素变体定义为其中至少一个原子被具有相同原子数但原子质量不同于在自然界中通常发现的原子质量的原子替代的变体。
适用于包含在本发明化合物中的同位素的例子包括以下元素的同位素：氢，诸如2H和3H，碳，诸如13C和14C，氮，诸如15N，氧，诸如17O和18O，磷，诸如32P，硫，诸如35S，氟，诸如18F，和氯，诸如36Cl。
用同位素诸如氘取代本发明的化合物可能提供某些由更大代谢稳定性引起的治疗优点，例如，增加的体内半衰期或减小的剂量需求，且因此在某些情况下可能是优选的。
式(I)的化合物的某些同位素变体，例如，掺入放射性同位素的那些，可用在药物和/或底物组织分布研究中。考虑到放射性同位素氚和14C易于掺入和检测方便，它们对于该目的是特别有用的。
通过本领域技术人员已知的常规技术，或通过与附随实施例和制备中所述的那些类似的方法，使用合适试剂的适当同位素变体，通常可以制备式(I)的化合物的同位素变体。
式(I)的化合物是去泛素化酶USP30的抑制剂。
根据另一个方面，本发明提供了用于在体外或在体内抑制USP30的如本文中定义的式(I)的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
根据另一个方面，本发明提供了用于用作药物的如本文中定义的式(I)的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
根据另一个方面，本发明提供了治疗或预防哺乳动物的已知USP30的抑制会产生有益效果或可以证实USP30的抑制会产生有益效果的障碍或病症的方法，其包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的如本文中定义的式(I)的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，所述障碍或病症是CNS适应症。在本发明的所有方面的一个进一步优选的实施方案中，所述障碍或病症是外周适应症。
根据另一个方面，本发明提供了如本文中定义的式(I)的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防已知USP30的抑制会产生有益效果或可以证实USP30的抑制会产生有益效果的障碍或病症。药物的制备可以尤其包括式(I)的化合物或其盐的化学合成，或包含所述化合物或盐的组合物或制剂的制备，或包含所述化合物的任何药物的包装。在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，所述障碍或病症是CNS适应症。在本发明的所有方面的一个进一步优选的实施方案中，所述障碍或病症是外周适应症。
根据另一个方面，本发明提供了一种抑制患者中的USP30的方法，其包括给所述患者施用治疗有效量的如本文中定义的式(I)的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
受益于USP30活性的障碍或病症可以选自涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化。
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，所述受益于USP30活性的障碍或病症是涉及线粒体功能障碍的病症。所述涉及线粒体功能障碍的病症可以是CNS适应症或外周适应症。
线粒体功能障碍是由线粒体的缺陷引起，线粒体是存在于身体的每个细胞(红细胞除外)中的专门隔室。当线粒体失能时，在细胞内产生的能量越来越少，随之而来的是细胞损伤或甚至细胞死亡。如果该过程在身体各处重复，发生这种情况的受试者的生命会受到严重损害。线粒体疾病似乎最常出现在对能量要求非常高的器官中，诸如脑、心脏、肝脏、骨骼肌、肾脏以及内分泌和呼吸系统。
涉及线粒体功能障碍的病症可以选自牵涉线粒体自噬缺陷的病症、牵涉线粒体DNA突变的病症、牵涉线粒体氧化性应激的病症、牵涉线粒体膜电位缺陷的病症、线粒体生物发生、牵涉线粒体形状或形态缺陷的病症、以及牵涉溶酶体贮积缺陷的病症。
具体地，涉及线粒体功能障碍的病症可以选自：神经变性疾病；多发性硬化(MS)；线粒体脑病、乳酸性酸中毒和中风样发作(MELAS)综合征；母系遗传性糖尿病和耳聋(MIDD)；Leber氏遗传性视神经病(LHON)；癌症(包括，例如，乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌或组织器官的其它癌症和血细胞癌诸如淋巴瘤和白血病、多发性骨髓瘤、转移性癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、鼻咽癌、结肠直肠癌和非小细胞肺癌)；神经病、共济失调、色素性视网膜炎、母系遗传性Leigh综合征(NARP-MILS)；Danon病；糖尿病；糖尿病性肾病；代谢障碍；心力衰竭；导致心肌梗塞的缺血性心脏病；精神病学疾病、例如精神分裂症；多种硫酸酯酶缺乏症(MSD)；粘脂质贮积症II(ML II)；粘脂质贮积症III(ML III)；粘脂质贮积症IV(ML IV)；GMl-神经节苷脂贮积病(GM1)；神经元蜡样质-脂褐素增多症(NCL1)；阿尔珀斯病；Barth综合征；β-氧化缺陷；肉碱-酰基-肉碱缺乏；肉碱缺乏；肌酸缺乏综合征；辅酶Q10缺乏；复合物I缺乏；复合物II缺乏；复合物III缺乏；复合物IV缺乏；复合物V缺乏；COX缺乏；慢性进行性外侧眼肌麻痹综合征(CPEO)；CPT I缺乏；CPT II缺乏；戊二酸尿症II型；卡恩斯-塞尔综合征；乳酸性酸中毒；长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏(LCHAD)；Leigh氏病或综合征；Leigh综合征法国-加拿大(LSFC)变体；致死性婴儿心肌病(LIC)；勒夫特病；中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏(MCAD)；肌阵挛型癫痫和破碎红纤维(MERRF)综合征；线粒体细胞病；线粒体隐性遗传性共济失调综合征；线粒体DNA耗竭综合征；肌神经胃肠道障碍和脑病；皮尔逊综合征；丙酮酸脱氢酶缺乏；丙酮酸羧化酶缺乏；POLG突变；中/短链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶(M/SCHAD)缺乏；极长链酰基辅酶A脱氢酶(VLCAD)缺乏；过氧化物酶体障碍；甲基丙二酸血症；甲羟戊酸激酶缺乏；年龄依赖性的认知功能和肌肉强度下降；肌肉结构障碍；以及与神经变性和神经精神病学障碍相关的认知损害。
涉及线粒体功能障碍的病症可以是CNS障碍，例如神经变性疾病。
神经变性疾病包括但不限于帕金森病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、亨廷顿病、缺血、中风、痴呆伴露易小体、多系统萎缩(MSA)、进行性核上性麻痹(PSP)、皮质基底变性(CBD)和额颞叶痴呆。
具体地，本发明的化合物可用于治疗或预防帕金森病，包括但不限于与α-突触核蛋白、parkin、PINK1、GBA和LRRK2中的突变有关的PD，以及常染色体隐性的青少年帕金森病(AR-JP)或早发型帕金森病(EOPD)，其中parkin或PINK1被突变、截短或删除。
具体地，本发明的化合物可用于治疗与神经变性和神经精神病学障碍相关的认知损害，包括，例如，与阿尔茨海默氏病和帕金森病相关的认知损害、AD和PD的临床前或前驱形式、亨廷顿病、路易小体痴呆疾病、与精神分裂症相关的认知损害、情绪障碍、双相和重性抑郁障碍。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及Leigh综合征或疾病的治疗或预防，包括例如，X-连锁的Leigh氏病、Leigh综合征法国-加拿大变体和/或与Leigh氏病相关的症状。具体地，本发明的化合物可用于治疗肌肉结构障碍，其选自肌营养不良、杜兴肌营养不良、贝克肌营养不良、肢带型肌营养不良、先天性肌营养不良、面肩肱肌营养不良、强直性肌营养不良、眼咽肌营养不良、远端肌营养不良、埃-德二氏肌营养不良、Bethlem肌病、中央轴空病、先天性纤维类型不平衡、透明体肌病、肌肉钠通道障碍、肌强直性软骨营养不良、肌管性肌病、线状体疾病和压迫性尿失禁。
当用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症时，本文描述的本发明的化合物或其药物组合物可以与一种或多种另外的药剂组合。所述化合物可以与一种或多种另外的药剂组合，所述另外的药剂选自左旋多巴、多巴胺激动剂、单氨基加氧酶(MAO)B抑制剂、儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)抑制剂、抗胆碱能药、利鲁唑、金刚烷胺、胆碱酯酶抑制剂、美金刚、丁苯那嗪、抗精神病药、地西泮、氯硝西泮、抗抑郁药和抗惊厥药。所述化合物可以与减少/去除神经变性疾病中的致病蛋白聚集体的药剂组合，所述药剂是例如减少/去除帕金森病、多系统萎缩或痴呆伴露易小体中的α-突触核蛋白的药剂；减少/去除阿尔茨海默氏病或进行性核上性麻痹中的Tau的药剂；减少/去除ALS或额颞叶痴呆中的TDP-43的药剂。
所述化合物可以与可用作线粒体疾病治疗的新型药剂(包括但不限于烟酰胺核苷)组合。
所述化合物可以与用于治疗肌营养不良(诸如DMD)的药剂组合，所述药剂包括皮质类固醇(例如，泼尼松和地夫可特)、阿塔鲁伦(ataluren)、依特立生(eteplirsen)、戈洛迪森(golodirsen)、casimersen、viltepso、以及其它外显子跳跃/无义通读/基因疗法、吉维司他、潘瑞鲁单抗和瓦莫罗酮、以及心脏药物诸如血管紧张素-转换酶抑制剂和β阻滞剂。
在本发明的所有方面的另一个优选实施方案中，受益于USP30活性的障碍或病症是癌症。所述癌症可能与线粒体功能障碍相关。优选的癌症包括，例如，乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌或组织器官的其它癌症和血细胞癌诸如淋巴瘤和白血病、多发性骨髓瘤、转移性癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、鼻咽癌、结直肠癌、结肠直肠癌和非小细胞肺癌。
具体地，本发明的化合物可用于治疗或预防其中细胞凋亡途径失调的癌症，和更具体地其中BCL-2家族的蛋白发生突变或过表达或表达不足的癌症。
纤维化是指在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增生和瘤形成以后发生的细胞外基质组分的积累。通过本发明的化合物和组合物可以治疗的纤维化障碍尤其包括与主要器官疾病相关的纤维化/纤维化障碍，所述主要器官疾病是例如间质性肺病(ILD)、肝硬化、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)(肝纤维化)、肾脏疾病(肾纤维化)、急性肾损伤(AKI)、急性肾脏疾病(AKD)、慢性肾脏疾病(CKD)、肾移植物功能延迟、心脏或血管疾病(心脏纤维化、肥厚型心肌病(HCM))和眼部疾病；纤维增生性障碍，例如，全身和局部硬皮病、瘢痕疙瘩和肥大性疤痕、动脉粥样硬化、再狭窄和Dupuytren氏挛缩；与创伤相关的瘢痕形成，例如，外科手术并发症、化疗药物诱导的纤维化(例如博来霉素诱导的纤维化)、辐射诱导的纤维化、意外损伤和烧伤)；腹膜后纤维化(奥蒙德氏病)；和接受腹膜透析的患者中的腹膜纤维化/腹膜瘢痕形成，通常在肾移植后。参见，例如，Wynn等人,2004,Nat Rev Immunol.8月；4(8):583-594。因此，本发明涉及治疗或预防主要器官(包括例如肺、肝、肾、心脏、皮肤、眼、胃肠道、腹膜和骨髓)的纤维化/纤维化障碍和/或与主要器官(包括例如肺、肝、肾、心脏、皮肤、眼、胃肠道、腹膜和骨髓)相关的纤维化/纤维化障碍和本文描述的其它疾病/障碍的方法，以及用于所述方法中的化合物和组合物。
所述化合物可以与用作肾脏疾病治疗的药剂组合，所述药剂包括抗糖尿病剂、心血管疾病药剂以及靶向疾病有关途径诸如氧化性应激(包括但不限于nrf2/keap-1途径)和抗细胞凋亡途径(包括但不限于抗p53药剂)的新的药剂。
间质性肺病(ILD)包括其中肺部炎症和纤维化为最终常见病理学途径的障碍，例如，结节病、硅沉着病、药物反应、感染和胶原血管疾病，诸如类风湿性关节炎和系统性硬化症(硬皮病)。肺的纤维化障碍包括例如肺纤维化、特发性肺纤维化(IPF)、常见间质性肺炎(UIP)、间质性肺病、隐发性纤维化肺泡炎(CFA)、闭塞性细支气管炎和支气管扩张。
特发性肺纤维化(IPF)是最常见的ILD类型并且尚无已知的原因。
所述化合物可以与作为IPF治疗和潜在ILD治疗的药剂(包括尼达尼布和吡非尼酮)组合。
肝硬化具有与ILD相似的原因，并且包括，例如，与病毒性肝炎，血吸虫病和慢性酒精中毒相关的肝硬化。
肾脏疾病可能与糖尿病相关，糖尿病可以损伤肾脏并使肾脏形成瘢痕，从而导致进行性功能丧失，以及高血压疾病。肾纤维化可能发生在肾脏疾病的任何阶段，从损伤后急性肾脏疾病(AKD)和慢性肾脏疾病(CKD)诸如偶然性CKD和进行性CKD到终末期肾脏疾病(ESRD)。肾纤维化可以作为心血管疾病诸如高血压或糖尿病的结果而发生，高血压和糖尿病都对肾功能造成巨大压力，其促进纤维化应答。但是，肾纤维化也可以是特发性的(没有已知原因)，并且某些遗传性线粒体疾病也出现肾纤维化临床表现和相关症状。
心脏病可以产生瘢痕组织，所述瘢痕组织可以损害心脏的泵送能力。
眼部疾病包括，例如，黄斑变性以及视网膜和玻璃体视网膜病变，它们可以损害视力。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及特发性肺纤维化(IPF)的治疗或预防。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及肾纤维化的治疗或预防。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及急性肾损伤(AKI)的治疗或预防，尤其在高风险患者中。例子包括手术后AKI，例如器官移植，诸如由于缺血再灌注损伤、移植物功能延迟引起；肿瘤学，诸如化学疗法引起的AKI；造影剂诱导的肾病，诸如直接肾小管细胞毒性、血液动力学缺血和渗透效应；急性间质性肾炎，诸如由于药物或感染引起的；由阻塞诸如肾结石引起的AKI；和COVID-19诱导的AKI。特定的高风险患者亚组是正在接受心脏外科手术(例如，冠状动脉旁路移植术和/或瓣膜外科手术)的患者。对于AKI存在已确定的静态风险因素，诸如年龄65岁或更大、胰岛素依赖型糖尿病、CKD(具有小于60ml/min/1.73m2的估计肾小球滤过率[eGFR]的成年人是特别有风险的)、心力衰竭、肝疾病、AKI病史。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及由这样的AKI引起的急性肾脏疾病(AKD)或慢性肾脏疾病(CKD)的治疗或预防，包括例如，小管间质性纤维化和糖尿病性肾病。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及肝疾病的治疗或预防，包括例如NAFLD、NASH、肝硬化、门静脉高血压、急性肝衰竭和肝细胞癌。肝疾病诸如NAFLD和NASH可能与各种代谢病症诸如代谢综合征和II型糖尿病相关，其也会增加各种糖尿病相关病状的风险，包括糖尿病性视网膜病变和周围神经病变。
当用于治疗或预防涉及肝病和代谢功能障碍的病症时，如本文所述的本发明的化合物或其药物组合物可以与一种或多种另外的药剂组合，所述另外的药剂包括二甲双胍、磺酰脲类、DPP-4抑制剂、GLP-1激动剂、PPAR激动剂、SGLT2抑制剂、血管紧张素-转换酶(ACE)抑制剂和血管紧张素II受体阻滞剂(ARB)。
对“治疗”的提及包括在暂时或永久基础上改善症状、缓解症状、消除症状的原因的手段。本发明的化合物可用于治疗人类和其它哺乳动物中的本文中公开的疾病。
在另一个实施方案中，本发明包括本文中公开的疾病的预防性治疗并且包括预防或减慢所述障碍或病症的症状的出现的手段。本发明的化合物可用于预防人类和其它哺乳动物中的本文中公开的疾病。
需要治疗或预防的患者可以例如是患有所述病症或处于患所述病症的风险中的人或其它哺乳动物。
根据另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含如本文中定义的式(I)的化合物或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐、以及药学上可接受的稀释剂或载体。
本发明的药物组合物包含与任何药学上可接受的载体、辅助剂或媒介物组合的本发明的任何化合物。药学上可接受的载体的例子是本领域技术人员已知的，并且包括但不限于防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂，取决于施用方式和剂型的性质。所述组合物可以是例如片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒、酏剂、锭剂、栓剂、糖浆剂和液体制剂(包括混悬液和溶液)的形式。在本发明的上下文中的术语“药物组合物”是指包含活性剂且另外包含一种或多种药学上可接受的载体的组合物。所述组合物可以进一步含有选自例如稀释剂、辅助剂、赋形剂、媒介物、防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂的成分，取决于施用模式和剂型的性质。
如本文中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以单独使用或与一种或多种另外的药剂组合。所述化合物可以与另外的抗肿瘤治疗剂(例如，化疗药物或其它调节蛋白的抑制剂)组合。在一个实施方案中，另外的抗肿瘤治疗剂是BH-3模拟物。在另一个实施方案中，BH-3模拟物可以选自但不限于ABT-737、ABT-199、ABT-263和奥巴克拉(Obatoclax)中的一种或多种。在另一个实施方案中，另外的抗肿瘤剂是化学治疗剂。化学治疗剂可以选自但不限于奥拉帕尼、丝裂霉素C、顺铂、卡铂、奥沙利铂、电离辐射(IR)、喜树碱、伊立替康、托泊替康、替莫唑胺、紫杉烷、5-氟嘧啶、吉西他滨和多柔比星。
对于纤维化障碍的治疗或预防，例如，如本文中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以单独使用或与一种或多种另外的药剂组合，所述另外的药剂选自抗胆碱能药剂、β-2模拟物、类固醇、PDE-IV抑制剂、p38 MAP激酶抑制剂、NK1拮抗剂、LTD4拮抗剂、EGFR抑制剂和内皮缩血管肽拮抗剂。
具体地，如本文中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以单独使用或与一种或多种另外的药剂组合，所述另外的药剂选自：一般免疫抑制药物，诸如皮质类固醇，免疫抑制剂或细胞毒剂，或抗纤维化剂，诸如吡非尼酮或非特异性的激酶抑制剂(例如尼达尼布)。
本发明的药物组合物可以以任何适当有效的方式施用，诸如口服、胃肠外、局部、吸入、鼻内、直肠、阴道内、经眼和经耳。适合用于递送本发明的化合物的药物组合物和它们的制备方法将是对本领域技术人员显而易见的。用于它们的制备的这类组合物和方法可以参见，例如，“Remington's Pharmaceutical Sciences”，第19版(Mack PublishingCompany,1995)。
口服施用
可以口服施用本发明的化合物。口服施用可以包括吞咽，从而使化合物进入胃肠道；或可以采用含服或舌下施用，由此使化合物自嘴直接进入血流。
适用于口服施用的制剂包括固体制剂诸如片剂，含有微粒、液体或粉末的胶囊剂，锭剂(包括液体填充的)，咀嚼物，多微粒和纳米微粒，凝胶，薄膜(包括粘膜粘着剂)，卵状剂(ovule)，喷雾剂和液体制剂。
液体制剂包括混悬液、溶液、糖浆剂和酏剂。这样的制剂可以用作软胶囊或硬胶囊中的填充剂并且通常包含载体，例如水、乙醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油，以及一种或多种乳化剂和/或助悬剂。液体制剂还可以通过将固体(例如得自药囊)重构来制备。
本发明的化合物也可以以快速溶解、快速崩解剂型使用，诸如Liang和Chen(2001)在Expert Opinion in Therapeutic Patents,11(6),981-986中描述的那些。
使用制剂化学家已知的标准方法，例如，通过直接压制、制粒(干法、湿法或熔融)、熔融凝结或挤出，可以制备典型的片剂。片剂制剂可以包含一个或多个层并且可以是包衣的或未包衣的。
适用于口服施用的赋形剂的例子包括：载体，例如纤维素、碳酸钙、磷酸氢钙、甘露醇和柠檬酸钠，制粒粘合剂，例如聚乙烯基吡咯烷、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和明胶，崩解剂，例如淀粉羟乙酸钠和硅酸盐，润滑剂，例如硬脂酸镁和硬脂酸，润湿剂，例如月桂基硫酸钠，防腐剂，抗氧化剂，香料和着色剂。
用于口服施用的固体制剂可以配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控双重释放、靶向释放和程序化释放。合适的调释技术诸如高能分散体、渗透和包衣颗粒的细节可以参见Verma等人,Pharmaceutical TechnologyOn-line,25(2),1-14(2001)。其它调释制剂描述于美国专利第6,106,864号。
胃肠外施用
本发明的化合物还可以直接施用到血流、肌肉或内脏器官中。胃肠外施用的适宜手段包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内和皮下。用于胃肠外施用的合适装置包括针(包括微针)注射器、无针注射器和输注技术。
胃肠外制剂通常是可能含有赋形剂诸如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选调至3-9的pH)的水溶液，但是，对于一些应用，它们可以更适当地配制为无菌的非水性溶液或配制为要与合适的媒介物(诸如无菌的、无热原的水)结合使用的干燥形式。
使用本领域技术人员众所周知的标准制药技术，可以容易地完成在无菌条件下胃肠外制剂的制备，例如，通过冷冻干燥。
通过合适的加工，例如，使用高能喷雾干燥的分散体和/或使用适当的制剂技术，诸如使用增溶剂，可以增加用于制备胃肠外溶液的式(I)的化合物的溶解度。
可以将用于胃肠外施用的制剂配制成立即和/或调节释放。调释制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控双重释放、靶向释放和程序化释放。
本发明的药物组合物还包括本领域已知的用于绕过血脑屏障的组合物和方法，或可以直接注射到脑中。合适的注射区域包括大脑皮质、小脑、中脑、脑干、下丘脑、脊髓和心室组织，以及包括颈动脉体和肾上腺髓质在内的周围神经系统区域。
剂量
化合物的有效剂量的大小当然会随着要治疗的病症的严重程度和施用途径的性质而变化。适当剂量的选择是在医师的能力范围内。每日剂量范围是约10μg至约100mg/千克人和非人动物体重，并且通常可以是每剂约10μg至30mg/千克体重。可以每天施用上述剂量1-3次。
例如，口服施用可能需要5mg至1000mg、诸如5至500mg的总每日剂量，而静脉内剂量可能仅需要0.01-30mg/kg体重，诸如0.1-10mg/kg，更优选地0.1-1mg/kg体重。可以以单剂量或分剂量施用总每日剂量。技术人员还会理解，在某些病症的治疗或预防中，本发明的化合物可以在“根据需要”基础上(即根据需要或期望)作为单剂量施用。
合成方法
使用以下一般反应方案和代表性实施例中所述的方法，可以制备式(I)的化合物。在适当的情况下，在方案中的单独转化可以以不同的顺序完成。通过以下非限制性实施例说明本发明，其中使用了以下缩写和定义。通过液相色谱法-质谱法(LCMS)或1H NMR或两者表征化合物。
根据另一个方面，本发明提供了一种用于制备式(I)的化合物的方法，其包括使式(IV)的化合物(其中Y是OH)与式(V)的胺(其中PG是保护基，诸如BOC或Cbz)反应，以产生式(III)的酰胺(方案1)。所述酰胺-偶联反应可以使用标准方法进行，例如通过使用偶联剂诸如DCC、HATU、HBTU、EDC或通过混合酸酐进行反应。可替换地，使用SOCl2、POCl3、PCl3或PCl5，可以将酸(IV)(其中Y是OH)或其羧酸盐(诸如锂盐)转化成酰氯(IV)(其中Y是Cl)，然后可以使其与胺(V)反应，优选地在合适的溶剂中在合适的碱存在下。可替换地，可以使化合物(IV)(其中Y形成酯)直接与胺(V)反应，优选地在合适的溶剂中。
根据在WO 2016/156816、WO 2017/103614、WO 2018/234775、WO 2020/212350、WO2020/212351、WO 2021/043870、WO 2021/204856、WO 2021/239863、WO 2021/245186、WO2021/249909和WO 2022/084479中公开的方法，可以制备式(IV)的化合物。
可以使用标准方法将式(III)的化合物去保护以产生胺(II)，然后可以使其与溴化氰反应以产生对应的式(I)的化合物。
在另一个方面，本发明提供了选自式(II)和(III)的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的盐：
其中PG是保护基且环A、环B、X1、X2、X3、X4、R1、R2、R3、R4和R5如本文中关于式(I)的化合物及其所有优选方面和实施方案所定义。
关于本发明的式(I)、(I)(A)、(I)(B)、(I)(C)、(I)(D)、(I)(E)、(I)(F)和(I)(G)的每种化合物的合成中间体，式(II)和(III)[(II)(i)至(II)(G)(i)和(III)(i)至(III)(G)(i)]的对应化合物优选地作为具有式(II)(i)和(III)(i)的绝对构型的单一立体异构体存在：
在式(II)和(III)的化合物作为单一立体异构体存在的情况下，它们优选地以至少60％、更优选地至少80％、更优选地至少90％、且最优选地至少95％、例如96％、97％、98％、99％或100％的立体异构体过量存在。
保护基优选地选自叔丁基氧基羰基(BOC)、苄氧基羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(MeOZ)、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)、乙酰基(Ac)、苯甲酰基(Bz)、苄基(Bn)、氨基甲酸酯、对甲氧基苄基(PMB)、3,4-二甲氧基苄基(DMPM)、对甲氧基苯基(PMP)、甲苯磺酰基(Ts)、三氯乙氧基羰基(Troc)、4-硝基苯磺酰基(对硝基苯磺酰基)和2-硝基苯基次磺酰基(Nps)。最优选的是BOC和Cbz。
缩写
br s 宽单峰(NMR信号) MeOH 甲醇
d 双峰(NMR信号) min 分钟
DCM 二氯甲烷 NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
DEA 二乙胺 NMR 核磁共振
DMF N,N-二甲基甲酰胺 nOe 核欧沃豪斯效应
DMSO 二甲基亚砜 PDA 光电二极管阵列
ES 电喷射 rac 外消旋的
EtOAc 乙酸乙酯 rt 室温
h 小时 s 单峰(NMR信号)
HPLC 高效液相色谱法 SFC 超临界流体色谱法
IPA 异丙醇 TBD 1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯
LCMS 液相色谱法-质谱法 TEA 三乙胺
m 多重峰(NMR信号) TFA 三氟乙酸
Ms 甲磺酰基/甲烷磺酰基 THF 四氢呋喃
MeCN 乙腈 vol 体积
LCMS方法
方法C
方法C1
方法F
方法H
方法H1
方法J
方法J1
方法N
方法X1用于反相制备型HPLC的方法
方法X3用于反相制备型HPLC的方法
方法X4用于反相制备型HPLC的方法
方法X8用于反相制备型HPLC的方法
方法X9用于反相制备型HPLC的方法
方法X10用于反相制备型HPLC的方法
方法X11用于反相制备型HPLC的方法
方法X14用于反相制备型HPLC的方法
方法X15用于反相制备型HPLC的方法
方法X16用于反相制备型HPLC的方法
方法X17用于反相制备型HPLC的方法
方法Y4用于分析型手性SFC的方法
方法Y8用于分析型手性SFC的方法
方法Y9用于分析型手性HPLC的方法
方法Y10用于分析型手性HPLC的方法
方法Y12A用于分析型手性SFC的方法
方法Y14用于分析型手性SFC的方法
方法Y20用于分析型手性SFC的方法
方法Y21用于分析型手性HPLC的方法
方法Y28用于分析型手性HPLC的方法
方法Y30用于分析型手性HPLC的方法
方法Y31用于分析型手性HPLC的方法
方法Y32用于分析型手性HPLC的方法
方法Z1用于制备型手性HPLC的方法
方法Z2用于制备型手性HPLC的方法
中间体的合成
中间体A
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向1H-1,2,3-三唑(CAS288-36-8，得自Spectrochem,0.76g,11.24mmol)在DMF(30mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(3.88g,28.11mmol)。在0℃加入(2S,4R)-4-叠氮基-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.0g,9.37mmol)。将混合物温热至室温并搅拌48h，然后倒入冰冷的水(700mL)中，并用EtOAc(5x 100mL)萃取。将合并的有机相用冰冷的水(2x 100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，15-20％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(较上的斑点,1.0g,3.41mmol,36％收率)，并随后通过柱色谱法(40至50％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(较下的斑点,1.0g,3.41mmol,36％收率)。
对于(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(较上的斑点，较低极性的):LCMS:方法C,1.67min,MS:ES+294.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.83(s,2H),4.63-4.65(m,2H),4.02-4.19(m,2H),3.41-3.44(m,1H),3.04-3.14(m,1H),2.00-2.17(m,2H),1.43(s,9H)。
对于(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(较下的斑点，较高极性的):LCMS:方法C,1.52min,MS:ES+294.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.96-8.02(m,1H),7.77(s,1H),4.56-4.63(m,2H),4.01-4.21(m,2H),3.41-3.49(m,1H),3.07-3.15(m,1H),1.95-2.08(m,2H),1.39(s,9H)。
步骤(ii)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(较下的斑点,1.0g,3.41mmol)在MeOH(20mL)中的搅拌溶液中加入10％ Pd/C(50％湿度)(0.50g,0.5w/w)。将混合物用H2气体净化1h，然后通过Celite过滤并将滤液在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.85g,3.18mmol,93％收率)。
LCMS:方法C,1.26min,MS:ES+268.5。
中间体B
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(环丙基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(环丙基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g,3.74mmol)和(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(0.78g,4.49mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入AcOH(0.5mL)。5min以后，在0℃分批加入NaBH3CN(0.47g,7.48mmol)，并将混合物在60℃加热6h。将混合物与另外一个相同批混合，并在减压下浓缩。然后将粗产物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，4-5％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(环丙基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.38g,1.23mmol,16％收率)。LCMS:方法H1,2.34min,MS:ES+308.2。
中间体C
(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步骤(i)
(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(较上的斑点,1.0g,3.41mmol)在MeOH(20mL)中的搅拌溶液中加入10％ Pd/C(50％湿度)(0.50g,0.5w/w)。将混合物用H2气体净化1h，然后通过Celite过滤并将滤液在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.98g,3.67mmol，定量收率)。
LCMS:方法C,1.31min,MS:ES+268.5。
中间体D
(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向4H-1,2,4-三唑(CAS288-88-0，得自Spectrochem,0.17g,2.40mmol)在DMF(14mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.90g,6.56mmol)。在0℃加入(2S,4R)-4-叠氮基-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.70g,2.18mmol)。将混合物温热至室温并搅拌48h，然后倒入冰冷的水(100mL)中，并用EtOAc(4x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，30-35％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g,0.75mmol,34％收率)。
LCMS:方法C,1.53min,MS:ES+294.6；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.43(m,1H),8.01(s,1H),4.34-4.45(m,2H),4.08-4.17(m,2H),3.40-3.49(m,1H),3.15-3.18(m,1H),1.95-2.01(m,2H),1.39(s,9H)。
步骤(ii)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g,0.75mmol)在MeOH(2.2mL)中的搅拌溶液中加入10％Pd/C(50％湿度)(0.11g,0.5w/w)。将混合物用H2气体净化2h，然后通过Celite过滤并将滤液在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.16g,0.59mmol,80％收率)。
LCMS:方法C,1.23min,MS:ES+268.2。
中间体E
(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步骤(i)
N'-甲酰基甲酰肼
在0℃向水合肼(99％)(5.00g,99.88mmol)中逐滴加入甲酸(8.29mL,219.73mmol)并在0℃搅拌15min。将混合物温热至室温并在120℃加热6h。将混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物通过使用乙醚(3x 50mL)研磨进行纯化并在减压下干燥以产生N'-甲酰基甲酰肼(3.0g,34.06mmol,34％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.84(br s,2H),8.01(s,2H)。
步骤(ii)
(E)-N'-((E)-(二甲基氨基)亚甲基)-N,N-二甲基甲腙酰胺
在0℃向N'-甲酰基甲酰肼(3.0g,34.06mmol)在DMF(30mL)中的搅拌溶液中逐滴加入SOCl2(5.46mL,74.93mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌48h。将固体通过布氏漏斗过滤，用乙醚(3x 50mL)洗涤并将滤液在减压下浓缩。将残余物通过使用乙醚(2x 50mL)、正己烷类(2x 50mL)研磨进行纯化并在减压下干燥以产生(E)-N'-((E)-(二甲基氨基)亚甲基)-N,N-二甲基甲腙酰胺(4.0g,28.12mmol,82％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.30(s,2H),2.99(s,12H)。
步骤(iii)
(2S,4R)-2-(氨基甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将装有(2S,4R)-4-叠氮基-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.0g,12.48mmol)在MeOH(40mL)中的溶液的高压釜在-78℃用NH3气体净化，并然后将混合物在70℃加热15h。将得到的混合物在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-(氨基甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.80g,7.45mmol,59％收率)。
