CN117986235A

CN117986235A - p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途

Info

Publication number: CN117986235A
Application number: CN202311456959.1A
Authority: CN
Inventors: 陆标; 杨方龙; 耿开骏; 王思勤; 金磊
Original assignee: Changchun Genescience Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Changchun Genescience Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2022-11-04
Filing date: 2023-11-03
Publication date: 2024-05-07

Abstract

本发明提供了一种式(I)所示的化合物，其具有良好的p53‑Y220C突变体激活作用，能够有效恢复p53‑Y220C突变蛋白的活性，可用于治疗含p53‑Y220C突变蛋白的肿瘤疾病，以及制备用于此类病症或疾病的药物。

Description

p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途

本发明要求享有于2022年11月4日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202211379812.2，名称为“p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途”；于2022年11月25日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202211494089.2，名称为“p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途”；于2022年12月19日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202211635002.9，名称为“p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途”；于2023年2月3日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202310055082.9，名称为“p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途”；于2023年3月31日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202310338581.9，名称为“p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途”；于2023年5月16日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202310551016.0，名称为“p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途”；于2023年5月30日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202310628500.9，名称为“p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途”；于2023年6月20日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202310735234.X，名称为“p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途”的在先申请的优先权。上述在先申请的全文通过引用的方式结合于本发明中。

技术领域

本发明属于药物化合物领域，具体涉及p53-Y220C选择性小分子重激活剂化合物、药物组合物及其用途。

背景技术

肿瘤是一系列相关疾病的集合，其特征是肿瘤细胞不受控制地增殖，并可能转移到全身各处。肿瘤细胞增殖离不开原癌基因和抑癌基因，基因突变可导致二者异常激活或活性抑制，进一步促进不受控制的细胞分裂。TP53作为著名的抑癌基因，被称为“基因组卫士”。TP53属于p53样转录因子家族，包括三个成员TP53、TP63和TP73基因，分别编码p53、p63和p73三种蛋白质。它们结构相似：DNA结合结构域几乎相同，均可与相似的DNA特异性序列结合，调节相同基因和一些不同基因的转录；C端结构域在大小、序列和功能上各不相同，调节DNA结合和转录，介导蛋白相互作用；N末端序列至少编码两个不同的转录激活结构域。同p53相似，p63也是一个关键的转录因子，通过诱导细胞凋亡以应答DNA损伤，作用于颅骨、面部、四肢和中枢神经系统，参与全身鳞状细胞上皮的产生和再生。纤毛上皮细胞的产生则需要p73，作用于雄性生殖细胞、免疫系统、听力系统、气管、肺、中枢神经系统等。

p53抑癌因子主要分布于细胞核浆，作为细胞应激的感受器，可应答于多种细胞应激，包括紫外线辐射、缺氧、癌基因激活和DNA损伤等。p53激活后以四聚体形式与特定的DNA序列结合，介导下游的基因转录，通过多种机制抑制癌症进展，如包括调控细胞周期，凋亡，衰老，干细胞分化，代谢(降低糖合成)，ROS和线粒体，DNA损伤修复等。p53可以激活参与上述途径的蛋白质，包括例如Fas/Apol、KILLER/DR5、Bax、Puma、Noxa、Bid、caspase-3、caspase6、caspase 7、caspase_8、caspase-9和p21。此外，p53还可以抑制多种基因的转录，包括c-MYC、Cyclin B、VEGF、RAD51、hTERT。

由于其在肿瘤抑制中的关键作用，TP53基因是人类癌症中最常发生突变的基因，近50％恶性肿瘤中存在p53突变。与其他抑癌基因如RB1，APC,PTEN等的突变相反，大多数TP53突变是错义突变，比例高达75％。错义突变大多位于p53的DNA结合结构域，导致DNA识别和结合所需的蛋白序列异常折叠。p53可能发生突变的氨基酸位点有很多，如Vall43、Hisl68、Argl75、Tyr220、Gly245、Arg248、Arg299、Phe270、Arg273和Arg282。相应地，可以废除野生型p53活性的p53突变包括，例如，R175H、Y220C、G245S、R248Q、R248W、R273H和R282H。这些p53突变既可以扭曲DNA结合位点的结构，也可破坏其热力学稳定性。TP53突变后通过纯合子缺失(loss of Homozygousity)的形式失去野生型p53的抑癌转录活性；通过杂合子缺失的形式表现为显性负性作用(Dominant negative effects)，以及功能获得性作用(Gain of function)如增加与p63和p73的结合等特征，从而促进肿瘤发生发展。因此，突变的p53蛋白可以被看作是一组异质蛋白，具有不同程度的正常肿瘤抑制功能的丧失和致癌特性的获得(GOF)。

尽管不同p53突变体的活性不同，TP53错义突变体可以看作为原癌基因，促进肿瘤迁移、耐药导致预后不良，从而成为药物开发的治疗靶点。其中，致癌的p53 Y220C突变体展现出特别合适的小分子稳定剂开发的典型结构。它是在癌症中发现的第九大最常见的p53错义突变，全球每年约10万例新发癌症病例。Tyr220突变为Cys会在p53 DBD表面形成一个狭窄的疏水性裂缝，从而降低其热稳定性约为4kcal/mol。野生型p53是中等稳定的，在44℃熔化变性，而Y220C突变蛋白在生理条件的体温下就迅速从折叠状态展开变性，有效地消除了p53野生型的抑癌信号并驱动肿瘤发生。重要的是，Y220C突变引起的疏水性裂缝远离参与DNA识别或蛋白质相互作用的p53蛋白表面，从而允许在不干扰其与天然DNA底物结合的情况下开发小分子药物。Y220C突变体是一种温度敏感突变体，在较低的温度下与DNA结合，在体温下变性。当小分子化合物选择性地与p53-Y220C突变体结合后，该化合物可以稳定Y220C突变体，以减少p53蛋白质在体温下变性的可能性，将p53从未折叠状态转变为折叠状态，恢复p53的野生型构象及转录活性。

研究表明已有若干小分子可与Y220C突变体的疏水裂隙结合，如PK083，PK7088，PK5196，PC14586等，但仍存在起效浓度较高，因此不能排除是否是脱靶(off-target)的作用。因此，仍需开发更优的小分子从而更特异的与Y220C突变体结合，更好的恢复p53野生型的结构与转录活性，更有效的抑制肿瘤。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种式(I)所示的化合物及其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、前药或其药学上可接受的盐：

其中，

R₁、R₂相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基；

R₃选自H、C_1-12烷基；

X₁选自NR_x11、CR_x12、O、S；

X₂选自NR_x21、CR_x22、O、S；

R_x11、R_x21相同或不同，其不存在或彼此独立地选自H、无取代或任选被一个、两个或更多个R_x1a取代的下列基团：C_1-12烷基、C_3-12环烷基；每个R_x1a相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、羟基、氨基、氧代(＝O)、卤素；

R_x12、R_x22相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、无取代或任选被一个、两个或更多个R_x1b取代的下列基团：C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、C_3-12环烷基；每个R_x1b相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、羟基、氨基、氧代(＝O)、卤素；

X₃、X₄相同或不同，彼此独立地选自C或N，且X₃和X₄不同时为N；

表示单键或双键；

环A选自C_6-14芳环、5-14元杂芳环或5-14元杂环；

Y不存在或者选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_y6取代的下列基团：-C(＝O)-R_y1、-S(＝O)-R_y2、-S(＝O)₂-R_y3、-P(＝O)(R_y4)(R_y5)、-S(＝O)(＝NH)-R_y7、-S(＝O)(＝NR_y8)-R_y7、-C_1-6烷基-S(＝O)₂-R_y3、-C_1-6烷基-S(＝O)(＝NH)-R_y7、-C_1-6烷基-S(＝O)(＝NR_y8)-R_y7、-C_1-6烷基-C(＝O)-R_y1；R_y1、R_y2、R_y3、R_y4、R_y5、R_y7、R_y8、R_y9、R_y10相同或不同，彼此独立地选自H、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、卤代C_1-12烷基、卤代C_1-12烷氧基、C_1-12烷基-NH-、C_3-12环烷基-NH-、(C_1-12烷基)₂N-、NH₂、卤代C_1-12烷基-NH-、氰基C_1-12烷基-NH-、C_1-6烷基-(3-14元杂环基)-NH-、C_3-12环烷基、3-14元杂环基；或者R_y9和R_y10与其连接的S原子共同形成3-8元含S杂环；或者Y选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_y6取代的下列基团：C_3-12环烷基、3-14元杂环基、C_6-14芳基、5-14元杂芳基；每个R_y6相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、羟基、氧代(＝O)、卤素、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、卤代C_1-12烷基、卤代C_1-12烷氧基、羟基C_1-12烷基；或者，两个R_y6与其各自连接的原子形成C_3-12烷基环；

每个R_a相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、卤素、氧代(＝O)、无取代或任选被一个、两个或更多个R_a1取代的下列基团：C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、C_3-12环烷基、C_3-12环烷氧基、(3-14元杂环基)-O-、-C(＝O)-R_a11；或者，两个R_a与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_a1取代的3-12元环状基团；每个R_a1相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、羟基、氧代(＝O)、卤素、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、卤代C_1-12烷基、卤代C_1-12烷氧基、C_3-12环烷基、羟基C_1-12烷基、氰基C_1-12烷基；或者，两个R_a1与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_a2取代的3-12元环状基团；每个R_a2相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、卤代C_1-12烷基、卤代C_1-12烷氧基；R_a11选自H、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、卤代C_1-12烷基、卤代C_1-12烷氧基、C_1-12烷基-NH-、C_3-12环烷基-NH-、(C_1-12烷基)₂N-、NH₂、卤代C_1-12烷基-NH-、氰基C_1-12烷基-NH-、(3-14元杂环基)-NH-；

m选自0、1、2、3、4或5；

或者，Y和一个R_a与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_a1取代的3-12元杂环或C_3-12烷基环；

环E选自C_6-14芳环、5-14元杂芳环、C_3-12环烷烃环、3-12元杂环；

每个R_e相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、卤素、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、卤代C_1-12烷基、卤代C_1-12烷氧基；或者，两个R_e与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_e1取代的3-8元环状基团；每个R_e1相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、卤素、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基；n选自0、1、2、3、4或5；

Z选自NH、O、S、CH₂；

R_z选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_z1取代的下列基团：3-14元杂环基、C_3-12环烷基；每个R_z1相同或不同，彼此独立地选自H、OH、氰基、氧代(＝O)、卤素、无取代或任选被一个、两个或更多个R_z2取代的下列基团：CH₂＝、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、C_3-12环烷基、3-14元杂环基、C_1-12烷基-NH-、(C_1-12烷基)₂N-；每个R_z2相同或不同，彼此独立地选自H、OH、氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基。

根据一些实施方案，R₁、R₂、R₃相同或不同，彼此独立地选自H、C_1-6烷基。

根据一些实施方案，R₁、R₂、R₃均为H。

根据一些实施方案，当X₁选自NR_x11时，X₂选自CR_x22、O、S；当X₁选自CR_x12时，X₂选自NR_x21、O、S；当X₁选自O或S时，X₂选自NR_x21或CR_x22；

根据一些实施方案，R_x11、R_x21相同或不同，其不存在或彼此独立地选自H、无取代或任选被一个、两个或更多个R_x1a取代的下列基团：C_1-6烷基、C_3-8环烷基；每个R_x1a相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、羟基、卤素；

根据一些实施方案，R_x12、R_x22相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、无取代或任选被一个、两个或更多个R_x1b取代的下列基团：C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_3-8环烷基；每个R_x1b相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、卤素；

根据一些实施方案，R_x11、R_x21相同或不同，其不存在或彼此独立地选自H、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、卤代C_1-6烷基；R_x12、R_x22相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、卤代C_1-6烷基；

根据一些实施方案，R_x11、R_x21、R_x12、R_x22相同或不同，其不存在或彼此独立地选自H、乙基、2-氟代乙基、1-氟乙基、1-羟基乙基、1,2,2,2-四氟乙基、1-氯-2,2,2-三氟乙基、1-羟基-2,2,2-三氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、2-氯-2,2-二氟乙基、全氟乙基、环丙基、氰基；

根据一些实施方案，R_x11、R_x21、R_x12、R_x22相同或不同，其不存在或彼此独立地选自H、乙基、2-氟代乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、2-氯-2,2-二氟乙基、环丙基、氰基。

根据一些实施方案，环A选自C_6-10芳环、5-10元杂芳环或5-10元杂环；例如苯环、吡啶环、2,3-苯并呋喃、苯并噻唑、2,3-二氢苯并呋喃、

根据一些实施方案，Y不存在或者选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_y6取代的下列基团：-C(＝O)-R_y1、-S(＝O)-R_y2、-S(＝O)₂-R_y3、-P(＝O)(R_y4)(R_y5)、-S(＝O)(＝NH)-R_y7、-S(＝O)(＝NR_y8)-R_y7、-CH₂-S(＝O)₂-R_y3、-CH₂-S(＝O)(＝NH)-R_y7、-CH₂-S(＝O)(＝NR_y8)-R_y7、-CH₂-C(＝O)-R_y1；R_y1、R_y2、R_y3、R_y4、R_y5、R_y7、R_y8、R_y9、R_y10相同或不同，彼此独立地选自C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_1-6烷基-NH-、NH₂、卤代C_1-6烷基-NH-、氰基C_1-6烷基-NH-、C_1-6烷基-(5-8元杂环基)-NH-、C_3-6环烷基、3-6元杂环基；或者R_y9和R_y10与其连接的S原子共同形成3-6元含S杂环；或者Y选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_y6取代的C_3-6环烷基、3-6元杂环基、C_6-10芳基、5-10元杂芳基；每个R_y6相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、羟基C_1-6烷基；或者，两个R_y6与其各自连接的原子形成C_3-6烷基环；或者，Y和一个R_a与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_a1取代的3-12元杂环或C_3-12烷基环，例如环戊烷、/>

根据一些实施方案，R_y1、R_y2、R_y3、R_y4、R_y5、R_y7、R_y8、R_y9、R_y10相同或不同，彼此独立地选自甲基、乙基、甲氨基、三氟甲基、环丙基、NH₂、或者R_y9和R_y10与其连接的S原子共同形成/>

根据一些实施方案，Y选自无取代或任选被一个或两个R_y6取代的5-6元杂环基或5-6元杂芳基；

根据一些实施方案，每个R_y6相同或不同，彼此独立地选自氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、羟基C_1-3烷基；或者，两个R_y6与其各自连接的原子形成C_3-6烷基环；

根据一些实施方案，Y选自无取代或任选被一个或两个R_y6取代的恶唑烷基、恶二唑基、吡咯烷或每个R_y6相同或不同，彼此独立地选自氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、羟基C_1-3烷基；或者，两个R_y6与其各自连接的原子形成环丙烷环；

根据一些实施方案，Y不存在或者选自或者，Y和一个R_a与其各自连接的原子形成/>

根据一些实施方案，每个R_a相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、卤素、氧代(＝O)、C_1-6烷基、C_3-6环烷基-、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基、氰基-C_1-6烷基、羟基-C_1-6烷基、羟基-卤代C_1-6烷基、卤代C_1-6烷氧基、C_3-6环烷基-O-、卤代C_3-6环烷基-O-、(3-6元杂环基)-O-、C_1-6烷基-(3-6元杂环基)-O-、-C(＝O)-R_a11；或者，两个R_a与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_a1取代的3-8元杂环或C_3-8烷基环；每个R_a1相同或不同，彼此独立地选自H、氧代(＝O)、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、羟基C_1-6烷基、氰基C_1-6烷基；或者，两个R_a1与其各自连接的原子形成3-8元环烷烃环；R_a11选自H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基、卤代C_1-6烷氧基、C_1-6烷基-NH-、C_3-6环烷基-NH-、(C_1-6烷基)₂N-、NH₂、卤代C_1-6烷基-NH-、氰基C_1-6烷基-NH-、(3-6元杂环基)-NH-；

根据一些实施方案，m选自0、1、2或3；

根据一些实施方案，每个R_a相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、F、氧代(＝O)、甲基、乙基、环丙基、三氟甲基、二氟甲基、甲氧基、乙氧基、一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲基、

根据一些实施方案，每个R_a1相同或不同，彼此独立地选自H、甲基、氧代(＝O)、环丙基、HO-CH₂-、NC-CH₂-；或者，两个R_a1与其各自连接的原子形成环丙烷环。

根据一些实施方案，环E选自C_6-10芳环、5-10元杂芳环、C_3-8环烷烃环、3-8元杂环；

根据一些实施方案，环E选自苯环、吡啶环、嘧啶环、吡嗪环、噻唑环、噻吩环、吡唑环、咪唑环、环戊烷环、环己烷环。

根据一些实施方案，环选自含有至少一个氮原子的五元杂芳环。本领域技术人员能够理解，该环中不应存在相邻的两个双键。

根据一些实施方案，环选自吡咯环、噻吩环、呋喃环、吡唑环、咪唑环、噻唑环、噁唑环或三唑环。

根据一些实施方案，环选自吲哚环、吡唑并吡啶环、苯并噻吩环、苯并呋喃环、咪唑并吡嗪环、吡咯并嘧啶环、噻吩并吡咯环、吡咯并吡唑环、咪唑并咪唑环、环戊烯并吡咯环、环己烯并吡咯环。

根据一些实施方案，环选自/>

根据一些实施方案，每个R_e选自H、氰基、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；或者，两个R_e与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_e1取代的下列基团：3-8元杂环、C_3-8环烷烃环，例如环丙烷环、环丁烷环、环戊烷环、每个R_e1相同或不同，彼此独立地选自H、F、Cl、C_1-6烷基；n选自0、1、2或3；

根据一些实施方案，每个R_e选自H、氰基、F、Cl、甲基、甲氧基；或者，两个R_e与其各自连接的原子形成：

根据一些实施方案，R_z选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_z1取代的下列基团：5-10元杂环基、C_5-10环烷基；

根据一些实施方案，R_z选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_z1取代的下列基团：哌啶基、环己基、四氢吡喃基、

根据一些实施方案，每个R_z1相同或不同，彼此独立地选自H、OH、氰基、氧代(＝O)、卤素、无取代或任选被一个、两个或更多个R_z2取代的下列基团：CH₂＝、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、5-10元杂环基、C_1-6烷基-NH-、(C_1-6烷基)₂N-；每个R_z2相同或不同，彼此独立地选自H、OH、氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

根据一些实施方案，每个R_z1相同或不同，彼此独立地选自H、OH、F、氰基、CH₂＝、CHF＝、CF₂＝、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基-C_1-6烷基、羟基-C_1-6烷基、C_1-6烷基-C(＝O)-、(C_1-6烷基)₂N-、5-10元杂环基；

根据一些实施方案，每个R_z1相同或不同，彼此独立地选自H、OH、F、氰基、CH₂＝、CHF＝、CF₂＝、甲基、甲氧基、乙氧基、氰基甲基、二甲氨基、2-羟基乙基、2-氰基乙基、乙酰基、

根据一些实施方案，R_z选自

根据一些实施方案，式(I)所示的化合物具有如下所示的结构：

其中，环A、环E、Y、Z、R_a、R_e、R_z、R₁、R₂、R₃、X₁、X₂、X₃、X₄、m、n具有本文中所述的定义；当Y不存在时，R_a可以位于Y所在的取代位置。

其中，环A、环E、Y、Z、R_a、R_e、R_z、R₁、R₂、R₃、R_x11、X₁、X₂、X₃、X₄、m具有本文中所述的定义。

其中，Y、Z、R_e、R_z、n具有本文中所述的定义。

其中，Y、Z、R_e、R_z1、n具有本文中所述的定义。

其中，Y、R_x11、R_x12、R_z1、R_a1具有本文中所述的定义。

/>

其中，环A、Y、R_a、m具有本文中所述的定义。

根据一些实施方案，所述式(I)所示的化合物及其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、前药或其药学上可接受的盐中，式(I)所示的化合物的举例性的、非限制性的具体实例如下所示：

/>

本发明还提供式(I)所示化合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)化合物1与化合物2反应得到化合物3；

(2)化合物3与R_z-ZH反应得到式(I)所示化合物；

其中，环A、环E、Y、Z、R_a、R_e、R_z、R₁、R₂、R₃、X₁、X₂、X₃、X₄、m、n具有本文中所述的定义；L₁和L₂选自离去基团，如卤素，如L₁选自碘，L₂选自Br。

本发明还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、前药或其药学上可接受的盐中的至少一种。

根据本发明的实施方案，所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的辅料。

根据本发明的实施方案，所述药物组合物还可以进一步含有一种或多种额外的治疗剂。

本发明还提供一种治疗肿瘤疾病的方法，包括给予患者预防或治疗有效量的式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、前药或其药学上可接受的盐中的至少一种。

根据本发明的实施方案，所述肿瘤为含有p53-Y220C突变体的肿瘤。

本发明还提供治疗肿瘤疾病的方法，包括给予患者预防或治疗有效量的上述药物组合物。

在一些实施方案中，所述患者包括哺乳动物，优选是人。

本发明还提供用于治疗肿瘤疾病的式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、前药或其药学上可接受的盐中的至少一种，或其药物组合物。

本发明还提供式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、前药或其药学上可接受的盐中的至少一种在制备药物中的用途。

根据本发明的实施方案，所述用途可以为在制备抗含p53-Y220C突变体的肿瘤药物中的用途，如在制备p53-Y220C重激活剂药物中的用途。

根据本发明的实施方案，所述含p53-Y220C突变体的肿瘤包括急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、肾上腺皮质癌、艾滋病相关癌症、艾滋病相关淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑肿瘤如小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始细胞瘤、神经外胚层肿瘤、视觉通路和下丘脑胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤、伯基特淋巴瘤，未知原发癌，中枢神经系统淋巴瘤，小脑星形细胞瘤、宫颈癌、儿童癌症、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性骨髓增生性疾病、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、促纤维增生性小圆细胞瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌、尤因氏肉瘤、生殖细胞肿瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质肿瘤、胶质瘤、毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞癌、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、唇癌和口腔癌、脂肪肉瘤、肝癌、肺癌如非小细胞肺癌和小细胞肺癌、淋巴瘤、白血病、巨球蛋白血症、恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤、髓母细胞瘤、黑色素瘤、间皮瘤、转移性鳞癌伴隐性原发性、口腔癌、多发性内分泌肿瘤综合征、骨髓增生异常综合征、髓系白血病、鼻腔癌和鼻窦癌，鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞瘤、胰腺癌、胰腺胰岛细胞癌、副鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体星形细胞瘤、松果体生殖细胞瘤、垂体腺瘤、胸膜肺母细胞瘤、浆细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、皮肤梅克尔细胞癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、T细胞淋巴瘤、喉癌、胸腺瘤、胸腺癌、甲状腺癌、滋养细胞肿瘤(妊娠期)、癌症原发部位未知，尿道癌，子宫肉瘤，阴道癌，外阴癌，瓦尔登斯特隆巨球蛋白血症和肾母细胞瘤。

有益效果

本发明的化合物具有良好的p53-Y220C突变体激活作用，能够有效恢复p53-Y220C突变蛋白的活性，用以治疗含p53-Y220C突变蛋白的肿瘤疾病，以及制备用于此类病症或疾病的药物。

术语定义与说明

除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当被理解为本申请说明书和/或权利要求书记载的范围内。

除非另有说明，本说明书和权利要求书记载的数值范围相当于至少记载了其中每一个具体的整数数值。例如，数值范围“1-14”相当于记载了数值范围“1-14”中的每一个整数数值，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14。

本领域技术人员可以理解，表示环A上连接Y基团和m个R_a基团，其中Y和R_a可以分别独立地在环A的任意位置取代，例如R_a可以和Y在同一个C原子取代，也可以和左侧取代基在同一个C原子取代，或者，当Y不存在时，R_a可以位于Y所在的取代位置。

本申请通式定义中的术语“任选的”(或“任选地”、“任选”)意味着被零个、一个或多个取代基所取代的情形，例如“任选被一个、两个或更多个R取代”意味着可以不被R取代(无取代)或可以选择被一个、两个或更多个R取代。

“更多个”表示三个或三个以上。

术语“C_1-12烷基”应理解为表示具有1～12个碳原子的直链和支链烷基，“C_1-8烷基”表示具有1、2、3、4、5、6、7、或8个碳原子的直链和支链烷基，“C_1-6烷基”表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链和支链烷基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。

术语“C_1-12烷氧基”应理解为“C_1-12烷基-O-”，C_1-12烷基如上所定义。

术语“C_3-12环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、二环(如稠环、桥环、螺环)烃环或三环烷烃，其具有3～12个碳原子，优选“C_3-10环烷基”，更优选“C_3-8环烷基”。术语“C_3-12环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、双环(如桥环、螺环)烃环或三环烷烃，其具有3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个碳原子。所述C_3-12环烷基可以是单环烃基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如龙脑基、吲哚基、六氢吲哚基、四氢萘基、十氢萘基、二环[2.1.1]己基、二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.1]庚烯基、6,6-二甲基二环[3.1.1]庚基、2,6,6-三甲基二环[3.1.1]庚基、二环[2.2.2]辛基、2,7-二氮杂螺[3,5]壬烷基、2,6-二氮杂螺[3,4]辛烷基，或者是三环烃基如金刚烷基。

术语“C_6-14芳基”应理解为优选表示具有6～14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、二环或三环烃环，其可以是单芳族环或稠合在一起的多芳族环，优选“C_6-10芳基”。术语“C_6-14芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“C_6-14芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“C₆芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“C₉芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“C₁₀芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“C₁₃芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“C₁₄芳基”)，例如蒽基。当所述C_6-20芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为邻位、对位或间位取代。

术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、二环(如稠环、桥环、螺环)或三环芳族环系：其具有5～14个环原子且包含1-5个独立选自N、O和S的杂原子，例如“5-10元杂芳基”。术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是5或6或9或10个碳原子，且其包含1-5个，优选1-3各独立选自N、O和S的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。“杂芳基”还指其中杂芳族环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中所述连接的根基或点在杂芳族环上。非限制性实例包括1-、2-、3-、5-、6-、7-或8-吲嗪基、1-、3-、4-、5-、6-或7-异吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基、2-、4-、5-、6-、7-或8-嘌呤基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-喹嗪基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基、1-、4-、5-、6-、7-或8-酞嗪基(phthalazinyl)、2-、3-、4-、5-或6-萘啶基、2-、3-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基、3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基、2-、4-、6-或7-蝶啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-4aH咔唑基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-咔唑基咔唑基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-咔啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-菲啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-吖啶基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-啶基、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-或10-菲咯啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-吩嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩噻嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩嗪基、2-、3-、4-、5-、6-或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-苯并异喹啉基、2-、3-、4-或噻吩并[2,3-b]呋喃基、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-7H-吡嗪并[2,3-c]咔唑基、2-、3-、5-、6-或7-2H-呋喃并[3,2-b]-吡喃基、2-、3-、4-、5-、7-或8-5H-吡啶并[2,3-d]-邻-嗪基、1-、3-或5-1H-吡唑并[4,3-d]-唑基、2-、4-或54H-咪唑并[4,5-d]噻唑基、3-、5-或8-吡嗪并[2,3-d]哒嗪基、2-、3-、5-或6-咪唑并[2,1-b]噻唑基、1-、3-、6-、7-、8-或9-呋喃并[3,4-c]噌啉基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10或11-4H-吡啶并[2,3-c]咔唑基、2-、3-、6-或7-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基、7-苯并[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-或7-苯并唑基、2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基、2-、4-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-苯并氧杂基(benzoxapinyl)、2-、4-、5-、6-、7-或8-苯并嗪基、1-、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-4H-吡咯并[1,2-b][2]苯并氮杂基(benzazapinyl)。典型的稠合杂芳基包括但不限于2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-或7-苯并唑基、2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基和2-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基。当所述5-14元杂芳基与其它基团相连构成本发明的化合物时，可以为5-14元杂芳基环上的碳原子与其它基团相连，也可以为5-14元杂芳基环上的杂原子与其它基团相连。当所述5-14元杂芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为杂芳基环上与碳原子相连的氢被取代，或者杂芳基环上与杂原子相连的氢被取代。

除非另有定义，术语“3-14元杂环基”是指饱和的或不饱和的非芳族的环或环系，例如，其是4-、5-、6-或7-元的单环、7-、8-、9-、10-、11-或12-元的二环(如稠环、桥环、螺环)或者10-、11-、12-、13-或14-元的三环环系，并且含有至少一个，例如1、2、3、4、5个或更多个选自O、S和N的杂原子，其中N和S还可以任选被氧化成各种氧化状态，以形成氮氧化物、-S(O)-或-S(O)₂-的状态。优选地，所述杂环基可以选自“3-10元杂环基”。术语“3-10元杂环基”意指饱和的或不饱和的非芳族的环或环系，并且含有至少一个选自O、S和N的杂原子。所述杂环基可以通过所述碳原子中的任一个或氮原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。所述杂环基可以包括稠合的或桥连的环以及螺环的环。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元环，如二氮杂环庚烷基；或8元环，如任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。杂环基可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于二氢呋喃基、二氢吡喃基、2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、1,2,3,5-四氢噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。所述3-14元杂环基与其它基团相连构成本发明的化合物时，可以为3-14元杂环基上的碳原子与其它基团相连，也可以为3-14元杂环基环上杂环原子与其它基团相连。例如当3-14元杂环基选自哌嗪基时，可以为哌嗪基上的氮原子与其它基团相连。或当3-14元杂环基选自哌啶基时，可以为哌啶基环上的氮原子和其对位上的碳原子与其它基团相连。

术语“螺环”是指两个环共用1个成环原子的环系。

术语“稠环”是指两个环共用2个成环原子的环系。

术语“桥环”是指两个环共用3个以上成环原子的环系。

术语“卤素”表示氟、氯、溴和碘。

“卤代”指被一个或多个卤素取代。

本领域技术人员可以理解，式(I)所示化合物可以以各种药学上可接受的盐的形式存在。如果这些化合物具有碱性中心，则其可以形成酸加成盐；如果这些化合物具有酸性中心，则其可以形成碱加成盐；如果这些化合物既包含酸性中心(例如羧基)又包含碱性中心(例如氨基)，则其还可以形成内盐。

本发明的化合物可以溶剂合物(如水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。

根据其分子结构，本发明的化合物可以是手性的，因此可能存在各种对映异构体形式。因而这些化合物可以以消旋体形式或光学活性形式存在。本发明的化合物涵盖了各手性碳为R或S构型的异构体或其混合物、消旋体。本发明的化合物或其中间体可以通过本领域技术人员公知的化学或物理方法分离为对映异构体化合物，或者以此形式用于合成。在外消旋的胺的情况中，通过与光学活性的拆分试剂反应，从混合物制得非对映异构体。适当的拆分试剂的示例是光学活性的酸，例如R和S形式的酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸、适当的N-保护的氨基酸(例如N-苯甲酰脯氨酸或N-苯磺酰基脯氨酸)或各种光学活性的樟脑磺酸。借助光学活性的拆分试剂(例如固定在硅胶上的二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸、三乙酸纤维素或其它碳水化合物的衍生物或手性衍生化的异丁烯酸酯聚合物)，也可有利地进行色谱对映体拆分。用于此目的的适当的洗脱剂是含水或含醇的溶剂混合物，例如，己烷/异丙醇/乙腈。

可以根据已知的方法，例如通过萃取、过滤或柱层析来分离相应的稳定异构体。

术语“患者”是指包括哺乳动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。

术语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症。(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)。(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代甲醇(CD₃OD)或氘代氯仿(CDCl₃)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1200Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛海洋化工GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。

实施例1

第一步：化合物001-2的合成

氮气保护下，(3-(4-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)丙-2-炔-1-基)(2-甲氧基-4-(甲基磺酰基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(化合物001-1，100mg,0.162mmol,1eq)，双联频哪醇硼酸酯(82.52mg,0.324mmol,2eq)，[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(13.24mg,0.016mmol,0.1eq)和乙酸钾(39.87mg,0.405mmol,2.5eq)的1,4-二氧六环(2mL)溶液在100℃下搅拌反应2小时，反应结束后冷却到室温，加入10mL水，反应混合物用乙酸乙酯萃取(2×10mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物001-2(150mg，16.57％)。

LC-MS:(ES,m/z):663.45[M+H]⁺。

第二步：化合物001-3的合成

0℃下，向(2-甲氧基-4-(甲基磺酰基)苯基)(3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物001-2，50mg,0.075mmol,1eq)的四氢呋喃(1mL)溶液中，滴加氢氧化钠(0.05mL)和双氧水(0.05mL)，室温下继续搅拌20分钟，反应完后用乙酸乙酯萃取(2×20mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)，得到化合物001-3(35mg,83.93％)。

LC-MS:(ES,m/z):552.95[M+H]⁺。

第三步：化合物001-4的合成

在氮气保护，5℃下，向(3-(4羟基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)丙-2-炔-1-基)(2-甲氧基-4-(甲基磺酰基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(化合物001-3，25mg,0.045mmol,1eq)，1-甲基哌啶-4-醇(10.42mg,0.045mmol,1eq)和四三苯基膦(23.73mg,0.090mmol,2.00eq)的四氢呋喃(1.25mL)溶液中，滴加偶氮二甲酸二异丙酯(18.3mg,0.090mmol,2.00eq)下继续搅拌16小时，反应结束后过滤，将滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，得到化合物001-4。

LC-MS:(ES,m/z):650.00[M+H]⁺。

第三步：化合物001的合成

氮气保护，室温下，(2-甲氧基-4-(甲基磺酰基)苯基)(3-(4-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)丙-2炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物001-4，12mg,0.018mmol,1eq)和甲酸(0.2mL)的二氯甲烷(0.6mL)溶液搅拌反应6小时，所得残余物减压浓缩，残留物用反相柱层析纯化，条件：YMC Triart C18 ExRs 5μm,30mm×150mm，流动相：水(10mmol/L碳酸氢铵)和乙腈(40％至70％乙腈，10min)，得到化合物001(1.26mg,11.93％)。

LC-MS:(ES,m/z):549.95[M+H]⁺。

¹H NMR:(400MHz,CDCl₃-d)δ7.54(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.28(d,J＝2.0Hz,1H),7.19(t,J＝8.1Hz,1H),6.93(s,1H),6.87(d,J＝8.3Hz,1H),6.82(d,J＝8.4Hz,1H),6.57(d,J＝7.9Hz,1H),5.14(t,J＝6.2Hz,1H),4.61(q,J＝8.5Hz,2H),4.55–4.46(m,1H),4.35(d,J＝6.3Hz,2H),3.94(s,3H),3.03(s,3H),2.75-2.67(m,2H),2.45-2.35(m,1H),2.34(s,3H),2.13-2.02(m,2H),2.00-1.92(m,2H).

实施例2

第一步：化合物002-2的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物002-1，1g,8.465mmol,1eq)，用70mL四氢呋喃溶解，降温至0℃，逐滴加入三氟化硼乙醚(1.32g,9.312mmol,1.1eq)，搅拌10分钟并将温度降至-78℃，加入2,2,6,6-四甲基哌啶基氯化镁氯化锂复合物溶液(1.0摩尔/升的四氢呋喃溶液)(10.2mL,1.2eq)，搅拌20分钟，再加入碘单质(3.22g,12.697mmol,1.5eq)，升至室温反应，搅拌过夜。反应混合物室温下加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物002-2(276mg,12.96％)。

LC-MS:(ES,m/z):244.75[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.68(dd,J＝7.0,1.0Hz,1H),7.65(d,J＝8.9Hz,1H),7.26(ddd,J＝8.9,6.8,1.1Hz,1H),6.90–6.84(m,2H).

第二步：化合物002-3的合成

氮气保护下，反应瓶中加入2-碘吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物002-2，280mg,1.147mmol,1eq)，10mL四氢呋喃溶解。在-78℃下，加入2,2,6,6-四甲基哌啶基氯化镁氯化锂复合物溶液(1.0摩尔/升的四氢呋喃溶液)(1.38mL,1.2eq)，搅拌20分钟，再加入1,2-二溴四氯乙烷(560.43mg,1.720mmol,1.5eq)，升至室温反应，搅拌过夜，反应完后向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液(5mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物002-3(152mg,33.64％)。

LC-MS:(ES,m/z):323.00[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.72(dd,J＝8.8,1.2Hz,1H),7.29(dd,J＝7.3,1.2Hz,1H),7.19(dd,J＝8.8,7.3Hz,1H),7.08(s,1H).

第三步：化合物002-4的合成

氮气保护下，反应瓶中加入7-溴-2-碘吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物002-3，97mg,0.300mmol,1eq)，3-甲氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酰胺(化合物002-3A，98.34mg,0.450mmol,1.5eq)，四三苯基膦钯(34.71mg,0.030mmol,0.1eq)，碘化亚铜(5.72mg,0.030mmol,0.1eq)，二异丙胺(303.95mg,3.000mmol,10.0eq)，四氢呋喃(5mL)溶解，0℃反应2小时。反应结束后向反应液中加入水(5mL),用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得残留物用硅胶柱层析纯化，乙酸乙酯冲洗，得到化合物002-4(63mg,50.24％)。LC-MS:(ES,m/z):412.80[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.10(d,J＝4.6Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,1.2Hz,1H),7.42(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.39–7.33(m,2H),7.18(dd,J＝8.8,7.2Hz,1H),6.94(s,1H),6.75(d,J＝8.3Hz,1H),5.99(t,J＝6.3Hz,1H),4.30(d,J＝6.4Hz,2H),3.85(s,3H),2.75(d,J＝4.5Hz,3H).

第三步：化合物002的合成

氮气保护，将4-((3-(7-溴吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物002-4，45mg,0.109mmol,1eq)，4-氨基-1-甲基哌啶(24.87mg,0.218mmol,2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(9.16mg,0.011mmol,0.10eq)，碳酸铯(88.69mg,0.272mmol,2.50eq)溶于1,4-二氧六环中(4.5mL)，80℃下搅拌反应4小时。反应完后将反应液冷却到室温，加水5mL，用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，残留物通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:YMC Triart C18 ExRs 5μm,30mm*150mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵)流动相B:乙腈；流速:60mL/min；洗脱梯度:30％至60％B，8分钟；检测波长：UV 220nm；保留时间(分钟):6.65)，得到化合物002(12.62mg,25.69％)。LC-MS:(ES,m/z):447.30[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.10(q,J＝4.5Hz,1H),7.41(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.34(d,J＝1.8Hz,1H),7.19–7.12(m,1H),6.85(d,J＝8.5Hz,1H),6.71(d,J＝8.3Hz,1H),6.58(s,1H),6.49(d,J＝8.5Hz,1H),6.06(d,J＝7.6Hz,1H),5.98(t,J＝6.3Hz,1H),4.27(d,J＝6.3Hz,2H),3.84(s,3H),3.50–3.38(m,1H),2.80–2.67(m,5H),2.16(s,3H),2.02(td,J＝11.7,2.5Hz,2H),1.88(dd,J＝13.3,3.8Hz,2H),1.74–1.61(m,2H).

实施例3

第一步：化合物003-2的合成

氮气保护，-78℃下向4-溴-1-苯并噻吩(化合物003-1，5g,23.5mmol,1eq)的四氢呋喃(40mL)溶液中滴加二异丙基氨基锂(3.02g,28mmol,1.2eq)，继续搅拌30分钟。然后在-78℃下，向反应液中加入碘单质(7.15g,28mmol,1.2eq)的四氢呋喃(10mL)溶液，反应液缓慢升温至室温，搅拌反应1小时，反应结束后，反应液在冰浴下用水淬灭(80mL)，并用乙酸乙酯萃取(3×60mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(1×80mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物003-2(7.78g,97.8％)。

GC-MS:(ES,m/z):339.9[M]⁺。

第二步：化合物003-3的合成

氮气保护，室温下向4-溴-2-碘-1-苯并噻吩(化合物003-2，500mg,1.5mmol,1eq)和3-甲氧基-N-甲基-4-丙-2-炔基氨基苯甲酰胺(化合物002-3A，386mg,1.8mmol,1.2eq)的二甲基亚砜(10mL)溶液中加入碘化亚铜(18.8mg,0.3mmol,0.2eq)，四三苯基膦钯(341mg,0.3mmol,0.2eq)和二异丙基氨基锂(10mL)，反应液升温至50℃搅拌反应2小时，反应完后将反应液冷却至室温，用水稀释(30mL)，并用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(40mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物003-3。

LC-MS:(ES,m/z):428.75[M+H]⁺。

第三步：化合物003的合成

氮气保护，室温下向4-(4-溴-1-苯并噻吩-2-基)丙-2-炔-1-基]氨基}-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物003-3，40mg,0.1mmol,1eq)的1,4二氧六环(10mL)溶液中加入3-氟-1-甲基哌啶-4-胺盐酸盐(14.8mg,0.1mmol,1.2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-丙基丁基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-基亚基]二氯(3-氯吡啶-KN)钯(15.7mg,0.02mmol,0.2eq)和碳酸铯(121mg,0.4mmol,4eq)，反应液升温至80℃，搅拌反应5小时，反应完后将反应液冷却至室温，用水淬灭(20mL)，并用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(1×30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过高效液相纯化，条件：(层析柱规格XBridge Shield RP18 OBD柱，30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈；流速：60mL/分钟；梯度:8分钟25％B到50％B,50％B；波长:UV 220nm；RT1(分钟):8.00；)，得到化合物003(2.1mg,4.69％)。

LC-MS:(ES,m/z):481.15[M+H]⁺。

¹H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(q,J＝4.5Hz,1H),8.03(s,1H),7.44(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.18(t,J＝7.9Hz,1H),7.08(d,J＝8.0Hz,1H),6.73(d,J＝8.3Hz,1H),6.55(d,J＝7.9Hz,1H),5.99(t,J＝6.3Hz,1H),5.82(d,J＝8.4Hz,1H),4.82(d,J＝49.4Hz,1H),4.31(d,J＝6.3Hz,2H),3.86(s,3H),3.71–3.49(s,1H),3.09–2.99(m,1H),2.82(d,J＝11.2Hz,1H),2.77(d,J＝4.5Hz,3H),2.29(d,J＝12.9Hz,1H),2.20(s,3H),2.15–2.05(m,1H),2.04–1.91(m,1H),1.72–1.63(dd,J＝12.6,3.6Hz,1H).

实施例4

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第一步：化合物004-2的合成

氮气保护，-78℃下，向4-溴苯并呋喃(化合物004-1，1g,5.075mmol,1eq)的四氢呋喃(10mL,123.428mmol,24.32eq)溶液中缓慢滴加二异丙基氨基锂(815.58mg,7.613mmol,1.5eq)，加完并搅拌反应30分钟后，-78℃下向反应液中滴加碘(2576.34mg,10.150mmol,2eq)的四氢呋喃(3mL)溶液，加完后，体系从-78℃缓慢升至室温并继续搅拌2小时，反应完结束后，0℃下，向体系中滴加饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(3×30mL),合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:1)得到化合物004-2(1.05g,64.06％)。

¹H NMR:(400MHz,DMSO-d₆)δ7.64(dt,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.46(dd,J＝7.9,0.7Hz,1H),7.25–7.20(m,1H),7.19(d,J＝1.0Hz,1H).

第二步：化合物004-3的合成

在室温下，向40mL样品瓶内依此加入4-溴-2-碘-1-苯并呋喃(化合物004-2，300mg,0.929mmol,1eq)和3-甲氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔基-1-胺)苯甲酰胺(化合物002-3A，263.59mg,1.208mmol,1.3eq)，四(三苯基膦)钯(107.35mg,0.093mmol,0.1eq)和二甲基亚砜溶液(10mL,140.791mmol,151.55eq)，再加入碘化亚铜(17.69mg,0.093mmol,0.1eq)和二异丙基胺(940.09mg,9.290mmol,10eq)，氩气抽换气三次后，体系升至50℃，并维持此温度搅拌反应2小时，反应结束后，反应液冷却至室温，加入20mL水，水相用乙酸乙酯萃取(3x50mL)，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，将滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)得到化合物004-3(150mg；39.16％)。

LC-MS:(ES,m/z):412.85[M+H]⁺。

第三步：化合物004的合成

室温下，向40mL反应管内依此加入4-((3-(4-溴苯并呋喃基-2-基)丙-2-炔基-1-氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物004-3，23.99mg,0.181mmol,1.5eq)，碳酸铯(157.68mg,0.484mmol,4eq)和二氧六环(5mL,59.020mmol,487.82eq)，再加入(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-丙基丁基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-基亚基]二氯(3-氯吡啶-KN)钯(2-甲基吡啶)(15.7mg,0.02mmol,0.2eq)。氩气置换三次后，氩气保护下反应于100℃下搅拌12小时，反应结束后将反应液冷却到室温，加20mL水，水相用乙酸乙酯萃取(3×40mL)，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，将滤液减压浓缩，残留物通过高效液相纯化得到化合物004(2.38mg,4.23％)

LC-MS:(ES,m/z):465.45[M+H]⁺

¹H NMR:(400MHz,DMSO-d₆)δ8.13–8.07(m,1H),7.47(d,J＝0.7Hz,1H),7.42(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.34(d,J＝1.8Hz,1H),7.09(t,J＝8.1Hz,1H),6.72(d,J＝8.3Hz,1H),6.69(d,J＝8.3Hz,1H),6.40(d,J＝8.0Hz,1H),6.01(t,J＝6.4Hz,1H),5.79(d,J＝8.7Hz,1H),4.79(d,J＝49.4Hz,1H),4.31(d,J＝6.4Hz,2H),3.84(s,3H),3.67–3.49(m,1H),3.07–2.98(m,1H),2.80(d,J＝11.5Hz,1H),2.75(d,J＝4.5Hz,3H),2.28(d,J＝12.3Hz,1H),2.18(s,3H),2.14–2.04(m,1H),1.95–1.83(m,1H),1.69(d,J＝12.9Hz,1H).

实施例5

第一步：化合物005-2的合成

在0℃下，向5-氨基吲哚-1-甲酸叔丁酯(化合物005-1，11g,47.356mmol,1eq)的乙腈(500毫升)溶液中，加入N-溴代丁二酰亚胺(8.43g,47.356mmol,1.00eq)，加完后将反应液缓慢升至室温下继续搅拌过夜，反应结束后将反应液真空浓缩。得到粗品化合物005-2(13g,88.22％)。

LC-MS:(ES,m/z):311.25[M+H]⁺。

第二步：化合物005-3的合成

在室温下，向5-氨基-4-溴吲哚-1-甲酸叔丁酯(化合物005-2，13.0g,41.777mmol,1eq)的甲醇(251毫升)溶液中，加入水(84mL)和碳酸钾(17.31g,125.249mmol,3.00eq)，50℃下搅拌18，反应结束后，过滤，收集滤饼并用水(1×200mL)洗涤，滤液减压浓缩除去甲醇，混合物用二氯甲烷萃取(2×200mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到化合物005-3(8.54g,96.85％)。

LC-MS:(ES,m/z):211.25[M+H]⁺。

第三步：化合物005-4的合成

在0℃下，向4-溴吲哚胺(化合物005-3，8.2g,38.851mmol,1eq)的乙腈(300mL)溶液中，加入四氟硼酸(5.12g,58.276mmol,1.5eq)和叔丁基亚硝酰(6.0g,58.276mmol,1.5eq)，室温搅拌45分钟，0℃下向反应液中加入氰化亚铜(10.44g,116.553mmol,3eq)的水(100mL)溶液，加入后60℃下继续搅拌4小时，反应完后，反应混合物用乙酸乙酯萃取(3×100mL)，合并有机相，用水洗涤(3×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到化合物005-4(3.7g,43.08％)。

LC-MS:(ES,m/z):221.35[M+H]⁺。

第四步：化合物005-5的合成

在0℃下，向4-溴吲哚-5-甲腈(化合物005-4，3.6g,16.285mmol,1eq)的四氢呋喃(50mL)溶液中，加入氢化钠(508.06mg,21.171mmol,1.3eq)，0℃下继续搅拌15分钟，再加入苯磺酰氯(2.88g,16.285mmol,1eq)，加完室温继续搅拌2小时，反应完后向反应液中加水，用二氯甲烷萃取(2×100mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(2×100mL)，无水硫酸钠干燥，滤，将滤液减压浓缩，得到化合物005-5(4.7g,79.90％)。

LC-MS:(ES,m/z):360.85[M+H]⁺

第五步：化合物005-6的合成

在氮气保护下，-78℃下，向1-苯磺酰基-4-溴吲哚-5-甲腈(化合物005-5，361mg,0.999mmol,1eq)的四氢呋喃(3mL)溶液中，滴入二异丙基氨基锂(149.89mg,1.399mmol,1.4eq)，-78℃下继续搅拌2小时，再滴入碘(507.32mg,1.998mmol,2eq)的四氢呋喃(2mL)溶液，加入后-78℃下继续搅拌2小时，反应液室温下搅拌过夜，反应完后，加入饱和氯化铵溶液(100mL)和饱和硫代硫酸钠溶液(100mL)，用二氯甲烷萃取(2×100mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(2x100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到粗品化合物005-6。

第六步：化合物005-7的合成

在氮气保护，室温下，向1-苯磺酰基-4-溴-2-碘吲哚-5-甲腈(化合物005-6，440mg,0.903mmol,1eq)的四氢呋喃(20mL)溶液中，滴加入四丁基氟化铵(283.41mg,1.084mmol,1.2eq)，室温下搅拌过夜，反应完后真空浓缩，得到粗品化合物005-7。

LC-MS:(ES,m/z):346.85[M+H]⁺。

第七步：化合物005-8的合成

在室温下，向4-溴-2-碘-5-甲腈(化合物005-7，550mg,1.585mmol,1eq)和碳酸铯(1549mg,4.754mmol,3.00eq)的二甲基甲酰胺(16mL)溶液中，加入2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯(368mg,1.586mmol,1.00eq)，室温下搅拌2小时，反应结束后，反应液用乙酸乙酯萃取(2×100mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(2×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到化合物005-8(105mg,15.44％)。

GC-MS:(ES,m/z):428.0[M]⁺。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.45(d,J＝8.6Hz,1H),7.37(d,J＝8.6Hz,1H),7.06(d,J＝0.8Hz,1H),4.78(q,J＝8.2Hz,2H).

第八步：化合物005-9的合成

在氮气保护，室温下，向4-溴-2-碘-1-2,2,2-三氟乙基吲哚-5-甲腈(化合物005-8，89mg,0.207mmol,1eq)，3-甲氧基-N-甲基-4-丙-2-炔基氨基苯甲酰胺(化合物002-3A，59mg,0.270mmol,1.30eq)，四(三苯基膦)钯(24mg,0.021mmol,0.10eq)和碘化亚铜(4mg,0.021mmol,0.10eq)的二甲基亚砜(2mL)溶液中，滴加二异丙基胺(210mg,2.075mmol,10.00eq)，50℃下搅拌1小时，反应完后加入5mL水，用乙酸乙酯萃取(2×50mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(2×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到粗品化合物005-9。

LC-MS:(ES,m/z):519.00[M+H]⁺。

第九步：化合物005的合成

在氮气保护，室温下，向4-[4-溴-5-氰基-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-2-基]丙-2-炔-1-基}氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物005-9，153mg,0.295mmol,1eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(27mg,0.029mmol,0.10eq)，R-(+)-1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(37mg,0.059mmol,0.20eq)和碳酸铯(288mg,0.884mmol,3.00eq)的1,4-二氧六环(2毫升)溶液中，滴加1-甲基-4-氨基哌啶(100.9mg,0.884mmol,3.00eq)，100℃下继续搅拌5小时，反应完后加入5mL水，用乙酸乙酯萃取(2×50mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(2×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，残留物通过高效液相纯化，条件：层析柱规格:Xselect CSH C18 OBD柱30*150mm 5μm；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B：乙腈；流速:60毫升/分钟；梯度:45％B至75％B，8min；检测波长:UV 220nm；保留时间(分钟):7.4，得到化合物005的甲酸盐(28.7mg,17.52％)，

LC-MS:(ES,m/z):553.60[M+H]⁺。

¹H NMR:(400MHz,DMSO-d₆)δ8.10(q,J＝4.6Hz,1H),7.41(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.26(s,1H),7.20(d,J＝8.8Hz,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,1H),6.75(d,J＝8.3Hz,1H),6.00(t,J＝6.8Hz,2H),5.02(q,J＝9.0Hz,2H),4.32(d,J＝6.4Hz,2H),4.07–3.92(m,1H),3.84(s,3H),2.82–2.76(m,2H),2.75(d,J＝4.5Hz,3H),2.18(s,3H),2.00(t,J＝11.3Hz,2H),1.90(d,J＝12.3Hz,2H),1.59(qd,J＝12.2,3.7Hz,2H).

实施例6

第一步：化合物099-2的合成

80℃下，4-溴-3-甲氧基苯甲酸(化合物099-1，20g,86.563mmol,1eq)和N-羟甲基邻苯二甲酰亚胺(化合物099-1A，15.34g,86.563mmol,1eq)的硫酸(200mL)溶液搅拌反应3小时。冷却至室温，加入冰水搅拌15分钟，过滤。反应混合物溶于乙醇(100mL)和氨水(100mL)，在80℃下，搅拌3小时，反应结束后将反应液冷却，旋干乙醇，过滤得到化合物099-2(8g,19.09％)。

LCMS:(ESI,m/z):241.90[M+H]⁺

第二步：化合物099-3的合成

氮气保护，45℃下，5-溴-6-甲氧基异吲哚-1-酮(化合物099-2，3g,12.393mmol,1eq)，二碳酸二叔丁酯(3.25g,14.872mmol,1.2eq)，三乙胺(1.32g,18.589mmol,1.5eq)和N,N-二甲氨基吡啶(151.41mg,1.239mmol,0.1eq)的四氢呋喃(60mL)溶液搅拌反应2小时，反应结束后将所得残余物减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化，石油醚/乙酸乙酯(5/1)，得到化合物099-3(1.5g,35.37％)。

LCMS:(ESI,m/z):363.90[M+Na]⁺

第三步：化合物099-4的合成

氮气保护，100℃下，5-溴-6-甲氧基-1-氧代异吲哚-2-羧酸叔丁酯(化合物099-3，2g,5.845mmol,1eq)，氨基甲酸叔丁酯(821.64mg,7.014mmol,1.20eq)，双环己基(3-异丙氧-2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯]-2-基)膦烷(312.58mg,0.584mmol,0.10eq)，(甲磺酸(双环己基)(3-异丙氧-2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯]-2-基)膦烷(2'-甲氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(268.44mg,0.292mmol,0.05eq)和碳酸铯(3.81g,11.694mmol,2.00eq)的N,N-二甲基甲酰胺(40mL)溶液搅拌反应2小时，反应结束后将反应混合物冷却到室温。反应混合物室温下加入水(200毫升)淬灭。反应混合物用乙酸乙酯萃取(2×200mL)。合并有机相，用氯化钠反洗(2×200毫升)，硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化，石油醚/乙酸乙酯(10:1)，得到化合物099-4(680mg,30.74％)。

LCMS:(ESI,m/z):322.85[M-56+1]⁺

第四步：化合物099-5的合成

氮气保护，0℃下向5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-甲氧基-1-氧代异吲哚-2-羧酸叔丁酯(化合物099-4，680mg,1.797mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入氢化钠(107.81mg,2.695mmol,1.50eq,60％)，搅拌反应30分后，0摄氏度下分批加入炔丙基溴(256.52mg,2.156mmol,1.20eq)，加入完毕后体系室温下继续搅拌2小时，反应完后，室温下向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭。反应混合物用乙酸乙酯萃取(2×50mL)，合并有机相，用氯化钠反洗(2×50mL)，硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(10:1)，得到化合物099-5(600mg,80.17％)。

LCMS:(ESI,m/z):360.95[M-56+1]⁺

第五步：化合物099-6的合成

氮气保护,50℃下，5-((叔丁氧基羰基)(丙-2-炔-1-基)氨基)-6-甲氧基-1-氧代异吲哚-2-羧酸叔丁酯(化合物099-5，300mg,0.720mmol,1eq)，4-溴-2-碘-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚(化合物099-5A，261.89mg,0.648mmol,0.90eq)，四三苯基磷钯(83.24mg,0.072mmol,0.10eq)，碘化亚铜(13.72mg,0.072mmol,0.10eq)和二异丙基胺(728.93mg,7.203mmol,10.00eq)的二甲基亚砜(5mL)溶液搅拌反应1小时，反应完后将反应液冷却到室温，加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(2×30mL)，合并有机相，用饱和氯化钠反洗(2×30mL)，硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品用硅胶柱层析纯化，石油醚/乙酸乙酯(5:1)，得到化合物099-6(300mg,60.14％)。

LCMS:(ESI,m/z):635.90[M-56+1]⁺

第六步：化合物099-7的合成

氮气保护，100℃下，5-((3-(4-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)丙-2-炔-1-基)(叔丁氧基羰基)氨基)-6-甲氧基-1-氧代异吲哚-2-羧酸叔丁酯(化合物099-6，160mg,0.231mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(94.77mg,0.462mmol,2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(19.43mg,0.023mmol,0.1eq)和碳酸铯(188.19mg,0.578mmol,,2.5eq)的1,4-二氧六环(5mL)溶液搅拌反应过夜，反应完后将反应液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化，二氯甲烷/甲醇(10:1)，得到化合物099-7(100mg,77.59％)。

LCMS:(ESI,m/z):744.40[M+H]⁺

第七步：化合物099的合成

0℃下，5-((叔丁氧基羰基)(3-(4-(((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-6-甲氧基-1-氧代异吲哚-2-羧酸叔丁酯(化合物099-7，80mg,0.108mmol,1eq)的二氧六环溶液(2mL)加入HCl(气体)的1,4-二氧六环溶液(2mL)，室温搅拌反应1小时，反应完后，将反应液浓缩，粗品经高效液相纯化，条件如下：色谱柱:XSelect CSH Fluoro Phenyl 5m,30mm×150mm；流动相A:水(0.1％甲酸),流动相B:乙腈；流速:60毫升/分钟；梯度:10％B to 30％B in 10分钟；检测波长:254nm/220nm；RT1(min):9.22，得到化合物099的甲酸盐099-S(20.67mg,32.40％)。

LCMS:(ESI,m/z):544.15[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.01(s,1H),7.18(s,1H),7.03(s,1H),7.00(t,J＝7.9Hz,1H),6.85(s,1H),6.73(d,J＝8.3Hz,1H),6.24(d,J＝7.8Hz,1H),6.16(t,J＝6.3Hz,1H),5.49(d,J＝8.7Hz,1H),4.91(q,J＝11.2Hz,2H),4.80(d,J＝48.0Hz,1H),4.34(d,J＝6.3Hz,2H),4.21(s,2H),3.86(s,3H),3.65–3.49(m,1H),3.03(t,J＝11.1Hz,1H),2.80(d,J＝11.2Hz,1H),2.27(d,J＝12.9Hz,1H),2.18(s,3H),2.08(t,J＝11.5Hz,1H),1.92(td,J＝12.1,8.5Hz,1H),1.73–1.64(d,J＝11.6Hz,1H).

实施例7

第一步：化合物133-2的合成

在氮气保护下，-78℃，向7-溴-1-苯并噻吩(化合物133-1，4.3g,20.179mmol,1eq)和碘(10.30g,40.566mmol,2.00eq)的四氢呋喃(43mL)溶液中，滴加入二异丙基氨基锂(2M)(14mL,28.396mmol,1.4eq)。-78℃下继续搅拌1小时，反应结束后，加水淬灭反应，反应混合物用二氯甲烷萃取(2×200毫升)，合并有机相，用饱和氯化铵溶液(2×200毫升)反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用反相柱层析纯化，条件如下：C18层析柱，流动相，水和乙腈，10％到80％梯度8分钟，UV254纳米检测器。得到化合物133-2(5.4g,80.29％)。GCMS:(ESI,m/z):337.83[M]⁺

第二步：化合物133-3的合成

在室温下，向20mL反应瓶内加入3-甲氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酰胺(化合物002-3A，605.74mg,1.788mmol,1.3eq)，7-溴-2-碘-1-苯并噻吩(化合物133-2，300mg,1.375mmol,1eq),四(三苯基膦)钯(158.84mg,0.138mmol,0.1eq)，二异丙胺(940.09mg,9.290mmol,10eq)，碘化亚铜(1390.93mg,13.750mmol,10eq)和二甲基亚砜(3毫升)溶液，于50℃，氮气保护下搅拌反应2小时。反应结束后，将反应液冷却到室温，加30mL水，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗，再用无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压浓缩。残留物通过硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物133-3(250mg,42.36％)。

LCMS:(ESI,m/z):429.15[M+H]⁺

第三步：化合物133的合成

在室温下，向20mL反应瓶内加入4-{[3-(7-溴-1-苯并噻吩-2-基)丙-2-炔-1-基]氨基}-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物133-3，50mg,0.116mmol,1eq)，和(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺(26.74mg,0.202mmol,2eq)，碳酸铯(131.83mg,0.404mmol,4eq)和2-双环己基膦-2,6-二异丙氧基联苯(10.87mg,0.023mmol,0.2eq)，加入溶剂1,4-二氧六环(2mL)溶液，氮气保护，100℃下搅拌反应18小时。反应完后，将反应液冷却到室温，加20mL水，水相用乙酸乙酯萃取(3×30mL).有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压浓缩，残留物通过高效液相纯化，条件：C18层析柱，流动相，水(0.1％甲酸)和乙腈，10％到80％梯度8分钟。得到化合物133的甲酸盐133-S(4.52mg,7.75％)。

LCMS:(ESI,m/z):481.20[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.09(q,J＝4.7Hz,1H),7.48(s,1H),7.42(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.34(d,J＝1.9Hz,1H),7.20(t,J＝7.7Hz,1H),7.14(d,J＝7.1Hz,1H),6.73(d,J＝8.2Hz,2H),5.98(t,J＝6.3Hz,1H),5.03(d,J＝8.6Hz,1H),4.79(d,J＝50.0Hz,1H),4.30(d,J＝6.3Hz,2H),3.84(s,3H),3.67–3.60(m,1H),3.03(t,J＝11.3Hz,1H),2.79(d,J＝11.4Hz,1H),2.75(d,J＝4.5Hz,3H),2.26(d,J＝13.1Hz,1H),2.18(s,3H),2.08(t,J＝11.5Hz,1H),1.99–1.86(m,1H),1.76–1.66(m,1H).

实施例8

第一步：化合物134-2的合成

在氮气保护下，-78℃下，向7-溴-1-苯并呋喃(化合物134-1，3.94g,19.997mmol,1eq)和碘(10.15g,39.991mmol,2.00eq)的四氢呋喃(60mL)溶液中，滴加入二异丙基氨基锂(2M)(14mL,27.996mmol,1.4eq)。-78℃下搅拌1小时。反应完后，加水淬灭反应，反应混合物用二氯甲烷萃取(2×100mL)，合并有机相，饱和氯化铵溶液反洗(2×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用反相柱层析纯化，条件如下：C18层析柱，流动相，水和乙腈，10％到80％梯度10分钟，UV254纳米检测器。得到化合物134-2(1.91g,29.58％)。

GCMS:(ESI,m/z):322.0[M]⁺

第二步：化合物134-3的合成

在室温下，向20mL反应瓶内加入7-溴-2-碘-1-苯并呋喃(化合物134-2，300mg,0.929mmol,1eq)和3-甲氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酰胺(化合物002-3A，263.59mg,1.208mmol,1.3eq)，四(三苯基膦)钯(107.35mg,0.093mmol,0.1eq)和碘化亚铜(17.69mg,0.093mmol,0.1eq)，二异丙胺(940.09mg,9.290mmol,10eq)和二甲基亚砜(3mL)，于50℃，氮气保护下搅拌反应2小时，反应完后，将反应液冷却到室温，加水30mL，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，所得残余物减压浓缩。残留物通过硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)得到化合物134-3(350mg,91.16％)。

LCMS:(ESI,m/z):412.80[M+H]⁺

第三步：化合物134的合成

在室温下，向20mL反应瓶内加入4-{[3-(7-溴-1-苯并呋喃-2-基)丙-2-炔-1-基]氨基}-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物134-3，50mg,0.101mmol,1eq)和(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺(26.74mg,0.202mmol,2eq)，碳酸铯(131.83mg,0.404mmol,4eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(8.51mg,0.010mmol,0.1eq)和2mL 1,4-二氧六环，氮气保护，60℃下反应18小时，反应完后，将反应液冷却到室温，加入20mL水,水相用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得有机相减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，(色谱柱型号,XSelect CSH Fluoro Phenyl 5μm,30mm*150mm；流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈；流速:44毫升/分钟；梯度:28％B至60％B，8min；检测波长:UV 220nm；保留时间(分钟):4；得到化合物134的甲酸盐134-S(8.83mg,15.95％)。

LCMS:(ESI,m/z):465.20[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(q,J＝4.7Hz,1H),7.42(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.34(d,J＝1.9Hz,1H),7.08(s,1H),7.02(t,J＝7.8Hz,1H),6.83(dd,J＝7.8,1.0Hz,1H),6.72(d,J＝8.3Hz,1H),6.68(d,J＝7.5Hz,1H),6.01(t,J＝6.3Hz,1H),5.22(d,J＝9.1Hz,1H),4.76(d,J＝49.4Hz,1H),4.33(d,J＝6.4Hz,2H),3.84(s,3H),3.72–2.55(m,1H),3.08–2.95(m,1H),2.81–2.69(m,4H),2.30–2.09(m,4H),2.06(t,J＝11.4Hz,1H),1.92–1.80(m,1H),1.71(d,J＝12.3Hz,1H).

实施例9

第一步：化合物135-1的合成

在室温下，向250mL圆底烧瓶内加入7-溴苯并噻吩(化合物133-1，10g,46.929mmol,1eq)和乙酸酐(14.371g,140.787mmol,3eq)，再加入三氟乙酸(60mL)。室温下，反应搅拌过夜，反应完后向反应混合物中加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(3×100mL)，合并有机相，用饱和食盐水溶液反洗，无水硫酸钠干燥，所得混合物过滤，将滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物135-1(6g,47.61％)。

LCMS:(ESI,m/z):254.80[M+H]⁺

第二步：化合物135-2的合成

在室温下，将化合物1-(7-溴-苯并噻吩-3-基)乙烷-1-酮(化合物135-1，2g,7.839mmol,1eq)和三乙基硅烷(2.19g,18.814mmol,2.4eq)溶于1,2-二氯乙烷(4mL)和乙腈(2mL)的混合溶剂，再加入三氟化硼乙醚(1.34g,9.407mmol,1.2eq)，氮气保护，50℃下反应3小时，反应结束后将反应混合物冷却到室温，加水(50mL)，用乙酸乙酯萃取(3×100mL)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(2×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物135-2(1.30g,65.33％)。

GCMS:(EI,m/z):240.0[M]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.85(dt,J＝8.0,0.9Hz,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,1H),7.53(d,J＝1.3Hz,1H),7.38(t,J＝7.8Hz,1H),2.90–2.77(m,2H),1.30(t,J＝7.5Hz,3H).

第三步：化合物135-3的合成

在室温下，将化合物7-溴-3-乙基苯并[b]噻吩(化合物135-2，300mg,1.244mmol,1eq)和1,3-二碘-5,5-二甲基海因(708.96mg,1.866mmol,1.5eq)溶于乙腈(5mL)。45℃下搅拌反应2小时，反应结束后将反应液冷却到室温，加水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(3×200mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物135-3(300mg,63.07％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.87(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),7.59(dd,J＝7.7,0.9Hz,1H),7.36(t,J＝7.9Hz,1H),2.81(q,J＝7.5Hz,2H),1.13(t,J＝7.5Hz,3H).

第四步：化合物135-4的合成

在室温下，向反应瓶内加入7-溴-3-乙基-2-碘苯并[b]噻吩(化合物135-3，200mg,0.545mmol,1eq)、3-甲氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酰胺(化合物002-3A，154.61mg,0.709mmol,1.3eq)、碘化亚铜(10.38mg,0.055mmol,0.1eq)、二异丙胺(442.98mg,5.450mmol,10eq)和四三苯基膦钯(62.97mg,0.055mmol,0.1eq)，再加入二甲基亚砜(5mL)。氮气保护，50℃下搅拌反应1.5小时。反应结束后将反应液冷却到室温，加水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(3×50mL)。合并有机相，用饱和食盐水反洗(2×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物135-4(200mg,78.64％)。LCMS:(ESI,m/z):456.90[M+H]⁺.

第五步：化合物135的合成

在室温下，向反应瓶内加入4-((3-(7-溴-3-乙基苯并[b]噻吩-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物135-4，20mg,0.044mmol,1eq)、(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(11.56mg,0.088mmol,2eq)、碳酸铯(56.99mg,0.176mmol,4eq)和{(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(3.68mg,0.004mmol,0.1eq)，再加入溶剂1,4-二氧六环(3mL)，氮气保护，80℃下反应12小时，反应结束后将反应液冷却到室温，加水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，所得残余物真空浓缩，粗品通过高效液相纯化(层析柱规格:XSelect CSHFluoro Phenyl 5μm,30×150mm；流动相A:水(10mmol/L甲酸)，流动相B：乙腈(洗脱梯度:15％B to 35％B in 10min)；检测波长:UV254nm/220nm,保留时间7.92min)，得到化合物135的甲酸盐(5.66mg,25.28％)。

LCMS:(ESI,m/z):509.35[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.14(q,J＝4.5Hz,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,1H),7.35(s,1H),7.23(t,J＝7.8Hz,1H),7.11(d,J＝7.9Hz,1H),6.77(d,J＝8.3Hz,1H),6.74(d,J＝7.8Hz,1H),6.04(t,J＝6.4Hz,1H),4.98(d,J＝8.7Hz,1H),4.78(d,J＝49.9Hz,1H),4.32(d,J＝6.3Hz,2H),3.84(s,3H),3.72–3.55(m,1H),3.03(t,J＝10.7Hz,1H),2.84–2.71(m,6H),2.30–2.12(m,4H),2.07(t,J＝11.0Hz,1H),1.92(dt,J＝12.2,9.4Hz,1H),1.75–1.66(d,J＝10.3Hz,1H),1.06(t,J＝7.5Hz,3H).

实施例10

第一步：化合物068-1的合成

氮气保护下，反应瓶中加入7-溴苯并噻吩(化合物133-1，10g,46.929mmol,1eq)，三氟乙酸酐(29.57g,140.787mmol,3.0eq)，4-二甲氨基吡啶(6.88g,56.315mmol,1.2eq)，氯化铝(18.77g,140.787mmol,3.0eq)，用二氯甲烷(100mL)溶解，室温搅拌反应24小时，反应结束后，0℃下向反应液中加入冰水淬灭，用二氯甲烷萃取(3×100mL)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物068-1(5g,34.12％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.29(dd,J＝3.5,1.7Hz,1H),8.58(dd,J＝8.2,0.9Hz,1H),7.87–7.84(dd,J＝8.2,0.9Hz,1H),7.60(t,J＝8.2Hz,1H).

第二步：化合物068-2的合成

氮气保护下，反应瓶中加入1-(7-溴苯并[b]噻吩-3-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(化合物068-1，2g,6.470mmol,1eq)，用四氢呋喃(5mL)和甲醇(5mL)溶解，0℃下加入硼氢化钠(0.49g,12.940mmol,2eq)，再升至室温反应1小时，反应完后向反应液中加入水溶液(5毫升)淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物068-2(1.93g,95.87％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(d,J＝8.1Hz,1H),8.04(s,1H),7.66(d,J＝8.1Hz,1H),7.43–7.38(t,J＝8.1Hz,1H),7.06(d,J＝5.8Hz,1H),5.67–5.59(m,1H).

第三步：化合物068-3的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入1-(7-溴苯并[b]噻吩-3-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-醇(化合物068-2，500mg,1.607mmol,1eq)，N,N'-硫羰基二咪唑(429.61mg,2.410mmol,1.5eq)，并用四氢呋喃(10mL)溶解，升至70℃反应1小时，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物068-3(568mg,83.06％)。

LCMS:(ESI,m/z):421.10[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.62(t,J＝1.1Hz,1H),8.49(s,1H),8.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.92(t,J＝1.6Hz,1H),7.78–7.72(m,1H),7.61(q,J＝6.5Hz,1H),7.50(t,J＝7.9Hz,1H),7.19(dd,J＝1.8,0.8Hz,1H).

第四步：化合物068-4的合成

氮气保护下，反应瓶中加入1-(7-溴苯并[b]噻吩-3-基)-2,2,2-三氟乙基)1H-咪唑-1-硫代甲酸酯(化合物068-3，200mg,0.475mmol,1eq)，三正丁基氢锡(207.29mg,0.712mmol,1.5eq)，偶氮二异丁腈(15.59mg,0.095mmol,0.2eq)，并用甲苯(5mL)溶解，升至60℃反应1小时，反应完后加水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×5mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物068-4(100mg,70.66％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.01(d,J＝8.0Hz,1H),7.93(s,1H),7.68(d,J＝7.6Hz,1H),7.44(t,J＝7.8Hz,1H),4.01(q,J＝11.2Hz,2H).

第五步：化合物068-5的合成

氮气保护下，反应瓶中加入7-溴-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并[b]噻吩(化合物068-4，200mg,0.678mmol,1eq)，1,3-二碘-5,5-二甲基海因(386.2mg,1.017mmol,1.5eq)，三氟乙酸(2mL)和乙腈(10mL)溶解，升至80℃反应1小时，反应完后加水10mL，用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物068-5(114mg,31.96％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.99(d,J＝8.1Hz,1H),7.66–7.63(d,J＝8.1Hz,1H),7.41(t,J＝8.1Hz,1H),3.95(q,J＝10.9Hz,2H).

第六步：化合物068-6的合成

氮气保护下，反应瓶中加入7-溴-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并[b]噻吩(化合物068-5，90mg,0.214mmol,1eq)，3-甲氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酰胺(化合物002-3A，69.99mg,0.321mmol,1.5eq)，四三苯基膦钯(24.7mg,0.021mmol,0.1eq)，碘化亚铜(4.07mg,0.021mmol,0.1eq)，二异丙胺(216.32mg,2.140mmol,10.0eq)，并用四氢呋喃(4mL)溶解，50℃反应1小时，反应完后加水10mL，用乙酸乙酯萃取(3×10毫升)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得到化合物068-6(100mg,90.56％)。

LCMS:(ESI,m/z):510.90[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.12(d,J＝4.9Hz,1H),7.96(d,J＝8.1Hz,1H),7.73(dd,J＝7.7,0.9Hz,1H),7.48–7.41(m,2H),7.36(d,J＝1.9Hz,1H),6.76(d,J＝8.3Hz,1H),6.04(t,J＝6.3Hz,1H),4.36(d,J＝6.4Hz,2H),3.91(t,J＝10.9Hz,2H),3.84(s,3H),2.75(d,J＝4.5Hz,3H).

第七步：化合物068的合成

氮气保护，将4-((3-(7-溴-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并噻吩-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物068-6，20mg,0.039mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(10.34mg,0.078mmol,2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(3.29mg,0.004mmol,0.1eq)，碳酸铯(50.97mg,0.156mmol,4eq)，溶于1,4-二氧六环中(2mL)，80℃下搅拌反应过夜，反应完后将反应混合物冷却到室温，向反应液中加水10mL，用乙酸乙酯萃取(3×10毫升)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液减压浓缩。粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Sunfire C18 5μm,30mm*150mm；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B:乙腈；流速:60mL/min；洗脱梯度:15％B to 35％B in 8分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):7.22)，得到化合物068的甲酸盐(6.81mg,30.95％)。

LCMS:(ESI,m/z):563.45[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.12(q,J＝4.4Hz,1H),7.42(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.27(t,J＝7.8Hz,1H),7.20(d,J＝7.9Hz,1H),6.76(t,J＝7.4Hz,2H),6.03(t,J＝6.4Hz,1H),5.18(d,J＝8.6Hz,1H),4.79(d,J＝49.5Hz,1H),4.34(d,J＝6.4Hz,2H),3.89–3.73(m,5H),3.72–3.56(m,1H),3.03(t,J＝11.2Hz,1H),2.79(d,J＝11.1Hz,1H),2.75(d,J＝4.4Hz,3H),2.30–2.13(m,4H),2.07(t,J＝11.6Hz,1H),2.01–1.88(m,1H),1.75–1.65(m,1H).

实施例11

第一步：化合物138-1的合成

在室温下，向反应瓶内加入1-(7-溴苯并[b]噻吩-3-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(化合物068-1，500mg,1.618mmol,1eq)和二乙胺基三氟化硫(10mL)。在65℃下搅拌过夜，反应完后，将反应液冷却到室温，向冰水中逐滴加入反应液(20mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到化合物138-1(500mg,74.68％)。粗品直接用于下一步。

GCMS:(EI,m/z):330.0[M]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.73(s,1H),7.95(d,J＝8.2Hz,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H).

第二步：化合物138-2的合成

氮气保护，-78℃下向7-溴-3-(1,1,2,2,2-五氟乙基)苯并噻吩(化合物138-1，200mg,0.604mmol,1eq)的四氢呋喃溶液中加入二异丙基氨基锂(0.42mL,0.848mmol,1.40eq)搅拌，之后升温至室温，继续搅拌30分钟。室温下分批加入碘(306.63mg,1.208mmol,2eq)的四氢呋喃溶液，用时约5分钟。加入完毕后室温下继续搅拌1小时，反应完后向反应液中加水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)。合并有机相，用饱和食盐水反洗(1×60mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化，洗脱液为纯石油醚，得到化合物138-2(210mg,68.47％)。

GCMS:(EI,m/z):455.9[M]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.90(d,J＝8.3Hz,1H),7.75(d,J＝8.3Hz,1H),7.46(t,J＝8.3Hz,1H).

第三步：化合物138-3的合成

在氮气保护下，将化合物7-溴-2-碘-3-(1,1,2,2,2-五氟乙基)苯并噻吩(化合物138-2，150mg,0.328mmol,1eq)和3-甲氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酰胺(化合物002-3A，93.13mg,0.426mmol,1.3eq)用二甲基亚砜(10mL)溶解，再加入碘化亚铜(6.25mg,0.033mmol,0.1eq)、四三苯基膦钯(37.93mg,0.033mmol,0.1eq)和二异丙胺(332.14mg,3.280mmol,10eq)。50℃下继续搅拌1小时，反应完后将反应液冷却到室温，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到化合物138-3(120mg,53.44％)。

LCMS:(ESI,m/z):546.90[M+H]⁺.

第四步：化合物138的合成

在氮气保护下，向4-(3-[7-溴-3-(1,1,2,2,2-五氟乙基)苯并噻吩-2-基]丙基-2-炔-1-基氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物138-3，80mg,0.146mmol,1eq)和(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(28.98mg,0.219mmol,1.5eq)的1,4-二氧六环(50mL)溶液中，加入碳酸铯(191.08mg,0.584mmol,4eq)和(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(12.29mg,0.015mmol,0.1eq)。80℃下继续搅拌过夜，反应完后将反应液冷却到室温，加水10mL，用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(1×50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品通过高效液相纯化(层析柱规格:Sunfire C18 5μm,30mm×150mm；流动相:水(0.1％甲酸)和乙腈(洗脱梯度:15％B to 40％Bin 10min；)；检测波长:UV 254nm/220nm,保留时间8.53min)，得到化合物138的甲酸盐(1.51mg,1.72％)

LCMS:(ESI,m/z):599.15[M+H]⁺.

实施例12

第一步：化合物067-2的合成

氮气保护下，将3-溴-2-羟基苯甲醛(化合物067-1，10g,0.063mol,1eq)用二氯甲烷(20ml)溶解，加入氟硼酸(0.57g,0.007mol,0.01eq)，再加入重氮乙酸乙酯(17.12g,0.15mol,2.4eq)，待没有气体产生后加入硫酸(10ml)，反应结束后滴加碳酸钠溶液淬灭，水相用乙酸乙酯萃取(3×100毫升)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。得到化合物067-2(5g,75.56％)。

LCMS:(ESI,m/z):268.95[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.88(s,1H),7.98(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),7.68(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),7.37(t,J＝7.8Hz,1H),4.36(q,J＝7.1Hz,2H),1.35(t,J＝7.1Hz,3H).

第二步：化合物067-3的合成

氮气保护，将7-溴苯并呋喃-3-甲酸乙酯(化合物067-2，5g,0.018mol,1eq)用二氯甲烷(20ml)溶解，-78℃下滴加二异丁基氢化铝的甲苯溶液(40ml,0.037mol,2.0eq)，回温至室温搅拌1小时，反应结束后，反应混合物室温下用十水合硫酸钠的水溶液淬灭。反应混合物过滤后，用乙酸乙酯萃取(3×100毫升)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得到化合物067-3(3.6g,99.25％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.00(s,1H),7.71(dd,J＝7.8,1.1Hz,1H),7.55(dd,J＝7.8,1.0Hz,1H),7.22(t,J＝7.8Hz,1H),5.24(t,J＝5.5Hz,1H),4.63(dd,J＝5.5,1.1Hz,2H).

第三步：化合物067-4的合成

氮气保护下，将7-溴苯并呋喃-3-甲醇(化合物067-3，3.5g,0.015mol,1eq)用无水乙醚(10mL)溶解，0度下滴加三溴化磷(12.19g,0.045mol,3eq)，0℃搅拌反应30分钟。反应混合物用冰水淬灭，乙酸乙酯萃取(3×50毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚做洗脱剂)，得到化合物067-4(1.2g,99.18％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.29(s,1H),7.76(dd,J＝7.8,1.0Hz,1H),7.62(dd,J＝7.8,1.1Hz,1H),7.30(t,J＝7.8Hz,1H),4.90(d,J＝0.8Hz,2H).

第四步：化合物067-5的合成

氮气保护下，将7-溴-3-溴甲基苯并呋喃(化合物067-4，1.1g,0.004mol,1eq)，碘化亚铜(88mg,0.458mmol,0.12eq)，氟磺酰基二氟乙酸甲酯(1.54g,0.008mol,2eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，80℃下搅拌反应1小时，反应完后，向反应液中加水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×50毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗(3×50毫升)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚做洗脱剂)，得到化合物067-5(530mg,91.81％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.18(s,1H),7.75(d,J＝7.7Hz,1H),7.61(dd,J＝7.8,1.1Hz,1H),7.28(t,J＝7.8Hz,1H),3.87(qd,J＝11.4,0.9Hz,2H).

第五步：化合物067-6的合成

氮气保护下，将化合物7-溴-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并呋喃(化合物067-5，250mg,0.899mmol,1eq)，N-碘代丁二酰亚胺(243mg,1.079mmol,1.2eq)溶于三氟乙酸(4mL)中，室温下搅拌反应2小时。反应完后将反应液减压浓缩，再加水10mL，用乙酸乙酯萃取(3×20毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用反相柱层析纯化(条件如下：C18层析柱，流动相，水和乙腈，10％到60％梯度10分钟，UV254纳米检测器)。乙酸乙酯萃取出产品，有机相减压浓缩得到化合物067-6(103mg,72.53％)。GCMS:(ESI,m/z):403.9[M]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(t,J＝7.8Hz,1H),3.75(q,J＝11.1Hz,2H).

第六步：化合物067-7的合成

氮气保护下，将化合物7-溴-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并呋喃(化合物067-6，100mg,0.247mmol,1eq)，3-甲氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酰胺(化合物002-3A，80.9mg,0.371mmol,1.5eq)，四三苯基膦钯(28.6mg,0.025mmol,0.1eq)，碘化亚铜(5mg,0.025mmol,0.1eq)，二异丙胺(250mg,2.47mmol,10eq)用四氢呋喃(3mL)溶解，50℃搅拌反应1小时，反应完后加水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯做洗脱剂)，得到化合物067-7(69mg,97.12％)。

LCMS:(ESI,m/z):494.90[M+H]⁺.

第七步：化合物067的合成

氮气保护，将4-(3-(7-溴-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并呋喃-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物067-7，55mg,0.111mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺(22.02mg,0.167mmol,1.5eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(9.34mg,0.011mmol,0.1eq)，碳酸铯(144.72mg,0.444mmol,4eq)，溶于1,4-二氧六环中(3mL)，100℃下搅拌反应3小时，反应完后将反应液冷却到室温，加水5mL，用乙酸乙酯萃取(3×10毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Sunfire C18 5μm,30mm×150mm；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B:乙腈；流速:60mL/min；洗脱梯度:15％B to 35％B in 8分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):6.7)，得到化合物067的甲酸盐(15.71mg,99.91％)。

LCMS:(ESI,m/z):547.30[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.21(q,J＝4.5Hz,1H),7.50(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.44(d,J＝1.5Hz,1H),7.16(t,J＝7.8Hz,1H),6.98(d,J＝7.8Hz,1H),6.83(t,J＝7.5Hz,2H),6.13(t,J＝6.3Hz,1H),5.43(d,J＝9.0Hz,1H),4.85(d,J＝49.8Hz,1H),4.45(d,J＝6.3Hz,2H),3.93(s,3H),3.82–3.65(m,3H),3.11(t,J＝10.7Hz,1H),2.91–2.78(m,4H),2.37–2.21(m,4H),2.15(t,J＝10.9Hz,1H),2.02–1.89(m,1H),1.84–1.74(d,J＝9.9Hz,1H).

实施例13

第一步：化合物151-1的合成

氮气保护，0摄氏度下向5-溴-6-甲氧基异吲哚-1-酮(化合物099-2，4g,16.524mmol,1eq)的四氢呋喃溶液(150毫升)中加入氢化钠(1.32g,33.048mmol,2.00eq,60％),搅拌反应30分后，0℃下滴加碘甲烷(4.69g,33.048mmol,2.00eq)，加入完毕后体系室温下继续搅拌过夜。反应完后，室温下向反应液中加入水(250毫升)淬灭，用二氯甲烷萃取(3×150毫升)。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝20:1)，得到化合物151-1(1.2g,28.36％)。

LCMS:(ESI,m/z):255.90[M+H]⁺.

第二步：化合物151-2的合成

氮气保护，将5-溴-6-甲氧基-2-甲基异吲哚-1-酮(化合物151-1，1.2g,4.686mmol,1eq)，氨基甲酸叔丁酯(1.10g,9.372mmol,2.00eq)，(甲磺酸(双环己基)(3-异丙氧-2′,4′,6′-三异丙基-[1,1′-联苯]-2-基)膦烷(2′-甲氨基-1,1′-联苯-2-基)钯(430.41mg,0.469mmol,0.10eq)，双环己基(3-异丙氧-2′,4′,6′-三异丙基-[1,1′-联苯]-2-基)膦烷(250.59mg,0.469mmol,0.10eq)和碳酸铯(3.05g,9.372mmol,2.00eq)溶于1,4-二氧六环(20毫升)，100℃下搅拌反应2小时，反应完后，室温下向反应液中加入水(100毫升)淬灭，用乙酸乙酯萃取(2×100毫升)，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:3)，得到化合物151-2(800mg,58.40％)。

LCMS:(ESI,m/z):293.05[M+H]⁺.

第三步：化合物151-3的合成

氮气保护，0摄氏度下向(6-甲氧基-2-甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物151-2，680mg,2.326mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)溶液中加入氢化钠(83.73mg,3.489mmol,1.50eq),搅拌反应30分后，0℃下滴加加入炔丙基溴(415.07mg,3.489mmol,1.50eq)。室温下继续搅拌3小时，反应完后向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(20毫升)淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×20毫升)，合并有机相，饱和食盐水反洗(2×50毫升)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物151-3(700mg,91.09％)

LCMS:(ESI,m/z):331.05[M+H]⁺.

第四步：化合物151-4的合成

氮气保护下，将7-溴-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并[b]噻吩(化合物151-3，80mg,0.191mmol,1eq)，N-(6-甲氧基-2-甲基-1-氧代异吲哚-5-基)-N-(丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物068-5，94.3mg,0.286mmol,1.5eq)，四三苯基膦钯(22.02mg,0.019mmol,0.1eq)，碘化亚铜(3.62mg,0.019mmol,0.1eq)，二异丙胺(0.28ml,1.910mmol,10eq)用四氢呋喃(5mL)溶解，50℃搅拌反应1小时，反应完后加水5mL淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯做洗脱剂)，得到化合物151-4(98mg,76.01％)。

LCMS:(ESI,m/z):623.00[M+H]⁺.

第五步：化合物151-5的合成

氮气保护，将N-(3-(7-溴-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并噻吩-2-基)丙-2-炔-1-基)-N-(6-甲氧基-2-甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物151-4，30mg,0.048mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(14.84mg,0.072mmol,1.5eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(4.05mg,0.005mmol,0.1eq)，碳酸铯(62.89mg,0.192mmol,4eq)溶于1,4-二氧六环中(2mL)，80℃下搅拌反应过夜。反应完后将反应液冷却到室温，用水5mL淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/无水甲醇＝10:1)，得到化合物151-5(25mg,100％)。

LCMS:(ESI,m/z):675.20[M+H]⁺.

第六步：化合物151的合成

氮气保护下，将化合物N-(3-(7-(((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并噻吩-2-基)丙-2-炔-1-基)-N-(6-甲氧基-2-甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物151-5，25mg,1.607mmol,1eq)溶于1,4-二氧六环(2mL)，0℃下滴加2M的盐酸/二氧六环溶液1.8ml，滴加完毕后升至室温反应1小时，反应完后向反应液中加水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:XselectCSHTMPrep C18 5μm,19×150mm；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B:乙腈；流速:60mL/min；洗脱梯度:15％B to 37％B in 8分钟；检测波长:UV 254纳米/220纳米；保留时间(分钟):7.92)，得到化合物151的甲酸盐(1.21mg,99.84％)。

LCMS:(ESI,m/z):575.20[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.27(t,J＝7.9Hz,1H),7.20(d,J＝7.9Hz,1H),7.04(s,1H),6.87(s,1H),6.78(d,J＝7.6Hz,1H),6.17(t,J＝6.4Hz,1H),5.17(d,J＝8.5Hz,1H),4.80(d,J＝48.0Hz,1H),4.36(d,J＝6.3Hz,2H),4.28(s,2H),3.86(s,3H),3.82(q,J＝11.2Hz,2H),3.69-3.62(m,1H),3.12–3.04(m,1H),3.02(s,3H),2.81(d,J＝11.1Hz,1H),2.41-2.19(m,1H),2.20(s,3H),2.15–2.05(m,1H),2.01–1.88(m,1H),1.77–1.65(m,1H).

实施例14

第一步：化合物153-2的合成

氮气保护下，将化合物2-硝基-5-溴苯甲醚(化合物153-1，5g,21.549mol,1eq)溶于二氧六环(10ml)，加入2-唑烷酮(2.81g,32.323mmol,1.5eq)，N1,N2-二甲基-1,2-环已二胺(0.31g,2.15mmol,0.1eq)，碘化亚铜(0.41g,2.155mmol,0.1eq)和碳酸钾(3.57g,25.859mmol,1.2eq)，100℃反应过夜，反应结束后加水淬灭，水相用乙酸乙酯萃取(3×50毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物153-2(3.7g,72.08％)。

LCMS:(ESI,m/z):239.00[M+H]⁺.

第二步：化合物153-3的合成

将3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)恶唑烷-2-酮(化合物153-2，3.6g,0.015mol,1eq)，还原铁粉(4.2g,0.075mol,5eq)，氯化铵(2.4g,0.045mol,3eq)用乙醇/水(4:1)混合溶液(36mL)溶解，60℃下反应1小时，反应结束后，反应混合物用砂芯漏斗过滤后，乙酸乙酯萃取(3×500毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到化合物153-3(1.9g,60.38％)。

LCMS:(ESI,m/z):209.00[M+H]⁺.

第三步：化合物153-4的合成

在氮气保护下，室温下，向3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)恶唑烷-2-酮(化合物153-3，0.5g,0.002mol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(10.0mL)溶液中，分批加入碳酸钾(0.99g,0.007mol,3eq)和3-溴丙炔(0.28g,0.002mol,1eq)，80℃下继续搅拌2小时，反应完后，室温下向反应液中加入水(50毫升)，用乙酸乙酯萃取(3×50毫升)，合并有机相，饱和食盐水反洗(3×30毫升)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得到化合物153-4(0.19g,32.13％)。

LCMS:(ESI,m/z):247.00[M+H]⁺.

第四步：化合物153-5的合成

氮气保护下，将7-溴-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并噻吩(化合物068-5，205mg,0.487mmol,1.2eq)，3-(3-甲氧基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯基)恶唑烷-2-酮(化合物153-4，120mg,0.41mmol,1.0eq)，四三苯基膦钯(46.92mg,0.041mmol,0.1eq)，碘化亚铜(7.73mg,0.041mmol,0.1eq)，二异丙胺(410mg,4.06mmol,10eq)，用四氢呋喃(3mL)溶解，50℃搅拌反应1小时，反应完后加水5mL淬灭，乙酸乙酯萃取(3×10毫升)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯洗脱)，得到化合物153-5(85mg,38.81％)。

LCMS:(ESI,m/z):540.85[M+H]⁺.

第五步：化合物153的合成

氮气保护，将3-(4-(3-(7-溴-3-(2,2,2-三氟乙基)苯并噻吩-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯基)恶唑烷-2-酮(化合物153-5，30mg,0.056mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺(8.82mg,0.067mmol,1.2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(4.68mg,0.006mmol,0.1eq)，碳酸铯(72.49mg,0.224mmol,4eq)溶于1,4-二氧六环(3mL)中，100℃下搅拌反应过夜，反应完后将反应混合物冷却到室温，加水5mL，乙酸乙酯萃取(3×10毫升)，合并有机相，饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Sunfire C18 5μm,30mm×150mm；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B:乙腈；流速:60mL/min；洗脱梯度:20％B to 40％B in 10分钟；检测波长:UV254nm/220nm；保留时间(分钟):6.5)，得到化合物153的甲酸盐(3.73mg,11.29％)。

LCMS:(ESI,m/z):591.20[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.29–7.17(m,3H),6.88(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.77(dd,J＝8.1,4.8Hz,2H),5.45(t,J＝6.6Hz,1H),5.16(d,J＝8.5Hz,1H),4.80(d,J＝48.3Hz,1H),4.43–4.36(m,2H),4.28(d,J＝6.5Hz,2H),4.04–3.98(m,2H),3.86–3.72(m,5H),3.71–3.56(m,1H),3.12–2.99(m,1H),2.81(d,J＝11.0Hz,1H),2.30-2.03(m,5H),2.00–1.89(m,1H),1.78–1.65(m,1H).

实施例15

第一步：化合物103-2的合成

反应瓶中加入乙腈(化合物103-1，4.72g,114.872mmol,3.4eq)，四氢呋喃(150mL)溶液，-78℃下，逐滴加入正丁基锂(44mL)，继续搅拌1小时。再逐滴加入溶有2,6-二氯吡啶(5g,33.786mmol,1eq)的四氢呋喃溶液(50mL)，-78℃下继续反应2小时，再升温至室温反应30分钟。反应完后加水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×300mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得到化合物103-2(4.66g,89.49％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.92(t,J＝7.8Hz,1H),7.52(dd,J＝8.0,0.7Hz,1H),7.45(dd,J＝7.6,0.7Hz,1H),4.26(s,2H).

第二步：化合物103-3的合成

反应瓶中加入2-(6-氯吡啶-2-基)乙腈(化合物103-2，5g,32.770mmol,1eq)，用二氯甲烷(100mL)溶解，0℃下加入溶有2-[(氨基氧基)磺酰基]-1,3,5-三甲基苯(化合物103-2A，14.11g,65.546mmol,2.00eq)的二氯甲烷溶液(70mL)，0℃下继续搅拌2小时。反应完后加入乙醚，再旋干溶剂，得到粗产物103-3(7g,40.65％)，直接投入下一步。

第三步：化合物103-4的合成

反应瓶中加入1-氨基-2-氯-6-(氰基甲基)吡啶-1-鎓-2,4,6-三甲基苯磺酸盐(化合物103-3，8g,21.748mmol,1eq)，用甲醇(80.0mL)溶解，冰浴下加入碳酸钾(6.01g,43.496mmol,2.00eq)，再升至室温反应过夜。反应完后旋掉溶剂，加水，用二氯甲烷萃取(3×100mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝50:1)，得到化合物103-4(1.7g,39.64％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.28(dd,J＝8.8,1.2Hz,1H),7.01(dd,J＝8.8,7.3Hz,1H),6.75(dd,J＝7.3,1.2Hz,1H),5.80(s,1H),5.57(s,2H).

第四步：化合物103-5的合成

反应瓶中依次加入7-氯吡唑[1,5-a]吡啶-2-胺(化合物103-4，1.4g,8.353mmol,1eq)，4-二甲氨基吡啶(102.05mg,0.835mmol,0.1eq)，二碳酸二叔丁酯(2.01g,9.188mmol,1.1eq)，用二氧六环(20mL)溶解，室温反应3小时。反应完后加水稀释，用二氯甲烷萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物103-5(634mg,22.68％)。

LCMS:(ESI,m/z):267.85[M+H]⁺.

第五步：化合物103-6的合成

反应瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(化合物103-5，344.03mg,4.706mmol,2eq)和四氢呋喃(13mL)，0℃下加入三氯氧磷(1.08g,7.059mmol,3eq)，反应30分钟，再加入(7-氯吡啶并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(630mg,2.353mmol,1eq)，升至40℃反应30分钟，反应完后加入饱和碳酸钠溶液淬灭，用二氯甲烷萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，直接得到化合物103-6(791mg,90.93％)。

LCMS:(ESI,m/z):296.00[M+H]⁺.

第六步：化合物103-7的合成

反应瓶中加入(7-氯-3-甲酰基吡啶并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物103-6，740mg,2.502mmol,1eq)，用二氯甲烷(5mL)和三氟乙酸(5mL)溶解，室温反应30分钟。反应完后直接旋干溶剂，得到粗产物103-7(800mg,138.92％)，直接投入下一步。

LCMS:(ESI,m/z):196.00[M+H]⁺.

第七步：化合物103-8的合成

反应瓶中加入2-氨基-7-氯吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲醛(化合物103-7，490mg,2.505mmol,1eq)，对甲苯磺酸水合物(1.43g,7.515mmol,3eq)，用乙腈(8mL)溶解，另一反应瓶中加入亚硝酸钠(345.66mg,5.010mmol,2eq)，碘化钾(1.04g,6.262mmol,2.5eq)，用水(2mL)溶解，再将此混合水溶液逐滴加入至前面的乙腈溶液中，室温反应过夜。反应完后加入饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物103-8(180mg,23.21％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.76(s,1H),8.22(dd,J＝8.7,1.2Hz,1H),7.73(dd,J＝8.7,7.5Hz,1H),7.54(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H).

第八步：化合物103-9的合成

反应瓶中加入7-氯-2-碘代吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲醛(化合物103-8，160mg,0.522mmol,1eq)，(三苯基磷鎓基)二氟乙酸内盐(372.01mg,1.044mmol,2eq)，用N,N-二甲基甲酰胺(8.0mL)溶解，60℃反应2小时，再加入四丁基氟化铵溶液(1M的四氢呋喃溶液，1.566mL,1.566mmol,3.00eq)，继续反应1小时。反应完后加入乙酸乙酯稀释，再加水，用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物103-9(57mg,29.98％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.85–7.82(m,1H),7.38(dd,J＝8.9,7.3Hz,1H),7.25(dd,J＝7.3,1.1Hz,1H),3.78(q,J＝11.0Hz,2H).

第九步：化合物103-10的合成

氮气保护下，反应瓶中加入7-氯-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶(化合物103-9，50mg,0.139mmol,1eq)，3-甲氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酰胺(化合物002-3A，36.33mg,0.167mmol,1.2eq)，四三苯基膦钯(16.03mg,0.014mmol,0.1eq)，碘化亚铜(2.64mg,0.014mmol,0.1eq)，二异丙胺(140.35mg,1.390mmol,10.0eq)，用四氢呋喃(3mL,37.028mmol,266.97eq)溶解，50℃反应1小时。反应完后直接旋干溶剂，所得粗品用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯洗脱)，得到化合物103-10(46mg,72.83％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.10(d,J＝4.7Hz,1H),7.81–7.77(m,1H),7.43–7.40(m,1H),7.38–7.30(m,3H),6.77(d,J＝8.3Hz,1H),6.00(t,J＝6.4Hz,1H),4.32(d,J＝6.4Hz,2H),3.84(s,3H),3.74(q,J＝11.0Hz,2H),2.75(d,J＝4.5Hz,3H).

第十步：化合物103的合成

氮气保护，将化合物4-(3-(7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物103-10，35.0mg,0.078mmol,1.0eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(20.52mg,0.156mmol,2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(6.53mg,0.008mmol,0.1eq)，碳酸铯(101.17mg,0.312mmol,4eq)溶于1,4-二氧六环中(3mL)，120℃下搅拌反应12小时。反应完后，将反应混合物冷却到室温，用水淬灭，乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Xselect CSHTM Prep C18 5μm19*150mm OBD；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B:乙腈；流速:60mL/min；洗脱梯度:10％B升至30％B用时8分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):7.9)，得到化合物103(24.9mg,58.51％)的甲酸盐。

LCMS:(ESI,m/z):547.20[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.09(q,J＝4.2Hz,1H),7.41(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.26(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.75(d,J＝8.3Hz,1H),6.30(d,J＝7.6Hz,1H),6.20(d,J＝9.0Hz,1H),5.99(t,J＝6.3Hz,1H),4.86(d,J＝49.5Hz,1H),4.30(d,J＝6.3Hz,2H),3.91–3.71(m,4H),3.65(q,J＝11.1Hz,2H),3.05(t,J＝11.8Hz,1H),2.82–2.69(d,J＝4.5Hz,4H),2.35–2.30(m,1H),2.20(s,3H),2.13(t,J＝11.5Hz,1H),1.97–1.89(m,1H),1.88–1.78(m,1H).

实施例16

第一步：化合物210-2的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(化合物210-1，10g,58.436mmol,1eq)，用甲醇(50mL,1234.942mmol,21.13eq)和水(5mL,277.546mmol,4.75eq)溶解，0℃下加入甲硫醇钠(8.19g,116.872mmol,2eq)，升温至65℃搅拌反应2小时，反应完后，将反应混合物减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到化合物210-2(7.2g,59.87％)。

LCMS:(ESI,m/z):200.00[M+H]⁺.

第二步：化合物210-3的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入(3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)硫烷(化合物210-2，7g,35.137mmol,1eq)，用二氯甲烷(30mL,471.918mmol,13.43eq)溶解，降温至0℃后分批加入间氯过氧苯甲酸(6.06g,35.137mmol,1eq)，回温至室温搅拌反应2小时，反应完后，反应混合物0℃下加入水(30ml)淬灭，反应混合物用乙酸乙酯萃取(30ml×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(50ml),无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得到化合物210-3(6.5g,83.89％)。

LCMS:(ESI,m/z):216.40[M+H]⁺.

第三步：化合物210-4的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入2-甲氧基-4-(甲基亚磺酰基)-1-硝基苯(化合物210-3，6.4g,29.737mmol,1eq)，(二乙酰氧基碘)苯(3.8g,118.948mmol,4eq)，醋酸铵(2.2g,29.737mmol,1eq)，用甲醇(100mL,2469.883mmol,83.06eq)溶解，室温搅拌反应3小时，反应完后，将混合物减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/无水甲醇＝10:1)，得到化合物210-4(5g,65.65％)。

LCMS:(ESI,m/z):231.35[M+H]⁺.

第四步：化合物210-5的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入亚氨基(甲基)(3-甲氧基-4-硝基苯基)-λ⁶-砜(化合物210-4，5g,21.716mmol,1eq)，用无水乙醇(20mL,344.266mmol,15.85eq)和水(4mL,222.037mmol,10.22eq)溶解，升温至70℃，加入铁粉(5.4g,97.722mmol,4.5eq)和氯化铵(10.4g,195.444mmol,9eq)，搅拌反应1小时，反应完后，将混合物减压浓缩，所得粗品用反相柱层析纯化(条件如下：C18层析柱，流动相，水(5％三氟乙酸)和乙腈，5％到50％梯度20分钟，UV254纳米检测器)，得到化合物210-5(3g,68.57％)。

LCMS:(ESI,m/z):201.45[M+H]⁺.

第五步：化合物210-6的合成

氮气保护下，向20ml封管中加入亚氨基(甲基)(4-氨基-3-甲氧基苯基)-λ⁶-砜(化合物210-5，1g,4.994mmol,1eq)，N,N-二甲基甲酰胺(10mL,129.215mmol,25.88eq)溶解，再加入溴代丙炔(712.84mg,5.993mmol,1.2eq)和N,N-二异丙基乙胺(1290.79mg,9.988mmol,2eq)，封管密闭后升温至50℃搅拌反应8小时，反应完后，反应混合物用反相柱层析纯化(条件如下：C18层析柱，流动相，水(5％三氟乙酸)和乙腈，5％到50％梯度20分钟，UV254纳米检测器)，得到化合物210-6(200mg,9.23％)。

LCMS:(ESI,m/z):238.85[M+H]⁺.

第六步：化合物210-7的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入亚氨基(甲基)(3-甲氧基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯基)-λ⁶-砜(化合物210-6，126.92mg,0.533mmol,1.2eq)，7-氯-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物103-9，160mg,0.444mmol,1.00eq)，四(三苯基磷)钯(51.29mg,0.044mmol,0.1eq)，碘化亚铜(8.45mg,0.044mmol,0.1eq)，二异丙胺(449.12mg,4.440mmol,10eq)，用四氢呋喃(8mL,98.742mmol,222.48eq)溶解，升温至50℃搅拌反应1小时，反应完后，将反应混合物减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/无水甲醇＝10:1)，得到粗品混合物，将粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱:XselectCSHTM PrepC18 5μm 30*150mm OBD；流动相A:水(0.1％三氟乙酸),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；洗脱梯度:22％B to 40％B in 10min；检测波长:254nm/220nm；保留时间(min):7.85)，得到化合物210-7(60mg,28.45％)。LCMS:(ESI,m/z):471.40[M+H]⁺

第七步：化合物210的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入亚氨基(甲基)((4-(3-(7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-λ⁶-砜(化合物210-7，60mg,0.127mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(20.21mg,0.152mmol,1.2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(10.72mg,0.013mmol,0.1eq)，碳酸铯(166.06mg,0.508mmol,4eq)，用1,4-二氧六环(2mL)溶解，升温至120℃搅拌反应2小时，反应完后将反应混合物减压浓缩。粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱:XBridge BEH C18 OBD Prep Column130,5μm,30mm*150mm；流动相A:水(10mmol/L NH₄HCO₃),流动相B:乙腈；流速：60mL/min；洗脱梯度:29％B to 49％B in 10min；检测波长:254nm/220nm；保留时间(min):8.38)，得到化合物210(3mg,4.14％)。

LCMS:(ESI,m/z):566.85[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.42(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H),7.30(d,J＝1.9Hz,1H),7.26(t,J＝8.3Hz,1H),6.99(d,J＝8.6Hz,1H),6.86(d,J＝8.4Hz,1H),6.31(t,J＝6.5Hz,1H),6.29(s,1H),6.18(d,J＝9.0Hz,1H),4.92(s,0.5H),4.79(s,0.5H),4.34(d,J＝6.3Hz,2H),3.88(s,3H),3.85–3.72(m,2H),3.66(q,J＝10.8Hz,2H),3.09–3.00(m,1H),2.98(s,3H),2.82–2.73(m,1H),2.36–2.23(m,1H),2.20(s,3H),2.17–2.06(m,1H),1.97–1.76(m,2H).

实施例17

第一步：化合物209-2的合成

在室温下，向100mL三口烧瓶内加入7-氨基-2,3-二氢苯并呋喃(化合物209-1，4.5g,33.292mmol,1eq)，用N,N-二甲基甲酰胺(45mL)溶解，降至0℃，缓慢滴加N-溴代丁二酰亚胺(6518.1mg,36.621mmol,1.1eq)，自然升至室温，搅拌反应3小时，反应完后用水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，饱和食盐水反洗(3×50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用反相柱层析纯化，条件如下：层析柱规格：C18(300g)，流动相：水(0.05％三氟乙酸)和乙腈，20％到50％梯度20分钟，约40％收集目标产物，检测波长：UV 220nm。得到化合物209-2(4.5g,59.99％)。

LCMS:(ESI,m/z):213.80[M+H]⁺.

第二步：化合物209-3的合成

在室温下，向100mL两口烧瓶内加入4-溴-7-氨基-2,3-二氢苯并呋喃(化合物209-2，3g,0.14mmol,1eq)，用四氢呋喃(30mL)溶解，降至0℃，加入双三甲基硅基氨基钠(5.65g,0.31mmol,2.2eq)，保持0℃下，搅拌30分钟后加入二碳酸二叔丁酯(3.36g,0.15mmol,1.1eq)，缓慢升至室温搅拌1小时后停止反应，室温下用水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合并有机相，饱和食盐水反洗(1×40mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用反相柱层析纯化，条件如下：层析柱规格：C18(300g)，流动相：水(0.05％三氟乙酸)和乙腈，30％到60％梯度30分钟，约55％得到目标产物，检测波长：UV 220nm。得到化合物209-3(3g,68.18％)。LCMS:(ESI,m/z):258.00[M-56+H]⁺.

第三步：化合物209-4的合成

在室温下，向100mL高压釜内加入N-(4-溴-2,3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物209-3，1.2g,3.819mmol,1eq)和1,3-双(二苯基膦)丙烷(0.16g,0.382mmol,0.1eq)，醋酸钯(0.09g,0.382mmol,0.1eq)和三乙胺(4mL)，用N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和无水甲醇(10mL)溶解，通入一氧化碳至0.4MPa,140℃下反应过夜，反应完后将反应混合物冷却到室温，所得粗品真空浓缩，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×40mL)，合并有机相，饱和食盐水反洗(1×50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝30:70)，得到化合物209-4(800mg,64.27％)。

LCMS:(ESI,m/z):237.85[M-56+H]⁺.

第四步：化合物209-5的合成

在室温下，向50mL三口烧瓶内加入7-[(叔丁氧羰基)氨基]-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-羧酸甲酯(化合物209-4，500mg,1.705mmol,1eq)用N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶解，降至0℃，加入氢化钠(49.09mg,2.046mmol,1.2eq)，0℃下搅拌半小时后加入溴丙炔(243.34mg,2.046mmol,1.2eq)，缓慢升至室温搅拌反应1小时，反应完以后加水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，饱和食盐水反洗(1×50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝80:20)，得到化合物209-5(450mg,71.70％)。

LCMS:(ESI,m/z):276.00[M-56+H]⁺.

第五步：化合物209-6的合成

在室温下，将化合物7-叔丁氧羰基((丙基-2-炔基-1-基)氨基)-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-羧酸甲酯(化合物209-5，500mg,1.575mmol,1eq)和氢氧化锂(75.46mg,3.150mmol,2eq)溶于水(3mL)/四氢呋喃(3mL)/无水甲醇(3mL)的混合溶液，搅拌反应过夜，反应完后将反应液真空浓缩，得到化合物209-6(450mg,90.01％)。

LCMS:(ESI,m/z):262.40[M-56+H]⁺.

第六步：化合物209-7的合成

室温下，将化合物7-叔丁氧羰基((丙基-2-炔基-1-基)氨基)-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-羧酸(化合物209-6，500mg,1.576mmol,1eq)，甲胺盐酸盐(159.58mg,2.364mmol,1.5eq)，N,N-二异丙基乙胺(1.01g,7.88mmol,5eq)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(898.64mg,2.364mmol,1.5eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，搅拌反应1小时，反应完后，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)，得到化合物209-7(600mg,22.08％)。

LCMS:(ESI,m/z):275.40[M-56+H]⁺.

第七步：化合物209-8的合成

氮气保护，向反应瓶中加入(4-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)(丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物209-7，100mg,(7-0.303mmol,1.00eq)，7-氯-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物103-9，100mg,0.303mmol,1.00eq)，四(三苯基磷)钯(34.98mg,0.030mmol,0.1eq)，碘化亚铜(5.76mg,0.030mmol,0.1eq)，二异丙胺(306.29mg,3.030mmol,10eq)，用四氢呋喃(8mL)溶解，升至50℃搅拌反应3小时，反应完后将反应液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到化合物209-8(90mg,47.54％)。

LCMS:(ESI,m/z):507.00[M-56+H]⁺.

第八步：化合物209-9的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入(3-(7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)(4-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物209-8，80mg,0.142mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(22.54mg,0.170mmol,1.2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(11.95mg,0.014mmol,0.1eq)，碳酸铯(185.2mg,0.568mmol,4eq)，用1,4-二氧六环(2mL)溶解，升温至120℃，搅拌反应2小时，反应完后将反应液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到化合物209-9(70mg,71.04％)。

LCMS:(ESI,m/z):659.00[M+H]⁺.

第八步：化合物209的合成

室温下，将(3-(7-(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)(4-(4甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物209-9，60mg,0.091mmol,1eq)溶于无水甲醇(2mL)，滴加氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4M,0.2mL)，常温下搅拌反应2小时，反应完后将反应液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Xselect CSHTM Prep C18 5μm,30mm*150mmOBD；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B:乙腈；流速:60mL/分；洗脱梯度:10％B升至32％B用时8分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):8.48)，得到化合物209(17.92mg,35.08％)。

LCMS:(ESI,m/z):559.30[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.90(q,J＝4.2Hz,1H),7.30–7.23(m,1H),7.16(d,J＝8.3Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.64(d,J＝8.3Hz,1H),6.30(d,J＝7.4Hz,1H),6.22(d,J＝8.8Hz,1H),5.84(t,J＝6.4Hz,1H),4.88(d,J＝49.4Hz,1H),4.53(t,J＝8.8Hz,2H),4.28(d,J＝6.4Hz,2H),3.94–3.75(m,1H),3.65(q,J＝11.1Hz,2H),3.41(t,J＝8.8Hz,2H),3.17–3.00(s,1H),2.82(d,J＝11.2Hz,1H),2.71(d,J＝4.5Hz,3H),2.44–2.28(m,1H),2.26–2.10(m,4H),2.02–1.79(m,2H).

实施例18

第一步：化合物211-1的合成

氮气保护，亚氨基(3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)-λ⁶-砜(化合物210-4，8g,34.746mmol,1eq)的甲醛(64mL)和甲酸(160mL)溶液在100℃下，搅拌反应24小时，反应完后将反应混合物冷却到室温，将反应液减压浓缩，所得粗品用反相柱层析纯化，条件如下：C18层析柱，流动相：水(10毫摩尔每升碳酸氢铵)和乙腈，10％到50％梯度50分钟，检测波长：UV254/220nm,流速80毫升每分钟，流动相旋干得到化合物211-1(2g,23.56％)。

LCMS:(ESI,m/z):245.40[M+H]⁺.

第二步：化合物211-2的合成

氮气保护，65℃下向(3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)(甲基亚氨基)-λ⁶-砜(化合物211-1，2g,8.188mmol,1eq)的乙醇(20mL)和水(4mL)溶液中加入铁粉(2.78g,49.781mmol,4.50eq)和氯化铵(3.94g,73.692mmol,9.00eq)，搅拌反应2小时，过滤，滤饼用二氯甲烷(2×20mL)洗涤，滤液减压浓缩，所得粗品用二氯甲烷/甲醇(27mL/1.5mL)搅拌2小时，过滤，滤饼用二氯甲烷(2×20mL)洗涤，滤液减压浓缩得到化合物211-2(1.8g,92.34％)。

LCMS:(ESI,m/z):214.85[M+H]⁺.

第三步：化合物211-3的合成

在30mL封管中，将(4-氨基-3-甲氧基苯基)(甲基)(甲基亚氨基)-λ⁶-砜(化合物211-2，1g,4.667mmol,1eq)，3-溴丙炔(0.56g,4.714mmol,1.01eq)和N,N-二异丙基乙胺(1.21g,9.381mmol,2.01eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液，80℃下搅拌反应3天，反应完后将反应混合物冷却到室温，所得粗品用反相柱层析纯化，条件如下：C18层析柱，流动相：水(10毫摩尔每升碳酸氢铵)和乙腈，10％到50％梯度40分钟，检测波长：UV254/220nm，旋干得到化合物211-3(140mg,11.89％)。

LCMS:(ESI,m/z):253.45[M+H]⁺.

第四步：化合物211-4的合成

氮气保护，50℃下，(3-甲氧基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯基)(甲基)(甲基亚氨基)-λ⁶-砜(化合物211-3，100mg,0.396mmol,1eq)，7-氯-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶(化合物103-9，142.87mg,0.396mmol,1eq)，碘化亚铜(7.55mg,0.040mmol,0.1eq)，二异丙胺(401.03mg,3.960mmol,10eq)和四三苯基磷钯(45.8mg,0.040mmol,0.1eq)的四氢呋喃(5mL)溶液搅拌反应1小时。反应完后将反应混合物冷却到室温，减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到化合物211-4(120mg,62.44％)。

LCMS:(ESI,m/z):484.75[M+H]⁺.

第五步：化合物211的合成

氮气保护，110℃下，(4-((3-(7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯基)(甲基)(甲基亚氨基)-λ⁶-砜(化合物211-4，100mg,0.206mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(63.44mg,0.309mmol,1.5eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(17.35mg,0.021mmol,0.10eq)和碳酸铯(201.6mg,0.618mmol,3.00eq)的1,4-二氧六环(5mL)溶液搅拌反应2小时。反应结束后将反应混合物冷却到室温，减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到粗品化合物211。粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:YMC Triart C18 ExRs 5m,30mm×150mm；流动相A:水(10毫摩尔每升碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；梯度:35％B升至57％B用时10分钟；波长:UV 254nm/220nm；RT1(分钟):8.41.)，得到化合物211，通过手性纯化得到化合物211-A(8.53mg,42.48％)和211-B(7.69mg,38.33％)，条件如下(层析柱规格:CHIRALPAK-IC 2×25cm,5m；流动相：正己烷(0.1％二乙胺)，流动相B:甲醇:二氯甲烷＝1:1；流速:20毫升每分钟；梯度:60；波长:UV 254nm/220nm；RT1(分钟):4.82；RT2(分钟):7.42；样品溶剂:甲醇；单次进样量:2.0mL；进样次数:1)。

化合物211-A，保留时间4.82分钟

LCMS:(ESI,m/z):580.85[M+H]⁺.

¹H NMR:(400MHz,DMSO-d₆)δ7.31(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.29–7.24(m,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.00(d,J＝8.7Hz,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),6.37(t,J＝6.3Hz,1H),6.30(d,J＝7.4Hz,1H),6.20(d,J＝8.9Hz,1H),4.86(d,J＝48.0Hz,1H),4.34(d,J＝6.3Hz,2H),3.88(s,3H),3.83–3.73(m,1H),3.65(q,J＝11.2Hz,2H),3.07(t,J＝12.0Hz,1H),3.01(s,3H),2.78(d,J＝11.3Hz,1H),2.45(s,3H),2.32–2.07(m,5H),1.98–1.79(m,2H).

化合物211-B，保留时间7.42分钟

LCMS:(ESI,m/z):580.85[M+H]⁺.

¹H NMR:(400MHz,DMSO-d₆)δ7.31(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H),7.29–7.24(m,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.00(d,J＝8.6Hz,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),6.37(t,J＝6.3Hz,1H),6.30(d,J＝7.5Hz,1H),6.19(d,J＝9.1Hz,1H),4.86(d,J＝48.0Hz,1H),4.35(d,J＝6.3Hz,2H),3.88(s,3H),3.84–3.72(m,1H),3.66(q,J＝11.2Hz,2H),3.07(t,J＝12.0Hz,1H),3.01(s,3H),2.78(d,J＝11.0Hz,1H),,2.45(s,3H),2.33–2.21(m,1H),2.20(s,3H),2.12(t,J＝11.1Hz,1H),1.98–1.79(m,2H).

实施例19

第一步：化合物228-2的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入4-(叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物228-1，900mg,3.199mmol,1eq)，用N,N-二甲基甲酰胺(9.0mL)溶解，降温至0℃，再加入氢化钠(115.17mg,4.798mmol,1.5eq)，搅拌反应30分钟，再加入3-溴丙炔(570.9mg,4.798mmol,1.5eq)，升温至室温搅拌反应1小时，反应完后，将反应混合物用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物228-2(850mg,82.11％)。

LCMS:(ESI,m/z):220.45[M-100+H]⁺.

第二步：化合物228-3的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入4-(叔丁氧羰基)(丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物228-2，800mg,2.505mmol,1eq)，用二氯甲烷(4.7mL)溶解，降温至0℃后滴加4摩尔每升的盐酸二氧六环溶液(4.7mL)，滴加完毕升温至室温搅拌反应1小时，反应完后，反应混合物用饱和碳酸钠溶液碱化到pH＝8，水相用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。得到化合物228-3(600mg,96.07％)。

LCMS:(ESI,m/z):220.45[M+H]⁺.

第三步：化合物228-4的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入3-甲氧基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酸甲酯(化合物228-3，291.91mg,1.332mmol,1.2eq)，7-氯-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物103-9，400mg,1.110mmol,1.00eq)，四(三苯基磷)钯(128.22mg,0.111mmol,0.1eq)，碘化亚铜(21.13mg,0.111mmol,0.1eq)，二异丙胺(1122.81mg,11.100mmol,10eq)，加入四氢呋喃(10mL)溶解，升温至50℃搅拌反应1小时，反应完后将反应混合物减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝15:1)，得到化合物228-4(500mg,89.46％)。

LCMS:(ESI,m/z):452.40[M+H]⁺.

第四步：化合物228-5的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入4-(3-(7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑(1,5-a)吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸酯(化合物228-4，500mg,1.107mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(175.53mg,1.328mmol,1.2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(93.08mg,0.111mmol,0.1eq)，碳酸铯(1442.22mg,4.428mmol,4eq)，加入1,4-二氧六环(10mL)溶解，升温至100℃搅拌反应4小时，反应完后将反应混合物减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到化合物228-5(350mg,49.10％)。

LCMS:(ESI,m/z):548.00[M+H]⁺.

第五步：化合物228-6的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入4-(3-(7-((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸酯(化合物228-5，350mg,0.639mmol,1eq)，氢氧化锂(76.54mg,3.195mmol,5eq)，加入四氢呋喃(5mL)，甲醇(5mL)和水(5mL)溶解，升温至50℃搅拌反应6小时，反应完后，反应混合物用1摩尔每升的盐酸水溶液中和到pH＝7，过滤，滤饼用二氯甲烷(150mL×2)洗涤，得到滤液，分液后有机相减压浓缩，得到化合物228-6(280mg,82.10％)。

LCMS:(ESI,m/z):534.50[M+H]⁺.

第六步：化合物228的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入4-(3-(7-((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(化合物228-6，50mg,0.094mmol,1eq)，2,2,2-三氟乙烷-1-胺(18.57mg,0.188mmol,2eq)，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N’,N’,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(53.45mg,0.141mmol,1.5eq)，N,N-二异丙基乙胺(60.56mg,0.470mmol,5eq)，用N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶解，室温搅拌反应过夜，反应完后将反应混合物用乙酸乙酯萃取(20mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Kinetex 5m EVO C18,30mm*150mm；流动相A:水(10毫摩尔每升NH₄HCO₃)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:38％B升至64％B用时10分钟；检测波长:UV254nm/220nm；保留时间(分钟):7.57)，得到化合物228(15.27mg,26.38％)

LCMS:(ESI,m/z):614.80[M+H]⁺.

¹H NMR:(400MHz,DMSO-d₆)δ8.70(t,J＝6.2Hz,1H),7.51(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),7.41(d,J＝1.9Hz,1H),7.26(dd,J＝8.7,7.6Hz,1H),6.99(d,J＝8.6Hz,1H),6.79(d,J＝8.3Hz,1H),6.30(d,J＝7.6Hz,1H),6.19(d,J＝9.0Hz,1H),6.13(t,J＝6.3Hz,1H),4.86(d,J＝49.5Hz,1H),4.33(d,J＝6.2Hz,2H),4.10–4.00(m,2H),3.86(s,3H),3.81–3.75(m,1H),3.65(q,J＝11.0Hz,2H),3.05(t,J＝11.5Hz,1H),2.77(d,J＝11.4Hz,1H),2.36–2.23(m,1H),2.20(s,3H),2.16–2.08(m,1H),1.95–1.79(m,2H).

实施例20

第一步：化合物244的合成

氮气保护下，向反应瓶中加入4-(3-(7-((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(化合物228-6，50mg,0.094mmol,1eq)，氨基乙腈(10.51mg,0.188mmol,2eq)，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N’,N’,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(53.45mg,0.141mmol,1.5eq)，N,N-二异丙基乙胺(60.56mg,0.470mmol,5.00eq)，加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶解，室温搅拌反应过夜，反应完后将反应混合物用乙酸乙酯萃取(20mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化得到90％纯度的粗品，条件如下(层析柱规格:YMC Triart C18 ExRs 5μm,30mm×150mm；流动相A:水(10毫摩尔每升碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:35％B升至63％B用时10分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):9.07)，再送至手性除杂，条件如下(层析柱规格:CHIRALPAK-IC 2x25cm,5m；流动相A:正己烷(0.1％二乙胺)，流动相B:甲醇:二氯甲烷＝1:1；流速:20毫升每分钟；洗脱梯度:isocratic 55；检测波长:UV 254/220nm；保留时间(分钟):4.58；溶样溶剂:甲醇；单次进样量:2.0mL；进样次数:1)。得到化合物244(12.27mg,22.83％)。

LCMS:(ESI,m/z):571.90[M+H]⁺.

¹H NMR:(400MHz,DMSO-d₆)δ8.82(t,J＝5.4Hz,1H),7.46(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.37(d,J＝1.9Hz,1H),7.26(t,J＝8.2Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.79(d,J＝8.4Hz,1H),6.30(d,J＝7.6Hz,1H),6.22–6.06(m,2H),4.86(d,J＝49.4Hz,1H),4.33(d,J＝6.3Hz,2H),4.26(d,J＝5.4Hz,2H),3.86(s,3H),3.83–3.71(s,1H),3.65(q,J＝11.1Hz,2H),3.05(t,J＝11.6Hz,1H),2.77(d,J＝11.6Hz,1H),2.35–2.24(m,1H),2.20(s,3H),2.13(t,J＝11.1Hz,1H),1.95–1.79(m,2H).

实施例21

第一步：化合物231-2的合成

氮气保护下，反应瓶中依次加入5-溴-2-硝基苯甲醚(化合物231-1，1.5g,6.465mmol,1equiv)，二甲基亚磺酰亚胺(903.17mg,9.697mmol,1.5equiv)，三(二亚苄基丙酮)钯(591.98mg,0.647mmol,0.1equiv)，2-(二叔丁基膦)联苯(385.81mg,1.293mmol,0.2equiv)，叔丁醇钠(931.92mg,9.697mmol,1.5equiv)，用二氧六环(30.0mL)溶解，80℃反应4小时，反应完后将反应液降至室温，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤，旋干溶剂，所得残余物用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到化合物231-2(1.36g,68.90％)。

LCMS:(ESI,m/z):245.00[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.84(dd,J＝8.4,0.8Hz,1H),6.63(d,J＝8.4Hz,2H),3.86(s,3H),3.36(s,6H).

第二步：化合物231-3的合成

高压氢化釜中加入((3-甲氧基-4硝基苯基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(化合物231-2，1.36g,5.568mmol,1equiv)，含水钯碳(10％)(888.76mg,8.352mmol,1.5equiv)，用乙醇(120mL)溶解，置于氢气环境中(3MPa)，室温反应过夜，反应完后硅藻土过滤，乙醇洗涤，旋干溶剂得到化合物231-3(1.3g,87.17％)

LCMS:(ESI,m/z):215.00[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.47(d,J＝8.1Hz,1H),6.40(d,J＝2.2Hz,1H),6.32(dd,J＝8.2,2.3Hz,1H),4.25(s,2H),3.70(s,3H),3.09(s,6H).

第三步：化合物231-4的合成

反应瓶中加入((3-甲氧基-4-氨基苯基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(化合物231-3，500mg,2.333mmol,1equiv)，3-溴丙炔(277.58mg,2.333mmol,1equiv)，碳酸钾(322.49mg,2.333mmol,1equiv)，用N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶解，80℃反应4小时，反应完后将反应液降至室温，加水稀释，反应混合物用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得残余物用反相柱层析纯化，条件如下：流动相：水(1％甲酸)和乙腈，10％乙腈到50％乙腈，用时5分钟，UV 254纳米检测器，得到化合物231-4(170mg,25.99％)。

LCMS:(ESI,m/z):252.80[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.50(d,J＝8.0Hz,1H),6.43(d,J＝7.8Hz,2H),4.79(t,J＝6.4Hz,1H),3.84(dd,J＝6.4,2.4Hz,2H),3.72(s,3H),3.17(s,1H),3.11(s,6H).

第四步：化合物231-5的合成

氮气保护下，向反应瓶中依次加入7-氯-2碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶(化合物103-9，121mg,0.336mmol,1equiv)，((3-甲氧基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(化合物231-4，84.69mg,0.336mmol,1equiv)，四三苯基膦钯(38.79mg,0.034mmol,0.1equiv)，碘化亚铜(6.39mg,0.034mmol,0.1equiv)，二异丙胺(339.65mg,3.360mmol,10.0equiv)，用四氢呋喃(5mL)溶解，50℃反应1小时，反应完后直接旋干溶剂，所得残余物用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到化合物231-5(78mg,43.13％)。

LCMS:(ESI,m/z):406.95[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.78(d,J＝8.6Hz,1H),7.40–7.28(m,2H),6.63(d,J＝8.1Hz,1H),6.46(d,J＝7.4Hz,2H),5.06(t,J＝6.6Hz,1H),4.21(d,J＝6.5Hz,2H),3.77–3.69(m,5H),3.11(s,6H).

第五步：化合物231的合成

氮气保护下，反应瓶中加入(([4-((3-[7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶-2-基]丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯基]亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(化合物231-5，40mg,0.082mmol,1equiv)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(33.84mg,0.164mmol,2equiv)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(6.94mg,0.008mmol,0.1equiv)，用二氧六环(4mL)溶解，120℃反应2小时，反应完后旋干溶剂，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:XselectCSHTM Prep C18 5μm 19*150mm OBD；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:5％B升至30％B用时10分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):9.27)，得到化合物231(7.84mg,16.25％)，LCMS:(ESI,m/z):581.00[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.26(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.62(d,J＝8.1Hz,1H),6.51–6.41(m,2H),6.29(d,J＝7.6Hz,1H),6.20(d,J＝9.1Hz,1H),5.03(t,J＝6.2Hz,1H),4.86(d,J＝49.5Hz,1H),4.19(d,J＝5.8Hz,2H),3.92–3.76(m,1H),3.74(s,3H),3.64(q,J＝11.1Hz,2H),3.11(s,6H),3.04(t,J＝11.6Hz,1H),2.78(d,J＝11.3Hz,1H),2.35–2.22(m,1H),2.20(s,3H),2.18–2.08(m,1H),1.98–1.79(m,2H).

实施例22

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第一步：化合物167-1的合成

室温下向氰乙酸乙酯(1.37mL,12.856mmol,1.1equiv)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中加入氢化钠(607.69mg,15.193mmol,1.3equiv,60％)，搅拌反应30分钟后，室温下分批加入5-氟-2-硝基苯甲醚(化合物210-1，2g,11.687mmol,1equiv)，加入完毕后，反应混合物加热至100℃搅拌1小时，反应完全后，室温下向反应混合物滴加2摩尔每升盐酸水溶液至反应体系红色褪去，反应混合物用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(3×20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到粗品化合物167-1(3g,97.14％)未进一步纯化，直接投下步。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.81(d,J＝8.3Hz,1H),7.14(d,J＝1.8Hz,1H),7.07(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),4.73(s,1H),4.23–4.19(m,2H),3.94(s,3H),1.26–1.22(m,3H).

第二步：化合物167-2的合成

室温下向2-氰基-2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)乙酸乙酯(化合物167-1，2g,7.569mmol,1equiv)的二甲基亚砜(10mL)溶液中加入氯化钠(751.96mg,12.867mmol,1.7equiv)和水(0.12mL,6.812mmol,0.9equiv)，100℃搅拌5小时，反应完后冷却置室温，加入水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)。合并有机相，用饱和食盐水反洗(3×15mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3:2)，得到化合物167-2(720mg,49.50％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.80(d,J＝8.3Hz,1H),7.01(d,J＝1.8Hz,1H),6.95–6.90(m,1H),3.93(s,3H),3.77(s,2H).

第三步：化合物167-3的合成

室温下，向2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)乙腈(化合物167-2，720mg,3.747mmol,1equiv)和四丁基溴化铵(193.25mg,0.600mmol,0.16equiv)的甲苯(10mL)溶液中，分批加入氢氧化钠(1498.53mg,37.470mmol,10equiv)的水溶液(10mL)和碘甲烷(2658.95mg,18.735mmol,5equiv)，室温下搅拌1小时，反应完后向反应液中加水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(2×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4:1)，得到化合物167-3(610mg,73.93％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.82(d,J＝8.5Hz,1H),7.17(d,J＝1.9Hz,1H),7.02(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),3.95(s,3H),1.70(s,6H).

第四步：化合物167-4的合成

0℃下，向2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2-甲基丙腈(化合物167-3，386mg,1.753mmol,1equiv)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL溶液中，加入4,4'-联吡啶(1.37mg,0.009mmol,0.005equiv)，然后缓慢加入连二硼酸(471.4mg,5.259mmol,3equiv)，室温下搅拌10分钟，反应完后加水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(3×15mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3:2)，得到化合物167-4(320mg,95.97％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.89(d,J＝2.1Hz,1H),6.85(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),6.71(d,J＝8.1Hz,1H),3.89(s,3H),1.69(s,6H).

第五步：化合物167-5的合成

室温下，向2-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-2-甲基丙腈(化合物167-4，252mg,1.325mmol,1equiv)和碳酸钾(549.2mg,3.975mmol,3equiv)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中，滴加炔丙基溴(157.58mg,1.325mmol,1equiv)，反应混合物在80℃下搅拌1小时，反应完后，降至室温，向反应混合物中加水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×15mL)，合并有机相，用饱和食盐水反洗(3×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4:1)，得到化合物167-5(250mg,82.67％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.96–6.89(m,2H),6.63(d,J＝8.1Hz,1H),5.38(t,J＝6.4Hz,1H),3.91(dd,J＝6.4,2.4Hz,2H),3.82(s,3H),3.00(t,J＝2.4Hz,1H),1.65(s,6H).

第六步：化合物167-6的合成

氮气保护下，反应瓶中依次加入7-氯-2碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶(化合物103-9，80mg,0.222mmol,1equiv)，2-[3-甲氧基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯基]-2-2-甲基丙腈(化合物167-5，50.66mg,0.222mmol,1equiv)，四三苯基膦钯(25.64mg,0.022mmol,0.1equiv)，碘化亚铜(4.23mg,0.022mmol,0.1equiv)，二异丙胺(224.56mg,2.220mmol,10equiv)，，用四氢呋喃(4.0mL)溶解，50℃反应1小时，反应完后旋干溶剂，所得残余物用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到化合物167-6(68mg,63.16％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm)δ7.78(dd,J＝8.7,1.5Hz,1H),7.38–7.29(m,2H),6.96(d,J＝8.1Hz,2H),6.78(d,J＝8.0Hz,1H),5.62(t,J＝6.5Hz,1H),4.28(d,J＝6.5Hz,2H),3.84(s,3H),3.70(q,J＝11.1Hz,2H),1.66(s,6H).

第七步：化合物167的合成

氮气保护下，反应瓶中依次加入2-[4-((3-[7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶-2-基]丙-2-炔-1-基氨基)-3-甲氧基苯基]-2-甲基丙腈(化合物167-6，40mg,0.087mmol,1equiv)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(35.6mg,0.174mmol,2equiv)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(7.3mg,0.009mmol,0.1equiv)，碳酸铯(113.11mg,0.348mmol,4equiv)，用二氧六环(4mL)溶解，120℃反应2小时，反应完后旋干溶剂，粗品通过高效液相纯化，条件如下：层析柱规格:Xselect CSHTM Prep C18 5μm 30*150mm OBD；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:15％B升至45％B用时8分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):7.35)，得到化合物167(9.73mg,20.02％)。

LCMS:(ESI,m/z):557.25[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.26(t,J＝8.2Hz,1H),6.98(d,J＝8.6Hz,1H),6.97–6.89(m,2H),6.77(d,J＝8.0Hz,1H),6.29(d,J＝7.6Hz,1H),6.21(d,J＝8.4Hz,1H),5.59(t,J＝6.5Hz,1H),4.86(d,J＝49.5Hz,1H),4.26(d,J＝6.5Hz,2H),3.91–3.74(s,4H),3.60(q,J＝11.1Hz,2H),3.06(t,J＝10.4Hz,1H),2.79(d,J＝9.3Hz,1H),2.32–2.08(m,5H),1.98–1.79(m,2H),1.65(s,6H).

实施例23

第一步：化合物168-2的合成

75℃下，3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(化合物168-1，10g,50.217mmol,1eq)，碳酸钾(20.82g,150.651mmol,3eq)和环丙醇(3.50g,60.260mmol,1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液搅拌反应16小时，反应完后将反应液降至室温，加水稀释，用乙酸乙酯萃取(3×400mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(3×300mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物168-2(8.8g,73.88％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.07(d,J＝1.7Hz,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,1H),7.70(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),4.22(tt,J＝6.0,2.9Hz,1H),3.92(s,3H),0.93–0.85(m,2H),0.76(dtd,J＝4.9,3.3,2.1Hz,2H).

第二步：化合物168-3的合成

65℃下，3-环丙氧基-4-硝基苯甲酸甲酯(化合物168-2，5g,21.078mmol,1eq)，铁粉(5.89g,105.390mmol,5eq)和氯化铵(3.38g,63.234mmol,3eq)的乙醇(40mL)和水(10mL)溶液搅拌反应2小时，反应完后将反应液降至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取(3×200mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×200mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。未进一步纯化，得到化合物168-3(3.9g,89.29％)。

LCMS:(ESI,m/z):207.90[M+H]⁺.

第三步：化合物168-4的合成

80℃下，4-氨基-3-环丙氧基苯甲酸甲酯(化合物168-3，3g,14.477mmol,1eq)，3-溴丙炔(3.44g,28.954mmol,2eq)和碳酸钾(6.00g,43.431mmol,3eq)的N,N-二甲基甲酰胺(24mL)溶液搅拌反应2小时，反应完后，反应混合物室温下用水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×150mL)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(3×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物168-4(1.46g,41.12％)。LCMS:(ESI,m/z):245.85[M+H]⁺.

第四步：化合物168-5的合成

室温下，3-环丙氧基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酸甲酯(化合物168-4，600mg,2.446mmol,1eq)和氢氧化锂(117.17mg,4.892mmol,2eq)的四氢呋喃(3mL)和水(3mL)溶液搅拌反应2小时，反应完全后，加水，反应混合物用1M盐酸溶液酸化到pH＝5，用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1x 30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，未进一步纯化，得到化合物168-5(480mg,84.85％)。

LCMS:(ESI,m/z):232.05[M+H]⁺.

第五步：化合物168-6的合成

室温下，3-环丙氧基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酸(化合物168-5，440mg,1.553mmol,1eq)，甲胺盐酸盐(88.64mg,2.854mmol,1.5eq)，N-羟基苯并三氮唑(385.66mg,2.854mmol,1.5eq)，N,N-二异丙基乙胺(491.84mg,3.806mmol,2eq)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(547.12mg,2.854mmol,1.5eq)的N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液搅拌反应2小时，反应完后，加水，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(3×20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝9:1)，得到化合物168-6(340mg,73.15％)

LCMS:(ESI,m/z):244.90[M+H]⁺.

第六步：化合物168-7的合成

氮气保护，50℃下，3-环丙氧基-N-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯甲酰胺(化合物168-6，200mg,0.819mmol,1eq)，7-氯-2碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶(化合物103-9，442.70mg,1.228mmol,1.5eq)，碘化亚铜(15.59mg,0.082mmol,0.1eq)，四三苯基膦钯(94.61mg,0.082mmol,0.1eq)和二异丙胺(705.53mg,8.190mmol,10eq)的四氢呋喃(2mL)溶液搅拌反应2小时，反应完后，反应混合物室温下用水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝8:1)，得到化合物168-7(280mg,69.39％)。

LCMS:(ESI,m/z):476.90[M+H]⁺.

第七步：化合物168的合成

氮气保护，120℃下，4-({3-[7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶-2-基]丙-2-炔-1-基}氨基)-3-环丙氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物168-7，80mg,0.168mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(26.61mg,0.202mmol,1.2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(14.11mg,0.017mmol,0.1eq)和碳酸铯(218.63mg,0.672mmol,4eq)的1,4-二氧六环(2mL)溶液搅拌反应2小时，反应体系用液质监测。反应完全后，反应混合物室温下用水淬灭。反应混合物用乙酸乙酯萃取(3x10毫升)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×10毫升)，硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩。粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Sunfire C18 5m,30mm×150mm；流动相A:水(0.1％碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:32％升至55％用时10分钟；检测波长:UV 254纳米/220纳米；保留时间(分钟):9.73)，得到]化合物168(26.13mg,26.33％)。

LCMS:(ESI,m/z):573.20[M+H]⁺.

¹H NMR:(400MHz,DMSO-d₆)δ8.08(q,J＝4.4Hz,1H),7.63(d,J＝1.9Hz,1H),7.41(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.26(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),6.99(d,J＝8.6Hz,1H),6.74(d,J＝8.3Hz,1H),6.30(d,J＝7.3Hz,1H),6.19(d,J＝9.0Hz,1H),5.85(t,J＝6.3Hz,1H),4.86(d,J＝49.4Hz,1H),4.29(d,J＝6.3Hz,2H),3.94–3.74(m,2H),3.65(q,J＝11.1Hz,2H),3.05(t,J＝11.4Hz,1H),2.82–2.69(m,4H),2.36–2.22(m,1H),2.20(s,3H),2.12(t,J＝10.5Hz,1H),1.97–1.88(m,1H),1.88–1.79(m,1H),0.87–0.77(m,2H),0.74–0.66(m,2H).

实施例24

第一步：化合物265的合成

室温下，将化合物228-6，即4-(3-(7-((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(40mg,0.075mmol,1eq)，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(42.76mg,0.112mmol,1.5eq)，3-氨基氧杂环丁烷(8.22mg,0.112mmol,1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(19.38mg,0.150mmol,2eq)的1,4-二氧六环(1mL)溶液搅拌反应2小时，反应完全后，将反应混合物室温下用水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Sunfire C18 5μm,30mm×150mm；流动相A:水(0.1％碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:35％升至58％用时10分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):8.5)，得到化合物265(25.49mg,56.38％)。

LCMS:(ESI,m/z):589.15[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm)δ8.73(d,J＝6.5Hz,1H),7.49(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H),7.39(d,J＝1.9Hz,1H),7.26(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.78(d,J＝8.3Hz,1H),6.30(dd,J＝7.9,1.0Hz,1H),6.19(d,J＝9.1Hz,1H),6.07(t,J＝6.3Hz,1H),5.04–4.94(m,1H),4.86(d,J＝50.0Hz,1H),4.76(t,J＝6.9Hz,2H),4.58(t,J＝6.4Hz,2H),4.32(d,J＝6.3Hz,2H),3.86(s,3H),3.83–3.73(m,1H),3.65(q,J＝11.1Hz,2H),3.05(t,J＝11.4Hz,1H),2.77(d,J＝11.4Hz,1H),2.36–2.20(m,1H),2.20(s,3H),2.17–2.05(m,1H),1.97–1.75(m,2H).

实施例25

第一步：化合物200的合成

在氮气保护，室温下，向化合物228-6，即4-(3-(7-((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(40mg,0.075mmol,1eq)和1-甲基哌啶-4-胺(12.84mg,0.112mmol,1.5eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)溶液中，分批加入N,N-二异丙基乙胺(48.45mg,0.375mmol,5eq)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯)(42.76mg,0.112mmol,1.5eq)，室温搅拌1小时，反应完后，将反应混合物室温下用水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Xselect CSHTM Prep C18 5μm 30×150mm OBD；流动相A:水(0.1％甲酸)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:5％B升至35％B用时10min；检测波长:UV254nm/220nm；保留时间(分钟):6.12)，得到化合物200的甲酸盐。

LCMS:(ESI,m/z):629.95[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm)δ7.89(d,J＝7.7Hz,1H),7.44(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.34(d,J＝1.9Hz,1H),7.26(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.75(d,J＝8.4Hz,1H),6.30(d,J＝7.4Hz,1H),6.19(d,J＝9.0Hz,1H),5.99(t,J＝6.3Hz,1H),4.86(d,J＝49.5Hz,1H),4.31(d,J＝6.3Hz,2H),3.85(s,3H),3.83–3.71(m,2H),3.65(q,J＝11.1Hz,2H),3.05(t,J＝11.7Hz,1H),2.86(d,J＝11.4Hz,2H),2.78(d,J＝11.4Hz,1H),2.36–2.30(m,1H),2.25(s,3H),2.20(s,3H),2.17–2.05(m,3H),1.98–1.72(m,4H),1.66–1.53(m,2H).

实施例26

第一步：化合物266-A的合成

室温下，将化合物228-6，即4-(3-(7-((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(50mg,0.094mmol,1eq)，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(53.45mg,0.141mmol,1.5eq)，(R)-3-氨基四氢呋喃(12.25mg,0.141mmol,1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(24.22mg,0.188mmol,2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液搅拌反应2小时，反应完后，向反应液中加水，用乙酸乙酯萃取(3x10 mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Sunfire C18 5μm,30mm×150mm；流动相A:水(0.1％碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:30％升至50％用时10分钟；检测波长:UV 254纳米/220纳米；保留时间(分钟):8.42)，得到化合物266-A(22.95mg,40.56％)。

LCMS:(ESI,m/z):603.15[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm)δ8.15(d,J＝6.5Hz,1H),7.47(d,J＝8.3Hz,1H),7.37(s,1H),7.26(t,J＝8.2Hz,1H),6.99(d,J＝8.6Hz,1H),6.76(d,J＝8.3Hz,1H),6.30(d,J＝7.6Hz,1H),6.19(d,J＝9.0Hz,1H),6.02(t,J＝6.3Hz,1H),4.86(d,J＝49.4Hz,1H),4.53–4.38(m,1H),4.31(d,J＝6.3Hz,2H),3.92–3.74(m,6H),3.74–3.61(m,3H),3.55(dd,J＝8.8,4.5Hz,1H),3.05(t,J＝11.4Hz,1H),2.77(d,J＝11.1Hz,1H),2.37–2.23(m,1H),2.20(s,3H),2.16–2.07(m,2H),1.94–1.81(m,3H).

实施例27

第一步：化合物266-B的合成

在氮气保护下，室温下，向化合物228-6，即4-(3-(7-((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(30mg,0.056mmol,1eq)和(3S)-氧杂环戊烷-3-胺(7.35mg,0.084mmol,1.5eq)的N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)溶液中，分批加入N,N-二异丙基乙胺(36.34mg,0.280mmol,5eq)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯)(32.07mg,0.084mmol,1.5eq)，室温下继续搅拌1小时，反应完后，向反应液中加水，用乙酸乙酯萃取(3x10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:Kinetex 5μm EVO C18,30mm×150mm；流动相A:水(10毫摩尔每升碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:32％B升至50％B用时10分钟；检测波长:UV254nm/220nm；保留时间(分钟):8.33)，得到化合物266-B(13.38mg,39.37％)。

LCMS:(ESI,m/z):602.90[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm)δ8.15(d,J＝6.5Hz,1H),7.47(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),7.37(d,J＝1.9Hz,1H),7.26(t,J＝8.2Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.76(d,J＝8.3Hz,1H),6.30(d,J＝7.7Hz,1H),6.19(d,J＝9.0Hz,1H),6.02(t,J＝6.4Hz,1H),4.86(d,J＝49.5Hz,1H),4.44(q,J＝6.1Hz,1H),4.31(d,J＝6.3Hz,2H),3.94–3.74(m,6H),3.73–3.60(m,3H),3.55(dd,J＝8.9,4.5Hz,1H),3.05(t,J＝11.2Hz,1H),2.77(d,J＝11.4Hz,1H),2.36–2.21(m,2H),2.20(s,3H),2.17–2.08(m,2H),1.90(qd,J＝13.1,12.7,7.3Hz,3H).

实施例28

第一步：化合物223-2的合成

反应瓶中加入3-溴丙炔(1.2g,10.087mmol,1eq)，邻甲氧基苯胺(化合物223-1，4.97g,40.348mmol,4eq)，碳酸钾(2.79g,20.174mmol,2eq)，用乙腈(15mL)溶解，室温反应60小时，反应完后，过滤，滤液旋干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物223-2(1.7g,94.09％)

LCMS:(ESI,m/z):162.05[M+H]⁺.

第二步：化合物223-3的合成

反应瓶中加入化合物223-2，即2-甲氧基-N-(丙-2-炔-1-基)苯胺(500mg,3.102mmol,1eq)，三水六氟丙酮(819.09mg,3.722mmol,1.2eq)，对甲苯磺酸水合物(59.00mg,0.310mmol,0.1eq)，用甲苯(5.0mL)溶解，110℃反应过夜，反应完后，将反应液恢复至室温，加水，反应混合物用乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物223-3(193mg,18.07％)。

LCMS:(ESI,m/z):328.00[M+H]⁺.

第三步：化合物223-4的合成

氮气保护下，反应瓶中依次加入化合物103-9，即7-氯-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶(130mg,0.361mmol,1eq)，化合物223-3即1,1,1,3,3,3-六氟-2-[3-甲氧基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)苯基]丙-2-醇(118.00mg,0.361mmol,1eq)，四三苯基膦钯(41.67mg,0.036mmol,0.1eq)，碘化亚铜(6.87mg,0.036mmol,0.1eq)，二异丙胺(364.91mg,3.610mmol,10.0eq)，加入四氢呋喃(5mL)溶解，50℃反应1小时，反应完后，直接旋干溶剂，所得残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物223-4(100mg,47.06％)。

LCMS:(ESI,m/z):559.90[M+H]⁺.

第四步：化合物223的合成

氮气保护下，反应瓶中依次加入化合物223-4，即2-[4-((3-[7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶-2-基]丙-2-炔-1-基氨基)-3-甲氧基苯基]-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(56mg,0.100mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(26.44mg,0.200mmol,2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(8.41mg,0.010mmol,0.1eq)，碳酸铯(130.37mg,0.400mmol,4eq)，加入二氧六环(5mL)溶解，120℃反应5小时，反应完后，旋干溶剂，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:YMC Triart C18 ExRs 5μm,30mm*150mm；流动相A:水(10毫摩尔每升碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:49％B升至75％B用时10分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):9.4)，得到化合物223(22.27mg,33.55％)。

LCMS:(ESI,m/z):655.80[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm)δ8.33(s,1H),7.26(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),7.12(d,J＝8.5Hz,1H),7.09(s,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.84(d,J＝8.5Hz,1H),6.29(d,J＝7.6Hz,1H),6.19(d,J＝9.0Hz,1H),5.90(t,J＝6.4Hz,1H),4.86(d,J＝49.4Hz,1H),4.29(d,J＝6.4Hz,2H),3.90–3.74(m,4H),3.62(q,J＝11.0Hz,2H),3.05(t,J＝11.7Hz,1H),2.77(d,J＝11.5Hz,1H),2.34–2.23(m,1H),2.20(s,3H),2.17–2.08(m,1H),1.96–1.79(m,2H).

实施例29

/>

第一步：化合物245-1的合成

氮气保护，50℃下，将化合物103-9，即7-氯-2-碘-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶(400mg,1.110mmol,1eq)，N-Boc-氨基丙炔(189.42mg,1.221mmol,1.1eq)，碘化亚铜(21.13mg,0.111mmol,0.1eq)，四三苯基膦钯(128.22mg,0.111mmol,0.1eq)和二异丙胺(1.12g,11.100mmol,10eq)用四氢呋喃(6mL)溶解，搅拌反应1小时，反应完后，反应混合物室温下用水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合并有机相，用饱和氯化钠反洗(2×20ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:9)，得到化合物245-1(400mg,92.96％)。

LCMS:(ESI,m/z):387.95[M+H]⁺.

第二步：化合物245-2的合成

氮气保护，将化合物245-1，即{3-[7-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶-2-基]丙-2-炔-1-基}氨基甲酸叔丁酯(380mg,0.980mmol,1eq)，(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(240.92mg,1.176mmol,1.2eq)，(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(82.43mg,0.098mmol,0.1eq)和碳酸铯(1.277g,3.920mmol,4eq)用1,4-二氧六环(4mL)溶解，120℃下搅拌反应4小时，待反应完后，降至室温，加水稀释，反应混合物用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(1×50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到化合物245-2(380mg,80.20％)。

LCMS:(ESI,m/z):483.90[M+H]⁺.

第三步：化合物245-3的合成

室温下，向反应瓶内加入化合物245-2，即N-[3-(7-{[(3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]氨基}-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基]氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.207mmol,1eq)用甲醇(2mL)，0℃滴加4M的HCl/1,4-二氧六环(2mL)，室温反应1小时，反应完后，所得残余物真空浓缩，得到化合物245-3的二盐酸盐。

LCMS:(ESI,m/z):383.85[M+H]⁺.

第四步：化合物245的合成

在氮气保护下，室温下，向化合物245-3，即(3S,4R)-N-[2-(3-氨基丙基-1-炔基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-7-基]-3-氟-1-甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(60mg,0.131mmol,1eq)和5-氟-1-甲基-6-氧代吡啶-2-甲腈(16.00mg,0.105mmol,0.8eq)的二甲基亚砜(1.0mL)溶液中，滴加入N,N-二异丙基乙胺(67.98mg,0.524mmol,4eq)。加入完毕后体系80℃下继续搅拌2小时。反应混合物室温下加入水(10.0mL)淬灭。反应混合物用乙酸乙酯萃取(3×10mL)。合并有机相，用饱和食盐水反洗(2×10mL)，无水硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到化合物245的粗品，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:YMC Triart C18 ExRs5μm,30mm×150mm；流动相A:水(10毫摩尔每升碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:38％B升至62％B用时10min；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):9.08)，得到化合物245(5.04mg,7.41％)。

LCMS:(ESI,m/z):515.21[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm)δ7.28(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),7.23(t,J＝6.3Hz,1H),7.10(d,J＝7.8Hz,1H),7.01(d,J＝8.7Hz,1H),6.44(d,J＝7.9Hz,1H),6.31(d,J＝7.5Hz,1H),6.20(d,J＝9.0Hz,1H),4.87(d,J＝49.5Hz,1H),4.34(d,J＝6.3Hz,2H),3.90–3.78(m,1H),3.70(q,J＝11.1Hz,2H),3.59(s,3H),3.06(t,J＝11.6Hz,1H),2.78(d,J＝11.5Hz,1H),2.37–2.23(m,1H),2.21(s,3H),2.14(t,J＝11.2Hz,1H),1.95–1.81(m,2H).

实施例30

第一步：化合物263的合成

室温下，将化合物228-6，即4-(3-(7-((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(20mg,0.037mmol,1eq)，N,N-二异丙基乙胺(19.38mg,0.148mmol,4eq)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(14.25mg,0.037mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)溶液搅拌反应20分钟，再分批加入2-氨基-2-甲基丙腈(3.15mg,0.037mmol,1eq)，搅拌过夜，反应完后，将反应混合物倒入5mL水中淬灭，用乙酸乙酯萃取(2×5mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(2×5mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，粗品通过高效液相纯化，条件如下(层析柱规格:XBridge BEH Shield RP18 5μm,30mm×150mm；流动相A:水(10毫摩尔每升碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60毫升每分钟；洗脱梯度:34％B升至64％B用时10分钟；检测波长:UV 254nm/220nm；保留时间(分钟):9.33)，得到化合物263(1.37mg,6.09％)。

LCMS:(ESI,m/z):546.90[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm)δ8.31(s,1H),7.48(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.36(d,J＝1.9Hz,1H),7.27(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),7.00(d,J＝8.6Hz,1H),6.78(d,J＝8.3Hz,1H),6.30(d,J＝7.5Hz,1H),6.19(d,J＝9.1Hz,1H),6.15(t,J＝6.3Hz,1H),4.86(d,J＝48Hz,1H),4.33(d,J＝6.3Hz,2H),3.87(s,3H),3.83–3.74(m,1H),3.64(q,J＝11.2Hz,2H),3.05(t,J＝11.5Hz,1H),2.77(d,J＝10.9Hz,1H),2.35–2.23(m,1H),2.20(s,3H),2.12(t,J＝10.5Hz,1H),1.98–1.79(m,2H),1.68(s,6H).

生物学评价

测试例1、体外DNA结合活性实验

使用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FREt,Time-Resolved FluorescenceResonance Energy Transfer)检测化合物调节Y220C与DNA结合的活性。首先准备好重组的带有his-tag的Y220Cp53 DBD蛋白以及带有生物素标记的DNA序列。供体Eu(Europium)-SA(Streptavidin)可以通过生物素(biotin)结合到DNA序列上，受体为his抗体连接别藻蓝蛋白(APC,allophycocyanin)，his抗体可以结合到带有his-tag的Y220C p53 DBD蛋白上。当给与340nm波长激发光时，供体Eu(Europium)-SA(Streptavidin)会产生发射波长为620nm的荧光，如果供体与受体相互靠近，供体会将部分能量转移到受体上，产生发射波长为665nm的荧光。也就是说，如果p53突变蛋白被化合物恢复活性与DNA靠近结合后，供体能量转移到受体，会产生615和665nm的荧光。如不存在相互作用，则仅有615nm的荧光。

a.384微孔板的每孔中添加4μL稀释化合物溶液。

b.384微孔板的每孔中添加4μL 4X P53工作溶液。

c.密封384微孔板，并在室温下平衡60分钟。

d.将4μl生物素DNA溶液加入384微孔板。

e.向384微孔板的每孔添加4μl 4X检测溶液(MAb Anti-6His-Eu和链霉亲和素-d2)。

f.孵育过夜，避光。

g.在BMG上读取665nm和615nm波长的数据。

本文中的代表性化合物对p53-Y220C突变蛋白重激活活性通过以上的实验来进行测定，测得的SC₁₅₀值见表1。

表1本文中的代表性化合物对p53-Y220C突变蛋白活性的SC₁₅₀值

注：SC₁₅₀表示增加50％蛋白与DNA结合活性所需要的化合物浓度

实验结论：上述代表性化合物能够有效的恢复p53-Y220C突变蛋白的活性。

以上对本发明技术方案的实施方式进行了示例性的说明。应当理解，本发明的保护范围不拘囿于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，本领域技术人员所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请权利要求书的保护范围之内。

Claims

1.一种式(I)所示的化合物及其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、前药或其药学上可接受的盐：

其中，

R₃选自H、C_1-12烷基；

X₁选自NR_x11、CR_x12、O、S；

X₂选自NR_x21、CR_x22、O、S；

表示单键或双键；

环A选自C_6-14芳环、5-14元杂芳环或5-14元杂环；

Y不存在或者选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_y6取代的下列基团：-C(＝O)-R_y1、-S(＝O)-R_y2、-S(＝O)₂-R_y3、-P(＝O)(R_y4)(R_y5)、-S(＝O)(＝NH)-R_y7、-S(＝O)(＝NR_y8)-R_y7、-C_1-6烷基-S(＝O)₂-R_y3、-C_1-6烷基-S(＝O)(＝NH)-R_y7、-C_1-6烷基-S(＝O)(＝NR_y8)-R_y7、-C_1-6烷基-C(＝O)-R_y1；R_y1、R_y2、R_y3、R_y4、R_y5、R_y7、R_y8、R_y9、R_y10相同或不同，彼此独立地选自H、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、卤代C_1-12烷基、卤代C_1-12烷氧基、C_1-12烷基-NH-、C_3-12环烷基-NH-、(C_1-12烷基)₂N-、NH₂、卤代C_1-12烷基-NH-、氰基-C_1-12烷基-NH-、C_1-6烷基-(3-14元杂环基)-NH-、C_3-12环烷基、3-14元杂环基；或者R_y9和R_y10与其连接的S原子共同形成3-8元含S杂环；或者Y选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_y6取代的下列基团：C_3-12环烷基、3-14元杂环基、C_6-14芳基、5-14元杂芳基；每个R_y6相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、羟基、氧代(＝O)、卤素、C_1-12烷基、C_1-12烷氧基、卤代C_1-12烷基、卤代C_1-12烷氧基、羟基-C_1-12烷基；或者，两个R_y6与其各自连接的原子形成C_3-12烷基环；

m选自0、1、2、3、4或5；

Z选自NH、O、S、CH₂；

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，R₁、R₂、R₃相同或不同，彼此独立地选自H、C_1-6烷基；

优选地，R₁、R₂、R₃均为H；

优选地，当X₁选自NR_x11时，X₂选自CR_x22、O、S；当X₁选自CR_x12时，X₂选自NR_x21、O、S；当X₁选自O或S时，X₂选自NR_x21或CR_x22；

优选地，R_x11、R_x21相同或不同，其不存在或彼此独立地选自H、无取代或任选被一个、两个或更多个R_x1a取代的下列基团：C_1-6烷基、C_3-8环烷基；每个R_x1a相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、羟基、卤素；

优选地，R_x12、R_x22相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、无取代或任选被一个、两个或更多个R_x1b取代的下列基团：C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_3-8环烷基；每个R_x1b相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、卤素；

优选地，R_x11、R_x21相同或不同，其不存在或彼此独立地选自H、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、卤代C_1-6烷基；R_x12、R_x22相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、卤代C_1-6烷基；

优选地，R_x11、R_x21、R_x12、R_x22相同或不同，其不存在或彼此独立地选自H、乙基、2-氟代乙基、1-氟乙基、1-羟基乙基、1,2,2,2-四氟乙基、1-氯-2,2,2-三氟乙基、1-羟基-2,2,2-三氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、2-氯-2,2-二氟乙基、全氟乙基、环丙基、氰基；

优选地，R_x11、R_x21、R_x12、R_x22相同或不同，其不存在或彼此独立地选自H、乙基、2-氟代乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、2-氯-2,2-二氟乙基、环丙基、氰基。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，环A选自C_6-10芳环、5-10元杂芳环或5-10元杂环；例如苯环、吡啶环、2,3-苯并呋喃、苯并噻唑、2,3-二氢苯并呋喃、

优选地，Y不存在或者选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_y6取代的下列基团：-C(＝O)-R_y1、-S(＝O)-R_y2、-S(＝O)₂-R_y3、-P(＝O)(R_y4)(R_y5)、-S(＝O)(＝NH)-R_y7、-S(＝O)(＝NR_y8)-R_y7、 -CH₂-S(＝O)₂-R_y3、-CH₂-S(＝O)(＝NH)-R_y7、-CH₂-S(＝O)(＝NR_y8)-R_y7、-CH₂-C(＝O)-R_y1；R_y1、R_y2、R_y3、R_y4、R_y5、R_y7、R_y8、R_y9、R_y10相同或不同，彼此独立地选自C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_1-6烷基-NH-、NH₂、卤代C_1-6烷基-NH-、氰基C_1-6烷基-NH-、C_1-6烷基-(5-8元杂环基)-NH-、C_3-6环烷基、3-6元杂环基；或者R_y9和R_y10与其连接的S原子共同形成3-6元含S杂环；或者Y选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_y6取代的C_3-6环烷基、3-6元杂环基、C_6-10芳基、5-10元杂芳基；每个R_y6相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、羟基C_1-6烷基；或者，两个R_y6与其各自连接的原子形成C_3-6烷基环；或者，Y和一个R_a与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_a1取代的3-12元杂环或C_3-12烷基环，例如环戊烷、/>

优选地，R_y1、R_y2、R_y3、R_y4、R_y5、R_y7、R_y8、R_y9、R_y10相同或不同，彼此独立地选自甲基、乙基、甲氨基、三氟甲基、环丙基、NH₂、或者R_y9和R_y10与其连接的S原子共同形成/>

优选地，Y选自无取代或任选被一个或两个R_y6取代的5-6元杂环基或5-6元杂芳基；每个R_y6相同或不同，彼此独立地选自氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、羟基C_1-3烷基；或者，两个R_y6与其各自连接的原子形成C_3-6烷基环；

优选地，Y选自无取代或任选被一个或两个R_y6取代的恶唑烷基、恶二唑基、吡咯烷或每个R_y6相同或不同，彼此独立地选自氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、羟基C_1-3烷基；或者，两个R_y6与其各自连接的原子形成环丙烷环；

优选地，Y不存在或者选自或者，Y和一个R_a与其各自连接的原子形成/>

优选地，每个R_a相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、卤素、氧代(＝O)、C_1-6烷基、C_3-6环烷基-、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基、氰基-C_1-6烷基、羟基-C_1-6烷基、羟基-卤代C_1-6烷基、卤代C_1-6烷氧基、C_3-6环烷基-O-、卤代C_3-6环烷基-O-、(3-6元杂环基)-O-、C_1-6烷基-(3-6元杂环基)-O-、-C(＝O)-R_a11；或者，两个R_a与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_a1取代的3-8元杂环或C_3-8烷基环；每个R_a1相同或不同，彼此独立地选自H、氧代(＝O)、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、羟基C_1-6烷基、氰基C_1-6烷基；或者，两个R_a1与其各自连接的原子形成3-8元环烷烃环；R_a11选自H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基、卤代C_1-6烷氧基、C_1-6烷基-NH-、C_3-6环烷基-NH-、(C_1-6烷基)₂N-、NH₂、卤代C_1-6烷基-NH-、氰基C_1-6烷基-NH-、(3-6元杂环基)-NH-；

优选地，m选自0、1、2或3；

优选地，每个R_a相同或不同，彼此独立地选自H、氰基、F、氧代(＝O)、甲基、乙基、环丙基、三氟甲基、二氟甲基、甲氧基、乙氧基、一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲基、

优选地，每个R_a1相同或不同，彼此独立地选自H、甲基、氧代(＝O)、环丙基、HO-CH₂-、NC-CH₂-；或者，两个R_a1与其各自连接的原子形成环丙烷环。

4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，环E选自C_6-10芳环、5-10元杂芳环、C_3-8环烷烃环、3-8元杂环；

优选地，环E选自苯环、吡啶环、嘧啶环、吡嗪环、噻唑环、噻吩环、吡唑环、咪唑环、环戊烷环、环己烷环；

优选地，环选自含有至少一个氮原子的五元杂芳环；

优选地，环选自吡咯环、噻吩环、呋喃环、吡唑环、咪唑环、噻唑环、噁唑环或三唑环。

优选地，环选自吲哚环、吡唑并吡啶环、苯并噻吩环、苯并呋喃环、咪唑并吡嗪环、吡咯并嘧啶环、噻吩并吡咯环、吡咯并吡唑环、咪唑并咪唑环、环戊烯并吡咯环、环己烯并吡咯环。

优选地，环选自/>

优选地，每个R_e选自H、氰基、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；或者，两个R_e与其各自连接的原子形成无取代或任选被一个、两个或更多个R_e1取代的下列基团：3-8元杂环、C_3-8环烷烃环，例如环丙烷环、环丁烷环、环戊烷环、每个R_e1相同或不同，彼此独立地选自H、F、Cl、C_1-6烷基；n选自0、1、2或3；

优选地，每个R_e选自H、氰基、F、Cl、甲基、甲氧基；或者，两个R_e与其各自连接的原子形成：

5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物，其特征在于，R_z选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_z1取代的下列基团：5-10元杂环基、C_5-10环烷基；

优选地，R_z选自无取代或任选被一个、两个或更多个R_z1取代的下列基团：哌啶基、环己基、四氢吡喃基、

优选地，每个R_z1相同或不同，彼此独立地选自H、OH、氰基、氧代(＝O)、卤素、无取代或任选被一个、两个或更多个R_z2取代的下列基团：CH₂＝、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、5-10元杂环基、C_1-6烷基-NH-、(C_1-6烷基)₂N-；每个R_z2相同或不同，彼此独立地选自H、OH、氰基、氧代(＝O)、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

优选地，每个R_z1相同或不同，彼此独立地选自H、OH、F、氰基、CH₂＝、CHF＝、CF₂＝、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基-C_1-6烷基、羟基-C_1-6烷基、C_1-6烷基-C(＝O)-、(C_1-6烷基)₂N-、5-10元杂环基；

优选地，每个R_z1相同或不同，彼此独立地选自H、OH、F、氰基、CH₂＝、CHF＝、CF₂＝、甲基、甲氧基、乙氧基、氰基甲基、二甲氨基、2-羟基乙基、2-氰基乙基、乙酰基、

优选地，R_z选自

6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有如下所示的结构：

其中，环A、环E、Y、Z、R_a、R_e、R_z、R₁、R₂、R₃、X₁、X₂、X₃、X₄、m、n具有权利要求1-5任一项所述的定义；

优选地，式(I)所示的化合物具有如下所示的结构：

其中，环A、环E、Y、Z、R_a、R_e、R_z、R₁、R₂、R₃、R_x11、X₁、X₂、X₃、X₄、m具有权利要求1-5任一项所述的定义；

优选地，式(I)所示的化合物具有如下所示的结构：

其中，Y、Z、R_e、R_z、n具有权利要求1-5任一项所述的定义；

优选地，式(I)所示的化合物具有如下所示的结构：

其中，Y、Z、R_e、R_z1、n具有权利要求1-5任一项所述的定义；

优选地，式(I)所示的化合物具有如下所示的结构：

其中，Y、R_x11、R_x12、R_z1、R_a1具有权利要求1-5任一项所述的定义；

优选地，式(I)所示的化合物具有如下所示的结构：

其中，环A、Y、R_a、m具有权利要求1-5任一项所述的定义。

7.根据权利要求1-6任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自以下结构：

/>

8.权利要求1-7任一项所述化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)化合物1与化合物2反应得到化合物3；

(2)化合物3与R_z-ZH反应得到式(I)所示化合物；

其中，环A、环E、Y、Z、R_a、R_e、R_z、R₁、R₂、R₃、X₁、X₂、X₃、X₄、m、n具有权利要求1-7任一项所述的定义；L₁和L₂选自离去基团，如卤素，如L₁选自碘，L₂选自Br。

9.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-7任一项所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、前药或其药学上可接受的盐中的至少一种。

10.权利要求1-7任一项所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、前药或其药学上可接受的盐中的至少一种在制备药物中的用途；

优选地，所述用途可以为在制备抗含p53-Y220C突变体的肿瘤药物中的用途，如在制备p53-Y220C重激活剂药物中的用途；

优选地，所述含p53-Y220C突变体的肿瘤包括急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、肾上腺皮质癌、艾滋病相关癌症、艾滋病相关淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑肿瘤如小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始细胞瘤、神经外胚层肿瘤、视觉通路和下丘脑胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤、伯基特淋巴瘤，未知原发癌，中枢神经系统淋巴瘤，小脑星形细胞瘤、宫颈癌、儿童癌症、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性骨髓增生性疾病、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、促纤维增生性小圆细胞瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌、尤因氏肉瘤、生殖细胞肿瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质肿瘤、胶质瘤、毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞癌、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、唇癌和口腔癌、脂肪肉瘤、肝癌、肺癌如非小细胞肺癌和小细胞肺癌、淋巴瘤、白血病、巨球蛋白血症、恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤、髓母细胞瘤、黑色素瘤、间皮瘤、转移性鳞癌伴隐性原发性、口腔癌、多发性内分泌肿瘤综合征、骨髓增生异常综合征、髓系白血病、鼻腔癌和鼻窦癌，鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞瘤、胰腺癌、胰腺胰岛细胞癌、副鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体星形细胞瘤、松果体生殖细胞瘤、垂体腺瘤、胸膜肺母细胞瘤、浆细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、皮肤梅克尔细胞癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、T细胞淋巴瘤、喉癌、胸腺瘤、胸腺癌、甲状腺癌、滋养细胞肿瘤(妊娠期)、癌症原发部位未知，尿道癌，子宫肉瘤，阴道癌，外阴癌，瓦尔登斯特隆巨球蛋白血症和肾母细胞瘤。