CN118021681A - 一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物的制备及应用 - Google Patents
一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物的制备及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物的制备及应用。所述组合物包括表皮细胞间脂质组成、类人皮脂膜组分；按质量百分比，表皮细胞间脂质组成包括：燕麦仁油33‑60％、植物甾醇类20‑35％、红山茶提取物20‑35％；类人皮脂膜组分包括：红山茶提取物52‑60％、角鲨烷10‑14％、霍霍巴籽油23‑29％、植物甾醇类1‑10％；其中，表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为0.1‑5：5‑0.1。该组合物中的所有成分均为天然来源，可以作为化妆品功效原料加入到不同类型的化妆品产品中，如精华油、乳液、面霜等产品，从皮脂膜+角质层+活性表皮层的维度，达到三维修护皮肤屏障的作用。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，涉及一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物的制备及应用，具体涉及一种含红山茶提取物、类人皮脂膜的三维修护皮肤屏障组合物及其制备方法和应用。
背景技术
成人皮肤的延伸面积约为2m2，平均厚度约为2.5mm。皮肤大约占了人体质量的6％左右。皮肤提供了一个巨大的物理屏障，旨在保护我们免受一系列的伤害。通常，皮肤包括两种广泛的组织类型：表皮层(70-150μm，手掌/脚底的表皮层可厚达600μm，上皮组织)和真皮层(可达4mm，例如成人背部，但大部分＜2mm，结缔组织)。从解剖学的角度，还包括第三层：皮下组织。真皮层还包括皮脂腺、汗腺等分泌腺，角化结构及神经受体等。
皮肤的表皮层，主要由角质形成细胞组成，通过基底膜与真皮层紧密相连，从内到外分别为基底层(SB)、棘层(SS)、颗粒层(SG)和角质层(SC)。基底层由未分化的角质形成细胞、干细胞、黑素细胞和默克尔细胞组成，基底层角质形成细胞的增殖活性保证了组织的持续更新；在棘层，通过产生大量桥粒提高了细胞间的粘附力，进而使组织更加稳定；在颗粒层，不仅发现了紧密连接(Tight Junctions，TJ)结构，并会在此层准备形成角质层的主要过程。由于这种逐步的分化，不同的层可以完成不同的功能，如形成新的细胞(SB)，提供机械强度(SS、SG)，形成有效的屏障(SG、SC)。
广义来说，皮肤屏障分为物理屏障、化学屏障、微生物屏障及免疫屏障。狭义的皮肤屏障通常指表皮，尤其是角质层的物理性或机械性屏障结构，又称为渗透性屏障，它们主要由角质细胞和细胞间脂质形成砖墙样结构，其中角质细胞是“砖”，通过细胞间角化桥粒紧密连接；细胞间脂质是“灰浆”，通过神经酰胺等结构性脂质与角质细胞锚定在一起；角质层外还有一层由皮肤表面脂质和汗液构成的皮脂膜，作为“外墙的涂料层”共同构成了皮肤的物理屏障。皮肤表面脂质主要来源于皮脂腺分泌的脂质，并含有少量角质形成细胞崩解的脂质。皮脂腺分泌的脂质，主要含有甘油三酯、游离脂肪酸、角鲨烯、蜡酯、胆固醇和胆固醇酯等(详见表1)，刚分泌出来的皮脂不含有游离脂肪酸，它是毛囊内的寄生菌水解甘油三酯形成的，能够抑制部分细菌和真菌。值得注意的是，细胞间脂质成分与皮脂腺分泌的脂质成分不同，细胞间脂质中含有皮脂腺脂质所没有的神经酰胺、磷脂等，几乎不含有角鲨烯、蜡酯等成分。皮肤表面脂质具有保护皮肤屏障、滋养皮肤、抗感染、中和酸碱损害及维持人体皮肤表面常驻菌生态稳定性等作用。
表1皮脂组分相对含量汇总表
| 脂质类型 | 含量范围(质量分数)/％ | 平均含量(质量分数)/％ |
| 甘油三酯 | 20～60 | 45 |
| 蜡酯 | 23～29 | 25 |
| 角鲨烯 | 10～14 | 12 |
| 游离脂肪酸 | 5～40 | 10 |
| 胆固醇和胆固醇酯 | 1～5 | 4 |
| 双甘酯 | 1～2 | 2 |
紧密连接(tight junctions)是一类较早被发现于多种细胞和组织类型中的细胞与细胞之间的结合部，是由许多种紧密连接跨膜蛋白质所构成的复杂结构，它能够紧密连接相邻细胞。但直到今年，这种蛋白质在哺乳动物中的表皮中的表达才得到证实。紧密连接蛋白包括：Claudin(Cldns)家族蛋白(简称水闸蛋白)、闭合蛋白(occludin)、连接黏附分子家族蛋白以及紧密连接斑块蛋白。不同的紧密连接蛋白在表皮中的表达量及表达部位各不相同。除角质形成细胞外，Cldn-1在固定和迁徙的朗格汉斯细胞中也有表达。然而，尽管有几种紧密连接蛋白在表皮的全层均有表达，但是典型的紧密连接结构只存在于颗粒层。水闸蛋白是组成角质细胞紧密连接的重要蛋白质家族，目前已发现24种，与角质细胞共同帮助维持皮肤屏障功能。水闸蛋白的缺乏可以使小鼠在出生后24h因皮肤干皱、严重的脱水及表皮渗透性和TEWL值的增加而死亡。在特异性皮炎中，水闸蛋白-1和水闸蛋白-23的表达均显著降低。
