CN118186130A - 用于西瓜品种鉴定的InDel标记引物及其应用 - Google Patents
用于西瓜品种鉴定的InDel标记引物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了用于西瓜品种鉴定的InDel标记引物及其应用，属于生物技术领域，更具体地，本发明提供的InDel标记引物扩增模板为“EW‑11”西瓜品种DNA和/或“E23S560M”西瓜品种DNA时扩增片段上存在如SEQ ID No.3所示的InDel标记片段，所述InDel标记引物包括如SEQ ID No.1所示的上游引物TY1‑4‑F和如SEQ ID No.2所示的下游引物TY1‑4‑R。采用本发明提供的InDel标记引物、试剂盒、鉴定方法可以快速、准确地鉴定出“甜依1号”、“EW‑11”、“E23S560M”中任意一种或多种，可以避免试验场地大、环境突变、人为主观判断误差和周期长等问题，在幼苗或种子水平就能快速、准确地鉴定大批量杂交种种子的纯度。这为后续植物新品种开发、植物分型、植物选育提供了基础工具。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及用于西瓜品种鉴定的InDel标记引物及其应用。
背景技术
杂种优势在生物界普遍存在，是指杂合体在一种或多种性状上优于两个亲本的现象。杂种优势利用作为遗传应用的典型代表，已在水稻、玉米和小麦等作物中取得了丰硕成果。随着育种工作的深入，杂种优势的应用不再局限于粮食作物，也开始应用到蔬菜瓜果等领域。西瓜，是葫芦科西瓜属一年生蔓生藤本植物，号称夏季瓜果之王。西瓜果肉富含多种维生素，具有平衡血压、调节心脏功能的作用。“甜依1号”是一种新培育的中小果形黄肉西瓜，其口感爽脆，甜度高且风味足，逐渐被大众和相关市场所欢迎。
杂交制种过程中，存在亲本自交或外源花粉污染等问题，从而造成种子纯度降低，进而影响作物的产量和品质。因此，纯度鉴定是保证西瓜杂交品种质量的必要流程，也是实现作物优质高产的坚实保障。目前，我国西瓜纯度鉴定以田间表型鉴定为主，此鉴定方法易受环境因素干扰，存在田间表型不易把握和耗时过长等问题。
发明内容
本发明所要解决的问题是如何快速且准确地鉴定西瓜品种。
为解决上述问题，本发明第一方面提供一种用于西瓜品种鉴定的InDel标记引物，所述InDel标记引物用于鉴定“甜依1号”西瓜品种、“EW-11”西瓜品种和“E23S560M”西瓜品种中的任意一种或多种，所述InDel标记引物扩增模板为“EW-11”西瓜品种DNA和/或“E23S560M”西瓜品种DNA时扩增片段上存在如SEQ ID No.3所示的InDel标记片段。
作为优选，所述InDel标记引物包括如SEQ ID No.1所示的上游引物TY1-4-F和如SEQ ID No.2所示的下游引物TY1-4-R。
本发明提供的InDel标记引物针对“甜依1号”、“EW-11”和“E23S560M”西瓜品种设计，InDel多态性分子标记是基于插入或缺失位点两侧的序列来设计特异性引物并进行PCR扩增的标记，具有扩增产物带型清晰简单，稳定性强和分离效果明显等优势。InDel分子标记检测杂交种纯度相比传统的田间小区表型鉴定法，可以避免试验场地大、环境突变、人为主观判断误差和周期长等问题，在幼苗或种子水平就能快速、准确地鉴定大批量杂交种种子的纯度。
进一步地，本发明第二方面提供一种前述InDel标记引物的应用，即将所述InDel标记引物应用于以下任意一个或多个方面：
a：鉴定或辅助鉴定西瓜品种；
b：制备鉴定或辅助鉴定西瓜品种的产品；
c：选育或辅助选育西瓜品种；
d：制备选育或辅助选育西瓜品种的产品；
e：西瓜育种；
f：制备西瓜育种的产品。
进一步地，本发明第三方面提供一种试剂盒，所述试剂盒中含有SEQ IDNo.1～2所示的InDel标记引物。
作为优选，所述试剂盒中还含有用于PCR反应用的试剂和/或用于琼脂糖凝胶电泳的试剂。
进一步地，本发明第四方面提供一种前述试剂盒的应用，即将所述试剂盒应用于以下任意一个或多个方面：
A：鉴定或辅助鉴定西瓜品种；
B：制备鉴定或辅助鉴定西瓜品种的产品；
C：选育或辅助选育西瓜品种；
D：制备选育或辅助选育西瓜品种的产品；
E：西瓜育种；
F：制备西瓜育种的产品。
进一步地，本发明第五方面提供一种西瓜品种的鉴定方法，所述西瓜品种选自
7.一种西瓜品种的鉴定方法，其特征在于，所述西瓜品种选自“甜依1号”西瓜品种、“EW-11”西瓜品种和“E23S560M”西瓜品种中的任意一种或多种，所述鉴定方法采用SEQID No.1～2所示的InDel引物或含有SEQ IDNo.1～2所示InDel引物的试剂盒对西瓜品种进行鉴定。
作为优选，所述鉴定方法包括以下步骤：
S1：提取样品西瓜的DNA；
S2：以提取的DNA为模板，利用利用SEQ ID No.1～2所示的InDel标记引物或含有SEQ ID No.1～2所示的InDel标记引物的试剂盒对提取的DNA进行PCR扩增；
S3：对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；
S4：根据琼脂糖凝胶电泳成像结果，对样品西瓜的品种进行鉴定。
作为优选，所述步骤S4中，若琼脂糖凝胶电泳的成像结果为双带型且上条带所示分子量大小为309bp，下条带的所示分子量大小为240bp，则样品西瓜的品种为“甜依1号”；若琼脂糖凝胶电泳的成像结果为单带型且条带所示分子量大小为309bp，则样品西瓜的品种为“EW-11”；若琼脂糖凝胶电泳的成像结果为单带型且条带所示分子量大小为240bp，则样品西瓜的品种为“E23S560M”。
作为优选，所述步骤S2中，PCR的反应程序为94℃预变性5min，94℃变性20s，退火20s(退火温度根据设计引物设定)，72℃延伸40s，循环35次，72℃延伸10min，4℃保存。
与现有技术相比，本发明具备的有益效果：“甜依1号”是母本“EW-11”和父本“E23S560M”杂交后获得的F1。相对于现有的田间试验分型鉴别，本发明提供的InDel标记引物、试剂盒、鉴定方法可以通过对西瓜的任何部位的DNA的检测对西瓜品种进行快速鉴定，使用该引物的试剂盒、鉴定方法鉴定的准确度高、成本低，可以在幼苗时期即进行鉴定，这为后续植物新品种开发、植物分型、植物选育提供了基础工具。
附图说明
图1为本发明具体实施方式实施例1中杂交品种“甜依1号”及其父母本单株的DNA样品为母本加入设计的InDel引物经PCR扩增后的凝胶电泳成像结果照片；
图2为本发明具体实施方式实施例2中引物特异性验证实验琼脂糖凝胶电泳成像结果照片；
图3为本发明具体实施方式实施例2中“甜依1号”的田间表型照片。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面对本发明的具体实施例做详细的说明。需要说明的是，以下各实施例仅用于说明本发明的实施方法和典型参数，而不用于限定本发明所述的参数范围，由此引申出的合理变化，仍处于本发明权利要求的保护范围内。
需要说明的是，在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
除非另有定义，本文中使用的所有术语、符号和其他科学术语旨在具有与本发明所属领域技术人员通常所理解的相同含义。在一些情况下，本文处于阐明或便于引用目的对具有常规理解含义的术语加以限定，本文中此类限定不应理解为表示与本领域常规理解具有显著差异。本文所述或所引用的技术方法一般已有本领域技术人员充分了解并通过常规方法采用。除非另有说明，涉及市售可得的试剂盒和试剂、仪器的使用均按照生产商给出的方案和参数进行。
术语说明：InDel标记：插入/缺失(insertion-deletion，InDel)是指在近缘种或同一物种不同个体之间基因组同一位点的序列发生了不同大小核苷酸片段的插入或缺失，即一个序列上某一位点相比同源的另一个序列插入或缺失了一个或多个碱基。InDel多态性分子标记是基于插入/缺失位点两侧的序列设计特异引物进行PCR扩增的标记。InDel多态性分子标记是基于插入或缺失位点两侧的序列来设计特异性引物并进行PCR扩增的标记，具有扩增产物带型清晰简单，稳定性强和分离效果明显等优势。随着第二代测序技术的发展，实验人员可以快速地从全基因组范围内挖掘变异信息，有助于InDel标记开发及应用。InDel位点普遍分布在动植物的基因组DNA中，相比SNP具有更佳的遗传稳定性。开发InDel分子标记相比SSR标记，对应开发的工作量大幅减小，扩增产物的带型清晰简单，具有更佳的稳定性和分离效果。InDel分子标记检测杂交种纯度相比传统的田间小区表型鉴定法，可以避免试验场地大、环境突变、人为主观判断误差和周期长等问题，在幼苗或种子水平就能快速、准确地鉴定大批量杂交种种子的纯度。
“甜依1号”：“甜依1号”是母本“EW-11”和父本“E23S560M”杂交后获得的F1。
为解决背景技术中现有技术存在的问题，本发明的具体实施方式提供了一种用于西瓜品种鉴定的InDel标记引物，该InDel标记引物用于鉴定“甜依1号”西瓜品种、“EW-11”西瓜品种和“E23S560M”西瓜品种中的任意一种或多种，该InDel标记引物扩增模板为“EW-11”西瓜品种DNA和/或“E23S560M”西瓜品种DNA时扩增片段上存在如SEQ ID No.3所示的InDel标记片段，其中：
SEQ ID No.3：5’-GATGGGAGTTGGAAAAGAGGATGATTTTTTTGT GAGCCAGACATCACCACTGTCTTACGTGGGAAATTT-3’。
在上述实施方式中，InDel标记引物包括如SEQ ID No.1所示的上游引物TY1-4-F和如SEQ ID No.2所示的下游引物TY1-4-R。其中，
SEQ ID No.1：TY1-4-F：ACCTCCTAAGTTGGGGATG；
SEQ ID No.2：TY1-4-R：GCAAGGGACAAAAGAAGGGAA。
更具体地，上述实施方式中，InDel标记引物的设计流程如下：取杂交品种“甜依1号”的母本“EW-11”和父本“E23S560M”的幼苗叶片为样品，进行全基因组重测序，经数据质控后获得clean data。以BWA软件比对西瓜全基因组数据，对父母本变异位点进行比对和筛选。
根据重测序检测结果，选取父本缺失，母本无变异或母本缺失，父本无变异的InDel位点，利用Primer Premier 5.0软件在差异位点两侧保守区设计引物。为确保扩增的特异性，引物设计参数特别考虑GC含量介于40％～50％，退火温度介于50～60℃，引物片段长度介于17～25bp，引物PCR扩增产物长度介于200～300bp。
以杂交品种“甜依1号”及其父母本单株的DNA样品为模板，加入设计的InDel引物，经PCR扩增和凝胶电泳成像，筛选出“甜依1号”及其父母本带型存在特异性的引物。
在一些优选实施方式中，InDel标记引物应用于以下任意一个或多个方面：
a：鉴定或辅助鉴定西瓜品种；
b：制备鉴定或辅助鉴定西瓜品种的产品；
c：选育或辅助选育西瓜品种；
d：制备选育或辅助选育西瓜品种的产品；
e：西瓜育种；
f：制备西瓜育种的产品。
在上述实施方式中，鉴定或辅助鉴定西瓜品种的产品包括但不限于试剂盒、试剂，所述产品应含有前述InDel标记引物。
在上述实施方式中，选育或辅助选育西瓜品种的产品包括但不限于试剂盒、试剂，所述产品应含有前述InDel标记引物。
在上述实施方式中，西瓜育种的产品包括但不限于试剂盒、试剂，所述产品应含有前述InDel标记引物。
本发明的另一实施方式提供了一种西瓜品种的鉴定方法，西瓜品种选自“甜依1号”西瓜品种、“EW-11”西瓜品种和“E23S560M”西瓜品种中的任意一种或多种，所述鉴定方法采用SEQ ID No.1～2所示的InDel引物或含有SEQ ID No.1～2所示InDel引物的试剂盒对西瓜品种进行鉴定。具体包括以下步骤：
S1：提取样品西瓜的DNA；
S2：以提取的DNA为模板，利用利用SEQ ID No.1～2所示的InDel标记引物或含有SEQ ID No.1～2所示的InDel标记引物的试剂盒对提取的DNA进行PCR扩增；
S3：对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；
S4：根据琼脂糖凝胶电泳成像结果，对样品西瓜的品种进行鉴定。
上述实施方式以杂交品种“甜依1号”父母本的基因组重测序数据为基础，经分析比对筛选出父母本缺失、母本无变异、父本无变异的InDel位点，设计引物，以杂交品种“甜依1号”及其父母本单株的DNA样品为模板对设计引物进行筛选，筛选出父母本和杂交种PCR扩增产物带型存在特异性的引物，以筛选引物检测田间杂交种“甜依1号”品种并于田间表型鉴定结果相互验证，开发出具有实用性的InDel标记引物，为以后高通量模式的西瓜杂交种测纯奠定基础。
在上述实施方式中的步骤S4中，若琼脂糖凝胶电泳的成像结果为双带型且上条带所示分子量大小为309bp，下条带的所示分子量大小为240bp，则样品西瓜的品种为“甜依1号”；若琼脂糖凝胶电泳的成像结果为单带型且条带所示分子量大小为309bp，则样品西瓜的品种为“EW-11”；若琼脂糖凝胶电泳的成像结果为单带型且条带所示分子量大小为240bp，则样品西瓜的品种为“E23S560M”。
在上述实施方式的步骤S1中，杂交种“甜依1号”、母本“EW-11”、父本“E23S560M”DNA的提取可采用任何符合国标的方法或商用试剂盒进行提取，当然，优选CTAB法，如采用CTAB法提取DNA，具体步骤如下：西瓜幼嫰新叶裁剪约1cm2，置于装有钢珠(直径：2mm)的2ml离心管内，用多样品组织研磨仪研磨(频率：60Hz，时间：90s)。研磨后的离心管内加入预热65℃700μL NaHSO3的CTAB溶液(NaHSO3浓度：10.4g·L-1)，充分摇晃后放入65℃水浴锅内水浴30min，每隔10min摇晃一次。水浴完毕后离心管内加入700μL异戊醇和三氯甲烷混合液(异戊醇:三氯甲烷＝1：24)并离心(转速：8000g，时间：10min)，提取400μL上清液置于1.5ml离心管内。上清液加入预冷异丙醇300μL并离心(转速：12000g，时间：10min)，倒出上清液留底，以75％乙醇漂洗后风干，用ddH2O溶解获得DNA水溶液。
在上述实施方式的步骤S2中，PCR扩增中的PCR反应体系，包括5.5μL的ddH2O，10μL的2×taq mix，1.5μL的所述上游引物(浓度：10mM)，1.5μL的所述下游引物(浓度：10mM)，1.5μL的所述杂交品种“甜依1号”或其父母本的单株DNA。PCR扩增中的PCR反应程序包括：94℃预变性5min，94℃变性20s，退火20s(退火温度根据设计引物设定)，72℃延伸40s，循环35次，72℃延伸10min，4℃保存。
在上述实施方式的步骤S3中，PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，置于凝胶成像系统(型号：BIO-RAD)内成像。筛选引物时，采用A3-1大型凝胶电泳系统，设置350V电压和500mA电流，以4％琼脂糖凝胶电泳50min。核酸染色采用胶染法，即在制胶时加入核酸染料E×Red，比例为每50ml琼脂糖溶液中加入5μL E×Red 10000×储液。
更具体地，在一些优选实施方式中，为进一步保证筛选引物测纯的准确性，本发明的具体实施方式还开展了田间表型鉴定和实验室分子检测对比试验，其中：
田间表型鉴定包括：在同一实验小区地块上，种植杂交种“甜依1号”以待鉴定，种植母本“EW-11”以作对照。在各生长阶段观察待鉴定植株表型是否与正常“甜依1号”植株一致，与种植的母本表型比较，鉴定出杂交种中混杂的母本自交种。
实验室分子检测包括：取杂交种“甜依1号”植株的幼苗叶片，以CTAB法提取单株DNA，加入筛选引物进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后置于凝胶成像系统内成像。根据凝胶成像结果统计带型，记录待鉴定植株中混杂的非“甜依1号”植株并计算纯度。引物检测纯度时，为扩大检测数量采用A3-1大型凝胶电泳系统，设置350V电压和500mA电流，以4％琼脂糖凝胶电泳45min。
田间表型鉴定与实验室分子检测结果一对一比对，比对时会排除田间表型鉴定期间因停止生长而无法鉴定的植株，也会排除田间表型不同于“甜依1号”和母本“EW-11”的外源花粉污染异株，前者无田间表型鉴定结果，后者则因外源花粉污染异株的不确定性强。实际的杂交种生产中，工作人员对周围外源花粉来源可以实施有效的人为管控。
统计分子检测中带型双带对应杂交种“甜依1号”和带型上带对应母本“EW-11”的植株，若分子检测与田间表型鉴定结果完全一致，说明成功开发了能够准确鉴定“甜依1号”杂交种纯度的InDel分子标记，后续的“甜依1号”纯度鉴定可直接采用分子检测。
下面结合说明书附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1
杂交种“甜依1号”及其父母本PCR扩增产物带型呈特异性引物筛选
取杂交品种“甜依1号”的母本“EW-11”和父本“E23S560M”的幼苗叶片为样品，送至天津诺禾致源科技股份有限公司进行全基因组重测序，经数据质控后获得clean data。以BWA软件比对西瓜全基因组数据，对父母本变异位点进行比对和筛选。
选取父本缺失，母本无变异或母本缺失，父本无变异的InDel位点，利用PrimerPremier 5.0软件在差异位点两侧保守区设计引物。为确保扩增的特异性，引物设计参数特别考虑GC含量介于40％～50％，退火温度介于50～60℃，引物片段长度介于17～25bp，引物PCR扩增产物长度介于200～400bp，引物序列如表1所示。
表1针对杂交种“甜依1号”测纯设计的InDel引物序列
以杂交品种“甜依1号”及其父母本单株的DNA样品为模板，加入设计的InDel引物，经PCR扩增和凝胶电泳成像，筛选出“甜依1号”及其父母本带型存在特异性的引物。具体成像结果如图1所示，图1中对照采用MarkerⅠ，每对引物扩增相同的12个DNA样品，从左到右依次顺序为4个母本“EW-11”、4个父本“E23S560M”、4个杂交品种“甜依1号”的DNA样品。由图1可知，引物TY1-3F/R和TY1-4F/R的PCR扩增结果显示父母本及其杂交种带型呈现特异性。相比引物TY1-3F/R，TY1-4F/R扩增产物的条带分离更快更清晰，故采用该引物开展后续引物纯度检测准确性验证试验。
母本‘EW-11’经TY1-4F/R引物扩增的产物序列如SEQ ID No.4所示：ACCTCCTAAGTTGGGGATGGGAGATGGGGACTTGGCAATTCCGGATGGATATGGATGACGGAGCCGAGTATGGTCGAGCATAACGACCTTAAAGCATTGTGCTACCTAGAGGCAGCCAGGATTTATATTTATGTTGTTTCTTTTCTTTTCTTTTTATTTTTATTGAGCTTAATTCTTTTTTATCTATTAGGTTTTTCTTGTTTGATGGGAGTTGGAAAAGAGGATGATTTTTTTGTGAGCCAGACATCACCACTGTCTTACGTGGGAAATTTCAGGGAAGTTCTCTGTTTCCCTTCTTTTGTCCCTTGC
父本‘E23S560M’经TY1-4F/R引物扩增的产物序列如SEQ ID No.5所示：ACCTCCTAAGTTGGGGATGGGAGATGGGGACTTGGCAATTCCG GATGGATATGGATGACGGAGCCGAGTATGGTCGAGCATAACGACCTTAAAGCATTGTGCTACCTAGAGGCAGCCAGGATTTATATTTATGTTGTTTCTTTTCTTTTCTTTTTATTTTTATTGAGCTTAATTCTTTTTTATCTATTAGGTTTTTCTTGTTTCAGGGAAGTTCTCTGTTTCCCTTCTTTTGTCCCTTGC，
由上可见，TY1-4F/R引物所对应的InDel标记位点的核苷酸序列如SE Q ID No.3所示：GATGGGAGTTGGAAAAGAGGATGATTTTTTTGTGAG CCAGACATCACCACTGTCTTACGTGGGAAATTT。
实施例2
验证特异性引物对“甜依1号”纯度检测的准确性
随机抽取一批杂交种“甜依1号”种子(数量：54粒)，与纯合母本“EW-11”种子一起播种到96孔穴盘内，播种时一孔一粒。待长至两叶一心均定植到塑料大棚内，为降低地块肥力不均等因素造成的影响，需充分整地并定植在同一条垄上。
为田间“甜依1号”待鉴定群体植株设置编号牌，剪取了54株植株的新叶叶片以提取DNA。用筛选的引物TY1-4F/R去扩增这54份DNA样品，PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后置于BIO-RAD凝胶成像系统内获取图像。统计54份DNA带型，其中双带带型有54个，获得该批杂交种“甜依1号”种子纯度为100％(计算公式：西瓜杂交品种“甜依1号”的纯度(％)＝扩增出两条带带型的植株(种子)数目/检测群体(种子)数目*100％)。部分胶图成像结果详见图2，具体统计结果详见表2。
在各生长阶段观察待鉴定植株表型是否与正常“甜依1号”植株一致，与种植的母本表型比较，鉴定出杂交种中混杂的母本自交种。对比时，会根据西瓜的果皮颜色、果肉颜色和果形等性状判定。“甜依1号”果形小且呈椭圆状、果皮颜色浅绿、果肉颜色呈明黄色，田间表型详见图3。田间表型鉴定时，共鉴定52株，其中无母本自交种和外源花粉污染异株，纯度为100％，具体统计结果详见表2。
表2“甜依1号”实验室分子检测与田间表型鉴定比对结果
综上，本发明的具体实施方式以获得的杂交品种“甜依1号”父母本的基因组重测序数据为基础，经分析比对筛选出父本缺失，母本无变异或母本缺失，父本无变异的InDel位点，设计引物。以杂交品种“甜依1号”及其父母本单株的DNA样品为模板对设计引物进行筛选，筛选出父母本和杂交种PCR扩增产物带型存在特异性的引物。以筛选引物检测田间的杂交种“甜依1号”带鉴定群体，结合田间表型鉴定确认该引物检测的准确性。当实验室分子检测结果与田间表型鉴定结果完全一致，即“甜依1号”杂交种与混杂其中的母本自交种杂株能被分子检测准确鉴定，则可在后续直接采用该InDel分子标记引物开展纯度鉴定。
虽然本公开披露如上，但本公开的保护范围并非仅限于此。本领域技术人员，在不脱离本公开的精神和范围的前提下，可进行各种变更与修改，这些变更与修改均将落入本发明的保护范围。
Claims (9)
1.用于西瓜品种鉴定的InDel标记引物，其特征在于，所述InDel标记引物包括如SEQID No.1所示的上游引物TY1-4-F和如SEQ ID No.2所示的下游引物TY1-4-R，所述InDel标记引物用于鉴定“甜依1号”西瓜品种、“EW-11”西瓜品种和“E23S560M”西瓜品种中的任意一种或多种，所述InDel标记引物对应的InDel位点的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
2.一种权利要求1所述InDel标记引物的应用，其特征在于，将所述InDel标记引物应用于以下任意一个或多个方面：
a：鉴定或辅助鉴定西瓜品种；
b：制备鉴定或辅助鉴定西瓜品种的产品；
c：选育或辅助选育西瓜品种；
d：制备选育或辅助选育西瓜品种的产品；
e：西瓜育种；
f：制备西瓜育种的产品。
3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有SEQ ID No.1～2所示的InDel标记引物。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有用于PCR反应用的试剂和/或用于琼脂糖凝胶电泳的试剂。
5.一种权利要求3或4任一所述试剂盒的应用，其特征在于，将所述试剂盒应用于以下任意一个或多个方面：
A：鉴定或辅助鉴定西瓜品种；
B：制备鉴定或辅助鉴定西瓜品种的产品；
C：选育或辅助选育西瓜品种；
D：制备选育或辅助选育西瓜品种的产品；
E：西瓜育种；
F：制备西瓜育种的产品。
6.一种西瓜品种的鉴定方法，其特征在于，所述西瓜品种选自“甜依1号”西瓜品种、“EW-11”西瓜品种和“E23S560M”西瓜品种中的任意一种或多种，所述鉴定方法采用SEQ IDNo.1～2所示的InDel引物或含有SEQ IDNo.1～2所示InDel引物的试剂盒对西瓜品种进行鉴定。
7.如权利要求6所述的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：提取样品西瓜的DNA；
S2：以提取的DNA为模板，利用利用SEQ ID No.1～2所示的InDel标记引物或含有SEQID No.1～2所示的InDel标记引物的试剂盒对提取的DNA进行PCR扩增；
S3：对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；
S4：根据琼脂糖凝胶电泳成像结果，对样品西瓜的品种进行鉴定。
8.如权利要求7所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S4中，若琼脂糖凝胶电泳的成像结果为双带型且上条带所示分子量大小为309bp，下条带的所示分子量大小为240bp，则样品西瓜的品种为“甜依1号”；若琼脂糖凝胶电泳的成像结果为单带型且条带所示分子量大小为309bp，则样品西瓜的品种为“EW-11”；若琼脂糖凝胶电泳的成像结果为单带型且条带所示分子量大小为240bp，则样品西瓜的品种为“E23S560M”。
9.如权利要求7所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S2中，PCR的反应程序为94℃预变性5min，94℃变性20s，退火20s，72℃延伸40s，循环35次，72℃延伸10min，4℃保存。
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