CN118119615A - Rho相关蛋白激酶抑制剂或其溶剂合物的固体形式及其制备方法和用途 - Google Patents

Rho相关蛋白激酶抑制剂或其溶剂合物的固体形式及其制备方法和用途 Download PDF

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CN118119615A CN202280062579.7A CN202280062579A CN118119615A CN 118119615 A CN118119615 A CN 118119615A CN 202280062579 A CN202280062579 A CN 202280062579A CN 118119615 A CN118119615 A CN 118119615A
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Abstract

提供Rho相关蛋白激酶抑制剂(6‑(4‑((4‑(1H‑吡唑‑4‑基)苯基)氨基)嘧啶‑2‑基)‑1‑甲基‑1H‑吲哚‑2‑基)(3，3‑二氟氮杂环丁烷‑1‑基)甲酮或其溶剂合物的固体形式，制备所述固体形式的方法、包含所述固体形式的药物组合物，以及所述固体形式用作Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂，优选选择性ROCK2抑制剂的用途。

Description

Rho相关蛋白激酶抑制剂或其溶剂合物的固体形式及其制备方法和用途 发明领域
本发明涉及Rho相关蛋白激酶抑制剂(6-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮(在下文中称作“化合物A”)或其溶剂合物的固体形式，制备所述固体形式的方法、包含所述固体形式的药物组合物，以及所述固体形式用作Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂，优选选择性ROCK2抑制剂的用途。
发明背景
Rho相关蛋白激酶(ROCK)为AGC激酶家族的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其包括两种亚型，ROCK1和ROCK2。ROCK1和ROCK2在特定组织中被差异性地表达和调节。例如ROCK1以相对高的水平普遍表达，而ROCK2在心脏、脑和骨骼肌中优先表达。ROCK是第一个被发现的Rho蛋白下游效应因子，其通过磷酸化下游的效应蛋白(MLC、Lin-11、Isl-1、LIMK、ERM、MARCKS、CRMP-2等)来实现其生物学功能。研究表明多种疾病(如肺纤维化、心脑血管疾病、神经系统疾病和癌症等)与ROCK介导的通路有关，因此在药物研发中，ROCK被认为是一类重要的靶点。
本申请人已发现(6-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮可用作有效的Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂(参见PCT/CN2018/093713，将其整体通过援引加入本文)，但对于该化合物的固体形式尚未有任何报道。
发明概述
在一个方面中，本发明提供如下所示的化合物A((6-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮)或其溶剂合物的晶型：
本发明的优选晶型不仅在预防或治疗Rho相关蛋白激酶(ROCK)介导的疾病中具有优异的效果，还具有其它优点。例如，本发明的优选晶型具有优良的物理性质(包括溶解度、溶出率、耐光照性、低吸湿性、耐高温性、耐高湿性、流动性等)，并且在诸如生物利用度、物理和/或化学稳定性及易于制备性等性质上，本发明的优选晶型可具有更优异的性质。本发明的优选晶型具有良好的粉体学性质，更适合和便于大量制造和用于形成制剂，可减少刺激性并提高吸收，解决了代谢速度方面的问题，显著降低了药物蓄积带来的毒性，提高了安全性，有效保证了药物产品的质量和效能。
在另一方面中，本发明提供制备本发明的晶型的方法。
在另一方面中，本发明提供药物组合物，其包含本发明中的任意一种或多种晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体。
在另一方面中，本发明提供本发明的晶型在制备用作Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂，优选选择性ROCK2抑制剂的药物中的用途。
附图简要说明
图1为化合物A一水合物的晶型I的X射线粉末衍射图谱。
图2为化合物A一水合物的晶型I的差示扫描量热(DSC)图谱。
图3为化合物A一水合物的晶型I的热重分析(TGA)图谱。
图4为化合物A一水合物的晶型I的扫描电子显微镜照片。
图5为化合物A无水物的晶型II的X射线粉末衍射图谱。
图6为化合物A无水物的晶型II的差示扫描量热(DSC)图谱。
图7为化合物A无水物的晶型II的热重分析(TGA)图谱。
图8为化合物A无水物的晶型II的扫描电子显微镜照片。
图9为化合物A一水合物的晶型III的X射线粉末衍射图谱。
图10为化合物A一水合物的晶型III的差示扫描量热(DSC)图谱。
图11为化合物A一水合物的晶型III的热重分析(TGA)图谱。
图12为化合物A一水合物的晶型III的扫描电子显微镜照片。
图13为化合物A一水合物的晶型IV的X射线粉末衍射图谱。
图14为化合物A一水合物的晶型IV的差示扫描量热(DSC)图谱。
图15为化合物A一水合物的晶型IV的热重分析(TGA)图谱。
图16为化合物A一水合物的晶型IV的扫描电子显微镜照片。
图17为化合物A一水合物的晶型V的X射线粉末衍射图谱。
图18为化合物A一水合物的晶型V的差示扫描量热(DSC)图谱。
图19为化合物A一水合物的晶型V的热重分析(TGA)图谱。
图20为化合物A无水物的晶型II在固体稳定性测试中的X射线粉末衍射图谱对比。
图21为将化合物A一水合物的晶型I进行热处理前后的X射线粉末衍射图谱对比。
发明详述
定义
除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
如本文中所使用的术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。
如本文中所使用的词语“约”是指本领域的普通技术人员认为在所述值的可接受的标准误差内，例如±0.05、±0.1、±0.2、±0.3、±1、±2或±3等。
本发明所使用的术语“固体形式”包括化合物A或其任意溶剂合物的所有固态形式，例如晶体形式或无定形形式。
如本文中所使用的术语“无定形”是指三维上无排序的任意固体物质。在一些情况中，无定形固体可通过已知技术表征，所述技术包括XRPD晶体学、固态核磁共振(ssNMR)波谱学、DSC或这些技术的一些组合。如以下所说明，无定形固体产生弥散的XRPD图谱，其通常包括一个或两个宽峰(即具有约5°2θ或更大的基宽的峰)。
如本文中所使用的术语“晶型”或“晶体”是指呈现三维排序的任意固体物质，与无定形固体物质相反，其产生具有边界清楚的峰的特征性XRPD图谱。
如本文中所使用的术语“X射线粉末衍射图谱(XRPD图谱)”是指实验观察的衍射图或源于其的参数。XRPD图谱通常由峰位(横坐标)和/或峰强度(纵坐标)表征。
如本文中所使用的术语“2θ”是指基于X射线衍射实验的实验设置的以度数表示的峰位，并且通常是在衍射图谱中的横坐标单位。如果当入射束与某晶格面形成θ角时反射被衍射，则实验设置需要以2θ角记录反射束。应当理解，在本文中提到的特定晶体形式的特定2θ值意图表示使用本文所述的X射线衍射实验条件所测量的2θ值(以度数表示)。例如，如本文所述，使用Cu-Kα 1.540598和 1.544426)作为辐射源。
如本文中所使用，“I％”表示峰强度百分比。
如本文中所使用的术语“差示扫描量热(DSC)图谱”是指由差示扫描量热仪记录到的曲线。
如本文中所使用的术语“热重分析(TGA)图谱”是指由热重分析仪记录到的曲线。
如本文中所使用的，对于X射线衍射峰位的术语“基本上相同”意指将代表性峰位和强度变化考虑在内。例如，本领域技术人员会理解峰位(2θ)会显示一些变化，通常多达0.1-0.2度，并且用于测量衍射的仪器也会显示一些变化。另外，本领域技术人员会理解相对峰强度会显示仪器间的变化以及由于结晶性程度、择优取向、制备的样品表面以及本领域技术人员已知的其它因素的变化。相似地，如本文中所使用，对于DSC图谱的“基本上相同”也意图涵盖本领域技术人员已知的与这些分析技术有关的变化。例如，对于边界清楚的峰，在差示扫描量热图谱通常会具有多达±0.2℃的变化，对于宽峰甚至更大(例如多达±1℃)。
本申请中的液态核磁谱图优选在Bruker 400M核磁共振仪上采集，除非另外说明，以DMSO-d 6作为溶剂。
本申请中的偏光显微数据优选通过Polarizing Microscope ECLIPSE LV100POL(Nikon,JPN)进行 采集。
如本文中所使用的数值范围(如“1-10个”、“1-6个”、“2-10个”、“2-6个”、“3-10个”、“5-10个”、“3-6个”)等涵盖所述数值范围中的任意个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个)。
可将制备晶体形式通过包括倾析、离心、蒸发、重力过滤、抽滤或者在加压下或在减压下的任何其它用于固体回收的技术在内的方法进行回收。可将回收的固体任选地进行干燥。本发明中的“干燥”是在减压(优选真空)下进行直到残留溶剂的含量降低至International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use(“ICH”)指南所给出的限度的范围内。残留溶剂含量取决于溶剂的类型，但不超过约5000ppm、或优选约4000ppm、或更优选约3000ppm。所述干燥可以在盘式干燥器、真空烘箱、空气烘箱、锥形真空干燥器(cone vacuum dryer)、旋转式真空干燥器、流化床干燥器、旋转闪蒸干燥器、快速干燥器等中进行。所述干燥可以在低于约100℃、低于约80℃、低于约60℃、低于约50℃、低于约30℃的温度或任何其它合适的温度下，在大气压或减压(优选真空)下在能够实现期望的结果的任何期望的时间内(如约1、2、3、5、10、15、20、24小时或者过夜)进行，只要晶体的品质不劣化。所述干燥可以进行任何期望的次数，直到实现所需的产物品质。干燥的产物可以任选地经历粉碎操作，以产生期望的粒度。可在产物的干燥前或干燥完成后进行研磨或微粉化。可用于减小粒度的技术包括但不限于球磨、辊磨和锤磨，以及喷射研磨(jet milling)。
如本文中所使用的术语“无水物”优选意指其中不含有水分子作为结构要素的晶型。
化合物A的晶型及其制备方法
在一个实施方案中，本发明提供化合物A一水合物的晶型I：
所述晶型I的XRPD图谱包括在约4.5±0.2°、12.2±0.2°、20.1±0.2°、25.3±0.2°和25.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在优选的实施方案中，所述晶型I的XRPD图谱包括在约4.5±0.2°、9.1±0.2°、10.3±0.2°、12.2±0.2°、16.1±0.2°、18.2±0.2°、20.1±0.2°、25.3±0.2°和25.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型I的XRPD图谱包括在约4.5±0.2°、9.1±0.2°、10.3±0.2°、12.2±0.2°、12.5±0.2°、16.1±0.2°、16.9±0.2°、17.4±0.2°、18.2±0.2°、18.9±0.2°、20.1±0.2°、20.5±0.2°、21.2±0.2°、22.6±0.2°、24.3±0.2°、24.8±0.2°、25.3±0.2°、25.5±0.2°、26.8±0.2°和27.2±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型I的XRPD图谱包括在以下衍射角(2θ)处的峰：
峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％
1 4.5 62.3 15 16.1 28.8 29 24.3 20
2 7.7 7.1 16 16.9 11.4 30 24.8 22.4
3 8.5 9.5 17 17.4 14.4 31 25.3 76.6
4 9.1 33.5 18 18.2 29.2 32 25.5 100
5 10.3 26.9 19 18.9 12.3 33 26.8 16.9
6 10.8 9.4 20 20.1 37.8 34 27.2 13
7 11.2 6.3 21 20.5 12.4 35 28.2 9.9
8 12.2 46.8 22 21.2 11.6 36 28.8 6.5
9 12.5 15.9 23 21.8 6.6 37 31.7 5.5
10 13.1 9.7 24 22.3 9.8 38 33.3 4.2
11 13.4 8.5 25 22.6 10.3 39 36.3 3.9
12 13.8 7 26 23.5 9.7 40 36.5 3.5
13 14.3 7.3 27 23.6 9.1 41 38.0 3.4
14 15.3 8.9 28 23.7 9.2 42 38.3 3.5
在更优选的实施方案中，所述晶型I的XRPD图谱包括与图1所示基本上相同的衍射角(2θ)处的峰。在最优选的实施方案中，所述晶型I的XRPD图谱与图1所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，所述晶型I的DSC图谱包括在约103℃处的宽吸热峰，在约177℃处 的宽吸热峰，在约191℃处的放热峰以及在约259℃处的吸热峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型I的DSC图谱包括与图2所示基本上相同的特征峰。在最优选的实施方案中，所述晶型I的DSC图谱与图2所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，在热重分析中，所述晶型I在加热至约68℃时有约1.5％的失重，在约68-147℃有约2.2％的失重，在约147-200℃有约0.3％的失重。
在最优选的实施方案中，所述晶型I的TGA图谱与图3所示基本上相同。
在最优选的实施方案中，所述晶型I的扫描电子显微镜照片与图4所示基本上相同。
在一些实施方案中，本发明提供制备晶型I的方法，其包括将化合物A在包含具有1-10个碳原子的烃类、具有1-10个碳原子的酰胺类和水的混合溶剂中搅拌(例如在室温下进行，例如持续约1-30小时，优选约10-20小时)，过滤，将滤饼用水淋洗并真空干燥后得到晶体。
在优选的实施方案中，化合物A和所述混合溶剂的重量体积比(g/mL)为约1:(1-10)，优选约1:3.5。
在优选的实施方案中，所述具有1-10个碳原子的烃类溶剂包括烷烃类、卤代烷烃类、烯烃类、炔烃类和芳烃类，具体包括但不限于二氯甲烷、三氯甲烷(氯仿)、正己烷、正庚烷和甲苯。
在优选的实施方案中，所述具有1-10个碳原子的酰胺类溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或N,N-二甲基乙酰胺。
在优选的实施方案中，所述混合溶剂中的具有1-10个碳原子的烃类、具有1-10个碳原子的酰胺类和水的体积比为约5:1:1。
在优选的实施方案中，所述真空干燥在约20-50℃(优选约40℃)下进行，持续约1-10小时(优选6小时)。
在一个实施方案中，本发明提供化合物A无水物的晶型II：
所述晶型II的XRPD图谱包括在约8.6±0.2°、12.5±0.2°和21.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在优选的实施方案中，所述晶型II的XRPD图谱包括在约6.7±0.2°、8.6±0.2°、12.5±0.2°、13.5±0.2°、13.8±0.2°、21.9±0.2°和24.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型II的XRPD图谱包括在约6.2±0.2°、6.7±0.2°、8.6±0.2°、11.1±0.2°、12.5±0.2°、13.5±0.2°、13.8±0.2°、15.2±0.2°、17.3±0.2°、18.2±0.2°、18.6±0.2°、21.0±0.2°、21.9±0.2°、24.3±0.2°、24.9±0.2°和25.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型II的XRPD图谱包括在以下衍射角(2θ)处的峰：
峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％
1 6.2 17.1 12 18.2 10.8 23 25.9 10.8
2 6.7 31.7 13 18.6 11.3 24 27.2 8.6
3 8.6 44.4 14 19.0 5.1 25 28.6 3.6
4 11.1 15.2 15 19.7 8.9 26 29.0 6.4
5 12.5 100 16 20.3 6.7 27 29.7 4.6
6 13.5 30.5 17 21.0 12.5 28 30.5 5.4
7 13.8 29 18 21.9 38 29 30.7 4.8
8 15.2 19.6 19 22.8 5 30 31.7 3.4
9 16.3 6 20 23.6 6.4 31 32.8 2.4
10 16.8 5.2 21 24.3 10.3 32 33.8 2.5
11 17.3 20.2 22 24.9 28.3
在更优选的实施方案中，所述晶型II的XRPD图谱包括与图5所示基本上相同的衍射角(2θ)处的峰。在最优选的实施方案中，所述晶型II的XRPD图谱与图5所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，所述晶型II的DSC图谱包括在约261℃处的吸热峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型II的DSC图谱包括与图6所示基本上相同的特征峰。在最优选的实施方案中，所述晶型II的DSC图谱与图6所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，在热重分析中，所述晶型II在加热至约230℃时有不大于约1.0％，优选不大于约0.2％的失重。
在最优选的实施方案中，所述晶型II的TGA图谱与图7所示基本上相同。
在最优选的实施方案中，所述晶型II的扫描电子显微镜照片与图8所示基本上相同。
在一些实施方案中，本发明提供制备晶型II的方法，其包括将化合物A在具有2-10个碳原子的酯类溶剂中搅拌(例如在约20-80℃(例如约55℃)下进行，例如持续约1-30小时，优选约10-20小时)，过滤，并将所得固体真空干燥后得到晶体。
在优选的实施方案中，化合物A和所述酯类溶剂的重量体积比(g/mL)为约1:(1-10)，优选约1:5。
在优选的实施方案中，所述具有2-10个碳原子的酯类溶剂为乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯或异丙酸乙酯。
在优选的实施方案中，所述真空干燥在约20-50℃(优选约40℃)下进行，持续约1-10小时(优选6小时)。
在一个实施方案中，本发明提供化合物A一水合物的晶型III：
所述晶型III的XRPD图谱包括在约8.7±0.2°、12.3±0.2°和13.8±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在优选的实施方案中，所述晶型III的XRPD图谱包括在约8.7±0.2°、12.3±0.2°、13.8±0.2°、18.5±0.2°、19.5±0.2°、21.0±0.2°和24.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型III的XRPD图谱包括在约8.7±0.2°、12.3±0.2°、13.8±0.2°、16.9±0.2°、17.6±0.2°、18.2±0.2°、18.5±0.2°、19.5±0.2°、19.9±0.2°、21.0±0.2°、22.5±0.2°、24.5±0.2°和24.7±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型III的XRPD图谱包括在以下衍射角(2θ)处的峰：
峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％
1 6.1 2.8 15 19.9 3.4 29 28.7 0.7
2 8.7 8.1 16 21.0 4.3 30 29.5 2.3
3 12.3 100 17 21.5 0.8 31 30.4 1.8
4 12.9 2 18 22.2 2 32 30.8 1.7
5 13.8 8 19 22.5 3.8 33 31.0 1.3
6 15.0 1.2 20 23.3 1.4 34 31.7 1.1
7 15.5 2.1 21 23.9 1.2 35 33.6 1
8 16.2 2 22 24.5 5.2 36 34.9 0.7
9 16.6 1.2 23 24.7 4.1 37 35.8 1.2
10 16.9 4 24 25.3 2.4 38 36.4 1.3
11 17.6 3.3 25 25.6 1.6 39 37.5 2.4
12 18.2 3.1 26 26.3 1 40 38.1 0.9
13 18.5 4.5 27 27.4 0.9 41 39.7 2.1
14 19.5 4.1 28 28.0 0.8 42 28.7 0.7
在更优选的实施方案中，所述晶型III的XRPD图谱包括与图9所示基本上相同的衍射角(2θ)处的峰。在最优选的实施方案中，所述晶型III的XRPD图谱与图9所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，所述晶型III的DSC图谱包括在约84-131℃处的宽吸热峰以及在约260℃处的吸热峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型III的DSC图谱包括与图10所示基本上相同的特征峰。在最 优选的实施方案中，所述晶型III的DSC图谱与图10所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，在热重分析中，所述晶型III在加热至约150℃时有约3.3％的失重。
在最优选的实施方案中，所述晶型III的TGA图谱与图11所示基本上相同。
在最优选的实施方案中，所述晶型III的扫描电子显微镜照片与图12所示基本上相同。
在一些实施方案中，本发明提供制备晶型III的方法，其包括将化合物A在包含具有1-10个碳原子的醇类和水的混合溶剂中搅拌(例如在约20-80℃(例如约55℃)下进行，例如持续约1-30小时，优选约10-20小时)，过滤，并将所得固体真空干燥后得到晶体。
在优选的实施方案中，化合物A和所述混合溶剂的重量体积比(g/mL)为约1:(1-15)，优选约1:7.5。
在优选的实施方案中，所述具有1-10个碳原子的醇类溶剂为具有1-6个碳原子的醇，其包括但不限于甲醇、乙醇、1-丙醇(正丙醇)、2-丙醇(异丙醇)、1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇。
在优选的实施方案中，所述混合溶剂中的具有1-10个碳原子的醇类和水的体积比为约(1-5):1，优选为约2:1。
在优选的实施方案中，所述真空干燥在约20-50℃(优选约40℃)下进行，持续约1-10小时(优选6小时)。
在一个实施方案中，本发明提供化合物A一水合物的晶型IV：
所述晶型IV的XRPD图谱包括在约8.9±0.2°、11.4±0.2°和17.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在优选的实施方案中，所述晶型IV的XRPD图谱包括在约8.3±0.2°、8.9±0.2°、9.2±0.2°、11.4±0.2°、15.3±0.2°、17.9±0.2°、22.0±0.2°和26.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型IV的XRPD图谱包括在约5.7±0.2°、8.3±0.2°、8.9±0.2°、9.2±0.2°、10.2±0.2°、11.4±0.2°、12.4±0.2°、15.3±0.2°、16.4±0.2°、16.8±0.2°、17.2±0.2°、17.4±0.2°、17.9±0.2°、18.5±0.2°、19.6±0.2°、20.3±0.2°、20.8±0.2°、21.3±0.2°、22.0±0.2°、22.4±0.2°、23.0±0.2°、23.8±0.2°、24.8±0.2°、26.1±0.2°、26.9±0.2°、27.8±0.2°和28.7±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型IV的XRPD图谱包括在以下衍射角(2θ)处的峰：
峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％
1 5.7 18 11 17.2 32.5 21 23.0 21.6
2 8.3 39.7 12 17.4 33.4 22 23.8 32.1
3 8.9 54.6 13 17.9 66.2 23 24.8 29.4
4 9.2 49.9 14 18.5 34 24 26.1 27.6
5 10.2 26.2 15 19.6 18.9 25 26.9 36.4
6 11.4 100 16 20.3 17.4 26 27.8 18.6
7 12.4 25.9 17 20.8 26.5 27 28.7 12.7
8 15.3 35.1 18 21.3 20.2 28 31.8 9.2
9 16.4 17.3 19 22.0 42.4
10 16.8 21.4 20 22.4 24
在更优选的实施方案中，所述晶型IV的XRPD图谱包括与图13所示基本上相同的衍射角(2θ)处的峰。在最优选的实施方案中，所述晶型IV的XRPD图谱与图13所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，所述晶型IV的DSC图谱包括在约93℃处的吸热峰，在约156℃处的吸热峰，在约174℃处的吸热峰，在约201℃处的放热峰，以及在约260℃处的吸热峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型IV的DSC图谱包括与图14所示基本上相同的特征峰。在最优选的实施方案中，所述晶型IV的DSC图谱与图14所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，在热重分析中，所述晶型IV在加热至约63℃时有约0.8％的失重，并且在约63-165℃有约3.8％的失重。
在最优选的实施方案中，所述晶型IV的TGA图谱与图15所示基本上相同。
在最优选的实施方案中，所述晶型IV的扫描电子显微镜照片与图16所示基本上相同。
在一些实施方案中，本发明提供制备晶型IV的方法，其包括将化合物A在包含具有1-10个碳原子的烃类和具有1-10个碳原子的醇类的混合溶剂中搅拌(例如在室温下进行，例如持续约1-30小时，优选约10-20小时)，过滤，并将所得固体真空干燥后得到晶体。
在优选的实施方案中，化合物A和所述混合溶剂的重量体积比(g/mL)为约1:(1-10)，优选约1:5.5。
在优选的实施方案中，所述具有1-10个碳原子的烃类溶剂包括烷烃类、卤代烷烃类、烯烃类、炔烃类和芳烃类，具体包括但不限于二氯甲烷、三氯甲烷(氯仿)、正己烷、正庚烷和甲苯。
在优选的实施方案中，所述具有1-10个碳原子的醇类溶剂为具有1-6个碳原子的醇，其包括但不限于甲醇、乙醇、1-丙醇(正丙醇)、2-丙醇(异丙醇)、1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇。
在优选的实施方案中，所述混合溶剂中的具有1-10个碳原子的烃类和具有1-10个碳原子的醇类的体积比为约(1-15):1，优选为约10:1。
在优选的实施方案中，所述真空干燥在约20-50℃(优选约40℃)下进行，持续约1-10小时(优选6小时)。
在一个实施方案中，本发明提供化合物A一水合物的晶型V：
所述晶型V的XRPD图谱包括在约8.7±0.2°、12.2±0.2°和24.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在优选的实施方案中，所述晶型V的XRPD图谱包括在约8.7±0.2°、12.2±0.2°、13.7±0.2°、16.9±0.2°、20.0±0.2°、20.9±0.2°和24.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型V的XRPD图谱包括在约8.7±0.2°、12.2±0.2°、12.8±0.2°、13.7±0.2°、15.5±0.2°、16.3±0.2°、16.9±0.2°、17.5±0.2°、20.0±0.2°、20.9±0.2°、22.2±0.2°、22.5±0.2°、24.5±0.2°、25.2±0.2°、29.4±0.2°和30.3±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型V的XRPD图谱包括在以下衍射角(2θ)处的峰：
峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％ 峰编号 2θ(°)±0.2° I％
1 6.0 1.1 12 17.5 15.5 23 25.6 2.6
2 6.9 3.3 13 18.3 9.3 24 26.4 2.6
3 8.7 100 14 19.5 8.4 25 29.4 11.9
4 11.1 1 15 20.0 29.9 26 30.3 13.4
5 12.2 66.3 16 20.9 43.2 27 32.8 1.1
6 12.8 19.7 17 22.2 13.4 28 33.8 1.1
7 13.7 21.1 18 22.5 12.9 29 35.8 2.9
8 15.0 5.5 19 23.3 3 30 38.1 1.1
9 15.5 14.2 20 23.9 4.8 31 39.7 2
10 16.3 17.4 21 24.5 59.3 32 41.4 0.6
11 16.9 49 22 25.2 16.7 33 46.1 0.9
在更优选的实施方案中，所述晶型V的XRPD图谱包括与图17所示基本上相同的衍射角(2θ)处的峰。在最优选的实施方案中，所述晶型V的XRPD图谱与图17所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，所述晶型V的DSC图谱包括在约113℃处的吸热峰、在约215℃处的放热峰，以及在约252℃处的吸热峰。
在更优选的实施方案中，所述晶型V的DSC图谱包括与图18所示基本上相同的特征峰。在最优选的实施方案中，所述晶型V的DSC图谱与图18所示基本上相同。
在更优选的实施方案中，在热重分析中，所述晶型V在加热至约130℃时有约3.5％的失重。
在最优选的实施方案中，所述晶型V的TGA图谱与图19所示基本上相同。
在一些实施方案中，本发明提供制备晶型V的方法，其包括将化合物A的酸加成盐加入至包含 具有1-10个碳原子的醇类和水的混合溶剂中，然后加入碱，并将混合物搅拌(例如在室温下进行，例如持续约1-15小时，优选约1-10小时)，过滤，并将所得固体真空干燥后得到晶体。
在优选的实施方案中，所述化合物A的酸加成盐(优选为化合物A的盐酸盐)和所述混合溶剂的重量体积比(g/mL)为约1:(1-10)，优选约1:5.5。
在优选的实施方案中，所述化合物A的酸加成盐与碱的摩尔比为约1:(1-5)，优选为约1:(1-2)。
在优选的实施方案中，所述碱为有机碱，例如三乙胺。
在优选的实施方案中，所述具有1-10个碳原子的醇类溶剂为具有1-6个碳原子的醇，其包括但不限于甲醇、乙醇、1-丙醇(正丙醇)、2-丙醇(异丙醇)、1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇。
在优选的实施方案中，所述混合溶剂中的具有1-10个碳原子的醇类和水的体积比为约(1-15):1，优选为约10:1。
在优选的实施方案中，所述真空干燥在约20-50℃(优选约40℃)下进行，持续约1-10小时(优选4小时)。
药物组合物、治疗方法和用途
在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的晶型I、II、III、IV和V中的任意一种或多种，以及一种或多种药学上可接受的载体。
在一些实施方案中，本发明提供本发明的晶型I、II、III、IV和V中的任意一种或多种在制备用作Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂，优选选择性ROCK2抑制剂的药物中的用途。
在一些实施方案中，本发明提供本发明的晶型I、II、III、IV和V中的任意一种或多种，其用作Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂，优选选择性ROCK2抑制剂。
在一些实施方案中，本发明提供预防或治疗Rho相关蛋白激酶(ROCK)介导的疾病的方法，其包括向需要其的个体(优选哺乳动物)给药预防或治疗有效量的本发明的晶型I、II、III、IV和V中的任意一种或多种。
在一些实施方案中，所述Rho相关蛋白激酶(ROCK)介导的疾病包括自身免疫性疾病(其包括类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮(SLE；狼疮)、银屑病、克罗恩病、特应性皮炎、湿疹或移植物抗宿主病(GVHD))；心血管病症(其包括高血压、动脉粥样硬化、再狭窄、心脏肥大、脑缺血、脑血管痉挛或勃起功能障碍)；炎症(其包括哮喘、心血管炎症、溃疡性结肠炎或肾脏炎症)；中枢神经系统病症(其包括神经元变性或脊髓损伤；所述中枢神经系统病症优选为亨延顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)或多发性硬化症)；动脉血栓性病症(其包括血小板聚集或白细胞聚集)；纤维化病症(其包括肝纤维化、肺纤维化或肾纤维化)；瘤性疾病(其包括淋巴瘤、癌(例如鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食道癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑色素瘤或头颈部癌症)、白血病、星形细胞瘤、软组织肉瘤、肉瘤或母细胞瘤)；代谢综合征；胰岛素抗性；高胰岛素血症；2型糖尿病；葡萄糖耐受不良；骨质疏松症；眼部病症(其包括高眼压、年龄相关性黄斑变性(AMD)、脉络膜新生血管形成(CNV)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、虹膜新生血管形成、葡萄膜炎、青光眼(其包括原发性开角型青光眼、急性闭角型青光眼、色素性青光眼、先天性青光眼、正常张力青光眼、继发青光眼或新生血管性青光眼)或早产儿视网膜病变(ROP))。
在一些实施方案中，所述Rho相关蛋白激酶(ROCK)介导的疾病包括狼疮肾炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎(RA)、血管瘤、血管纤维瘤、肺纤维化、银屑病、角膜移植排斥、胰岛素依赖型糖尿病、多发性硬化症、重症肌无力、克罗恩病、自身免疫性肾炎、原发性胆汁性肝硬化、急性胰腺炎、异体排异、过敏性炎症、接触性皮炎、迟发型超敏反应、炎症性肠病、感染性休克、骨质疏松、骨关节炎、神经元炎症、Osler-Weber综合征、再狭窄、真菌感染、寄生虫感染和病毒感染。
如本文中所使用的术语“药学上可接受的载体”是指与治疗剂一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。
在本发明的药物组合物中可使用的药学上可接受的载体包括但不限于无菌液体，例如水和油，包括那些石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当所述药物组合物通过静脉内给药时，水是示例性载体。还可以使用生理盐水和葡萄糖及甘油水溶液作为液体载体，特别是用于注射液。适合的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽糖、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。 所述组合物还可以视需要包含少量的湿润剂、乳化剂或pH缓冲剂。口服制剂可以包含标准载体，如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适合的药学上可接受的载体的实例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(1990)中所述。
本发明的组合物可以系统地作用和/或局部地作用。为此目的，它们可以适合的途径给药，例如通过注射、静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内或经皮给药；或通过口服、含服、经鼻、透粘膜、局部、以眼用制剂的形式或通过吸入给药。
对于这些给药途径，可以适合的剂型给药本发明的组合物。
所述剂型可为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气态制剂，具体包括但不限于片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、混悬剂、酏剂、糖浆剂。
本发明所述的药物组合物可以通过本领域熟知的任何方法来制备，例如通过混合、溶解、制粒、糖包衣、碾磨、乳化、冻干等处理来制备。
如本文中所使用的术语“治疗有效量”指被给药后会在一定程度上缓解所治疗病症的一或多种症状的化合物的量。
可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，可给药单次推注，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。
所给药的本发明的化合物的量会取决于所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率、化合物的处置及处方医师的判断。一般而言，有效剂量在每日每kg体重约0.0001至约50mg，例如约0.01至约10mg/kg/日(单次或分次给药)。对70kg的人而言，这会合计为约0.007mg/日至约3500mg/日，例如约0.7mg/日至约700mg/日。在一些情况下，不高于前述范围的下限的剂量水平可以是足够的，而在其它情况下，仍可在不引起任何有害副作用的情况下采用较大剂量，条件是首先将所述较大剂量分成数个较小剂量以在一整天中给药。
本发明的化合物在药物组合物中的含量或用量可以是约0.01mg至约1000mg，适合地是0.1-500mg，优选0.5-300mg，更优选1-150mg，特别优选1-50mg，例如1.5mg、2mg、4mg、10mg和25mg等。
除非另外说明，否则如本文中所使用，术语“治疗(treating)”意指逆转、减轻、抑制这样的术语所应用的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状的进展，或预防这样的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状。
如本文所使用的“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
实施例
以下将结合实施例更详细地解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非用于限定本发明的范围，本领域技术人员可进行一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
以下实施例中使用的检测仪器及条件如下：
(1)X-射线粉末衍射(XRPD)
仪器型号：Bruker D8 advance，配备LynxEye检测器
测试条件：阳极靶材料为铜，光管设定为(40KV 40mA)，样品的2θ扫描角度从3°到40°，扫描步长为0.02°。
(2)差示扫描量热分析(DSC)
仪器型号：TA Discovery DSC 250(TA Instruments,US)
测试条件：升温速率为10℃/min，干燥氮气用作吹扫气体。
(3)热重分析(TGA)
仪器型号：Discovery TGA 55(TA Instruments,US)
测试条件：加热炉内自动称量，升温速率为10℃/min，干燥氮气用作吹扫气体。
(4)偏光显微镜分析(PLM)
仪器型号：Polarizing Microscope ECLIPSE LV100POL(Nikon,JPN)
实施例1：(6-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮(化合物A)的制备(参照PCT/CN2018/093713，将其整体通过援引加入本文)
第一步：
在500mL烧瓶中加入化合物A-1(20g，83.31mmol)和乙醇(200mL)，加入氯化亚砜(19.82g,166.63mmol)，然后60℃反应3小时。薄层色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)检测显示反应完全。将反应液浓缩得到粗品，将粗品在二氯甲烷(500mL)中溶解，将所得溶液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次(每次150mL)。将有机相再用饱和食盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物A-2(21g，棕色固体，产率：94.01％)。MS m/z(ESI)：266.1；268.1[M-H]。
第二步：
将化合物A-2(21g，78.33mmol)和联硼酸频哪醇酯(26.85g，105.74mmol)溶于1,4-二氧六环(200mL)中，加入乙酸钾(23.06g，234.98mmol)及Pd(dppf)Cl 2(3.24g，3.91mmol)，氩气置换3次，置于80℃油浴中反应过夜。LC-MS显示反应完全。将反应液冷却至室温，减压浓缩，将残留物通过柱色谱法分离(石油醚/乙酸乙酯＝100:1到5:1)纯化得到化合物A-3(17.5g，白色固体，产率：70.89％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.92(s,1H),7.92(s,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,1H),7.57(d,J＝8.1Hz,1H),7.22-7.18(m,1H),4.42(q,J＝7.1Hz,2H),1.42(t,J＝7.1Hz,3H),1.37(s,12H).MS m/z(ESI)：316.2[M+H]。
第三步：
将化合物A-3(10.0g，31.8mmol)溶于四氢呋喃(250mL)中，冰浴下加入氢化钠(1.91g，47.8mmol)后反应30分钟，将碘甲烷(13.5g,95.4mmol)缓慢加入到反应液中，室温反应过夜。薄层色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)显示反应完全。将反应液用水(100mL)淬灭，用乙酸乙酯(150mL x 2)萃取，将合并的有机相依次用饱和氯化铵水溶液(200mL x 2)和饱和食盐水(300mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将粗品用柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝15:1)分离纯化得到化合物A-4(6.5g，黄色固体，产率：62.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.91(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.27(s,1H),4.12(s,3H),3.91(s,3H),1.38(s,12H).
第四步：
将化合物Reg-1-16(1.00g，2.70mmol)和A-4(1.33g，4.04mmol)溶于乙醇/水(8:1)的混合液(120mL)中，加入碳酸钠(572mg，5.40mmol)及Pd(PPh 3)Cl 2(189mg，0.27mmol)，氩气置换3次，置于110℃油浴中反应过夜，LC-MS显示反应完全。将反应液冷却至室温，减压浓缩，将残留物用水(30mL)稀释，用6N HCl调节pH至1，有大量固体析出，过滤，将固体用甲醇润洗得到化合物A-5(900mg，黄色固体，粗品)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.54(s,1H),8.77(s,1H),8.38(d,J＝7.2Hz,1H),8.14(s,2H),8.03(d,J＝8.8Hz,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.80-7.69(m,4H),7.33(s,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),4.16(s,3H).
第五步：
将化合物A-5(300mg，0.73mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)，加入HATU(335mg，0.88mmol)和DIEA(377mg，2.92mmol)，室温反应30min后加入化合物A-a(114mg,0.88mmol)，继续室温反应2小时。LC-MS显示反应完全。将反应液减压浓缩，将粗品用高效液相色谱法纯化得到化合物A(185mg，黄色固体，产率：52.1％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.63(s,1H),8.52(s,1H),8.41(d,J＝6.4Hz,1H),8.09(s,2H),8.06(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,2H),7.72(d,J＝8.4Hz,2H),7.13(s,1H),6.86(d,J＝6.4Hz,1H),4.91(s,2H),4.57(s,2H),4.05(s,3H).MS m/z(ESI)：486.2[M+H]。
实施例2：化合物A一水合物的晶型I的制备
将化合物A(2.0g)加入到二氯甲烷(5mL)、DMF(1mL)和水(1mL)的溶液中，室温搅拌18h，过滤，收集固体，将滤饼用水(2mL)淋洗，40℃下真空干燥6h，得到晶体(1.0g，收率48.2％)。经X-射线粉末衍射检测，其XRPD图谱如图1所示；经DSC和TGA分析，其DSC图谱如图2所示，TGA图谱如图3所示；将样品在扫描电子显微镜下观察，晶体形貌如图4所示。
实施例3：化合物A无水物的晶型II的制备
将化合物A(2.0g)加入到乙酸乙酯(10mL)中，55℃搅拌18h，过滤，收集固体，40℃下真空干燥6h，得到晶体(1.4g，收率70.0％)。经X-射线粉末衍射检测，其XRPD图谱如图5所示；经DSC和TGA分析，其DSC图谱如图6所示，TGA图谱如图7所示；将样品在扫描电子显微镜下观察，晶体形貌如图8所示。
实施例4：化合物A一水合物的晶型III的制备
将化合物A(2.0g)加入到甲醇(10mL)和水(5mL)中，55℃搅拌18h，过滤，收集固体，40℃下真空干燥6h，得到晶体(1.2g，收率57.8％)。经X-射线粉末衍射检测，其XRPD图谱如图9所示；经DSC和TGA分析，其DSC图谱如图10所示，TGA图谱如图11所示；将样品在扫描电子显微镜下观察，晶体形貌如图12所示。
实施例5：化合物A一水合物的晶型IV的制备
将化合物A(2.0g)加入到二氯甲烷(10mL)和甲醇(1mL)中，室温搅拌18h，过滤，收集固体，40℃下真空干燥6h，得到晶体(1.3g，收率62.7％)。经X-射线粉末衍射检测，其XRPD图谱如图13所示；经DSC和TGA分析，其DSC图谱如图14所示，TGA图谱如图15所示；将样品在扫描电子显微镜下观察，晶体形貌如图16所示。
实施例6：化合物A一水合物的晶型V的制备
将化合物A(3.7g)加入到反应瓶中，加入丙酮(250ml)，加热反应液至50℃，搅拌10min，固体完全溶解，加入水(26.7ml)，搅拌，溶液澄清，加入浓盐酸(0.641ml)，析出大量固体，控温50℃搅拌18h，过滤，收集固体，50℃真空干燥8h，得到化合物A的盐酸盐(2.7g，收率67.9％)。
将化合物A的盐酸盐(2.0g)加入到无水乙醇(10mL)和水(1mL)中，加入三乙胺(0.4g)，室温搅拌5h，过滤，收集固体，40℃下真空干燥4h，得到晶体(1.4g，收率72.6％)。经X-射线粉末衍射检测，其XRPD图谱如图17所示；经DSC和TGA分析，其DSC图谱如图18所示，TGA图谱如图19所示。
实验例
实验例1：固体稳定性测试
将两份化合物A无水物的晶型II分别置于40℃/75％RH和60℃/90％RH的环境中放置7天，经XRPD检测，样品晶型无变化，稳定性优异。XRPD图谱对比如图20所示。
实验例2：固体热稳定性测试
在差示扫描量热仪中，以10℃/min的加热速率将化合物A一水合物的晶型I的样品分别加热至150℃和210℃，然后进行X-射线粉末衍射检测，原料和热处理后样品的XRPD图谱如图21所示。加热至210℃后的样品晶型转化成化合物A无水物的晶型II，而加热至150℃后样品晶型保持不变。
实施例3：固体吸湿性测试
精密称量100mg的化合物A无水物晶型II和100mg的化合物A一水合物的晶型I。将两份样品在温度25℃±1℃、相对湿度80％±2％条件下放置24小时。然后分别称量两份样品的重量，并计算样品的增重百分比。
根据计算，化合物A无水物晶型II的增重百分比为0.69％，一水合物晶型I的增重百分比为3.62％。实验结果表明与一水合物晶型I相比，化合物A无水物晶型II具有较低的引湿性。
除本文中描述的那些外，根据前述描述，本发明的多种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。

Claims (10)

  1. 化合物A一水合物的晶型I：
    所述晶型I的XRPD图谱包括在约4.5±0.2°、12.2±0.2°、20.1±0.2°、25.3±0.2°和25.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；优选包括在约4.5±0.2°、9.1±0.2°、10.3±0.2°、12.2±0.2°、16.1±0.2°、18.2±0.2°、20.1±0.2°、25.3±0.2°和25.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；最优选包括在约4.5±0.2°、9.1±0.2°、10.3±0.2°、12.2±0.2°、12.5±0.2°、16.1±0.2°、16.9±0.2°、17.4±0.2°、18.2±0.2°、18.9±0.2°、20.1±0.2°、20.5±0.2°、21.2±0.2°、22.6±0.2°、24.3±0.2°、24.8±0.2°、25.3±0.2°、25.5±0.2°、26.8±0.2°和27.2±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
  2. 化合物A无水物的晶型II：
    所述晶型II的XRPD图谱包括在约8.6±0.2°、12.5±0.2°和21.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；优选包括在约6.7±0.2°、8.6±0.2°、12.5±0.2°、13.5±0.2°、13.8±0.2°、21.9±0.2°和24.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；最优选包括在约6.2±0.2°、6.7±0.2°、8.6±0.2°、11.1±0.2°、12.5±0.2°、13.5±0.2°、13.8±0.2°、15.2±0.2°、17.3±0.2°、18.2±0.2°、18.6±0.2°、21.0±0.2°、21.9±0.2°、24.3±0.2°、24.9±0.2°和25.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
  3. 化合物A一水合物的晶型III：
    所述晶型III的XRPD图谱包括在约8.7±0.2°、12.3±0.2°和13.8±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；优选包括在约8.7±0.2°、12.3±0.2°、13.8±0.2°、18.5±0.2°、19.5±0.2°、21.0±0.2°和24.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；最优选包括在约8.7±0.2°、12.3±0.2°、13.8±0.2°、16.9±0.2°、17.6±0.2°、18.2±0.2°、18.5±0.2°、19.5±0.2°、19.9±0.2°、21.0±0.2°、22.5±0.2°、24.5±0.2°和24.7±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
  4. 化合物A一水合物的晶型IV：
    所述晶型IV的XRPD图谱包括在约8.9±0.2°、11.4±0.2°和17.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；优选地，所述晶型IV的XRPD图谱包括在约8.3±0.2°、8.9±0.2°、9.2±0.2°、11.4±0.2°、15.3±0.2°、17.9±0.2°、22.0±0.2°和26.9±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；最优选地，所述晶型IV的XRPD图谱包括在约5.7±0.2°、8.3±0.2°、8.9±0.2°、9.2±0.2°、10.2±0.2°、11.4±0.2°、12.4±0.2°、15.3±0.2°、16.4±0.2°、 16.8±0.2°、17.2±0.2°、17.4±0.2°、17.9±0.2°、18.5±0.2°、19.6±0.2°、20.3±0.2°、20.8±0.2°、21.3±0.2°、22.0±0.2°、22.4±0.2°、23.0±0.2°、23.8±0.2°、24.8±0.2°、26.1±0.2°、26.9±0.2°、27.8±0.2°和28.7±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
  5. 化合物A一水合物的晶型V：
    所述晶型V的XRPD图谱包括在约8.7±0.2°、12.2±0.2°和24.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；优选包括在约8.7±0.2°、12.2±0.2°、13.7±0.2°、16.9±0.2°、20.0±0.2°、20.9±0.2°和24.5±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰；最优选包括在约8.7±0.2°、12.2±0.2°、12.8±0.2°、13.7±0.2°、15.5±0.2°、16.3±0.2°、16.9±0.2°、17.5±0.2°、20.0±0.2°、20.9±0.2°、22.2±0.2°、22.5±0.2°、24.5±0.2°、25.2±0.2°、29.4±0.2°和30.3±0.2°的衍射角(2θ)处的特征峰。
  6. 药物组合物，其包含权利要求1的晶型I、权利要求2的晶型II、权利要求3的晶型III、权利要求4的晶型IV和权利要求5的晶型V中的任意一种或多种，以及一种或多种药学上可接受的载体。
  7. 权利要求1的晶型I、权利要求2的晶型II、权利要求3的晶型III、权利要求4的晶型IV和权利要求5的晶型V中的任意一种或多种在制备用作Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂，优选选择性ROCK2抑制剂的药物中的用途。
  8. 权利要求7的用途，其中所述药物用于预防或治疗Rho相关蛋白激酶(ROCK)介导的疾病，其包括自身免疫性疾病(其包括类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮(SLE；狼疮)、银屑病、克罗恩病、特应性皮炎、湿疹或移植物抗宿主病(GVHD))；心血管病症(其包括高血压、动脉粥样硬化、再狭窄、心脏肥大、脑缺血、脑血管痉挛或勃起功能障碍)；炎症(其包括哮喘、心血管炎症、溃疡性结肠炎或肾脏炎症)；中枢神经系统病症(其包括神经元变性或脊髓损伤；所述中枢神经系统病症优选为亨延顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)或多发性硬化症)；动脉血栓性病症(其包括血小板聚集或白细胞聚集)；纤维化病症(其包括肝纤维化、肺纤维化或肾纤维化)；瘤性疾病(其包括淋巴瘤、癌(例如鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食道癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑色素瘤或头颈部癌症)、白血病、星形细胞瘤、软组织肉瘤、肉瘤或母细胞瘤)；代谢综合征；胰岛素抗性；高胰岛素血症；2型糖尿病；葡萄糖耐受不良；骨质疏松症；眼部病症(其包括高眼压、年龄相关性黄斑变性(AMD)、脉络膜新生血管形成(CNV)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、虹膜新生血管形成、葡萄膜炎、青光眼(其包括原发性开角型青光眼、急性闭角型青光眼、色素性青光眼、先天性青光眼、正常张力青光眼、继发青光眼或新生血管性青光眼)或早产儿视网膜病变(ROP))。
  9. 权利要求7的用途，其中所述药物用于预防或治疗Rho相关蛋白激酶(ROCK)介导的疾病，其包括狼疮肾炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎(RA)、血管瘤、血管纤维瘤、肺纤维化、银屑病、角膜移植排斥、胰岛素依赖型糖尿病、多发性硬化症、重症肌无力、克罗恩病、自身免疫性肾炎、原发性胆汁性肝硬化、急性胰腺炎、异体排异、过敏性炎症、接触性皮炎、迟发型超敏反应、炎症性肠病、感染性休克、骨质疏松、骨关节炎、神经元炎症、Osler-Weber综合征、再狭窄、真菌感染、寄生虫感染和病毒感染。
  10. 制备权利要求2的化合物A无水物的晶型II的方法，其包括将化合物A在具有2-10个碳原子的酯类溶剂中搅拌，过滤，并将所得固体真空干燥后得到晶体。
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