CN118169094A - 一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法 - Google Patents
一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118169094A CN118169094A CN202410579439.8A CN202410579439A CN118169094A CN 118169094 A CN118169094 A CN 118169094A CN 202410579439 A CN202410579439 A CN 202410579439A CN 118169094 A CN118169094 A CN 118169094A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tetracycline
- concentration
- solution
- diluent
- mol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 title claims abstract description 74
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 title claims abstract description 74
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 title claims abstract description 74
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 title claims abstract description 73
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 title claims abstract description 73
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 238000002156 mixing Methods 0.000 title claims abstract description 26
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 52
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 claims abstract description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 24
- XPOIJNIQXJYQOV-UHFFFAOYSA-N 4-fluorobenzene-1,3-diol Chemical compound OC1=CC=C(F)C(O)=C1 XPOIJNIQXJYQOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 53
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 47
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 26
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 26
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 14
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 9
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 17
- 229940072172 tetracycline antibiotic Drugs 0.000 description 13
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 6
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 5
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 5
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 208000014651 Meester-Loeys syndrome Diseases 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229960004191 artemisinin Drugs 0.000 description 1
- 229930101531 artemisinin Natural products 0.000 description 1
- -1 artemisinin ester Chemical class 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 231100000739 chronic poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000020251 goat milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000006101 laboratory sample Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 239000000273 veterinary drug Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明属于荧光识别检测技术领域，具体涉及一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法。本发明利用多巴胺和4‑氟间苯二酚的共混溶液可以定量的检测溶液中的四环素含量，检测过程在室温下进行，反应条件简单；检测过程大约需要30分钟，耗时短；可以检测的四环素范围为10‑350μmol/L，检测范围大，灵敏度高；检测所需试剂价廉易得，便于保存。
Description
技术领域
本发明属于荧光识别检测技术领域，具体涉及一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法。
背景技术
四环素类抗生素生产价格低、质量高、纯度高，是最广泛用于人类和动物细菌感染的广谱抗生素之一。在所有抗生素中，四环素类抗生素的生产和使用在全球排名第二，在中国排名第一。虽然四环素类抗生素对人类和动物健康有一些好处，但动物饲养者在使用药物过程中长期、超量使用或用于促进生长等滥用四环素类抗生素成为动物产品污染的主要原因，导致残留的四环素类抗生素在牛奶、肉类、蜂蜜等动物性食品中积累，进而在摄入后对人体健康造成严重的副作用，引起人慢性中毒、对人体的肝脏和骨骼等有严重的威胁。另外，只有小部分四环素类抗生素能在体内代谢或吸收，而高达75%四环素类抗生素通常以活性形式在排泄物中释放，使得水和土壤环境中四环素类抗生素增加，造成环境污染，并导致细菌耐药性增加。
食品安全问题是全世界范围内持续关注的重大问题之一。为了保证消费者健康，许多国家和监管组织，如欧盟、瑞典、食品法典委员会等已经制定了法规来控制动物食品中抗生素的用量或者禁止使用，严格规定四环素类抗生素在动物源食品中的最高残留限量(MRLS)。我国的最新国标GB31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》规定了四环素类抗生素在家畜家禽的肌肉、肝和肾中的MRLS分别为200、600和1200μg/kg，牛奶或羊奶中为100μg/kg，家禽的蛋中残留不超过400μg/kg，在鱼和虾中均为200μg/kg。在动物源性食品流通到市场，到达消费者手中前，需快速有效的分析方法检验食品中四环素类抗生素残留量，因此，开发合适的分析技术来检测四环素成为研究工作的重点之一。
近年来关于四环素类抗生素残留检测的方法不断涌现，根据文献报道，传统的此类药物检测方法从原理上大致可以分为3种：微生物学检测方法、理化检测方法和免疫学检测方法。
微生物学检测方法的原理是利用四环素类药物对微生物的生理机能、繁殖代谢的抑制作用，根据所产生的抑菌圈的大小定性或定量确定样品中的四环素类抗生素残留。微生物学检测方法相对简单、费用低、样品用量少，但是易受样品中其他抗生素的影响，特异性低，灵敏度不高，且耗时。
理化检测方法主要是利用四环素类药物分子中的基团所具有的特殊性质或特异反应来测定其含量，包括色谱法、色谱-质谱联用技术和毛细管电泳法等。理化检测方法灵敏度较高，应用较为普遍，但检测程序复杂、较耗时间，且需要昂贵的仪器和专业操作人员。因此，该方法一般用于实验室样品测定，难以在基层大规模推广。
免疫学检测方法是以抗原（四环素类药物）与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析方法，主要包括酶联免疫分析法和电化学免疫传感器法。该类方法具有较高的选择性和特异性，检测速度快，且样品前处理简单，但前期设备投入大，方法的建立较困难，且单样检测费用高。
荧光传感器是检测不同介质中待检物的最有效工具之一。与传统方法比较，荧光传感器具有成本低、方便、操作少、灵敏度高、可见性好等优点，是一种适用于食品中四环素类抗生素的检测工具。大多数化学传感器基于荧光信号，在各种光学检测技术中，与其他光学检测技术相比，荧光法因其高灵敏度、高特异性和高准确性而被认为在实际应用中非常有用。荧光传感器可以与便携式检测仪结合，既能达到实时监测的要求，又具有成本低、特异性好、操作简单、准确度高等优势。因此，在食品安全方面，荧光传感器显示出巨大的应用潜力。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用，所述共混溶液是通过将多巴胺稀释液、4-氟间苯二酚稀释液、Na2CO3稀释液、伯瑞坦-罗宾森(Britton-Robinson，BR)缓冲溶液和超纯水混合，在室温下孵育30min后得到的。
进一步的，所述多巴胺稀释液浓度为100μmol/L，添加量为200μL。
进一步的，所述4-氟间苯二酚稀释液的浓度为150μmol/L，添加量为200μL。
进一步的，所述Na2CO3稀释液浓度为1500mmol/L，添加量为100μL。