CN 111557874 B公开了一种仿生的、含山茶提取物的修复皮肤屏障组合物和应用。由以下几部分组成：皮脂膜修复组分：角鲨烯类物质，脂肪酸，甘油三酯，胆固醇类似物；角质细胞间间质组分：游离脂肪酸，神经酰胺，胆固醇类似物；协同增效组分：舒缓消炎成分，抗衰老成分，美白成分，皮肤渗透剂；其中，皮脂膜修复和角质细胞间间质组分由山茶提取物、亚麻荠籽油、燕麦仁油和角鲨烷、植物甾醇、神经酰胺3组成。CN 113041172 A公开了一种用于肌肤屏障修护的皮脂膜仿生组合物及其应用和化妆品，其成分包括：乙酰基二肽-1鲸蜡酯1-2份、茶多酚1-2份、角鲨烷3-5份、烟酰胺2-4份、甘油8-12份、生物搪胶-12-4份、PEG-100硬脂酸酯4-8份、硬脂醇聚醚-212-5份、维生素E1-2份、水46-80份。但上述两份专利都基本都只模拟了单独皮脂或单独细胞间脂质的不同成分比例，没有考虑到皮脂膜与细胞间脂质的比例。
发明内容
本发明的目的在于针对已有的技术现状，提供了一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物的制备及应用，该组合物主要具有修护皮肤屏障的作用。本发明除了分别模拟皮脂膜及细胞间脂质的比例外，还模拟了合适的皮脂膜与细胞间脂质比例，进而达到最优的修护屏障效果。除此之外，测试此组合物促进角质形成细胞分泌紧密连接蛋白CLAUDIN-1的含量，旨在让组合物可以从皮脂膜+角质层+活性表皮层三维达到修护皮肤屏障的作用。
本发明的目的可以通过以下方案来实现：
第一方面，本发明提供一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物，所述组合物包括表皮细胞间脂质组成、类人皮脂膜组分；
按占表皮细胞间脂质组成总重的质量百分比计，表皮细胞间脂质组成包括：
燕麦仁油 33-60％，
植物甾醇类 20-35％，
红山茶提取物 20-35％；
按占类人皮脂膜组分总重的质量百分比计，类人皮脂膜组分包括：
作为本发明的一个实施方案，所述表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为0.1-5：5-0.1。若低于或高于该范围，皮肤的屏障将会受损，如皮肤锁水功能下降，皮肤含水量不正常；也会导致皮肤表面菌群失衡，或引起各种皮炎的产生。
进一步地，所述表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为1-3：3-1。
作为本发明的一个实施方案，所述红山茶提取物包括红山茶籽油、红山茶花提取物、红山茶叶提取物，其质量百分比分别为75-90％、5-15％、5-15％。
本发明中，红山茶花提取物和红山茶叶提取物的制备方法参见专利CN109157454B，即分别将红山茶花和红山茶叶，粉碎过筛后，进行超临界萃取，然后进行两级分离，即得；其中，所述超临界萃取的参数为：CO2流体的流速为15-30ml/min；萃取压力为15-30Mpa；萃取温度为30-50℃；萃取时间为1-2h；所述两级分离的参数为：Ⅰ级分离压力为8-12Mpa，温度为25-40℃；Ⅱ级分离压力为7-8Mpa，温度为25-40℃。
本发明中，表皮细胞间脂质组成为A相，类人皮脂膜组分为B相。
第二方面，本发明提供一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
S1、将表皮细胞间脂质组成混合并搅拌；
S2、将类人皮脂膜组分混合并搅拌；
S3、将步骤S1中的表皮细胞间脂质组成与步骤S2中的类人皮脂膜组分混合后搅拌，得到所述组合物。
作为本发明的一个实施方案，步骤S1中，所述搅拌的方式包括水浴搅拌，水浴搅拌的温度为70-85℃，时间为20-40min。
在一些实施例中，步骤S1中混合的方式：将A相成分依次加入到烧杯中。
作为本发明的一个实施方案，步骤S2中，所述搅拌的方式包括水浴搅拌，水浴搅拌的温度为70-85℃，时间为20-40min。
在一些实施例中，步骤S2中混合的方式：将B相成分依次加入到烧杯中。
作为本发明的一个实施方案，步骤S3中，搅拌至冷却到室温。
第三方面，本发明提提了一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物作为功效原料在制备化妆品中的用途。
作为本发明的一个实施方案，所述化妆品为用于修护皮肤屏障的化妆品。
作为本发明的一个实施方案，所述化妆品的类型包括精华油、乳液、面霜中的至少一种。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1、本发明除了分别模拟皮脂膜及细胞间脂质的比例外，还摸索了合适的皮脂膜与细胞间脂质比例，进而达到最优的修护屏障效果。
2、本发明组合物通过含红山茶组合物的类人皮脂膜组合物显著促进角质形成细胞分泌紧密连接蛋白CLAUDIN-1的含量，可以从皮脂膜+角质层+活性表皮层的维度，达到三维修护皮肤屏障的作用。
3、本发明使用霍霍巴籽油模拟皮脂膜中的蜡酯成分，使得最终的组合物更加贴合真实的皮肤皮脂膜组成，从而增强三维修护皮肤屏障的作用。
4、本发明组合物中的所有成分均为天然来源，具有修护皮肤屏障的作用，可以作为化妆品功效原料加入到不同类型的化妆品产品中，如精华油、乳液、面霜等产品。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为模型对照组与1.0％类人皮脂膜组合物的免疫荧光测试图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。以下实例在本发明技术方案的前提下进行实施，提供了详细的实施方式和具体的操作过程，将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明。需要指出的是，本发明的保护范围不限于下述实施例，在本发明的构思前提下做出的若干调整和改进，都属于本发明的保护范围。
本发明提供以下实施例或对比例的组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1：将A相成分依次加入到烧杯中，并于70-85℃水浴锅中搅拌30min；
S2：将B相成分依次加入到烧杯中，于70-85℃水浴锅中搅拌30min；
S3：之后将A相与B相以A：B＝0.1-5：5-0.1的比例混合到一起，搅拌冷却至室温。
需要说明的是，以下实施例中表皮细胞间脂质组成的质量比为燕麦仁油：植物甾醇类：红山茶提取物＝5：3：2；类人皮脂膜组分的质量比为红山茶提取物：角鲨烷：霍霍巴籽油：植物甾醇类＝55：13：25：7。
本发明以下实施例和对比例中，红山茶花提取物和红山茶叶提取物的制备方法参见专利CN109157454B，即分别将红山茶花和红山茶叶，粉碎过筛后，进行超临界萃取，然后进行两级分离，即得；其中，所述超临界萃取的参数为：CO2流体的流速为20ml/min；萃取压力为20Mpa；萃取温度为40℃；萃取时间为2h；所述两级分离的参数为：Ⅰ级分离压力为10Mpa，温度为30℃；Ⅱ级分离压力为8Mpa，温度为30℃。
实施例1
本实施例提供了一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物，包括如下组分：
其中，表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为1：1。
实施例2
本实施例提供了一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物，包括如下组分：
其中，表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为2：1。
实施例3
本实施例提供了一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物，包括如下组分：
其中，表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为3：1。
实施例4
本实施例提供了一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物，包括如下组分：
其中，表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为1：2。
实施例5
本实施例提供了一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物，包括如下组分：
其中，表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为1：3。
实施例6
本实施例提供了一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物，包括如下组分：
其中，表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为1：4。
实施例7
本实施例提供了一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物，包括如下组分：
其中，表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为4：1。
对比例1
本对比例提供了一种含红山茶提取物组合物，包括如下组分：
对比例2
本对比例提供了一种含红山茶提取物组合物，包括如下组分：
效果验证1：安全性测试
a:鸡胚绒毛尿囊膜测试
使用鸡胚绒毛尿囊膜试验检测组合物的刺激性。从表1和表2中可以得知，根据刺激性分类，所有实施例和对比例对鸡胚绒毛尿囊膜并无刺激。
表1刺激评分标准
| 终点评分 | 刺激性分类 |
| ES＝0 | 无刺激性 |
| 0＜ES≤4 | 轻刺激性 |
| 4＜ES＜5.3 | 中度刺激性 |
| 5.3≤ES | 强刺激性/腐蚀性 |
表2鸡胚绒毛尿囊膜测试结果
b:人体斑贴测试
选用合格的斑试器材，以封闭性斑贴试验方法，将受试物约0.020g～0.025g置于斑试器内，外用低敏胶带贴敷于受试者手臂内侧，24小时去除受试物，分别于去除后0.5、24、48小时观察皮肤反应，按《化妆品安全技术规范》(2015年版)中皮肤反应分级标准记录结果。如表3展示，本次测试30人中，无不良反应，因此所有实施例及对比例均可以通过人体皮肤斑贴试验。
表3人体斑贴测试结果
效果验证2：体外修护测试-细胞划痕(角质形成细胞)
表皮角质形成细胞是构成表皮层的重要细胞，当皮肤表面损伤时，角质形成细胞会受到刺激迁移，对受损部分进行修复。当体外细胞生长到单层状态时，在单层细胞上人为制造一个空白区域，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使划痕愈合，一定程度上模拟了体内细胞迁移过程。通过测定样品处理后细胞迁移率，评价受试物是否具有修复功效。结果如表4所示，不同比例的A相、B相组合物具有不同的细胞迁移增长率，且差异非常显著，且实施例2的细胞迁移增长率最高，表明其修护效果最佳。
表4不同样品对细胞迁移率的影响
效果验证3：修护皮肤屏障及舒缓功效—经表皮水分流失TEWL值和红斑EI值
本方案通过33位中国健康受试者经1％SLS斑贴刺激背部24h，分别测试使用后10分钟的EI值；使用前(斑贴撕下后1小时)、3天和7天的TEWL值和EI值。采用与空白对照的方法，评价样品修护和舒缓功效。按照样品涂抹区和空白对照区，早晚清洁后按2.00±0.05μL/cm2取样并按摩5圈。7天的TEWL值和EI值如表5和表6展示。TEWL值越低，修复皮肤屏障的效果越好。不同A/B值的实施例之间存在显著差异，实施例2的效果最优。红值EI值越低，说明组合物的舒缓效果越好，从表6中可以得知，同样实施例2对降低皮肤红值效果最佳。
表5TEWL变化率结果
表6红斑指数EI值测试结果
效果验证4：促进紧密连接蛋白Claudin-1的表达测试
皮肤屏障功能受损时，会加快皮肤表面水分流失以及皮肤衰老。由于自然老化及光老化的影响，会出现干燥、皱纹、松弛等皮肤问题。紧密连接蛋白中的Claudin家族蛋白对于皮肤细胞屏障的渗透特异性和物质跨膜运动起着重要作用，当皮肤受到紫外线的照射时，Claudin-1表达降低，从而引起角质形成细胞的通透性屏障功能障碍。细胞免疫荧光染色利用抗原抗体特异性结合和荧光标记的方法显示目的蛋白在细胞内的表达和定位情况，统计目的蛋白的荧光强度可以指征蛋白的相对表达含量。本实验使用角质形成细胞HaCaT，对其进行培养、种板、紫外造模及免疫荧光测试，结果如表7所示。从表中可以得知，含红山茶组合物的类人皮脂膜组合物均可显著促进Claudin-1的表达，其中实施例2促进率最高，免疫荧光测试图如图1所示(分别为模型对照组和1.0％类人皮脂膜组合物；其中模型对照组为紫外造模，类人皮脂膜组合物为1.0wt.％)。因此，含红山茶组合物的类人皮脂膜组合物可显著修护皮肤屏障。
表7Claudin-1相对表达促进率测试结果
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。
Claims (10)
1.一种含红山茶提取物、类人皮脂膜组合物，其特征在于，所述组合物包括表皮细胞间脂质组成、类人皮脂膜组分；
按占表皮细胞间脂质组成总重的质量百分比计，表皮细胞间脂质组成包括：
燕麦仁油 33-60％，
植物甾醇类 20-35％，
红山茶提取物 20-35％；
按占类人皮脂膜组分总重的质量百分比计，类人皮脂膜组分包括：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为0.1-5：5-0.1。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述表皮细胞间脂质组成和类人皮脂膜组分的质量比为1-3：3-1。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述红山茶提取物包括红山茶籽油、红山茶花提取物、红山茶叶提取物；其质量百分比分别为75-90％、5-15％和5-15％。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
S1、将表皮细胞间脂质组成混合并搅拌；
S2、将类人皮脂膜组分混合并搅拌；
S3、将步骤S1中的表皮细胞间脂质组成与步骤S2中的类人皮脂膜组分混合后搅拌，得到所述组合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤S1和步骤S2中，所述搅拌的方式包括水浴搅拌，水浴搅拌的温度为70-85℃，时间为20-40min。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，搅拌至冷却到室温。
8.一种如权利要求1-4中任一项所述组合物，或权利要求5-7中任一项所述制备方法得到的组合物作为功效原料在制备化妆品中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述化妆品为用于修护皮肤屏障的化妆品。
10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述化妆品的类型包括精华油、乳液、面霜中的至少一种。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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