CN118159281A - 治疗pcsk9活性相关病况的化合物 - Google Patents

Abstract

本公开提供了治疗高胆固醇血症和与PCSK9活性相关的其他病况(例如，动脉粥样硬化、动脉粥样硬化性心血管疾病、冠心病、代谢综合征、急性冠脉综合征或相关的心血管疾病和心脏代谢病况)的方法，其通过向受试者口服施予一定量的式(I)化合物，其中A^‑选自药学上可接受的阴离子，并且其中施予的所述量为约5mg至约300mg的式(I)化合物。本发明还涉及包含式(I)化合物(包括式(I)化合物的特定盐)和渗透促进剂的药物组合物。

Description

治疗PCSK9活性相关病况的化合物

相关申请

本申请要求2021年8月19日提交的63/234,973号美国临时申请、2021年10月4日提交的63/251,972号美国临时申请、2021年10月27日提交的63/263,095号美国临时申请、2022年2月18日提交的63/311,622号美国临时申请和2022年8月17日提交的63/371,685号美国临时申请的优先权。各申请的内容在此以引用的方式全文并入本文。

技术领域

本公开涉及治疗高胆固醇血症和与PCSK9活性相关的其他病况(例如，动脉粥样硬化、动脉粥样硬化性心血管疾病、冠心病、代谢综合征、急性冠脉综合征或相关的心血管疾病和心脏代谢病况)的方法。

背景技术

前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶-kexin9型(以下简称“PCSK9”)，也称为神经凋亡调节转化酶1(“NARC-1”)，是被鉴定为分泌性枯草杆菌酶家族第九成员的蛋白酶K样枯草杆菌酶；参见Seidah et al.,2003PNAS100:928-933。PCSK9属于哺乳动物丝氨酸蛋白酶前蛋白转化酶家族，包含N端信号序列、前结构域、催化结构域和C端结构域；参见Seidah et al.,2012Nat.Rev.Drug Discov.11:367–383。一项对PCSK9转录调控的研究表明，它受到甾醇调控元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding protein,SREBP)的调控，如在参与胆固醇代谢的其它基因中所观察到的；Maxwell et al.,2003J.Lipid Res.44:2109-2119，也如在牵涉脂蛋白代谢的其他基因中是典型的；Dubuc et al.,2004Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.24:1454-1459。已证实他汀类药物以归因于药物降胆固醇作用的方式上调PCSK9的表达；同上。此外，已证实PCSK9启动子具有两个参与胆固醇调节的保守位点，即甾醇调节元件和Sp1位点；同上。

而在内质网中，PCSK9表现为仅有对残基Gln-152和Ser-153之间的自动裂解的催化活性；参见Naureckiene et al.,2003Arch.Biochem.Biophys.420:55–67；Seidah etal.,2003Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100:928–933。前结构域在随后通过反式高尔基体网络运输期间保持与催化结构域紧密相关。已证明经由自动裂解的成熟对PCSK9分泌和随后的细胞外功能而言至关重要(参见Benjannet et al.,2012J.Biol.Chem.287:33745–33755)。因此，多项证据表明，PCSK9尤其会降低肝脏LDLR蛋白的量，从而损害肝脏从循环中清除低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)胆固醇的能力。

小鼠肝脏中腺病毒介导的PCSK9的过表达导致循环低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol,LDL-C)的累积，这是由于肝脏LDLR蛋白的显著损失，对LDLR mRNA水平没有影响；Benjannet et al.,2004J.Biol.Chem.279:48865-48875；Maxwell&Breslow,2004PNAS101:7100-7105；Park et al.,2004J.Biol.Chem.279:50630-50638；和Lalanne et al.,2005J.Lipid Res.46:1312-1319。PCSK9过表达对提高小鼠循环LDL-C水平的作用完全依赖于LDLR的表达，再次表明PCSK9对LDL-C的调节是通过LDLR蛋白下调介导的。与这些发现一致，缺乏PCSK9或其中PCSK9 mRNA已被反义寡核苷酸抑制剂降低的小鼠具有更高水平的肝LDLR蛋白和更强的循环LDL-C清除能力；Rashid et al.,2005PNAS102:5374-5379；and Graham et al.,2007J.Lipid Res.48(4):763-767。另外，通过siRNA降低培养的人肝细胞中的PCSK9水平还导致更高的LDLR蛋白水平和增加的LDL-C摄取能力；Benjannet et al.,2004J.Biol.Chem.279:48865-48875；和Lalanne et al.,2005J.Lipid Res.46:1312-1319。总之，这些数据表明PCSK9作用通过降低LDLR蛋白水平导致LDL-C增加。

PCSK9基因中的许多突变还结论性地与常染色体显性高胆固醇血症(autosomaldominant hypercholesterolemia,ADH)相关，这是一种以血浆中低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein,LDL)颗粒显著升高为特征的遗传性代谢紊乱，可导致早发性心血管功能衰竭；参见Abifadel et al.,2003Nature Genetics 34:154-156；Timms et al.,2004Hum.Genet.114:349-353；Leren,2004Clin.Genet.65:419-422。Abifadel等人(同上)随后发表的一项关于S127R突变的研究，报告了携带这种突变的患者在血浆中表现出较高的总胆固醇和apoB100，这归因于(1)含apoB100的脂蛋白如低密度脂蛋白(low densitylipoprotein,LDL)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)和中密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein,IDL)的过量产生，和(2)所述脂蛋白的清除率或转化率的相关降低；Ouguerram et al.,2004Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.24:1448-1453。

因此，毫无疑问的是PCSK9在LDL的调节中发挥作用。PCSK9的表达或上调与增加的LDL胆固醇的血浆水平相关，并且PCSK9表达的相应抑制或缺乏与降低的LDL胆固醇血浆水平相关。已发现与PCSK9中的序列变异相关的降低的LDL胆固醇水平赋予对冠心病的保护；Cohen,2006N.Engl.J.Med.354:1264-1272。

在临床试验中，LDL胆固醇水平的降低与冠状动脉事件的发生率直接相关；Law etal.,2003BMJ 326:1423-1427。已发现血浆LDL胆固醇水平的适度终生降低与冠状动脉事件发生率的显著降低相对应；Cohen et al.,2006N.Engl.J.Med.354:1264-1272。即使在非脂质相关心血管危险因素高流行的群体中情况也是如此；同上。因此，从LDL胆固醇水平的管理控制中可以获得很大益处。

因此，亟需确定有效治疗心血管疾病的化合物和/或药剂，包括在LDL调节中对PCSK9的功能的拮抗；然而，一般来说，因为PCSK9在血液中循环并且对细胞表面LDL受体具有适度的结合亲和力，迄今为止利用这种机制治疗与高血清LDL水平相关的疾病的尝试一直集中于大生物分子(例如抗体)的使用。尽管PCSK9导向的siRNA或单克隆抗体(mAb)疗法可降低高胆固醇血症患者的LDL-C，但这两种类型的疗法均通过注射给药。小肽或小分子作为靶向PCSK9的药物的治疗潜力才刚刚开始被探索；参见例如，Tombling et al.,Atherosclerosis 330(2021)52-60。此外，没有多少化合物适合配制成剂型以利用口服施用途径给药此类化合物，口服施用途径对于为其中PCSK9活性的调节可能起作用的病况提供疗法而言是非常理想的。

WO2019/246349公开了可用于治疗与PCSK9活性相关的心血管疾病和病况的环肽化合物。本公开通过提供治疗高胆固醇血症和与PCSK9活性相关的其他病况的方法，提高了现有技术的水平，所述方法理想地包括口服使用所确定的PCSK9抑制剂。本文还提供了PCSK9抑制剂的新的盐的形式。

发明内容

本公开提供了治疗高胆固醇血症和与PCSK9活性相关的其他病况(例如，动脉粥样硬化、动脉粥样硬化性心血管疾病、冠心病、代谢综合征、急性冠脉综合征或相关的心血管疾病和心脏代谢病况)的方法，其通过向受试者口服施予一定量的式(I)化合物，

其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且其中式(I)化合物的施予量为约5mg至约300mg的。

本公开还提供了一种在有需要的受试者中降低LDL-C的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且其中式(I)化合物的施予量为约5mg至约300mg的。

本公开还提供了一种在有此需要的受试者中治疗动脉粥样硬化性心血管疾病的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且其中式(I)化合物施予量为约5mg至约300m。

本公开还提供了一种在有此需要的受试者中抑制PCSK9活性的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且其中式(I)化合物的施予量为约5mg至约300mg。

本发明还涉及式(I)化合物的特定盐。

本发明还涉及包含式(I)化合物(包括式(I)化合物的特定盐)和渗透促进剂的药物组合物。

附图说明

图1示出了约10至约300mg的不同剂量的单剂量化合物1(式(I)的化合物)的药代动力学。

图2示出了向健康男性参与者施予10至300mg化合物1的单口服剂量后血浆药代动力学的统计数据的总结。

图3示出了式(I)化合物以及已知的抗PCSK9单克隆抗体和抗PCSK9 siRNA活性剂以及安慰剂的制剂相对于基线LDL-C的％变化。

图4示出了在化合物1的单剂量之后，游离PCSK9的血浆水平相较于基线的降低。

图5示出了化合物1、化合物2和化合物3之间的稳定性差异。

具体实施方式

本公开提供了一种治疗高胆固醇血症和与PCSK9活性相关的其他病况，例如，动脉粥样硬化、动脉粥样硬化性心血管疾病、冠心病、代谢综合征、急性冠脉综合征或相关的心血管疾病和心脏代谢病况)的方法。根据本公开的方法，其中A^-选自药学上可接受的阴离子的式(I)化合物

被口服施予需要治疗的受试者。

在一个实施方案中，本公开提供了一种在需要此种治疗的受试者中治疗高胆固醇血症的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且其中式(I)化合物的施予量为约5mg至约300mg。

在一个实施方案中，本公开总体上涉及在有此需要的受试者中降低LDL-C的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且式(I)化合物的量为约5mg至约300mg。

在一个实施方案中，本公开涉及在需要此种治疗的受试者中治疗动脉粥样硬化性心血管疾病的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且其中式(I)化合物的所述量为约5mg至约300mg。

在一个实施方案中，本公开总体上涉及在有此需要的受试者中抑制PCSK9活性的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且其中式(I)化合物的所述量为约5mg至约300mg的。如本文所用，“抑制(inhibiting)”或“拮抗(antagonizing)”是指向受影响的组织提供式(I)化合物，式(I)化合物对抗其作用、抑制、抵消、中和或减弱受影响组织中PCSK9的一种或多种活性或功能。在一些实施方案中，用于抑制PCSK9活性的方法用于治疗如上所述的与PCSK9活性相关的病症，或者，替代性地，用于在可受益于PCSK9拮抗剂作用的疾病、病症或病况中提供疗法。

关于式(I)化合物、其药学上可接受的阴离子、其量、所治疗的受试者、口服施用、口服剂型、制剂、药学上可接受的赋形剂、LDL-C降低、PCSK9抑制等的以下细节涉及上文和下文所述的本公开的所有方法。

式(I)化合物

也称“化合物A”，其中A^-选自药学上可接受的阴离子，用于本公开的所有方法中。如本文所用，“药学上可接受的阴离子”是指适于形成药学上可接受的盐的阴离子。

本文所用的术语“盐”及其在短语“药学上可接受的盐”中的使用包括以下中的任一种：与无机和/或有机酸形成的酸性盐、与无机和/或有机碱形成的碱性盐、两性离子和季铵络合物。本发明的化合物的盐可以通过本领域普通技术人员已知的方法形成，例如，通过使本发明的化合物与一定量(例如当量)的酸或碱在介质(例如盐在其中沉淀的介质)中或在水性介质中反应、然后冻干。

本发明的化合物含有四配位的带正电的氮原子，其可以通过添加阴离子以形成盐或通过在分子的不同部分中形成阴离子以产生两性离子(偶称内盐)来稳定。因此，本发明的化合物可以以季铵盐或季铵两性离子的形式制备。

因此，本发明化合物的结构表示，无论是盐形式还是两性离子形式，还包括上述此种化合物的所有其它形式。因此，本发明的一个方面是提供药学上可接受的盐或两性离子形式的本发明的化合物。本领域技术人员将认识到其中本发明的化合物可形成此类盐的那些情况，包括其中四配位氮可被季铵化且带电氮形式被缔合的阴离子稳定的情况。术语“药学上可接受的盐”是指不是生物学地或其他方面上不期望的(例如，对其接受者既不是毒性的也不是另外有害的)任何盐(包括盐和内盐，如两性离子)。

由碱性(或酸性)药物化合物的药学上可接受的盐的形成已有广泛讨论，例如，通过S.Berge et al.,Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould,International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson et al,The Practiceof Medicinal Chemistry(1996),Academic Press,New York；in The Orange Book(Food&Drug Administration,Washington,D.C.on their website)；以及P.Heinrich Stahl,Camille G.Wermuth(Eds.),Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,(2002)Int’l.Union of Pure and Applied Chemistry,pp.330-331。这些公开内容以引用的方式并入本文。

本公开考虑式(I)化合物的所有可用的盐，包括在制备药学制剂中通常被认为是安全的盐和当前可在本领域普通技术之内形成且随后被归类为是在用于制备药学制剂中“通常被认为是安全的”的那些，在本文中术语化为“药学上可接受的盐”。

药学上可接受的酸盐的实例包括但不限于乙酸盐，包括三氟乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐(也称为十烷酸盐)、环戊烷丙酸盐(cyclopentanepropionates)、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(pamoates)、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐(例如本文提及的那些)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonates/tosylates)、十一酸盐等。因此，根据本公开内容，对应于这些盐中的每一种的药学上可接受的阴离子可以是A^-。

可用于本公开的药学上可接受的盐及其相应的药学上可接受的阴离子的进一步实例包括但不限于氟酸盐、盐酸盐、溴酸盐、碘酸盐、乙酸盐和癸酸盐。在本发明的一个实施方案中，药学上可接受的阴离子选自氯离子、乙酸根或癸酸根。如本文所用，癸酸盐和十烷酸盐可互换使用。

在本发明的一个实施方案中，药学上可接受的阴离子是氯离子，并且式(I)的化合物是

在一个实施方案中，化合物1是式(I)化合物的盐酸盐的无定形形式。在图5中，“API无定形盐酸盐”是指化合物1。

在本发明的一个实施方案中，药学上可接受的阴离子是癸酸盐，且式(I)的化合物是

其在本文中称为“化合物2”。在一个实施方案中，化合物2是式(I)化合物的癸酸盐的无定形形式。

在本发明的一个实施方案中，药学上可接受的阴离子为乙酸根，且所述式(I)化合物为

其在本文中称为“化合物3”。在一个实施方案中，化合物3是式(I)

化合物的乙酸盐的无定形形式。

在一个实施方案中，本发明的方法包括施予式(I)的化合物，其中式(I)的化合物选自

无定形盐酸盐(化合物1)的制备采用酸化步骤，其中盐酸盐通过在超临界流体色谱法和蒸发之后向产物中添加盐酸而被引入。图5证实了与在给定批次的化合物1(称为“API无定形盐酸盐”)中过量HCl的添加相关的风险，因为这种过量的盐酸(其是一种强酸)会导致分子的化学降解增加，如通过图5中无定形盐酸盐相比于无定形乙酸盐或无定形癸酸盐显示出的更高杂质水平所观察到的。尽管无定形盐酸盐的稳定性取决于用于合成该盐的方法，但是，无论使用何种合成方法，无定形乙酸盐和无定形癸酸盐不受该风险的影响并显示出稳定性。

本公开还提供了在有此需要的受试者中抑制PCSK9活性的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且其中式(I)化合物的施予量为约5mg至约300mg。

式(I)化合物是具有拮抗PCSK9功能的性质的化合物，因此是PCSK9特异性拮抗剂或抑制剂。式(I)化合物以及制备该化合物的方法公开于WO2019/246349A1中，其全部公开内容以引用的方式并入本文。

式(I)化合物使用常规立体化学符号示出一些不对称碳中心。因此，实心黑色“楔形”键表示从再现介质的平面突出的键，而“散列楔形”键表示下行到再现介质的平面中的键。如常规的，普通实线表示所描绘的键合的所有空间构型。因此，在没有提供特定立体化学符号的情况下，该表示考虑结构特征的所有立体化学和空间取向。

式(I)的化合物是稳定的。如本文所用，“稳定的”是指化合物可被制备和分离并且其结构和性质在足以允许将化合物用于本文所述目的(例如，治疗性施予受试者)的时间期间内保持或可使其保持基本上不变。

式(I)化合物是可生物利用的，特别是口服地可生物利用的。如本文所用，“可生物利用的”是指式(I)化合物被身体吸收和利用的能力。如本文所用，“口服可生物利用的”是指当经口服用时式(I)化合物可被身体吸收和利用。

如本文所用，术语“治疗”或“治疗”是指抑制或改善正在经历或表现出疾病、病况或病症的病理学或症状的受试者的疾病、病况或病症。例如，抑制疾病、病况或病症是指阻止所述疾病、病况或病症的病理学和/或症状的进一步进展。另外，改善疾病、病况或病症例如是指逆转病理学和/或症状，例如降低疾病的严重性。

如本文所用，术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”或“预防(prevention)”包括预防与被预防的疾病、病况或病症有关或由其引起的至少一种症状。

如本文所用，“受试者”是指动物，优选哺乳动物，并且特别是人类或非人类动物，包括家畜动物和家养动物，包括但不限于牛、马、绵羊、猪、山羊、兔、猫、犬和其他需要治疗的哺乳动物。在一些实施方案中，受试者是人类。

如本文所用，关于式(I)化合物的术语“施用”及其变体(例如“施予”)是指将化合物提供给需要治疗的受试者。如本文所用，“口服”及其变体(例如“经口”)是指通过口施用，即通过口施用式(I)化合物。

向受试者施予式(I)的化合物包括自我施用和通过他者向受试者施用。受试者可能需要或期望治疗现有的疾病或医学病症、或可能需要或期望预防性治疗以预防或降低疾病或医学病症发生的风险。如本文所用，如本文所用，“需要”治疗现有病症或预防性治疗的受试者涵盖医疗专业人员对需要的确定以及患者对此类治疗的期望。

除非另有说明或从上下文中显而易见，如本文所用，术语“约”应理解为在所述值10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％之内。

在一个实施方案中，施予受试者的量为约5mg至约300mg的式(I)化合物。本发明包括5-300mg之间的整数和半整数。在一个实施方案中，施用的量为约10mg至约300mg的式(I)化合物。在一个实施方案中，施用的量是约10mg或约20mg的式(I)化合物。在一个实施方案中，施用的量是约5、约6、约10、约12、约15、约18、约20、约24、约25、约30mg、约35mg或约100mg的式(I)化合物。在一个实施方案中，施用的量是约10、约12、约15、约18、约20、约24、约25或约30mg的式(I)化合物。在一个实施方案中，施用的量为约10、约10.5、约11、约11.5、约12、约12.5、约13、约13.5、约14、约14.5、约15、约15.5、约16、约16.5、约17、约17.5、约18、约18.5、约19、约19.5、约20、约20.5、约21、约21.5、约22、约22.5、约23、约23.5、约24、约24.5、约25、约25.5、约26、约26.5、约27、约27.5、约28、约28.5、约29、约29.5或约30mg的式(I)化合物。在一个实施方案中，施用的量为约5mg至约300mg的日剂量。在一个实施方案中，施用的量为约10、约10.5、约11、约11.5、约12、约12.5、约13、约13.5、约14、约14.5、约15、约15.5、约16、约16.5、约17、约17.5、约18、约18.5、约19、约19.5、约20、约20.5、约21、约21.5、约22、约22.5、约23、约23.5、约24、约24.5、约25、约25.5、约26、约26.5、约27、约27.5、约28、约28.5、约29、约29.5或约30mg的式(I)化合物的日剂量。在一个实施方案中，施用的量是约5、约6、约10、约12、约15、约18、约20、约24、约25或约30mg的式(I)化合物的日剂量。在一个实施方案中，施用的量是约10、约12、约15、约18、约20、约24、约25或约30mg的式(I)化合物的日剂量。

在一个实施方案中，施予受试者的式(I)的量为约10mg至约30mg的式(I)化合物。在另一个实施方案中，施予受试者的量为约12mg至约27mg的式(I)化合物。在又另一个实施方案中，施予受试者的量为约15mg至约25mg的式(I)化合物。在一个实施方案中，施予受试者的量为约10mg至约20mg的式(I)化合物。在再另一个实施方案中，施予受试者的量为约15mg至约20mg的式(I)化合物。

在一个实施方案中，施予受试者的量为约10mg至约30mg的化合物1。在另一个实施方案中，施予受试者的量为约12mg至约27mg的化合物1。在又一个实施方案中，施予受试者的量为约15mg至约25mg的化合物1。在一个实施方案中，施予受试者的量为约10mg至约20mg的化合物1。在又一个实施方案中，施予受试者的量为约15mg至约20mg的化合物1。在一个实施方案中，所述量是约10、约10.5、约11、约11.5、约12、约12.5、约13、约13.5、约14、约14.5、约15、约15.5、约16、约16.5、约17、约17.5、约18、约18.5、约19、约19.5、约20、约20.5、约21、约21.5、约22、约22.5、约23、约23.5、约24、约24.5、约25、约25.5、约26、约26.5、约27、约27.5、约29、约29.5或约30mg的化合物1的日剂量。在一个实施方案中，所述量是约15、约15.5、约16、约16.5、约17、约17.5、约18、约18.5、约19、约19.5、约20、约20.5、约21、约21.5、约22mg化合物1的日剂量。在又一个实施方案中，向有需要的受试者施用的量是约15mg、约17.5mg、18mg、约20mg或约22mg的化合物1。

在一个实施方案中，施予受试者的量为约10mg至约30mg的化合物2。在另一个实施方案中，施予受试者的量为约12mg至约27mg的化合物2。在又一个实施方案中，施予受试者的量为约15mg至约25mg的化合物2。在一个实施方案中，施予受试者的量为约10mg至约20mg的化合物2。在又一个实施方案中，施予受试者的量为约15mg至约20mg的化合物2。在一个实施方案中，所述量是约10、约10.5、约11、约11.5、约12、约12.5、约13、约13.5、约14、约14.5、约15、约15.5、约16、约16.5、约17、约17.5、约18、约18.5、约19、约19.5、约20、约20.5、约21、约21.5、约22、约22.5、约23、约23.5、约24、约24.5、约25、约25.5、约26、约26.5、约27、约27.5、约29、约29.5或约30mg的化合物2的日剂量。在一个实施方案中，所述量是约15、约15.5、约16、约16.5、约17、约17.5、约18、约18.5、约19、约19.5、约20、约20.5、约21、约21.5、约22mg的化合物2的日剂量。在又一个实施方案中，向有需要的受试者施用的量是约15mg、约17.5mg、18mg、约20mg或约22mg的化合物2。

在一个实施方案中，施予受试者的量为约10mg至约30mg的化合物3。在另一个实施方案中，施予受试者的量为约12mg至约27mg的化合物3。在又一个实施方案中，施予受试者的量为约15mg至约25mg的化合物3。在一个实施方案中，施予受试者的量为约10mg至约20mg的化合物3。在又一个实施方案中，施予受试者的量为约15mg至约20mg的化合物3。在一个实施方案中，所述量是约10、约10.5、约11、约11.5、约12、约12.5、约13、约13.5、约14、约14.5、约15、约15.5、约16、约16.5、约17、约17.5、约18、约18.5、约19、约19.5、约20、约20.5、约21、约21.5、约22、约22.5、约23、约23.5、约24、约24.5、约25、约25.5、约26、约26.5、约27、约27.5、约29、约29.5或约30mg的化合物3的日剂量。在一个实施方案中，所述量是约15、约15.5、约16、约16.5、约17、约17.5、约18、约18.5、约19、约19.5、约20、约20.5、约21、约21.5、约22mg化合物3的日剂量。在又一个实施方案中，向有需要的受试者施用的量是约15mg、约17.5mg、18mg、约20mg或约22mg的化合物3。

在一个实施方案中，本发明的方法包括施用包含一定量的式(I)化合物的口服剂型。在另一个实施方案中，所述方法包括施用包含一定量的式(I)化合物的单一口服剂型。在另一个实施方案中，所述方法包括每日一次施用包含一定量的式(I)化合物的单一口服剂型。

在一个实施方案中，所述量是式(I)化合物的治疗或预防有效量。如本文所用，关于量的“治疗有效”或“预防有效”是指在期望的时间段内达到期望的治疗和/或预防效果所需的预期剂量的量。期望的效果可以是例如与所治疗的病症相关的至少一种症状的缓解、改善、减少或消除。例如，当治疗高胆固醇血症时，降低LDL-C是所需的效果。如本领域普通技术人员将理解，量可根据各种因素而变化，所述因素包括但不限于个体的疾病状态、年龄、性别和体重，以及PCSK9拮抗剂在个体中引发所需作用的能力。该反应可以通过体外测定、体内非人类动物研究证明，和/或通过临床试验进一步支持。

在一个实施方案中，口服施予包括施予包含一定量的式(I)化合物的单一口服剂型。在一个实施方案中，口服施予包括施予多于一种或多种口服剂型，各包含一定量的式(I)化合物或其部分。在一个实施方案中，口服施予包括每天一次施予包含一定量的式(I)化合物的单一口服剂型。在一个实施方案中，口服施予包括每天一次施予多于一种或多种口服剂型，各包含一定量的式(I)化合物或其部分。在一个实施方案中，口服施予包括每天多于一次(例如每天两次、三次或四次)施予包含一定量的式(I)化合物的单一口服剂型。在一个实施方案中，口服施予包括每天多于一次(例如每天两次、三次或四次)施予多于一种或多种口服剂型，各包含一定量的式(I)化合物或其部分。口服剂型可以在禁食或不禁食，即有或没有食物的情况下施予。在本发明的一个实施方案中，需要治疗的受试者在式(I)化合物的施用前禁食约30分钟。

在一个实施方案中，每天一次施予单一口服剂型，持续至少14天。在一个实施方案中，每天一次施予单一口服剂型，持续14天。在一个实施方案中，只要受试者需要治疗，每天一次施予单一口服剂型。

如本文所用，“口服剂型”是指包含式(I)化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物制剂，其适于通过受试者的口施用。如本文所用，术语“口服剂型”和“药物组合物”旨在涵盖指定量的指定成分的组合，以及直接或间接由指定量的指定成分的组合产生的任何产品。口服剂型可以包括式(I)化合物的全部量，例如约5mg至约300mg，其可以是日剂量或可以不是日剂量。口服剂型可以包括式(I)化合物的日剂量的一部分。

根据本公开的口服剂型可以是固体、半固体或液体。此类口服剂型包括但不限于粉末、分散颗粒、迷你片剂和珠剂(其可用于例如压片、封装或直接施用)、丸剂、片剂、漆片、糖衣片、硬胶囊和软胶囊(包括明胶胶囊)、锭剂、速溶片、水性、酒精性或油性溶液、凝胶、糖浆、乳液或悬浮液。根据本公开的口服剂型可附加性地包括一种或多种改变释放特性的包衣，例如赋予延迟释放的包衣或具有延长释放特性的制剂。本公开内容还包括旨在在使用前不久转化为悬浮液或溶液的制剂；实例包括但不限于冷冻干燥制剂和吸附到固体吸收介质中的液体制剂。在一个实施方案中，口服剂型是液体填充胶囊，例如，填充有式(I)化合物组合和丙二醇(例如以2:1的比例)的硬明胶胶囊。在一个实施方案中，口服剂型是液体填充胶囊，例如，填充有式(I)化合物组合/>和丙二醇(例如以2:1的比例)的硬明胶胶囊，其用肠溶胶囊(例如HPMC/>肠溶胶囊(/>Lonza))再次封装。在一个实施方案中，口服剂型为混悬剂，例如将式(I)化合物以例如2:1的比例混悬于Orablend SF和丙二醇的组合中。在一个实施方案中，口服剂型是干填充的肠溶包衣囊，例如干填充的HPMC/>肠溶胶囊(/>Lonza)。在一个实施方案中，口服剂型是片剂。在一个实施方案中，口服剂型是片剂。在另一个实施方案中，口服剂型是薄膜包衣的片剂。

如普通技术人员将理解的，药学上可接受的赋形剂是使组合物适应特定施用途径或帮助将组合物加工成剂型而本身不发挥活性药物成分作用的任何组分。通常，组合物包含多于一种药学上可接受的赋形剂，并且药学上可接受的赋形剂是基于口服剂型的形式来选择的。药学上可接受的赋形剂的实例和例如如上所述的口服剂型制备方法可参见A.Gennaro(ed.),Remington:The Science and Practice of Pharmacy,20th Edition,(2000),Lippincott Williams&Wilkins,Baltimore,MD。

适用于本公开的药学上可接受的赋形剂包括但不限于载体(例如用于丸剂、片剂、糖衣片剂和硬明胶胶囊的乳糖、淀粉、淀粉衍生物、滑石粉、硬脂酸或其盐；例如用于软胶囊的脂肪、蜡、半固体和液体多元醇、天然或硬化油等；例如用于溶液、乳液或糖浆的生理上可接受的氯化钠溶液、醇、甘油、多元醇、蔗糖、转化糖、葡萄糖、甘露醇、植物油等)、填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、压制助剂、润湿剂、稳定剂、乳化剂、吸收促进剂、渗透促进剂、渗透促进剂、分散剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、芳香剂、增稠剂、稀释剂、缓冲物质、溶剂、增溶剂、用于实现贮库效应的试剂、用于改变渗透压的盐、包衣剂和/或抗氧化剂。选择用于口服剂型的特定的药学上可接受的赋形剂及其量，以在可接受体积的口服剂型中提供所需量的式(I)化合物，使得其可在被施予口服剂型的受试者中在可接受的时间段内提供活性物的治疗性血清水平，并且使得口服剂型在可接受的温度范围内储存可接受的时间期间保持生物活性。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物含有选自聚乙二醇(具有3000以上的不同分子量)、微晶纤维素、甘露醇、淀粉、磷酸二钙、碳酸钙、碳酸钠、乳糖或其组合的稀释剂。在一个实施方案中，本发明的药物组合物含有选自聚乙二醇(PEG4000)、微晶纤维素、甘露醇、乳糖或其组合的稀释剂。在进一步的实施方案中，稀释剂选自聚乙二醇(PEG4000)、微晶纤维素或乳糖。在一个实施方案中，本发明的药物组合物含有选自交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮或羟基乙酸淀粉钠的崩解剂。在进一步的实施方案中，崩解剂是交联羧甲基纤维素钠。在一个实施方案中，本发明的药物组合物含有选自二氧化硅、淀粉、滑石、硬脂酸镁或磷酸三钙的助流剂。在进一步的实施方案中，助流剂选自二氧化硅或磷酸三钙。在一个实施方案中，本发明的药物组合物含有选自硬脂酸镁或硬脂酰富丁酸钠或二者的润滑剂。在一个实施方案中，本发明的药物组合物含有选自丙二醇、聚山梨醇酯80、山梨醇、聚氧乙烯蓖麻油(cremophor EL)、蓖麻油、玉米油、棉籽油、红花油、芝麻油、大豆油、薄荷油、橄榄油、miglyol、甘油或其组合的增溶剂。在进一步的实施方案中，增溶剂是丙二醇。

在一个实施方案中，口服剂型还包含渗透促进剂。如本文所用，“渗透促进剂”是指改善活性剂(例如式(I)化合物)从胃肠道吸收的药学上可接受的赋形剂。渗透促进剂通过促进穿过肠上皮细胞之间的紧密连接的尺寸有限的通道来提供细胞不可渗透的化合物的吸收。(D.J.Drucker,Advances in oral peptide therapeutics,Nat Rev Drug Discov,19,pp 277-289(2020)。)合适的渗透促进剂包括但不限于癸酸钠、Salcaprozate sodium(SNAC)及其组合。/>也称为辛酰基己酰基聚乙二醇-8甘油酯(Caprylocaproyl Polyoxyl-8glycerides)，由Gattefosse,Saint Priest,Lyon,France生产。在一个实施方案中，口服剂型包含癸酸钠。当存在于口服剂型中时，使用至多1800mg的量、至多约720mg的量、至多约540mg的量、至多约360mg的量、范围在约90mg至约360mg的量、范围在约180至约360mg的量、或90mg、180mg或360mg的量的渗透促进剂。在本发明的一个实施方案中，口服剂型包含至多约360mg的量、范围在约90mg至约360mg的量、范围在约180至约360mg的量、或90mg、180mg或360mg的量的渗透促进剂。在一个实施方案中，本发明的口服剂型包含90mg、180mg或360mg量的渗透促进剂。在一个实施方案中，本发明的口服剂型包含180mg或360mg量的渗透促进剂。

当存在于口服剂型中时，使用至多约360mg的量、范围在约90mg至约360mg的量、范围在约180至约360mg的量、或90mg、180mg或360mg的量的癸酸钠。在一个实施方案中，本发明的口服剂型包含90mg、180mg或360mg量的渗透促进剂癸酸钠。在一个实施方案中，在口服剂型中使用180mg癸酸钠。在一个实施方案中，口服剂型中使用360mg癸酸钠。

在本发明的一个实施方案中，干填充胶囊或片剂可用于向有需要的受试者施予式(I)化合物。在本发明的药物组合物中，可以包括渗透促进剂。在一个实施方案中，渗透促进剂如癸酸钠的量可以为1重量％至75重量％。如本文所用，重量％是指成分相对于药物组合物的总重量的重量百分比。在另一个实施方案中，药物组合物中渗透促进剂的量为约18重量％至约65重量％。对于片剂，渗透促进剂如癸酸钠的量可以为约22重量％至约65重量％。口服剂型可以通过标准方法制备，包括湿法制粒和干法制粒。

表1：使用化合物1的制剂的实施例

在一个实施方案中，本发明是包含式(I)的化合物和渗透促进剂的药物组合物，

其中A^-是药学上可接受的阴离子。在进一步的实施方案中，渗透促进剂是癸酸钠。在进一步的实施方案中，药物组合物还包含稀释剂。在进一步的实施方案中，所述组合物包含两种或更多种稀释剂，其中所述两种或更多种稀释剂包含微晶纤维素、聚乙二醇(PEG4000)和乳糖的组合。

在本发明的一个实施方案中，药物组合物包含a)相对于药物组合物的总重量按重量计1％至7％的式(I)化合物；b)相对于所述药物组合物的总重量约1重量％至75重量％的渗透促进剂；c)至少一种稀释剂；d)任选的助流剂和/或润滑剂。在一个实施方案中，相对于药物组合物的总重量约18重量％至74重量％的渗透促进剂存在于药物组合物中。在本发明的另一个实施方案中，药物组合物包含a)相对于药物组合物的总重量约1重量％至7重量％的式(I)化合物；b)相对于所述药物组合物的总重量约22重量％至67重量％的选自癸酸钠或的渗透促进剂；c)至少一种选自PEG4000/微晶纤维素/丙二醇和乳糖的稀释剂或增溶剂；d)任选的助流剂；和e)任选的润滑剂。

在本发明的一个实施方案中，药物组合物包含a)相对于药物组合物的总重量按重量计约2％至6％的式(I)化合物；b)相对于药物组合物的总重量按重量计约18％至74％的渗透促进剂，其中所述渗透促进剂为癸酸钠；c)至少一种选自PEG4000、微晶纤维素或乳糖的稀释剂；d)相对于所述药物组合物的总重量按重量计0％至约3％的助流剂，其中所述助流剂为二氧化硅；e)相对于所述药物组合物的总重量按重量计0％至约2％的润滑剂，其中所述润滑剂是硬脂酸镁和f)任选的至少一种崩解剂。

在一个实施方案中，受试者具有用一种或多种他汀类药物治疗高胆固醇血症的历史，所述治疗已经或尚未中断；换言之，用式(I)化合物治疗的受试者目前或之前以他汀疗法治疗。在一个实施方案中，受试者未接受过他汀类药物；换言之，受试者从未以他汀疗法治疗。在一个实施方案中，受试者同时以他汀疗法治疗，所述治疗已经或尚未达到其治疗目标。

在一个实施方案中，一种或多种附加性的药理学活性剂可以与式I的化合物组合施用。如本文所用，“附加性的药理学活性剂”意指在体内有活性的药学活性剂，包括在施用后转化为药学活性形式的前药，其不同于式I化合物，并且还包括附加性的药理学活性剂的游离酸、游离碱和药学上可接受的盐。通常，任何合适的附加性的药理学活性剂，包括但不限于抗高血压剂、抗动脉粥样硬化剂如脂质改性化合物、抗糖尿病剂和/或抗肥胖剂可以与式I化合物以任意组合在单一口服剂型中使用(固定剂量药物组合)或可以以一种或多种单独的剂量制剂施予受试者，其允许式(I)化合物和附加性药理学活性剂的同时或顺序施用(单独的活性剂的共同施用)。

可使用的附加性药理学活性剂的实例包括但不限于血管紧张素转换酶抑制剂(例如，阿拉普利、贝那普利、卡托普利、西罗普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、依那普利拉、福辛普利、咪达普利、赖诺普利、莫维普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、螺普利、替莫普利或群多普利)、血管紧张素II受体拮抗剂(例如氯沙坦，即缬沙坦、坎地沙坦、奥美沙坦、替美沙坦以及任何这些药物与氢氯噻嗪例如/>的组合)、中性肽链内切酶抑制剂(例如塞奥芬和膦酰二肽)、醛固酮拮抗剂、醛固酮合酶抑制剂、肾素抑制剂、肾素抑制剂(例如二肽和三肽的尿素衍生物(参见美国专利5,116,835号)、氨基酸及其衍生物(美国专利5,095,119和5,104,869号)、通过非肽键连接的氨基酸链(美国专利5,114,937号)、二肽和三肽衍生物、肽基氨基二醇和肽基β-氨基酰基氨基二醇氨基甲酸酯、以及小分子肾素抑制剂(包括二醇磺酰胺和亚磺酰基)、N-吗啉代衍生物、N-杂环醇和pyrolimidazolones、胃酶抑素衍生物以及含酮肽的氟代和氯代衍生物、enalkrein、RO 42-5892、A 65317、CP 80794、ES1005,ES 8891、SQ 34017、阿利吉仑(2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(2-氨基甲酰基-2-甲基丙基)-5-氨基-4-羟基-2,7-二异丙基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)-苯基]-辛酰胺半富马酸酯)SPP600、SPP630和SPP635)、内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶5抑制剂(例如西地那非、他达那非和伐地那非)、血管扩张剂、钙通道阻滞剂(例如，氨氯地平、硝苯地平、维拉帕米、地尔硫卓、加洛帕米、尼鲁地平、尼莫地平、尼卡地平)、钾通道激活剂(例如，尼可地尔、吡那地尔、克罗卡林、米诺地尔、阿普卡林、洛普唑仑)、利尿剂(例如氢氯噻嗪)、交感神经药、β-肾上腺素能阻断药物(例如普萘洛尔、阿替洛尔、比索洛尔、卡维地洛、美托洛尔或酒石酸美托洛尔)、α肾上腺素能阻断药物(例如多沙佐星、哌佐星或α甲基多巴)、中枢α肾上腺素激动剂、外周血管扩张剂(例如肼屈嗪)、降脂剂例如HMG-CoA还原酶抑制剂例如以内酯前药形式作为/>和/>销售并且在施用后起到抑制剂作用的辛伐他汀和洛伐他汀、和二羟基开环酸HMG-CoA还原酶抑制剂的药学上可接受的盐如阿托伐他汀(特别是作为/>销售的钙盐)、罗素伐他汀(特别是作为出售的钙盐)、普伐他汀(特别是作为/>出售的钠盐)、氟伐他汀(特别是作为/>出售的钠盐)、克伐他汀和匹伐他汀、胆固醇吸收抑制剂例如依折麦布(ezetimibe)/>和依折麦布与任何其他降脂剂例如上述HMG-CoA还原酶抑制剂的组合，特别是与辛伐他汀/>或阿托伐他汀钙、速释或缓释形式的烟酸和/或与HMG-CoA还原酶抑制剂、烟酸受体激动剂如阿昔莫司和阿西夫兰以及烟酸受体部分激动剂、包括胰岛素和胰岛素模拟物(例如，德谷胰岛素、甘精胰岛素、赖脯胰岛素)的代谢改变剂、二肽基肽酶-IV(DPP-4)抑制剂(例如，西格列汀、阿格列汀、奥格列汀、利格列汀、维格列汀)、胰岛素增敏剂，包括(i)PPARγ激动剂，例如格列酮类(例如吡格列酮、AMG 131、MBX2044、mitoglitazone、lobeglitazone、IDR-105、罗格列酮和巴格列酮)，和其它PPAR配体，包括(1)PPARα/γ双激动剂(例如，ZYH2、ZYH1、GFT505、西格列羧、莫格列扎、aleglitazar、sodelglitazar和naveglitazar)，(2)PPARα激动剂例如非诺贝酸衍生物(例如，优瑞脂、氯贝丁酯、环丙贝特、非诺贝特、苯扎贝特)，(3)选择性PPARγ调节剂(SPPARγM’s)，(例如，例如公开于WO 02/060388、WO 02/08188、WO 2004/019869、WO 2004/020409、WO 2004/020408和WO 2004/066963的那些)；(4)PPARγ部分激动剂，(ii)双胍类，例如二甲双胍及其药学上可接受的盐，特别是盐酸二甲双胍，及其缓释制剂，例如Glumetza^TM、Fortamet^TM和GlucophageXR^TM，和(iii)蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制剂(例如，ISIS-113715和TTP814)、胰岛素或胰岛素类似物(例如，地特胰岛素、谷赖胰岛素、德谷胰岛素、甘精胰岛素、赖脯胰岛素以及各自的可吸入制剂)、瘦素和瘦素衍生物和激动剂、胰淀素和胰淀素类似物(例如普兰林肽)、磺酰脲类和非磺酰脲类胰岛素促分泌剂(例如甲苯磺丁脲、格列本脲、格列吡嗪、格列美脲、米格列奈、美格列奈、那格列奈和瑞格列奈)、α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇)、胰高血糖素受体拮抗剂(例如，MK-3577、MK-0893、LY-2409021和KT6-971)、肠降血糖素模拟物，例如GLP-1、GLP-1类似物、衍生物和模拟物、GLP-1受体激动剂(例如，度拉鲁肽、索马鲁肽、阿必鲁肽、艾塞那肽、利拉鲁肽、利西拉来、他斯鲁肽、CJC-1131和BIM-51077，包括其鼻内、透皮和每周一次的制剂)、胆汁酸螯合剂(例如，考来替兰、考来司胺、盐酸考来雪仑、考来替泊、考来烯胺和交联葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物)、酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶抑制剂(例如阿伐麦布)、抗肥胖化合物、用于治疗炎性病况的药物，例如阿司匹林、非甾体类抗炎药或NSAID、糖皮质激素和选择性环氧合酶-2或COX-2抑制剂、葡萄糖激酶激活剂(GKA)(例如AZD6370)、11β-羟基类固醇脱氢酶1型抑制剂(例如美国专利6,730,690和LY-2523199号中公开的那些)、CETP抑制剂(例如anacetrapib，torcetrapib和evacetrapib)、果糖1,6-二磷酸酶的抑制剂(例如美国专利6,054,587、6,110,903、6,284,748、6,399,782和6,489,476号中公开的那些)、乙酰CoA羧化酶1或2(ACC1或ACC2)抑制剂、AMP活化蛋白激酶(AMPK)活化剂、G蛋白偶联受体的其它激动剂：(i)GPR-109、(ii)GPR-119(例如MBX2982和PSN821)、和(iii)GPR-40(例如TAK875)、SSTR3拮抗剂(例如WO 2009/001836中公开的那些)、神经调节肽U受体激动剂(例如，诸如WO 2009/042053中公开的那些，包括但不限于神经调节肽S(NMS))、SCD调节剂、GPR-105拮抗剂(例如，诸如WO 2009/000087中公开的那些)、SGLT抑制剂(例如ASP1941、SGLT-3、恩格列净、达格列净、卡格列净、BI-10773、埃格列净、remogloflozin、TS-071、妥格列净、依格列净和LX-4211)、酰基辅酶A抑制剂：二酰基甘油酰基转移酶1和2(DGAT-1和DGAT-2)、脂肪酸合酶抑制剂、酰基辅酶A抑制剂：单酰基甘油酰基转移酶1和2(MGAT-1和MGAT-2)、TGR5受体激动剂(也称为GPBAR1、BG37、GPCR19、GPR131和M-BAR)、回肠胆汁酸转运蛋白抑制剂、PACAP、PACAP模拟物和PACAP受体3激动剂、PPAR激动剂、蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制剂、IL-1b抗体(例如XOMA052和卡那单抗)、甲磺酸溴隐亭及其快速释放制剂、以及贝培多酸(bempedoicacid)、以及有益于治疗上述病况或病症的其他药物，包括化学上可能的上述附加性的药理学活性剂的游离酸、游离碱和药学上可接受的盐形式。

在一个实施方案中，附加性的药理学活性剂是他汀类药物、依折麦布、贝培多酸(bempedoic acid)、被认为是护理标准的任何其他胆固醇降低剂或其任意组合。

在一个实施方案中，本公开的方法还包括施用他汀类药物的步骤。因此，式(I)化合物将与至少一种他汀类药物共同施用。式(I)化合物可与他汀类药物同时或单独施用。这种组合施用可以包括式(I)化合物和他汀类药物在同一口服剂型中同时施用、以单独剂型同时施用和单独施用。即，式(I)化合物和他汀类药物可以一起配制在相同的口服剂型中并同时施用。或者，式(I)化合物和他汀类药物可以同时施用，其中两者存在于单独的制剂中。在另一个替代方案中，可以在施用式(I)化合物后立即施用他汀类药物，或反之亦然。在单独施用方案的一些实施方案中，式(I)化合物和他汀类药物间隔几分钟、或间隔几小时、或间隔几天施用。

在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗之前的LDL-胆固醇基线水平降低。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗前的LDL-C基线水平降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、超过50％、至少60％、超过60％、至少65％、超过65％、至少70％、超过70％、至少75％、超过75％、至少80％、超过80％、至少85％、超过85％或至少90％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗前的LDL-C基线水平降低超过50％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗前的LDL-C基线水平降低超过60％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗前的LDL-C基线水平降低超过65％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗前的LDL-C基线水平降低超过70％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗受试者14天后，受试者的LDL-C水平相对于LDL-C基线水平降低超过50％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗受试者14天后，受试者的LDL-C水平相对于LDL-C基线水平降低超过60％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗受试者14天后，受试者的LDL-C水平相对于LDL-C基线水平降低超过65％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗受试者14天后，受试者的LDL-C水平相对于LDL-C基线水平降低超过70％。LDL-C的基线水平和治疗后水平均可通过用于测量血液胆固醇的标准临床实验室测试来确定。

在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗前的LDL-C基线水平降低至少50％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗前的LDL-C基线水平降低至少60％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗前的LDL-C基线水平降低至65％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的LDL-C水平相对于用式(I)化合物治疗前的LDL-C基线水平降低至少70％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗受试者14天后，受试者的LDL-C水平相对于LDL-C基线水平降低至少50％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗受试者14天后，受试者的LDL-C水平相对于LDL-C基线水平降低至少60％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗受试者14天后，受试者的LDL-C水平相对于LDL-C基线水平降低至少65％。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗受试者14天后，受试者的LDL-C水平相对于LDL-C基线水平降低至少70％。LDL-C的基线水平和治疗后水平均可通过用于测量血液胆固醇的标准临床实验室测试来确定。

在一个实施方案中，本发明涉及降低有需要的受试者的载脂蛋白B(Apo B)水平的方法，其包括向受试者口服施予一定量的式(I)化合物。在一些实施方案中，在用式(I)的化合物治疗后，有需要的受试者的载脂蛋白B(Apo B)水平相对于用式(I)化合物治疗之前的Apo B基线水平降低。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的Apo B水平降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、超过50％、至少60％、超过60％、至少65％、超过65％、至少70％、超过70％、至少75％、超过75％、至少80％、超过80％、至少85％、超过85％或至少90％。

在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的非高密度脂蛋白胆固醇(非HDL-C)水平相对于用式(I)化合物治疗之前的非HDL-C基线水平降低。在一个实施方案中，用式(I)化合物治疗后受试者的用式(I)化合物治疗后受试者的水平相对于用式(I)化合物治疗之前的非HDL-C基线水平降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、大于50％、至少60％、大于60％、至少65％、大于65％、至少70％、大于70％、至少75％、大于75％、至少80％、大于80％、至少85％、大于85％或至少90％。

一种或多种PCSK9相关功能性质的抑制或拮抗作用可根据本领域已知的(参见，例如，Barak&Webb,1981J.Cell Biol.90:595-604；Stephan&Yurachek,1993J.Lipid Res.34:325330；以及McNamara et al.,2006Clinica Chimica Acta 369:158-167)以及本文所述的那些方法容易地确定。相对于不存在拮抗剂时观察到的活性，或例如相对于存在不相关特异性的对照拮抗剂时观察到的活性，抑制或拮抗将导致PCSK9活性的降低。优选地，式(I)化合物拮抗PCSK9，其发挥功能至测量参数(包括但不限于本文公开的活性)降低至少10％的程度，更优选地，测量参数降低至少20％、30％、40％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％和95％。

式(I)化合物已被证明在健康志愿者中对降低LDL胆固醇高度有效且单一和多次口服剂量后通常耐受性良好。在用单剂量的式(I)化合物治疗后，式(I)化合物使游离PCSK9蛋白(其促进高LDL胆固醇)的水平相对于基线降低超过90％。在每天一次口服施用14天后，式(I)的化合物将血液中的LDL-胆固醇从已经处于中等至高强度他汀疗法背景下的参与者的基线水平降低约65％。这些参与者已经服用他汀类药物以控制他们的胆固醇水平。式(I)的化合物可以是对患有高胆固醇的患者的高度有效的治疗。

这些实施例仅被提供用于进一步说明，不旨在作为对本公开的限制。

实施例

实施例1：化合物1(无定形盐酸盐)的制备

在室温下向50L圆柱形反应器中加入0.5L乙腈(MeCN)，然后加入化合物4(294.7g,206mmol)。(WO2019/246349中描述了起始原料化合物4的合成方法，参见Ex-01)使用另外2.4L的MeCN将所有固体冲洗至反应器底部。添加化合物5(5-羧基-N,N,N-三甲基戊-1-氯化铵，47.5g，227mmol)。使用另外2.0L的MeCN将所有固体冲洗至反应器底部。加入N,N-二异丙基乙胺(iPr₂NEt,216mL,1236mmol)，使用0.5L MeCN将液体冲洗至反应器底部。向反应器中装入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化物六氟磷酸酯(HATU，94g，247mmol)，并使用0.5L的MeCN将所有固体冲洗至反应器底部。在室温下3小时后，在1小时内滴加乙酸异丙酯(iPrOAc，17.7L)。过滤浆料并用2.9L iPrOAc洗涤湿滤饼3次。将固体在伴随N₂吹扫的真空下干燥，得到337g粗产物。

使用超临界流体色谱法纯化粗产品(固定相：DIACEL DCpak P4VP[30x 250mm,5μm]；流动相：45％改性剂(0.25％ NH₄OH和5％H₂O在MeOH中)和55％CO₂)。含有产物的级分使用旋转蒸发进行浓缩。蒸发后的残余物溶于水(3.2L)中，且0.1M水溶液HCl(1389ml，139mmol)在室温下被加入(使用pH试纸测得添加结束时的pH为6)。所得溶液通过0.22μm线性滤器过滤并冻干，得到238g化合物1(无定形盐酸盐)。

实施例2：冻干化合物2(无定形癸酸盐)的制备

大孔阴离子交换树脂AG MP-1M(6g，100-200目，盐酸盐形式)被装入60mL漏斗中。将装入的树脂用9mL乙腈和水(1:1)的混合物洗涤五次。将树脂用200mL的1M NaOH洗涤然后用10mL水洗涤，重复两次。将树脂转移到玻璃柱中并用10mL水洗涤三次。树脂随后用10mLEtOH洗涤两次，再用9mL 1M癸酸的EtOH溶液洗涤五次，随后用9mL EtOH洗涤三次。将化合物1(0.3g)溶解在6mL MeCN/水(1:1)中并装载入树脂填充柱中。将滤液收集在20mL小瓶中。用15mL MeCN和水溶液(1:1)洗涤柱三次，并将滤液收集在20mL小瓶中。合并含有化合物2癸酸盐的级分并浓缩，以除去MeCN，然后通过冻干分离所需的无定形化合物2(0.29g)。

实施例3：冻干化合物3(无定形乙酸盐)的制备

大孔阴离子交换树脂AG MP-1M(6g，100-200目，盐酸盐形式)被装入60mL漏斗中。将装入的树脂用9mL乙腈和水(1:1)的混合物洗涤五次。将树脂用200mL的1M NaOH洗涤然后用50mL的溶于水中的1M AcOH洗涤。将树脂转移至100mL圆底烧瓶中，圆底烧瓶中含有化合物1(盐酸盐，0.3g)在6mL乙腈和水的1:1混合物中的溶液。添加另外的18mL MeCN/水(1:1)。混合物在室温下陈化30分钟，并将所得混合物转移至60mL漏斗中。收集滤液，用10mL MeCN/水(1/1)洗涤树脂3次，并将滤液收集于20mL小瓶中。将含有化合物3的级分合并并浓缩，以除去MeCN，然后通过溶液的冻干分离出所需的无定形化合物3(0.304g)。

实施例4：含有式(I)化合物的片剂的制备

癸酸钠(1.5kg)和聚乙二醇(499.9g)被装载入10L高剪切制粒机中。将两种组分在高剪切磨碎机中以183rpm的叶轮速度干混合1分钟。在高剪切制粒机中连续混合期间，加入水直至达到合适的制粒程度。湿颗粒通过筛网尺寸为2.0mm的锥形磨进行研磨，然后转移至流化床干燥机并使用70℃的入口温度进行干燥，直至达到预定的颗粒干燥失重(<3.00％)。干燥后的颗粒通过筛网尺寸为1.0mm的圆锥磨机研磨。然后将干燥的颗粒(1.275kg)与化合物1(26.96g)、乳糖(150.4g)和二氧化硅(22.58g)在10L扩散混合器中混合920转，然后通过筛网尺寸为0.8mm的锥形研磨机研磨。随后将研磨的共混物与硬脂酸镁(22.58g)在10L扩散混合器中混合460转。使用旋转压片机将最终润滑的颗粒压制成片剂，目标重量为564.9mg。

实施例5：干填充胶囊的制造方法

使用10L扩散混合器将微晶纤维素(179.7g)、癸酸钠(661g)、化合物1(41g)和二氧化硅(8.996g)混合375转，然后将硬脂酸镁(4.498g)加入到混合器中并混合250转。然后使用21bar的辊压、2.0mm粗筛网和1mm细筛网通过辊压将共混物造粒。使用5L扩散混合器将辊压颗粒(761.9g)与硬脂酸镁(3.8g)混合250转。然后将最终润滑的颗粒手动灌胶囊至490mg的目标填充重量。

实施例6：液体填充胶囊制造方法

使用搅拌盘作为载体，在250mL瓶中制备ALF(辛酰基己酰基聚乙二醇-8甘油酯，100mL)和丙二醇(50mL)的溶液。在125mL瓶中使用搅拌盘将化合物1(0.7747g)溶解于溶媒(49.7mL)中5分钟，随后超声处理15分钟。将最终溶液填充到硬明胶胶囊中至548mg的目标重量。然后使用50％乙醇水溶液手动密封硬明胶胶囊并检查泄漏。将最终的硬明胶胶囊再次封装(over-encapsulated)在肠溶胶囊中，然后使用90％乙醇的水溶液手动密封。通过使用搅拌盘在30mL瓶中将10.4mL乙醇(96％)和9.6mL水混合15分钟来制备50％乙醇水溶液。通过使用搅拌盘在30mL瓶中将18.8mL乙醇(96％)和1.2mL水混合15分钟来制备90％乙醇水溶液。

测试例

化学稳定且抗胃肠(GI)降解的化合物1，即式(I)化合物的无定形盐酸盐，

其表现出针对人PCSK9的皮摩尔结合亲和力。在大鼠、非人灵长类中，化合物1的GI吸收通过与渗透促进剂(Labrasol，癸酸钠)共同施用而改善。大鼠和非人灵长类的临床前实验室优良操作规范(Good Laboratory Practices,GLP)毒性研究支持了临床开发；这些研究使用了皮下给药(以实现化合物1的高全身暴露)加口服臂(以评价局部/GI耐受性)进行。在这些GLP毒性研究中，直到/包括施用的最高剂量没有观察到副作用。

安全性测试

在18-50岁的正常健康男性志愿者中研究了单一剂量的式(I)化合物的药代动力学、药效学(游离PCSK9相对于基线的减少)和安全性和耐受性的评价。本研究的目的是评价单一剂量化合物1(约10mg至约300mg)的安全性和耐受性以及化合物1的药代动力学(pharmacokinetics,PK)。另外，该试验检查了渗透促进剂剂量对PK的影响、食物对PK的影响和不同胶囊制剂对PK的影响。本研究中测量的药效学终点是靶标接合(游离PCSK9的％变化)。对于试验中的每个组，将参与者随机化以在9:3随机化方案中接受化合物1或安慰剂(PBO)(n＝9化合物1:n＝3PBO)。本研究参与者的基线特征如表2所示。

表2：安全性试验的基线特征

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将单一剂量的化合物1(其为式(I)化合物的无定形盐酸盐)以液体填充的硬明胶胶囊进行施用。胶囊包含不同强度的化合物1或不含化合物1(安慰剂)，以及液体渗透促进剂和丙二醇以2:1比例的混合物，包括不同量(至多1800mg)的/>胶囊以肠溶胶囊(HPMC/>Enteric,/>Lonza)再次封装(over-encapsulated)。

该研究还评价了通过注射器/PO给药施用的40mg/mL化合物1在2:1比例的orablend SF和丙二醇中的无渗透促进剂的混悬液、以及含有不同强度的化合物1和至多1800mg癸酸钠的干填充肠溶包衣的胶囊(HPMCEnteric,/>Lonza)。本试验中化合物1的最小剂量为10mg，施用的最高剂量为300mg。化合物1在高达300mg的剂量下耐受性良好，没有死亡、严重不良事件或实验室安全测试中有临床意义的趋势、生命体征或ECG作为研究干预的功能。在本研究中，无死亡或严重不良事件(SAE)。在总共60名参与者中，有6名中断—3名因不良事件(斑丘疹、与震荡/损伤相关的伤口、腰痛)、2名因违反方案、1名因参与者的工作冲突而退出。本研究中，研究人员报告的与化合物1相关的不良事件(AE)包括腹部不适、腹泻、消化不良、头痛和斑丘疹。除一名参与者的剂量无关的严重背痛之外，所有治疗相关的AE均为轻度/中度。

化合物1(式(I)化合物的无定形盐酸盐)表现出在所研究的所有剂量水平下血浆暴露的剂量依赖性增加，和在所研究的所有剂量水平下>90％的游离血浆PCSK9水平相对于基线的平均最大降低。参见图2和下表3。

药代动力学结果如图1所示。本试验还证明了渗透促进剂改善了吸收，这由Cmax和AUC0-24的增加证明(参见图2)。化合物1的PK在渗透促进剂和癸酸钠的存在下是类似的(如图2所示)。该试验还证明，与禁食条件相比，给药前30分钟消耗的食物导致较低的血浆暴露，而给药后30分钟消耗的食物对血浆暴露具有可忽略的影响(参见图2)。

如图4所示，化合物1的剂量与游离PCSK9蛋白(促进高LDL胆固醇)的血浆水平降低相关，与基线水平相比降低超过90％。

表3：按剂量，游离PCSK9相对于基线的最大目标降低百分比的基于模型的几何平均值(Geometric Mean,GM)和95％置信区间(CI)，其具有≥80％的真实GM游离PCSK9最大降低百分比的后验概率

LDL－胆固醇降低试验

在18-65岁接受他汀类药物背景疗法以控制血液胆固醇的男性和女性参与者中，使用多剂量研究评估化合物1的给药以实现>50％的目标LDL-C降低。参与者的基线平均LDL-C为～87mg/dL，并且85％的参与者正在接受中度或高强度他汀类药物。在过夜禁食后的早晨每天一次施用安慰剂或化合物1，持续14天。在接受每日一次剂量后不少于30分钟向参与者提供标准外带餐食。除了包括生命体征、ECG和实验室安全测试的标准安全监测之外，还测量了血浆脂质(总胆固醇、LDL-C、HDL-C和TG)。监控LDL-C，作为实验室安全性的一部分。

20mg化合物1加360mg癸酸钠的起始剂量与约62％的血浆LDL-C平均降低相关。10mg化合物1加360mg癸酸钠是所研究的下一剂量。10mg化合物1加360mg癸酸钠与约64％的LDL-C平均降低有关。第三剂量水平也是10mg化合物1；然而，该制剂含有180mg癸酸钠。10mg化合物1加180mg癸酸钠剂量与约60％的LDL-C平均降低相关。该剂量的PK近似于10mg化合物1加360mg癸酸钠剂量的PK，这支持LDL-C降低的相似性。所有仅含癸酸钠(安慰剂)或含癸酸钠和化合物1二者的制剂均为干填充的肠溶包衣的胶囊(HPMCEnteric,Lonza)形式。

在给药前和给药后第3、7、14、15和21天使用标准临床实验室测试程序测量血液LDL-胆固醇水平。该研究的结果如图3所示。如其中所示，在10和20mg剂量下观察到的LDL-胆固醇的最大降低在使用抗PCSK9单克隆抗体Repatha和Praluent时观察到的LDL-C降低的范围内，报告于它们3期心血管结果试验和抗PCSK9siRNA Inclisiran的3期脂质试验中。参见，Repatha心血管结果试验FOURIER报告了59％的LDL-C降低，N Engl J Med 2017May 4,376(18):1713-1722；Praluent心血管结果试验ODYSSEY报告了59％的LDL-C降低，N Engl JMed 2018,379:2097-2107；以及Inclisiran的3期脂质试验报告了49-52％的LDL-C降低，NEngl J Med 2020,382:1507-1519。相比之下，安慰剂治疗的参与者表现出<5％的相比于基线的LDL-C降低。

在单独的研究中，将含有5mg化合物1加180mg癸酸钠的硬明胶胶囊施予服用他汀类药物的男性和女性参与者以控制胆固醇。％LDL-C降低小于如上报告的试验中所观察到的(相比于基线降低<50％)。

Claims (26)

1.一种在需要此种治疗的受试者中治疗高胆固醇血症的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，

其中A^-选自药学上可接受的阴离子，并且其中所述式(I)化合物的施予量为约5mg至约300mg。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(I)化合物的施予量为约10mg至约30mg。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(I)化合物的施予量为10mg、12.5mg、15mg、17.5mg、18mg或20mg。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(I)化合物的施予量为10mg或20mg。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中式(I)化合物以口服剂型施予，该口服剂型进一步包含渗透促进剂。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述渗透促进剂是癸酸钠。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述口服剂型包含180mg的所述渗透促进剂。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中式(I)化合物以单一口服剂型施予，该单一口服剂型每天施予一次持续至少14天。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述受试者目前或之前以他汀类疗法治疗。

10.根据权利要求1所述的方法，其中相对于治疗前的LDL-胆固醇基线水平，治疗后的所述受试者的LDL-胆固醇水平降低。

11.根据权利要求10所述的方法，其中相对于治疗前的LDL-胆固醇基线水平，治疗后的所述受试者的LDL-胆固醇水平降低超过50％。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述式(I)化合物选自

14.一种在有需要的受试者中降低LDL-C的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，

其中A^-是选自癸酸根或乙酸根的药学上可接受的阴离子，并且其中所述式(I)化合物的所述量为约5mg至约300mg。

15.一种在有需要的受试者中治疗动脉粥样硬化性心血管疾病的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，

其中A^-是选自癸酸根或乙酸根的药学上可接受的阴离子，并且其中所述式(I)化合物的所述量为约5mg至约300mg。

16.一种在有需要的受试者中抑制PCSK9活性的方法，其包括向所述受试者口服施予一定量的式(I)化合物，

其中A^-是选自癸酸根或乙酸根的药学上可接受的阴离子，并且其中所述式(I)化合物的所述量为约5mg至约300mg。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述有需要的受试者在式(I)化合物的施用前禁食约30分钟。

18.一种药物组合物，其包含式(I)化合物和渗透促进剂，

其中A^-是药学上可接受的阴离子。

19.根据权利要求18所述的药物组合物，其中所述渗透促进剂是癸酸钠。

20.根据权利要求18或19所述的药物组合物，其进一步包含选自聚乙二醇、微晶纤维素、甘露醇、淀粉、磷酸二钙、碳酸钙、碳酸钠、乳糖或其组合的稀释剂。

21.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述稀释剂选自微晶纤维素、乳糖或聚乙二醇(PEG 4000)。

22.根据权利要求18-21中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是片剂形式。

23.根据权利要求18-21中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是胶囊形式。

24.根据权利要求18-23中任一项所述的药物组合物，其中所述式(I)化合物是化合物1、化合物2或化合物3。

25.根据权利要求18-24中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含a)相对于所述药物组合物的总重量按重量计约1％至7％的式(I)化合物；b)相对于所述药物组合物的总重量按重量计约1％至75％的渗透促进剂；c)至少一种稀释剂；以及d)任选地，助流剂和/或润滑剂。

26.根据权利要求18-24中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含a)相对于所述药物组合物的总重量按重量计约2％至6％的式(I)化合物；b)相对于所述药物组合物的总重量按重量计约18％至74％的渗透促进剂，其中所述渗透促进剂是癸酸钠；c)至少一种选自PEG4000、微晶纤维素和乳糖的稀释剂；d)相对于所述药物组合物的总重量按重量计0％至约3％的助流剂，其中所述助流剂是二氧化硅；e)相对于所述药物组合物的总重量按重量计0％至约2％的润滑剂，其中所述润滑剂是硬脂酸镁，以及f)任选地，至少一种崩解剂。