CN118010469A - 一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于纤维蛋白原检测技术领域，涉及一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用。本发明提供了一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液，所述稀释液的制备用原料包括咪唑、氯化钠、EACA和转谷氨酰胺酶。本发明所述稀释液能够提高纤维蛋白原即时检测过程中的灵敏度、稳定性和线性拟合程度。
Description
技术领域
本发明属于纤维蛋白原检测技术领域，具体涉及一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用。
背景技术
严重创伤是全球死亡和残疾的主要原因。尽管过去十年创伤管理取得了进步，但与严重创伤相关的大出血仍然是发病率和死亡率的主要原因。在生活中，外伤导致的大出血也是死亡的主要原因。在医院内，分娩、心脏手术、肝移植和术后并发症等也会导致严重出血，这成为造成死亡的主要原因之一。大失血导致的低纤维蛋白原血症，成人首次剂量可以用到2~5 g纤维蛋白原，如果用全血补充至正常水平几乎是不可能的。并且输入的RBC和PLT会将患者的纤维蛋白原稀释至低于凝血阈值水平。目前，纤维蛋白原可以用新鲜冰冻血浆（Fresh frozen plasma，FFP）、冷沉淀（Cryoprecipitate，CRYO）和纤维蛋白原浓缩物（Fibrinogen concentrate，FC）补充。FFP和CRYO在使用前必须解冻，这是一个耗时的过程，通常必须在给药前确认ABO血型相容性。FC具有许多优势，包括纤维蛋白原剂量标准、体积小、保存期长、易于运输、病毒灭活、无需ABO相容性匹配等。所以FC比FFP和CRYO更快地增加血浆纤维蛋白原水平，并能够减少输血量、避免免疫原性和感染的发生。因此FC被广泛用于纤维蛋白原的补充。FC是一种由混合血浆制成的冻干凝血因子浓缩物，在很短时间就可以补充到正常浓度，最多只需要5 min的补充时间，大量输注时会有风险导致高纤维蛋白原血症引起的血栓栓塞。因此，快速准确地检测纤维蛋白原浓度非常重要，进一步精确补充有助于改善预后。
纤维蛋白原临床检测方法需复杂仪器设备，即时检测困难。因此急需一种基于即时检验与微流通道技术的快速检测纤维蛋白原浓度的方法，在大失血等紧急情况下，可快速检测纤维蛋白原浓度，从而评价凝血功能，使得快速止血复苏成为可能，进一步确保患者的生命安全。在一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置及其检测方法（专利号ZL202111036833.X）的应用中，提供了可以实现全血中纤维蛋白原浓度的快速检测的装置，但此装置用于检测时灵敏度、稳定性和线性拟合程度较差。因此，目前缺乏一种灵敏度、稳定性和线性拟合程度更好的稀释液产品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用。本发明所述稀释液能够提高纤维蛋白原即时检测过程中的灵敏度、稳定性和线性拟合程度。
本发明提供了一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液，所述稀释液的制备用原料包括咪唑、氯化钠、EACA和转谷氨酰胺酶。
优选的是，所述稀释液的制备用原料还包括PGE1。
优选的是，所述转谷氨酰胺酶包括FXIII因子。
优选的是，所述稀释液中，咪唑的质量浓度为3.06~3.74 g/L，氯化钠的质量浓度为5.55~6.14 g/L，EACA的质量浓度为1.8~2.2 g/L，转谷氨酰胺酶的质量浓度为45~75 mg/L。
优选的是，所述稀释液中，咪唑的质量浓度为3.4 g/L，氯化钠的质量浓度为5.85g/L，EACA的质量浓度为2 g/L，转谷氨酰胺酶的质量浓度为60 mg/L。
优选的是，所述稀释液中，PGE1的质量浓度为31.91~42.54 mg/L。
优选的是，所述稀释液中，PGE1的质量浓度为35.45 mg/L。
本发明还提供了上述技术方案所述稀释液的制备方法，包括以下步骤：将稀释液的原料与水混合，得到稀释液。
本发明还提供了上述技术方案所述稀释液或上述技术方案所述制备方法制备得到的稀释液在制备定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种非疾病诊断目的的基于上述技术方案所述稀释液或上述技术方案所述制备方法制备得到的稀释液定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的方法，包括以下步骤：
将全血或血浆样品与稀释液混合，得到稀释后的全血或血浆样品；
将稀释后的全血或血浆样品加入纤维蛋白原浓度检测装置中进行浓度检测。
本发明提供了一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液。本发明所述稀释液通过添加转谷氨酰胺酶，可以促进纤维蛋白单体形成稳定的纤维蛋白网，进而提高即时检测过程中的灵敏度、稳定性和线性拟合程度。
进一步的，本发明通过在稀释液中添加PGE1，能够实现对全血和血浆中进行纤维蛋白原浓度的即时快速检测，且检测灵敏度高，稳定性和线性拟合程度好。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例3提供的在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图2为本发明实施例4提供的在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图3为本发明实施例5提供的在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图4为本发明实施例6提供的在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图5为本发明实施例7提供的在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图6为本发明实施例8提供的在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图7为本发明实施例9提供的在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图8为本发明实施例10提供的在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图9为本发明实施例11提供的在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图10为本发明提供的PBS缓冲液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图11为本发明提供的PBS缓冲液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线；
图12为本发明提供的PBS缓冲液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线。
具体实施方式
本发明提供了一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液，所述稀释液的制备用原料包括咪唑、氯化钠、EACA和转谷氨酰胺酶。在本发明中，所述稀释液的溶剂优选为水。在本发明中，所述稀释液的pH值优选为7.3~7.4。本发明所述稀释液能够实现血浆中纤维蛋白原浓度的快速定量检测，检测灵敏度高，重复稳定性好且线性拟合高，线性相关性高。本发明所述稀释液优选配合纤维蛋白原浓度快速检测装置进行使用。本发明所述纤维蛋白原浓度快速检测装置优选为申请号为CN202111036833.X的专利中的装置。所述装置的稀释用试剂，传统采用PBS缓冲液。虽然基于上述装置，PBS缓冲液可以实现全血中纤维蛋白原浓度的快速检测，但检测灵敏度、稳定性和线性拟合程度较差。相对于传统PBS缓冲液，本咪唑稀释液可以进一步提高即时检测在检测过程中的稳定性，灵敏度和线性拟合程度。
在本发明中，所述稀释液中，咪唑的质量浓度优选为3.06~3.74 g/L，更优选为3.4g/L。咪唑主要来源市售产品，咪唑在本发明所述稀释液中的作用为缓冲pH值及防腐。
在本发明中，所述稀释液中，氯化钠的质量浓度优选为5.55~6.14g/L，更优选为5.85 g/L。氯化钠主要来源为市售产品，氯化钠在本发明所述稀释液中的作用为维持溶液渗透压。
在本发明中，所述稀释液中，EACA的质量浓度优选为1.8~2.2g/L，更优选为2 g/L。EACA为6-氨基己酸，来源为市售产品，EACA在本发明所述稀释液中的作用为抗纤溶。
在本发明中，所述稀释液中，转谷氨酰胺酶的质量浓度优选为45~75mg/L，更优选为60 mg/L。在本发明中，所述转谷氨酰胺酶在促进纤维蛋白单体形成稳定的纤维蛋白网的整个凝结过程中发挥主要作用。在本发明中，所述转谷氨酰胺酶优选包括FXIII因子。FXⅢ因子又称为纤维蛋白稳定因子，主要发挥转谷氨酰胺酶的活性，促进纤维蛋白的交联使得纤维蛋白原在凝血过程中形成稳定的纤维蛋白网。在血液中可能存在FXⅢ因子功能减低或者缺乏的情况。同时在血液稀释过程中，血液中FXⅢ因子同样被稀释，使得其发挥转谷氨酰胺酶活性的功能作用被减弱，因此在凝血过程中纤维蛋白单体转化成稳定的纤维蛋白网的能力减弱，其形成的纤维蛋白网稳定性较差。本稀释液配方通过添加FXⅢ因子可明显改善全血在稀释过程中FXⅢ总体数量减少或者全血中FXⅢ不足和缺乏导致的纤维蛋白网凝结不充分而造成的检测结果不稳定、灵敏度降低等问题，进一步提高即时检测过程中结果稳定性。
在本发明中，所述稀释液的制备用原料优选还包括PGE1（前列腺素E1）。在本发明中，PGE1可以消除全血中血小板的影响而对影响纤维蛋白原的活性影响不大。添加了PGE1后，本发明所述稀释液不仅能够实现血浆中纤维蛋白原浓度的检测，还能实现全血中纤维蛋白原浓度的高效检测。在本发明中，所述稀释液中，PGE1的质量浓度优选为31.91~42.54mg/L。更优选为35.45 mg/L。相对于传统PBS缓冲液稀释，添加了PGE1和FXⅢ的稀释液能够通过消除血小板的影响和提高FXⅢ因子活性使得纤维蛋白原在凝血过程中完全转化成稳定的纤维蛋白网，可以进一步提高即时检测过程的灵敏度、稳定性和线性拟合程。
本发明还提供了上述技术方案所述稀释液的制备方法，包括以下步骤：将稀释液的原料与水混合，得到稀释液。将原料和水混合后，本发明优选对pH值进行调节。在本发明中，所述pH值优选为7.3~7.4。本发明优选使用盐酸进行pH值的调节，更优选使用物质的量浓度为0.1 mol/L的盐酸进行调节。
本发明还提供了上述技术方案所述稀释液或上述技术方案所述制备方法制备得到的稀释液在制备定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种非疾病诊断目的的基于上述技术方案所述稀释液或上述技术方案所述制备方法制备得到的稀释液定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的方法，包括以下步骤：
将全血或血浆样品与稀释液混合，得到稀释后的全血或血浆样品；
将稀释后的全血或血浆样品加入纤维蛋白原浓度检测装置中进行浓度检测。
本发明将全血或血浆样品与稀释液混合，得到稀释后的全血或血浆样品。在本发明中，全血或血浆与稀释液混合的体积比优选分别为1：（4~12），更优选为1:8。
得到稀释后的全血或血浆样品后，本发明将稀释后的全血或血浆样品加入纤维蛋白原浓度检测装置中进行浓度检测。本发明优选使用申请号为CN202111036833.X的专利中的装置进行纤维蛋白原浓度检测。得到稀释后的全血或血浆样品后，本发明优选先在37℃下育温大于4min，优选为5 min。育温后，本发明稀释后的全血或血浆样品加入反应孔槽反应。在本发明中，所述反应的时间优选为大于3min，更优选为6min。反应后，本发明将第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸，芯吸后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断血浆纤维蛋白原浓度。
本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。任何在相关领域具备经验的人，都可以按照本发明的原理，通过替换一种或多种原料或更改浓度范围等，提供一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液，实现纤维蛋白原的高灵敏度、强稳定性和较好线性拟合程度的检测。这些并不脱离本发明描述的基本概念。因此，这些修改或不同的应用都在本发明的覆盖范围之内。
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
实施例1-1
咪唑3.4 g，氯化钠5.85 g，EACA 2 g，PGE135.45 mg，FXⅢ因子60 mg 加于约500mL水中；加0.1 mol/L盐酸186 mL，调pH至7.3~7.4，最后加蒸馏水至1L。
实施例1-2
咪唑3.06 g，氯化钠5.55 g，EACA 1.8 g，PGE1 31.91 mg，FXⅢ因子45 mg 加于约500 mL水中；加0.1 mol/L盐酸170 mL，调pH至7.3~7.4，最后加蒸馏水至1L。
实施例1-3
咪唑3.74 g，氯化钠6.14g，EACA 2.2 g，PGE1 42.54 mg，FXⅢ因子 75 mg 加于约500 mL水中；加0.1 mol/L盐酸205 mL，调pH至7.3~7.4，最后加蒸馏水至1L。
实施例2-1
咪唑3.4 g，氯化钠5.85 g，EACA 2 g，FXⅢ因子60 mg 加于约500 mL水中；加0.1mol/L盐酸186 mL，调pH至7.3~7.4，最后加蒸馏水至1L。
实施例2-2
咪唑3.06 g，氯化钠5.55 g，EACA 1.8g，FXⅢ因子45 mg 加于约500 mL水中；加0.1 mol/L盐酸170 mL，调pH至7.3~7.4，最后加蒸馏水至1L。
实施例2-3
咪唑3.74 g，氯化钠6.14 g，EACA 2.2 g，FXⅢ因子75 mg 加于约500 mL水中；加0.1 mol/L盐酸205 mL，调pH至7.3~7.4，最后加蒸馏水至1L。
实施例3
使用添加PGE1的稀释液（实施例1-1制备得到）对血浆样品进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测血浆样品与本稀释液按1:8稀释混合，得稀释后的血浆样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min，血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；血浆纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表1所示：
表1 试验结果
| 组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
| 1 | 5.40 | 3.80 | 3.2 | 2.10 |
| 2 | 5.80 | 3.50 | 3.2 | 2.20 |
| 3 | 5.60 | 3.60 | 2.80 | 2.35 |
| 平均值 | 5.60 | 3.63 | 3.07 | 2.22 |
| SD | 0.16 | 0.12 | 0.19 | 0.10 |
| CV | 2.92% | 3.43% | 6.15% | 4.63% |
在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图1所示。
根据表1和图1试验结果可以看出，血浆在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好，SD值均小于0.2，变异系数均不超过7％。总体线性拟合好，线性相关性高，R2可以达到0.9339，且k=-1.573，线性斜率较大，对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例4
使用添加PGE1的稀释液（实施例1-2制备得到）对血浆样品进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测血浆样品与本稀释液按1:8稀释混合，得稀释后的血浆样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min，血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；血浆纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表2所示:
表2 试验结果
| 组1（cm） | 组2（cm） | 组3（cm） | 组4（cm） | |
| 1 | 5.40 | 3.70 | 3.10 | 2.20 |
| 2 | 5.70 | 3.60 | 3.10 | 2.30 |
| 3 | 5.80 | 3.40 | 2.70 | 2.00 |
| 平均值 | 5.63 | 3.57 | 2.97 | 2.17 |
| SD | 0.17 | 0.12 | 0.19 | 0.12 |
| CV | 3.02% | 3.50% | 6.36% | 5.76% |
在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图2所示。
根据表2和图2试验结果可以看出，血浆在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好，SD值均小于0.2，变异系数均不超过7％。总体线性拟合好，线性相关性高，R2可以达到0.9269，且k=-1.614，线性斜率较大，对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例5
使用添加PGE1的稀释液（实施例1-3制备得到）对血浆样品进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测血浆样品与本稀释液按1:8稀释混合，得稀释后的血浆样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min，血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；血浆纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表3所示:
表3试验结果
| 组1（cm） | 组2（cm） | 组3（cm） | 组4（cm） | |
| 1 | 5.30 | 3.50 | 3.05 | 2.00 |
| 2 | 5.70 | 3.25 | 3.00 | 2.10 |
| 3 | 5.60 | 3.60 | 2.70 | 2.20 |
| 平均值 | 5.53 | 3.45 | 2.92 | 2.10 |
| SD | 0.17 | 0.15 | 0.15 | 0.08 |
| CV | 3.07% | 4.27% | 5.30% | 3.89% |
在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图3所示。
根据表3和图3试验结果可以看出，血浆在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好，SD值均小于0.2，变异系数均不超过6％。总体线性拟合好，线性相关性高，R2可以达到0.9225，且k=-1.592，线性斜率较大，对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例6
使用不添加PGE1的稀释液（实施例2-1制备得到）对血浆样品进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测血浆样品与不添加PGE1稀释液按1:8稀释混合，得稀释后的血浆样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min，血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表4所示：
表4 试验结果
| 组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
| 1 | 5.5 | 3.7 | 3.3 | 2.2 |
| 2 | 5.7 | 3.6 | 3.2 | 2.1 |
| 3 | 5.65 | 3.7 | 3.0 | 2.3 |
| 平均值 | 5.62 | 3.67 | 3.17 | 2.20 |
| SD | 0.08 | 0.05 | 0.12 | 0.08 |
| CV | 1.51% | 1.29% | 3.94% | 3.71% |
在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图4所示。
从表4和图4试验结果可以看出，血浆在不添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好，SD值均小于0.2，变异系数均不超过4％。总体线性拟合好，线性相关性高，R2可以达到0.9455，且k=-1.582，线性斜率较大，对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例7
使用不添加PGE1的稀释液（实施例2-2制备得到）对血浆样品进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测血浆样品与不添加PGE1稀释液按1:8稀释混合，得稀释后的血浆样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min，血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表5所示：
表5 试验结果
| 组1（cm） | 组2（cm） | 组3（cm） | 组4（cm） | |
| 1 | 5.90 | 3.80 | 3.00 | 2.30 |
| 2 | 5.80 | 3.50 | 3.40 | 2.40 |
| 3 | 5.50 | 3.70 | 3.10 | 2.0 |
| 平均值 | 5.73 | 3.67 | 3.17 | 2.23 |
| SD | 0.17 | 0.12 | 0.17 | 0.17 |
| CV | 2.96% | 3.40% | 5.37% | 7.61% |
在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图5所示。
从表5和图6试验结果可以看出，血浆在不添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好，SD值均小于0.2，变异系数均不超过8％。总体线性拟合好，线性相关性高，R2可以达到0.9299，且k=-1.618，线性斜率较大，对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例8
使用不添加PGE1的稀释液（实施例2-3制备得到）对血浆样品进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测血浆样品与不添加PGE1稀释液按1:8稀释混合，得稀释后的血浆样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min，血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用不添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表6所示：
表6试验结果
| 组1（cm） | 组2（cm） | 组3（cm） | 组4（cm） | |
| 1 | 5.90 | 3.70 | 3.30 | 2.10 |
| 2 | 5.70 | 3.30 | 3.00 | 1.90 |
| 3 | 5.70 | 3.50 | 3.10 | 2.30 |
| 平均值 | 5.77 | 3.50 | 3.13 | 2.10 |
| SD | 0.09 | 0.16 | 0.12 | 0.16 |
| CV | 1.63% | 4.67% | 3.98% | 7.78% |
在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图6所示。
从表6和图6试验结果可以看出，血浆在不添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好，SD值均小于0.2，变异系数均不超过8％。总体线性拟合好，线性相关性高，R2可以达到0.9151，且k=-1.676，线性斜率较大，对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例9
使用添加PGE1的稀释液（实施例1-1制备得到）对全血样品进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测全血样品与添加PGE1该稀释液按1:8稀释混合，得稀释后的全血样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释全血样品加入反应孔槽反应6 min，全血中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；全血中纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断全血中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表7所示：
表7 试验结果
| 组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
| 1 | 5.4 | 3.7 | 3.1 | 2.1 |
| 2 | 5.7 | 3.6 | 3.0 | 2.1 |
| 3 | 5.5 | 3.5 | 2.8 | 2.2 |
| 平均值 | 5.53 | 3.60 | 2.97 | 2.13 |
| SD | 0.12 | 0.08 | 0.12 | 0.05 |
| CV | 2.25% | 2.27% | 4.20% | 2.21% |
在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图7所示。
从表7和图7试验结果可以看出，全血在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好，SD值均小于0.2，变异系数均不超过5％。总体线性拟合好，线性相关性高，R2可以达到0.9460，且k=-1.590，线性斜率较大，对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例10
使用添加PGE1的稀释液（实施例1-2制备得到）对全血样品进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测全血样品与添加PGE1该稀释液按1:8稀释混合，得稀释后的全血样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释全血样品加入反应孔槽反应6 min，全血中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；全血中纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断全血中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表8所示：
表8试验结果
| 组1（cm） | 组2（cm） | 组3（cm） | 组4（cm） | |
| 1 | 5.70 | 3.70 | 3.15 | 2.30 |
| 2 | 5.60 | 3.40 | 3.20 | 2.20 |
| 3 | 5.40 | 3.50 | 3.30 | 2.10 |
| 平均值 | 5.57 | 3.53 | 3.22 | 2.20 |
| SD | 0.12 | 0.12 | 0.06 | 0.08 |
| CV | 2.24% | 3.53% | 1.94% | 3.71% |
在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图8所示。
从表8和图8试验结果可以看出，全血在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好，SD值均小于0.2，变异系数均不超过4％。总体线性拟合好，线性相关性高，R2可以达到0.9230，且k=-1.535，线性斜率较大，对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例11
使用添加PGE1的稀释液（实施例1-3制备得到）对全血样品进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测全血样品与添加PGE1该稀释液按1:8稀释混合，得稀释后的全血样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释全血样品加入反应孔槽反应6 min，全血中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；全血中纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断全血中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表9所示：
表9试验结果
| 组1（cm） | 组2（cm） | 组3（cm） | 组4（cm） | |
| 1 | 5.50 | 3.60 | 3.20 | 2.10 |
| 2 | 5.60 | 3.30 | 3.10 | 2.30 |
| 3 | 5.35 | 3.50 | 3.00 | 2.00 |
| 平均值 | 5.48 | 3.47 | 3.10 | 2.13 |
| SD | 0.10 | 0.12 | 0.08 | 0.12 |
| CV | 1.87% | 3.60% | 2.63% | 5.85% |
在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图9所示。
从表9和图9试验结果可以看出，全血在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好，SD值均小于0.2，变异系数均不超过6％。总体线性拟合好，线性相关性高，R2可以达到0.9238，且k=-1.534，线性斜率较大，对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
比较例1
以PBS作为稀释液，对血浆中的纤维蛋白原浓度进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测血浆样品与PBS缓冲液按1:8稀释混合，得稀释后的血浆样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min，血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断血浆中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用PBS缓冲液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L，采用PBS缓冲液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用PBS缓冲液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用PBS缓冲液稀释。试验结果如表10所示：
表10 试验结果
| 组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
| 1 | 9.60 | 8.80 | 8.20 | 7.30 |
| 2 | 9.50 | 8.30 | 8.20 | 7.40 |
| 3 | 9.00 | 8.00 | 8.90 | 7.50 |
| 平均值 | 9.37 | 8.37 | 8.43 | 7.40 |
| SD | 0.26 | 0.33 | 0.33 | 0.08 |
| CV | 2.80% | 3.94% | 3.91% | 1.10% |
PBS缓冲液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图10所示。
通过与本稀释液比较，比较例中线性拟合R2=0.8182，拟合程度较本稀释液差，k=-0.8614，斜率较小，对于纤维蛋白原浓度区分的灵敏性较本稀释液差。通过与PBS缓冲液比较，本稀释液的试验结果中明显进一步促进纤维蛋白原形成稳定的纤维蛋白网，减小SD值，提高了整体线性相关性，并使得整体线性斜率增加，提高了血浆纤维蛋白原浓度检测过程中的稳定性、灵敏度和线性拟合程度。
比较例2
以PBS作为稀释液，对血浆中的纤维蛋白原浓度进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测血浆样品与PBS缓冲液按1:8稀释混合，得稀释后的血浆样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min，血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断血浆中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用PBS缓冲液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L，采用PBS缓冲液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用PBS缓冲液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用PBS缓冲液稀释。试验结果如表11所示：
表11 试验结果
| 组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
| 1 | 9.7 | 8.7 | 8.1 | 7.2 |
| 2 | 9.4 | 8.5 | 8.3 | 7.5 |
| 3 | 8.9 | 8.0 | 8.7 | 7.8 |
| 平均值 | 9.33 | 8.40 | 8.37 | 7.50 |
| SD | 0.33 | 0.29 | 0.25 | 0.24 |
| CV | 3.54% | 3.50% | 2.98% | 3.27% |
PBS缓冲液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图11所示。
通过与本稀释液比较，比较例中线性拟合R2=0.8120，拟合程度较本稀释液差，k=-0.8245，斜率较小，对于纤维蛋白原浓度区分的灵敏性较本稀释液差。通过与PBS缓冲液比较，本稀释液的试验结果中明显进一步促进纤维蛋白原形成稳定的纤维蛋白网，减小SD值，提高了整体线性相关性，并使得整体线性斜率增加，提高了血浆纤维蛋白原浓度检测过程中的稳定性、灵敏度和线性拟合程度。
比较例3
以PBS作为稀释液，对全血中的纤维蛋白原浓度进行检测：
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置（申请号CN202111036833.X）进行检测，分别取已知纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测：将待测全血样品与PBS缓冲液按1:8稀释混合，得到稀释后的全血样品，在37℃下育温5 min后，再取150 μL稀释全血样品加入反应孔槽反应6 min，全血中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应，并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块，形成芯吸阻力；全血中纤维蛋白原与凝血酶反应完成，纤维蛋白凝块的量恒定，对芯吸的阻力恒定，此时将阻隔片3抽出，第二试纸条2与第一试纸条1搭接，第二试纸条2开始芯吸；由于随着纤维蛋白原浓度的增加，试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大，从而对芯吸阻滞越明显，芯吸长度越短，因此第二试纸条2芯吸4 min后，通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小，进而判断全血中纤维蛋白原浓度。分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按上述步骤进行检测。组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L，采用PBS缓冲液稀释；组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L，采用PBS缓冲液稀释；组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L，采用PBS缓冲液稀释；组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L，采用PBS缓冲液稀释。试验结果如表12所示：
表12 试验结果
| 组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
| 1 | 9.0 | 8.6 | 8.0 | 7.0 |
| 2 | 9.5 | 8.2 | 7.8 | 7.3 |
| 3 | 8.6 | 7.9 | 8.5 | 7.6 |
| 平均值 | 9.03 | 8.23 | 8.10 | 7.30 |
| SD | 0.37 | 0.29 | 0.29 | 0.24 |
| CV | 4.08% | 3.48% | 3.63% | 3.36% |
PBS缓冲液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图12所示。
通过与本稀释液比较，比较例中线性拟合R2=0.8221，拟合程度较本稀释液差，k=-0.7807，斜率较小，对于纤维蛋白原浓度区分的灵敏性较本稀释液差。通过与PBS缓冲液比较，本稀释液的试验结果中明显进一步促进纤维蛋白原形成稳定的纤维蛋白网，减小SD值，提高了整体线性相关性，并使得整体线性斜率增加，提高了全血中纤维蛋白原浓度检测过程中的稳定性、灵敏度和线性拟合程度。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性劳动的前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液，其特征在于，所述稀释液的制备用原料包括咪唑、氯化钠、EACA和转谷氨酰胺酶。
2.根据权利要求1所述的稀释液，其特征在于，所述稀释液的制备用原料还包括PGE1。
3.根据权利要求1所述的稀释液，其特征在于，所述转谷氨酰胺酶包括FXIII因子。
4.根据权利要求1或3所述的稀释液，其特征在于，所述稀释液中，咪唑的质量浓度为3.06~3.74g/L，氯化钠的质量浓度为5.55~6.14 mg/L，EACA的质量浓度为1.8~2.2 g/L，转谷氨酰胺酶的质量浓度为45~75 mg/L。
5.根据权利要求4所述的稀释液，其特征在于，所述稀释液中，咪唑的质量浓度为3.4g/L，氯化钠的质量浓度为5.85 g/L，EACA的质量浓度为2 g/L，转谷氨酰胺酶的质量浓度为60 mg/L。
6.根据权利要求2所述的稀释液，其特征在于，所述稀释液中，PGE1的质量浓度为31.91~42.54 mg/L。
7.根据权利要求6所述的稀释液，其特征在于，所述稀释液中，PGE1的质量浓度为35.45mg/L。
8.权利要求1~7任一项所述稀释液的制备方法，包括以下步骤：将稀释液的原料与水混合，得到稀释液。
9.权利要求1～7任一项所述稀释液或权利要求8所述制备方法制备得到的稀释液在制备定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的试剂盒中的应用。
10.一种非疾病诊断目的的基于权利要求1~7任一项所述稀释液或权利要求8所述制备方法制备得到的稀释液定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的方法，包括以下步骤：
将全血或血浆样品与稀释液混合，得到稀释后的全血或血浆样品；
将稀释后的全血或血浆样品加入纤维蛋白原浓度检测装置中进行浓度检测。
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