LCMS:方法C,1.29min,MS:ES+186.0(M-56)。
步骤(iv)
(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在室温向(2S,4R)-2-(氨基甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g,4.14mmol)和(E)-N'-((E)-(二甲基氨基)亚甲基)-N,N-二甲基甲腙酰胺(1.17g,4.14mmol)在甲苯(10mL)中的搅拌溶液中加入p-TSA(0.08g,0.41mmol)和分子筛(0.5g,0.5w/w)，并将混合物在110℃加热15h。将混合物倒入冰冷的水(200mL)中，并用EtOAc(3x 200mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，5％MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.49g,1.67mmol,40％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.42(s,2H),4.11-4.31(m,4H),3.12-3.18(m,1H),1.85-2.12(m,3H),1.42(s,9H)。
步骤(v)
(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.49g,1.67mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中加入10％Pd/C(50％湿度)(0.24g,0.5w/w)。将混合物用H2气体净化2h，然后通过Celite过滤并将滤液在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.25g,0.93mmol,56％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.39(s,2H),4.06-4.21(m,3H),3.12-3.28(m,2H),2.89-3.02(m,1H),1.61-1.81(m,4H),1.43(s,9H)。
中间体F
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向1H-吡唑(CAS288-13-1，得自Combi-Blocks,1.05g,15.46mmol)在DMF(45mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(5.82g,42.18mmol)。在0℃加入(2S,4R)-4-叠氮基-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.50g,14.06mmol)。将混合物温热至室温并搅拌48h，然后倒入冰冷的水(100mL)中，并用EtOAc(2x 150mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，15％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.42g,8.25mmol,58％收率)。
LCMS:方法J1,3.92min,MS:ES+293.0。
步骤(ii)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.42g,1.43mmol)在MeOH(4.5mL)中的搅拌溶液中加入10％ Pd/C(50％湿度)(0.21g,0.5w/w)。将混合物用H2气体净化2h，然后通过Celite过滤并将滤液在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.35g,1.31mmol,91％收率)。
LCMS:方法J1,2.64min,MS:ES+267.0。
中间体G
(2S,4R)-4-氨基-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和
(2S,4R)-4-氨基-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步骤(i)
(2S,4R)-4-叠氮基-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和
(2S,4R)-4-叠氮基-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向3-甲基-1H-吡唑(CAS1453-58-3，得自Combi-Blocks,0.77g,9.4mmol)在DMF(30mL)中的搅拌溶液中分批加入NaH(60％在油中)(0.47g,9.8mmol)。在0℃加入(2S,4R)-4-叠氮基-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.37g,4.27mmol)。将混合物温热至室温并搅拌18h，然后倒入冰冷的水(200mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相用冰冷的水(2x 100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，15-20％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生作为混合物的(2S,4R)-4-叠氮基-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(2S,4R)-4-叠氮基-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.97g,3.18mmol,74％收率)。
LCMS:方法H1,3.17min,MS:ES+307.0。
步骤(ii)
(2S,4R)-4-氨基-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和
(2S,4R)-4-氨基-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向作为混合物的(2S,4R)-4-叠氮基-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(2S,4R)-4-叠氮基-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.97g,3.18mmol)在MeOH(20mL)中的搅拌溶液中加入10％ Pd/C(50％湿度)(0.47g,0.5w/w)。将混合物用H2气体净化2h，然后通过Celite过滤并将滤液在减压下浓缩以产生作为混合物的(2S,4R)-4-氨基-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(2S,4R)-4-氨基-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.73g，定量收率)。
LCMS:方法H,2.21min,MS:ES+281.0。
中间体H
5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸锂
步骤(i)
3-乙酰基-4-氨基苄腈
将1-(2-氨基-5-溴苯基)乙烷-1-酮(CAS29124-56-9，得自Combi-Blocks,24.0g,112.68mmol)在DMF(250ml)中的搅拌溶液用N2气体净化15min，随后加入CuCN(11.09g,123.94mmol)并在170℃加热16h。将混合物倒入水(500mL)中，并用EtOAc(2x 500mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，12％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生3-乙酰基-4-氨基苄腈(10.5g,65.62mmol,58％收率)。LCMS:方法H1,2.39min,MS:ES+161.0。
步骤(ii)
3-乙酰基-4-碘苄腈
在0℃向3-乙酰基-4-氨基苄腈(9.5g,59.37mmol)在浓HCl(100mL)中的搅拌溶液中分批加入NaNO2(8.19g,118.75mmol)并搅拌10min。在0℃逐滴加入KI(24.63g,148.42mmol)在水(100mL)中的溶液并搅拌0.5h。将混合物倒入水(200mL)中，并用EtOAc(2x100mL)萃取。将合并的有机相用10％硫代硫酸钠溶液(2x 100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，10％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生3-乙酰基-4-碘苄腈(12.5g,46.13mmol,77％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.18-8.21(m,2H),7.67(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),2.61(s,3H)。
步骤(iii)
3-乙酰基-4-环丙基苄腈
向3-乙酰基-4-碘苄腈(12.5g,46.13mmol)和环丙基硼酸(CAS 411235-57-9，得自Combi-Blocks,7.92g,92.26mmol)在甲苯:水(130mL,8:2)中的搅拌溶液中加入K3PO4(19.55g,92.26mmol)。将混合物用N2气体净化10min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(3.37g,4.61mmol)并在100℃加热5h。将混合物倒入水(400mL)中，并用EtOAc(2x 400mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，10％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生3-乙酰基-4-环丙基苄腈(4.8g,25.94mmol,56％收率)。
LCMS:方法H1,3.01min,MS:ES+186.0。
步骤(iv)
3-(2-溴乙酰基)-4-环丙基苄腈
在室温向3-乙酰基-4-环丙基苄腈(4.8g,25.94mmol)在THF(50mL)中的搅拌溶液中分批加入苯基三甲基三溴化铵(10.72g,28.53mmol)并搅拌16h。将混合物倒入水(200mL)中，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，5％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生3-(2-溴乙酰基)-4-环丙基苄腈(4.5g,17.11mmol,65％收率)。
LCMS:方法H1,3.25min,MS:ES-262.0,264.0。
步骤(v)
4-环丙基-3-甘氨酰苄腈HCl盐
向3-(2-溴乙酰基)-4-环丙基苄腈(4.5g,17.11mmol)在MeCN(50mL)中的搅拌溶液中加入二甲酰氨基钠(1.97g,20.53mmol)并在80℃加热1h。将混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物用MeOH(50mL)和浓HCl(4.5mL)稀释。将混合物在80℃进一步加热3h，然后将其冷却至室温。将混合物在减压下浓缩，并将残余物与乙醚(40mL)一起搅拌以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生4-环丙基-3-甘氨酰苄腈HCl盐(5.5g，定量收率)。
LCMS:方法H1,2.31min,MS:ES+201.0。
步骤(vi)
2-((2-(5-氰基-2-环丙基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向4-环丙基-3-甘氨酰苄腈HCl盐(5.5g,23.25mmol)在DCM(60mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(12.83g,93.0mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(6.32g,5.17mL,46.5mmol)。将混合物温热至室温，搅拌1h，然后倒入水(200mL)中，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生2-((2-(5-氰基-2-环丙基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(3.3g,11.0mmol，经两步64％收率)。
LCMS:方法H1,2.84min,MS:ES+301.0。
步骤(vii)
5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
将2-((2-(5-氰基-2-环丙基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(3.3g,11.0mmol)在POCl3(33mL,10体积)中的搅拌溶液在100℃加热5h。将混合物冷却至室温，缓慢地倒入碎冰中，并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，15％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(1.2g,4.25mmol,39％收率)。
LCMS:方法H1,3.38min,MS:ES+283.0。
步骤(viii)
5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸锂
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.5g,1.77mmol)在THF(6mL)中的搅拌溶液中逐滴加入LiOH.H2O(0.15g,3.54mmol)在水(1mL)中的溶液并在室温搅拌3h。将反应混合物在减压下浓缩以产生5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.50g，定量收率)。
LCMS:方法H1,2.14min,MS:ES+255.0。
中间体I
5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸锂
步骤(i)
5-氰基-2-环丙基苯甲酸甲酯
向2-溴-5-氰基苯甲酸甲酯(CAS1031927-03-3，得自Reddy NReddy,1.5g,6.27mmol)和环丙基硼酸(CAS 411235-57-9，得自Combi-Blocks,0.59g,6.90mmol)在甲苯:水(15mL,9:1)中的搅拌溶液中加入K3PO4(2.65g,12.54mmol)。将混合物用N2气体净化15min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.45g,0.627mmol)并在100℃加热3h。将混合物倒入水(30mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，5％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-氰基-2-环丙基苯甲酸甲酯(1.0g,4.97mmol,79％收率)。
LCMS:方法H1,3.19min,MS:ES+219.0(M+18)。
步骤(ii)
5-氰基-2-环丙基苯甲酰肼
在0℃向5-氰基-2-环丙基苯甲酸甲酯(1.0g,4.97mmol)在EtOH(10mL)中的搅拌溶液中加入水合肼(99％)(5mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌3h。将混合物在减压下浓缩以产生5-氰基-2-环丙基苯甲酰肼(0.7g,3.48mmol,70％收率)。
LCMS:方法H1,1.96min,MS:ES+202.0。
步骤(iii)
5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
在0℃向5-氰基-2-环丙基苯甲酰肼(0.7g,3.48mmol)在DCM(7mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TEA(2.11g,2.90mL,20.89mmol)和乙基草酰氯(0.1g,0.85mL,7.66mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h。在0℃分批加入TsCl(0.79g,4.17mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌2h，然后倒入水(30mL)中，并用DCM(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，40％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.3g,1.05mmol,30％收率)。
LCMS:方法H1,3.20min,MS:ES+284.0。
步骤(vi)
5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸锂
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.24g,0.85mmol)在THF(4mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氢氧化锂一水合物(0.03g,0.85mmol)在水(1mL)中的溶液并在室温搅拌2h。将混合物在减压下浓缩以产生5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸锂(0.25g，定量收率)。
LCMS:方法H1,1.94min,MS:ES+256.0。
中间体J
5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酸
步骤(i)
2-溴-1-(3-氯苯基)乙烷-1-酮
在0℃向1-(3-氯苯基)乙烷-1-酮(CAS 99-02-5，得自Sigma-Aldrich,2.0g,12.98mmol)在DCM(40mL)中的搅拌溶液中加入苯基三甲基三溴化铵(4.88g,12.98mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后倒入水(50mL)中，并用DCM(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生2-溴-1-(3-氯苯基)乙烷-1-酮(1.1g,4.74mmol,36％收率)。将该粗制物质直接用在下一步中。
步骤(ii)
2-氨基-1-(3-氯苯基)乙烷-1-酮HCl盐
向2-溴-1-(3-氯苯基)乙烷-1-酮(1.0g,4.31mmol)在MeCN(25mL)中的搅拌溶液中加入二甲酰氨基钠(0.62g,6.46mmol)并在80℃加热12h。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物用MeOH(5mL)和浓HCl(2mL)稀释。将混合物在60℃进一步加热2h，然后将其冷却至室温。将混合物在减压下浓缩，并将残余物与正己烷类(25mL)一起搅拌以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生2-氨基-1-(3-氯苯基)乙烷-1-酮HCl盐(0.8g,3.89mmol,90％收率)。
LCMS:方法C1,0.89min,MS:ES+:170.2。
步骤(iii)
2-((2-(3-氯苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向2-氨基-1-(3-氯苯基)乙烷-1-酮HCl盐(0.8g,3.89mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(1.61g,11.67mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(0.79g,0.65mL,5.83mmol)。将混合物温热至室温，搅拌2h，然后倒入冰冷的水(50mL)中，并用EtOAc(2x50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，20％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-((2-(3-氯苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(0.7g,2.60mmol,66％收率)。
LCMS:方法C1,1.22min,MS:ES+270.3。
步骤(iv)
5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
将2-((2-(3-氯苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(0.7g,2.60mmol)在POCl3(15mL,20体积)中的搅拌溶液在100℃加热16h。将混合物冷却至室温，倒入冰冷的水(100mL)中，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物悬浮于MeOH(10mL)中并在-78℃搅拌15min。将固体通过在减压下过滤进行收集以提供5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.4g,1.59mmol,61％收率)。
LCMS:方法C1,1.35min,MS:ES+:252.2。
步骤(v)
5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酸
在0℃向5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.2g,0.79mmol)在THF:水(3:1,4mL)中的搅拌溶液中分批加入氢氧化锂一水合物(0.17g,3.98mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后倒入水(20mL)中，用1N HCl酸化至pH～2以形成沉淀。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酸(0.15g,0.67mmol,84％收率)。
LCMS:方法H1,1.93min,MS:ES+224.0。
中间体K
5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸
步骤(i)
2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙烷-1-酮
在0℃向1-(2-甲氧基苯基)乙烷-1-酮(CAS 579-74-8，得自Spectrochem,2.0g,13.31mmol)在THF(40mL)中的搅拌溶液中分批加入苯基三甲基三溴化铵(5.0g,13.31mmol)。将混合物温热至室温并搅拌16h，然后倒入水(50mL)中，并用DCM(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙烷-1-酮(2g,8.73mmol,65％收率)。
LCMS:方法F,6.41min,MS:ES+:229.0,231.0。
步骤(ii)
2-氨基-1-(2-甲氧基苯基)乙烷-1-酮HCl盐
向2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙烷-1-酮(2.0g,8.73mmol)在MeCN(50mL)中的搅拌溶液中加入二甲酰氨基钠(1.25g,13.09mmol)并在80℃加热12h。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物用MeOH(20mL)和浓HCl(10mL)稀释。将混合物在80℃进一步加热3h，然后将其冷却至室温。将混合物在减压下浓缩，并将残余物与正己烷类(50mL)一起搅拌以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生2-氨基-1-(2-甲氧基苯基)乙烷-1-酮HCl盐(1.2g,7.26mmol,83％收率)。
LCMS:方法H1,1.80min,MS:ES+:166.0。
步骤(iii)
2-((2-(2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向2-氨基-1-(2-甲氧基苯基)乙烷-1-酮HCl盐(1.2g,7.26mmol)在DCM(30mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(3.0g,21.78mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(1.48g,1.20mL,10.89mmol)。将混合物温热至室温，搅拌3h，然后倒入冰冷的水(50mL)中，并用EtOAc(2x50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生2-((2-(2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(1.0g,3.76mmol,51％收率)。
LCMS:方法H1,2.64min,MS:ES+266.0。
步骤(iv)
5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
向2-((2-(2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(1.0g,3.76mmol)在POCl3(20mL,20体积)中的搅拌溶液中在100℃加热3h。将混合物冷却至室温，倒入冰冷的水(100mL)中，并用EtOAc(2x200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.8g,3.23mmol,85％收率)。
LCMS:方法H1,3.19min,MS:ES+:248.0。
步骤(v)
5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸
在0℃向5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.8g,3.23mmol)在THF:水(6mL,2:1)中的搅拌溶液中分批加入LiOH.H2O(0.81g,19.42mmol)。将混合物在室温搅拌12h，然后倒入水(20mL)中，用1N HCl酸化至pH～2以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸(0.6g,2.73mmol,84％收率)。
LCMS:方法C1,1.00min,MS:ES+220.1。
中间体L
5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
步骤(i)
2-环丙基苯甲酸乙酯
向2-溴苯甲酸乙酯(CAS 6091-64-1，得自Combi-Blocks,8.0g,35.09mmol)和环丙基硼酸(CAS 411235-57-9，得自Combi-Blocks,3.01g,35.09mmol)在甲苯:水(80mL,9:1)中的搅拌溶液中加入K3PO4(14.89g,70.18mmol)。将混合物用N2气体净化20min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)(2.56g,3.50mmol)并在120℃加热3h。将混合物倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 40mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，6％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-环丙基苯甲酸乙酯(5.7g,29.98mmol,85％收率)。
LCMS:方法C1,1.14min,MS:ES+191.0。
步骤(ii)
2-环丙基苯甲酰肼
在0℃向2-环丙基苯甲酸乙酯(5.56g,29.24mmol)在EtOH(28mL)中的搅拌溶液中加入水合肼(99％)(16.68mL,3体积)并将混合物在80℃加热48h。将混合物在减压下浓缩以产生2-环丙基苯甲酰肼(4.5g,25.55mmol,87％收率)。
LCMS:方法C1,0.97min,MS:ES+177.2。
步骤(iii)
2-(2-(2-环丙基苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向2-环丙基苯甲酰肼(4.4g,24.98mmol)在DCM(44mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TEA(7.57g,10.42mL,74.94mmol)和乙基草酰氯(6.82g,5.59mL,49.96mmol)。将混合物温热至室温并搅拌3h，然后倒入水(120mL)，并用DCM(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生2-(2-(2-环丙基苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(13.0g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.09min,MS:ES+277.2。
步骤(iv)
5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
在0℃向2-(2-(2-环丙基苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(13g,47.08mmol)在DCM(130mL)中的搅拌溶液中分批加入TEA(14.26g,19.64mL,141.24mmol)和TsCl(10.72g,56.49mmol)。允许混合物在室温温热并搅拌3h，然后倒入水(100mL)中，并用DCM(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，20％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(2.97g,11.49mmol，经两步46％收率)。
LCMS:方法C1,1.36min,MS:ES+259.16。
中间体M
5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸锂
步骤(i)
1-(2-环丙基苯基)乙烷-1-酮
向1-(2-溴苯基)乙烷-1-酮(CAS2142-69-0，得自Combi-Blocks,10.0g,50.51mmol)和环丙基硼酸(CAS 411235-57-9，得自Combi-Blocks,8.67g,101.02mmol)在甲苯:水(100mL,8:2)中的搅拌溶液中加入K3PO4(21.41g,101.02mmol)。将混合物用N2气体净化10min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)(3.69g,5.05mmol)并在100℃加热5h。将混合物倒入水(300mL)中，并用EtOAc(2x 300mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，1至2％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生1-(2-环丙基苯基)乙烷-1-酮(6.0g,37.5mmol,74％收率)。
LCMS:方法H1,3.15min,MS:ES+161.0。
步骤(ii)
2-溴-1-(2-环丙基苯基)乙烷-1-酮
在0℃向1-(2-环丙基苯基)乙烷-1-酮(6.0g,37.5mmol)在THF(70mL)中的搅拌溶液中分批加入苯基三甲基三溴化铵(15.50g,41.25mmol)。将混合物温热至室温并搅拌16h，然后倒入水(200mL)中，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，1％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-溴-1-(2-环丙基苯基)乙烷-1-酮(6.2g,26.05mmol,69％收率)。
LCMS:方法H1,3.38min,MS:ES+239.0,240.9。
步骤(iii)
2-氨基-1-(2-环丙基苯基)乙烷-1-酮HCl盐
向2-溴-1-(2-环丙基苯基)乙烷-1-酮(6.2g,26.05mmol)在MeCN(60mL)中的搅拌溶液中加入二甲酰氨基钠(3.0g,31.26mmol)并在80℃加热3h。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物用MeOH(60mL)和浓HCl(6.5mL)稀释。将混合物在80℃进一步加热16h，然后将其冷却至室温。将混合物在减压下浓缩，并将残余物与乙醚(50mL)一起搅拌以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生2-氨基-1-(2-环丙基苯基)乙烷-1-酮HCl盐(8.2g，定量收率)。
LCMS:方法H1,2.36min,MS:ES+176.0。
步骤(iv)
2-((2-(2-环丙基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向2-氨基-1-(2-环丙基苯基)乙烷-1-酮HCl盐(8.2g,38.77mmol)在DCM(85mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(21.40g,155.08mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(10.54g,8.63mL,77.54mmol)。将混合物温热至室温，搅拌1h，然后倒入水(200mL)中，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生2-((2-(2-环丙基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(4.1g,14.90mmol，经两步57％收率)。
LCMS:方法H1,3.09min,MS:ES+276.0。
步骤(v)
5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
将2-((2-(2-环丙基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(4.1g,14.90mmol)在POCl3(41mL,10体积)中的搅拌溶液在100℃加热5h。将混合物冷却至室温，缓慢地倒入碎冰中，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，20％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(1.5g,5.83mmol,39％收率)。
LCMS:方法H1,3.58min,MS:ES+:258.0。
步骤(vi)
5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸锂
在0℃向5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.5g,1.94mmol)在THF(4mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氢氧化锂一水合物(0.16g,3.88mmol)在水(1mL)中的溶液并在室温搅拌2h。将反应混合物在减压下浓缩以产生5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.51g，定量收率)。
LCMS:方法H1,2.07min,MS:ES+230.0。
中间体O
5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸锂
步骤(i)
2-溴-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮
在0℃向1-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(CAS220227-93-0，得自Sigma-Aldrich,1.0g,4.89mmol)在THF(40mL)中的搅拌溶液中加入苯基三甲基三溴化铵(1.84g,4.89mmol)。将混合物温热至室温并搅拌16h，然后倒入水(50mL)中，并用DCM(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生2-溴-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(1.2g,4.25mmol,86％收率)。将该粗制物质直接用在下一步中。
步骤(ii)
2-氨基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮HCl盐
向2-溴-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(1.2g,4.23mmol)在MeCN(30mL)中的搅拌溶液中加入二甲酰氨基钠(0.61g,6.35mmol)并在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物用MeOH(5mL)和浓HCl(6mL)稀释。将混合物在80℃进一步加热3h，然后将其冷却至室温。将混合物在减压下浓缩，并将残余物与正己烷类(25mL)一起搅拌以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生2-氨基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮HCl盐(1.2g，定量收率)。
LCMS:方法C1,0.92min,MS:ES+:220.1。
步骤(iii)
2-氧代-2-((2-氧代-2-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)乙酸乙酯
在0℃向2-氨基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮HCl盐(1.2g,5.47mmol)在DCM(30mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(2.26g,16.37mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(1.11g,0.90mL,8.21mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌3h，然后倒入冰冷的水(50mL)中，并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，30％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-氧代-2-((2-氧代-2-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)乙酸乙酯(0.65g,2.30mmol，经两步48％收率)。
LCMS:方法C1,1.30min,MS:ES+320.2。
步骤(iv)
5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
将2-氧代-2-((2-氧代-2-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)乙酸乙酯(0.6g,2.03mmol)在POCl3(10mL,15体积)中的搅拌溶液在110℃加热3h。将混合物冷却至室温，倒入冰冷的水(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，30％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.32g,1.06mmol,52％收率)。
LCMS:方法C1,1.47min,MS:ES+:302.2。
步骤(v)
5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸锂
在0℃向5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.3g,0.99mmol)在THF:MeOH:水(1:1:1,9mL)中的搅拌溶液中分批加入LiOH.H2O(0.12g,2.98mmol)。将混合物在室温搅拌3h，并将混合物在减压下浓缩。将残余物与戊烷(10mL)一起搅拌以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.3g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.13min,MS:ES+274.0。
中间体P
5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酸锂
步骤(i)
2-氨基-1-(3-溴苯基)乙烷-1-酮HCl盐
向2-溴-1-(3-溴苯基)乙烷-1-酮(CAS18523-22-3，得自Combi-Blocks,6.0g,21.74mmol)在MeCN(150mL)中的搅拌溶液中加入二甲酰氨基钠(3.1g,32.62mmol)并在70℃加热24h。将混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物用MeOH(60mL)和浓HCl(30mL)稀释。将混合物在70℃进一步加热4h，然后将其冷却至室温。将混合物在减压下浓缩，并将残余物与IPA(25mL)一起搅拌以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以提供2-氨基-1-(3-溴苯基)乙烷-1-酮HCl盐(7.2g，定量收率)。
LCMS:方法C1,0.99min,MS:ES+:214.1,216.1。
步骤(ii)
2-((2-(3-溴苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向2-氨基-1-(3-溴苯基)乙烷-1-酮HCl盐(7.0g,28.11mmol)在DCM(100mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(11.65g,84.34mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(5.75g,4.71mL,42.17mmol)。将混合物温热至室温，搅拌3h，然后倒入水(100mL)中，并用DCM(2x100mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以提供2-((2-(3-溴苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(3.0g,9.58mmol，经两步44％收率)。
LCMS:方法C1,1.19min,MS:ES+314.0,316.1。
步骤(iii)
5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
将2-((2-(3-溴苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(3.0g,9.58mmol)在POCl3(9.0mL,3体积)中的搅拌溶液在100℃加热3h。将混合物冷却至室温，倒入冰冷的水(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，30％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(1.2g,4.06mmol,42％收率)。
LCMS:方法C1,1.36min,MS:ES+:295.9,297.9。
步骤(iv)
5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酸锂
在0℃向5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(1.1g,3.72mmol)在THF:MeOH:水(10mL,1:1:1)中的搅拌溶液中分批加入LiOH.H2O(0.45g,11.18mmol)。将混合物在0℃搅拌3h，然后在减压下浓缩以产生5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酸锂(1.1g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.04min,MS:ES+268.1,269.9。
中间体Q
5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
步骤(i)
2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯
向2-溴-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(CAS1150114-81-0，得自Combi-Blocks,1.30g,4.36mmol)和环丙基硼酸(CAS 411235-57-9，得自Angene,0.37g,4.36mmol)在甲苯:水(13mL,7:3)中的搅拌溶液中加入K3PO4(1.84g,8.69mmol)。将混合物用N2气体净化10min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)(0.31g,0.43mmol)并在100℃加热3h。将混合物倒入水(15mL)中，并用EtOAc(3x 15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，2％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(0.85g,3.26mmol,75％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(s,1H),7.26(d,J＝11.6Hz,1H),7.05(d,J＝8.8Hz,1H),3.95(s,3H),2.65-2.69(m,1H),1.02-1.05(m,2H),0.68-0.70(m,2H)。
步骤(ii)
2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼
在0℃向2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(1.1g,4.22mmol)在MeOH(28mL)中的搅拌溶液中逐滴加入水合肼(99％)(3.3mL,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌2h。将混合物在减压下浓缩以产生2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼(1.07g,4.13mmol,97％收率)。
LCMS:方法C1,1.11min,MS:ES+261.5。
步骤(iii)
2-(2-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼(1.0g,3.84mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TEA(1.16g,1.6mL,11.52mmol)和乙基草酰氯(1.04g,0.85mL,7.68mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后倒入水(15mL)中，并用EtOAc(3x 15mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生2-(2-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(1.64g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.20min,MS:ES+361.1。
步骤(iv)
5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
在0℃向2-(2-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(1.6g,4.44mmol)在DCM(16mL)中的搅拌溶液中分批加入TEA(1.34g,1.85mL,13.32mmol)和TsCl(1.01g,5.32mmol)。允许混合物在室温温热并搅拌2h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 20mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，20％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.6g,1.75mmol，经两步39％收率)。LCMS:方法C1,1.43min,MS:ES+343.1。
中间体R
5-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
步骤(i)
2-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼-1-甲酸叔丁酯
在0℃向2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(CAS 886497-85-4，得自Combi-Blocks,7.0g,31.23mmol)在THF(70mL)中的搅拌溶液中分批加入DIPEA(12.08g,16mL,105.25mmol)和HATU(23.7g,62.46mmol)。30min以后，在0℃加入肼甲酸叔丁酯(4.95g,37.48mmol)。将混合物缓慢地温热至室温并在室温搅拌16h，然后倒入冰冷的水(50mL)中，并用EtOAc(2x200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，25％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼-1-甲酸叔丁酯(9.0g,26.62mmol,85％收率)。
LCMS:方法J1,3.43min,MS:ES+283.1(M-56)。
步骤(ii)
2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼TFA盐
在0℃向2-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼-1-甲酸叔丁酯(5.0g,14.78mmol)在DCM(50mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(25mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼TFA盐(5.0g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.02min,MS:ES+239.2。
步骤(iii)
2-(2-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼TFA盐(10.0g,20.99mmol)在DCM(100mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(17.38g,125.97mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(8.59g,6.97mL,62.98mmol)。将混合物温热至室温并搅拌4h。将混合物倒入水(100mL)中以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以提供2-(2-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)-肼基)-2-氧代乙酸乙酯(10.0g,29.56mmol，经两步88％收率)。
LCMS:方法C1,1.13min,MS:ES+339.2。
步骤(iv)
5-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
在0℃将2-(2-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(10g,29.56mmol)在DCM(100mL)中的搅拌溶液分批加入TEA(12.2mL,8.85g,88.68mmol)和TsCl(6.76g,35.48mmol)中。将混合物温热至室温并搅拌4h。将混合物倒入水(100mL)中，并用DCM(2x 250mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，10％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以提供5-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(2.6g,8.12mmol,27％收率)。
LCMS:方法J1,4.02min,MS:ES+:320.8。
中间体S
5-(5-氰基-2-氟苯基)噁唑-2-甲酸锂
步骤(i)
(2-(5-氰基-2-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯
在N2气氛下在室温向3-溴-4-氟苄腈(CAS 79630-23-2，得自Combi-Blocks)(20.0g,100.53mmol)在干燥的THF(150mL)中的搅拌溶液中逐滴加入异丙基氯化镁(2M在THF中的溶液)(50.26mL,100.53mmol)。将得到的深色溶液在室温搅拌1.5h(在该时间中形成沉淀物)。同时，在0℃向(2-(甲氧基(甲基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(21.92g,100.53mmol)在THF(50mL)中的搅拌悬浮液中逐滴加入异丙基氯化镁(2M在THF中的溶液)(50.26mL,100.53mmol)。将得到的溶液搅拌15分钟，然后在0℃逐滴加入最初产生的芳基格氏试剂(Grignard)中。将混合物在室温搅拌16h。将得到的反应混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。将有机相合并，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将该粗制物质通过柱色谱法(25％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2-(5-氰基-2-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.0g,10.78mmol,10％收率)。
LCMS:方法H1,3.01min,MS:ES+179.0(M-100)。
步骤(ii)
4-氟-3-甘氨酰苄腈TFA盐
在0℃向(2-(5-氰基-2-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.2g,7.9mmol)在DCM(22mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(6.6mL,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌3h，然后在减压下浓缩以产生4-氟-3-甘氨酰苄腈TFA盐(4.0g，定量收率)。
LCMS:方法C1,0.37min,MS:ES+178.9。
步骤(iii)
2-((2-(5-氰基-2-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向4-氟-3-甘氨酰苄腈TFA盐(4.0g,13.6mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中加入TEA(4.1g,5.7mL,41.0mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(3.73g,3.0mL,27.3mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后倒入冰冷的水(150mL)中，并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生2-((2-(5-氰基-2-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(2.8g,10.07mmol，经两步44％收率)。
LCMS:方法C1,1.08min,MS:ES+279.1。
步骤(iv)
5-(5-氰基-2-氟苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
将2-((2-(5-氰基-2-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(2.8g,10.07mmol)在POCl3(14mL,5体积)中的搅拌溶液在100℃加热3h。将混合物冷却至室温，倒入冰冷的水(100mL)中，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，30％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(5-氰基-2-氟苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.8g,3.07mmol，经两步38％收率)。
LCMS:方法C1,1.19min,MS:ES+261.1。
步骤(v)
5-(5-氰基-2-氟苯基)噁唑-2-甲酸锂
在0℃向5-(5-氰基-2-氟苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.8g,3.07mmol)在THF(8mL)中的搅拌溶液中逐滴加入LiOH.H2O(0.15g,3.69mmol)在水(2mL)中的溶液并在室温搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩以产生5-(5-氰基-2-氟苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.9g，定量收率)。
LCMS:方法C1,0.92min,MS:ES+232.9。
中间体Y
2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酸
向4-溴-2-氟苯甲酸(CAS112704-79-7，得自Ark-Pharma,2.5g,11.47mmol)和(1-甲基-1H-吲唑-5-基)硼酸(CAS 590418-08-9，得自BLD-Pharma,2.22g,12.61mmol)在1,4-二氧杂环己烷:水(25mL,9:1)中的搅拌溶液中加入K3PO4(4.86g,22.94mmol)。将混合物用N2气体净化15min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.83g,1.14mmol)并在100℃加热3h。将混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(2x 150mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酸(1.7g,6.29mmol,54％收率)。
LCMS:方法J1,3.08min,MS:ES+271.1。
中间体Z
3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷TFA盐
步骤(i)
4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在-78℃向NaHMDS(1M在THF中的溶液)(5.39mL,5.39mmol)在THF(4mL)中的搅拌溶液中分批加入3-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(CAS101385-93-7，得自Combi-Blocks,0.50g,2.69mmol)并在-78℃搅拌15min。逐滴加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(CAS 37595-74-7，得自TCI,0.90g,2.69mmol)在THF(4mL)中的溶液并在-78℃搅拌2h。以类似的方式进行另外3个相同批，并将所有4批反应混合物混合并倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(3.3g,10.4mmol,96％收率)。将粗制物进行下一步。
步骤(ii)
4-(3-(三氟甲氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
向4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(2.50g,7.88mmol)和(3-(三氟甲氧基)苯基)硼酸(CAS179113-90-7，得自Combi-Blocks,1.61g,7.88mmol)在1,4-二氧杂环己烷:水(10mL,8:2)中的搅拌溶液中加入K3PO4(5.0g,2.36mmol)。将混合物用N2气体净化20min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.50g,0.78mmol)并在80℃加热2h。将混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，4％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生4-(3-(三氟甲氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.1g,3.34mmol,42％收率)。MS:ES+273.97(M-56)。
步骤(iii)
3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向4-(3-(三氟甲氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.0g,3.03mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中加入10％ Pd/C(50％湿度)(0.5g,0.5w/w)。将混合物用H2气体净化2h，然后通过Celite过滤并将滤液在减压下浓缩以产生3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.5g,1.51mmol,49％收率)。
LCMS:方法C1,1.47min,MS:ES+275.9(M-56)。
步骤(iv)
3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷TFA盐
在0℃向3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.45g,1.45mmol)在DCM(4mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2.4mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷TFA盐(0.65g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.14min,MS:ES+232.0。
中间体Z1
5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
步骤(i)
4-氟-N-甲氧基-N-甲基-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺
在0℃向4-氟-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(CAS 886496-49-7，得自Combi-Blocks,5.0g,22.32mmol)在THF(50mL)中的搅拌溶液中分批加入DIPEA(8.63g,11.44mL,66.96mmol)和HATU(12.72g,33.48mmol)。30min以后，在0℃加入N,O-二甲基羟胺HCl(2.39g,24.55mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌16h，然后倒入冰冷的水(100mL)中，并用EtOAc(2x 150mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，16％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生4-氟-N-甲氧基-N-甲基-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(4.80g,17.97mmol,81％收率)。
LCMS:方法J1,3.78min,MS:ES+267.8。
步骤(ii)
1-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮
在0℃向4-氟-N-甲氧基-N-甲基-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(4.80g,17.97mmol)在THF(48mL)中的搅拌溶液中逐滴加入甲基溴化镁(3M于乙醚中)(17.97mL,53.91mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌16h，然后倒入水(150mL)中，加入1N HCl(10mL)，并用EtOAc(2x 150mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，12％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生1-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(3.0g,13.51mmol,75％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.06-8.12(m,2H),7.70(t,J＝8.8Hz,1H),2.62(s,3H)。
步骤(iii)
2-溴-1-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮
在室温向1-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(3.0g,13.51mmol)在THF(30mL)中的搅拌溶液中分批加入吡啶鎓三溴化物(4.75g,14.86mmol)并在室温搅拌16h。将混合物倒入水(150mL)中，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，100％正己烷类)纯化以产生2-溴-1-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(2.0g,6.66mmol,49％收率)。将该物质用于下一步。
步骤(iv)
2-氨基-1-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮HCl盐
向2-溴-1-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(2.0g,6.66mmol)在MeCN(20mL)中的搅拌溶液中加入二甲酰氨基钠(0.76g,7.99mmol)并在80℃加热16h。将混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物用MeOH(20mL)和浓HCl(2mL)稀释。将混合物在80℃进一步加热16h，然后将其冷却至室温。将混合物在减压下浓缩，并将残余物与乙醚(20mL)一起搅拌以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生2-氨基-1-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮HCl盐(2.9g，定量收率)。
LCMS:方法J1,2.47min,MS:ES+238.0。
步骤(v)
2-((2-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向2-氨基-1-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮HCl盐(2.90g,10.60mmol)在DCM(30mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(4.39g,31.8mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(2.17g,1.77mL,15.9mmol)。将混合物温热至室温，搅拌4h，然后倒入水(50mL)中，并用DCM(2x 100mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生2-((2-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(1.70g,5.04mmol，经两步75％收率)。
LCMS:方法J1,3.80min,MS:ES+337.8。
步骤(vi)
5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
将2-((2-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(1.70g,5.04mmol)在POCl3(9mL,5.3体积)中的搅拌溶液在120℃加热16h。将混合物冷却至室温，缓慢地倒入碎冰中，并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，20％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.96g,3.01mmol,60％收率)。
LCMS:方法J1,3.86min,MS:ES+320.1。
中间体Z2
5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
步骤(i)
2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-溴烟酸甲酯
在室温向氮杂环丁烷盐酸盐(CAS 36520-39-5，得自Combi-Blocks,1.79g,19.27mmol)在DMSO(40mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(6.64g,48.18mmol)并搅拌5min。在室温加入5-溴-2-氯烟酸甲酯(CAS 78686-79-0，得自Combi-Blocks,4.0g,16.06mmol)并将混合物在80℃加热2h。将混合物倒入冰冷的水(100mL)中以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-溴烟酸甲酯(3.8g,14.07mmol,87％收率)。
LCMS:方法C1,1.35min,MS:ES+271.1,273.1。
步骤(ii)
2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基烟酸甲酯
在室温向2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-溴烟酸甲酯(1.90g,7.03mmol)在DMF(19mL)中的搅拌溶液中加入氰化锌(2.46g,21.09mmol)和锌粉(0.23g,3.51mmol)。将混合物用N2气体脱气10min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.26g,0.35mmol)和1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁(0.39g,0.70mmol)。将混合物在130℃加热2h。以类似的方式进行另外一个相同批，并混合两批反应混合物。将得到的混合物倒入冰冷的水(50mL)中，用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，14％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基烟酸甲酯(1.3g,5.99mmol,42％收率)。
LCMS:方法C1,1.14min,MS:ES+:218.1。
步骤(iii)
2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基烟酸酰肼
在0℃将2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基烟酸甲酯(1.2g,5.52mmol)加入水合肼(99％)(31.2mL,26体积)中。将混合物在室温搅拌8h，然后倒入水(20mL)中以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基烟酸酰肼(0.90g,4.14mmol,75％收率)。
LCMS:方法C1,0.79min,MS:ES+218.2。
步骤(iv)
5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
在0℃向2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基烟酸酰肼(0.9g,4.14mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TEA(1.25g,1.72mL,12.42mmol)和乙基草酰氯(0.85g,0.69mL,6.21mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h。在0℃分批加入TEA(1.25g,1.72mL,12.42mmol)和TsCl(0.94g,4.96mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h。将得到的混合物倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，27％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.55g,1.83mmol,44％收率)。
LCMS:方法C1,1.20min,MS:ES+300.2。
中间体Z3
5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
步骤(i)
5-溴-2-(吡咯烷-1-基)烟酸甲酯
在室温向吡咯烷(3.56g,50.2mmol)在DMSO(50mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(8.31g,60.24mmol)并搅拌5min。在室温将5-溴-2-氯烟酸甲酯(CAS 78686-79-0，得自Combi-Blocks,5.0g,20.08mmol)加入反应混合物中并在80℃加热2h。将混合物倒入冰冷的水(100mL)中以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生5-溴-2-(吡咯烷-1-基)烟酸甲酯(4.8g,16.90mmol,84％收率)。LCMS:方法C1,1.37min,MS:ES+285.1,287.0。
步骤(ii)
5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)烟酸甲酯
在室温向5-溴-2-(吡咯烷-1-基)烟酸甲酯(0.50g,1.76mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入氰化锌(0.62g,5.28mmol)和锌粉(0.06g,0.88mmol)。将反应混合物用N2气体脱气10min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.06g,0.09mmol)和1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁(0.14g,0.26mmol)。将反应混合物在130℃加热2h。以类似的方式进行另外8个相同批并将所有9批反应混合物合并对于后处理。将得到的混合物倒入冰冷的水(100mL)中，用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相用冰冷的水(4x 100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，34％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)烟酸甲酯(2.0g,8.65mmol,54％收率)。
LCMS:方法C1,1.20min,MS:ES+:232.1。
步骤(iii)
5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)烟酸酰肼
在室温向5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)烟酸甲酯(2.0g,8.65mmol)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液中加入水合肼(99％)(20mL,10体积)。将反应混合物在80℃加热16h。将混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物悬浮于水(20mL)中以形成沉淀物。将固体通过在减压下过滤进行收集以产生5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)烟酸酰肼(0.72g,3.11mmol,36％收率)。
LCMS:方法C1,0.90min,MS:ES+232.1。
步骤(iv)
5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
在0℃向5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)烟酸酰肼(0.72g,3.11mmol)在DCM(7mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TEA(0.94g,1.29mL,9.33mmol)和乙基草酰氯(0.46g,0.38mL,3.42mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h。在0℃分批加入TEA(0.94g,1.29mL,9.33mmol)和TsCl(0.71g,3.73mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌1h，然后倒入水(15mL)中，并用EtOAc(3x 15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，30％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.23g,0.73mmol,23％收率)。
LCMS:方法C1,1.25min,MS:ES+314.1。
中间体Z4
5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
步骤(i)
2-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯
向装有2-溴-1-氯-4-(三氟甲氧基)苯(CAS 468075-00-5，得自Combi-Blocks,5.0g,18.25mmol)在MeOH(100mL)中的溶液的高压釜中加入TEA(5.54g,7.63mL,54.76mmol)和[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(1.33g,1.82mmol)。将混合物在CO气体的压力(50psi)下在80℃加热16h。将混合物通过Celite过滤并将滤液在减压下浓缩。将残余物倒入水(50mL)中，并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，5％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(3.0g,11.81mmol,65％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.79(s,1H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,1H),3.88(s,3H)。
步骤(ii)
2-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼
在0℃向2-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(3.0g,3.81mmol)在MeOH(30mL)中的搅拌溶液中逐滴加入水合肼(99％)(15mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生2-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼(2.50g,9.84mmol,83％收率)。
LCMS:方法H1,2.37min,MS:ES+254.9。
步骤(iii)
5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
在0℃向2-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼(2.50g,9.84mmol)在DCM(25mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TEA(2.98g,4.11mL,29.52mmol)和乙基草酰氯(1.47g,1.56mL,10.82mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h。在0℃分批加入TsCl(2.24g,11.81mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌2h，然后倒入水(50mL)中，并用DCM(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，5％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(1.5g,4.46mmol,45％收率)。
LCMS:方法C1,1.34min,MS:ES+337.0。
中间体Z5
5-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
步骤(i)
2-溴-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼
在0℃向2-溴-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(CAS1150114-81-0，得自Enamine,7.0g,23.49mmol)在MeOH(70mL)中的搅拌溶液中逐滴加入水合肼(99％)(21mL,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后在减压下浓缩以产生2-溴-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼(5.10g,17.11mmol,73％收率)。LCMS:方法C,1.39min,MS:ES+299.0,301.0。
步骤(ii)
2-(2-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃向2-溴-5-(三氟甲氧基)苯甲酰肼(5.10g,17.11mmol)在DCM(51mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TEA(5.19g,7.2mL,51.34mmol)和乙基草酰氯(2.80g,2.29mL,20.53mmol)。将混合物温热至室温，搅拌2h，然后倒入水(50mL)中，并用DCM(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生2-(2-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(8.0g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.12min,MS:ES+399.0,401.0。
步骤(iii)
5-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
在0℃向2-(2-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(8.0g,20.10mmol)在DCM(80mL)中的搅拌溶液中分批加入TEA(6.10g,8.40mL,60.30mmol)和TsCl(3.81g,20.10mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后倒入水(50mL)中，并用DCM(3x30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，12％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(3.63g,9.55mmol，经两步56％收率)。LCMS:方法C1,1.35min,MS:ES+380.9,382.9。
中间体Z6
3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酸乙酯
步骤(i)
2-氨基-5-(三氟甲氧基)苄腈
向2-溴-4-(三氟甲氧基)苯胺(CAS175278-17-8，得自BLDpharm,20.0g,78.44mmol)在NMP(150mL)中的搅拌溶液中加入CuCN(14.0g,156.80mmol)并在165℃加热18h。将混合物倒入氨水溶液(300mL)中，并用EtOAc(3x 300mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，8％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-氨基-5-(三氟甲氧基)苄腈(11.2g,55.43mmol,70％收率)。
LCMS:方法H1,3.04min,MS:ES-201.0。
步骤(ii)
2-碘-5-(三氟甲氧基)苄腈
在0℃向2-氨基-5-(三氟甲氧基)苄腈(6.0g,29.69mmol)在浓HCl(60mL)中的搅拌溶液中分批加入NaNO2(4.0g,57.97mmol)并在0℃搅拌10min。在0℃逐滴加入KI(24.63g,74.09mmol)在水(60mL)中的溶液并搅拌0.5h。将混合物倒入水(300mL)中，并用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机相用10％硫代硫酸钠溶液(2x 150mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，6％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-碘-5-(三氟甲氧基)苄腈(7.79g,24.89mmol,84％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.13-8.16(m,1H),8.01(s,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H)。
步骤(iii)
2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苄腈
向2-碘-5-(三氟甲氧基)苄腈(2.6g,8.30mmol)和环丙基硼酸(CAS 411235-57-9，得自Combi-Blocks,1.42g,16.53mmol)在甲苯:水(10mL,4:1)中的搅拌溶液中加入K3PO4(3.52g,16.60mmol)。将混合物用N2气体净化10min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.67g,0.91mmol)并在100℃加热1h。以类似的方式进行另外2个相同批并将所有3批反应混合物混合并倒入水(500mL)中，并用EtOAc(3x 200mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，0.5％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苄腈(8.2g，定量收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.90(s,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),2.16-2.19(m,1H),1.12-1.14(m,2H),0.84-0.85(m,2H)。
步骤(iv)
(Z)-2-环丙基-N'-羟基-5-(三氟甲氧基)苯甲脒
向2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苄腈(4.0g,17.62mmol)和氢氧化钠(2.11g,52.75mmol)在EtOH:水(23mL,2:1)中的搅拌溶液中加入羟胺HCl(3.67g,52.81mmol)并在40℃加热48h。将混合物在减压下浓缩并倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生(Z)-2-环丙基-N'-羟基-5-(三氟甲氧基)苯甲脒(4.40g,16.92mmol,96％收率)。
LCMS:方法H1,2.79min,MS:ES+261.0。
步骤(v)
3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酸乙酯
在0℃向(Z)-2-环丙基-N'-羟基-5-(三氟甲氧基)苯甲脒(1.50g,5.76mmol)在吡啶(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入乙基草酰氯(1.18g,0.98mL,8.64mmol)。将混合物在80℃加热3h，然后冷却至室温，并在减压下浓缩。将得到的粗制物用水(100mL)稀释，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酸乙酯(1.44g,4.20mmol,73％收率)。LCMS:方法C,2.05min,MS:ES+343.1。
中间体Z7
5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酸乙酯
步骤(i)
2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酸
在室温向2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(1.10g,4.23mmol)在THF:水(10mL,1:1)中的搅拌溶液中分批加入LiOH.H2O(0.35g,8.46mmol)并在室温搅拌4h。然后将混合物倒入水(30mL)中，用柠檬酸酸化至pH～4，并用EtOAc(2x 70mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(1.08g，定量收率)。LCMS:方法J1,3.91min,MS:ES+244.8。
步骤(ii)
(Z)-2-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰氨基)-2-(肟基)乙酸乙酯
在0℃向2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(1.20g,4.87mmol)在THF(12mL)中的搅拌溶液中分批加入DIPEA(1.88g,2.5mL,14.63mmol)和HATU(2.78g,7.31mmol)。30min以后，在0℃加入(Z)-2-氨基-2-(肟基)乙酸乙酯(CAS10489-74-4，得自Combi-Blocks,0.77g,5.85mmol)。将混合物缓慢地温热至室温并在室温搅拌4h，然后倒入冰冷的水(30mL)中，并用EtOAc(2x 70mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生(Z)-2-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰氨基)-2-(肟基)乙酸乙酯(0.90g,2.50mmol，经两步59％收率)。LCMS:方法J1,3.71min,MS:ES+361.2。
步骤(iii)
5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酸乙酯
将(Z)-2-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰氨基)-2-(肟基)乙酸乙酯(0.90g,2.50mmol)在吡啶(5mL)中的溶液在110℃加热16h。将混合物温热至室温并然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，12％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酸乙酯(0.17g,0.49mmol，经两步20％收率)。LCMS:方法J1,4.50min,MS:ES+342.9。
实施例的合成
实施例1
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.3g,1.15mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(环丙基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.35g,1.13mmol)在吡啶(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入POCl3(0.53g,0.3mL,3.45mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g,0.41mmol,36％收率)。
LCMS:方法H1,3.24min,MS:ES+544.2。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g,0.40mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.1mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.25g，定量收率)。
LCMS:方法H1,2.62min,MS:ES+444.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.25g,0.45mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.18g,1.34mmol)并搅拌5min。将混合物冷却至0℃，然后加入溴化氰(0.05g,0.45mmol)。将混合物温热至室温，搅拌1h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，80-90％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺(0.02g,0.05mmol，经两步13％收率)。
LCMS:方法H1,2.88min,MS:ES+469.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.23(s,1H),8.13(s,1H),7.92(s,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(s,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),4.61-4.62(m,2H),4.30-4.45(m,2H),3.76-3.79(m,1H),3.62-3.66(m,1H),2.90-2.31(m,1H),2.19-2.20(m,3H),1.14-1.16(m,2H),0.83-0.85(m,2H),0.57-0.70(m,4H)；手性SFC:方法Y21,9.34min。
实施例2
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸锂(0.3g,1.14mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(环丙基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.35g,1.14mmol)在吡啶(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入POCl3(0.52g,0.32mL,3.42mmol)。将混合物在室温搅拌20min，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，65％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,0.55mmol,48％收率)。
LCMS:方法H1,3.96min,MS:ES+545.2。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,0.55mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.5mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.40g，定量收率)。
LCMS:方法J1,2.75min,MS:ES+445.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.40g,0.71mmol)在THF(4mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.29g,2.15mmol)并搅拌5min。在0℃加入溴化氰(0.07g,0.71mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.09g,0.18mmol，经两步35％收率)。
LCMS:方法H1,2.77min,MS:ES+470.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.34(s,1H),8.24(s,1H),8.0(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(s,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),4.62-4.63(m,2H),4.35-4.42(m,2H),3.78-3.82(m,1H),3.65-3.69(m,1H),3.05-3.17(m,1H),2.80-2.91(m,1H),2.59-2.64(m,1H),2.17-2.25(m,1H),1.14-1.23(m,2H),0.9-1.0(m,2H),0.60-0.83(m,4H)；手性SFC:方法Y28,14.39min。
实施例3
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.54g,2.24mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,1.12mmol)在THF(6mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.31g,2.24mmol)。将混合物温热至室温并搅拌24h并在70℃加热24h。将混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(4x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，3.5％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g,0.30mmol,27％收率)。
LCMS:方法C,1.52min,MS:ES+464.5。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g,0.30mmol)在DCM(2.8mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.7mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.15g，定量收率)。
LCMS:方法C,1.33min,MS:ES+364.5。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.15g,0.31mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.13g,0.94mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.03g,0.31mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入冰冷的水(100mL)中并将固体通过布氏漏斗过滤，用正己烷类(2x 100mL)洗涤。将固体残余物通过使用乙醚(2x 5mL)研磨进行纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.07g,0.18mmol，经两步59％收率)。
LCMS:方法H,2.27min,MS:ES+389.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.39(d,J＝6.8Hz,1H),8.34(s,1H),8.20(s,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),8.10(s,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.78(s,1H),7.75(t,J＝8.0Hz,1H),4.61-4.63(m,2H),4.33-4.38(m,2H),3.65-3.69(m,1H),3.39-3.43(m,1H),2.16-2.25(m,1H),1.95-2.03(m,1H)；手性SFC:方法Y12A,4.55min。
实施例4
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在室温向5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.20g,0.66mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.18g,0.66mmol)在THF(10mL)中的搅拌溶液中加入DBU(1mL,5体积)并搅拌16h。将混合物倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，50％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.15mmol,23％收率)。
LCMS:方法C1,1.28min,MS:ES+523.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.15mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.4mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.14g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.07min,MS:ES+423.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.14g,0.25mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.07g,0.51mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.04g,0.38mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 20mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，68％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.03g,0.08mmol，经两步51％收率)。
LCMS:方法H1,2.80min,MS:ES+448.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.38(d,J＝6.4Hz,1H),8.20(s,1H),8.10(s,1H),7.88(d,J＝7.6Hz,1H),7.83(s,1H),7.79(s,1H),7.69(t,J＝8.0Hz,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),4.62-4.65(m,2H),4.33-4.41(m,2H),3.66-3.70(m,1H),3.40-3.44(m,1H),2.18-2.25(m,1H),1.97-2.03(m,1H)；手性SFC:方法Y12A,3.77min。
实施例5
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酸(0.1g,0.44mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.10g,0.37mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.14g,0.19mL,1.11mmol)和HATU(0.35g,0.92mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后倒入冰冷的水(30mL)中，并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，50％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氯苯基)-噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g,0.32mmol,84％收率)。
LCMS:方法C1,1.27min,MS:ES+473.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g,0.32mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2.25mL,15体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.10g,0.20mmol,64％收率)。
LCMS:方法C1,1.04min,MS:ES+373.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.10g,0.20mmol)在MeCN(3mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.08g,0.62mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.03g,0.24mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(2x 20mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.04g,0.10mmol,49％收率)，将其通过反相制备型HPLC(方法X1)进一步纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.02g,0.05mmol,23％收率)。
LCMS:方法H1,2.64min,MS:ES+398.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.37(d,J＝6.8Hz,1H),8.20(s,1H),8.06(s,1H),7.93(s,1H),7.79-7.81(m,2H),7.51-7.59(m,2H),4.62-4.64(m,2H),4.34-4.38(m,2H),3.66-3.70(m,1H),3.40-3.44(m,1H),2.18-2.24(m,1H),1.96-2.03(m,1H)；手性SFC:方法Y20,5.44min。
实施例6
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸(0.2g,0.91mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.21g,1.01mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.35.g,0.49mL,1.11mmol)和HATU(0.52g,1.36mmol)。将混合物在室温搅拌12h，然后倒入冰冷的水(30mL)中，并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，50％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.18g,0.38mmol,42％收率)。
LCMS:方法C1,1.22min,MS:ES+469.8。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.18g,0.38mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.08mL,6体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.15g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.00min,MS:ES+369.4。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.15g,0.31mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.12g,0.93mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.03g,0.34mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(2x 20mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，100％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.09g,0.22mmol，经两步59％收率)。
LCMS:方法H1,2.47min,MS:ES+394.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.33(d,J＝6.4Hz,1H),8.19(s,1H),7.82(dd,J＝1.2,7.6Hz,1H),7.78(s,1H),7.71(s,1H),7.42-7.47(m,1H),7.21(d,J＝8.4,Hz 1H),7.13(t,J＝7.6Hz,1H),4.61-4.62(m,2H),4.34-4.39(m,2H),3.97(s,3H),3.64-3.68(m,1H),3.38-3.43(m,1H),2.17-2.24(m,1H),1.95-2.01(m,1H)；手性SFC:方法Y4,5.36min。
实施例7
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.7g,2.71mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.76g,2.84mmol)在THF(7mL)中的搅拌溶液用N2净化10min。在0℃分批加入TBD(0.41g,2.98mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌16h。将混合物倒入水(50mL)中，将沉淀的固体通过在减压下过滤进行收集，用水(2x 10mL)、正己烷类(2x 20mL)洗涤并在减压下干燥以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.46g,0.97mmol,36％收率)。
LCMS:方法C1,1.29min,MS:ES+480.41。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.46g,0.95mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2.3mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.48g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.03min,MS:ES+380.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.48g,0.97mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.40g,2.92mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.10g,0.97mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，100％EtOAc)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.1g,0.24mmol，经两步26％收率)。
LCMS:方法H1,2.72min,MS:ES+405.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(d,J＝6.4Hz,1H),8.21(s,1H),7.89(d,J＝7.6Hz,1H),7.80(s,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(t,J＝7.6Hz,1H),7.19(d,J＝7.6Hz,1H),4.64-4.65(m,2H),4.36-4.39(m,2H),3.67-3.71(m,1H),3.43-3.46(m,1H),2.69-2.71(m,1H),2.19-2.25(m,1H),1.99-2.04(m,1H),1.03-1.04(m,2H),0.77-0.78(m,2H)；手性HPLC:方法Y21,10.58min。
实施例8
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.5g,2.12mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.45g,1.70mmol)在THF(10mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.82g,1.09mL,6.38mmol)。10min以后，在0℃逐滴加入T3P(50％在EtOAc中的溶液)(1.01g,2.02mL,3.19mmol)。将混合物在室温搅拌5h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，90％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g,0.31mmol，经两步16％收率)。
LCMS:方法H1,3.32min,MS:ES-477.2。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g,0.31mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.5mL,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.17g，定量收率)。LCMS:方法H1,3.00min,MS:ES+379.0。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.17g,0.34mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.14g,1.03mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.04g,0.34mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，100％ EtOAc)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.08g,0.19mmol，经两步63％收率)，将其通过反相制备型HPLC(方法X4)进一步纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.04g,0.11mmol，经两步35％收率)。
LCMS:方法H1,2.68min,MS:ES+404.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.38(d,J＝6.8Hz,1H),8.21(s,1H),7.75-7.82(m,3H),7.38-7.39(m,2H),7.24-7.26(m,1H),4.62-4.64(m,2H),4.34-4.39(m,2H),3.65-3.69(m,1H),3.41-3.45(m,1H),2.19-2.23(m,1H),2.11-2.15(m,1H),1.98-2.02(m,1H),1.02-1.07(m,2H),0.69-0.73(m,2H)；手性SFC:方法Y12A,4.52min。
实施例9
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.5g,1.92mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.36g,1.34mmol)在吡啶(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入POCl3(0.88g,0.54mL,5.76mmol)，并将混合物在室温搅拌2h。然后将混合物倒入冰冷的水(50mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，90％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.07g,0.14mmol，经两步8％收率)。
LCMS:方法H1,3.09min,MS:ES-502.2。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.07g,0.14mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.7mL,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.09g，定量收率)。
LCMS:方法H1,2.50min,MS:ES+404.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.09g,0.17mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.07g,0.52mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.02g,0.17mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，100％ EtOAc)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.05g,0.10mmol，经两步75％收率)，将其通过反相制备型HPLC(方法X3)进一步纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.02g,0.06mmol，经两步42％收率)。
LCMS:方法H1,2.92min,MS:ES+429.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.42(d,J＝5.6Hz,1H),8.21(s,1H),8.18(d,J＝1.2Hz,1H),7.93(s,1H),7.85(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.79(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),4.63-4.64(m,2H),4.36-4.39(m,2H),3.67-3.71(m,1H),3.41-3.45(m,1H),2.21-2.26(m,2H),1.98-2.04(m,1H),1.12-1.17(m,2H),0.82-0.86(m,2H)；手性SFC:方法Y9,5.54min。
实施例10
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.3g,1.09mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.33g,1.20mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.42g,0.56mL,3.29mmol)和T3P(50％在EtOAc中的溶液)(0.69g,2.19mmol)。将混合物在室温搅拌3h，然后倒入冰冷的水(30mL)中，并用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，80％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.18g,0.34mmol,34％收率)。
LCMS:方法C1,1.38min,MS:ES+523.3。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.18g,0.34mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.9mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.2g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.13min,MS:ES+423.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.2g,0.37mmol)在MeCN:THF(6mL,1:1)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.15g,1.11mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.04g,0.41mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，80％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.12g,0.26mmol，经两步77％收率)。
LCMS:方法H1,2.79min,MS:ES+448.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.42(d,J＝6.4Hz,1H),8.20(s,1H),8.00(d,J＝7.2Hz,1H),7.79(s,1H),7.71(s,1H),7.61(d,J＝6.0Hz,3H),4.62-4.64(m,2H),4.36-4.39(m,2H),3.66-3.70(m,1H),3.41-3.44(m,1H),2.18-2.25(m,1H),1.97-2.03(m,1H)；手性SFC:方法Y9,4.77min。
实施例11
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酸锂(1.05g,3.92mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.7g,2.62mmol)在THF(10mL)中的搅拌溶液中逐滴加入DIPEA(1.01g,1.38mL,7.86mmol)和T3P(50％在EtOAc中的溶液)(1.66g,5.24mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，80％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.6g,1.16mmol，经两步29％收率)。
LCMS:方法C1,1.26min,MS:ES+517.1,519.1。
步骤(ii)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-乙烯基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-溴苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,0.58mmol)和乙烯基三氟硼酸钾(CAS13682-77-4，得自Combi-Blocks,0.10g,0.75mmol)在EtOH(9mL)中的搅拌溶液中加入TEA(0.076g,0.1mL,0.75mmol)。将混合物用N2气体净化20min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.04g,0.06mmol)并在80℃加热3h。将混合物倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x40mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，80％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-乙烯基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.25g,0.53mmol,93％收率)。
LCMS:方法C1,1.25min,MS:ES+465.3。
步骤(iii)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-乙烯基苯基)-噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.25g,0.53mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中加入10％Pd/C(50％湿度)(0.12g,0.5w/w)。将混合物用H2气体净化1h，然后通过Celite过滤并将滤液在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g,0.47mmol,88％)。
LCMS:方法C1,1.44min,MS:ES+467.4。
步骤(iv)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g,0.47mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2.2mL,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.20g,0.41mmol,88％收率)。
LCMS:方法C1,1.07min,MS:ES+367.2。
步骤(v)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.20g,0.41mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.17g,1.24mmol)并将混合物搅拌10min。在0℃加入溴化氰(0.05g,0.45mmol)并将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，100％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.08g,0.20mmol，经两步43％收率)。
LCMS:方法H,2.81min,MS:ES+392.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.35(d,J＝6.4Hz,1H),8.20(s,1H),7.94(s,1H),7.79(s,1H),7.68(s,1H),7.65(d,J＝7.6Hz,1H),7.45(t,J＝7.6Hz,1H),7.31(d,J＝7.6Hz,1H),4.62-4.64(m,2H),4.35-4.37(m,2H),3.63-3.72(m,1H),3.42-3.44(m,1H),2.67-2.70(m,2H),2.18-2.25(m,1H),1.97-2.02(m,1H),1.24(t,J＝7.6Hz,3H)；手性SFC:方法Y9,5.71min。
实施例12
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-环丙基苯基)噁唑2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-溴苯基)-噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.18g,0.34mmol)和环丙基硼酸(CAS 411235-57-9，得自Combi-Blocks,0.044g,0.52mmol)在甲苯:水(8mL,9:1)中的搅拌溶液中加入K3PO4(0.22g,1.04mmol)。将混合物用N2气体净化20min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.025g,0.034mmol)并在100℃加热3h。将混合物倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-环丙基苯基)-噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.1g,0.20mmol,60％收率)。
LCMS:方法C1,1.30min,MS:ES+479.3。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.1g,0.20mmol)在DCM(2.5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.5mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.08g,0.16mmol,78％收率)。
LCMS:方法C1,1.06min,MS:ES+379.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.08g,0.16mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.07g,0.48mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.02g,0.17mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(15mL)中，并用EtOAc(3x 15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，97％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.02g,0.06mmol,38％收率)。
LCMS:方法H1,2.81min,MS:ES+404.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(d,J＝6.4Hz,1H),8.19(s,1H),7.94(s,1H),7.78(s,1H),7.58(d,J＝7.6Hz,1H),7.51(s,1H),7.39(t,J＝7.6Hz,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H),4.61-4.62(m,2H),4.32-4.41(m,2H),3.62-3.7(m,1H),3.40-3.41(m,1H),2.67-2.69(m,1H),2.18-2.20(m,1H),1.98-1.99(m,1H),0.99-1.01(m,2H),0.75-0.76(m,2H)；手性HPLC:方法Y10,10.27min。
实施例13
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.40g,1.16mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.31g,1.16mmol)在THF(4mL)中的搅拌溶液用N2净化10min。在0℃逐滴加入DBU(1.2mL,3体积)。将混合物温热至室温并在室温搅拌4h。将混合物倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，78％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.14mmol,12％收率)。LCMS:方法C1,1.32min,MS:ES+564.3。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.14mmol)在DCM(0.8mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.4mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.09g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.13min,MS:ES+464.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.095g,0.16mmol)在THF(1mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.068g,0.49mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.017g,0.16mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后倒入水(15mL)中，并用EtOAc(3x15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过反相制备型HPLC(方法X8)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.03g,0.06mmol，经两步41％收率)。
LCMS:方法H1,3.01min,MS:ES+489.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(d,J＝6.0Hz,1H),8.19(s,1H),7.78-7.83(m,2H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝8.8Hz,1H),4.62-4.64(m,2H),4.35-4.38(m,2H),3.66-3.70(m,1H),3.41-3.45(m,1H),2.67-2.69(m,1H),2.17-2.24(m,1H),1.97-2.04(m,1H),1.05-1.07(m,2H),0.80-0.81(m,2H)；手性HPLC:方法Y9,4.98min。
实施例14
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸锂(0.25g,0.98mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.34g,1.27mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(2.5mL,2.94mmol)和HATU(0.74g,1.96mmol)。将混合物在室温搅拌3h，然后倒入冰冷的水(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，83.6％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.47g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.21min,MS:ES+505.3。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.47g,0.93mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2.3mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.32g,0.62mmol，经3步87％收率)。
LCMS:方法H1,2.38min,MS:ES+405.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.31g,0.60mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.41g,3.04mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.07g,0.68mmol)。将混合物在室温搅拌30min，然后倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，82％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.05g,0.12mmol，经3步17％收率)，将其通过反相制备型HPLC(方法X10)进一步纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.01g,0.03mmol，经3步5％收率)。
LCMS:方法H1,2.55min,MS:ES+430.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.77(s,1H),8.30(s,1H),8.20(s,1H),7.9(d,J＝8.0Hz,1H),7.78(s,1H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H),4.62-4.64(m,2H),4.33-4.44(m,2H),3.65-3.72(s,1H),3.42-3.45(m,1H),2.77-2.9(m,1H),2.16-2.25(m,1H),1.98-2.05(s,1H),1.16-1.17(m,2H),0.93(s,2H)；手性SFC:方法Y4,5.15min。
实施例15
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(1.2g,4.49mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.43g,4.49mmol)在THF(12mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.75g,5.38mmol)。将混合物温热至室温并搅拌6h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 60mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g,0.24mmol,6％收率)。
LCMS:方法J1,3.90min,MS:ES-540.1。
步骤(ii)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向环丙醇(CAS16545-68-9，得自Synthonix,0.03g,0.48mmol)在THF(1.3mL)中的搅拌溶液中分批加入NaH(60％在油中)(0.02g,0.48mmol)，并在0℃搅拌45min。在0℃逐滴加入(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-氟-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g,0.24mmol)在THF(1.3mL)中的溶液。将混合物温热至室温并搅拌6h，然后倒入冰冷的水(20mL)中，并用EtOAc(3x 40mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，40％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)-苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.14mmol,57％收率)。
LCMS:方法J1,3.66min,MS:ES+580.4。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.13mmol)在DCM(0.8mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.4mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.1g，定量收率)。
LCMS:方法J1,2.91min,MS:ES+480.2。
步骤(iv)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.1g,0.16mmol)在THF(1mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.11g,0.84mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.02g,0.24mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，96％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.02g,0.03mmol，经两步24％收率)。
LCMS:方法H1,2.88min,MS:ES+505.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.78(d,J＝4.0Hz,1H),8.20(s,1H),7.87(s,1H),7.78(s,1H),7.73-7.76(m,1H),7.67-7.69(m,1H),4.62-4.63(m,2H),4.33-4.45(m,2H),4.07-4.13(m,1H),3.65-3.69(m,1H),3.41-3.44(m,1H),2.18-2.21(m,1H),1.97-2.04(m,1H),0.86-0.88(m,2H),0.72-0.77(m,2H)；手性SFC:方法Y21,9.32min。
实施例16
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-氟苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(5-氰基-2-氟苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.25g,0.81mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.28g,1.22mmol)在吡啶(2.5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入POCl3(0.37g,0.22mL,2.44mmol)。将混合物在室温搅拌30min，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，90％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-氟苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g,0.28mmol，经两步26％收率)。LCMS:方法C1,1.25min,MS:ES+522.3。
步骤(ii)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在N2气氛下在0℃向氧杂环丁烷-3-醇(0.02g,0.38mmol)在THF(2mL)中的搅拌溶液中分批加入NaH(60％在油中)(0.01g,0.38mmol)。15min以后，在0℃逐滴加入(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-氟苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.18g,0.34mmol)在THF(1mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌2h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(2x 20mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g,0.22mmol,75％收率)。
LCMS:方法C1,1.17min,MS:ES+476.3(M-100)。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g,0.22mmol)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.65mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.14g，定量收率)。
LCMS:方法C1,0.99min,MS:ES+476.2。
步骤(iv)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.14g,0.23mmol)在THF(2mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.09g,0.71mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.02g,0.23mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(2x 40mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过反相制备型HPLC(方法X9)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺(0.01g,0.02mmol，经两步13％收率)。
LCMS:方法H1,2.43min,MS:ES+501.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.20-8.23(m,2H),7.93(s,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.79(s,1H),7.01(d,J＝8.8Hz,1H),5.57-5.60(m,1H),4.99-5.03(m,2H),4.75-4.78(m,2H),4.60-4.61(m,2H),4.40(br s,1H),4.32(br s,1H),3.76-3.80(m,1H),3.61-3.65(m,1H),3.13(br s,1H),2.50-2.54(m,1H),2.18-2.20(m,1H),0.65-0.72(m,2H),0.54-0.57(m,2H)；手性HPLC:方法Y21,11.44min。
实施例17
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.54g,2.24mmol)和(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,1.12mmol)在THF(6mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.31g,2.24mmol)。将混合物温热至室温并搅拌24h并在70℃加热24h。将混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(4x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，3％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g,0.32mmol,29％收率)。
LCMS:方法C,1.62min,MS:ES+464.5。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)-噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g,0.32mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.75mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.15g,0.31mmol,97％收率)。
LCMS:方法C,1.33min,MS:ES+364.5。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.15g,0.31mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.13g,0.94mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.03g,0.31mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入冰冷的水(100mL)中并将固体通过布氏漏斗过滤，用正己烷类(2x 100mL)洗涤以产生N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.07g,0.17mmol,56％收率)。
LCMS:方法H,2.47min,MS:ES+389.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.40(d,J＝6.4Hz,1H),8.34(s,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),8.10(s,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.86(s,2H),7.75(t,J＝8.0Hz,1H),4.63-4.65(m,2H),4.37-4.46(m,1H),4.26-4.35(m,1H),3.61-3.65(m,1H),3.38-3.41(m,1H),2.17-2.25(m,1H),2.01-2.08(m,1H)；手性SFC:方法Y12A,3.99min。
实施例18
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.31g,1.40mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.25g,0.93mmol)在吡啶(2.5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入POCl3(0.43g,0.27mL,2.81mmol)并将混合物在0℃搅拌2h。然后将混合物倒入冰冷的水(100mL)中，并用DCM(4x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，2％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.06g,0.13mmol,14％收率)。
LCMS:方法C,1.531min,MS:ES+464.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.06g,0.13mmol)在DCM(1.2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.3mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.07g，定量收率)。LCMS:方法C,1.316min,MS:ES+364.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.07g,0.15mmol)在THF(1.4mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.06g,0.44mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.01g,0.15mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入冰冷的水(100mL)中，并用DCM(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，5.6％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.01g,0.02mmol，经两步30％收率)。
LCMS:方法N,13.05min,MS:ES+389.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.40(d,J＝6.4Hz,1H),8.58(s,1H),8.34(s,1H),8.10-8.15(m,2H),8.04(s,1H),7.91-7.93(m,1H),7.74 -7.77(m,1H),4.30
-4.42(m,4H),3.67-3.70(m,1H),3.40-3.43(m,1H),2.16-2.23(m,1H),1.99-2.07(m,1H)；手性SFC:方法Y12A,4.12min。
实施例19
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.26g,0.97mmol)和5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.25g,1.16mmol)在DMF(2.6mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.25g,0.33mL,1.94mmol)和T3P(50％在EtOAc中的溶液)(0.46g,0.92mL,1.45mmol)。将混合物在室温搅拌15h。将混合物倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过使用乙醚(2x 10mL)研磨进行纯化以产生(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g,0.28mmol,29％收率)。
LCMS:方法J,3.79min,MS:ES+464.2。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g,0.28mmol)在DCM(2.6mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.65mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.13g,0.27mmol,97％收率)。
LCMS:方法J,2.81min,MS:ES+364.0。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.13g,0.27mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.11g,0.81mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.028g,0.27mmol)。将混合物温热至室温，搅拌1h，然后倒入水(50mL)中，并用DCM(4x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，8％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.04g,0.10mmol,38％收率)。
LCMS:方法H,2.14min,MS:ES-387.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.38(d,J＝6.8Hz,1H),8.57(s,2H),8.34(s,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),8.11(s,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.75(t,J＝8.0Hz,1H),4.38-4.48(m,1H),4.23-4.31(m,3H),3.69-3.73(m,1H),3.40-3.43(m,1H),2.15-2.20(m,1H),1.90-1.93(m,1H)；手性SFC:方法Y12A,4.3min。
实施例24
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基)吡啶甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-溴吡啶酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向4-溴吡啶甲酸(0.22g,1.12mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.20g,0.74mmol)在DCM(6.8mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.28g,0.37mL,2.24mmol)和HATU(0.42g,1.12mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后倒入水(30mL)中，并用DCM(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，11％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-溴吡啶酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.2g,0.44mmol,59％收率)。
LCMS:方法C1,1.18min,MS:ES+451.1,453.1。
步骤(ii)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-(3-(三氟甲基)苯基)吡啶酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-溴吡啶酰氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.27g,0.59mmol)和(3-(三氟甲基)苯基)硼酸(CAS 1423-26-3，得自Combi-Blocks,0.14g,0.72mmol)在甲苯:水(10mL,1:1)中的搅拌溶液中加入K3PO4(0.38g,1.79mmol)。将混合物用N2气体净化15min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.04g,0.06mmol)并在90℃加热1h。将混合物倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，56％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-(3-(三氟甲基)苯基)吡啶酰氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.27g,0.52mmol,87％收率)。
LCMS:方法H1,1.33min,MS:ES+517.4。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基)吡啶甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-(3-(三氟甲基)-苯基)吡啶酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.27g,0.52mmol)在DCM(2.7mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.35mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基)吡啶甲酰胺TFA盐(0.35g，定量收率)。
步骤(iv)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基)吡啶甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基)吡啶甲酰胺TFA盐(0.35g,0.66mmol)在THF(4mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.36g,2.64mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.08g,0.79mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，80％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.03g,0.06mmol，经2步13％收率)。
LCMS:方法H1,2.89min,MS:ES+442.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,J＝6.8Hz,1H),8.76(d,J＝4.8Hz,1H),8.33(s,1H),8.18-8.21(m,3H),8.06(d,J＝3.2Hz,1H),7.88-7.90(m,1H),7.78-7.82(m,2H),4.61-4.63(m,2H),4.35-4.40(m,2H),3.65-3.69(m,1H),3.43-3.46(m,1H),2.23-2.33(m,1H),1.96-2.02(m,1H)；手性SFC:方法Y9,5.07min。
实施例25
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡啶甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡啶酰氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-溴吡啶酰氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.20g,0.44mmol)和(3-(三氟甲氧基)苯基)硼酸(CAS#179113-90-7，得自Combi-Blocks,0.11g,0.53mmol)在甲苯:水(3mL,1:1)中的搅拌溶液中加入K3PO4(0.28g,1.32mmol)。将混合物用N2气体净化20min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.02g,0.02mmol)并在80℃加热2h。将混合物倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，60％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡啶酰氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g,0.28mmol,63％收率)。
LCMS:方法C1,1.33min,MS:ES+533.3。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲氧基)苯基)-吡啶甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(4-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡啶酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g,0.27mmol)在DCM(1.5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.72mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡啶甲酰胺TFA盐(0.17g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.11min,MS:ES+433.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲氧基)-苯基)吡啶甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡啶甲酰胺TFA盐(0.17g,0.31mmol)在THF(6mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.17g,1.24mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.04g,0.37mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，82％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡啶甲酰胺(0.025g,0.05mmol，经2步20％收率)。
LCMS:方法H1,2.95min,MS:ES+458.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.19(d,J＝6.8Hz,1H),8.75(d,J＝4.8Hz,1H),8.29(s,1H),8.20(s,1H),8.01(d,J＝4.8Hz,1H),7.88-7.93(m,2H),7.78(s,1H),7.70(t,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),4.61-4.63(m,2H),4.36-4.38(m,2H),3.65-3.69(m,1H),3.42-3.46(m,1H),2.24-2.28(m,1H),1.98-2.01(m,1H)；手性SFC:方法Y10,8.67min。
实施例26
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.25g,1.13mmol)和(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,1.13mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.44g,0.58mL,3.41mmol)和HATU(0.65g,1.70mmol)。将混合物在室温搅拌3h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，85％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.18mmol,16％收率)。
LCMS:方法C1,1.59min,MS:ES+463.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.17mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.24mL,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.09g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.33min,MS:ES+363.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.08g,0.17mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.07g,0.50mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.03g,0.25mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，89％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.01g,0.02mmol，经两步15％收率)。
LCMS:方法H,2.46min,MS:ES+388.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.36(d,J＝6.4Hz,1H),8.35(s,1H),8.16(d,J＝7.6Hz,1H),8.10(s,1H),7.93(d,J＝7.2Hz,1H),7.74-7.79(m,2H),7.51(s,1H),6.29(s,1H),4.25-4.37(m,4H),3.62-3.66(m,1H),3.40-3.42(m,1H),2.10-2.18(m,1H),2.00-2.04(m,1H)；手性SFC:方法Y12A,3.99min。
实施例27
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸锂
在0℃向5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.3g,0.99mmol)在THF:水(3:2,5mL)中的搅拌溶液中分批加入氢氧化锂一水合物(0.08g,1.99mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后在减压下浓缩以产生5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.3g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.15min,MS:m/z不支持。
步骤(ii)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.30g,1.07mmol)和(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.29g,1.07mmol)在吡啶(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入POCl3(0.49g,0.29mL,3.22mmol)。将混合物在室温搅拌30min，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，55％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g,5.83mmol,26％收率)。LCMS:方法C1,1.36min,MS:ES+:522.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g,0.26mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.2mL,8.5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.15g，定量收率)。LCMS:方法C1,1.11min,MS:ES+422.3。
步骤(iv)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.15g,0.35mmol)在THF(3.0mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.14g,1.06mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.03g,0.35mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，20％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.03g,0.33mmol，经两步21％收率)。
LCMS:方法H1,2.95min,MS:ES+447.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.30(s,1H),8.07(s,1H),7.77-7.87(m,3H),7.65-7.69(m,1H),7.46-7.49(m,2H),6.28(s,1H),4.22-4.29(m,4H),3.61-3.65(m,1H),3.38-3.40(m,1H),2.1-2.21(m,1H),1.97-2.08(m,1H)；手性SFC:方法Y10,7.24min。
实施例28和29
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺和
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和
(2S,4R)-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.29g,1.03mmol)和(2S,4R)-4-氨基-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(2S,4R)-4-氨基-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.29g,1.03mmol)在吡啶(0.28mL)中的搅拌溶液中逐滴加入POCl3(0.29mL,3.11mmol)并在0℃搅拌15min。将混合物倒入饱和的NaHCO3溶液(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，30-35％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生作为混合物的(2S,4R)-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(2S,4R)-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.09g,0.17mmol,17％收率)。LCMS:方法H1,3.48min,MS:ES+536.1和3.59min,MS:ES+536.0。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺TFA盐和
N-((3R,5S)-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(2S,4R)-2-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.09g,0.17mmol)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.48mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌30min，然后在减压下浓缩以产生作为混合物的N-((3R,5S)-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺和N-((3R,5S)-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.11g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.18min,MS:ES+436.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺和
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺和N-((3R,5S)-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.11g,0.20mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.13g,1.00mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.03g,0.20mmol)。将混合物在0℃搅拌30min，然后倒入冰冷的水(100mL)中用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生作为混合物的N-((3R,5S)-1-氰基-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺和N-((3R,5S)-1-氰基-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.04g,0.10mmol,55％收率)。
将两种化合物通过手性制备型HPLC(方法Z1，在287nm最大λ记录UV波谱)分离以产生N-((3R,5S)-1-氰基-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.02g,0.04mmol,22％收率)和N-((3R,5S)-1-氰基-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.01g,0.03mmol,16％收率)。
基于nOe NMR实验进行位置异构体分配，其中照射与连接到吡唑上的亚甲基对应的1H NMR谱部分，并测量对与甲基对应的1HNMR谱部分的影响。
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(实施例28)
LCMS:方法H1,2.97min,MS:ES+461.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.34(d,J＝6.8Hz,1H),8.09(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.82(s,1H),7.68(t,J＝8.0Hz,1H),7.62(s,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),6.04(s,1H),4.28-4.31(m,1H),4.21-4.23(m,3H),3.62-3.66(m,1H),3.2-3.3(m,1H),2.16(s,3H),2.08-2.13(m,1H),1.91-2.03(m,1H)；手性HPLC:方法Y30,7.05min。
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(实施例29)
LCMS:方法H1,2.95min MS:ES-459.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.36(d,J＝6.8Hz,1H),8.09(s,1H),7.87(d,J＝7.6Hz,1H),7.82(s,1H),7.68(t,J＝8.0Hz,1H),7.46(d,J＝7.6Hz,1H),7.36(s,1H),6.04(s,1H),4.36-4.37(m,1H),4.26-4.31(m,1H),4.19-4.20(m,2H),3.66-3.70(m,1H),3.2-3.3(m,1H),2.28(s,3H),2.12-2.16(m,1H),2.02-2.08(m,1H)；手性HPLC:方法Y30,7.65min。
实施例30
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)(3(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.5g,1.75mmol)和(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.46g,1.75mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入DBU(1.5mL,3体积)。将混合物温热至室温并在65℃加热2h。将混合物倒入水(30mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，30％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.21g,0.41mmol,13％收率)。
LCMS:方法J1,3.72min,MS:ES+506.3。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.21g,0.41mmol)在DCM(2.1mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2.1mL,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.34g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.08min,MS:ES+406.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(-3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.34g,0.65mmol)在THF(3.4mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.27g,1.96mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.08g,0.72mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h，然后倒入冰冷的水(100mL)中以形成沉淀物。将固体通过通过布氏漏斗过滤进行收集，用正己烷类(3x 20mL)洗涤以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.15g,0.35mmol，经两步82％收率)。
LCMS:方法H1,2.87min,MS:ES+431.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.39(d,J＝6.4Hz,1H),8.13-8.17(m,3H),7.79-7.82(m,3H),7.52(s,1H),6.30(s,1H),4.29-4.32(m,4H),3.63-3.66(m,1H),3.41-3.42(m,1H),2.14-2.19(m,1H),2.01-2.05(m,1H)；手性SFC:方法Y8,6.27min。
实施例34
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(2-氟-4-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)苯甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酸(0.3g,1.11mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中分批加入DIPEA(0.43g,0.58mL,3.33mmol)和HATU(0.84g,2.22mmol)。30min以后，在0℃加入(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.32g,1.22mmol)。将混合物缓慢地温热至室温并搅拌3h，然后倒入冰冷的水(15mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.50g,0.96mmol,86％收率)。
LCMS:方法J1,3.90min,MS:ES+:519.1。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.50g,0.96mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2.5mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺TFA盐(0.35g,0.83mmol,86％收率)。
LCMS:方法J1,2.97min,MS:ES+419.0。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺TFA盐(0.35g,0.83mmol)在THF(3.5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.46g,3.34mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.09g,0.92mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，5％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺(0.07g,0.17mmol,29％收率)。
LCMS:方法H1,2.58min,MS:ES+444.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.71(d,J＝6.0Hz,1H),8.14(d,J＝10.4Hz,2H),7.75-7.82(m,3H),7.66-7.70(m,3H),7.51(s,1H),6.29(s,1H),4.23-4.33(m,4H),4.09(s,3H),3.61-3.65(m,1H),3.31-3.34(m,1H),1.97-2.09(m,2H)；手性SFC:方法Y9,5.60min。
实施例35
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酸(0.3g,1.11mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中分批加入DIPEA(0.43g,0.58mL,3.33mmol)和HATU(0.84g,2.22mmol)。30min以后，在0℃加入(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.32g,1.22mmol)。将混合物缓慢地温热至室温并搅拌3h，然后倒入冰冷的水(15mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，90％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.50g,0.96mmol,86％收率)。
LCMS:方法C1,1.20min,MS:ES+:520.3。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.50g,0.96mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2.5mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺TFA盐(0.35g,0.65mmol,86％收率)。
LCMS:方法C1,0.99min,MS:ES+420.5。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺TFA盐(0.35g,0.65mmol)在THF(3.5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.45g,3.28mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.07g,0.72mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，10％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺(0.08g,0.18mmol,21％收率)。
LCMS:方法H1,2.45min,MS:ES+445.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.79(d,J＝5.2Hz,1H),8.15-8.21(m,3H),7.77-7.84(m,3H),7.68-7.72(m,3H),4.64-4.66(m,2H),4.31-4.42(m,2H),4.10(s,3H),3.66-3.70(m,1H),3.35(s,1H),2.09-2.19(m,1H),1.97-2.01(m,1H)；手性SFC:方法Y9,6.07min。
实施例36
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷TFA盐(0.5g,2.16mmol)在THF(4mL)和(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.57g,3.16mmol)中的搅拌溶液中加入TEA(0.89mL,6.49mmol)并搅拌10min。在0℃将三光气(0.32g,1.08mmol)分批加入反应混合物中。将混合物在室温搅拌5h，然后倒入水(20mL)中，并用DCM(3x 20mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，3％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g,0.34mmol,13％收率)。
LCMS:方法C1,1.41min,MS:ES+524.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(3-(3-(三氟甲氧基)-苯基)吡咯烷-1-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g,0.34mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.73mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺TFA盐(0.1g,0.22mmol,70％收率)。LCMS:方法C1,1.17min,MS:ES+424.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺TFA盐(0.1g,0.22mmol)在THF(2mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.09g,068mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.04g,0.34mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，95％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺(0.04g,0.08mmol,14％收率)。
LCMS:方法H1,2.90min,MS:ES+449.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.77(s,1H),7.46-7.50(m,2H),7.36(d,J＝7.2Hz,1H),7.31(s,1H),7.25(d,J＝7.6Hz,1H),6.28(s,2H),4.19-4.29(m,3H),3.97-4.05(m,1H),3.69-3.77(m,1H),3.40-3.56(m,4H),3.15-3.23(m,2H),2.20-2.30(s,1H),1.86-2.00(m,3H)；手性SFC:方法Y31,15.52min和17.04min。
实施例37和实施例38
(S)-N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺；
(R)-N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺；
将非对映异构体通过手性制备型HPLC(方法Z2，在220nm最大λ记录UV波谱)分离以产生作为第一洗脱的异构体的标题化合物的非对映异构体1(0.008g,0.02mmol,18％收率)和作为第二洗脱的异构体的标题化合物的非对映异构体2(0.009g,0.02mmol,20％收率)。未测定非对映异构体1和非对映异构体2的绝对构型。将实施例37指定为非对映异构体1。将实施例38指定为非对映异构体2。
实施例37
非对映异构体1：
LCMS:方法H1,2.88min,MS:ES+449.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.77(s,1H),7.46-7.50(m,2H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(s,1H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),6.28(s,2H),4.19-4.29(m,3H),3.97-4.05(m,1H),3.69-3.77(m,1H),3.42-3.56(m,4H),3.15-3.23(m,2H),2.20-2.30(s,1H),1.86-2.00(m,3H)；手性SFC:方法Y31,15.99min。
实施例38
非对映异构体2：
LCMS:方法H1,2.88min,MS:ES+449.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.76(d,J＝4.0Hz,1H),7.46-7.50(m,2H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(s,1H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),6.28(s,2H),4.19-4.29(m,3H),3.97-4.05(m,1H),3.71-3.77(m,1H),3.42-3.56(m,4H),3.14-3.23(m,2H),2.20-2.28(s,1H),1.86-2.00(m,3H)；手性SFC:方法Y31,16.99min。
实施例39
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.50g,1.56mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.49g,1.87mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.26g,1.87mmol)。将混合物温热至室温并搅拌6h。将混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(2x 150mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，80％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.23g,0.42mmol,27％收率)。
LCMS:方法J1,3.99min,MS:ES+541.0。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.23g,0.42mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.15mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌0.5h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.40g，定量收率)。
LCMS:方法J1,2.83min,MS:ES+441.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺TFA盐(0.40g,0.72mmol)在THF(4mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.49g,3.6mmol)并搅拌5min。将混合物冷却至0℃，然后加入溴化氰(0.08g,0.79mmol)。将混合物温热至室温，搅拌0.5h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 75mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，96％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.04g,0.09mmol，经两步21％收率)。
LCMS:方法H1,2.85min,MS:ES+466.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.37(d,J＝4.0Hz,1H),8.20(s,1H),8.04-8.07(m,2H),7.93(br s,1H),7.71-7.79(m,2H),4.63-4.64(m,2H),4.30-4.40(m,2H),3.66-3.70(m,1H),3.40-3.43(m,1H),2.20-2.23(m,1H),1.99-2.02(m,1H)；手性SFC:方法Y32,4.35min。
实施例40
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃将5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.25g,0.83mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.26g,0.99mmol)在THF(4mL)中的搅拌溶液分批加入TBD(0.17g,1.24mmol)中。将混合物温热至室温并在室温搅拌1h。将混合物倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，24％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.07g,0.13mmol,15％收率)。
LCMS:方法C1,1.18min,MS:ES+521.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.07g,0.13mmol)在DCM(1mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.35mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.10g，定量收率)。
LCMS:方法C1,0.95min,MS:ES+421.1。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.10g,0.19mmol)在THF(1mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.08g,0.57mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.03g,0.28mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过反相制备型HPLC(方法X11)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.04g,0.09mmol，经两步66％收率)。
LCMS:方法H1,2.23min,MS:ES+446.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(d,J＝6.4Hz,1H),8.72(d,J＝2.0Hz,1H),8.32(d,J＝2.0Hz,1H),8.19(s,1H),7.78(s,1H),4.62-4.64(m,2H),4.35-4.38(m,2H),4.02-4.11(m,4H),3.66-3.70(m,1H),3.41-3.44(m,1H),2.26-2.33(m,2H),2.18-2.23(m,1H),1.98-2.03(m,1H)；手性HPLC:方法Y4,5.32min。
实施例41
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃将5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.23g,0.73mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.19g,0.73mmol)在THF(2.3mL)中的搅拌溶液分批加入TBD(0.10g,0.73mmol)中。将混合物温热至室温并在室温搅拌0.5h。将混合物倒入水(15mL)中，并用EtOAc(3x 15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，95％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.10g,0.19mmol,25％收率)。
LCMS:方法C1,1.18min,MS:ES+534.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.10g,0.19mmol)在DCM(1mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.3mL,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.12g，定量收率)。
LCMS:方法C1,0.98min,MS:ES-433.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.12g,0.22mmol)在THF(1.2mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.09g,0.66mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.02g,0.22mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(15mL)中，并用EtOAc(3x15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，4％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.02g,0.05mmol，经两步26％收率)。
LCMS:方法H1,2.40min,MS:ES+460.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(d,J＝6.4Hz,1H),8.72(d,J＝2.0Hz,1H),8.30(d,J＝2.0Hz,1H),8.19(s,1H),7.78(s,1H),4.58-4.63(m,2H),4.34-4.37(m,2H),3.65-3.69(m,1H),3.40-3.44(m,1H),3.29-3.34(m,4H),2.16-2.22(m,1H),1.96-2.03(m,1H),1.85(br s,4H)；手性HPLC:方法Y4,5.45min。
实施例42
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.50g,1.48mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.39g,1.48mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.20g,1.48mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌0.5h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,0.53mmol,36％收率)。
LCMS:方法C1,1.28min,MS:ES+558.1。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,0.53mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.5mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.32g，定量收率)。
LCMS:方法C,1.36min,MS:ES+458.1。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.32g,0.56mmol)在THF(3.2mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.23g,1.68mmol)并搅拌5min。在0℃加入溴化氰(0.06g,0.56mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，85％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.06g,0.12mmol，经两步25％收率)。
LCMS:方法H1,2.81min,MS:ES+483.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.88(d,J＝6.0Hz,1H),8.22(s,1H),8.05(s,1H),7.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.81(s,1H),7.78(s,1H),4.65-4.66(m,2H),4.39-4.41(m,2H),3.69-3.73(m,1H),3.45-3.47(m,1H),2.21-2.24(m,1H),2.01-2.05(m,1H)；手性SFC:方法Y21,10.11min。
实施例43
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.47g,1.56mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.42g,1.56mmol)在THF(6mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.32g,2.33mmol)并在0℃搅拌15min。将混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(2x 120mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，60％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.19g,0.36mmol,23％收率)。LCMS:方法C1,1.25min,MS:ES+524.2。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.18g,0.34mmol)在DCM(1.8mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.8mL,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.18g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.05min,MS:ES+424.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.17g,0.32mmol)在THF(1.7mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.13g,0.95mmol)并搅拌5min。在0℃向混合物中加入溴化氰(0.04g,0.35mmol)。将混合物在0℃搅拌1h，然后倒入水(30mL)中，并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.05g,0.11mmol，经两步32％收率)。
LCMS:方法H1,3.50min,MS:ES+449.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.80(d,J＝4.0Hz,1H),8.22(s,1H),8.15(d,J＝8.0Hz,1H),8.01(s,1H),7.81-7.85(m,2H),7.75-7.76(m,1H),4.65-4.66(m,2H),4.40-4.41(m,2H),3.70-3.74(m,1H),3.47-3.48(m,1H),2.20-2.27(m,1H),2.00-2.07(m,1H)；手性SFC:方法Y4,4.14min。
实施例44
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.36g,1.05mmol)和(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.28g,1.05mmol)在THF(3.6mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.17g,1.26mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌0.5h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，60％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.17g,0.31mmol,30％收率)。
LCMS:方法C1,1.40min,MS:ES+563.1。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.17g,3.10mmol)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.57mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.23g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.13min,MS:ES+463.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.23g,0.41mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.28g,2.06mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.13g,1.20mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(10mL)中，并用EtOAc(3x 15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，50％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.065g,0.13mmol，经两步43％收率)。
LCMS:方法H1,3.14min,MS:ES+488.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),7.83(s,1H),7.78(s,1H),7.58(d,J＝8.0Hz1H),7.51(s,1H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),6.29(s,1H),4.29-4.32(m,4H),3.63-3.67(m,1H),3.39-3.42(m,1H),2.68-2.70(m,1H),2.13-2.15(m,1H),2.02-2.05(m,1H),1.05-1.07(m,2H),0.78-0.82(m,2H)；手性HPLC:方法Y14,3.75min。
实施例45
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.33g,0.96mmol)和(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,1.15mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.20g,1.44mmol)并在0℃搅拌0.5h。将混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，37％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.23g,0.40mmol,42％收率)。
LCMS:方法H1,3.61min,MS:ES-562.2。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.23g,0.39mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.1mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.30g，定量收率)。
LCMS:方法H1,2.97min,MS:ES+464.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.28g,0.49mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.34g,2.46mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.05g,0.49mmol)。将混合物温热至室温，并在室温搅拌15min，然后倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，37％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.07g,0.15mmol，经两步38％收率)。
LCMS:方法H1,3.15min,MS:ES+489.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.78(d,J＝6.8Hz,1H),7.81-7.84(m,3H),7.56(d,J＝7.6Hz,1H),7.29(d,J＝8.8Hz,1H),4.62-4.64(m,2H),4.40-4.43(m,1H),4.30-4.32(m,1H),3.61-3.65(m,1H),3.38-3.42(m,1H),2.66-2.70(m,1H),2.18-2.24(m,1H),2.03-2.08(m,1H),1.03-1.05(m,2H),0.79-0.80(m,2H)，手性SFC:方法Y10,7.61min。
实施例46
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.44g,1.55mmol)和(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.49g,1.86mmol)在THF(6mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.32g,2.32mmol)并将混合物在0℃搅拌15min，然后倒入水(80mL)中，并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，40％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.17g,0.33mmol,21％收率)。
LCMS:方法C,1.72min,MS:ES+504.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.16g,0.32mmol)在DCM(1.6mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.6mL,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.23g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.04min,MS:ES+404.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.23g,0.45mmol)在THF(2.3mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.18g,1.33mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.05g,0.49mmol)。将混合物在0℃搅拌1h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 80mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，50％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.06g,0.14mmol，经两步44％收率)。
LCMS:方法H1,2.68min,MS:ES+429.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.71(d,J＝6.4Hz,1H),8.29(d,J＝1.6Hz,1H),7.98(dd,J＝1.2,8.4Hz,1H),7.77(d,J＝2.0Hz,1H),7.49(d,J＝1.2Hz,1H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),6.27(s,1H),4.25-4.32(m,4H),3.62-3.66(m,1H),3.38-3.41(m,1H),2.77-2.85(m,1H),2.10-2.16(m,1H),1.99-2.05(m,1H),1.13-1.17(m,2H),0.90-0.91(m,2H)；手性SFC:方法Y10,9.37min。
实施例47
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.40g,1.17mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.46g,1.75mmol)在THF(6mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.24g,1.75mmol)并在0℃搅拌15min。将混合物倒入水(80mL)中，并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，85％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g,0.39mmol,33％收率)。
LCMS:方法C,1.78min,MS:ES+564.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g,0.39mmol)在DCM(2.2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2.2mL,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.32g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.08min,MS:ES+464.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.32g,0.55mmol)在THF(3.2mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.23g,1.66mmol)并搅拌5min。在0℃向混合物中加入溴化氰(0.06g,0.61mmol)。将混合物在0℃搅拌1h，然后倒入水(50mL)中，并用EtOAc(2x 80mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，85％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.05g,0.10mmol，经两步26％收率)，将其通过反相制备型HPLC(方法X15)进一步纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.01g,0.03mmol，经两步8％收率)。
LCMS:方法H1,2.95min,MS:ES+489.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.74(br s,1H),8.53-8.56(m,1H),7.98 -8.01(m,1H),7.78-7.81(m,1H),7.54-7.56(m,1H),7.27-7.29(m,1H),4.30-4.40(m,4H),3.51-3.63(m,1H),3.35-3.42(m,1H),2.61-2.72(m,1H),2.13-2.23(m,1H),1.98-2.07(s,1H),0.98-1.09(m,2H),0.72-0.83(m,2H)；手性SFC:方法Y14,3.7min。
实施例48
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(1.5g,3.94mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.05g,3.94mmol)在THF(15mL)中的搅拌溶液中逐滴加入DBU(4.5mL,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 20mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，100％ EtOAc)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.45g,0.70mmol,18％收率)。LCMS:方法C1,1.28min,MS:ES+602.2,604.1。
步骤(ii)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-烯丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.40g,0.66mmol)和2-烯丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(CAS 72824-04-5，得自Combi-Blocks,0.13g,0.79mmol)在1,4-二氧杂环己烷:水(4mL,4:1)中的搅拌溶液中加入K3PO4(0.42g,1.99mmol)。将混合物用N2气体净化10min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.04g,0.05mmol)并在110℃加热2h。将混合物倒入水(25mL)中，并用EtOAc(3x25mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，80％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-烯丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g,0.26mmol,40％收率)。
LCMS:方法C,1.84min,MS:ES+564.4。
步骤(iii)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-烯丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g,0.24mmol)在MeOH(1.4mL)中的搅拌溶液中加入10％ Pd/C(50％湿度)(0.03g,0.2w/w)。将混合物用H2气体净化3h，然后通过Celite 过滤并将滤液在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.06g,0.11mmol,46％)。
LCMS:方法C1,1.38min,MS:ES+566.4。
步骤(iv)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.06g,0.11mmol)在DCM(1mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.2mL,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.08g，定量收率)。
LCMS:方法C,1.43min,MS:ES+466.3。
步骤(v)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.08g,0.14mmol)在THF(1mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.06g,0.41mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.01g,0.14mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 10mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过反相制备型HPLC(方法X16)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.01g,0.02mmol，经两步6％收率)。
LCMS:方法H1,3.15min,MS:ES+491.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.75(d,J＝5.6Hz,1H),8.18(s,1H),7.86(s,1H),7.77(s,1H),7.62(s,2H),4.62-4.63(m,2H),4.36-4.37(m,2H),3.66-3.70(m,1H),3.41-3.44(m,1H),3.00(t,J＝8.0Hz,2H),2.18-2.21(m,1H),1.98-2.03(m,1H),1.57(q,J＝6.8Hz,2H),0.91(t,J＝6.8Hz,3H)；手性SFC:方法Y14,3.61min。
实施例49
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.40g,1.16mmol)和(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.31g,1.68mmol)在MeOH(7mL)中的搅拌溶液中分批加入DMAP(0.17g,1.40mmol)。将混合物在75℃加热16h。将混合物在减压下浓缩以产生(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.29g,0.52mmol,44％收率)。LCMS:方法C,1.68min,MS:ES+564.2。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.29g,0.52mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.5mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.40g，定量收率)。
LCMS:方法C,1.42min,MS:ES+464.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.40g,0.69mmol)在THF(4mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.28g,2.07mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.11g,1.03mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过反相制备型HPLC(方法X14)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.07g,0.12mmol，经两步27％收率)。
LCMS:方法H1,2.79min,MS:ES+489.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.77(br s,1H),8.57(s,2H),7.83(s,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝8.8Hz,1H),4.41-4.49(m,1H),4.24-4.32(m,3H),3.71-3.75(m,1H),3.42-3.46(m,1H),2.67-2.69(m,1H),2.15-2.20(m,1H),1.91-1.96(m,1H),1.05-1.07(m,2H),0.80-0.81(m,2H)；手性SFC:方法Y4,5.48min。
实施例50
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酸乙酯(0.70g,2.04mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.54g,2.04mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.42g,3.06mmol)并在0℃搅拌30min。将混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，40％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g,0.30mmol,27％收率)。
LCMS:方法C,1.85min,MS:ES+564.4。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.40g,0.73mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(2mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰胺TFA盐(0.50g，定量收率)。
LCMS:方法F,5.28min,MS:ES+464.0。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰胺TFA盐(0.50g,0.86mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.59g,4.33mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.09g,0.86mmol)。将混合物在室温搅拌15min，然后倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，87％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰胺(0.12g,0.25mmol，经两步35％收率)。
LCMS:方法H1,3.19min,MS:ES+489.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.85(d,J＝6.8Hz,1H),8.21(s,1H),7.80-7.81(m,2H),7.55(d,J＝7.6Hz,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,1H),4.64-4.66(m,2H),4.36-4.41(m,2H),3.68-3.72(m,1H),3.45-3.48(m,1H),3.35(m,1H),2.19-2.24(m,1H),2.01-2.06(m,1H),1.02-1.06(m,2H),0.77-0.80(m,2H)；手性SFC:方法Y21,7.47min。
实施例51
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺
步骤(iv)
(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酸乙酯(0.15g,0.43mmol)和(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g,0.48mmol)在THF(1.5mL)中的搅拌溶液中分批加入TBD(0.09g,0.65mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后倒入水(10mL)中，并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.14mmol,33％收率)。
LCMS:方法C1,1.35min,MS:ES+564.2。
步骤(ii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g,0.14mmol)在DCM(0.8mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(0.4mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺TFA盐(0.10g，定量收率)。
LCMS:方法C1,1.16min,MS:ES+464.2。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺TFA盐(0.10g,0.21mmol)在THF(1.0mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.12g,0.83mmol)并搅拌5min。在0℃加入溴化氰(0.02g,0.21mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(10mL)中，并用EtOAc(2x 15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过反相制备型HPLC(方法X17)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺(0.02g,0.045mmol，经两步32％收率)。
LCMS:方法F,5.93min,MS:ES+489.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.50(d,J＝4.0Hz,1H),8.20(s,1H),7.94(s,1H),7.78(s,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),4.58-4.69(m,2H),4.35-4.38(m,2H),3.67-3.70(m,1H),3.40-3.43(m,1H),2.57-2.65(m,1H),2.19-2.25(m,1H),1.99-2.02(m,1H),1.06-1.08(m,2H),0.77-0.85(m,2H)；手性SFC:方法Y14,4.11min。
实施例52
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-6-(1H-吲唑-4-基)烟酰胺
步骤(i)
(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(6-溴烟酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃向6-溴烟酸(CAS 6311-35-9，得自Combi-Blocks,0.60g,2.97mmol)和(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.79g,2.97mmol)在THF(6mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(1.14g,1.58mL,0.07mmol)和HATU(1.69g,2.97mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌16h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x 20mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，60％EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(6-溴烟酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.63g,1.40mmol,49％收率)。LCMS:方法C,1.58min,MS:ES+450.2,452.2。
步骤(ii)
(2S,4R)-4-(6-(1H-吲唑-4-基)烟酰氨基)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(2S,4R)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(6-溴烟酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.30g,0.66mmol)和(1H-吲唑-4-基)硼酸(CAS1023595-17-6，得自Combi-Blocks,0.10g,0.66mmol)在1,4-二氧杂环己烷:水(3mL,2:1)中的搅拌溶液中加入K3PO4(0.28g,1.33mmol)。将混合物用N2气体净化15min，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.05g,0.06mmol)并在100℃加热2h。将混合物倒入水(20mL)中，并用EtOAc(3x15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，80％ EtOAc在正己烷类中的溶液)纯化以产生(2S,4R)-4-(6-(1H-吲唑-4-基)烟酰氨基)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.20g,0.41mmol,77％收率)。LCMS:方法C,1.43min,MS:ES+488.3。
步骤(iii)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-6-(1H-吲唑-4-基)烟酰胺TFA盐
在0℃向(2S,4R)-4-(6-(1H-吲唑-4-基)烟酰氨基)-2-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.20g,0.41mmol)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(1.0mL,5体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-6-(1H-吲唑-4-基)烟酰胺TFA盐(0.20g，定量收率)。
LCMS:方法C,1.23min,MS:ES+388.3。
步骤(iv)
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-6-(1H-吲唑-4-基)烟酰胺
在室温向N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-6-(1H-吲唑-4-基)烟酰胺TFA盐(0.20g,0.36mmol)在THF(2mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(0.16g,1.19mmol)并搅拌5min。在0℃向反应混合物中加入溴化氰(0.05g,0.47mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(20mL)中，并用EtOAc(2x 15mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，8％ MeOH在DCM中的溶液)纯化以产生N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-6-(1H-吲唑-4-基)烟酰胺(0.10g,0.24mmol，经两步39％收率)。
LCMS:方法H1,2.14min,MS:ES-411.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.29(s,1H),9.21(d,J＝1.6Hz,1H),8.90(d,J＝6.4Hz,1H),8.66(s,1H),8.33(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),8.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.81-7.83(m,2H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.49-7.53(m,2H),6.31(s,1H),4.33-4.35(m,3H),3.67-3.71(m,1H),3.39-3.44(m,2H),2.07-2.14(m,1H),2.01-2.06(m,1H)。
手性SFC:方法Y32,6.08min。
本发明的化合物的生物活性
缩写：
TAMRA 羧基四甲基罗丹明
Tris 2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇
BSA 牛血清白蛋白
USP30生化IC50测定
在96孔聚丙烯V-底平板(Greiner#651201)中，在50％ DMSO中制备21倍最终浓度(对于100μM的最终浓度，为2100μM)的稀释平板。典型的8点稀释系列最终浓度为100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03μM。在黑色384孔平板(小体积，Greiner 784076)中一式两份地进行反应，最终反应体积为21μl。将1μl的50％ DMSO或稀释的化合物加入平板中。将USP30(Boston Biochem#E582)在反应缓冲液(40mM Tris,pH 7.5,0.005％吐温20,0.5mg/mlBSA,5mMβ-巯基乙醇)中稀释以达到4nM的最终测定浓度，并将10μl稀释的USP30加入化合物中。将酶和化合物在室温温育30分钟。通过添加50nM的TAMRA标记的肽(通过异肽键连接至泛素作为荧光偏振底物)来启动反应。添加底物后立即和在室温温育2小时后读取反应。在Pherastar Plus(BMG Labtech)上进行读数。λ激发540nm；λ发射590nm。
在USP30生化测定中示例性化合物的活性(IC50几何平均值):
TOM20-泛素化测定
可以用线粒体去极化剂(离子载体(例如CCCP、缬氨霉素)、线粒体复合物抑制剂(寡霉素、抗霉素A))刺激人细胞系以诱导TOM20的泛素化，然后在USP30抑制剂存在下进一步促进所述泛素化。随后通过细胞裂解物的蛋白质印迹法来评估TOM20泛素化，由于每添加一个泛素分子，分子量就会增加8kDa，因此可能检测到TOM20泛素化加合物，从而导致TOM20免疫反应带呈梯状。使用梯状免疫反应带的化学发光密度测定法，可以量化TOM20-泛素化水平。
在TOM20-泛素化测定中示例性化合物的活性(TOM20-Ub 1.5倍增益，抗霉素A/寡霉素线粒体自噬触发剂EC1.5x)：
临床前体内模型
使用来自公开的文献的标准研究程序，可以测试本发明的化合物在代表性体内疾病模型中的效力，所述标准研究程序包括例如：
(a)博来霉素诱导的肺纤维化模型，这是一种领先的特发性肺纤维化的临床前体内模型。[Kobayashi等人,2016,J Immunol,197(2):504-516]。
(b)饮食诱导的NAFLD和葡萄糖稳态模型。[Nishida等人,2013,Lab Invest；2月；93(2):230-41]。
(c)帕金森病的MPTP模型，这是一种常用的范例，用于观察由化学地诱导的线粒体功能障碍引发的脑的多巴胺能系统中的神经变性。[Karuppagouner等人,2014,SciRep.2014年5月2日；4:4874]。
(d)Ndufs4KO Leigh综合征模型。[Kruse等人,2008,Cell Metab.4月；7(4):312-20]。
(e)老化小鼠模型：对认知和运动功能的影响。[Kobilo等人,2014,Learn Mem.Jan17；21(2):119-26；Creed等人,2019,Neuroscience.Jun15；409:169-179]
(f)单侧输尿管阻塞性肾脏疾病模型(UUO)。[Chevalier等人,2009,Kidney Int75(11):1145-1152]
(g)缺血诱导的急性肾损伤模型(AKI)。

Claims (40)

1.式(I)的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
(a)X1是N；且
X2、X3和X4是CR6；或
(b)X1是N；
X2、X3和X4中的一个是N；且
X2、X3和X4中的两个是CR6；或
(c)X1和X4是CR6；且
X2和X3是N；
环A选自：
(i)包含1至3个杂原子的5元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N和O；
(ii)包含1至3个杂原子的6元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；
(iii)包含1至3个杂原子的4至6元饱和的或部分饱和的单环杂环基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；和
(iv)苯基或萘基；
环A是未被取代的或被1或2个R7取代基取代；
环B选自：
(i)苯基或萘基；
(ii)包含1至3个杂原子的5至6元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；和
(iii)包含1至4个杂原子的9至10元二环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S；
环B是未被取代的或被1至5个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、O(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、氧杂环丁基氧基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、NH(C1-C6)烷基、N((C1-C6)烷基)2、C(O)NH(C1-C6)烷基、C(O)N((C1-C6)烷基)2、NHC(O)(C1-C6)烷基、N(C1-C6)烷基)C(O)(C1-C6)烷基)、C(O)(C1-C6)烷基、C(O)O(C1-C6)烷基、CO2H、CONH2、SO2NH(C1-C6)烷基和SO2N((C1-C6)烷基)2；
R1选自氢、(C1-C6)烷基和(C3-C6)环烷基；
R2和R3各自独立地选自氢、卤素、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基；
R4和R5各自独立地选自氢和(C1-C4)烷基；
R6是氢或(C1-C4)烷基；且
每个R7独立地选自卤素、(C1-C6)烷基和(C1-C6)烷氧基；
前提条件是，当环A是未被取代的噁唑基或噁二唑基，且环B是苯基，且R1、R2、R3、R4和R5各自是氢，且X1、X2、X3和X4中的两个是N时，则环B在相对于环A的间位没有被CF3取代。
2.具有式(IA)的根据权利要求1所述的化合物：
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
Z是N或CR11；
R8、R11和R12各自独立地选自氢、卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、O(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、氧杂环丁基氧基、氮杂环丁基、吡咯烷基和哌啶基；
R9和R10各自独立地选自氢、卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、O(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、氧杂环丁基氧基、氮杂环丁基、吡咯烷基和哌啶基；
或R9和R10一起形成包含1至2个杂原子的5至6元饱和的、部分饱和的或芳族环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S，其中所述环是未被取代的或被1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、CN、羟基、氧代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷基和卤代(C1-C6)烷氧基；
前提条件是，当环A是未被取代的噁唑基或噁二唑基，且R1、R2、R3、R4和R5各自是氢，且X1、X2、X3和X4中的两个是N，且Z是CR11且R11是氢或卤素时，则R9不是CF3。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中Z是CR11。
4.根据权利要求2所述的化合物，其中Z是N。
5.根据权利要求1至4中的任一项所述的化合物，其中环A是包含1至3个杂原子的5元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N和O。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中环A选自噁唑基和噁二唑基。
7.根据权利要求1至4中的任一项所述的化合物，其中环A是包含1至3个杂原子的6元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中环A是吡啶基。
9.根据权利要求1至4中的任一项所述的化合物，其中环A是吡咯烷基。
10.根据权利要求1至4中的任一项所述的化合物，其中环A是苯基。
11.根据权利要求1至10中的任一项所述的化合物，其中R1选自氢、甲基和环丙基。
12.根据权利要求1至11中的任一项所述的化合物，其中R2、R3、R4和R5各自是氢。
13.根据权利要求1至12中的任一项所述的化合物，其中R6是氢或甲基。
14.根据权利要求1至13中的任一项所述的化合物，其中环A是未被取代的。
15.根据权利要求1至13中的任一项所述的化合物，其中每个R7独立地选自氟、氯、甲基和甲氧基。
16.根据权利要求1至15中的任一项所述的化合物，其中R8和R11各自独立地选自氢、CN和卤素。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中R8和R11各自是氢。
18.根据权利要求1至17中的任一项所述的化合物，其中R9选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
19.根据权利要求18所述的化合物，其中R9选自氢、氯、CN、乙基、环丙基、CF3和OCF3。
20.根据权利要求1至19中的任一项所述的化合物，其中R10选自氢、氟和CN。
21.根据权利要求20所述的化合物，其中R10是氢。
22.根据权利要求1至17中的任一项所述的化合物，其中R9和R10一起形成包含1至2个杂原子的5元部分饱和或芳族环，所述杂原子各自独立地选自N、O和S，其中所述环是未被取代的或被1至2个取代基取代，所述取代基各自独立地选自氟、氯、甲基和甲氧基。
23.根据权利要求1至22中的任一项所述的化合物，其中R12选自氢、卤素、CN、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、环丙基、环丙氧基、CF3、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
24.根据权利要求23所述的化合物，其中R12选自氢、甲氧基、环丙基、环丙氧基、OCF3和氧杂环丁烷-3-基氧基。
25.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自：
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氯苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-乙基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-环丙基苯基)噁唑2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-N-环丙基噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基)吡啶甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-4-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡啶甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-氰基苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-1-氰基-5-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)(3(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-2-氟-4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)苯甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺；
(S)-N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺；
(R)-N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-5-氰基吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(5-氰基-2-环丙基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-3-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5-甲酰胺；
N-((3R,5S)-5-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙基-5-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺；和
N-((3R,5S)-5-((1H-吡唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-6-(1H-吲唑-4-基)烟酰胺；
其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
26.用于用作药物的根据权利要求1至25中的任一项所述的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
27.用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症或纤维化的根据权利要求1至25中的任一项所述的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
28.根据权利要求1至25中的任一项所述的化合物、其互变异构体或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症或纤维化。
29.一种用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症或纤维化的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1至25中的任一项所述的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐的步骤。
30.根据权利要求27至29所述的化合物、用途或方法，其中所述涉及线粒体功能障碍的病症选自：CNS障碍；神经变性疾病；帕金森病；阿尔茨海默氏病；肌萎缩性侧索硬化；亨廷顿病；缺血；中风；路易小体痴呆；额颞叶痴呆；多发性硬化；线粒体脑病、乳酸性酸中毒和中风样发作综合征；母系遗传性糖尿病和耳聋；Leber氏遗传性视神经病；癌症；神经病、共济失调、色素性视网膜炎-母系遗传性Leigh综合征；Danon病；糖尿病；糖尿病性肾病；代谢障碍；心力衰竭；导致心肌梗塞的缺血性心脏病；精神病学疾病、精神分裂症；多种硫酸酯酶缺乏症；粘脂质贮积症II；粘脂质贮积症III；粘脂质贮积症IV；GMl-神经节苷脂贮积病；神经元蜡样质-脂褐素增多症；阿尔珀斯病；Barth综合征；β-氧化缺陷；肉碱-酰基-肉碱缺乏；肉碱缺乏；肌酸缺乏综合征；辅酶Q10缺乏；复合物I缺乏；复合物II缺乏；复合物III缺乏；复合物IV缺乏；复合物V缺乏；COX缺乏；慢性进行性外侧眼肌麻痹综合征；CPTI缺乏；CPTII缺乏；戊二酸尿症II型；卡恩斯-塞尔综合征；乳酸性酸中毒；长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏；Leigh氏病或综合征；Leigh综合征法国-加拿大变体；致死性婴儿心肌病；勒夫特病；中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏；肌阵挛型癫痫和破碎红纤维综合征；线粒体细胞病；线粒体隐性遗传性共济失调综合征；线粒体DNA耗竭综合征；肌神经胃肠道障碍和脑病；皮尔逊综合征；丙酮酸脱氢酶缺乏；丙酮酸羧化酶缺乏；POLG突变；中/短链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶缺乏；和极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏；过氧化物酶体障碍；甲基丙二酸血症；甲羟戊酸激酶缺乏；年龄依赖性的认知功能和肌肉强度下降；肌肉结构障碍；以及与神经变性和神经精神病学障碍相关的认知损害。
31.根据权利要求30所述的化合物、用途或方法，其中所述神经变性疾病选自帕金森病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿病、缺血、中风、路易小体痴呆、多系统萎缩、进行性核上性麻痹、皮质基底变性、额颞叶痴呆；和与α-突触核蛋白、parkin、PINK1、GBA和LRRK2中的突变有关的帕金森病，以及其中parkin发生突变的常染色体隐性的青少年帕金森病。
32.根据权利要求30所述的化合物、用途或方法，其中所述神经变性疾病选自Leigh综合征或疾病、X-连锁的Leigh氏病、Leigh综合征法国-加拿大变体和/或与Leigh氏病相关的症状。
33.根据权利要求27至29所述的化合物、用途或方法，其中所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌、肝癌、软组织癌、组织器官的癌症、血细胞的癌症、CML、AML、套细胞淋巴瘤、神经母细胞瘤、黑素瘤、软组织肉瘤、脂肉瘤、成纤维细胞性肉瘤、平滑肌肉瘤、肝细胞癌、骨肉瘤、食道癌、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、转移性癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、鼻咽癌、结直肠癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、其中细胞凋亡途径失调的癌症、以及其中BCL-2家族的蛋白发生突变或过表达或表达不足的癌症。
34.根据权利要求27至29所述的化合物、用途或方法，其中所述纤维化选自在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增生和瘤形成以后发生的、与细胞外基质组分的积累相关的纤维化或纤维化障碍。
35.根据权利要求34所述的化合物、用途或方法，其中所述纤维化选自与主要器官疾病相关的纤维化、纤维化障碍，纤维增生性障碍，和与创伤相关的瘢痕形成。
36.根据权利要求35所述的化合物、用途或方法，其中所述纤维化选自与以下相关的纤维化或纤维化障碍：间质性肺病、肝硬化、非酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪肝病和非酒精性脂肪性肝炎、肾脏疾病、急性肾损伤、慢性肾脏疾病、肾移植物功能延迟、心脏或血管疾病、眼疾病、全身性和局部性硬皮病、瘢痕疙瘩、肥大性疤痕、动脉粥样硬化、再狭窄、杜普伊特伦氏挛缩、外科手术并发症、化疗药物诱导的纤维化、辐射诱导的纤维化、意外损伤和烧伤、腹膜后纤维化和腹膜纤维化/腹膜瘢痕形成。
37.根据权利要求36所述的化合物、用途或方法，其中所述与间质性肺病相关的纤维化选自结节病、硅沉着病、药物反应、感染、胶原血管疾病、类风湿性关节炎、系统性硬化症、硬皮病、肺纤维化、特发性肺纤维化、常见间质性肺炎、间质性肺病、隐发性纤维化肺泡炎、闭塞性细支气管炎和支气管扩张。
38.根据权利要求36所述的化合物、用途或方法，其中所述肾脏疾病是急性肾损伤或慢性肾脏疾病。
39.一种药物组合物，其包含如在权利要求1至25中的任一项中所定义的式(I)的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐、以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
40.选自式(II)和(III)的化合物、其互变异构体、或者所述化合物或互变异构体的盐：
其中PG是保护基，且环A、环B、X1、X2、X3、X4、R1、R2、R3、R4和R5如在权利要求1至25中的任一项中关于式(I)的化合物所定义；且其中所述保护基优选地选自叔丁基氧基羰基、苄氧基羰基、对甲氧基苄基羰基、9-芴基甲氧羰基、乙酰基、苯甲酰基、苄基、氨基甲酸酯、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、对甲氧基苯基、甲苯磺酰基、三氯乙氧基羰基、4-硝基苯磺酰基和2-硝基苯基次磺酰基。
CN202280078062.7A 2021-12-01 2022-11-30 具有作为usp30抑制剂的活性的取代的n-氰基吡咯烷 Pending CN118302422A (zh)

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