CN118010469A - 一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用 - Google Patents
一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118010469A CN118010469A CN202410411454.1A CN202410411454A CN118010469A CN 118010469 A CN118010469 A CN 118010469A CN 202410411454 A CN202410411454 A CN 202410411454A CN 118010469 A CN118010469 A CN 118010469A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- diluent
- fibrinogen
- fibrinogen concentration
- plasma
- diluted
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 title claims abstract description 217
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 title claims abstract description 217
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 title claims abstract description 217
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 title claims abstract description 112
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 71
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 34
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 17
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 100
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 100
- GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N prostaglandin E1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N 0.000 claims description 68
- GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N (8R,11R,12R,13E,15S)-11,15-Dihydroxy-9-oxo-13-prostenoic acid Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 67
- 229960000711 alprostadil Drugs 0.000 claims description 67
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 14
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 115
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 76
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 76
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 64
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical group CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 50
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 50
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 50
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 24
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 24
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 16
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 12
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 5
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 3
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 2
- 239000000535 fibrinogen concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000004023 fresh frozen plasma Substances 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 206010051124 Hyperfibrinogenaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000035965 Postoperative Complications Diseases 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005536 corrosion prevention Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010073651 fibrinmonomer Proteins 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明属于纤维蛋白原检测技术领域,涉及一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用。本发明提供了一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液,所述稀释液的制备用原料包括咪唑、氯化钠、EACA和转谷氨酰胺酶。本发明所述稀释液能够提高纤维蛋白原即时检测过程中的灵敏度、稳定性和线性拟合程度。
Description
技术领域
本发明属于纤维蛋白原检测技术领域,具体涉及一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用。
背景技术
严重创伤是全球死亡和残疾的主要原因。尽管过去十年创伤管理取得了进步,但与严重创伤相关的大出血仍然是发病率和死亡率的主要原因。在生活中,外伤导致的大出血也是死亡的主要原因。在医院内,分娩、心脏手术、肝移植和术后并发症等也会导致严重出血,这成为造成死亡的主要原因之一。大失血导致的低纤维蛋白原血症,成人首次剂量可以用到2~5 g纤维蛋白原,如果用全血补充至正常水平几乎是不可能的。并且输入的RBC和PLT会将患者的纤维蛋白原稀释至低于凝血阈值水平。目前,纤维蛋白原可以用新鲜冰冻血浆(Fresh frozen plasma,FFP)、冷沉淀(Cryoprecipitate,CRYO)和纤维蛋白原浓缩物(Fibrinogen concentrate,FC)补充。FFP和CRYO在使用前必须解冻,这是一个耗时的过程,通常必须在给药前确认ABO血型相容性。FC具有许多优势,包括纤维蛋白原剂量标准、体积小、保存期长、易于运输、病毒灭活、无需ABO相容性匹配等。所以FC比FFP和CRYO更快地增加血浆纤维蛋白原水平,并能够减少输血量、避免免疫原性和感染的发生。因此FC被广泛用于纤维蛋白原的补充。FC是一种由混合血浆制成的冻干凝血因子浓缩物,在很短时间就可以补充到正常浓度,最多只需要5 min的补充时间,大量输注时会有风险导致高纤维蛋白原血症引起的血栓栓塞。因此,快速准确地检测纤维蛋白原浓度非常重要,进一步精确补充有助于改善预后。
纤维蛋白原临床检测方法需复杂仪器设备,即时检测困难。因此急需一种基于即时检验与微流通道技术的快速检测纤维蛋白原浓度的方法,在大失血等紧急情况下,可快速检测纤维蛋白原浓度,从而评价凝血功能,使得快速止血复苏成为可能,进一步确保患者的生命安全。在一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置及其检测方法(专利号ZL202111036833.X)的应用中,提供了可以实现全血中纤维蛋白原浓度的快速检测的装置,但此装置用于检测时灵敏度、稳定性和线性拟合程度较差。因此,目前缺乏一种灵敏度、稳定性和线性拟合程度更好的稀释液产品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用。本发明所述稀释液能够提高纤维蛋白原即时检测过程中的灵敏度、稳定性和线性拟合程度。
本发明提供了一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液,所述稀释液的制备用原料包括咪唑、氯化钠、EACA和转谷氨酰胺酶。
优选的是,所述稀释液的制备用原料还包括PGE1。
优选的是,所述转谷氨酰胺酶包括FXIII因子。
优选的是,所述稀释液中,咪唑的质量浓度为3.06~3.74 g/L,氯化钠的质量浓度为5.55~6.14 g/L,EACA的质量浓度为1.8~2.2 g/L,转谷氨酰胺酶的质量浓度为45~75 mg/L。
优选的是,所述稀释液中,咪唑的质量浓度为3.4 g/L,氯化钠的质量浓度为5.85g/L,EACA的质量浓度为2 g/L,转谷氨酰胺酶的质量浓度为60 mg/L。
优选的是,所述稀释液中,PGE1的质量浓度为31.91~42.54 mg/L。
优选的是,所述稀释液中,PGE1的质量浓度为35.45 mg/L。
本发明还提供了上述技术方案所述稀释液的制备方法,包括以下步骤:将稀释液的原料与水混合,得到稀释液。
本发明还提供了上述技术方案所述稀释液或上述技术方案所述制备方法制备得到的稀释液在制备定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种非疾病诊断目的的基于上述技术方案所述稀释液或上述技术方案所述制备方法制备得到的稀释液定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的方法,包括以下步骤:
将全血或血浆样品与稀释液混合,得到稀释后的全血或血浆样品;
将稀释后的全血或血浆样品加入纤维蛋白原浓度检测装置中进行浓度检测。
本发明提供了一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液。本发明所述稀释液通过添加转谷氨酰胺酶,可以促进纤维蛋白单体形成稳定的纤维蛋白网,进而提高即时检测过程中的灵敏度、稳定性和线性拟合程度。
进一步的,本发明通过在稀释液中添加PGE1,能够实现对全血和血浆中进行纤维蛋白原浓度的即时快速检测,且检测灵敏度高,稳定性和线性拟合程度好。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例3提供的在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图2为本发明实施例4提供的在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图3为本发明实施例5提供的在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图4为本发明实施例6提供的在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图5为本发明实施例7提供的在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图6为本发明实施例8提供的在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图7为本发明实施例9提供的在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图8为本发明实施例10提供的在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图9为本发明实施例11提供的在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图10为本发明提供的PBS缓冲液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图11为本发明提供的PBS缓冲液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线;
图12为本发明提供的PBS缓冲液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线。
具体实施方式
本发明提供了一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液,所述稀释液的制备用原料包括咪唑、氯化钠、EACA和转谷氨酰胺酶。在本发明中,所述稀释液的溶剂优选为水。在本发明中,所述稀释液的pH值优选为7.3~7.4。本发明所述稀释液能够实现血浆中纤维蛋白原浓度的快速定量检测,检测灵敏度高,重复稳定性好且线性拟合高,线性相关性高。本发明所述稀释液优选配合纤维蛋白原浓度快速检测装置进行使用。本发明所述纤维蛋白原浓度快速检测装置优选为申请号为CN202111036833.X的专利中的装置。所述装置的稀释用试剂,传统采用PBS缓冲液。虽然基于上述装置,PBS缓冲液可以实现全血中纤维蛋白原浓度的快速检测,但检测灵敏度、稳定性和线性拟合程度较差。相对于传统PBS缓冲液,本咪唑稀释液可以进一步提高即时检测在检测过程中的稳定性,灵敏度和线性拟合程度。
在本发明中,所述稀释液中,咪唑的质量浓度优选为3.06~3.74 g/L,更优选为3.4g/L。咪唑主要来源市售产品,咪唑在本发明所述稀释液中的作用为缓冲pH值及防腐。
在本发明中,所述稀释液中,氯化钠的质量浓度优选为5.55~6.14g/L,更优选为5.85 g/L。氯化钠主要来源为市售产品,氯化钠在本发明所述稀释液中的作用为维持溶液渗透压。
在本发明中,所述稀释液中,EACA的质量浓度优选为1.8~2.2g/L,更优选为2 g/L。EACA为6-氨基己酸,来源为市售产品,EACA在本发明所述稀释液中的作用为抗纤溶。
在本发明中,所述稀释液中,转谷氨酰胺酶的质量浓度优选为45~75mg/L,更优选为60 mg/L。在本发明中,所述转谷氨酰胺酶在促进纤维蛋白单体形成稳定的纤维蛋白网的整个凝结过程中发挥主要作用。在本发明中,所述转谷氨酰胺酶优选包括FXIII因子。FXⅢ因子又称为纤维蛋白稳定因子,主要发挥转谷氨酰胺酶的活性,促进纤维蛋白的交联使得纤维蛋白原在凝血过程中形成稳定的纤维蛋白网。在血液中可能存在FXⅢ因子功能减低或者缺乏的情况。同时在血液稀释过程中,血液中FXⅢ因子同样被稀释,使得其发挥转谷氨酰胺酶活性的功能作用被减弱,因此在凝血过程中纤维蛋白单体转化成稳定的纤维蛋白网的能力减弱,其形成的纤维蛋白网稳定性较差。本稀释液配方通过添加FXⅢ因子可明显改善全血在稀释过程中FXⅢ总体数量减少或者全血中FXⅢ不足和缺乏导致的纤维蛋白网凝结不充分而造成的检测结果不稳定、灵敏度降低等问题,进一步提高即时检测过程中结果稳定性。
在本发明中,所述稀释液的制备用原料优选还包括PGE1(前列腺素E1)。在本发明中,PGE1可以消除全血中血小板的影响而对影响纤维蛋白原的活性影响不大。添加了PGE1后,本发明所述稀释液不仅能够实现血浆中纤维蛋白原浓度的检测,还能实现全血中纤维蛋白原浓度的高效检测。在本发明中,所述稀释液中,PGE1的质量浓度优选为31.91~42.54mg/L。更优选为35.45 mg/L。相对于传统PBS缓冲液稀释,添加了PGE1和FXⅢ的稀释液能够通过消除血小板的影响和提高FXⅢ因子活性使得纤维蛋白原在凝血过程中完全转化成稳定的纤维蛋白网,可以进一步提高即时检测过程的灵敏度、稳定性和线性拟合程。
本发明还提供了上述技术方案所述稀释液的制备方法,包括以下步骤:将稀释液的原料与水混合,得到稀释液。将原料和水混合后,本发明优选对pH值进行调节。在本发明中,所述pH值优选为7.3~7.4。本发明优选使用盐酸进行pH值的调节,更优选使用物质的量浓度为0.1 mol/L的盐酸进行调节。
本发明还提供了上述技术方案所述稀释液或上述技术方案所述制备方法制备得到的稀释液在制备定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种非疾病诊断目的的基于上述技术方案所述稀释液或上述技术方案所述制备方法制备得到的稀释液定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的方法,包括以下步骤:
将全血或血浆样品与稀释液混合,得到稀释后的全血或血浆样品;
将稀释后的全血或血浆样品加入纤维蛋白原浓度检测装置中进行浓度检测。
本发明将全血或血浆样品与稀释液混合,得到稀释后的全血或血浆样品。在本发明中,全血或血浆与稀释液混合的体积比优选分别为1:(4~12),更优选为1:8。
得到稀释后的全血或血浆样品后,本发明将稀释后的全血或血浆样品加入纤维蛋白原浓度检测装置中进行浓度检测。本发明优选使用申请号为CN202111036833.X的专利中的装置进行纤维蛋白原浓度检测。得到稀释后的全血或血浆样品后,本发明优选先在37℃下育温大于4min,优选为5 min。育温后,本发明稀释后的全血或血浆样品加入反应孔槽反应。在本发明中,所述反应的时间优选为大于3min,更优选为6min。反应后,本发明将第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸,芯吸后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断血浆纤维蛋白原浓度。
本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明的保护范围不限于下述的实施例。任何在相关领域具备经验的人,都可以按照本发明的原理,通过替换一种或多种原料或更改浓度范围等,提供一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液,实现纤维蛋白原的高灵敏度、强稳定性和较好线性拟合程度的检测。这些并不脱离本发明描述的基本概念。因此,这些修改或不同的应用都在本发明的覆盖范围之内。
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
实施例1-1
咪唑3.4 g,氯化钠5.85 g,EACA 2 g,PGE135.45 mg,FXⅢ因子60 mg 加于约500mL水中;加0.1 mol/L盐酸186 mL,调pH至7.3~7.4,最后加蒸馏水至1L。
实施例1-2
咪唑3.06 g,氯化钠5.55 g,EACA 1.8 g,PGE1 31.91 mg,FXⅢ因子45 mg 加于约500 mL水中;加0.1 mol/L盐酸170 mL,调pH至7.3~7.4,最后加蒸馏水至1L。
实施例1-3
咪唑3.74 g,氯化钠6.14g,EACA 2.2 g,PGE1 42.54 mg,FXⅢ因子 75 mg 加于约500 mL水中;加0.1 mol/L盐酸205 mL,调pH至7.3~7.4,最后加蒸馏水至1L。
实施例2-1
咪唑3.4 g,氯化钠5.85 g,EACA 2 g,FXⅢ因子60 mg 加于约500 mL水中;加0.1mol/L盐酸186 mL,调pH至7.3~7.4,最后加蒸馏水至1L。
实施例2-2
咪唑3.06 g,氯化钠5.55 g,EACA 1.8g,FXⅢ因子45 mg 加于约500 mL水中;加0.1 mol/L盐酸170 mL,调pH至7.3~7.4,最后加蒸馏水至1L。
实施例2-3
咪唑3.74 g,氯化钠6.14 g,EACA 2.2 g,FXⅢ因子75 mg 加于约500 mL水中;加0.1 mol/L盐酸205 mL,调pH至7.3~7.4,最后加蒸馏水至1L。
实施例3
使用添加PGE1的稀释液(实施例1-1制备得到)对血浆样品进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测血浆样品与本稀释液按1:8稀释混合,得稀释后的血浆样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min,血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;血浆纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表1所示:
表1 试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 5.40 | 3.80 | 3.2 | 2.10 |
2 | 5.80 | 3.50 | 3.2 | 2.20 |
3 | 5.60 | 3.60 | 2.80 | 2.35 |
平均值 | 5.60 | 3.63 | 3.07 | 2.22 |
SD | 0.16 | 0.12 | 0.19 | 0.10 |
CV | 2.92% | 3.43% | 6.15% | 4.63% |
在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图1所示。
根据表1和图1试验结果可以看出,血浆在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好,SD值均小于0.2,变异系数均不超过7%。总体线性拟合好,线性相关性高,R2可以达到0.9339,且k=-1.573,线性斜率较大,对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例4
使用添加PGE1的稀释液(实施例1-2制备得到)对血浆样品进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测血浆样品与本稀释液按1:8稀释混合,得稀释后的血浆样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min,血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;血浆纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表2所示:
表2 试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 5.40 | 3.70 | 3.10 | 2.20 |
2 | 5.70 | 3.60 | 3.10 | 2.30 |
3 | 5.80 | 3.40 | 2.70 | 2.00 |
平均值 | 5.63 | 3.57 | 2.97 | 2.17 |
SD | 0.17 | 0.12 | 0.19 | 0.12 |
CV | 3.02% | 3.50% | 6.36% | 5.76% |
在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图2所示。
根据表2和图2试验结果可以看出,血浆在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好,SD值均小于0.2,变异系数均不超过7%。总体线性拟合好,线性相关性高,R2可以达到0.9269,且k=-1.614,线性斜率较大,对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例5
使用添加PGE1的稀释液(实施例1-3制备得到)对血浆样品进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测血浆样品与本稀释液按1:8稀释混合,得稀释后的血浆样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min,血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;血浆纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表3所示:
表3试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 5.30 | 3.50 | 3.05 | 2.00 |
2 | 5.70 | 3.25 | 3.00 | 2.10 |
3 | 5.60 | 3.60 | 2.70 | 2.20 |
平均值 | 5.53 | 3.45 | 2.92 | 2.10 |
SD | 0.17 | 0.15 | 0.15 | 0.08 |
CV | 3.07% | 4.27% | 5.30% | 3.89% |
在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图3所示。
根据表3和图3试验结果可以看出,血浆在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好,SD值均小于0.2,变异系数均不超过6%。总体线性拟合好,线性相关性高,R2可以达到0.9225,且k=-1.592,线性斜率较大,对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例6
使用不添加PGE1的稀释液(实施例2-1制备得到)对血浆样品进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测血浆样品与不添加PGE1稀释液按1:8稀释混合,得稀释后的血浆样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min,血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表4所示:
表4 试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 5.5 | 3.7 | 3.3 | 2.2 |
2 | 5.7 | 3.6 | 3.2 | 2.1 |
3 | 5.65 | 3.7 | 3.0 | 2.3 |
平均值 | 5.62 | 3.67 | 3.17 | 2.20 |
SD | 0.08 | 0.05 | 0.12 | 0.08 |
CV | 1.51% | 1.29% | 3.94% | 3.71% |
在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图4所示。
从表4和图4试验结果可以看出,血浆在不添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好,SD值均小于0.2,变异系数均不超过4%。总体线性拟合好,线性相关性高,R2可以达到0.9455,且k=-1.582,线性斜率较大,对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例7
使用不添加PGE1的稀释液(实施例2-2制备得到)对血浆样品进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测血浆样品与不添加PGE1稀释液按1:8稀释混合,得稀释后的血浆样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min,血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表5所示:
表5 试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 5.90 | 3.80 | 3.00 | 2.30 |
2 | 5.80 | 3.50 | 3.40 | 2.40 |
3 | 5.50 | 3.70 | 3.10 | 2.0 |
平均值 | 5.73 | 3.67 | 3.17 | 2.23 |
SD | 0.17 | 0.12 | 0.17 | 0.17 |
CV | 2.96% | 3.40% | 5.37% | 7.61% |
在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图5所示。
从表5和图6试验结果可以看出,血浆在不添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好,SD值均小于0.2,变异系数均不超过8%。总体线性拟合好,线性相关性高,R2可以达到0.9299,且k=-1.618,线性斜率较大,对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例8
使用不添加PGE1的稀释液(实施例2-3制备得到)对血浆样品进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测血浆样品与不添加PGE1稀释液按1:8稀释混合,得稀释后的血浆样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min,血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断血浆纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用不添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表6所示:
表6试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 5.90 | 3.70 | 3.30 | 2.10 |
2 | 5.70 | 3.30 | 3.00 | 1.90 |
3 | 5.70 | 3.50 | 3.10 | 2.30 |
平均值 | 5.77 | 3.50 | 3.13 | 2.10 |
SD | 0.09 | 0.16 | 0.12 | 0.16 |
CV | 1.63% | 4.67% | 3.98% | 7.78% |
在不添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图6所示。
从表6和图6试验结果可以看出,血浆在不添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好,SD值均小于0.2,变异系数均不超过8%。总体线性拟合好,线性相关性高,R2可以达到0.9151,且k=-1.676,线性斜率较大,对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例9
使用添加PGE1的稀释液(实施例1-1制备得到)对全血样品进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测全血样品与添加PGE1该稀释液按1:8稀释混合,得稀释后的全血样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释全血样品加入反应孔槽反应6 min,全血中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;全血中纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断全血中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表7所示:
表7 试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 5.4 | 3.7 | 3.1 | 2.1 |
2 | 5.7 | 3.6 | 3.0 | 2.1 |
3 | 5.5 | 3.5 | 2.8 | 2.2 |
平均值 | 5.53 | 3.60 | 2.97 | 2.13 |
SD | 0.12 | 0.08 | 0.12 | 0.05 |
CV | 2.25% | 2.27% | 4.20% | 2.21% |
在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图7所示。
从表7和图7试验结果可以看出,全血在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好,SD值均小于0.2,变异系数均不超过5%。总体线性拟合好,线性相关性高,R2可以达到0.9460,且k=-1.590,线性斜率较大,对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例10
使用添加PGE1的稀释液(实施例1-2制备得到)对全血样品进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测全血样品与添加PGE1该稀释液按1:8稀释混合,得稀释后的全血样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释全血样品加入反应孔槽反应6 min,全血中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;全血中纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断全血中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表8所示:
表8试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 5.70 | 3.70 | 3.15 | 2.30 |
2 | 5.60 | 3.40 | 3.20 | 2.20 |
3 | 5.40 | 3.50 | 3.30 | 2.10 |
平均值 | 5.57 | 3.53 | 3.22 | 2.20 |
SD | 0.12 | 0.12 | 0.06 | 0.08 |
CV | 2.24% | 3.53% | 1.94% | 3.71% |
在添加PGE1稀释液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图8所示。
从表8和图8试验结果可以看出,全血在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好,SD值均小于0.2,变异系数均不超过4%。总体线性拟合好,线性相关性高,R2可以达到0.9230,且k=-1.535,线性斜率较大,对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
实施例11
使用添加PGE1的稀释液(实施例1-3制备得到)对全血样品进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测全血样品与添加PGE1该稀释液按1:8稀释混合,得稀释后的全血样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释全血样品加入反应孔槽反应6 min,全血中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;全血中纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断全血中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用添加PGE1的稀释液稀释。试验结果如表9所示:
表9试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 5.50 | 3.60 | 3.20 | 2.10 |
2 | 5.60 | 3.30 | 3.10 | 2.30 |
3 | 5.35 | 3.50 | 3.00 | 2.00 |
平均值 | 5.48 | 3.47 | 3.10 | 2.13 |
SD | 0.10 | 0.12 | 0.08 | 0.12 |
CV | 1.87% | 3.60% | 2.63% | 5.85% |
在添加PGE1稀释液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图9所示。
从表9和图9试验结果可以看出,全血在添加PGE1稀释液稀释后结果重复性较好,SD值均小于0.2,变异系数均不超过6%。总体线性拟合好,线性相关性高,R2可以达到0.9238,且k=-1.534,线性斜率较大,对于区分纤维蛋白原浓度敏感性较高。
比较例1
以PBS作为稀释液,对血浆中的纤维蛋白原浓度进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测血浆样品与PBS缓冲液按1:8稀释混合,得稀释后的血浆样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min,血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断血浆中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用PBS缓冲液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L,采用PBS缓冲液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用PBS缓冲液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用PBS缓冲液稀释。试验结果如表10所示:
表10 试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 9.60 | 8.80 | 8.20 | 7.30 |
2 | 9.50 | 8.30 | 8.20 | 7.40 |
3 | 9.00 | 8.00 | 8.90 | 7.50 |
平均值 | 9.37 | 8.37 | 8.43 | 7.40 |
SD | 0.26 | 0.33 | 0.33 | 0.08 |
CV | 2.80% | 3.94% | 3.91% | 1.10% |
PBS缓冲液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图10所示。
通过与本稀释液比较,比较例中线性拟合R2=0.8182,拟合程度较本稀释液差,k=-0.8614,斜率较小,对于纤维蛋白原浓度区分的灵敏性较本稀释液差。通过与PBS缓冲液比较,本稀释液的试验结果中明显进一步促进纤维蛋白原形成稳定的纤维蛋白网,减小SD值,提高了整体线性相关性,并使得整体线性斜率增加,提高了血浆纤维蛋白原浓度检测过程中的稳定性、灵敏度和线性拟合程度。
比较例2
以PBS作为稀释液,对血浆中的纤维蛋白原浓度进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测血浆样品与PBS缓冲液按1:8稀释混合,得稀释后的血浆样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释血浆样品加入反应孔槽反应6 min,血浆中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;血浆中纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断血浆中纤维蛋白原浓度。已知组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用PBS缓冲液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9g/L,采用PBS缓冲液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用PBS缓冲液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用PBS缓冲液稀释。试验结果如表11所示:
表11 试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 9.7 | 8.7 | 8.1 | 7.2 |
2 | 9.4 | 8.5 | 8.3 | 7.5 |
3 | 8.9 | 8.0 | 8.7 | 7.8 |
平均值 | 9.33 | 8.40 | 8.37 | 7.50 |
SD | 0.33 | 0.29 | 0.25 | 0.24 |
CV | 3.54% | 3.50% | 2.98% | 3.27% |
PBS缓冲液稀释下血浆中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图11所示。
通过与本稀释液比较,比较例中线性拟合R2=0.8120,拟合程度较本稀释液差,k=-0.8245,斜率较小,对于纤维蛋白原浓度区分的灵敏性较本稀释液差。通过与PBS缓冲液比较,本稀释液的试验结果中明显进一步促进纤维蛋白原形成稳定的纤维蛋白网,减小SD值,提高了整体线性相关性,并使得整体线性斜率增加,提高了血浆纤维蛋白原浓度检测过程中的稳定性、灵敏度和线性拟合程度。
比较例3
以PBS作为稀释液,对全血中的纤维蛋白原浓度进行检测:
采用一种全血中纤维蛋白原浓度快速检测装置(申请号CN202111036833.X)进行检测,分别取已知纤维蛋白原浓度的血液样品按如下步骤进行检测:将待测全血样品与PBS缓冲液按1:8稀释混合,得到稀释后的全血样品,在37℃下育温5 min后,再取150 μL稀释全血样品加入反应孔槽反应6 min,全血中的纤维蛋白原与凹槽内的第一试纸条1上的凝血酶反应,并在第一试纸条1上凝结形成纤维蛋白凝块,形成芯吸阻力;全血中纤维蛋白原与凝血酶反应完成,纤维蛋白凝块的量恒定,对芯吸的阻力恒定,此时将阻隔片3抽出,第二试纸条2与第一试纸条1搭接,第二试纸条2开始芯吸;由于随着纤维蛋白原浓度的增加,试纸条上面生成的纤维蛋白凝块越大,从而对芯吸阻滞越明显,芯吸长度越短,因此第二试纸条2芯吸4 min后,通过读取芯吸长度判断芯吸阻力的大小,进而判断全血中纤维蛋白原浓度。分别取已知血浆纤维蛋白原浓度的血液样品按上述步骤进行检测。组1纤维蛋白原浓度为1.14 g/L,采用PBS缓冲液稀释;组2纤维蛋白原浓度为1.9 g/L,采用PBS缓冲液稀释;组3纤维蛋白原浓度为2.52 g/L,采用PBS缓冲液稀释;组4纤维蛋白原浓度为3.22 g/L,采用PBS缓冲液稀释。试验结果如表12所示:
表12 试验结果
组1(cm) | 组2(cm) | 组3(cm) | 组4(cm) | |
1 | 9.0 | 8.6 | 8.0 | 7.0 |
2 | 9.5 | 8.2 | 7.8 | 7.3 |
3 | 8.6 | 7.9 | 8.5 | 7.6 |
平均值 | 9.03 | 8.23 | 8.10 | 7.30 |
SD | 0.37 | 0.29 | 0.29 | 0.24 |
CV | 4.08% | 3.48% | 3.63% | 3.36% |
PBS缓冲液稀释下全血中纤维蛋白原浓度与芯吸长度拟合曲线如图12所示。
通过与本稀释液比较,比较例中线性拟合R2=0.8221,拟合程度较本稀释液差,k=-0.7807,斜率较小,对于纤维蛋白原浓度区分的灵敏性较本稀释液差。通过与PBS缓冲液比较,本稀释液的试验结果中明显进一步促进纤维蛋白原形成稳定的纤维蛋白网,减小SD值,提高了整体线性相关性,并使得整体线性斜率增加,提高了全血中纤维蛋白原浓度检测过程中的稳定性、灵敏度和线性拟合程度。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述,但它仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部实施例,人们还可以根据本实施例在不经创造性劳动的前提下获得其他实施例,这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液,其特征在于,所述稀释液的制备用原料包括咪唑、氯化钠、EACA和转谷氨酰胺酶。
2.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,所述稀释液的制备用原料还包括PGE1。
3.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,所述转谷氨酰胺酶包括FXIII因子。
4.根据权利要求1或3所述的稀释液,其特征在于,所述稀释液中,咪唑的质量浓度为3.06~3.74g/L,氯化钠的质量浓度为5.55~6.14 mg/L,EACA的质量浓度为1.8~2.2 g/L,转谷氨酰胺酶的质量浓度为45~75 mg/L。
5.根据权利要求4所述的稀释液,其特征在于,所述稀释液中,咪唑的质量浓度为3.4g/L,氯化钠的质量浓度为5.85 g/L,EACA的质量浓度为2 g/L,转谷氨酰胺酶的质量浓度为60 mg/L。
6.根据权利要求2所述的稀释液,其特征在于,所述稀释液中,PGE1的质量浓度为31.91~42.54 mg/L。
7.根据权利要求6所述的稀释液,其特征在于,所述稀释液中,PGE1的质量浓度为35.45mg/L。
8.权利要求1~7任一项所述稀释液的制备方法,包括以下步骤:将稀释液的原料与水混合,得到稀释液。
9.权利要求1~7任一项所述稀释液或权利要求8所述制备方法制备得到的稀释液在制备定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的试剂盒中的应用。
10.一种非疾病诊断目的的基于权利要求1~7任一项所述稀释液或权利要求8所述制备方法制备得到的稀释液定量检测全血或血浆中纤维蛋白原浓度的方法,包括以下步骤:
将全血或血浆样品与稀释液混合,得到稀释后的全血或血浆样品;
将稀释后的全血或血浆样品加入纤维蛋白原浓度检测装置中进行浓度检测。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202410411454.1A CN118010469B (zh) | 2024-04-08 | 2024-04-08 | 一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202410411454.1A CN118010469B (zh) | 2024-04-08 | 2024-04-08 | 一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN118010469A true CN118010469A (zh) | 2024-05-10 |
CN118010469B CN118010469B (zh) | 2024-07-02 |
Family
ID=90943131
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202410411454.1A Active CN118010469B (zh) | 2024-04-08 | 2024-04-08 | 一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN118010469B (zh) |
Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1469468A1 (ru) * | 1987-04-03 | 1989-03-30 | Московский медицинский стоматологический институт им.Н.А.Семашко | Способ определени гиперфибриногенолитической активности крови |
SU1659855A1 (ru) * | 1987-03-10 | 1991-06-30 | Тюменский государственный медицинский институт | Способ определени содержани продуктов деградации фибрина в плазме |
WO1991017444A1 (en) * | 1990-05-03 | 1991-11-14 | Blombaeck Birger | A METHOD OF DETERMINING QUANTITATIVELY FIBRINOGEN, FIBRONECTIN, α2-ANTIPLASMIN OR A TRANSLUTAMINASE |
US5508202A (en) * | 1992-09-11 | 1996-04-16 | Nippon Shoji Kaisha, Ltd. | Method of determining blood coagulation factor XIII activity and kit of reagents for the determination |
US5851836A (en) * | 1994-09-02 | 1998-12-22 | Nippon Shoji Kaisha Ltd. | Method for determining fibrinogen and reagent for determination thereof |
CN101558310A (zh) * | 2006-12-21 | 2009-10-14 | 积水医疗株式会社 | 含凝血酶的溶液中的α-凝血酶的稳定化方法 |
CN102000025A (zh) * | 2010-10-26 | 2011-04-06 | 西安力邦制药有限公司 | 无痛新型前列地尔脂肪乳制剂的稀释剂、稀释配伍方法和应用 |
US20170045494A1 (en) * | 2014-04-28 | 2017-02-16 | T2 Biosystems, Inc. | Systems and methods for identifying coagulopathies |
CN106574922A (zh) * | 2014-05-05 | 2017-04-19 | 美国血液技术公司 | 用于检测纤维蛋白溶解和纤溶亢进的方法学和试剂 |
CN110257475A (zh) * | 2019-06-28 | 2019-09-20 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 纤维蛋白原检测试剂及其制备方法及检测试剂制品 |
CN113025685A (zh) * | 2021-03-25 | 2021-06-25 | 哈尔滨瀚邦医疗科技有限公司 | 一种测定凝血因子xiii活性的方法及其在猪血制品检测中的应用 |
US20210299179A1 (en) * | 2020-02-04 | 2021-09-30 | Cellphire, Inc. | Methods of treating congenital hemophilia with anti-fibrinolytic loaded platelets |
CN115792222A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-03-14 | 北京乐普诊断科技股份有限公司 | 一种血小板p2y12受体抑制率的免疫层析检测试剂盒和制备方法及检测方法 |
-
2024
- 2024-04-08 CN CN202410411454.1A patent/CN118010469B/zh active Active
Patent Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1659855A1 (ru) * | 1987-03-10 | 1991-06-30 | Тюменский государственный медицинский институт | Способ определени содержани продуктов деградации фибрина в плазме |
SU1469468A1 (ru) * | 1987-04-03 | 1989-03-30 | Московский медицинский стоматологический институт им.Н.А.Семашко | Способ определени гиперфибриногенолитической активности крови |
WO1991017444A1 (en) * | 1990-05-03 | 1991-11-14 | Blombaeck Birger | A METHOD OF DETERMINING QUANTITATIVELY FIBRINOGEN, FIBRONECTIN, α2-ANTIPLASMIN OR A TRANSLUTAMINASE |
US5508202A (en) * | 1992-09-11 | 1996-04-16 | Nippon Shoji Kaisha, Ltd. | Method of determining blood coagulation factor XIII activity and kit of reagents for the determination |
US5851836A (en) * | 1994-09-02 | 1998-12-22 | Nippon Shoji Kaisha Ltd. | Method for determining fibrinogen and reagent for determination thereof |
CN101558310A (zh) * | 2006-12-21 | 2009-10-14 | 积水医疗株式会社 | 含凝血酶的溶液中的α-凝血酶的稳定化方法 |
CN102000025A (zh) * | 2010-10-26 | 2011-04-06 | 西安力邦制药有限公司 | 无痛新型前列地尔脂肪乳制剂的稀释剂、稀释配伍方法和应用 |
US20170045494A1 (en) * | 2014-04-28 | 2017-02-16 | T2 Biosystems, Inc. | Systems and methods for identifying coagulopathies |
CN106574922A (zh) * | 2014-05-05 | 2017-04-19 | 美国血液技术公司 | 用于检测纤维蛋白溶解和纤溶亢进的方法学和试剂 |
CN110257475A (zh) * | 2019-06-28 | 2019-09-20 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 纤维蛋白原检测试剂及其制备方法及检测试剂制品 |
US20210299179A1 (en) * | 2020-02-04 | 2021-09-30 | Cellphire, Inc. | Methods of treating congenital hemophilia with anti-fibrinolytic loaded platelets |
CN113025685A (zh) * | 2021-03-25 | 2021-06-25 | 哈尔滨瀚邦医疗科技有限公司 | 一种测定凝血因子xiii活性的方法及其在猪血制品检测中的应用 |
CN115792222A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-03-14 | 北京乐普诊断科技股份有限公司 | 一种血小板p2y12受体抑制率的免疫层析检测试剂盒和制备方法及检测方法 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
JANENE K: "Effect of sodium citrate, low molecular weight heparin, and prostaglandin E1 on aggregation, fibrinogen binding, and enumeration of equine platelets", AJVR, vol. 62, no. 4, 1 April 2001 (2001-04-01) * |
MACKIE IJ, KITCHEN S, MACHIN SJ, LOWE SDO, 董宁征: "纤维蛋白原检测的指南", 国外医学.输血及血液学分册, no. 02 * |
刘丽敏等: "《 临床血液透析指南[M]》", 30 November 1997, 黑龙江科学技术出版社, pages: 66 * |
刘培楠: "《基础分子生物学》", 31 May 1993, 高等教育出版社, pages: 85 * |
曹海涛: "血浆纤维蛋白原的实验室检测方法与临床应用进展", 现代中西医结合杂志, no. 15, 5 March 2006 (2006-03-05) * |
王加瑞: "血浆纤维蛋白原检测的方法及临床应用", 右江医学, 30 August 2002 (2002-08-30) * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN118010469B (zh) | 2024-07-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Vermylen et al. | A rapid enzymatic method for assay of fibrinogen fibrin polymerization time (FPT test) | |
Schöchl et al. | Goal-directed coagulation management of major trauma patients using thromboelastometry (ROTEM®)-guided administration of fibrinogen concentrate and prothrombin complex concentrate | |
Astrup et al. | The estimation of fibrinogen A revision | |
US4389490A (en) | Method of stabilizing platelets for determining multiple platelet parameters in reference control and calibrator compositions; and diluents thereof | |
JPH0275953A (ja) | 血液凝固因子安定化法 | |
US5175087A (en) | Method of performing tissue plasminogen activator assay | |
Crowley | Determination of uric acid: an automated analysis based on a carbonate method | |
CN114729949A (zh) | 凝血酶溶液、试剂盒、凝血酶的稳定化方法、检测试剂、凝血酶时间的测定方法以及消泡剂的用途 | |
CN118010469B (zh) | 一种纤维蛋白原浓度定量检测稀释液及其制备方法与应用 | |
CN106367471B (zh) | 用于测定总胆固醇的试剂盒和方法 | |
CN114544983A (zh) | 一种凝血与血小板功能分析仪用正常值质控品的制备方法 | |
CA3083551A1 (en) | Prothrombin time reagent comprising an iron chelator | |
JPH0870895A (ja) | フィブリノゲン測定方法およびその測定試薬 | |
Clayton et al. | Quantification of thrombelastographic changes after blood component transfusion in patients with liver disease in the intensive care unit | |
Smit et al. | Haematological assessment of generally used freshwater fish blood anticoagulants | |
Protti et al. | The delicate balance between pro-(risk of thrombosis) and anti-(risk of bleeding) coagulation during extracorporeal membrane oxygenation | |
KR101882408B1 (ko) | 혈액응고시간 연장제 | |
Aggeler et al. | STANDARDIZATION OF THE QUICK PROTHROMBIN TEST: WITH REFERENCE TO THE STATISTICAL SIGNIFICANCE OF VARIATIONS IN THE PROTHROMBIN CONCENTRATION WITH USE OF A STABLE THROMBOPLASTIN OF HIGH POTENCY | |
Björkman et al. | Demonstration of a fibrinolytic activator in red bone marrow | |
Innerfield et al. | Studies on trypsin: I. The anticoagulant action of trypsin | |
CN103217525B (zh) | 一种含有提高胱抑素c胶乳包被抗体的稳定性的组合物、稳定剂及其制备方法和用途 | |
EP2919014A1 (en) | Composition for use as an abnormal coagulation control plasma in in vitro assays | |
CN115517243A (zh) | 一种血浆保存液、凝血质控品及其应用 | |
Freeman et al. | Roles of prothrombin activity, heparin-protamine titer and platelet concentration in bleeding of leukemia | |
CN106596981B (zh) | 一种用于测定凝血功能的试剂盒 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant |