CN118139523A - 抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物 - Google Patents
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Classifications
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Abstract
提供显示抗洋桔梗立枯病性的洋桔梗植物。本发明的洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,其包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
Description
技术领域
本发明涉及抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
背景技术
作为子囊菌之一的尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)是洋桔梗属植物(洋桔梗植物)的洋桔梗立枯病的病原菌。上述洋桔梗立枯病是上述子囊菌从土壤中介由洋桔梗植物的根而感染的。随之,上述洋桔梗立枯病使洋桔梗植物的地上部产生严重的枯萎症状,最终,被感染的洋桔梗植物中会有10~30%的洋桔梗植物枯死(非专利文献1)。因此,一旦上述洋桔梗立枯病流行则会引发花卉的减产。
作为上述洋桔梗立枯病的防除方法,已知有基于土壤消毒的防除方法,虽然可抑制发病株的比例,但是不能完全防除(非专利文献2)。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1:Chiara Bertoldo et.al.,“Genetic diversity and virulenceof Italian strains of Fusarium oxysporum isolated from Eustoma grandiflora”,European Journal of Plant Pathology,2015,vol.141,pages 83-97
非专利文献2:生产者和技术指导者のためのトルコギキョウの立枯病对策事例集2021年3月农研机构蔬菜花卉研究部门发行、1~41页
发明内容
发明要解决的问题
在洋桔梗植物的品种之间,研究了对洋桔梗立枯病的病原菌的抗性。但是,将认为具有洋桔梗植物抗性的品种(celebrichwhite)栽培在进行过土壤消毒的苗圃的结果是,确认发生了洋桔梗立枯病(非专利文献2)。因此,现状是对洋桔梗立枯病具有抗性的洋桔梗植物尚属未知。因此,需要显示抗洋桔梗立枯病性的洋桔梗植物。
因此,本发明的目的在于,提供显示抗洋桔梗立枯病性的洋桔梗植物。
用于解决问题的方案
为了达到上述目的,本发明的洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,其包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
本发明的植物的一部分为上述本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的一部分。
本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法(以下称为“制造方法”)的特征在于,其包括下述(a)和(b)工序:
(a)使上述本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物与其它洋桔梗植物杂交的工序;
(b)从通过上述(a)工序得到的洋桔梗植物或其后代品系中选拔抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的工序。
本发明的对洋桔梗植物赋予抗洋桔梗立枯病性的方法(以下称为“赋予方法”)的特征在于,其包括下述导入工序:将第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座导入洋桔梗植物。
本发明的检测方法为洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的检测方法,其包括下述检测工序:对于受试洋桔梗植物,检测第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
本发明的筛选方法为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的筛选方法,其包括下述选拔工序:
从受试洋桔梗植物中选拔包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
发明的效果
根据本发明,可以提供对洋桔梗立枯病显示抗性的洋桔梗植物。
附图说明
图1为示出第20号染色体中的SNP(single nucleotide polymorphism,单核苷酸多态性)等的相对的所在位置的示意图。
图2为示出实施例1中的洋桔梗植物的发病指数的评价基准的照片。
图3为示出实施例1中的第20号染色体上的LOD值的图。
具体实施方式
<定义>
本说明书中,“洋桔梗植物”是指分类上属于龙胆科(Gentianaceae)洋桔梗属(Eustoma)的植物。上述洋桔梗植物例如也被称为草原龙胆、丽钵花等。
本说明书中,“洋桔梗立枯病”是指由镰刀菌属(Fusarium sp.)、特别是尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的土壤传播性病害。上述洋桔梗立枯病已知会引起受感染植物体的地上部的枯萎症状和枯死。
本说明书中,“洋桔梗立枯病的病原菌”或“病原菌”(以下也称为“洋桔梗立枯病菌”)是指分类上属于镰刀菌属(Fusarium sp.)、特别是尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的菌。
本说明书中,“抗洋桔梗立枯病性”是指针对因感染洋桔梗立枯病菌而发生病害和/或已发生的病害的进展的阻遏能力或抑制能力。作为具体例,上述“抗洋桔梗立枯病性”例如是指不发生因感染洋桔梗立枯病菌而发生的病害和/或使已发生的病害的进展停止、得到抑制、得到抑止、使其降低或延迟。上述抗洋桔梗立枯病性也可以称为洋桔梗立枯病抗性或洋桔梗立枯病抗病性。
本说明书中,“洋桔梗立枯病抗性基因座”(以下称为“抗性基因座”)是指提供抗洋桔梗立枯病性的数量性状基因座(Quantitative Traits Loci:QTL)或基因区域。上述数量性状基因座通常是指与数量性状的表达有关的染色体区域。
本说明书中,“植物体”或“植物”是指表示植物整体的植物个体。
本说明书中,“植物体的一部分”或“植物的一部分”是指植物个体的一部分。
以下列举例子对本发明进行说明,但是本发明不受以下例子等限定,可以任意变更而实施。另外,本发明中的各说明只要没有特别声明则可以相互援引。需要说明的是,本说明书中,使用“~”这一记载时,以包含其前后的数值或物理值的含义来使用。另外,本说明书中,“A和/或B”这一记载包括“仅A”、“仅B”、“A和B这两者”。
<洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性标志物>
一个方式中,本发明提供能够作为洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的指标使用的标志物。本发明的标志物的特征在于,其为洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性标志物,包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座,即,以第20号染色体上的洋桔梗立枯病基因座为指标。根据本发明的标志物,能够检测有无抗洋桔梗立枯病性。
上述洋桔梗植物可列举例如Eustoma grandiflorum、Eustoma exaltatum等。上述洋桔梗植物可以为各植物种的纯系的洋桔梗植物,也可以为对象洋桔梗植物与上述对象洋桔梗植物的近缘种的杂交种。上述近缘种可列举例如上述洋桔梗属植物中的各植物种。
上述洋桔梗植物具有第1号~第36号染色体。上述洋桔梗植物中的各染色体可以使用参照基因组(基因组DNA)的碱基序列(核酸序列)信息来确定。上述洋桔梗植物中的各染色体例如可以基于Eustoma grandiflorum(品种名:10B-620、可由日本国立研究开发法人农业·食品产业技术综合研究机构农业生物资源基因库获得)的基因组的碱基序列信息,通过对象洋桔梗植物的基因组的碱基序列信息与Eustoma grandiflorum(10B-620)的基因组的碱基序列信息进行比较来确定。上述比较例如可以使用BLAST、FASTA等分析软件以默认的参数来实施。Eustoma grandiflorum(10B-620)的基因组的碱基序列信息例如可由公益财团法人KAZUSADNA研究所的植物基因组数据库(Plant GARDEN:https://plantgarden.jp/)的网站(https://plantgarden.jp/en/list/t52518)获得序列名Egra_v1.0。
本发明的标志物以上述第20号染色体上的抗性基因座为指标。但是,具有上述抗性基因座的洋桔梗植物例如可以在代替第20号染色体的除第20号染色体以外的任意染色体上具有上述第20号染色体上的上述抗性基因座。即,具有上述抗性基因座的洋桔梗植物可以在第1染色体、第2染色体、第3染色体、第4染色体、第5染色体、第6染色体、第7染色体、第8染色体、第9染色体、第10染色体、第11染色体、第12染色体、第13染色体、第14染色体、第15染色体、第16染色体、第17染色体、第18染色体、第19染色体、第21染色体、第22染色体、第23染色体、第24染色体、第25染色体、第26染色体、第27染色体、第28染色体、第29染色体、第30染色体、第31染色体、第32染色体、第33染色体、第34染色体、第35染色体和第36染色体中的任意染色体上具有上述第20号染色体上的上述抗性基因座。
上述抗性基因座为显性基因座。因此,本发明的标志物例如可以以杂合型包含上述第20号染色体上的抗性基因座,也可以以纯合型包含。后者的情况下,上述抗性洋桔梗植物可以在除第20号染色体以外的染色体上包含至少一个抗性标志物,例如既可以在除第20号染色体以外的染色体上包含1个抗性基因座,也可以在除第20号染色体以外的染色体上包含2个抗性基因座。在除第20号染色体以外的染色体上包含2个抗性基因座时,上述抗性洋桔梗植物例如可以在同一染色体上包含上述2个抗性基因座,也可以在不同的染色体上包含2个抗性基因座。
上述抗性基因座的有助于抗洋桔梗立枯病性的抗洋桔梗立枯病性基因的个数可以为1个基因,也可以为多个基因。如后述的实施例所示,考虑到本发明中的抗洋桔梗立枯病性的遗传方式,推测由上述抗性基因座带来的抗洋桔梗立枯病性受单基因显性遗传的抗洋桔梗立枯病性基因支配。但是,本发明不受上述推测任何限制。
上述抗性基因座可以通过染色体上的座位、即表示位置的分子标志物来规定,即,可以使用与目标基因座连锁的分子标志物来确定。使用上述分子标志物来规定QTL等基因座的技术可以利用本申请技术领域中公知的技术。
用于规定上述抗性基因座的分子标志物没有特别限制。上述分子标志物可列举例如SNP标志物、AFLP(扩增片段长度多态性、amplified fragment length polymorphism)标志物、RFLP(限制性片段长度多态性、restriction fragment length polymorphism)标志物、微卫星标志物、SCAR(序列特异性扩增区域、sequence-characterized amplifiedregion)标志物或CAPS(酶切扩增多态性序列、cleaved amplified polymorphicsequence)标志物等。本发明中,上述分子标志物可以使用1种,也可以组合使用2种以上。使用SNP标志物作为上述分子标志物时,上述SNP标志物例如可以将1个SNP作为上述SNP标志物,也可以将2个以上SNP的组合作为上述SNP标志物、即SNP标志物组。
上述抗性基因座与后述的SNP标志物连锁。因此,本发明例如可以使用上述SNP标志物来规定上述抗性基因座。作为具体例,上述抗性基因座例如:(1)可以通过上述SNP标志物来规定(以下也称为“确定”);(2)可以通过包含上述SNP标志物的碱基序列来规定;(3)可以通过2个上述SNP标志物的位点间的区域的碱基序列来规定;可以通过这些组合来规定。通过上述组合来规定时,上述组合没有特别限制,例如,可以例示出以下组合。
上述(1)和上述(2)的组合;
上述(1)和上述(3)的组合;
上述(2)和上述(3)的组合;
上述(1)、上述(2)和上述(3)的组合。
(1)通过SNP标志物来确定
如上述(1)所示,上述抗性基因座例如可以通过上述SNP标志物来规定。上述SNP标志物没有特别限制,可列举例如Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378等。需要说明的是,这些SNP分析例如可以参照下述参考文献1。另外,Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378为本发明人们新鉴定的SNP标志物,该技术领域的本领域技术人员可以基于后述的包含这些SNP标志物的碱基序列来确定上述SNP标志物的所在位置。
参考文献1:Erik W.Ohlson et.al.,“Identification and Mapping of LateBlight Resistance Quantitative Trait Lociin Tomato Accession PI163245”,ThePlant Genome,vol.11,no.3,180007.
上述Egra20_3703734(以下也称为“SNP(a)”)表示序列号1的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号1的第101位的碱基)为T的多态性。即,表示上述SNP(a)为T的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除T以外的碱基的情况下(例如G的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号1的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(a)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3703734位碱基来确定。
序列号1:5'-TTGACCAACACAAGGTGTCATTCTGCAAACAGGCTTTCGGTATAGCAGCAGTGAAACACTCAAACTGTACGTGTCCATGGGTTCAAATTTTTGATCTCTT[T]GAGCAAATCCCAACCCGAGTACTAACTGAGATATGTCCTGGGGACCGTAGCAAGATATCTAAATGAATGTGCAGTCTATTCCTATTTTTAACTTACATAT-3'
上述Egra20_3759258(以下也称为“SNP(b)”)表示下述序列号2的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号2的第101位的碱基)为A的多态性。即,表示上述SNP(b)为A的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除A以外的碱基的情况下(例如G的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号2的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(b)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3759258位的碱基来确定。
序列号2:5'-GCTCAAATTTTTTCCAGCTATGGAATCAGCCCCAGAACAGGTTTCCTTTCTTTTTTCTTCCTGTTCAAAAGCATCCAATTTTATGCATTTTGGTACCTAG[A]TTTGGTGAATTTTGATAAAGATTTGATCTTTATAATTTTTTATTGGGGCTTAGGATTCTGAGAAAGTCGGGTCTCTAAAGGAGGTGAAGATGAATGAAAC-3'
上述SNP(b)也可以作为下述序列号79的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号79的第51位的碱基)为A的多态性来确定。
序列号79:5'-TTTTTTCTTCCTGTTCAAAAGCATCCAATTTTATGCATTTTGGTACCTAG[A]TTTGGTGAATTTTGATAAAGATTTGATCTTTATAATTTTTTATTGGGGCT-3'
上述Egra20_3839851(以下也称为“SNP(c)”)表示下述序列号3的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号3的第101位的碱基)为A的多态性。即,表示上述SNP(c)为A的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除A以外的碱基的情况下(例如C的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号3的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(c)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3839851位的碱基来确定。
序列号3:5'-TTTACAGGAGCGTAACGAGAGGTTATTTTACAAGCTTCTAATTGACAATGTGGACGAACTCCTTCCTGTGGTGTACACTCCCACTGTTGGTGAGGCTTGC[A]AGAAATATGGAAGCATTTTCAAGCGTCCTCAGGGTCTCTTCATCAGTTTGAAAGAAAGGTTCTGTCATTTGTTTTTAATTTGTCTTAAAACGACTACTGT-3'
上述SNP(C)也可以作为下述序列号80的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号80的第51位的碱基)为A的多态性来确定。
序列号80:5'-TGGACGAACTCCTTCCTGTGGTGTACACTCCCACTGTTGGTGAGGCTTGC[A]AGAAATATGGAAGCATTTTCAAGCGTCCTCAGGGTCTCTTCATCAGTTTG-3'
上述Egra20_3961378(以下也称为“SNP(d)”)表示下述序列号4的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号4的76位的碱基)为G的多态性。即,表示上述SNP(d)为G的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除G以外的碱基的情况下(例如A的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号4的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(d)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3961378位的碱基来确定。
序列号4:5'-TGAAGTTTGGAGAGTCTCTAGGGCTATTAAACATGCATCATTAGTACTTCATGGTGATTTCACATGAAGGTGCTT[G]CAGAAAGAATTCACAGGAATGCTTTTTTGTTGTATATCAAAATATTCGTATTGAATGTCTTTTTTTTTTTCTGGC-3'
上述Egra20_3833476(以下也称为“SNP(f)”)表示下述序列号72的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号72的第51位的碱基)为A的多态性。即,表示上述SNP(f)为A的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除A以外的碱基的情况下(例如G的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号72的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(f)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3833476位的碱基来确定。
序列号72:5'-ATGTCACTTCTAGAACTGATTTGTGCCTTTTATTTGTGTGGTTTTTGGTT[A]GATCATCTGTATGAGTACGCAATATTTTGGTTTAATGTTGATCTTAATCA-3'
上述Egra20_3849059(以下也称为“SNP(g)”)表示下述序列号73的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号73的第51位的碱基)为T的多态性。即,表示上述SNP(g)为T的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除T以外的碱基的情况下(例如G的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号73的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(g)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3849059位的碱基来确定。
序列号73:5'-TTTGTTGCAGATAATTACCATCTGAAGAGGATGCAGAAACAAGAATAATC[T]GTGTAAAATCCCAAGAATCATATTCAGGAACCTCGTTCAACCAAATAACA-3'
上述Egra20_3854638(以下也称为“SNP(h)”)表示下述序列号74的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号74的第51位的碱基)为T的多态性。即,表示上述SNP(h)为T的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除T以外的碱基的情况下(例如C的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号74的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(h)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3854638位的碱基来确定。
序列号74:5'-GAATACAATTTTTACAATATTCAGCCTCCAAATTCCATCCTTCCATTTTA[T]AATTGTTCTTACATATTCCACAATGTGTGATCTTCTAAATGTTCTTTAAA-3'
上述Egra20_3857016(以下也称为“SNP(i)”)表示下述序列号75的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号75的第51位的碱基)为A的多态性。即,表示上述SNP(i)为A的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除A以外的碱基的情况下(例如G的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号75的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(i)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3857016位的碱基来确定。
序列号75:5'-ACACAACAGGTGCAGTGCTCAACTCAGCCAAACTACTATAAGTATTGACC[A]AGCTGAGCTGACCACAAGTGTACAACTACGTACTGCTGATACCCTTTCAT-3'
上述Egra20_3879982(以下也称为“SNP(j)”)表示下述序列号76的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号76的第51位的碱基)为G的多态性。即,表示上述SNP(j)为G的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除G以外的碱基的情况下(例如A的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号76的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(j)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3879982位的碱基来确定。
序列号76:5'-TGATACCGGTATGTTTCGAAGGTGGAGTGAGGATGCTGATTACCTGCTAG[G]ATCCGGGTTTCAGCAAATAAATAGTTTCTTACCTGCGGTTGCGAGTATCA-3'
上述Egra20_3914662(以下也称为“SNP(k)”)表示下述序列号77的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号77的第51位的碱基)为T的多态性。即,表示上述SNP(k)为T的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除T以外的碱基的情况下(例如G的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号77的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(k)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3914662位的碱基来确定。
序列号77:5'-GCTGCATCGAGATTTCAAGAATCAAGATCAAAGCACATCAATCCCCAATT[T]CCCTAACGTTCTGAGCAATTCTTCAAAATAAAAGTACTCCCCAGTCAACA-3'
上述Egra20_3939402(以下也称为“SNP(l)”)表示下述序列号78的碱基序列中的、被括号包围的下划线部的碱基(序列号78的第51位的碱基)为A的多态性。即,表示上述SNP(l)为A的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除A以外的碱基的情况下(例如C的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,上述序列号78的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(l)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3939402位的碱基来确定。
序列号78:5'-TTATTCTTTATTTTGTGCAAGAGGTTGTTTCCACGGCTCGAACTCCTAAC[A]TCAAAGTCACAAAACAGCAACCGTACCAGTTGCTACAAGAACCGTCGTTC-3'
上述染色体中的上述SNP标志物的所在位置没有特别限制。如图1所示,上述SNP标志物在例如洋桔梗植物的第20号染色体上从上游侧(Egra20_3656645侧)起向下游侧(Egra20_3961378侧)按照Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378的顺序依次存在。需要说明的是,在图1中,使用Egra20_3656645来表示洋桔梗植物的第20号染色体中的Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378的所在位置,也可以作为SNP标志物来使用。这种情况下,在后述的Egra20_3656645的说明中,为与以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物的多态性相同的碱基时,表示洋桔梗植物例如为抗洋桔梗立枯病性,为除以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物的多态性以外的碱基时,表示洋桔梗植物例如为洋桔梗立枯病患病性。使用Egra20_3656645作为SNP标志物时,可以与选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的至少一种组合使用。
上述抗性基因座所具有的上述SNP标志物的个数没有特别限制,例如,可以为上述SNP标志物中的任意1个或2个以上、即2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或全部11个。需要说明的是,这11种多态性(SNP标志物)与抗洋桔梗立枯病性的相关性以往未曾报告,是本发明人们首次发现的与抗洋桔梗立枯病性相关的新的多态性。
上述SNP标志物的组合没有特别限制,例如,可以例示出以下组合。
SNP(a)和SNP(b)的组合;
SNP(a)和SNP(c)的组合;
SNP(a)和SNP(d)的组合;
SNP(b)和SNP(c)的组合;
SNP(b)和SNP(d)的组合;
SNP(b)和SNP(f)的组合;
SNP(b)和SNP(g)的组合;
SNP(b)和SNP(h)的组合;
SNP(b)和SNP(i)的组合;
SNP(b)和SNP(j)的组合;
SNP(b)和SNP(k)的组合;
SNP(b)和SNP(l)的组合;
SNP(c)和SNP(d)的组合;
SNP(c)和SNP(f)的组合;
SNP(c)和SNP(g)的组合;
SNP(c)和SNP(h)的组合;
SNP(c)和SNP(i)的组合;
SNP(c)和SNP(j)的组合;
SNP(c)和SNP(k)的组合;
SNP(c)和SNP(l)的组合;
SNP(f)和SNP(g)的组合;
SNP(f)和SNP(h)的组合;
SNP(f)和SNP(i)的组合;
SNP(f)和SNP(j)的组合;
SNP(f)和SNP(k)的组合;
SNP(f)和SNP(l)的组合;
SNP(g)和SNP(h)的组合;
SNP(g)和SNP(i)的组合;
SNP(g)和SNP(j)的组合;
SNP(g)和SNP(k)的组合;
SNP(g)和SNP(l)的组合;
SNP(h)和SNP(i)的组合;
SNP(h)和SNP(j)的组合;
SNP(h)和SNP(k)的组合;
SNP(h)和SNP(l)的组合;
SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(a)、SNP(b)和SNP(c)的组合;
SNP(a)、SNP(b)和SNP(d)的组合;
SNP(a)、SNP(c)和SNP(d)的组合;
SNP(b)、SNP(c)和SNP(d)的组合;
SNP(b)、SNP(c)和SNP(f)的组合;
SNP(b)、SNP(c)和SNP(g)的组合;
SNP(b)、SNP(c)和SNP(h)的组合;
SNP(b)、SNP(c)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(c)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(c)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(c)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(f)和SNP(g)的组合;
SNP(b)、SNP(f)和SNP(h)的组合;
SNP(b)、SNP(f)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(f)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(f)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(f)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(g)和SNP(h)的组合;
SNP(b)、SNP(g)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(g)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(g)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(g)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(h)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(h)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(h)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(h)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(f)和SNP(g)的组合;
SNP(c)、SNP(f)和SNP(h)的组合;
SNP(c)、SNP(f)和SNP(i)的组合;
SNP(c)、SNP(f)和SNP(j)的组合;
SNP(c)、SNP(f)和SNP(k)的组合;
SNP(c)、SNP(f)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(g)和SNP(h)的组合;
SNP(c)、SNP(g)和SNP(i)的组合;
SNP(c)、SNP(g)和SNP(j)的组合;
SNP(c)、SNP(g)和SNP(k)的组合;
SNP(c)、SNP(g)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(h)和SNP(i)的组合;
SNP(c)、SNP(h)和SNP(j)的组合;
SNP(c)、SNP(h)和SNP(k)的组合;
SNP(c)、SNP(h)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(c)、SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(c)、SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(c)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(f)、SNP(g)和SNP(h)的组合;
SNP(f)、SNP(g)和SNP(i)的组合;
SNP(f)、SNP(g)和SNP(j)的组合;
SNP(f)、SNP(g)和SNP(k)的组合;
SNP(f)、SNP(g)和SNP(l)的组合;
SNP(f)、SNP(h)和SNP(i)的组合;
SNP(f)、SNP(h)和SNP(j)的组合;
SNP(f)、SNP(h)和SNP(k)的组合;
SNP(f)、SNP(h)和SNP(l)的组合;
SNP(f)、SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(f)、SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(f)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(f)、SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(f)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(f)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(g)、SNP(h)和SNP(i)的组合;
SNP(g)、SNP(h)和SNP(j)的组合;
SNP(g)、SNP(h)和SNP(k)的组合;
SNP(g)、SNP(h)和SNP(l)的组合;
SNP(g)、SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(g)、SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(g)、SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(g)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(g)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(g)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(h)、SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(h)、SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(h)、SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(h)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(h)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(h)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(i)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(i)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(i)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(a)、SNP(b)、SNP(c)和SNP(d)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)和SNP(g)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)和SNP(h)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(g)和SNP(h)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(g)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(g)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(g)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(g)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(h)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(h)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(h)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(h)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(g)和SNP(h)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(g)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(g)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(g)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(g)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(h)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(h)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(h)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(h)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(h)和SNP(i)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(h)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(h)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(h)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(h)、SNP(i)和SNP(j)的组合;
SNP(b)、SNP(h)、SNP(i)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(h)、SNP(i)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(h)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(h)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(h)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(i)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(i)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(i)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)和SNP(h)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)和SNP(i)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)和SNP(j)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)和SNP(k)的组合;
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SNP(b)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)和SNP(k)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合。
上述组合中,从与抗洋桔梗立枯病性的相关性更高的角度出发,优选例如以下的组合。
SNP(f)和SNP(k)的组合;
SNP(a)、SNP(b)和SNP(c)的组合;
SNP(a)、SNP(b)、SNP(c)和SNP(d)的组合;
SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的组合。
本发明中,作为上述(1)SNP标志物,可以在上述SNP(a)~(d)和(f)~(l)的基础上还使用后述的SNP1~SNP66中的任意1个以上来作为SNP标志物,或者代替上述SNP(a)~(d)和(f)~(l)而使用后述的SNP1~SNP66中的任意1个以上来作为SNP标志物。在下述表1和表2A~表2B中,SNP1~66分别为用括号示出的碱基[N1/N2]中的N2的多态性。即,表示上述SNP1~66为N2的情况下洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性、为除N2以外的碱基的情况下(例如N1的情况下)洋桔梗植物为洋桔梗立枯病患病性。另外,下述表1和表2A~表2B中的上述序列号1~66的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。需要说明的是,各SNP中,-表示碱基缺失的多态性。
【表1】
【表2A】
【表2B】
上述抗性基因座所具有的上述SNP标志物的个数没有特别限制,例如,可以为上述SNP标志物中的任意1个或2个以上、即2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个或全部66个。需要说明的是,这66种多态性(SNP标志物)与抗洋桔梗立枯病性的相关性以往未曾报告,是本发明人们首次发现的与抗洋桔梗立枯病性相关的新的多态性。
(2)通过包含SNP标志物的碱基序列来确定
如上述(2)所示,上述抗性基因座例如可以通过上述包含SNP标志物的碱基序列来规定。上述抗性基因座例如可以由上述碱基序列构成,也可以包含上述碱基序列。
上述包含SNP标志物的碱基序列没有特别限制,可列举例如后述的(a)、(b)、(c)、(d)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸等。上述(a)、(b)、(c)、(d)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸分别相当于包含上述SNP(a)、SNP(b)、SNP(c)、SNP(d)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的SNP标志物的碱基序列。
上述(a)的多核苷酸为包含上述SNP(a)、即Egra20_3703734的碱基序列,例如,为下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸。上述(a2)和(a3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(a2)或(a3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在上述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于上述(a1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
上述(a1)的多核苷酸中,序列号1中的被括号包围的下划线部的碱基(T)为与上述SNP(a)的多态性对应的碱基。另外,上述(a1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERMBP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
上述(a2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~40个、1~35个、1~30个、1~25个、1~20个、1~18个、1~12个、1~8个、1~4个、1~3个、1个或2个。本发明中,碱基数等个数的数值范围例如公开了属于其范围的全部正整数。即,例如“1~5个”这一记载表示公开了“1、2、3、4、5个”的全部(以下同样)。
上述(a3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上或99%以上。上述一致性可以通过2个碱基序列的比对来求出(以下同样)。具体而言,上述一致性例如可以使用BLAST、FASTA等分析软件以默认的参数来计算(以下同样)。
上述(b)的多核苷酸为包含上述SNP(b)、即Egra20_3759258的碱基序列,例如,为下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸。上述(b2)和(b3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(b2)或(b3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸
(b2)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸
(b3)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(b1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸
上述(b1)的多核苷酸中,序列号2中的被括号包围的下划线部的碱基(A)为与上述SNP(b)的多态性对应的碱基。另外,上述(b1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERMBP-22427保藏的洋桔梗植物得到。作为上述(b1)的多核苷酸,可以为由上述序列号2的碱基序列缩短而成的碱基序列构成的多核苷酸。这种情况下,上述(b1)的多核苷酸可列举例如由序列号79的碱基序列构成的多核苷酸。这种情况下,上述(b2)和(b3)中的第101位的碱基(A)可以替换为第51位的碱基(A)并援引其说明。
上述(b2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~40个、1~35个、1~30个、1~25个、1~20个、1~18个、1~15个、1~12个、1~10个、1~9个、1~8个、1~5个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(b3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上或99%以上。
上述(c)的多核苷酸为包含上述SNP(c)、即Egra20_383985的碱基序列,例如,为下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸。上述(c2)和(c3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(c2)或(c3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸
(c2)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸
(c3)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(c1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸
上述(c1)的多核苷酸中,序列号3中的被括号包围的下划线部的碱基(A)为与上述SNP(c)的多态性对应的碱基。另外,上述(c1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERMBP-22427保藏的洋桔梗植物得到。作为上述(c1)的多核苷酸,可以为由上述序列号3的碱基序列缩短而成的碱基序列构成的多核苷酸。这种情况下,上述(c1)的多核苷酸可列举例如由序列号80的碱基序列构成的多核苷酸。这种情况下,上述(c2)和(c3)中的第101位的碱基(A)可以替换为第51位的碱基(A)并援引其说明。
上述(c2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~40个、1~35个、1~30个、1~25个、1~20个、1~18个、1~12个、1~10个、1~8个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(c3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上或99%以上。
上述(d)的多核苷酸为包含上述SNP(d)、即Egra20_3961378的碱基序列,例如,为下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸。上述(d2)和(d3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(d2)或(d3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸
(d2)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在上述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸
(d3)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于上述(d1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸
上述(d1)的多核苷酸中,序列号4中的被括号包围的下划线部的碱基(G)为与上述SNP(d)的多态性对应的碱基。另外,上述(d1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERMBP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
上述(d2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~30个、1~25个、1~20个、1~18个、1~15个、1~12个、1~8个、1~6个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(d3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上。
上述(f)的多核苷酸为包含上述SNP(f)、即Egra20_3833476的碱基序列,例如,为下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸。上述(f2)和(f3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(f2)或(f3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸;
(f3)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(f1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸;
上述(f1)的多核苷酸中,序列号72中的被括号包围的下划线部的碱基(A)为与上述SNP(f)的多态性对应的碱基。另外,上述(f1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
上述(f2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~20个、1~15个、1~10个、1~9个、1~8个、1~7个、1~6个、1~5个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(f3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上。
上述(g)的多核苷酸为包含上述SNP(g)、即Egra20_3849059的碱基序列,例如,为下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸。上述(g2)和(g3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(g2)或(g3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸;
(g3)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(g1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸;
上述(g1)的多核苷酸中,序列号73中的被括号包围的下划线部的碱基(T)为与上述SNP(g)的多态性对应的碱基。另外,上述(g1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
上述(g2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~20个、1~15个、1~10个、1~9个、1~8个、1~7个、1~6个、1~5个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(g3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上。
上述(h)的多核苷酸为包含上述SNP(h)、即Egra20_3854638的碱基序列,例如,为下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸。上述(h2)和(h3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(h2)或(h3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸;
(h3)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(h1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸;
上述(h1)的多核苷酸中,序列号74中的被括号包围的下划线部的碱基(T)为与上述SNP(h)的多态性对应的碱基。另外,上述(h1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
上述(h2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~20个、1~15个、1~10个、1~9个、1~8个、1~7个、1~6个、1~5个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(h3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上。
上述(i)的多核苷酸为包含上述SNP(i)、即Egra20_3857016的碱基序列,例如,为下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸。上述(i2)和(i3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(i2)或(i3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸;
(i3)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(i1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸;
上述(i1)的多核苷酸中,序列号75中的被括号包围的下划线部的碱基(A)为与上述SNP(i)的多态性对应的碱基。另外,上述(i1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
上述(i2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~20个、1~15个、1~10个、1~9个、1~8个、1~7个、1~6个、1~5个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(i3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上。
上述(j)的多核苷酸为包含上述SNP(j)、即Egra20_3879982的碱基序列,例如,为下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸。上述(j2)和(j3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(j2)或(j3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在上述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸;
(j3)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于上述(j1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸;
上述(j1)的多核苷酸中,序列号76中的被括号包围的下划线部的碱基(G)为与上述SNP(j)的多态性对应的碱基。另外,上述(j1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
上述(j2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~20个、1~15个、1~10个、1~9个、1~8个、1~7个、1~6个、1~5个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(j3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上。
上述(k)的多核苷酸为包含上述SNP(k)、即Egra20_3914662的碱基序列,例如,为下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸。上述(k2)和(k3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(k2)或(k3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸;
(k3)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(k1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸;
上述(k1)的多核苷酸中,序列号77中的被括号包围的下划线部的碱基(T)为与上述SNP(k)的多态性对应的碱基。另外,上述(k1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
上述(k2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~20个、1~15个、1~10个、1~9个、1~8个、1~7个、1~6个、1~5个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(k3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上。
上述(l)的多核苷酸为包含上述SNP(l)、即Egra20_3939402的碱基序列,例如,为下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸。上述(l2)和(l3)的多核苷酸分别为:在上述抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。上述同等功能例如是指:具有通过上述(l2)或(l3)的多核苷酸来确定的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物显示抗洋桔梗立枯病性。
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸;
(l3)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(l1)的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸;
上述(l1)的多核苷酸中,序列号78中的被括号包围的下划线部的碱基(A)为与上述SNP(l)的多态性对应的碱基。另外,上述(l1)的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
上述(l2)的多核苷酸中,上述1或多个例如为1~20个、1~15个、1~10个、1~9个、1~8个、1~7个、1~6个、1~5个、1~4个、1~3个、1个或2个。
上述(l3)的多核苷酸中,上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上。
上述抗性基因座所具有的、包含上述SNP标志物的碱基序列的个数、即与上述抗性基因座连锁的包含SNP标志物的碱基序列的个数没有特别限制,例如,可以为上述(a)、(b)、(c)、(d)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸中的任意1个或2个以上、即2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或全部11个。
上述包含SNP标志物的碱基序列的组合没有特别限制,例如,可以例示出以下组合。
(a)和(b)的多核苷酸的组合;
(a)和(c)的多核苷酸的组合;
(a)和(d)的多核苷酸的组合;
(b)和(c)的多核苷酸的组合;
(b)和(d)的多核苷酸的组合;
(b)和(f)的多核苷酸的组合;
(b)和(g)的多核苷酸的组合;
(b)和(h)的多核苷酸的组合;
(b)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)和(d)的多核苷酸的组合;
(c)和(f)的多核苷酸的组合;
(c)和(g)的多核苷酸的组合;
(c)和(h)的多核苷酸的组合;
(c)和(i)的多核苷酸的组合;
(c)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)和(g)的多核苷酸的组合;
(f)和(h)的多核苷酸的组合;
(f)和(i)的多核苷酸的组合;
(f)和(j)的多核苷酸的组合;
(f)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)和(h)的多核苷酸的组合;
(g)和(i)的多核苷酸的组合;
(g)和(j)的多核苷酸的组合;
(g)和(k)的多核苷酸的组合;
(g)和(l)的多核苷酸的组合;
(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(a)、(b)和(c)的多核苷酸的组合;
(a)、(b)和(d)的多核苷酸的组合;
(a)、(c)和(d)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)和(d)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)和(f)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)和(g)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)和(h)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)和(g)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)和(h)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)和(h)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)和(g)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)和(h)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)和(i)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)和(h)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)和(i)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)和(h)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)和(i)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)和(j)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(f)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(g)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(g)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(g)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(a)、(b)、(c)和(d)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)和(g)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)和(h)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)和(h)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)和(h)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)和(h)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)和(i)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(g)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)和(h)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)和(i)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(i)和(j)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(i)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(i)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(i)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(c)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合。
上述组合中,从与抗洋桔梗立枯病性的相关性更高的角度出发,优选例如以下的组合。
(f)和(k)的多核苷酸的组合;
(a)、(b)和(c)的多核苷酸的组合;
(a)、(b)、(c)和(d)的多核苷酸的组合;
(b)、(c)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸的组合。
作为上述包含SNP标志物的碱基序列,可以使用例如包含Egra20_3656645的碱基序列(由序列号5的碱基序列构成的多核苷酸)。这种情况下,上述多核苷酸可以为例如:由上述多核苷酸的多态性或下划线所示的碱基保守且在上述各多核苷酸的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成的多核苷酸;或者,由上述各多核苷酸的多态性或下划线所示的碱基保守且相对于上述各多核苷酸的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成的多核苷酸。上述1或多个和一致性例如可以援引上述(a2)和(a3)的说明。上述各多核苷酸例如可以与选自由上述(a)、(b)、(c)、(d)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸组成的组中的至少一个组合使用。
本发明中,作为上述(2)包含SNP标志物的碱基序列,可以在上述(a)~(d)和(f)~(l)的多核苷酸的基础上还使用包含上述SNP1~SNP66的多核苷酸中的任意1个以上来作为包含SNP标志物的碱基序列,或者代替上述(a)~(d)和(f)~(l)的多核苷酸而使用包含上述SNP1~SNP66的多核苷酸中的任意1个以上来作为包含SNP标志物的碱基序列。在上述表1和表2A~表2B中,包含SNP1~66的多核苷酸分别为:由包含用括号示出的碱基[N1/N2]中的N2的多态性的碱基序列构成的多核苷酸。即,包含SNP1~66的多核苷酸分别为:由在序列号6~71的碱基序列中包含用括号示出的碱基[N1/N2]中的N2的多态性的碱基序列构成的多核苷酸。包含SNP1~66的多核苷酸例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。
包含上述SNP1~66的多核苷酸可以为下述多核苷酸:由序列号6~71的碱基序列中的碱基N2保守且在对应的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1或多个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与包含上述SNP1~66的多核苷酸同等功能。上述1或多个例如为1~40个、1~35个、1~30个、1~25个、1~20个、1~18个、1~12个、1~8个、1~4个、1~3个、1个或2个。
包含上述SNP1~66的多核苷酸可以为下述多核苷酸:由序列号6~71的碱基序列中的碱基N2保守且相对于对应的碱基序列具有80%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与包含上述SNP1~66的多核苷酸同等功能。上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上或99%以上。
(3)通过2个SNP标志物的位点间的区域来确定
如上所述,上述抗性基因座与SNP标志物连锁。因此,如上述(3)所示,上述抗性基因座例如可以通过上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列或通过上述2个SNP标志物而规定的区域(也称为所在位置或作图区域)来规定。上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列没有特别限制,可列举例如上述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列等。上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列例如可以参照后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物(以下称为“保藏品系”)中的对应的2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列。参照上述保藏品系的碱基序列时,上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列例如与上述保藏品系的碱基序列完全一致或部分一致。后者的情况下,上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列例如只要具有通过上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列规定的抗性基因座的洋桔梗植物能显示抗洋桔梗立枯病性即可。上述部分一致例如可以通过相对于上述保藏品系的碱基序列的一致性来规定。上述一致性例如为80%以上、85%以上、89%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上、99.1%以上、99.2%以上、99.3%以上、99.4%以上、99.5%以上、99.6%以上、99.7%以上、99.8%以上或99.9%以上。上述抗性基因座通过上述(3)来确定的情况下,也可以称为上述抗性基因座位于例如上述2个SNP标志物的位点间的区域。通过上述抗性基因座所在的区域来确定时,也可以进一步与上述SNP标志物或上述包含SNP标志物的碱基序列组合来确定上述抗性基因座。
上述Egra20_3656645(以下也称为“SNP(e)”)例如表示序列号5中的被括号包围的下划线部的碱基的多态性。后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物中,示出上述SNP(e)为C的多态性,但是上述SNP(e)例如可以为C以外的碱基、即A、T或G。另外,上述序列号5的碱基序列例如可以由后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物得到。上述SNP(e)例如也可以由上述的网站等数据库上的公知信息来确定,作为具体例,可以作为Egra_v1.0的第20号染色体中的第3656645位的碱基来确定。
序列号5:5'-CACAGGTGGTAGGATGGCCTCCAGTTCGATCGTTCCGAAAGAATTCAATGGCAAACAATCCTCACAAGGCTGATGAAGAAGCAGATGCAATGACTGGAAG[C]AGTCGTCTTTACGTCAAAGTTAGCATGGATGGTGCCCCTTATCTGAGGAAAGTTGATATCAAGACATACAACAGCTACAAGGACCTGTCCTCTGCACTTG-3'
如上所述,上述区域例如可以通过上述2个SNP标志物的位点来确定上游侧端部和下游侧端部。上述区域例如为上述2个SNP标志物的位点间即可,例如,可以包含上述2个SNP标志物的两个位点或其中一个位点,也可以不包含。另外,上述区域包含上述SNP标志物的位点时,上述区域的上述上游侧端部与上述下游侧端部成为上述SNP标志物的位点,上述上游侧端部与上述下游侧端部的碱基例如可以为上述碱基序列中的下划线部的碱基,也可以为其以外的碱基。
规定上述区域的上述2个SNP标志物没有特别限制,例如,可以例示出以下组合。
(1)上游侧端部的SNP为SNP(e)或SNP(a),下游侧端部的SNP为SNP(c)或SNP(d);
(2)上游侧端部的SNP为SNP(e),下游侧端部的SNP为SNP(d);
(3)上游侧端部的SNP为SNP(a),下游侧端部的SNP为SNP(d);
(4)上游侧端部的SNP为SNP(a),下游侧端部的SNP为SNP(c);
(5)上游侧端部的SNP为SNP(b),下游侧端部的SNP为SNP(c)。
(6)上游侧端部的SNP为SNP(b),下游侧端部的SNP为SNP(d)。
(7)上游侧端部的SNP为SNP(b),下游侧端部的SNP为SNP(l)。
(8)上游侧端部的SNP为SNP(f),下游侧端部的SNP为SNP(k)。
上述组合中,从与抗洋桔梗立枯病性的相关性更高的角度出发,优选例如以下的组合。
上述(2)~(8)的组合;
上述组合中,从与抗洋桔梗立枯病性的相关性进一步高的角度出发,更优选例如以下的组合。
上述(3)的组合;
上述(5)的组合;
上述(7)的组合;
上述(8)的组合。
作为规定上述染色体中的区域的SNP,可以在上述SNP(a)~(d)和(f)~(l)的基础上使用SNP1~66,或者也可以使用SNP1~66来代替上述SNP(a)~(d)和(f)~(l)。
在通过上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列来规定上述抗性基因座时,上述抗性基因座优选进一步在上述区域的碱基序列中具有位于上述区域的上述SNP标志物。具体而言,上述抗性基因座优选在上述区域的碱基序列中具有选自由例如Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的至少1个SNP标志物。
位于上述区域的上述SNP标志物例如在上述染色体上可以为规定上述区域的上述2个SNP标志物的位点中的一个或两个位点,也可以为位于规定上述区域的上述2个SNP标志物的位点间的SNP标志物。将前者称为上述区域末端的SNP标志物,将后者称为上述区域内部的SNP标志物。位于上述区域的上述SNP标志物例如可以为上述区域末端的SNP标志物和上述区域内部的SNP标志物这两者。
上述区域内部的SNP标志物可列举例如位于规定上述区域的上游侧的上述SNP标志物的位点与下游侧的上述SNP标志物的位点之间的SNP标志物,例如,可以基于图1所示的上述SNP标志物的所在位置适当确定。上述位于2个SNP标志物的位点间的上述SNP标志物的个数为例如1个以上即可,作为具体例,为位于规定上述区域的SNP标志物的位点间的全部SNP标志物。
上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列与上述区域的碱基序列中的上述SNP标志物的组合没有特别限制,可列举例如下述条件(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(v)。
条件(i):
包含或位于上述染色体中的SNP(e)与SNP(d)的位点间的区域的碱基序列,且
在上述区域的碱基序列中具有选自由SNP(a)、SNP(b)、SNP(c)和SNP(d)组成的组中的至少一个SNP标志物,优选具有选自由SNP(a)、SNP(b)、SNP(c)组成的组中的至少一个SNP标志物(所确定的);
条件(ii):
包含或位于上述染色体中的SNP(a)与SNP(d)的位点间的区域的碱基序列,且
在上述区域的碱基序列中具有选自由SNP(a)、SNP(b)、SNP(c)和SNP(d)组成的组中的至少一个SNP标志物,优选具有选自由SNP(a)、SNP(b)、SNP(c)组成的组中的至少一个SNP标志物(所确定的);
条件(iii):
包含上述染色体中的SNP(a)与SNP(c)的位点间的区域的碱基序列、或/且
在上述区域的碱基序列中具有选自由SNP(a)、SNP(b)和SNP(c)组成的组中的至少一个SNP标志物(所确定的);
条件(iv):
包含或位于上述染色体中的SNP(b)与SNP(l)的位点间的区域的碱基序列,且
在上述区域的碱基序列中具有选自由SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)组成的组中的至少一个SNP标志物(所确定的);
条件(v):包含或位于上述染色体中的SNP(f)与SNP(k)的位点间的区域的碱基序列,且
在上述区域的碱基序列中具有选自由SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)和SNP(k)组成的组中的至少一个SNP标志物(所确定的)。
位于上述区域的上述SNP标志物可以在上述SNP(a)~(d)和(f)~(l)的基础上还使用上述SNP1~66,或者使用上述SNP1~66来代替上述SNP(a)~(d)和(f)~(l)。作为具体例,上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列与上述区域的碱基序列中的上述SNP标志物的组合没有特别限制,可列举例如下述条件(vi)或(vii)。
条件(vi):
包含或位于上述染色体中的SNP(b)与SNP(l)的位点间的区域的碱基序列,且
在上述区域的碱基序列中具有选自由SNP14~SNP59和SNP60组成的组中的至少一个SNP标志物(所确定的);
条件(vii):
包含或位于上述染色体中的SNP(f)和SNP(k)的位点间的区域的碱基序列,且
在上述区域的碱基序列中具有选自由SNP18~SNP48和SNP49组成的组中的至少一个SNP标志物(所确定的)。
上述抗性基因座例如为后述的以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物的第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
根据本发明的抗洋桔梗立枯病性标志物,例如可以对洋桔梗植物赋予抗洋桔梗立枯病性。本发明中,关于洋桔梗植物的上述抗洋桔梗立枯病性的程度,可以基于后述的实施例1的方法评价洋桔梗植物的发病度并通过发病度为1的个体(S1)在全部调査个体(SA)中所占的比例(S1/SA×100(%))来表示。并且,上述抗洋桔梗立枯病性的评价中上述比例(S1/SA×100(%))例如为50%以上、55%以上、60%以上、65%以上、70%以上、75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上或99%以上的情况下,可以将上述调査个体或调査个体组评价为抗洋桔梗立枯病性。上述抗洋桔梗立枯病性的判断中使用的洋桔梗植物(调査个体或调査个体组)的数量例如为能够计算上述比例的数量,作为具体例,为40~50株。
<抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物>
另一方式中,本发明提供对洋桔梗立枯病显示抗性的洋桔梗植物。本发明的洋桔梗植物为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,其包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。本发明的洋桔梗植物包含上述洋桔梗立枯病抗性基因座,因此可以对洋桔梗立枯病显示抗性。本发明的洋桔梗植物的说明中,上述第20号染色体上的上述洋桔梗立枯病抗性基因座例如可以替换为本发明的抗洋桔梗立枯病性标志物。
本发明的洋桔梗植物中,上述抗洋桔梗立枯病性如上所述也可以由上述第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座带来。本发明的洋桔梗植物在第20号染色体上具有上述抗性基因座,例如,也可以在代替第20号染色体的除第20号染色体以外的任意染色体上具有上述第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。即,具有上述抗性基因座的洋桔梗植物可以在第1号染色体、第2号染色体、第3号染色体、第4号染色体、第5号染色体、第6号染色体、第7号染色体、第8号染色体、第9号染色体、第10号染色体、第11号染色体、第12号染色体、第13号染色体、第14号染色体、第15号染色体、第16号染色体、第17号染色体、第18号染色体、第19号染色体、第21号染色体、第22号染色体、第23号染色体、第24号染色体、第25号染色体、第26号染色体、第27号染色体、第28号染色体、第29号染色体、第30号染色体、第31号染色体、第32号染色体、第33号染色体、第34号染色体、第35号染色体和第36号染色体中的任意染色体上具有上述第20号染色体上的上述抗性基因座。
本发明的洋桔梗植物例如可以包含1个上述抗性基因座,也可以包含2个以上,作为具体例,可以是1对染色体中的一条染色体包含上述抗性基因座(杂合型),也可以是两条染色体包含上述抗性基因座(纯合型)。
本发明的洋桔梗植物中,上述抗性基因座例如可以援引上述本发明的洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性标志物中的洋桔梗立枯病抗性基因座的说明。
本发明的洋桔梗植物中,对于上述抗性基因座,在进行上述“(3)通过2个SNP标志物的位点间的区域来确定”时,上述抗性基因座例如也可以称为位于2个SNP标志物间的抗性基因座。即,本发明的洋桔梗植物例如也可以说是:作为上述抗性基因座,包含位于选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的2个SNP标志物的位点间的抗性基因座。上述2个SNP标志物的组合可以援引上述本发明的标志物中的“(3)通过2个SNP标志物的位点间的区域来确定”的说明。这种情况下,上述抗性基因座例如可以进一步与上述本发明的标志物中的“(1)通过SNP标志物来确定”和/或“(2)通过包含SNP标志物的碱基序列来确定”组合来确定。这种情况下,上述抗性基因座的确定中使用的SNP标志物和包含SNP标志物的碱基序列可以援引上述本发明的标志物中的“(1)通过SNP标志物来确定”和“(2)通过包含SNP标志物的碱基序列来确定”的说明。
本发明的洋桔梗植物可列举以保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物(Eustoma grandiflorum)或其后代品系来作为一例。上述后代品系例如具有上述抗性基因座。保藏信息如以下所示。
保藏的种类:国际保藏
保藏机构名:独立行政法人制品评价技术基盘机构专利生物保藏中心(国家高级工业科学技术学院,国际专利生物保藏中心(IPOD,NITE))
通讯地址:日本〒292-0818日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室
保藏号:FERM BP-22427
用于识别的标识:Takii 21
接收日:2021年9月1日
本发明的洋桔梗植物可以包含以上述保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物的第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
本发明的洋桔梗植物例如也可以通过向洋桔梗植物导入上述抗性基因座来制造。向上述洋桔梗植物导入上述抗性基因座的方法没有特别限制,可列举例如与本发明的洋桔梗植物进行杂交、胚培养或现有公知的基因工程方法。作为上述基因工程方法,可列举例如使用基因重组技术、基因组编辑技术的方法等。所导入的上述抗性基因座可例示上述的抗性基因座。通过与本发明的洋桔梗植物进行杂交而导入时,杂交中使用的本发明的洋桔梗植物例如优选以纯合型包含上述抗性基因座。
关于本发明的洋桔梗植物,抗洋桔梗立枯病性以外的特征、例如性状特征、生态特征等没有特别限定。
本发明的洋桔梗植物可以还具有其它抗性。
<抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的一部分>
另一方式中,本发明提供对洋桔梗立枯病显示抗性的洋桔梗植物的一部分。本发明为上述本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的一部分。本发明的洋桔梗植物包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。本发明的洋桔梗植物的一部分由于包含上述洋桔梗立枯病抗性基因座,因此能够对洋桔梗立枯病显示抗性。本发明的洋桔梗植物的说明中,上述第20号染色体上的上述洋桔梗立枯病抗性基因座例如可以与本发明的抗洋桔梗立枯病性标志物互换。
上述植物的一部分可列举例如植物细胞、植物原生质体、能够再生出植物体的植物细胞培养物或组织培养物、植物愈伤组织、植物块(plant clumps)、从植物或植物的一部分分离出的植物细胞、分生组织细胞(meristematic cell)、花、花瓣、花芽、雌蕊、花冠、花粉、叶、叶柄、叶脉、子叶、子房(ovary)、胚、胚珠、胚轴、胚囊、卵细胞、小孢子(microspore)、花药、雌蕊、花、子房(ovary)、插条、接穂(scion)、砧木、根、根尖(根前端)、种子、果实、干、茎、苗等。上述植物的一部分可列举例如器官、组织、细胞或营养繁殖体等,任意者均可。上述器官可列举例如花瓣、花冠、花、叶、种子、果实、茎、根等。上述组织例如为上述器官的一部分。上述花粉可以为成熟花粉,也可以为未成熟花粉。
本发明的植物的一部分例如可以通过获得本发明的洋桔梗植物中的目标部位来制造。
<抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法>
另一方式中,本发明提供对洋桔梗立枯病显示抗性的洋桔梗植物的制造方法。本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法(以下也称为“制造方法”)包括下述(a)和(b)工序。本发明的制造方法可以仅包括下述(a)的工序。
(a)使上述本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物与其它洋桔梗植物进行杂交(交配)的工序;
(b)从通过上述(a)工序得到的洋桔梗植物或其后代品系中选拔抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的工序。
根据本发明的制造方法,可以从使上述本发明的洋桔梗植物与其它洋桔梗植物进行杂交而得到的后代品系中,得到对洋桔梗立枯病显示抗性的洋桔梗植物。根据本发明的制造方法,可以使用任意的洋桔梗植物来繁育对洋桔梗立枯病显示抗性的洋桔梗植物的品种。因此,本发明的制造方法例如也可以称为育种方法或培育方法。
本发明的制造方法中,上述抗性基因座可以援引上述本发明的标志物中的抗性基因座的说明。另外,本发明中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座也可以与上述本发明的抗性标志物互换并援引其说明。
上述(a)工序中,用于第一亲本的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物为上述本发明的抗性洋桔梗植物即可。上述抗性洋桔梗植物优选例如以上述保藏号FERM BP-22427保藏的洋桔梗植物或其后代品系。上述(a)工序中,用作第一亲本的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物例如可以通过后述的本发明的筛选方法得到。因此,上述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物例如可以在上述(a)工序之前例如从受试洋桔梗植物中通过下述(x)工序来选拔、准备。
(x)从受试洋桔梗植物中选拔上述本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的工序。
上述(x)工序中,上述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的选拔例如可以如下实施:直接和/或间接地评价受试洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性,选拔出上述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。上述直接评价可以援引使用上述抗洋桔梗立枯病性的发病度的评价方法的说明。
通过上述间接评价而实施时,上述(x)工序中的、上述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的选拔可以称为具有上述洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物的选拔。因此,上述(x)工序例如可以通过下述(x1)工序和(x2)工序来进行。
(x1)检测工序,检测上述受试洋桔梗植物的染色体上有无上述洋桔梗立枯病抗性基因座
(x2)选拔工序,根据上述洋桔梗立枯病抗性基因座的存在来选拔上述受试洋桔梗植物,作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物
上述(x)工序中的上述选拔如上所述例如为具有上述抗性基因座的洋桔梗植物的选拔,具体而言,可以通过对上述受试洋桔梗植物检测上述抗性基因座来选拔上述抗性洋桔梗植物。上述(x2)工序中,例如,可以在一对染色体中的一条染色体上存在上述抗性基因座时将上述受试洋桔梗植物作为上述抗性洋桔梗植物选拔,也可以在一对染色体中的两条染色体上存在上述抗性基因座时将上述受试洋桔梗植物作为上述抗性洋桔梗植物选拔,优选后者。关于上述(x1)工序中的上述抗性基因座的检测,例如,可以使用如上述本发明的标志物中说明的规定上述洋桔梗立枯病抗性基因座的(1)上述SNP标志物、(2)上述包含SNP标志物的碱基序列、(3)上述2个SNP标志物的位点间的区域以及这些的组合来检测。具体而言,上述(x1)工序中,例如检测上述受试洋桔梗植物的染色体上的与上述抗性基因座相关的SNP等分子标志物,根据得到的检测结果来检测有无上述洋桔梗立枯病抗性基因座。
对于上述(x)工序中的上述选拔,可列举以下具体例,但是本发明不限于这些。另外,关于上述洋桔梗立枯病抗性基因座,可以援引上述本发明的抗洋桔梗立枯病性标志物中的说明。
(1)通过SNP标志物来确定
上述(x)工序中的上述选拔例如为具有洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物的选拔,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的至少一个SNP标志物来确定。上述选择的SNP标志物没有特别限制,例如可以援引上述本发明的标志物中的“(1)通过SNP标志物来确定”的说明。
(2)通过包含SNP标志物的碱基序列来确定
上述(x)工序中的上述选拔例如为具有洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物的选拔,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由上述(a)、(b)、(c)、(d)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)组成的组中的至少一个多核苷酸来确定。上述(a)、(b)、(c)、(d)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)的多核苷酸例如可以援引上述本发明的标志物中的“(2)通过包含SNP标志物的碱基序列来确定”的说明。
(3)通过2个SNP标志物的位点间的区域来确定
上述(x)工序中的上述选拔例如为具有洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物的选拔,所述洋桔梗立枯病抗性基因座包含上述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列。上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列例如可以援引上述本发明的抗洋桔梗立枯病性标志物中的“(3)通过2个SNP标志物的位点间的区域来确定”的说明。
作为具体例,上述(x)工序中的上述选拔可列举例如具有洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物的选拔,所述洋桔梗立枯病抗性基因座在上述区域的碱基序列中具有选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的至少一个SNP标志物。
另外,上述(x)工序中的上述选拔例如可以为具有满足上述条件(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)或(vii)的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物的选拔。
通过有无上述2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列来检测时,上述(x1)工序中例如对上述受试洋桔梗植物的基因组(基因组DNA)的碱基序列进行解读。接着,在上述(x1)工序中,可以所得到的碱基序列和上述保藏品系的基因组(基因组DNA)的碱基序列进行比较,通过碱基序列是否一致来进行检测。上述碱基序列的解读例如可以使用包含含有受试洋桔梗植物的基因组(基因组DNA)的试样的试样、测序用试剂和测序仪来实施。另外,上述碱基序列的比较例如可以通过碱基序列分析软件(例如上述BLAST等)来实施。得到的碱基序列中,进行碱基序列比较的区域为上述2个SNP标志物的位点间的区域。由此,上述(x1)工序中,可以将具有与上述保藏品系中的2个SNP标志物的位点间的区域的碱基序列一致或满足上述一致性的碱基序列的洋桔梗植物确定(鉴定或检测)为包含上述抗性基因座的受试洋桔梗植物。并且,上述(x2)工序中,例如可以选拔包含上述抗性基因座的受试洋桔梗植物来作为本发明的洋桔梗植物或其后代品系、即显示抗洋桔梗立枯病性的洋桔梗植物。
要检测有无上述洋桔梗立枯病抗性基因座的染色体优选为第20号染色体。
另外,上述(a)工序中,用作另一亲本的洋桔梗植物没有特别限制,例如可以为已知具有或不具有抗洋桔梗立枯病性的洋桔梗植物,可以为具有或不具有其它抗性的洋桔梗植物,可以为上述本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
上述(a)工序中,上述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物与上述其它洋桔梗植物的杂交方法没有特别限制,可以采用公知的方法。
上述(b)工序中,要选拔抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的对象例如可以为通过上述(a)工序得到的洋桔梗植物,还可以为由该洋桔梗植物得到的后代品系。具体而言,上述对象例如可以为通过上述(a)工序的杂交而得到的F1的洋桔梗植物,也可以为其后代品系。上述后代品系例如可以为通过上述(a)工序的杂交得到的F1的洋桔梗植物的自交后代或回交后代,也可以为通过上述F1的洋桔梗植物与其它洋桔梗植物的杂交得到的洋桔梗植物。
上述(b)工序中,抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的选拔例如可以通过直接或间接地确认抗洋桔梗立枯病性来进行。
上述(b)工序中,上述直接确认可以通过对得到的上述F1的洋桔梗植物或其后代品系例如通过上述的发病度评价抗洋桔梗立枯病性来进行。具体而言,例如对上述F1的洋桔梗植物或其后代品系接种例如洋桔梗立枯病菌,通过发病度为1的个体在上述全部调査个体中所占的比例来评价抗洋桔梗立枯病性,由此进行确认。这种情况下,例如,可以选拔满足上述规定基准的上述F1的洋桔梗植物或其后代品系来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
另外,上述(b)工序中,上述通过间接确认来进行的选拔例如可以通过下述(b1)和(b2)工序来进行。
(b1)检测工序,对于通过上述(a)工序得到的洋桔梗植物或其后代品系,检测染色体上有无洋桔梗立枯病抗性基因座
(b2)选拔工序,根据上述洋桔梗立枯病抗性基因座的存在来选拔通过上述(a)工序而得到的洋桔梗植物或其后代品系,作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物
上述(b)工序中的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的、基于间接确认而进行的选拔例如与上述(x)工序中说明的方法同样地,可以通过检测有无上述洋桔梗立枯病抗性基因座、更具体而言通过使用上述分子标志物检测有无上述洋桔梗立枯病抗性基因座来进行。
本发明的制造方法优选对上述(b)工序中选拔出的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物进行进一步培育。
由此,可以选拔出上述确认到抗洋桔梗立枯病性的上述洋桔梗植物或其后代品系来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
本发明的制造方法可以还包括种子采集工序,所述种子采集工序从通过杂交而得到的上述后代品系中采集种子。
本发明的制造方法包括上述(a)工序和上述(b)工序,但是本发明不限于此,可以仅包括上述(a)工序。这种情况下,上述(a)工序中使用的本发明的洋桔梗植物优选以纯合型包含上述抗性基因座。
<抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的筛选方法>
另一方式中,本发明提供筛选对洋桔梗立枯病显示抗性的洋桔梗植物的方法。本发明的筛选方法为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的筛选方法,所述筛选方法包括下述选拔工序:从受试洋桔梗植物中选拔包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。根据本发明的筛选方法,能够筛选可能对洋桔梗立枯病显示抗性的洋桔梗植物。另外,根据本发明的筛选方法,能够筛选用于通过杂交而生产抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的亲本。
上述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的选拔例如可以援引上述本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法的上述(x)工序的说明。
<洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的检测方法>
另一方式中,本发明提供检测洋桔梗植物对洋桔梗立枯病的抗性的方法。本发明的检测方法为洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的检测方法,其包括下述检测工序:检测受试洋桔梗植物的第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。根据本发明的检测方法,能够检测对象洋桔梗植物对洋桔梗立枯病是否显示抗性。本发明的洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的检测方法例如也可以称为洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的筛选方法。
上述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的检测例如可以援引上述本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法的上述(x)工序的间接选拔、即上述(x1)工序的说明。作为具体例,上述检测工序中,例如,检测上述受试洋桔梗植物的染色体上的与上述抗性基因座相关的SNP等分子标志物,由得到的检测结果检测有无上述洋桔梗立枯病抗性基因座。要进行检测的染色体优选为第20号染色体。
<对洋桔梗植物赋予抗洋桔梗立枯病性的赋予方法>
另一方式中,本发明提供对洋桔梗植物赋予洋桔梗立枯病抗性的赋予方法。本发明的对洋桔梗植物赋予抗洋桔梗立枯病性的赋予方法的特征在于,包括下述导入工序:将第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座导入洋桔梗植物。根据本发明的赋予方法,能够通过导入上述第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座、即上述本发明的抗洋桔梗立枯病性标志物而对洋桔梗植物赋予抗洋桔梗立枯病性。
上述导入工序中,上述第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座的导入方法没有特别限制。上述导入方法可列举例如与上述抗性洋桔梗植物进行杂交或胚培养、现有公知的基因工程方法。导入的上述抗性基因座可以例示上述的抗性基因座。通过与上述抗性洋桔梗植物进行杂交而导入时,上述抗性洋桔梗植物例如优选以纯合型包含上述抗性基因座。
<保藏品系或其后代品系的识别方法>
另一方式中,本发明提供可识别通过FERM BP-22427来确定的保藏品系或其后代品系的方法。本发明的识别方法为通过FERM BP-22427来确定的保藏品系或其后代品系的识别方法,所述识别方法包括下述SNP检测工序:检测受试洋桔梗植物的选自由SNP1~65和SNP66组成的组中的至少1个SNP。根据本发明的识别方法,能够识别上述受试洋桔梗植物是否为上述保藏品系或其后代品系。上述识别也可以称为例如鉴别、鉴定、检测、判定、判别、评价等。因此,本发明的识别方法例如也可以称为鉴别方法、鉴定方法、检测方法、判定方法、判别方法、评价方法等。
上述SNP检测工序中,各SNP的检测可以基于包含各SNP的多核苷酸的碱基序列通过常规方法来实施。包含SNP1~66的多核苷酸可以参照后述的实施例2。
上述SNP检测工序中,所检测的SNP的个数没有特别限制,例如可以对SNP1~66中的任意1个或多个进行检测,也可以检测全部。通过在上述SNP检测工序中对上述受试洋桔梗植物检测相对多的SNP,本发明的识别方法能够以更高的准确度识别上述受试洋桔梗植物是否为上述保藏品系或其后代品系。
本发明的识别方法可以还包括下述评价工序:对上述受试洋桔梗植物的SNP和对应的基准SNP进行比较,评价上述受试洋桔梗植物是否为上述保藏品系或其后代品系。上述基准SNP为上述保藏品系的SNP1~66。作为具体例,上述评价工序中,例如上述受试洋桔梗植物的SNP与上述基准SNP一致时,可以评价为上述受试洋桔梗植物是上述保藏品系或其后代品系。另一方面,上述评价工序中,例如上述受试洋桔梗植物的SNP与上述基准SNP不一致时,可以评价为上述受试洋桔梗植物不是上述保藏品系或其后代品系。
上述评价工序中使用多个SNP进行评价时,例如,可以通过上述受试洋桔梗植物的SNP(评价对象的SNP)与上述基准SNP一致率来进行评价。上述一致率可以以下述形式来计算:评价对象的SNP的个数(A)中,与上述基准SNP一致的上述受试洋桔梗植物的SNP的个数(T)所占的比例(T/A×100(%))。这种情况下,本发明的识别方法中,可以在上述评价工序之前由上述受试洋桔梗植物的SNP(评价对象的SNP)与基准SNP来计算SNP一致率。然后,在上述评价工序中,例如上述受试洋桔梗植物的评价对象的SNP与上述基准SNP的一致率满足规定比例时,评价为上述受试洋桔梗植物是上述保藏品系或其后代品系。另一方面,在上述评价工序中,例如上述受试洋桔梗植物的评价对象的SNP与上述基准SNP的一致率不满足规定比例时,评价为上述受试洋桔梗植物不是上述保藏品系或其后代品系。上述规定比例例如为1%以上、3%以上、5%以上、10%以上、15%以上、20%以上、25%以上、30%以上、35%以上、40%以上、45%以上、50%以上、55%以上、60%以上、65%以上、70%以上、75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上或99%以上。
上述评价工序中使用多个SNP进行评价时,例如,可以通过上述受试洋桔梗植物的SNP(评价对象的SNP)与上述基准SNP之间一致的SNP的个数来进行评价。这种情况下,本发明的识别方法中,可以在上述评价工序之前,由上述受试洋桔梗植物的SNP(评价对象的SNP)与基准SNP来计算一致的SNP的个数。并且,在上述评价工序中,例如上述受试洋桔梗植物的评价对象的SNP与上述基准SNP间一致的SNP的个数满足规定数时,评价为上述受试洋桔梗植物是上述保藏品系或其后代品系。另一方面,在上述评价工序中,例如上述受试洋桔梗植物的评价对象的SNP与上述基准SNP间一致的SNP的个数不满足规定的个数时,评价为上述受试洋桔梗植物不是上述保藏品系或其后代品系。上述规定的个数例如为2个以上、3个以上、4个以上、5个以上、6个以上、7个以上、8个以上、9个以上、10个以上、15个以上、20个以上、25个以上、30个以上、35个以上、40个以上、45个以上、50个以上、55个以上、60个以上、61个以上、62个以上、63个以上、64个以上或65个以上。需要说明的是,SNP1~66是保藏品系中第20号染色体上的抗性基因座附近的单倍体SNP。因此,上述SNP1~66中的2个以上SNP一致时,通常可判断为上述保藏品系或其后代品系。上述评价工序中,上述受试洋桔梗植物的评价对象的SNP2~5中的任意1个以上与上述基准SNP中的SNP2~5中的任意1个以上之间SNP一致且上述受试洋桔梗植物的评价对象的SNP与上述基准SNP之间一致的SNP的个数满足规定个数时,可以评价为上述受试洋桔梗植物是上述保藏品系或其后代品系。这种情况下,上述规定的个数例如可以援引上述的说明。
实施例
以下使用实施例详细说明本发明,但是本发明不受实施例记载的方式限定。
[实施例1]
对于新的立枯病抗性洋桔梗植物,确认对洋桔梗立枯病菌显示抗性,另外进行了新的洋桔梗立枯病抗性基因座的确定。
为了选拔洋桔梗植物中对洋桔梗立枯病菌(Fusarium oxysporum)具有抗性的物,基于非专利文献1使用立枯病菌对泷井种苗株式会社保有的各种洋桔梗植物进行了接种试验。具体而言,立枯病菌接种试验如下进行。
(1)供试植物
将供于接种试验的洋桔梗植物播种于装有泷井播种培养土的288格育苗盘,育苗12周。上述育苗后,将上述洋桔梗植物移植到装有泷井播种培养土的55格育苗盘。
(2)接种试验
洋桔梗立枯病菌(Fusarium oxysporum)使用源自日本山形县洋桔梗栽培苗圃中自然罹患了立枯病的洋桔梗植物的洋桔梗立枯病菌。上述立枯病菌通过下述接种试验确认为能够感染上述患病性洋桔梗植物的病原菌。
在下述组成的添加蔗糖的马铃薯煎煮液液体培养基中,在25℃的条件下在烧瓶内振荡培养4天。在上述培养后,用2层纱布进行过滤,将孢子浓度调整为1×107个孢子/ml。之后,将上述调整物作为接种源供于接种试验。另外,供于上述接种试验的洋桔梗植物使用上述实施例1(1)中得到的洋桔梗植物。上述接种试验中,在实施例1(1)的移植当天,对每一个体灌注20ml上述接种源,在上述灌注后,在25℃、12小时光照的条件下培育3周。在上述培育后,进行发病程度评价。
(添加蔗糖的马铃薯煎煮液液体培养基)
上述发病度的评价通过按照以下的3阶段基准进行评价来实施。将各发病指数的代表例示于图2。
发病度1:无病害症状
发病度2:植物体的一部分枯萎
发病度3:植物体的整体枯萎或枯死
(3)保藏品系的建立
进行上述接种试验,结果得到了显示高度立枯病抗性的新的立枯病抗性洋桔梗品系。以下将该立枯病抗性洋桔梗植物称为亲本品系。另外,上述亲本品系以保藏号FERM BP-22427进行了保藏。以下也将上述亲本品系称为保藏品系。
(4)抗性基因座的确定
使具有立枯病抗性的上述保藏品系(以下也称为“PR品系”)与立枯病患病性(敏感性)洋桔梗植物“Mink”(泷井种苗株式会社、以下也称为“PS品系”)杂交,获得F1代。接着,使上述F1代自交,得到F2代的种子。进而,使上述F2代植物自交,得到192个个体的F3代种子(以下也称为“192个品系”)。
对于上述192个品系,使用PureGene DNA提取试剂盒(Gentra公司制)提取基因组DNA。通过GRAS-Di方法对上述提取而得的基因组DNA进行分析。在上述分析中,使用上述Egra_v1.0作为参照序列,获得基因组整体的单核苷酸多态性(以下称为SNP)信息。
另外,对上述192个品系进行接种试验。具体而言,除了使用上述192个品系作为接种试验的供试植物以外,与上述实施例1(2)的接种试验同样地实施接种试验。进行发病程度的评价,结果是能够对10个个体以上的发病程度进行评价且SNP信息的丢失值为20%以下的品系有111个品系(各10~15个个体)。基于上述111个品系的接种结果和通过上述GRAS-Di方法获得的全基因组SNP信息进行QTL分析。上述QTL分析使用R/qtl。将这些结果示于图3。
图3为示出染色体上的LOD值的图。图3中,横轴表示染色体上的位置和SNP标志物,纵轴表示LOD值。具体而言,在图3中,“Egra_v1_ChrX_Y”表示第X号染色体中的第Y位的碱基(SNP)。另外,图3中的虚线表示LOD值的阈值。如图1所示,在第20号染色体的3-5Mb附近,检测到1个用CIM(composite interval mapping)计算的LOD值的峰值显示为25的QTL区域。
为了获得PR品系与PS品系间的SNP信息,对上述PR品系和上述PS品系进行了重测序。基于上述重测序所得到的SNP信息和上述QTL区域构建了上述1的5个SNP标志物。上述表1中的SNP1~5分别对应于SNP(e)、SNP(a)、SNP(b)、SNP(c)和SNP(d)。在上述表1中,用括号示出的碱基[N1/N2]表示单核苷酸多态性,N1为PS品系的多态性(碱基)、即患病性的多态性,N2为PR品系的多态性(碱基)、即抗病性的多态性(碱基)。
接着,对上述F2代的3000个个体和上述F3代的2300个个体进行接种试验。具体而言,除了使用上述F2代或F3代作为上述接种试验的供试植物以外,与上述实施例1(2)的接种试验同样地实施接种试验。然后,基于上述发病指数(表型)评价各个体对上述洋桔梗立枯病菌的抗性。另外,从各供试植物提取DNA,使用上述SNP标志物进行SNP的分析。将这些结果示于下述表3。
【表3】
1:无病害症状
2:植物体的一部分枯萎或生长不良
3:植物体整体枯萎或枯死
上述表3为示出洋桔梗植物的基因型和发病度的表。上述表3中,A表示以患病性的纯合型保有各SNP,B表示以抗性的纯合型保有各SNP,H表示以杂合型保有各SNP。另外,在上述表3中,B和H以阴影线示出。如上述表3所示,Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3839851和Egra20_3961378的SNP标志物为抗性的纯合(B)或杂合(H)时,上述F2代和上述F3代对洋桔梗立枯病菌显示抗性。由以上结果可知,对洋桔梗立枯病菌的抗性基因位于第20号染色体的3,703,734bp与3,961,378bp之间,即,可知该区域为洋桔梗立枯病菌抗性基因座的所在区域。进而,个体数少的Egra20_3961378为A的情况、即基因型为从上游的SNP起的(7)HHHHA或(11)BBBBA的情况下也显示抗性,另外Egra20_3703734为A的情况、即基因型为从上游的SNP起的(9)AAHHH的情况下也显示抗性,以及第20号染色体的3,703,734bp起向下游100个碱基、3,961,378bp起向上游100个碱基不存在SNP,因此强烈暗示上述立枯病菌抗性基因存在于第20号染色体的3,703,834bp与3,961,278bp之间(约SNP(a)-SNP(d)间)。另外,从上述F2代和上述F3代的遗传方式来看,强烈暗示上述立枯病菌抗性基因为单基因且显性。
(5)市售品种的SNP的分析
对于新的立枯病抗性洋桔梗植物所具有的抗性基因座,确认是其它洋桔梗植物所不具有的。
对于下述表4的各洋桔梗植物,提取DNA,使用包括与上述立枯病菌抗性基因强烈连锁的Egra20_3759258和Egra20_3839851在内的SNP标志物进行SNP分析。将这些结果示于下述表4。在下述表4中,A表示以患病性的纯合方式保有各SNP,B表示以抗性的纯合方式保有各SNP。另外,在下述表4中,B以阴影线示出。如下述表4所示,PR品系以抗性的纯合型保有Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3839851和Egra20_3961378的全部SNP标志物。与此相对地,除了PR品系以外的洋桔梗植物则以患病性的纯合型保有Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3839851和Egra20_3961378的全部SNP标志物。由这些结果可知,上述SNP是PR品系特异性的。
【表4】
TAKII:TAKII&CO.,LTD.
PANAM:PanAmerican Seed
KANEKO:KANEKO SEEDS CO.,LTD.
SUMIKA:Sumika Agrotech Co.,Ltd.
SAKATA:SAKATA SEED CORPORATION
MIYOSHI:MIYOSHI&CO.,LTD.
由以上结果可知,通过以PR品系为第1亲本、以洋桔梗立枯病患病性洋桔梗植物为第2亲本进行杂交,能够得到具有抗洋桔梗立枯病性的洋桔梗植物,可知本发明的抗性基因座显性遗传。进而可知,通过使用上述SNP标志物,能够选拔本发明的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
[实施例2]
能够识别保藏品系和其后代品系的SNP标志物的鉴定。
(1)保藏品系的SNP标志物
使用保藏品系(PR品系)和下述市售的洋桔梗品种,检索保藏品系特异性SNP标志物。
(泷井种苗公司制)Paleo Pink、Falda Double Blue、Mink、La Folia、YukiTemari、Maiko
(KANEKO SEEDS CO.,LTD.制)Exe Lavender、Korezo Light Pink
(住化农业资材公司制)Celeb Pink、Umi Honoka
(SAKATA SEED CORPORATION制)Robella Clear Pink
(MIYOSHI&CO.,LTD.制)Borelo White
具体而言,对于保藏品系(PR品系)和上述市售的洋桔梗品种进行下述表4A~4F记载的SNP的分析。在上述表2A~表2B中,用括号表示的碱基[N1/N2]表示单核苷酸多态性,N1为保藏品系以外的品系的多态性(碱基),N2为保藏品系的多态性(碱基)。将该结果示于下述表5A~5C。另外,在下述表中,A表示以纯合方式保有保藏品系以外的品系的多态性,B表示以纯合方式保有保藏品系的多态性。如下述表5A~5C所示,在上述洋桔梗植物中,除了上述SNP1~5以外,SNP6~66也是保藏品系特异性的SNP标志物。因此,强烈暗示,通过在检测上述抗性基因座的基础上组合检测SNP6~66,能够识别保藏品系和其后代品系。
【表5A】
【表5B】
【表5C】
[实施例4]
对于新的立枯病抗性洋桔梗植物,确定洋桔梗立枯病抗性基因座的详细位置。
使保藏品系与上述PS品系杂交,获得F2代(1834个个体)。对于得到的F2代,确定SNP(b)(Egra20_3759258)、SNP(c)(Egra20_3839851)、SNP(k)(Egra20_3914662)和SNP(l)(Egra20_3939402)的多态性(基因型)。其结果是,作为重组个体,SNP(b)与SNP(f)间的重组个体为3个个体,SNP4与SNP44间的重组个体为1个个体,SNP44与SNP55间的重组个体为12个个体,合计得到16个重组个体。从各重组个体的出现率推测,SNP3-4间、SNP4-44间、SNP44-55间的标志物间的遗传距离分别为0.16cM、0.06cM、0.65cM。从这些重组个体采集自交种子,对于一部分品系进行接种试验。另外,对于这些接种供试个体,确定SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)的多态性(基因型)。将这些结果示于下述表6。在下述表中,A表示以纯合方式保有除了保藏品系以外的品系的多态性,B表示以纯合方式保有保藏品系的多态性,H表示以杂合方式保有除了保藏品系以外的品系的多态性和保藏品系的多态性。
【表6】
如上述表6所示,可知洋桔梗立枯病抗性基因座位于SNP(b)与SNP(l)间、特别是SNP(f)与SNP(k)间。另外,由SMP(b)~SNP(l)的遗传学上的距离为0.87cM可知,SNP(b)、SNP(c)、SNP(f)、SNP(g)、SNP(h)、SNP(i)、SNP(j)、SNP(k)和SNP(l)均与洋桔梗立枯病抗性基因座强烈连锁,检测任意1个以上则能够检测本发明的洋桔梗立枯病抗性基因座。
以上参照实施方式和实施例对本发明进行了说明,但是本发明不受上述实施方式和实施例限定。对于本发明的构成、细节,可以在本发明的范围内进行本领域技术人员可理解的各种变更。
该申请要求基于2021年10月22日提出申请的日本申请特愿2021-173508的优先权,将其公开的全部内容引入于此。
<附录>
上述的实施方式和实施例的一部分或全部可如以下的附录那样来记载,但是不限于以下。
<抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物>
(附录1)
一种抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,
其包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
(附录2)
根据附录1所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座通过下述来确定:
选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的SNP标志物、和/或
选自由SNP1~65和66组成的组中的SNP标志物。
(附录3)
根据附录2所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,其中,通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录4)
根据附录1至3中任一项所述的洋桔梗植物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由下述(a)~(d)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸、和/或选自由包含SNP1~65和66的多核苷酸组成的组中的多核苷酸来确定:
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在上述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于上述(a1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸:
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸;
(b2)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b3)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(b1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸:
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸;
(c2)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c3)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(c1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸:
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸;
(d2)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在上述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d3)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于上述(d1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f3)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(f1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g3)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(g1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h3)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(h1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i3)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(i1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在上述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j3)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于上述(j1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k3)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(k1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l3)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(l1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。
(附录5)
根据附录4所述的洋桔梗植物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由上述(b)、(c)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定。
(附录6)
根据附录1至5中任一项所述的洋桔梗植物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378、和/或SNP1~66组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域。
(附录7)
根据附录6所述的洋桔梗植物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的、
上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域、或
上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域。
(附录8)
根据附录7所述的洋桔梗植物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定;
上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982和Egra20_3914662组成的组中的SNP标志物来确定;
上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP14~SNP59和SNP60组成的组中的SNP标志物来确定;或者
上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP18~SNP48和SNP49组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录9)
根据附录1至8中任一项所述的洋桔梗植物,其中,上述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物为通过保藏号FERM BP-22427来确定的洋桔梗植物或其后代品系。
(附录10)
根据附录1至9中任一项所述的洋桔梗植物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座源自通过保藏号FERM BP-22427来确定的洋桔梗植物的洋桔梗立枯病抗性基因座。
<抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的一部分>
(附录11)
一种附录1至10中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的一部分。
(附录12)
根据附录11所述的植物的一部分,其中,上述植物的一部分为种子。
<制造方法>
(附录13)
一种抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其特征在于,其包括下述(a)和(b)工序:
(a)使附录1至10中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物与其它洋桔梗植物杂交的工序;
(b)从通过上述(a)工序得到的洋桔梗植物或其后代品系中选拔抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的工序。
(附录14)
根据附录13所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,在上述(a)工序之前包括下述(x)工序。
(x)从受试洋桔梗植物中选拔附录1至10中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的工序
(附录15)
根据附录14所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(x)工序中的上述选拔为选拔包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
(附录16)
根据附录15所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(x)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的SNP标志物和/或选自由SNP1~65和66组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录17)
根据附录16所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(x)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录18)
根据附录15至17所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(x)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由下述(a)~(d)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸和/或选自由包含SNP1~65和66的多核苷酸组成的组中的多核苷酸来确定:
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在上述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于上述(a1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸:
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸;
(b2)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b3)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(b1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸:
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸;
(c2)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c3)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(c1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸:
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸;
(d2)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在上述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d3)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于上述(d1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f3)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(f1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g3)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(g1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h3)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(h1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i3)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(i1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在上述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j3)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于上述(j1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k3)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(k1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l3)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(l1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。
(附录19)
根据附录18所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(x)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由上述(b)、(c)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定。
(附录20)
根据附录15至19中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(x)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378、和/或SNP1~66组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域。
(附录21)
根据附录20所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(x)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的、
上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域、或者
上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域。
(附录22)
根据附录21所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(x)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定;
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982和Egra20_3914662组成的组中的SNP标志物来确定;
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP14~SNP59和SNP60组成的组中的SNP标志物来确定;或者
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP18~SNP48和SNP49组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录23)
根据附录13至22中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(b)工序中的上述选拔为选拔包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
(附录24)
根据附录13至23中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(b)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的SNP标志物和/或选自由SNP1~65和66组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录25)
根据附录24所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(b)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录26)
根据附录13至25中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(b)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由下述(a)~(d)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸和/或选自由包含SNP1~65和66的多核苷酸组成的组中的多核苷酸来确定:
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在上述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于上述(a1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸:
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸;
(b2)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b3)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(b1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸:
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸;
(c2)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c3)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(c1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸:
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸;
(d2)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在上述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d3)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于上述(d1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f3)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(f1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g3)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(g1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h3)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(h1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i3)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(i1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在上述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j3)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于上述(j1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k3)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(k1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l3)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(l1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。
(附录27)
根据附录26所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(b)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由上述(b)、(c)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定。
(附录28)
根据附录13至27中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(b)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378、和/或SNP1~66组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域。
(附录29)
根据附录28所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(b)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的、
上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域、或者
上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域。
(附录30)
根据附录29所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,上述(b)工序中的上述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定;
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982和Egra20_3914662组成的组中的SNP标志物来确定;
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP14~SNP59和SNP60组成的组中的SNP标志物来确定;或者
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP18~SNP48和SNP49组成的组中的SNP标志物来确定。
<赋予方法>
(附录31)
对洋桔梗植物赋予抗洋桔梗立枯病性的赋予方法,其特征在于,包括下述导入工序:
将第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座导入洋桔梗植物。
(附录32)
根据附录31所述的赋予方法,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的SNP标志物和/或选自由SNP1~65和66组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录33)
根据附录32所述的赋予方法,其中,通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录34)
根据附录31至33中任一项所述的赋予方法,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由下述(a)~(d)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸和/或选自由包含SNP1~65和66的多核苷酸组成的组中的多核苷酸来确定:
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在上述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于上述(a1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸:
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸;
(b2)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b3)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(b1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸:
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸;
(c2)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c3)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(c1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸:
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸;
(d2)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在上述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d3)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于上述(d1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f3)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(f1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g3)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(g1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h3)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(h1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i3)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(i1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在上述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j3)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于上述(j1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k3)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(k1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l3)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(l1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。
(附录35)
根据附录34所述的赋予方法,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由上述(b)、(c)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定。
(附录36)
根据附录31至35中任一项所述的赋予方法,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378、和/或SNP1~66组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域。
(附录37)
根据附录36所述的赋予方法,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的、
上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域、或者
上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域。
(附录38)
根据附录37所述的赋予方法,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定;
上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982和Egra20_3914662组成的组中的SNP标志物来确定;
上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP14~SNP59和SNP60组成的组中的SNP标志物来确定;或者
上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP18~SNP48和SNP49组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录39)
根据附录31至38中任一项所述的赋予方法,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座源自通过保藏号FERM BP-22427来确定的洋桔梗植物的洋桔梗立枯病抗性基因座。
(附录40)
根据附录31至39中任一项所述的赋予方法,其中,通过与附录1至10中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物进行杂交来导入上述第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
(附录41)
根据附录40所述的赋予方法,其中,上述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物为通过保藏号FERM BP-22427来确定的洋桔梗植物或其后代品系。
<洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性标志物>
(附录42)
一种洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性标志物,其特征在于,
其包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
(附录43)
根据附录42所述的标志物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的SNP标志物和/或选自由SNP1~65和66组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录44)
根据附录43所述的标志物,其中,通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录45)
根据附录42至44中任一项所述的标志物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由下述(a)~(d)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸和/或选自由包含SNP1~65和66的多核苷酸组成的组中的多核苷酸来确定:
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在上述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于上述(a1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸:
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸;
(b2)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b3)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(b1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸:
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸;
(c2)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c3)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(c1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸:
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸;
(d2)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在上述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d3)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于上述(d1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f3)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(f1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g3)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(g1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h3)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(h1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i3)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(i1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在上述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j3)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于上述(j1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k3)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(k1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l3)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(l1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。
(附录46)
根据附录45所述的标志物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由上述(b)、(c)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定。
(附录47)
根据附录42至46中任一项所述的标志物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378和/或SN1~66组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域。
(附录48)
根据附录47所述的标志物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的、
上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域、或者
上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域。
(附录49)
根据附录48所述的标志物,其中,上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定;
上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982和Egra20_3914662组成的组中的SNP标志物来确定;
上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP14~SNP59和SNP60组成的组中的SNP标志物来确定;或者
上述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP18~SNP48和SNP49组成的组中的SNP标志物来确定。
<洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的检测方法>
(附录50)
一种洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的检测方法,其包括下述检测工序:
对于受试洋桔梗植物,检测第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
(附录51)
根据附录50所述的检测方法,其中,上述检测工序中,通过检测选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的SNP标志物、和/或选自由SNP1~65和66组成的组中的SNP标志物来检测上述洋桔梗立枯病抗性基因座。
(附录52)
根据附录51所述的检测方法,其中,上述检测工序中,通过检测选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来检测上述洋桔梗立枯病抗性基因座。
(附录53)
根据附录50至52中任一项所述的检测方法,其中,上述检测工序中,通过检测选自由下述(a)~(d)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸和/或选自由包含SNP1~65和66的多核苷酸组成的组中的多核苷酸来检测上述洋桔梗立枯病抗性基因座:
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在上述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于上述(a1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸:
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸;
(b2)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b3)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(b1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸:
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸;
(c2)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c3)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(c1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸:
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸;
(d2)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在上述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d3)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于上述(d1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f3)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(f1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g3)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(g1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h3)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(h1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i3)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(i1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在上述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j3)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于上述(j1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k3)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(k1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l3)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(l1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。
(附录54)
根据附录53所述的检测方法,其中,上述检测工序中,通过检测选自由上述(b)、(c)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来检测上述洋桔梗立枯病抗性基因座。
(附录55)
根据附录50至54中任一项所述的检测方法,其中,上述检测工序中,检测位于上述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378、和/或SNP1~66组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域的洋桔梗立枯病抗性基因座。
(附录56)
根据附录55所述的检测方法,其中,上述检测工序中,检测洋桔梗立枯病抗性基因座,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的、上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域、或者
上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域。
(附录57)
根据附录56所述的检测方法,其中,上述检测工序中,检测洋桔梗立枯病抗性基因座,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定;
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982和Egra20_3914662组成的组中的SNP标志物来确定;
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP14~SNP59和SNP60组成的组中的SNP标志物来确定;或者
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP18~SNP48和SNP49组成的组中的SNP标志物来确定。
<洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的筛选方法>
(附录58)
一种抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的筛选方法,其包括下述选拔工序:
从受试洋桔梗植物中选拔包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
(附录59)
根据附录58所述的筛选方法,其中,上述选拔工序中,选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的SNP标志物和/或选自由SNP1~65和66组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录60)
根据附录59所述的筛选方法,其中,上述选拔工序中,选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定。
(附录61)
根据附录58至60中任一项所述的筛选方法,其中,上述选拔工序中,选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由下述(a)~(d)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸和/或选自由包含SNP1~65和66的多核苷酸组成的组中的多核苷酸来确定:
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在上述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由上述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于上述(a1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸:
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸;
(b2)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b3)由上述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(b1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸:
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸;
(c2)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在上述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c3)由上述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于上述(c1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸:
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸;
(d2)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在上述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d3)由上述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于上述(d1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f3)由上述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(f1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g3)由上述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(g1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h3)由上述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(h1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i3)由上述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(i1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在上述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j3)由上述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于上述(j1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在上述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k3)由上述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于上述(k1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在上述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l3)由上述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于上述(l1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在上述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于上述抗洋桔梗立枯病性具有与上述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。
(附录62)
根据附录61所述的筛选方法,其中,上述选拔工序中,选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由上述(b)、(c)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定。
(附录63)
根据附录58至62中任一项所述的筛选方法,其中,上述选拔工序中,选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378、和/或SNP1~66组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域。
(附录64)
根据附录63所述的筛选方法,其中,上述选拔工序中,选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的、
上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域、或者
上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域。
(附录65)
根据附录64的筛选方法,其中,上述选拔工序中,选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定;或者
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982和Egra20_3914662组成的组中的SNP标志物来确定;
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3759258与上述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP14~SNP59和SNP60组成的组中的SNP标志物来确定;或者
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于上述染色体中的上述Egra20_3833476与上述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由SNP18~SNP48和SNP49组成的组中的SNP标志物来确定。
<保藏品系或后代品系的识别方法>
(附录66)
一种通过FERM BP-22427来确定的保藏品系或其后代品系的识别方法,其包括下述SNP检测工序:
检测受试洋桔梗植物的选自由SNP1~65和SNP66组成的组中的至少1个SNP。
(附录67)
根据附录66所述的识别方法,其中,包括下述评价工序:对上述受试洋桔梗植物的SNP与对应的基准SNP进行比较,评价上述受试洋桔梗植物是否为上述保藏品系或其后代品系。
产业上的可利用性
如上所述,根据本发明,能够提供对洋桔梗立枯病显示抗性的洋桔梗植物。因此,本发明在例如农业领域、育种领域等中极为有用。
Claims (26)
1.一种抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,
其包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
2.根据权利要求1所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,其中,
所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的SNP标志物来确定。
3.根据权利要求2所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,
其通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的洋桔梗植物,其中,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由下述(a)~(d)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定:
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由所述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在所述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由所述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于所述(a1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸:
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸;
(b2)由所述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在所述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b3)由所述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于所述(b1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸:
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸;
(c2)由所述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在所述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c3)由所述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于所述(c1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸:
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸;
(d2)由所述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在所述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d3)由所述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于所述(d1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由所述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在所述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f3)由所述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于所述(f1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由所述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在所述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g3)由所述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于所述(g1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由所述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在所述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h3)由所述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于所述(h1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由所述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在所述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i3)由所述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于所述(i1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由所述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在所述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j3)由所述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于所述(j1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由所述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在所述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k3)由所述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于所述(k1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由所述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在所述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l3)由所述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于在所述(l1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。
5.根据权利要求4所述的洋桔梗植物,其中,
所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由所述(b)、(c)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的洋桔梗植物,其中,
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于所述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域。
7.根据权利要求6所述的洋桔梗植物,其中,
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于所述染色体中的、
所述Egra20_3759258与所述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域、或
所述Egra20_3833476与所述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域。
8.根据权利要求7所述的洋桔梗植物,其中,
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于所述染色体中的所述Egra20_3759258与所述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定、或者
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于所述染色体中的所述Egra20_3833476与所述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域且通过选自由Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982和Egra20_3914662组成的组中的SNP标志物来确定。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的洋桔梗植物,其中,
所述抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物为通过保藏号FERM BP-22427来确定的洋桔梗植物或其后代品系。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的洋桔梗植物,其中,
所述洋桔梗立枯病抗性基因座源自通过保藏号FERM BP-22427来确定的洋桔梗植物的洋桔梗立枯病抗性基因座。
11.一种权利要求1至10中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的一部分。
12.根据权利要求11所述的植物的一部分,其中,
所述植物的一部分为种子。
13.一种抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其特征在于,其包括下述(a)和(b)工序:
(a)使权利要求1至10中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物与其它洋桔梗植物杂交的工序;
(b)从通过所述(a)工序得到的洋桔梗植物或其后代品系中选拔抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的工序。
14.根据权利要求13所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,在所述(a)工序之前包括下述(x)工序:
(x)从受试洋桔梗植物中选拔权利要求1至10中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的工序。
15.根据权利要求14所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,
所述(x)工序中的所述选拔为选拔包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
16.根据权利要求15所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,
所述(x)工序中的所述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的SNP标志物来确定。
17.根据权利要求16所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,
所述(x)工序中的所述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,
所述(x)工序中的所述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由下述(a)~(d)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定:
(a)下述(a1)、(a2)或(a3)的多核苷酸:
(a1)由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸;
(a2)由所述(a1)的第101位的碱基(T)保守且在所述(a1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(a3)由所述(a1)的第101位的碱基(T)保守且相对于所述(a1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(a1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b)下述(b1)、(b2)或(b3)的多核苷酸:
(b1)由序列号2的碱基序列构成的多核苷酸;
(b2)由所述(b1)的第101位的碱基(A)保守且在所述(b1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(b3)由所述(b1)的第101位的碱基(A)保守且相对于所述(b1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(b1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c)下述(c1)、(c2)或(c3)的多核苷酸:
(c1)由序列号3的碱基序列构成的多核苷酸;
(c2)由所述(c1)的第101位的碱基(A)保守且在所述(c1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~20个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(c3)由所述(c1)的第101位的碱基(A)保守且相对于所述(c1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(c1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d)下述(d1)、(d2)或(d3)的多核苷酸:
(d1)由序列号4的碱基序列构成的多核苷酸;
(d2)由所述(d1)的第76位的碱基(G)保守且在所述(d1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(d3)由所述(d1)的第76位的碱基(G)保守且相对于所述(d1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(d1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f)下述(f1)、(f2)或(f3)的多核苷酸:
(f1)由序列号72的碱基序列构成的多核苷酸;
(f2)由所述(f1)的第51位的碱基(A)保守且在所述(f1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(f3)由所述(f1)的第51位的碱基(A)保守且相对于所述(f1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(f1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g)下述(g1)、(g2)或(g3)的多核苷酸:
(g1)由序列号73的碱基序列构成的多核苷酸;
(g2)由所述(g1)的第51位的碱基(T)保守且在所述(g1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(g3)由所述(g1)的第51位的碱基(T)保守且相对于所述(g1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(g1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h)下述(h1)、(h2)或(h3)的多核苷酸:
(h1)由序列号74的碱基序列构成的多核苷酸;
(h2)由所述(h1)的第51位的碱基(T)保守且在所述(h1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(h3)由所述(h1)的第51位的碱基(T)保守且相对于所述(h1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(h1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i)下述(i1)、(i2)或(i3)的多核苷酸:
(i1)由序列号75的碱基序列构成的多核苷酸;
(i2)由所述(i1)的第51位的碱基(A)保守且在所述(i1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(i3)由所述(i1)的第51位的碱基(A)保守且相对于所述(i1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(i1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j)下述(j1)、(j2)或(j3)的多核苷酸:
(j1)由序列号76的碱基序列构成的多核苷酸;
(j2)由所述(j1)的第51位的碱基(G)保守且在所述(j1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(j3)由所述(j1)的第51位的碱基(G)保守且相对于所述(j1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(j1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k)下述(k1)、(k2)或(k3)的多核苷酸:
(k1)由序列号77的碱基序列构成的多核苷酸;
(k2)由所述(k1)的第51位的碱基(T)保守且在所述(k1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(k3)由所述(k1)的第51位的碱基(T)保守且相对于所述(k1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(k1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l)下述(l1)、(l2)或(l3)的多核苷酸:
(l1)由序列号78的碱基序列构成的多核苷酸;
(l2)由所述(l1)的第51位的碱基(A)保守且在所述(l1)的碱基序列中缺失、置换、插入和/或添加有1~15个碱基的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸;
(l3)由所述(l1)的第51位的碱基(A)保守且相对于在所述(l1)的碱基序列具有90%以上的一致性的碱基序列构成,在所述洋桔梗立枯病抗性基因座中,关于所述抗洋桔梗立枯病性具有与所述(l1)的多核苷酸同等功能的多核苷酸。
19.根据权利要求18所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,
所述(x)工序中的所述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座通过选自由所述(b)、(c)和(f)~(l)组成的组中的多核苷酸来确定。
20.根据权利要求15至19中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,
所述(x)工序中的所述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于所述染色体中的选自由Egra20_3656645、Egra20_3703734、Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662、Egra20_3939402和Egra20_3961378组成的组中的2个SNP标志物的位点间的区域。
21.根据权利要求20所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,
所述(x)工序中的所述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于所述染色体中的、
所述Egra20_3759258与所述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域、或者
所述Egra20_3833476与所述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域。
22.根据权利要求21所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的制造方法,其中,
所述(x)工序中的所述选拔为选拔具有洋桔梗立枯病抗性基因座的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物,
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于所述染色体中的所述Egra20_3759258与所述Egra20_3939402的SNP标志物的位点间的区域,并且通过选自由Egra20_3759258、Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982、Egra20_3914662和Egra20_3939402组成的组中的SNP标志物来确定,或者
所述洋桔梗立枯病抗性基因座位于所述染色体中的所述Egra20_3833476与所述Egra20_3914662的SNP标志物的位点间的区域,并且通过选自由Egra20_3833476、Egra20_3839851、Egra20_3849059、Egra20_3854638、Egra20_3857016、Egra20_3879982和Egra20_3914662组成的组中的SNP标志物来确定。
23.一种对洋桔梗植物赋予抗洋桔梗立枯病性的赋予方法,其特征在于,包括下述导入工序:
将第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座导入洋桔梗植物。
24.根据权利要求15所述的赋予方法,其中,
通过与权利要求1至10中任一项所述的抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物进行杂交,从而导入所述第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
25.一种洋桔梗植物的抗洋桔梗立枯病性的检测方法,其包括下述检测工序:
对于受试洋桔梗植物,检测第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座。
26.一种抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物的筛选方法,其包括下述选拔工序:
从受试洋桔梗植物中选拔包含第20号染色体上的洋桔梗立枯病抗性基因座的洋桔梗植物来作为抗洋桔梗立枯病性洋桔梗植物。
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