CN118272277A

CN118272277A - 一种能够缓解腹泻的动物双歧杆菌及其应用

Info

Publication number: CN118272277A
Application number: CN202410676684.0A
Authority: CN
Inventors: 马新; 喻扬; 郁雪平
Original assignee: Thankcome Biotechnology Suzhou Co ltd
Current assignee: Thankcome Biotechnology Suzhou Co ltd
Priority date: 2024-05-29
Filing date: 2024-05-29
Publication date: 2024-07-02

Abstract

本发明属于微生物技术领域，涉及一种能够缓解腹泻的动物双歧杆菌及其应用。本发明提供了一种动物双歧杆菌，所述动物双歧杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:64207。本发明提供的动物双歧杆菌QC08可以恢复抗生素腹泻导致的体重下降，可以增强肠道作用，使得肠道结构恢复正常，保护肠结构，促进肠道蠕动。另外，还能调节紊乱的肠道菌群进而缓解小鼠腹泻情况。本发明提供的动物双歧杆菌QC08在保健品和医药领域具有较佳的应用。

Description

一种能够缓解腹泻的动物双歧杆菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一种能够缓解腹泻的动物双歧杆菌及其应用，具体涉及一种能缓解抗生素诱导的腹泻的动物双歧杆菌及其应用。

背景技术

腹泻（diarrhea），是指患者排便次数和形状发生的变化。通常会使患者排便次数增多，粪便量也会随之增加，除此之外，有的粪便还会带有一丝血迹和未消化物，除此之外新鲜的粪便还会充斥着一种难闻的酸菜味。腹泻可以分为急性和慢性腹泻两种，依据病程和发病的缓急和严重程度。很多情况都会导致腹泻，比如在肠道菌群紊乱，还有患者自身的健康情况等等都有可能导致腹泻。

抗生素是一种有效的治疗策略可以被用于来治疗疾病。然而，长期使用或者乱用抗生素会增加临床并发症的风险，其中经常出现的疾病就是抗生素相关性腹泻（antibiotic-associated diar rhea，AAD）也叫作不明原因的腹泻，可分为重度和轻度，是指使用抗菌药物后出现的没有办法用其他原因解释的腹泻，轻度的腹泻患者往往会表现为腹泻，随着病情的持续发展，患者出现发热、乏力、腹痛等各种腹泻症状，严重者可能还会引起伪膜性肠炎，严重威胁者患者生命安全。目前发现可以使用粪菌移植补充微生态制剂、单克隆抗体疗法和补充微生态制剂等多种方法来对腹泻患者进行有效的治疗，根据研究发现益生菌能够有效的治疗和预防因为抗生素而引起的腹泻情况，益生菌能够通过多种机制维持患者肠道菌群平衡，使得患者的肠道菌群趋于稳定。

肠道具有屏障作用同时也是机体消化吸收营养物质的主要场所。正常肠道屏障功能应包括肠道菌群和肠道内分泌、肠道免疫系统、肠黏膜上皮屏障，这三个功能中最重要的就是肠黏膜上皮屏障。肠黏膜上皮屏障能使肠道稳定的表达基因，如果损伤了肠道黏膜层，就会导致水盐平衡被打破，使得通透性增加，引起肠道菌群紊乱，这样极易引发肠道炎症性疾病，降低其生产性甚至导致死亡。

中国专利申请CN117568211A公开了一株具有抗沙门氏菌感染功能的植物乳植杆菌GOLDGUT-LP618及其应用。所述植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)GOLDGUT-LP618保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo. 28399。该菌株具有较高的耐酸和耐胆盐能力，可适应消化道环境；能够抑制沙门氏菌感染，缓解因沙门氏菌感染导致的腹泻、炎症和肠道损伤，促进肠道健康，可用于制备抗沙门氏菌感染、改善因沙门氏菌感染导致的腹泻和炎症的功能食品、膳食补充剂或药物，具有较好的应用前景。

中国专利申请CN116790448A公开了一株能够缓解便秘和腹泻的瑞士乳杆菌OPB102和应用，名称为：OPB102，分类名称为：瑞士乳杆菌，保藏编号为：CGMCC No. 26806，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。所述OPB102能够耐受胃肠道环境，可用于制备缓解便秘或腹泻的功能性菌剂、食品和药物；同时能够恢复受损的结肠组织、改善绒毛密度和增加杯状细胞数量。

目前本领域需要更多的用于缓解腹泻的益生菌。

发明内容

动物双歧杆菌是双歧杆菌的一个亚种，属于人类肠道中的固有菌。动物双歧杆菌能够抑制腐生菌生长，因为动物双歧杆菌会产生醋酸、乳酸使得患者肠道中pH值降低，此外动物双歧杆菌还能产生类似于细菌素的蛋白质，具有一定的杀菌作用。

本实验采用动物双歧杆菌QC08对抗生素诱导小鼠进行实验，探索动物双歧杆菌对抗生素诱导小鼠腹泻的缓解机制。

为了实现上述技术目的，本发明提出了以下技术方案：

在一个方面，本发明提供了一种动物双歧杆菌（Bifidobacterium animalis），所述动物双歧杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No: 64207。

在一些实施方案中，所述动物双歧杆菌用于缓解腹泻。

在一些优选的实施方案中，所述动物双歧杆菌用于缓解抗生素诱导的腹泻。

在另一方面，本发明提供了一种培养物，所述培养物为前述任一动物双歧杆菌经培养基培养而得。

本发明所述的培养基包括微生物增殖、存活或生长必需的碳源、氮源和/或磷源，任选的，还可包含对微生物增殖、存活或生长有所助益的微量元素等生长添加剂。

本领域技术人员可以使用本领域中已知的任何标准或已知的静态干燥或液体发酵技术制备本发明所述的“培养物”或“微生物培养物”，以用于本文中的组合物或产品中。微生物培养的最佳条件可以取决于具体菌株。本领域的技术人员将能够确定合适的营养素和条件。微生物可以在培养基上的好氧、厌氧或兼性厌氧的液体培养物中生长。

在一些实施方案中，所述培养基为用于培养乳酸菌的培养基。

在一些优选的实施方案中，所述培养基为用于培养乳酸杆菌的培养基。

在一些优选的实施方案中，所述培养基为MRS培养基或MRS改良培养基。

在一些实施方案中，所述培养物包括，但不限于：前述任一动物双歧杆菌的活菌、灭活菌体、分泌物或代谢产物。

在又一方面，本发明提供了一种菌剂，所述菌剂包含前述任一动物双歧杆菌或培养物。

在一些实施方式中，所述菌剂还包括增强所述动物双歧杆菌或培养物稳定性、或有助于所述动物双歧杆菌或培养物发挥生物学功能的助剂，例如：食品、保健品（保健食品）或药物生产标准中规定的防腐剂以安全剂量添加也是允许的。

在又一方面，本发明提供了前述任一动物双歧杆菌、培养物或菌剂在制备预防、治疗和/或辅助治疗腹泻的产品中的应用。

在一些优选的实施方案中，所述腹泻为抗生素诱导的腹泻。

在一些实施方案中，所述产品包括药物或食品。

在一些优选的实施方案中，所述食品为保健食品（保健品）。

在一些实施方案中，所述保健食品包括营养素补充剂或功能性保健食品。

在又一方面，本发明提供了一种预防、治疗和/或辅助治疗腹泻的产品，所述产品包括前述任一动物双歧杆菌、培养物或菌剂。

在一些优选的实施方案中，所述腹泻为抗生素诱导的腹泻。

在一些实施方案中，所述产品的每单位至少包含1×10⁸CFU所述动物双歧杆菌。

在一些实施方案中，所述产品的每单位至少包含1×10⁸、1×10⁹、1×10¹⁰、1×10¹¹、1×10¹²CFU所述动物双歧杆菌。

在一些优选的实施方案中，所述产品的每单位至少包含1×10⁹CFU所述动物双歧杆菌。

所述每单位取决于产品的剂型或包装形式，例如每片、每罐、每颗、每粒、每包等，具体以生产实践或商品包装为准。

在一些实施方案中，所述产品包括药物或食品。

在一些优选的实施方案中，所述食品为保健食品。

在一些实施方案中，所述产品还包含至少一种生理上可接受的辅料、或药学上可接受的赋形剂。

在一些实施方案中，所述生理上可接受的辅料包括，但不限于：赤藓糖醇、D-甘露糖醇、富马酸、甘油、果胶、海藻酸钾、海藻酸钠、滑石粉、焦磷酸钠、聚葡萄糖、卡拉胶、抗坏血酸钠、抗坏血酸棕榈酸酯、L-苹果酸、L(+)-酒石酸、麦芽糖醇、明胶、木糖醇、柠檬酸、柠檬酸钾、柠檬酸钠、柠檬酸脂肪酸甘油酯、琼脂、乳酸、乳酸钠、山梨酸及其钾盐、山梨糖醇、酸性红、碳酸钙、碳酸钠、碳酸氢钠、甜菜红、维生素C、维生素E、氧化淀粉、乙醇、乙酸钠、硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸镁和/或糊精。

在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂包括，但不限于：溶剂、稀释剂、崩解剂、沉淀抑制剂、表面活性剂、助流剂、粘合剂、润滑剂、分散剂、助悬剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂和/或抗氧化剂。

在一些实施方案中，所述产品为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气体制剂。

在一些实施方案中，所述产品为食品，包括，但不限于：糖果制品、发酵饮料、巧克力、发酵乳、冰激凌、能量棒、烘焙品、饼干或罐头等。

在一些实施方案中，所述产品为保健食品，包括营养素补充剂或功能性保健食品。

在一些实施方案中，所述保健食品还包括用于缓解腹泻第二益生菌。

在一些实施方案中，所述第二益生菌为产酸的益生菌，

在一些优选的实施方案中，所述产酸的益生菌包括，但不限于：植物乳杆菌、植物乳植杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、卷曲乳杆菌或乳酸片球菌。

在一些实施方案中，所述保健食品的剂型包括，但不限于：片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、丸剂、凝胶糖果、粉剂、口服液或滴剂。

在一些优选的实施方案中，所述营养素补充剂包括单一营养素补充剂和复合营养素补充剂。

在一些优选的实施方案中，所述功能性保健食品为有助于缓解腹泻的功能性保健食品。

在一些实施方案中，所述产品为药物。

在一些实施方案中，所述药物还包括用于促进消化、和/或预防、治疗或辅助治疗腹泻的第二治疗剂。

在一些实施方案中，所述第二治疗剂包括，但不限于：蒙脱石散、消旋卡多曲、口服补液盐、左氧氟沙星、诺氟沙星、盐酸小襞碱片、复方黄连素片。

抗生素杀伤肠道内对人体健康有益的细菌，造成菌群失调，引起食物代谢障碍而发生渗透性腹泻；菌群失调引起肠粘膜的保护屏障破坏，引发感染性腹泻。本发明提供的动物双歧杆菌QC08可以恢复抗生素腹泻导致的体重下降，可以增强肠道作用，使得肠道结构恢复正常，保护肠结构，促进肠道蠕动。另外，还能调节紊乱的肠道菌群进而缓解小鼠腹泻情况。具体而言，动物双歧杆菌QC08能够通过恢复肠组织形态，调节肠组织中的水分，调控血清中的细胞因子含量和相关基因的mRNA表达水平，从而维持肠道正常运动，缓解腹泻症状。因此，本发明提供的动物双歧杆菌QC08在保健品和医药领域具有较佳的应用。

保藏信息：

生物材料名称：Bifidobacterium animalisQC08；

分类命名：Bifidobacterium animalis；

保藏日期：2023年12月28日；

保藏编号：GDMCC No: 64207；

保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心；

保藏单位简称：GDMCC；

保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

附图说明

图1示出了不同实验组小鼠体重的变化情况。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图2示出了不同实验组小鼠血清中MDA含量的变化情况。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图3示出了不同实验组小鼠血清中IL-17A含量的变化情况。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图4示出了不同实验组小鼠血清中IL-6含量的变化情况。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图5示出了不同实验组小鼠血清中5-HT含量的变化情况。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图6示出了不同实验组小鼠血清中T-AOC含量的变化情况。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图7示出了不同实验组小鼠小肠H&E染色结果。

图8示出了不同实验组小鼠结肠H&E染色结果。

图9示出了不同实验组小鼠小肠组织中CFTR的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图10示出了不同实验组小鼠小肠组织中EGFR的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图11示出了不同实验组小鼠小肠组织中TGFβ1的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图12示出了不同实验组小鼠小肠组织中NHE1的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图13示出了不同实验组小鼠小肠组织中NHE4的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图14示出了不同实验组小鼠结肠组织中CFTR的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图15示出了不同实验组小鼠结肠组织中EGFR的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图16示出了不同实验组小鼠结肠组织中TGFβ1的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图17示出了不同实验组小鼠结肠组织中NHE1的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

图18示出了不同实验组小鼠结肠组织中NHE4的mRNA相对表达水平。其中*，**，***，****分别表示各组在Dunnett多重比较检验中与腹泻组有显著性差异，p值分别为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

具体实施方式

除非另有定义，否则本发明使用的所有技术术语和科技术语都具有如在本发明所属领域中通常使用的相同含义。出于解释本说明书的目的，将应用以下定义，并且在适当时，以单数形式使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。

除非上下文另有明确说明，否则本文所用的表述“一种”和“一个”包括复数指代。例如，提及“一个细胞”包括多个这样的细胞及本领域技术人员可知晓的等同物等等。

本文所用的术语“约”表示其后的数值的±20%的范围。在一些实施方式中，术语“约”表示其后的数值的±10%的范围。在一些实施方式中，术语“约”表示其后的数值的±5%的范围。

本文所使用的数值范围应被理解为已经列举了对该范围内的所有数字。例如，1至20的范围应当理解为包括来自下组的任何数字、数字组合或子范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。

本文所用的术语“包括（comprises）”或“包含（comprising）”是指“包括但不限于”。该术语旨在是开放式的，以指定任何所述特征、要素、整数、步骤或组件的存在，但不排除一个或多个其他特征、要素，整数、步骤、组件或其组的存在或添加。因此，术语“包含”包括更具限制性的术语“由……组成”和“基本上由……组成”。在一个实施方式中，在整个申请中特别是在权利要求书中使用的术语“包含”可以被术语“由……组成”代替。

本文所用的术语“任选”、“任一”、“任意”或“任一项”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。本发明所用，“一个”和“一种”在本发明中用来指的一个或多于一个的语法对象。

本文所用的术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项中的任意两项或更多项的组合。

本文所用的术语“培养物”，是指一定时间一定空间内微生物的活细胞群或活生长物。如微生物的斜面培养物、摇瓶培养物等。在一些实例中，是指在人为规定的条件下培养、繁殖得到的活的微生物群体。

本文所用的术语“培养基”，是指含有可以被微生物吸收并且支持有效的细胞生长的碳源、氮源和无机盐来源。碳源可以包括己糖，如葡萄糖，并且可以使用其他易于吸收的来源，如氨基酸。许多无机和蛋白质材料可以用作生长过程中的氮源。氮源可以包括氨基酸和尿素，以及氨、无机硝酸盐和铵、维生素、嘌呤、嘧啶、酵母提取物、牛肉提取物、朊蛋白胨、大豆粉、酪蛋白的水解产物、烧酒糟残液等。可以并入营养培养基中的无机矿物质为能够产生钙、锌、铁、锰、镁、铜、钴、钾、钠、钼酸根、磷酸根、硫酸根、氯离子、硼酸根和类似离子的盐。

为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步的详细说明。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所有试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购的常规产品。为了更好地说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于构成对本发明的任何限制。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。这样的结构和技术在许多出版物的出版中也进行了描述。

本发明涉及的主要试剂、仪器或材料如表1所示。

表1

本发明采用昆明雄性小鼠（七周龄），体重为25±2.5 g，来源于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证编号：SCXK（湘）2019-0004。饲养环境要求：12小时白昼/12小时黑夜，温度25±2°C，分笼分组饲养，平均每笼10只进行小鼠适应性喂养7天。

本发明的数据使用SPSS数据统计软件ANOVA（one-way）进行显著性分析（p＜0.05），采用单因素方差分析各组之间是否存在显著性差异，再用Duncan’s多重比较。

实施例1 动物双歧杆菌QC08的发酵培养

将冻存的动物双歧杆菌QC08悬液以4.5%的接种量接种到发酵培养基中发酵培养，37°C，厌氧发酵24 h，获得动物双歧杆菌发酵液。离心后重悬菌液，以备后续使用。

所述发酵培养基包括以下重量份组分：蛋白胨10份、酵母浸粉8份、葡萄糖20份、磷酸氢二钾3份、硫酸镁0.2份、醋酸钠3份、硫酸锰0.01份和水1000份。

实施例2 动物双歧杆菌QC08对体重的影响

2.1 动物模型的构建

将50只雄性昆明小鼠随机分为5组：高剂量组、低剂量组、阳性药组、正常组、腹泻组，每组10只。从实验第一天起除正常组外其余组别小鼠灌胃浓度为120 mg/kg 的盐酸林可霉素注射液，连续7天，随后正常组和腹泻组给予生理盐水0.2 mL灌胃，低剂量组、高剂量组分别灌胃浓度为1×10⁸CFU/kg、1×10⁹CFU/kg的动物双歧杆菌QC08，阳性药组灌胃双歧杆菌四联活菌片（21.06 mg/kg），共灌胃14天，每日测量并记录小鼠体重。第15天所有小鼠禁食不禁水12小时后静脉取血并处死。

2.2 动物双歧杆菌QC08对抗生素诱导腹泻小鼠的体重的影响

结果显示，与正常组相比，腹泻组小鼠随着时间的推移，体重逐渐下降，经过动物双歧杆菌QC08灌胃后，小鼠体重显著回升，但仍低于正常组，阳性药组与低剂量组趋势呈相同趋势，且高剂量组效果显著优于阳性药组（图1）。

实施例3 动物双歧杆菌QC08对血清因子的影响

本实施例的实验分组以及动物模型构建均同实施例2。

将小鼠眼眶静脉取血后，用台式高速冷冻离心机在4°C，14000 r/min下离心10min，取小鼠血清上清液重复此操作三次，将第三次离心后的上清液利用相应的ELISA试剂盒测定小鼠血清中总抗氧化能力（T-AOC），丙二醛（MDA），5羟色胺（5-HT），小鼠白细胞介素（IL-6、IL-17）。

结果显示，促炎因子IL-6、IL-17A，氧化因子MDA和胃肠激素5-HT的表达在腹泻组小鼠的血清中呈高表达，经动物双歧杆菌QC08与阳性药干预后，表达显著下降（p＜0.05）（图2-图5）。与腹泻组相比，抗氧化因子T-AOC的表达在高剂量组小鼠的血清中显著提高，阳性药组和低剂量组的表达与高剂量组呈相同趋势（p＜0.05）（图6）。

实施例4 动物双歧杆菌QC08对肠道组织的影响

本实施例的实验分组以及动物模型构建均同实施例2。

小鼠处死后取小肠和结肠组织，首先用中性的福尔马林浸泡固定小鼠的肠（小肠和结肠）组织，随后进行包埋、切片、染色和制片，最后使用光学显微镜进行病理学观察，并拍摄典型图像。

4.1 小肠组织的病理观察

结果显示，正常组小鼠的小肠在切片镜下可见肠绒毛结构完整，肠上皮细胞形态完整，排列紧密；腹泻组的小肠切片在切片镜下可见小肠绒毛结构被破坏，肠上皮结构也被破坏，并伴随水肿，病变细胞坏死；阳性药组的小鼠小肠切片在切片镜下可见小肠肠绒毛结构完整，相比于正常组的肠绒毛有所增宽；高剂量组的小鼠小肠在切片镜下可见肠绒毛增宽结构相对完整，部分肠绒毛断裂或溶解；低剂量组的小鼠小肠在切片镜下可见小肠绒毛结构完整跟药物组相差不大（图7）。

4.2 结肠组织的病理观察

结果显示，正常组的结肠切片在切片镜下可见结肠各个组织结构很完整，上皮细胞排列整齐，看起来是很清晰的树状结构；腹泻组的结肠组织结构严重破坏，肠绒毛脱落或断裂严重，病变或者坏死；阳性药组与正常组相比肠绒毛明显增宽，结构完整未见明显水肿现象，没有明显的脱落或熔断情况发生；高剂量组的结肠切片在切片镜下可见肠绒毛与正常组相比明显增宽，肠上皮细胞相对完整，可见部分有扭曲现象，有少量炎症细胞浸润；低剂量组未见明显断裂或熔断，肠绒毛结构完整，排列紧密（图8）。

实施例5 动物双歧杆菌QC08对肠道组织相关基因mRNA表达水平的影响

本实施例的实验分组以及动物模型构建均同实施例2。

小鼠处死后采集小鼠肠道组织，检测相关基因（TGFβ1、EGFR、NHE1、NHE4和CFTR）的mRNA相对表达水平。PCR的反应程序为：95℃变性10s，60℃退火20s，72℃延伸20s循环40次。检测引物如表2所示。

表2

5.1动物双歧杆菌QC08对小肠组织相关基因mRNA表达水平的影响

结果显示，由盐酸林可霉素诱导的腹泻组小鼠与正常组相比，腹泻组增加了EGFR、TGFβ1和CFTR基因的表达，降低了NHE1和NHE4的表达（p＜0.05）（图9-图13）。通过灌胃双歧杆菌四联活菌片和动物双歧杆菌QC08后，腹泻组小鼠小肠组织中的CFTR、EGFR和TGFβ1的表达显著降低，同时NHE1和NHE4的表达明显增强（p＜0.05）（图9-图13）。其中，高剂量组优于药物组，而阳性药组优于低剂量组。

5.2动物双歧杆菌QC08对结肠组织相关基因mRNA表达水平的影响

结果显示，CFTR、TGFβ1和EGFR的表达在腹泻组小鼠的结肠组织内呈现高表达，而NHE1和NHE4的表达与正常组相比，显著降低。与腹泻组相比，高剂量组、阳性药组和低剂量组小鼠结肠内的CFTR、EGFR和TGFβ1的表达明显下降（p＜0.05），NHE1和NHE4的含量显著提高（p＜0.05）（图14-图18）。

肠道黏膜层如果缺失或破坏，会导致机体的消化吸收能力和抵抗体外抗原侵袭的能力降低，继而引发诸多肠道疾病。本发明用盐酸林可霉素注射液120 mg/kg诱导抗生素腹泻模型，抗生素杀伤肠道内对人体健康有益的细菌，造成菌群失调，引起食物代谢障碍而发生渗透性腹泻；菌群失调引起肠粘膜的保护屏障破坏，引发感染性腹泻。本发明的结果显示腹泻组的小鼠结肠和小肠在切片镜下都有炎症现象有大面积的深层溃疡，肠绒毛上面的组织也大面积脱落，灌胃了动物双歧杆菌QC08组的小肠和结肠切片在肠切片镜下没有发现病变现象，且结肠的肠绒毛明显增宽，小肠和结肠切片在切片镜下也趋于正常形态，肠绒毛排列紧密，脱落或断裂的情况很少，因此动物双歧杆菌QC08可能具有恢复肠组织形态的作用。

抗生素诱导腹泻往往伴随着全身炎症的发生，促炎细胞因子分泌增加。IL-6在肠上皮屏障中起重要作用，实验发现促炎因子IL-6、IL-17A的腹泻组比其他组都高，且与高剂量组有显著性（p＜0.05），表明动物双歧杆菌QC08对促炎因子有抑制作用；T-AOC是衡量机体内氧化应激水平的指标之一。腹泻时，体内氧自由基会急剧增多进而激发自由基连锁反应使脂质过氧化导致MDA含量增高。正如实验结果腹泻组小鼠血清中的MDA在所有组内表达最高，T-AOC表达最低，而在药物组和高剂量组，低剂量组中MDA都有所降低，T-AOC都相应提高。表明动物双歧杆菌QC08能通过调控氧化指标，缓解腹泻小鼠的氧化应激状况。5-HT是存在于胃肠道的重要的神经递质之一，当机体内发生腹泻时，其表达会增强，同时引发胃肠道运动的收缩。实验结果显示，高剂量和低剂量能有效降低腹泻小鼠血清中5-HT的含量，表明动物双歧杆菌QC08可通过下调5-HT因子的表达，维持肠道正常运动，缓解腹泻症状。

胃肠道电解质平衡紊乱，粪便中水分增加，往往会诱发腹泻症状。研究发现，由位于肠腔侧的Na+/H+交换子(NHEs)介导的电中性途径可吸收大量的NaCl。而NHE1、NHE4则是对于肠道电中性钠吸收发挥重要作用的运载体。实验结果显示，腹泻组小鼠中NHE1和NHE4的水平表达显著降低，但通过动物双歧杆菌QC08处理，有效提升了NHE1和NHE4因子的表达，说明动物双歧杆菌QC08能通过调节离子通道运输，维护肠道电解质平衡，从而缓解小鼠的腹泻症状。转化生长因子-β1（TGF-β1）是一种多功能细胞因子，可调节各种细胞类型的生长和分化，促进炎症并抑制免疫。实验结果发现，高剂量组和低剂量组小鼠的结肠和小肠中，TGFβ1的含量较腹泻组小鼠而言显著降低，说明动物双歧杆菌QC08可通过抑制TGFβ1过度表达，从而维护肠道动态平衡。CFTR叫做囊性纤维化跨膜转导调节因子，主要是通过激活氯离子通路进行对细胞的水分进行调控，而同样作为表皮生长因子的EGFR也能够通过抑制细胞的生长导致肠道发生水肿现象。由实验数据可知在高剂量组和低剂量组小鼠的小肠和结肠中CFTR和EGFR的基因表达都显著低于腹泻组（p＜0.05），表明动物双歧杆菌QC08能够通过降低CFTR和EGFR基因的表达来调节肠组织中的水分，使得肠组织能恢复正常的肠道蠕动。

综上所述，动物双歧杆菌QC08是一种肠道中重要的益生菌，可以增强肠道作用，使得肠道结构恢复正常，保护肠结构，促进肠道蠕动。另外，还能调节紊乱的肠道菌群进而缓解小鼠腹泻情况。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1. 动物双歧杆菌在制备预防、治疗和/或辅助治疗腹泻的产品中的应用，其特征在于，所述动物双歧杆菌的保藏编号为GDMCC No: 64207。

2. 一种预防、治疗和/或辅助治疗腹泻的产品，其特征在于，所述产品包含保藏编号为GDMCC No: 64207的动物双歧杆菌。

3.根据权利要求2所述的产品，其特征在于，所述产品包括药物或食品。

4. 根据权利要求2所述的产品，其特征在于，所述产品的每单位至少包含1×10⁸ CFU的动物双歧杆菌；

和/或，所述产品还包含至少一种生理上可接受的辅料、或药学上可接受的赋形剂。

5.根据权利要求3或4所述的产品，其特征在于，所述食品为保健食品，包括营养素补充剂或功能性保健食品。

6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述保健食品为有助于缓解腹泻的功能性保健食品；

和/或，所述保健食品的剂型包括片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、丸剂、凝胶糖果、粉剂、口服液或滴剂。

7.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述保健食品还包括用于缓解腹泻的第二益生菌；

和/或，所述药物还包括用于预防、治疗或辅助治疗腹泻的第二治疗剂。