进一步的，所述伯瑞坦-罗宾森缓冲溶液的pH为7，添加量为100μL。
进一步的，所述共混溶液对四环素的检测范围为10-350μmol/L。
本发明还提供了一种所述共混溶液检测四环素浓度的检测方法，包括如下步骤：
（1）四环素稀释液的制备：准确称取四环素粉末，溶解于超纯水中，制得浓度为0.7mol/L的四环素储备液；通过向四环素储备液中添加超纯水制备不同浓度的四环素稀释液；
（2）标准曲线的建立：将步骤（1）中得到的100μL不同浓度梯度的四环素稀释液加入到所述共混溶液中，共混溶液中的超纯水的添加量为1300μL，在416nm的激发波长下，测量并记录其在461nm下的荧光发射强度；通过Origin软件线性拟合四环素浓度与体系荧光强度，得线性方程：荧光强度值=-1081.687c+3494.285，R2=0.9940；线性范围为：10-350mol/L，最低检出限浓度为10μmol/L；
（3）实际样品中四环素的测定：将100μL待测四环素溶液、浓度为100μmol/L的多巴胺稀释液200μL、浓度为150μmol/L的4-氟间苯二酚稀释液200μL、浓度为1500mmol/L的Na2CO3稀释液100μL、pH为7的BR缓冲液100μL、超纯水1300μL依次混合，在室温下孵育30min；在416nm的激发波长下，测量荧光强度，将荧光强度代入线性方程荧光强度=-1081.687c+3494.285，即可计算出待测样品中四环素浓度。
本发明的有益技术效果：本发明利用多巴胺和4-氟间苯二酚的共混溶液可以定量的检测溶液中的四环素含量，检测过程在室温下进行，反应条件简单；检测过程大约需要30分钟，耗时短；可以检测的四环素范围为10-350μmol/L，检测范围大，灵敏度高；检测所需试剂价廉易得，便于保存。
与传统方法相比，本发明检测方法简单快捷，避免使用大型仪器，检测过程大约需要30分钟，为四环素的即时、现场检测提供了一种有效的解决方案。
附图说明
图1为不同pH环境下，共混溶液的荧光强度图；
图2为不同Na2CO3浓度时，共混溶液的荧光强度图；
图3为不同4-氟间苯二酚浓度时，共混溶液的荧光强度图；
图4为不同多巴胺浓度时，共混溶液的荧光强度图；
图5为四环素检测的标准曲线；
图6为不同检测物质时，共混溶液的荧光强度图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
溶液的配制
（1）多巴胺（dopamine）稀释液的制备:准确称取多巴胺粉末,溶解于水中,制得浓度为5.0mmol/L的多巴胺储备液；多巴胺稀释液是用纯水稀释多巴胺储备液获得；
(2) Na2CO3稀释液的制备:准确称取Na2CO3粉末,溶解于超纯水中,制得浓度为2.5mol/L的Na2CO3储备液；Na2CO3稀释液是用纯水稀释Na2CO3储备液获得；
(3)4-氟间苯二酚（4F-resorcinol）稀释液的制备:准确称取4-氟间苯二酚粉末,溶解于超纯水中,制得浓度为5.0mmol/L的4-氟间苯二酚储备液；4-氟间苯二酚稀释液是用纯水稀释4-氟间苯二酚储备液获得；
(4)硼酸储备液的制备:准确称取硼酸粉末,溶解于超纯水中,制得浓度为0.4mol/L的硼酸储备液；
(5)磷酸储备液的制备:准确量取磷酸,用超纯水稀释,制得浓度为0.4mol/L的磷酸储备液；
(6)醋酸储备液的制备:准确量取醋酸,用超纯水稀释,制得浓度为0.4mol/L的醋酸储备液；
(7)伯瑞坦-罗宾森(Britton-Robinson,BR)缓冲溶液的配制：在100mL磷酸、硼酸和醋酸三种酸(浓度均为0.04mol/L))的混合液中,向其中加入不同体积的氢氧化钠(浓度为0.2mol/L)可以组成pH=3-13的缓冲溶液储备液。
实施例1 共混溶液的荧光强度随反应时间变化
将浓度为50μmol/L的多巴胺稀释液200μL、浓度为1.0mmol/L的4-氟间苯二酚稀释液200μL、浓度为500mmol/L的Na2CO3稀释液100μL、pH为7的BR缓冲液100μL、超纯水1400μL依次混合，在室温下孵育不同时间，随孵育时间的变化测共混溶液的荧光强度值，确定最佳反应时间为30min。
实施例2 pH对共混溶液的荧光强度的影响
将浓度为50μmol/L的多巴胺稀释液200μL、浓度为1.0mmol/L的4-氟间苯二酚稀释液200μL、浓度为500mmol/L的Na2CO3稀释液100μL、pH为3-13的BR缓冲液100μL、超纯水1400μL依次混合，所得混合液即为荧光传感器体系，在室温下孵育30min；测试各个混合溶液的荧光强度值，结果见图1，确定反应的最佳pH为7。
实施例3 碳酸钠溶液的浓度对共混溶液的荧光强度的影响
将浓度为50μmol/L的多巴胺稀释液200μL、浓度为1.0mmol/L的4-氟间苯二酚稀释液200μL、浓度为500-2500mmol/L的Na2CO3稀释液100μL、pH为7的BR缓冲液100μL、超纯水1400μL依次混合，将上述各个混合液体在室温下孵育30min；测试各个混合溶液的荧光强度值，结果见图2，发现浓度值超过1500mmol/L后，荧光强度增加幅度较小，因此确定反应的最佳Na2CO3稀释液浓度为1500mmol/L。
实施例4 4-氟间苯二酚溶液的浓度对共混溶液的荧光强度的影响
将浓度为50μmol/L的多巴胺稀释液200μL、浓度为2.5-500μmol/L的4-氟间苯二酚稀释液200μL、浓度为1500mmol/L的Na2CO3稀释液100μL、pH为7的BR缓冲液100μL、超纯水1400μL依次混合，将上述各个混合液体在室温下孵育30min；测试各个混合溶液的荧光强度值，结果见图3，发现浓度值超过150μmol/L后，荧光强度增加幅度较小，因此确定反应的最佳4-氟间苯二酚稀释液浓度为150μmol/L。
实施例5 多巴胺溶液的浓度对共混溶液的荧光强度的影响
将浓度为1-100μmol/L的多巴胺稀释液200μL、浓度为150μmol/L的4-氟间苯二酚稀释液200μL、浓度为1500mmol/L的Na2CO3稀释液100μL、pH为7的BR缓冲液100μL、超纯水1400μL依次混合，将上述各个混合液体在室温下孵育30min；测试各个混合溶液的荧光强度值，结果见图4，确定反应的最佳多巴胺稀释液浓度为100μmol/L。
实施例6 所述共混溶液在四环素检测中的应用
所述基于多巴胺和4-氟间苯二酚的共混溶液用于四环素定量检测的检测方法，包括如下步骤：
（1）四环素稀释液的制备：准确称取四环素粉末，溶解于超纯水中，制得浓度为0.7mol/L的四环素储备液；通过向四环素储备液中添加超纯水制备不同浓度的四环素稀释液；
（2）标准曲线的建立：将步骤（1）中得到的100μL不同浓度梯度的四环素稀释液加入到所述共混溶液中，共混溶液中的超纯水的添加量为1300μL，在416nm的激发波长下，测量并记录其在461nm下的荧光发射强度；通过Origin软件线性拟合四环素浓度与体系荧光强度，得线性方程：荧光强度值=-1081.687c+3494.285，R2=0.9940；线性范围为：10-350μmol/L，最低检出限浓度为10μmol/L，见图5；
（3）实际样品中四环素的测定：将100μL待测四环素溶液、浓度为100μmol/L的多巴胺稀释液200μL、浓度为150μmol/L的4-氟间苯二酚稀释液200μL、浓度为1500mmol/L的Na2CO3稀释液100μL、pH为7的BR缓冲液100μL、超纯水1300μL依次混合，在室温下孵育30min；在416nm的激发波长下，测量荧光强度，将荧光强度代入线性方程荧光强度值=-1081.687c+3494.285，即可计算出待测样品中四环素浓度。
实施例7 所述共混溶液对四环素检测的专一性测试，其步骤如下：
将100μL待测溶液、浓度为100μmol/L的多巴胺稀释液200μL、浓度为150μmol/L的4-氟间苯二酚稀释液200μL、浓度为1500mmol/L的Na2CO3稀释液100μL、pH为7的BR缓冲液100μL、超纯水1300μL依次混合，在室温下孵育30min；在416nm的激发波长下,测量荧光强度，所述待测溶液分别是超纯水、四环素、青蒿素、青蒿素酯、双氰青蒿素、硫脲、柠檬酸、葡萄糖和卡那霉素。所得到的结果如图6所示，表明：除四环素外，其他的待测溶液不会使荧光强度减弱，即荧光检测传感体系对四环素检测具有专一性，其他物质不会干扰四环素浓度的检测。
在本发明中，室温条件下，上述混合溶液在波长416nm的激发光下具有强烈的蓝光发射。本发明首次发现四环素可以高效率、高选择性地淬灭上述反应的蓝色荧光,利用这个原理，可以建立四环素浓度和荧光强度的对应关系。在共混溶液达到最佳荧光强度的条件下，逐步加入四环素，并且改变四环素的浓度，共混溶液的荧光强度会随之减小。利用酶标仪检测共混溶液的荧光强度，并且将荧光强度与加入的四环素浓度建立线性对应关系，即可精确检测四环素的浓度。
Claims (7)
1.一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用，其特征在于：所述共混溶液是通过将多巴胺稀释液、4-氟间苯二酚稀释液、Na2CO3稀释液、伯瑞坦-罗宾森缓冲溶液和超纯水混合，在室温下孵育30min后得到的。
2.根据权利要求1所述的共混溶液在检测四环素浓度上的应用，其特征在于：所述多巴胺稀释液浓度为100μmol/L，添加量为200μL。
3.根据权利要求1所述的共混溶液在检测四环素浓度上的应用，其特征在于：所述4-氟间苯二酚稀释液的浓度为150μmol/L，添加量为200μL。
4.根据权利要求1所述的共混溶液在检测四环素浓度上的应用，其特征在于：所述Na2CO3稀释液浓度为1500mmol/L，添加量为100μL。
5.根据权利要求1所述的共混溶液在检测四环素浓度上的应用，其特征在于：所述伯瑞坦-罗宾森缓冲溶液的pH为7，添加量为100μL。
6.根据权利要求1所述的共混溶液在检测四环素浓度上的应用，其特征在于：所述共混溶液对四环素的检测范围为10-350μmol/L。
7.一种利用权利要求1-6中任一项所述的共混溶液检测四环素浓度的检测方法，包括如下步骤：
（1）四环素稀释液的制备：准确称取四环素粉末，溶解于超纯水中，制得浓度为0.7mol/L的四环素储备液；通过向四环素储备液中添加超纯水制备不同浓度的四环素稀释液；
（2）标准曲线的建立：将步骤（1）中得到的100μL不同浓度梯度的四环素稀释液加入到所述共混溶液中，共混溶液中的超纯水的添加量为1300μL，在416nm的激发波长下，测量并记录其在461nm下的荧光发射强度；通过Origin软件线性拟合四环素浓度与体系荧光强度，得线性方程: 荧光强度值=-1081.687c+3494.285，R2=0.9940；线性范围为:10-350mol/L，最低检出限浓度为10μmol/L；
（3）实际样品中四环素的测定：将100μL待测四环素溶液、浓度为100μmol/L的多巴胺稀释液200μL、浓度为150μmol/L的4-氟间苯二酚稀释液200μL、浓度为1500mmol/L的Na2CO3稀释液100μL、pH为7的伯瑞坦-罗宾森缓冲溶液100μL、超纯水1300μL依次混合，在室温下孵育30min；在416nm的激发波长下，测量荧光强度，将荧光强度代入线性方程荧光强度值=-1081.687c+3494.285，即可计算出待测样品中四环素浓度。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410579439.8A CN118169094B (zh) | 2024-05-11 | 2024-05-11 | 一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410579439.8A CN118169094B (zh) | 2024-05-11 | 2024-05-11 | 一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118169094A true CN118169094A (zh) | 2024-06-11 |
| CN118169094B CN118169094B (zh) | 2024-07-12 |
Family
ID=91350821
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410579439.8A Active CN118169094B (zh) | 2024-05-11 | 2024-05-11 | 一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118169094B (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103115903A (zh) * | 2013-01-16 | 2013-05-22 | 大连理工大学 | 一种微量四环素类抗生素的荧光检测方法 |
| CN105820585A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-08-03 | 东北林业大学 | 介孔分子印迹荧光探针的制备及其检测四环素类抗生素 |
| CN107817230A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-03-20 | 宁波大学 | 基于石墨烯量子点与铕离子复合体系的四环素类抗生素检测方法 |
| CN107894503A (zh) * | 2017-09-28 | 2018-04-10 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 一种甲胎蛋白检测试剂盒及其检测方法 |
| CN109125715A (zh) * | 2017-06-19 | 2019-01-04 | 深圳瑞健生命科学研究院有限公司 | 一种调控glp-1/glp-1r的方法和药物 |
| CN112304914A (zh) * | 2020-10-27 | 2021-02-02 | 郑州大学 | 基于荧光光谱法检测四环素类抗生素的方法 |
| CN113390846A (zh) * | 2021-06-21 | 2021-09-14 | 中山大学 | 硫量子点作为荧光探针在四环素检测中的应用 |
-
2024
- 2024-05-11 CN CN202410579439.8A patent/CN118169094B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103115903A (zh) * | 2013-01-16 | 2013-05-22 | 大连理工大学 | 一种微量四环素类抗生素的荧光检测方法 |
| CN105820585A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-08-03 | 东北林业大学 | 介孔分子印迹荧光探针的制备及其检测四环素类抗生素 |
| CN109125715A (zh) * | 2017-06-19 | 2019-01-04 | 深圳瑞健生命科学研究院有限公司 | 一种调控glp-1/glp-1r的方法和药物 |
| CN107817230A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-03-20 | 宁波大学 | 基于石墨烯量子点与铕离子复合体系的四环素类抗生素检测方法 |
| CN107894503A (zh) * | 2017-09-28 | 2018-04-10 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 一种甲胎蛋白检测试剂盒及其检测方法 |
| CN112304914A (zh) * | 2020-10-27 | 2021-02-02 | 郑州大学 | 基于荧光光谱法检测四环素类抗生素的方法 |
| CN113390846A (zh) * | 2021-06-21 | 2021-09-14 | 中山大学 | 硫量子点作为荧光探针在四环素检测中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| LAN WANG ET AL.: "Synthesis of dopamine-mediated Cu nanoclusters for sensing and fluorescent coding", 《ANAL. METHODS》, 31 December 2015 (2015-12-31), pages 40 * |
| 郭艳琼等: "高效液相色谱—串联质谱法测定畜肉组织中 四环素及 3 种 β- 受体激动剂的研究", 《畜牧与饲料科学》, vol. 39, no. 4, 31 December 2018 (2018-12-31), pages 10 - 14 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN118169094B (zh) | 2024-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101793881B (zh) | 一种食品中生物胺的检测方法 | |
| Morais et al. | Turbidimetric and nephelometric flow analysis: concepts and applications | |
| US20100285522A1 (en) | Versatile Multichannel Capillary Biosensor System | |
| CN1912594A (zh) | 血清中肌酐的化学发光测定方法 | |
| CN108645826A (zh) | 一种快速检测抗坏血酸的新方法 | |
| NIshi et al. | Three turbidimetric methods for determining total protein compared. | |
| Teepoo et al. | A competitive colorimetric immunosensor for detection of tyramine in fish samples | |
| CN118169094B (zh) | 一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法 | |
| Lin et al. | An enzymatic microassay for lactate concentration in blood and hemolymph | |
| CN1403812A (zh) | 测定油中酸值的实验方法－溴百里香酚兰法 | |
| CN113957116B (zh) | 基于含半胱氨酸脱硫酶大肠杆菌活细胞检测l-丝氨酸的方法 | |
| Kessler et al. | Nonimmunological assay of urinary albumin based on laser-induced fluorescence | |
| Wang et al. | Rapid quantitative detection of okadaic acid in shellfish using lanthanide-labelled fluorescent-nanoparticle immunochromatographic test strips | |
| Vidigal et al. | Flow-based system for the determination of titratable acidity in wines | |
| CN110398586B (zh) | 果糖胺测定试剂盒 | |
| CN109799352B (zh) | 化学发光试剂及其在免疫检测中应用 | |
| CN102495205B (zh) | 小分子有机物的量子点标记抗体多组分非竞争均相免疫分析方法 | |
| Alhadeff et al. | Integrated biosensor systems for ethanol analysis | |
| US4096037A (en) | Arginase test | |
| CN110749574B (zh) | 双波长共振瑞利散射法测定全氟辛烷磺酸的方法及应用 | |
| CN108956572A (zh) | 一种基于锰掺杂硫化锌量子点磷光信号的蜂蜜中氯霉素的检测方法 | |
| CN109187514A (zh) | 一种基于纳米金表面的化学发光共振能量转移传感器快速检测百草枯的方法 | |
| Vilariño et al. | 1 High-throughput detection methods | |
| Sun et al. | Development of a chemiluminescence detection technique for malachite green | |
| Zerwekh et al. | New rapid kit for determining calcium in serum and urine evaluated. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant |