CN118033111A - 一种将he染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其包括如下步骤：S1.将HE染色冰冻切片浸入至TO试剂中3‑5分钟，然后褪下盖玻片，随后再浸入无水乙醇中洗去TO试剂，备用；S2.使用梯度酒精溶液进行浸洗后再水洗，完成褪苏木素和褪胞浆，最后进行水化，备用；S3.使用抗原修复液进行抗原修复，然后进行血清封闭及免疫组化染色，染色完毕后即可进行免疫组化检测。本发明优点为，该方法对于一些病变组织较少的病例的诊断十分有益，其成本低，操作简单迅速，可更快更准的得到检测结果，提高了诊断的准确性，便于临床尽快给患者进行下一步治疗，对患者的伤害降到最低，有利于提高其生命质量。
Description
技术领域
本发明涉及切片检查领域，具体涉及一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法。
背景技术
手术中冰冻切片快速病理检查(简称“冰冻切片”)，是通过临床手术医师切除病变组织，病理医生切取具有代表性的组织块冻结于零下20度左右，在经过HE染色、制片等多个环节后，在显微镜下观察并做出病理诊断。一般情况下30分钟内要求作出冰冻病理诊断，其主要特点就是及时、快速。它是外科手术科室与病理科之间就与术中处理方案有关的疾病诊断问题而进行的一种急会诊方式。冰冻切片快速病理检查适用以下几种情况：1、手术过程中需要确定病变性质(如肿瘤或非肿瘤/良性肿瘤或恶性肿瘤等)，以即时决定手术方案，决定是就此结束手术，还是进一步大范围切除；2、了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等；3、确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留，即判断切缘干净与否，如果切缘干净，就到此为止，如果不干净，则继续扩切。
病理诊断的正确与否直接关系到手术台上处理患者的下一个步骤，对手术治疗有重大帮助和指导意义，诊断要力求正确、迅速和可靠。但是快速冰冻病理诊断不是万能的，它是一把“双刃剑”，虽然它及时快速，但由于时间紧迫、送检标本局限性、新鲜标本水分对细胞形态的影响、有些病例需要做进一步检查(如免疫组化)等因素，导致冰冻病理诊断报告的准确性远不如常规石蜡病理诊断报告。因此冰冻检查只能作为术中指导手术方案的参考诊断，最终诊断仍以常规石蜡病理诊断为准。所以有一些病检标本需要进行常规石蜡切片进一步检查，但是在冰冻取材中的病变组织极少，若进一步行免疫组化检查，存在病变组织切失的问题。面对该问题，有必要有效利用冰冻切片的病变组织，通过对其进行特定处理以满足进行免疫组化检查的需要。
发明内容
本发明提供一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，旨在克服现有技术中存在的上述不足。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其包括如下步骤：
S1.将HE染色冰冻切片浸入至TO试剂中3-5分钟，然后褪下盖玻片，随后再浸入无水乙醇中洗去TO试剂，备用；
S2.使用梯度酒精溶液进行浸洗后再水洗，完成褪苏木素和褪胞浆，最后进行水化，备用；
S3.使用抗原修复液进行抗原修复，然后进行血清封闭及免疫组化染色，染色完毕后即可进行免疫组化检测。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下进一步的具体选择。
具体的，步骤S1中浸入无水乙醇中持续时间为1-2min。
具体的，步骤S2中的梯度酒精溶液依次为体积分数95％酒精、85％酒精和75％酒精，浸洗次数依次为2次、1次和1次，三种浓度的酒精中每次浸洗时间依次为2-3min、5-15min和3-5min。
具体的，步骤S2中的水洗为浸入清水中1-2min后取出。
具体的，步骤S3中的抗原修复液为柠檬酸盐缓冲液或Tris缓冲液。
具体的，步骤S3中的血清封闭采用3％双氧水对组织切片进行画圈处理。
具体的，步骤S3中免疫组化染色的步骤如下：一抗4℃过夜孵育，二抗室温孵育，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明并封片。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供的方法对于一些病变组织较少的病例的诊断十分有益，其成本低，操作简单迅速，可更快更准的得到检测结果，提高了诊断的准确性，便于临床尽快给患者进行下一步治疗，对患者的伤害降到最低，有利于提高其生命质量。
附图说明
图1为本发明提供的将HE染色冰冻切片褪色再进行免疫组化检测的方法中冰冻切片褪色处理的工艺流程图；
图2为冰冻切片褪色处理后进行修复及免疫组化染色的工艺流程图。
具体实施方式
以下结合附图及具体实施例对本发明的原理和特征作进一步的详细描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
为免赘述以下实施例中用到的药品原料若无特别说明则均为市售常规产品，用到的方法若无特别说明则均为本领域的常规方法。
常规HE染色冰冻切片的制备流程如下:取材、冷冻、切片、染色、封片、核对和出片。HE染色冰冻切片对应的病变组织可以为常见的各种组织。
如图1至2所示，本发明利用上述制备出的HE染色冰冻切片,先通过褪色处理使冰冻切片完成中性树胶去除、苏木素及胞浆褪除，然后再进行免疫组化染色并进行免疫组化检测。
实施例1
一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其包括如下步骤：
S1.将HE染色冰冻切片浸入至TO试剂中3分钟，然后褪下盖玻片，随后再浸入无水乙醇中洗去TO试剂，浸入无水乙醇中持续时间为1min,取出备用；
S2.使用梯度酒精溶液进行浸洗后再水洗，完成褪苏木素和褪胞浆，最后进行水化，备用；具体而言，梯度酒精溶液依次为体积分数95％酒精、85％酒精和75％酒精，浸洗次数依次为2次、1次和1次，三种浓度的酒精中每次浸洗时间依次为2min、5-10min和3min，即95％酒精浸洗两次，每次浸洗2min，85％酒精浸洗一次，75％酒精浸洗一次，时间为3-5min，水洗时使用清水(优选为纯净水)将切片组织浸入1min后取出，水化为向水洗完成的切片组织上喷纯净水冲洗1min。
S3.使用抗原修复液进行抗原修复，然后进行血清封闭及免疫组化染色，染色完毕后即可进行免疫组化检测；抗原修复液为柠檬酸盐缓冲液或Tris缓冲液,血清封闭采用3％双氧水对组织切片进行画圈处理,具体的免疫组化染色的步骤如下：一抗4℃过夜孵育，二抗室温孵育，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明并封片。
实施例2
一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其包括如下步骤：
S1.将HE染色冰冻切片浸入至TO试剂中5分钟，然后褪下盖玻片，随后再浸入无水乙醇中洗去TO试剂，浸入无水乙醇中持续时间为2min,取出备用；
S2.使用梯度酒精溶液进行浸洗后再水洗，完成褪苏木素和褪胞浆，最后进行水化，备用；具体而言，梯度酒精溶液依次为体积分数95％酒精、85％酒精和75％酒精，浸洗次数依次为2次、1次和1次，三种浓度的酒精中每次浸洗时间依次为3min、10-15min和5min，即95％酒精浸洗两次，每次浸洗23min，85％酒精浸洗一次，75％酒精浸洗一次，时间为5min，水洗时使用清水(优选为纯净水)将切片组织浸入2min后取出，水化为向水洗完成的切片组织上喷纯净水冲洗1min。
S3.使用抗原修复液进行抗原修复，然后进行血清封闭及免疫组化染色，染色完毕后即可进行免疫组化检测；抗原修复液为柠檬酸盐缓冲液或Tris缓冲液,血清封闭采用3％双氧水对组织切片进行画圈处理,具体的免疫组化染色的步骤如下：一抗4℃过夜孵育，二抗室温孵育，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明并封片
需要说明的是，在进行免疫组化染色时，各环节的具体内容如下，一抗孵育时在玻片上画上阻水圈，滴加50uL一抗覆盖组织，保湿盒中室温60分钟或4度过夜，其作用是让一抗跟组织上的抗原充分结合。阻水圈是为了防止孵育时一抗向玻片的其它地方扩散，保温盒是为了防止在孵育期间一抗挥发引起的抗体浓度过高或干掉，孵育过夜后可以使用PBS浸泡三次，每次3分钟左右，从而去掉没有结合的一抗，防止后面出现非特异性着色；二抗孵育时滴加50uL二抗覆盖组，保湿盒中，室温20分钟，PBS浸泡3次，每次3分钟；DAB显色处理是滴加50uL DAB工作液覆盖组织，浸染5分钟，纯化水冲清中止显色反应，目的是让二抗跟一抗充分结合，随后可用PBS浸泡去掉没有结合的二抗；苏木素复染操作为滴加50uL苏木素覆盖组织，浸染3分钟，纯化水冲洗，滴加50ul酸洗液1-2秒，纯水化冲洗，流水冲冼3分钟返蓝；脱水、透明并封片处理是指使用梯度酒精75％、95％和100％每缸浸2分钟，然后在透明液中浸泡3分钟，取出玻片凉干，滴上中性树脂，盖上盖玻片，轻压盖玻赶出汽泡，即得，目的是保存染色效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.将HE染色冰冻切片浸入至TO试剂中3-5分钟，然后褪下盖玻片，随后再浸入无水乙醇中洗去TO试剂，备用；
S2.使用梯度酒精溶液进行浸洗后再水洗，完成褪苏木素和褪胞浆，最后进行水化，备用；
S3.使用抗原修复液进行抗原修复，然后进行血清封闭及免疫组化染色，染色完毕后即可进行免疫组化检测。
2.根据权利要求1所述的一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其特征在于，步骤S1中浸入无水乙醇中持续时间为1-2min。
3.根据权利要求1所述的一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其特征在于，步骤S2中的梯度酒精溶液依次为体积分数95％酒精、85％酒精和75％酒精，浸洗次数依次为2次、1次和1次，三种浓度的酒精中每次浸洗时间依次为2-3min、5-15min和3-5min。
4.根据权利要求1所述的一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其特征在于，步骤S2中的水洗为浸入清水中1-2min后取出。
5.根据权利要求1所述的一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其特征在于，步骤S3中的抗原修复液为柠檬酸盐缓冲液或Tris缓冲液。
6.根据权利要求1所述的一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其特征在于，步骤S3中的血清封闭采用3％双氧水对组织切片进行画圈处理。
7.根据权利要求1至6任一项所述的一种将HE染色冰冻切片褪色处理再进行免疫组化检测的方法，其特征在于，步骤S3中免疫组化染色的步骤如下：一抗4℃过夜孵育，二抗室温孵育，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明并封片。
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