CN118105402A - 一种针对早产儿视网膜病变防治的干扰序列及其应用 - Google Patents
一种针对早产儿视网膜病变防治的干扰序列及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118105402A CN118105402A CN202410247981.3A CN202410247981A CN118105402A CN 118105402 A CN118105402 A CN 118105402A CN 202410247981 A CN202410247981 A CN 202410247981A CN 118105402 A CN118105402 A CN 118105402A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nucleotide sequence
- seq
- dancr
- nucleic acid
- acid molecule
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 title abstract description 18
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 title abstract description 18
- 230000002028 premature Effects 0.000 title abstract description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 60
- 102100034613 Annexin A2 Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 101000924474 Homo sapiens Annexin A2 Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 19
- 101000912352 Homo sapiens Putative uncharacterized protein DANCR Proteins 0.000 claims abstract 12
- 102100026242 Putative uncharacterized protein DANCR Human genes 0.000 claims abstract 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 80
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 80
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 48
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 48
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 48
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 24
- 206010038933 Retinopathy of prematurity Diseases 0.000 claims description 20
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 claims description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 17
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 14
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 claims description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 238000010453 CRISPR/Cas method Methods 0.000 claims description 8
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 claims description 8
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims description 8
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 claims description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 5
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims description 4
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 4
- 101150070863 ANXA2 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 25
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 6
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 5
- 208000034038 Pathologic Neovascularization Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 48
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 23
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 20
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 18
- 108091046869 Telomeric non-coding RNA Proteins 0.000 description 15
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 14
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 14
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 13
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 13
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 11
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 11
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108091007767 MALAT1 Proteins 0.000 description 7
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 6
- 101150055440 DANCR gene Proteins 0.000 description 5
- 108091027881 NEAT1 Proteins 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 4
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 4
- 108020005198 Long Noncoding RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000010595 endothelial cell migration Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 4
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 3
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 3
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 3
- 208000007135 Retinal Neovascularization Diseases 0.000 description 3
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 3
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 238000013355 OIR mouse model Methods 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 206010014801 endophthalmitis Diseases 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- LGZKGOGODCLQHG-CYBMUJFWSA-N 5-[(2r)-2-hydroxy-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)ethyl]-2-methoxyphenol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1C[C@@H](O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 LGZKGOGODCLQHG-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 1
- CDEURGJCGCHYFH-DJLDLDEBSA-N 5-ethynyl-2'-deoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C#C)=C1 CDEURGJCGCHYFH-DJLDLDEBSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 1
- 102000004149 Annexin A2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000668 Annexin A2 Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- PANKHBYNKQNAHN-JTBLXSOISA-N Crocetin Natural products OC(=O)C(\C)=C/C=C/C(/C)=C\C=C\C=C(\C)/C=C/C=C(/C)C(O)=O PANKHBYNKQNAHN-JTBLXSOISA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100030801 Elongation factor 1-alpha 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010041308 Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 101000920078 Homo sapiens Elongation factor 1-alpha 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000642523 Homo sapiens Transcription factor SOX-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091028684 Mir-145 Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 1
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 206010038848 Retinal detachment Diseases 0.000 description 1
- 208000004350 Strabismus Diseases 0.000 description 1
- 238000012288 TUNEL assay Methods 0.000 description 1
- 102100036730 Transcription factor SOX-7 Human genes 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000008790 VE-cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229960002833 aflibercept Drugs 0.000 description 1
- 108010081667 aflibercept Proteins 0.000 description 1
- 230000008848 allosteric regulation Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006909 anti-apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002137 anti-vascular effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 108010018828 cadherin 5 Proteins 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- PANKHBYNKQNAHN-JUMCEFIXSA-N carotenoid dicarboxylic acid Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C(=O)O)C=CC=C(/C)C(=O)O PANKHBYNKQNAHN-JUMCEFIXSA-N 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 238000012650 click reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011490 co-immunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- LGZKGOGODCLQHG-UHFFFAOYSA-N combretastatin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1CC(O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 LGZKGOGODCLQHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- PANKHBYNKQNAHN-MQQNZMFNSA-N crocetin Chemical compound OC(=O)C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(\C)/C=C/C=C(\C)C(O)=O PANKHBYNKQNAHN-MQQNZMFNSA-N 0.000 description 1
- 238000000315 cryotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003208 gene overexpression Methods 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002647 laser therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 208000018773 low birth weight Diseases 0.000 description 1
- 231100000533 low birth weight Toxicity 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 108091091360 miR-125b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091084619 miR-125b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063409 miR-125b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091050014 miR-125b-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091088856 miR-345 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091051052 miR-345-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091049311 miR-345-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 201000003142 neovascular glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001023 pro-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 229960003876 ranibizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000004264 retinal detachment Effects 0.000 description 1
- 208000032253 retinal ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000001210 retinal vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000006459 vascular development Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种针对早产儿视网膜病变防治的干扰序列及其应用。本发明提供了DANCR抑制剂的应用，实验表明DANCR通过调节ANXA2影响眼部病理性新生血管生成，可通过有效减少DANCR和/或ANXA2的表达，阻止病理状态下眼部新生血管的生成，用于预防和/或治疗早产儿视网膜病变，为早产儿视网膜病变提供了新的治疗靶点。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种针对早产儿视网膜病变防治的干扰序列及其应用。
背景技术
早产儿视网膜病变(ROP)是一种发生在早产儿和低出生体重儿的眼底疾病，其主要特征是视网膜血管异常增殖。如果不及时治疗，该病可能导致严重并发症，如视网膜脱离、新生血管性青光眼和斜视等，最终可能导致失明。ROP是全球儿童致盲的主要原因之一。随着围产医学和新生儿监护室的不断进步和普及，早产儿的存活率也在不断提高，这导致了ROP患儿数量的增加。国内报道的ROP检出率约为6.6％至24.6％。对于大多数儿童来说，早产儿视网膜病变会以较轻的形式发生，并会自然痊愈。然而，如果疾病进展到严重阶段，将会导致一只或双眼失明。如果未能及时发现和治疗，将会造成不可逆的眼底损伤，导致患儿失去视力，并对他们的日后生长发育产生严重影响。
早产儿视网膜病变发病机制非常复杂，目前研究认为可能与早产、低出生体质量及吸氧引发的相关细胞及细胞外基质多种因素改变有关。近年该病的治疗手段有了许多进展，如冷冻治疗、激光治疗、玻璃体视网膜手术和抗血管内皮生长因子(Vascularendothelial growth factor，VEGF)药物的应用，但疗效仍不理想，存在着病情容易反复、长期疗效差、反复多次给药、治疗不应答或快速抗药反应和不良反应等问题。这促使研究者们不断对其他分子机制的探索和新的药物靶点的识别。
大量研究表明，膜联蛋白A2(Annexin A2，ANXA2)复合物作为纤溶酶原和组织纤溶酶原激活物的内皮细胞表面共受体，可加速纤溶酶的生成，促进纤维蛋白溶解。纤溶酶随后可激活涉及多种基质金属蛋白酶的下游蛋白水解级联反应。因此，除了维持血管通畅外，ANXA2复合物还可以通过其促纤维蛋白溶解活性促进血管生成。
长非编码RNA(long non-coding RNA，LncRNA)是由基因组中非编码序列转录生成的长度大于200nt且不具有翻译成蛋白质能力的转录本，在疾病病理机制中起着重要的作用。大量研究表明LncRNA通过改变染色质结构、转录后调控、蛋白复合物重组、细胞间信号转导和蛋白质的变构调节等方式在维持正常的生理功能和发病机制中发挥着重要作用。随着近年来RNA基因组学的快速发展，发现一些LncRNA与新生血管性疾病的发病机制密切相关，且发现一些LncRNA与部分眼新生血管性疾病密切相关，如已有许多研究证明，通过调节LncRNA NEAT1可抑制高葡萄糖诱导的糖尿病视网膜病变(The mechanism by whichcrocetin regulates the lncRNA NEAT1/miR-125b-5p/SOX7 molecular axis toinhibit high glucose-induced diabetic retinopathy.Exp Eye Res.2022Sep；222:109157.)；LncRNA MALAT1影响视网膜新生血管生成(Effect and mechanism of the longnoncoding RNA MALAT1 on retinal neovascularization in retinopathy ofprematurity.Life Sci.2020Nov 1；260:118299.)(LncRNA-MALAT1 promotesneovascularization in diabetic retinopathy through regulating miR-125b/VE-cadherin axis.Biosci Rep.2019May 15；39(5):BSR20181469.)。同时，分化拮抗非蛋白编码RNA(differentiation antagonizing non-protein coding RNA，DANCR)是近年发现的一类LncRNA，在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。近期有研究发现DANCR可促进卵巢癌的肿瘤生长和血管生成(LncRNA DANCR promotes tumor growth and angiogenesis inovarian cancer through direct targeting of miR-145.Mol Carcinog.2019Dec；58(12):2286-2296.)。DANCR同样可以促进胆管癌细胞增殖、迁移、浸润和血管生成(LncRNADANCR affected cell growth,EMT and angiogenesis by sponging miR-345-5pthrough modulating Twist1 in cholangiocarcinoma.Eur Rev Med PharmacolSci.2020Mar；24(5):2321-2334.)。并且有研究发现，LINC00941通过结合ANXA2并增强其稳定性，从而激活FAK/AKT信号通路，促进胰腺癌细胞的增殖和转移。这些研究结果预示着可能通过抑制DANCR来抵抗ANXA2的促新生血管作用来作为一种抗新生血管治疗方法，而关于DANCR在眼部新生血管性疾病中的功能应用还尚未见报道。
目前高频地眼内注射抗VEGF药物是治疗早产儿视网膜病变的一种常见的治疗方法，如注射VEGF-A单抗或VEGFR竞争性结合蛋白，以达到抑制VEGF的功能的目的。常用的抗VEGF药物有雷珠单抗、康柏西普和阿柏西普等，从本质上来说仍是对症治疗，需要多次注射，两次注射间隔从一个月到数月，病人需要反复玻璃体腔注药治疗，无法解决视网膜缺血缺氧的根本问题。同时部分患者对传统抗VEGF治疗不应答或快速抗药反应，且抗VEGF治疗有一定比例的不良反应，包括眼内炎和闭塞性血管炎等。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了DANCR在制备防治早产儿视网膜病变药物中的应用，本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供DANCR和/或ANXA2作为靶点在制备预防和/或治疗早产儿视网膜病变的药物中的应用。
本发明旨在克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供制备以DANCR和/或ANXA2作为靶点预防和/或治疗早产儿视网膜病变的药物的应用，提供一种更稳定、长效且副作用小的早产儿视网膜病变的治疗方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了DANCR抑制剂在如下任一项中的应用：
(I)、抑制新生血管性眼病；
(II)、制备抑制新生血管性眼病的药物；
所述新生血管性眼病包括早产儿视网膜病变。
在本发明的一些具体实施方案中，上述应用的所述DANCR抑制剂包括敲除或敲减DANCR的基因编辑试剂、沉默或下调DANCR表达的RNA干扰试剂或靶向DANCR的小分子抑制剂中的一种或多种；
所述基因编辑试剂包括靶向DANCR基因的CRISPR/Cas试剂，所述CRISPR/Cas试剂包括sgRNA；
所述RNA干扰试剂包括siRNA或shRNA。
在本发明的一些具体实施方案中，上述应用的所述DANCR抑制剂包括shDANCR和/或siDANCR；
所述shDANCR具有：
(1)、如SEQ ID NO:1、2或3所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:1、2或3互补的核苷酸序列；或
(2)、如(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(1)的相同或相似；或
(3)、与如(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
所述siDANCR具有：
(4)、如SEQ ID NO:6、7或8所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:6、7或8互补的核苷酸序列；或
(5)、如(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(4)的相同或相似；或
(6)、与如(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
所述多个为2个至5个。
本发明还提供了ANXA2抑制剂和上述应用中所述的DANCR抑制剂在如下任一项中的应用：
(I)、抑制新生血管性眼病；
(II)、制备抑制新生血管性眼病的药物；
所述新生血管性眼病包括早产儿视网膜病变。
在本发明的一些具体实施方案中，上述应用的所述ANXA2抑制剂包括敲除或敲减ANXA2的基因编辑试剂、沉默或下调ANXA2表达的RNA干扰试剂或靶向ANXA2的小分子抑制剂中的一种或多种；
所述基因编辑试剂包括靶向ANXA2基因的CRISPR/Cas试剂，所述CRISPR/Cas试剂包括sgRNA；
所述RNA干扰试剂包括siRNA或shRNA。
在本发明的一些具体实施方案中，上述应用的所述ANXA2抑制剂包括siANXA2；
所述siANXA2具有：
(7)、如SEQ ID NO:4或5所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:4或5互补的核苷酸序列；或
(8)、如(7)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(7)的相同或相似；或
(9)、与如(7)或(8)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
所述多个为2个至5个。
本发明还提供了核酸分子，其具有：
(10)、如SEQ ID NO:1～8任一所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:1～8任一者互补的核苷酸序列；或
(11)、如(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(10)的相同或相似；或
(12)、与如(10)或(11)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
所述多个为2个至5个。
本发明还提供了核酸分子组合，包括核酸分子组合1和/或核酸分子组合2；
核酸分子组合1包括核酸分子1、核酸分子2、核酸分子3、核酸分子6、核酸分子7或核酸分子8中的两种或以上；
核酸分子组合2核酸分子4和/或核酸分子5；
所述核酸分子1具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:1互补的核苷酸序列；
所述核酸分子2具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:2互补的核苷酸序列；
所述核酸分子3具有如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:3互补的核苷酸序列；
所述核酸分子4具有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:4互补的核苷酸序列；
所述核酸分子5具有如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:5互补的核苷酸序列；
所述核酸分子6具有如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:6互补的核苷酸序列；
所述核酸分子7具有如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:7互补的核苷酸序列；
所述核酸分子8具有如SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:8互补的核苷酸序列。
本发明还提供了药物，包括上述核酸分子或上述核酸分子组合，以及可接受的辅料或助剂。
本发明还提供了抑制新生血管性眼病的方法，所述新生血管性眼病包括早产儿视网膜病变，包括：
(A)、沉默、下调、敲减或敲除DANCR；
(B)、沉默、下调、敲减或敲除DANCR和ANXA2；
(C)、施用上述药物；
所述药物的制剂方式可以是任何适于眼部局部施用的剂型，包括但不限于滴眼剂、注射剂、气雾剂或脂质体中的一种或多种。
本发明有如下效果：
1.本发明研究发现，相对于正常小鼠视网膜而言，在高氧诱导视网膜病变小鼠的病理性新生血管组织中可检测到异常的DANCR高表达；同样的，相对于常氧条件下培养的视网膜微血管内皮细胞，低氧条件下的视网膜微血管内皮细胞的DANCR表达量升高。
2.在体外，抑制DANCR可减少视网膜血管内皮细胞细胞的活性、增殖与成管，且相比如其他lncRNA(如MALAT1、NEAT1)，DANCR的促血管形成的能力更强。沉默ANXA2可抵消DANCR对内皮细胞迁移和成管功能的促进作用，敲除小鼠的DANCR基因减轻小鼠视网膜新生血管的形成。结果表明，不同于其他LncRNA的作用机制，DANCR通过调节ANXA2影响眼部病理性新生血管生成，可通过抑制DANCR和/或ANXA2的表达(包括但不限于敲除、沉默、下调等方式)，进而阻止眼部新生血管的生成，从而预防和/或治疗早产儿视网膜病变。
眼内注射抗VEGF药物虽然可以抑制新生血管的形成，但需要反复多次给药。同时部分患者对传统抗VEGF治疗不应答或快速抗药反应，且抗VEGF治疗有一定比例的不良反应，包括眼内炎和闭塞性血管炎等，而本发明公开了DANCR、ANXA2在制备防治早产儿视网膜病变的药物中的应用，本发明研究显示，DANCR通过调节ANXA2影响眼部病理性新生血管生成，可通过有效减少DANCR和/或ANXA2的表达，阻止病理状态下眼部新生血管的生成，用于预防和/或治疗早产儿视网膜病变，为早产儿视网膜病变提供了新的治疗靶点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示OIR小鼠模型建立示意图；
图2示OIR小鼠视网膜DANCR表达差异实验结果；
图3示内皮细胞DANCR表达差异实验结果图；
图4示过表达载体PCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-Puro(8132bp)；
图5示内皮细胞过表达DANCR后其DANCR表达水平、细胞活性、细胞抗凋亡能力实验结果图；
图6示内皮细胞过表达DANCR后其迁移能力和DANCR与MALAT1的成管能力实验结果图；
图7示shDANCR-1、shDANCR-1、shDANCR-1敲低DANCR的结果图；
图8示内皮细胞沉默DANCR后其DANCR表达水平和细胞活性实验结果图；
图9示内皮细胞沉默DANCR、NEAT1后其增殖能力和成管能力实验结果图；
图10示siANXA2-1、siANXA2-2敲低ANXA2的结果图；
图11示RNA pull down、RIP和内皮细胞沉默ANXA2后其ANXA2基因和蛋白表达水平实验结果图；
图12A示内皮细胞迁移能力和成管能力实验结果图；
图12B示内皮细胞迁移能力和成管能力实验结果图；
图13示siDANCR-1、siDANCR-2、siDANCR-3敲低DANCR的结果图；
图14示OIR小鼠沉默DANCR后视网膜DANCR基因表达和新生血管情况实验结果图。
具体实施方式
本发明公开了DANCR在制备防治早产儿视网膜病变药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
应该理解，表述“……中的一种或多种”单独地包括每个在所述表述后叙述的物体以及所述叙述的物体中的两者或更多者的各种不同组合，除非从上下文和用法中另有理解。与三个或更多个叙述的物体相结合的表述“和/或”应该被理解为具有相同的含义，除非从上下文另有理解。
术语“包括”、“具有”或“含有”，包括其语法同义语的使用，通常应该被理解为开放性和非限制性的，例如不排除其他未叙述的要素或步骤，除非另有具体陈述或从上下文另有理解。
应该理解，只要本发明仍可操作，步骤的顺序或执行某些行动的顺序并不重要。此外，两个或更多个步骤或行动可以同时进行。
本文中的任何和所有实例或示例性语言如“例如”或“包括”的使用，仅仅打算更好地说明本发明，并且除非提出权利要求，否则不对本发明的范围构成限制。本说明书中的任何语言都不应解释为指示任何未要求保护的要素对于本发明的实践是必不可少的。
此外，用以界定本发明的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。因此，除非另有明确的说明，应当理解本公开所用的所有范围、数量、数值与百分比均经过“约”的修饰。在此处，“约”通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。
如无特殊说明，本发明涉及的原料、试剂、耗材以及仪器皆为普通市售品，均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：不同视网膜病变病理样本中DANCR表达量检测
1、高氧诱导视网膜病变小鼠模型和体外视网膜微血管内皮细胞缺氧模型的构建
为探究DANCR与新生血管的作用，选择了氧诱导视网膜病变(OIR)模型，该模型是最常用的早产儿视网膜病变模型，模拟了早产儿视网膜病变的病理过程。模型构建示意图见图1，具体流程如下：a.记录小鼠(C57BL/6j，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司)出生日期，待小鼠饲养到第7天，称量体重，去除比较轻的乳鼠后，将余下的乳鼠和母鼠一起放置在含有75％氧气的动物氧仓内，准备另外一只哺乳期的母鼠交换用；b.监测氧气浓度，维持氧气浓度75±2％，每天交换母鼠，给予正常的食物和水；c.将乳鼠持续饲养放在75％氧仓5天，第12天时将母鼠和乳鼠一起放回正常氧环境中饲养。体外视网膜微血管内皮细胞缺氧模型则是将细胞放入1％氧浓度下培养24小时，对照组则是将细胞放在正常氧浓度下培养24小时。
2、实验方法
将小鼠随机分为正常氧组和OIR组，在出生后14天，取小鼠视网膜组织，使用RNA提取试剂盒(AG21023，艾科瑞，中国)提取RNA，逆转录后通过PCR实验观察DANCR表达情况；将内皮细胞分为正常氧组和低氧组，培养24小时后提取RNA，通过PCR检测观察DANCR表达情况。
3、实验结果
实验结果如图2所示(数据如表1所示)，与正常氧组小鼠相比，OIR组小鼠视网膜DANCR表达量明显升高；同时如图3所示(数据如表2所示)，与正常氧组内皮细胞相比，低氧组细胞DANCR基因表达量也明显升高。表明DANCR在新生血管中高表达，可能存在促进新生血管生长的作用。
表1：小鼠视网膜DANCR表达量(差异倍数)
| DANCR表达量(样本1) | DANCR表达量(样本2) | DANCR表达量(样本3) | |
| 常氧组 | 0.71 | 0.75 | 1.54 |
| OIR组 | 2.45 | 3.15 | 2.45 |
表2：内皮细胞DANCR表达量(差异倍数)
| DANCR表达量(样本1) | DANCR表达量(样本2) | DANCR表达量(样本3) | |
| 常氧组 | 1.04 | 1.00 | 0.97 |
| 低氧组 | 1.40 | 1.28 | 1.26 |
实施例2：过表达DANCR质粒构建及其对血管内皮细胞的影响及DANCR与其他lncRNA效果的区别
1、实验分组及过表达质粒构建
实验分为空载对照组(oeNC)、DANCR过表达组(oeDANCR)和lncRNA MALAT1过表达组(oeMALAT1)三组。质粒构建：将DANCR(RefSeq序列号NR_145129.1)或MALAT1(RefSeq序列号NR_002819.4)序列亚克隆到带有CMV和EF1A启动子和红色荧光标签的质粒PCDH载体(载体图谱如图4所示)上，获得oeDANCR质粒、oeMALAT1质粒，并通过测序进行验证；对照组采用空载质粒(oeNC)。使用Endofree Plasmid Maxi kit II(DP118，天根，中国)扩增质粒DNA，使用NanoDrop 2000(Thermo，美国)测定质粒浓度。利用lipo3000(Thermo，美国)将目的质粒和慢病毒辅助质粒(pMD2.G和psPAX2)共转染HEK-293T细胞中，培养48小时后收集含有病毒颗粒的上清培养液，分装后-80℃保存。采用qPCR检测基因过表达的影响。
2、实验方法
(1)细胞培养：复苏人视网膜微血管内皮细胞(EC)，稳定培养传代1-2代，转染前一天接种细胞到6孔板，控制在贴壁后细胞密度约为30％，每孔加入2ml内皮细胞完全培养基(ECM，1001，sciencell，美国)。转染当天吸出完全培养基，每孔加入2mL新鲜的OPTI-MEM转染基础液(Thermo，美国)，用基础液稀释oeNC、oeDANCR和oeMALAT1质粒及Lipo3000分别加入到各组细胞组中，每孔加入质粒为2.5μg。在37℃的细胞培养箱中培养细胞8小时后更换内皮细胞完全培养基并培养细胞48小时后，提取细胞RNA进行逆转录，并通过PCR检测过表达效果。
(2)细胞活性实验：分别将oeNC和oeDANCR转染后的内皮细胞提前一天种到96孔细胞培养板中，24小时后除去原培养基，PBS洗1次。避光，向每个孔加100μl 10％CCK8溶液(MCE，美国)，加液时注意不要产生气泡；将培养板放回培养箱，继续孵育4小时；酶标仪测定450nm波长处的吸光值(OD)。
(3)细胞凋亡实验：将oeNC和oeDANCR转染后的内皮细胞常规消化离心后去上清，用无血清ECM培养液重悬后接种到96孔培养板中。在培养箱培养24小时后弃去原培养基，用4％多聚甲醛固定15分钟，去掉PFA，PBS洗1次，加有0.3％Triton X-100的PBS，常温下通透10分钟；弃通透液，用PBS洗2次，每个孔加50μl TUNEL检测液(K1133，Apexbio，美国)，37℃避光反应60分钟；弃检测液，PBS洗3次；加入DAPI稀释液，常温下避光孵10min，PBS洗3min，重复3次；每孔滴加少许抗荧光淬灭剂，尽快用荧光显微镜观察、拍照。
(4)细胞迁移实验：将oeNC和oeDANCR转染后的内皮细胞常规消化离心后去上清，用无血清ECM培养液重悬后接种到Transwell培养板(康宁，美国)上室中，下室加入含血清的ECM完全培养基培养基，注意避免上下室产生气泡。培养板在培养箱培养24小时后弃去原培养基，用4％多聚甲醛固定10分钟，蒸馏水洗涤2次后每孔加结晶紫染液索莱宝，中国)常温下孵20分钟。染色结束后用棉签去除小室上层细胞，用普通显微镜进行观察拍照和统计分析。
(5)细胞成管实验：将基质胶Matrigel(356231，康宁，美国)和移液器枪头放于4℃预冷。再96孔板中每孔加入50微升的基质胶平铺，避免产生气泡，随后将96孔板放入37℃培养箱中孵育30分钟，让基质胶凝固。分别将oeNC、oeDANCR和oeMALAT1转染后的内皮细胞进行种板，每孔细胞量为10000个，并加入新的培养基。6小时后在显微镜下观察拍照，记录细胞的成管形态。
3、实验结果
实验结果如图5、6所示，与对照组相比，DANCR过表达组(oeDANCR)明显上调DANCR基因表达(图5中的A，数据如表3所示)，在EC中过表达DANCR可增强细胞的细胞活性(图5中的B，数据如表4所示)、抗凋亡能力(图5中的C，数据如表5所示)、细胞密度(图5中的C，数据如表6所示)、迁移能力(图6中的A)与成管能力(图6中的B)，且DANCR促血管生成能力比MALAT1更强。
表3：DANCR表达量(差异倍数)
| 分组 | DANCR表达量(样本1) | DANCR表达量(样本2) | DANCR表达量(样本3) |
| oeNC | 0.96 | 1.03 | 1.01 |
| oeDANCR | 18965.78 | 18319.74 | 17532.91 |
表4：细胞活性
| 分组 | OD 450nm(样本1) | OD 450nm(样本2) | OD 450nm(样本3) | OD 450nm(样本4) |
| oeNC | 0.349 | 0.336 | 0.324 | 0.351 |
| oeDANCR | 0.861 | 0.870 | 0.788 | 0.703 |
表5：Tunel阳性细胞比例(％)
| 分组 | Tunel阳性比(样本1) | Tunel阳性比(样本2) | Tunel阳性比(样本3) |
| oeNC | 5.70 | 7.01 | 6.85 |
| oeDANCR | 1.75 | 2.82 | 1.99 |
表6：细胞密度(cells/mm2)
| 分组 | 细胞密度(样本1) | 细胞密度(样本2) | 细胞密度(样本3) |
| oeNC | 412.26 | 513.25 | 444.08 |
| oeDANCR | 630.84 | 687.57 | 625.31 |
表7：迁移细胞数
| 分组 | 迁移细胞数(样本1) | 迁移细胞数(样本2) | 迁移细胞数(样本3) |
| oeNC | 98.25 | 86.25 | 87.5 |
| oeDANCR | 134.75 | 132.5 | 139.5 |
表8：新生血管分指数(％)
| 分组 | 新生血管分支数(样本1) | 新生血管分支数(样本2) | 新生血管分支数(样本3) |
| oeNC | 0.97 | 0.95 | 1.08 |
| oeMALAT1 | 1.08 | 1.16 | 0.79 |
| oeDANCR | 1.32 | 2.20 | 1.98 |
实施例3：沉默DANCR及其对血管内皮细胞的影响及DANCR与其他lncRNA效果的区别
1、实验分组及沉默细胞构建
实验分为对照序列组(shNC)、LncRNA NEAT1敲减组(shNEAT1)与DANCR敲减组(shDANCR)两组。
质粒构建：
沉默靶标序列包括shDANCR-1序列：GCGCCACTATGTAGCGGGTTT(SEQ ID NO:1)；shDANCR-2序列：GGCCTCTTTGTCAGCTGGAGT(SEQ ID NO:2)和shDANCR-3序列：GCTCCAGGAGTTCGTCTCTTA(SEQ ID NO:3)，三者皆能有效敲低DANCR的表达，但实验表明shDANCR-3效率最高(如图7和表9所示)，因此选用shDANCR-3进行后续实验。
表9
| 分组 | DANCR表达量(样本1) | DANCR表达量(样本2) | DANCR表达量(样本3) |
| shNC | 0.99 | 1.01 | 1.01 |
| shDANCR-1 | 0.76 | 0.78 | 0.78 |
| shDANCR-2 | 0.91 | 0.85 | 0.87 |
| shDANCR-3 | 0.65 | 0.62 | 0.61 |
采用GV298载体构建沉默质粒。shNEAT1质粒为上海吉凯基因医学科技股份有限公司购买。将lipo3000转染试剂、含目的序列的沉默质粒、pMD2.G和psPAX2慢病毒包装质粒共转染HEK-293T细胞以获得病毒液。
2、实验方法
(1)细胞培养：复苏人视网膜微血管内皮细胞(EC)，稳定培养传代1-2代，转染前一天将对数生长期细胞消化、重悬后，接种在6cm培养皿中培养过夜。第二天，更换新鲜培养基，同时加入含有目的基因的病毒液以及5μg/ml聚凝胺，混合均匀后，置于培养箱中继续培养；6小时后换液，然后继续培养48小时，之后用2μg/ml嘌呤霉素进行细胞筛选，筛选3天后的细胞即为shNC、shNEAT1和shDANCR细胞。
(2)细胞增殖实验：分别将shNC和shDANCR转染后的内皮细胞提前一天种到细胞培养板种，24小时后将Edu(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine，C0071S，碧云天，中国)添加到培养基中，使其浓度为10微摩尔/升，将细胞在37℃，5％二氧化碳的细胞培养箱中培养2小时，然后使用4％的多聚甲醛溶液室温固定15分钟。加入试剂盒中的Click反应液室温避光孵育30分钟行染色处理，结束后用共聚焦显微镜(LSM880，蔡司，德国)观察拍照和图像分析，计算细胞的增殖率。
(3)成管实验同实施例2。
3、实验结果
实验结果如图8、9所示，与对照组相比，DANCR敲减组中DANCR基因表达成功下调(图8中的A，数据如表10所示)，在内皮细胞中敲减DANCR可降低细胞的细胞活性(图8中的B，数据如表11所示)、增殖能力(图9中的A，数据如表12所示)与成管能力(图9中的B，数据如表13所示)，且敲减DANCR比敲减LncRNA NEAT1更能抑制新生血管的形成(图9中的B，数据如表13所示)。
表10：DANCR表达量
| 分组 | DANCR表达量(样本1) | DANCR表达量(样本2) | DANCR表达量(样本3) |
| shNC | 1.05 | 0.97 | 0.98 |
| shDANCR | 0.341 | 0.39 | 0.32 |
表11：细胞活性
| 分组 | OD 450nm(样本1) | OD 450nm(样本2) | OD 450nm(样本3) | OD 450nm(样本4) |
| shNC | 0.65 | 0.68 | 0.66 | 0.66 |
| shDANCR | 0.44 | 0.51 | 0.51 | 0.47 |
表12：增殖能力
| 分组 | Edu阳性百分比(样本1) | Edu阳性百分比(样本1) | Edu阳性百分比(样本1) |
| shNC | 67.77 | 58.34 | 51.33 |
| shDANCR | 41.14 | 43.17 | 38.42 |
表13：成管能力
| 分组 | 新生血管分支数(样本1) | 新生血管分支数(样本2) | 新生血管分支数(样本3) |
| shNC | 0.97 | 0.95 | 1.08 |
| shNEAT1 | 1.03 | 1.10 | 0.99 |
| shDANCR | 0.93 | 0.61 | 0.55 |
实施例4：DANCR通过影响ANXA2对血管内皮细胞的影响
1、实验分组
实验分为常氧+过表达对照序列组(NO+oeNC)、低氧+oeNC组(HO+oeNC)、低氧+过表达DANCR组(HO+oeDANCR)、低氧+oeDANCR+siRNA(小干扰核糖核酸)对照序列组(HO+oeDANCR+siNC)与低氧+oeDANCR+ANXA2-siRNA组(HO+oeDANCR+siANXA2)。ANXA2-siRNA构建：沉默靶标序列包括siANXA2-1序列：GTCTGTCAAAGCCTATACT(SEQ ID NO:4)和siANXA2-2序列：CGGCTGTATGACTCCATGA(SEQ ID NO:5)，两者皆能有效敲低ANXA2的表达，但实验表明siANXA2-1效率更高(如图10和表14所示)，因此选用siANXA2-1进行后续实验。
表14
| 分组 | ANXA2表达量(样本1) | ANXA2表达量(样本2) | ANXA2表达量(样本3) |
| siNC | 0.97 | 1.02 | 1.01 |
| siANXA2-1 | 0.71 | 0.71 | 0.68 |
| siANXA2-2 | 0.71 | 0.73 | 0.74 |
2、实验方法
(1)RNA下拉实验(RNA Pull Down)：先设计包含T7启动子的体外转录引物，包括DANCR正义链(sense)和反义链(Antisense)，经体外转录后获得DANCR RNA和AntisenseRNA后通过使用RNA pull down试剂盒(Thermo，美国)富集DANCR结合蛋白。蛋白电泳后通过银染结果进行DANCR结合蛋白的鉴定。
(2)RNA免疫共沉淀实验(RIP)：根据RIP试剂盒(RN1001，MBL，日本)步骤，先将Protein A/G琼脂糖微珠与ANXA2抗体或阴性对照抗体结合，利用抗体-微珠结合细胞裂解物中的可以和ANXA2结合的RNA，再经过洗涤将靶RNA从微珠上洗脱，并通过PCR鉴定DANCR是否和ANXA2结合。
(3)细胞迁移实验同实施例2。
(4)成管实验同实施例2。
3、实验结果
如图11中的A所示，在内皮细胞中，DANCR可结合ANXA2蛋白；同时如图11中的B所示，ANXA2可以下拉DANCR的RNA，所以从正反两方面证明了DANCR与ANXA2可相互结合作用。与对照组(siNC)相比，ANXA2敲减组(siANXA2)中ANXA2的RNA和蛋白表达成功下调(图11中的C，数据如表15所示；图12中的D，数据如表16所示)。如图12所示，敲减ANXA2可抵消DANCR对内皮细胞迁移(图12A，数据如表17所示)和成管能力(图12B，数据如表18所示)的促进作用，说明DANCR通过调节ANXA2来影响内皮细胞功能。
表15：ANXA2表达量
表16：ANXA2/β-actin
| 分组 | ANXA2/β-actin(样本1) | ANXA2/β-actin(样本2) | ANXA2/β-actin(样本3) |
| siNC | 1.13 | 1.11 | 0.77 |
| siANXA2 | 0.77 | 0.36 | 0.40 |
表17：细胞迁移
| 分组 | 迁移细胞数(样本1) | 迁移细胞数(样本2) | 迁移细胞数(样本3) |
| NO+oeNC | 62.5 | 60.75 | 60 |
| HO+oeNC | 98.25 | 86.25 | 87.5 |
| HO+oeDANCR | 134.75 | 132.5 | 139.5 |
| HO+oeDANCR+shNC | 97.75 | 92.25 | 95.75 |
| HO+oeDANCR+shANXA2 | 58.75 | 61.25 | 55.75 |
表18：成管能力
实施例5：沉默DANCR对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管的治疗作用
1、实验分组及高氧诱导视网膜病变小鼠模型的构建
利用氧诱导视网膜病变(OIR)模型探究DANCR对新生血管的作用，造模方法同实施例1。实验分组：初生小鼠被随机均匀地分为四组-正常氧组(Control)、OIR组、OIR+对照阴性siRNA组(OIR+siNC)、OIR+DANCR-siRNA组(OIR+siDANCR)。沉默靶标序列包括DANCR-siRNA-1(siDANCR-1)序列：CCTGAAGGTAGTTTGCTAA(SEQ ID NO:6)、DANCR-siRNA-2(siDANCR-2)序列：CCTGTATATTGTTGCCTAT(SEQ ID NO:7)和DANCR-siRNA-3(siDANCR-3)序列：GCATGTAGTGACCAGGTTT(SEQ ID NO:8)，三者皆能有效敲低DANCR的表达，但实验表明siDANCR-1效率最高(如图13和表19所示)，因此选用shDANCR-1进行后续实验。
表19
| 分组 | DANCR表达量(样本1) | DANCR表达量(样本2) | DANCR表达量(样本3) |
| siNC | 0.93 | 1.02 | 1.06 |
| DANCR-siRNA-1 | 0.48 | 0.49 | 0.48 |
| DANCR-siRNA-2 | 0.55 | 0.54 | 0.46 |
| DANCR-siRNA-3 | 0.75 | 0.71 | 0.74 |
2、实验方法
在出生后第12天，OIR+对照阴性siRNA组和OIR+DANCR-siRNA组小鼠拿回到正常氧环境，并且使用汉密尔顿微量注射器(33G针头)通过玻璃体腔每只眼分别注射1nmol对照阴性siRNA和DANCR-siRNA。在出生后14天，取小鼠视网膜组织提取RNA，逆转录后精选PCR检测；在出生后17天取眼球固定，取视网膜铺片，进行植物凝集素(IB4)血管特异性染色，在共聚焦显微镜下观察视网膜血管发育程度。
3、实验结果
实验结果如图14所示，与OIR+对照阴性siRNA组小鼠相比，OIR+DANCR-siRNA组小鼠DANCR表达量明显降低(图14中的A，数据如表20所示)，且新生血管区和无灌注区面积明显减小(图14中的B，数据如表21所示)。
表20：DANCR表达量
| 分组 | DANCR表达量(样本1) | DANCR表达量(样本2) | DANCR表达量(样本3) |
| Control | 0.71 | 0.75 | 1.54 |
| OIR | 2.45 | 3.15 | 2.45 |
| OIR+siNC | 0.63 | 0.48 | 0.56 |
| OIR+siDANCR | 0.34 | 0.28 | 0.34 |
表21：新生血管比例
以上结果表明，DANCR和ANXA2与眼部病理性新生血管生成相关，可通过抑制DANCR的表达(包括但不限于敲除、沉默、下调等方式)，进而阻止眼部新生血管的生成，从而预防和/或治疗早产儿视网膜病变。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.DANCR抑制剂在如下任一项中的应用：
(I)、抑制新生血管性眼病；
(II)、制备抑制新生血管性眼病的药物；
所述新生血管性眼病包括早产儿视网膜病变。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述DANCR抑制剂包括敲除或敲减DANCR的基因编辑试剂、沉默或下调DANCR表达的RNA干扰试剂或靶向DANCR的小分子抑制剂中的一种或多种；
所述基因编辑试剂包括靶向DANCR基因的CRISPR/Cas试剂，所述CRISPR/Cas试剂包括sgRNA；
所述RNA干扰试剂包括siRNA或shRNA。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述DANCR抑制剂包括shDANCR和/或siDANCR；
所述shDANCR具有：
(1)、如SEQ ID NO:1、2或3所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:1、2或3互补的核苷酸序列；或
(2)、如(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(1)的相同或相似；或
(3)、与如(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
所述siDANCR具有：
(4)、如SEQ ID NO:6、7或8所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:6、7或8互补的核苷酸序列；或
(5)、如(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(4)的相同或相似；或
(6)、与如(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
所述多个为2个至5个。
4.ANXA2抑制剂和如权利要求1至3任一项所述的应用中所述的DANCR抑制剂在如下任一项中的应用：
(I)、抑制新生血管性眼病；
(II)、制备抑制新生血管性眼病的药物；
所述新生血管性眼病包括早产儿视网膜病变。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述ANXA2抑制剂包括敲除或敲减ANXA2的基因编辑试剂、沉默或下调ANXA2表达的RNA干扰试剂或靶向ANXA2的小分子抑制剂中的一种或多种；
所述基因编辑试剂包括靶向ANXA2基因的CRISPR/Cas试剂，所述CRISPR/Cas试剂包括sgRNA；
所述RNA干扰试剂包括siRNA或shRNA。
6.如权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述ANXA2抑制剂包括siANXA2；
所述siANXA2具有：
(7)、如SEQ ID NO:4或5所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:4或5互补的核苷酸序列；或
(8)、如(7)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(7)的相同或相似；或
(9)、与如(7)或(8)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
所述多个为2个至5个。
7.核酸分子，其特征在于，具有：
(10)、如SEQ ID NO:1～8任一所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:1～8任一者互补的核苷酸序列；或
(11)、如(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(10)的相同或相似；或
(12)、与如(10)或(11)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
所述多个为2个至5个。
8.核酸分子组合，其特征在于，包括核酸分子组合1和/或核酸分子组合2；
核酸分子组合1包括核酸分子1、核酸分子2、核酸分子3、核酸分子6、核酸分子7或核酸分子8中的两种或以上；
核酸分子组合2核酸分子4和/或核酸分子5；
所述核酸分子1具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:1互补的核苷酸序列；
所述核酸分子2具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:2互补的核苷酸序列；
所述核酸分子3具有如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:3互补的核苷酸序列；
所述核酸分子4具有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:4互补的核苷酸序列；
所述核酸分子5具有如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:5互补的核苷酸序列；
所述核酸分子6具有如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:6互补的核苷酸序列；
所述核酸分子7具有如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:7互补的核苷酸序列；
所述核酸分子8具有如SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:8互补的核苷酸序列。
9.药物，其特征在于，包括如权利要求7所述的核酸分子或如权利要求8所述的核酸分子组合，以及可接受的辅料或助剂。
10.抑制新生血管性眼病的方法，所述新生血管性眼病包括早产儿视网膜病变，其特征在于，包括：
(A)、沉默、下调、敲减或敲除DANCR；
(B)、沉默、下调、敲减或敲除DANCR和ANXA2；
(C)、施用如权利要求9所述的药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410247981.3A CN118105402A (zh) | 2024-03-05 | 2024-03-05 | 一种针对早产儿视网膜病变防治的干扰序列及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410247981.3A CN118105402A (zh) | 2024-03-05 | 2024-03-05 | 一种针对早产儿视网膜病变防治的干扰序列及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118105402A true CN118105402A (zh) | 2024-05-31 |
Family
ID=91217839
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410247981.3A Pending CN118105402A (zh) | 2024-03-05 | 2024-03-05 | 一种针对早产儿视网膜病变防治的干扰序列及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118105402A (zh) |
-
2024
- 2024-03-05 CN CN202410247981.3A patent/CN118105402A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107949424A (zh) | Tat诱导的基于crispr/核酸内切酶的基因编辑 | |
| CN109640946A (zh) | 通过基因编辑策略进行hiv-1的负反馈调节 | |
| Yang et al. | MiR-126 overexpression inhibits high glucose-induced migration and tube formation of rhesus macaque choroid-retinal endothelial cells by obstructing VEGFA and PIK3R2 | |
| Yang et al. | Paxillin promotes the migration and angiogenesis of HUVECs and affects angiogenesis in the mouse cornea | |
| CN110251529A (zh) | miR-124-3p与其类似物在制备抗乳腺癌疾病药物中的应用 | |
| CN106591308A (zh) | 一种改善人肺腺癌厄洛替尼的耐药性的shRNA | |
| US10302629B2 (en) | Compositions and methods for treating cancer by rational targeting of protein translation | |
| CN111110691A (zh) | 人参皂苷Rb2在制备预防和/或治疗动脉粥样硬化药物中的应用 | |
| CN118105402A (zh) | 一种针对早产儿视网膜病变防治的干扰序列及其应用 | |
| CN104995300B (zh) | Rna活性和血管通透性的调节 | |
| He et al. | CircRNA SCMH1 regulates the miR-200a-3p/ZEB1 signaling axis to promote diabetes-induced retinal epithelial-mesenchymal transition | |
| CN110917206B (zh) | miR-674-5p在制备治疗胶质瘤药物中的应用 | |
| CN115851946A (zh) | CaMK I作为治疗靶点在制备胰腺癌治疗药物中的应用 | |
| Shi et al. | Long non-coding RNA PNKY modulates the development of choroidal neovascularization | |
| CN103667292A (zh) | 一种与乳腺癌多西紫杉醇耐药相关的microRNA分子及其应用 | |
| CN104630221B (zh) | 抑制肿瘤细胞生长的shRNA及其重组载体与应用 | |
| CN103421884B (zh) | 人fzr1基因的用途及其相关药物 | |
| CN116459270B (zh) | 一种药物组合物及其在制备防治眼部新生血管性疾病药物中的应用 | |
| CN111437391B (zh) | 敲降circHECTD1在制备治疗胶质瘤药物中的应用 | |
| CN117138048B (zh) | Dock6在制备防治眼部新生血管性疾病药物中的应用 | |
| CN103656673B (zh) | 人ywhaq基因的用途及其相关药物 | |
| CN103667430A (zh) | 一种八聚核苷酸结合蛋白表达基因的用途及其相关药物 | |
| CN114854755B (zh) | 一种抑制vstm2l表达的慢病毒载体及其应用 | |
| CN116407636B (zh) | Lnc-CCKAR-5在制备促进糖尿病创面修复的药物中的应用 | |
| CN103667431B (zh) | 一种人ccch型锌指蛋白表达基因的用途及其相关药物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |