CN117959379A - 一种抗衰老组合物 - Google Patents

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权强华
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Abstract

本发明涉及一种抗衰老组合物。具体地，本发明提供一种组合物，所述的组合物包括重楼提取物和/或三七提取物。本发明所述的重楼提取物和三七提取物具有优异抗衰老效果，且重楼提取物和三七提取物在抗衰老方面具有协同效果。

Description

一种抗衰老组合物
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种抗衰老组合物。
背景技术
皮肤衰老是一种常见的现象，许多因素例如紫外线辐射等等会导致皮肤衰老，衰老的皮肤中的胶原蛋白含量常常降低。皮肤成纤维细胞分泌的胶原蛋白如Ⅲ型胶原蛋白在皮肤中起到支撑和结构的作用，能够维持皮肤的弹性和紧致，胶原蛋白的减少导致皮肤松弛和皱纹的出现，通过补充胶原蛋白能够使皮肤保持弹性和紧致，从而减缓皮肤老化的过程，实现美容护肤的效果。然而，现有技术中缺乏一种能够有效抗衰老的产品和方法，随着生活水平和健康要求的不断提高，如何开发一种抗衰老的产品和方法成为当今的研究热点。
因此，本领域需要开发一种抗衰老的产品和方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于抗衰老的组合物。
本发明第一方面提供一种组合物，所述的组合物包括重楼提取物和/或三七提取物。
优选地，所述的组合物包括重楼提取物和三七提取物。
优选地，所述的提取物为干浸膏。
优选地，所述的提取物为干提取物。
优选地，所述的重楼提取物与所述三七提取物的重量比为1：5-200，较佳地1：5-100，更佳地1：10-90，更佳地1：10-80，更佳地1：10-70，更佳地1：20-60，更佳地1：25-55，更佳地1：30-50，更佳地1：35-45，更佳地1：38-42，更佳地1：40。
优选地，所述的重楼提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(1)将重楼用乙醇水溶液提取，得到提取液，所述提取液经石油醚萃取，分离的水层用乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，所述正丁醇层萃取液经蒸干，得到重楼提取物。
优选地，所述步骤(1)中，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为30-90％，较佳地50-90％，更佳地60-80％，更佳地65-75％，更佳地68-72％，最佳地70％。
优选地，所述步骤(1)中，所述乙醇水溶液提取的方式为加热回流提取。
优选地，所述步骤(1)中，将重楼用乙醇水溶液提取后过滤，得到提取液。
优选地，所述步骤(1)中，所述乙醇水溶液对重楼提取的时间为0.5-5h，较佳地1-3h，更佳地1-2h，更佳地1.3-1.7h，最佳地1.5h。
优选地，所述步骤(1)中，所述的重楼原料与所述的乙醇水溶液的重量比为1：3-12，较佳地1：3-10，更佳地1：4-8，较佳地1：5-7，较佳地1：5.5-6.5，最佳地较佳地1：6。
优选地，所述步骤(1)中，对所述提取液进行浓缩后经石油醚萃取。
优选地，所述浓缩的方法包括减压浓缩。
优选地，所述浓缩的倍数为3-10倍，较佳地4-8倍，更佳地5-7倍，更佳地5.5-6.5倍，最佳地6倍。
优选地，所述步骤(1)中，所述的提取液经浓缩后的浓缩液与所述乙醇水溶液的体积比为1：3-12，较佳地1：3-10，更佳地1：4-8，较佳地1：5-7，较佳地1：5.5-6.5，最佳地1：6。
优选地，所述步骤(1)中，所述的石油醚与所述提取液的体积比为(0.5-1.5)：(0.5-1.5)，较佳地(0.8-1.2)：(0.8-1.2)，最佳地1：1。
优选地，所述步骤(1)中，所述的石油醚与所述提取液经浓缩后的浓缩液的体积比为(0.5-1.5)：(0.5-1.5)，较佳地(0.8-1.2)：(0.8-1.2)，最佳地1：1。
优选地，所述步骤(1)中，所述的乙酸乙酯与经石油醚萃取后分离的水层的体积比为(0.5-1.5)：(0.5-1.5)，较佳地(0.8-1.2)：(0.8-1.2)，最佳地1：1。
优选地，所述步骤(1)中，所述的正丁醇与经乙酸乙酯萃取后分离的水层的体积比为(0.5-1.5)：(0.5-1.5)，较佳地(0.8-1.2)：(0.8-1.2)，最佳地1：1。
优选地，所述的蒸干为减压浓缩蒸干。
优选地，所述的重楼提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(1)将重楼加入到65-75％(v/v)乙醇水溶液中，加热回流提取，得到提取液，向提取液中加入石油醚萃取，分离的水层用乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，所述正丁醇层萃取液经减压浓缩蒸干，得到重楼提取物。
优选地，所述的重楼提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(1)将重楼加入到65-75％(v/v)乙醇水溶液中，加热回流提取，过滤，得到的滤液经减压浓缩，向浓缩液中加入石油醚萃取，分离的水层用乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，所述正丁醇层萃取液经减压浓缩蒸干，得到重楼提取物。
优选地，所述的重楼提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(1)将重楼加入到65-75％(v/v)乙醇水溶液中，加热回流提取1-2h，过滤，得到的滤液经减压浓缩，向浓缩液中加入石油醚萃取，分离的水层用乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，所述正丁醇层萃取液经减压浓缩蒸干，得到重楼提取物。
优选地，所述步骤(1)中，所述的浓缩液与所述乙醇水溶液的体积比为1：3-12，较佳地1：3-10，更佳地1：4-8，较佳地1：5-7，较佳地1：5.5-6.5，最佳地1：6。
优选地，所述的重楼提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(1)将重楼加入到70％(v/v)乙醇水溶液中，加热回流提取，得到提取液，向提取液中加入石油醚萃取，分离的水层用乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，所述正丁醇层萃取液经减压浓缩蒸干，得到重楼提取物。
优选地，所述的重楼提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(1)取200g重楼，加入1200mL 70％(v/v)乙醇水溶液，加热回流提取1.5h，过滤，得到的滤液经减压浓缩，得到200mL浓缩液，向浓缩液中加入等体积的石油醚萃取，分离的水层用等体积的乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用等体积正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，所述正丁醇层萃取液经减压浓缩蒸干，得到重楼提取物。
优选地，所述的三七提取物通过乙醇水溶液提取制备而得。
优选地，所述的三七提取物包括乙醇水溶液提取物。
优选地，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为30-90％，较佳地50-90％，更佳地60-80％，更佳地65-75％，更佳地68-72％，最佳地70％。
优选地，所述的三七提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(a)将三七用乙醇水溶液提取，得到三七提取物。
优选地，所述步骤(a)中，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为30-90％，较佳地50-90％，更佳地60-80％，更佳地65-75％，更佳地68-72％，最佳地70％。
优选地，所述步骤(a)中，所述乙醇水溶液提取的方式为加热回流提取。
优选地，所述步骤(a)中，所述乙醇水溶液对三七提取的时间为0.5-5h，较佳地1-3h，更佳地1-2h，更佳地1.3-1.7h，最佳地1.5h。
优选地，所述步骤(a)中，所述的三七原料与所述的乙醇水溶液的重量比为1：3-12，较佳地1：3-10，更佳地1：4-8，较佳地1：5-7，较佳地1：5.5-6.5，最佳地较佳地1：6。
优选地，所述的三七提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(a)将三七用乙醇水溶液提取，得到提取液，所述提取液经蒸干，得到三七提取物。
优选地，所述步骤(a)中，将三七用乙醇水溶液提取后过滤，得到提取液。
优选地，所述的蒸干为减压浓缩蒸干。
优选地，所述的三七提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(a)将三七加入到65-75％(v/v)乙醇水溶液中，加热回流提取，得到提取液，所述提取液经蒸干，得到三七提取物。
优选地，所述的三七提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(a)将三七加入到70％(v/v)乙醇水溶液中，加热回流提取，得到提取液，所述提取液经蒸干，得到三七提取物。
优选地，所述的三七提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
取的200g三七，加入1200mL 70％(v/v)乙醇水溶液，加热回流提取1.5h，过滤，得到的滤液经减压浓缩蒸干，得到三七提取物。
优选地，所述的重楼提取物的含量为0.001-99.9wt％，较佳地0.1-99wt％，更佳地1-99wt％，更佳地1-90wt％，更佳地10-90wt％，更佳地20-80wt％，更佳地30-70wt％，更佳地20-40wt％，以组合物的重量计。
优选地，所述的三七提取物的含量为0.001-99.9wt％，较佳地0.1-99wt％，更佳地1-99wt％，更佳地1-90wt％，更佳地10-90wt％，更佳地20-80wt％，更佳地30-70wt％，更佳地20-40wt％，以组合物的重量计。
优选地，所述的组合物包括抗衰老组合物。
优选地，所述的组合物为药物组合物、食品组合物、保健品组合物或化妆品组合物。
优选地，所述的组合物还包括药学上、食品上、保健品上或化妆品可接受的载体。
优选地，所述的组合物的剂型为固体制剂、半固体制剂或液体制剂。
优选地，所述的药物组合物、食品组合物或保健品组合物的剂型为口服制剂。
优选地，所述的药物组合物或化妆品组合物的剂型为外用制剂。
优选地，所述的药物组合物或化妆品组合物的剂型为乳膏、霜剂、溶液剂、喷雾剂或贴剂。
优选地，所述的组合物的给药对象为人。
本发明第二方面提供一种活性成分组合，所述的活性成分组合包括以下组分：
(i)第一活性成分，所述的第一活性成分包括重楼提取物；和/或
(ii)第二活性成分，所述的第二活性成分包括三七提取物。
优选地，所述的重楼提取物如上本发明第一方面所述。
优选地，所述的三七提取物如上本发明第一方面所述。
优选地，所述的活性成分组合包括抗衰老活性成分组合。
优选地，所述的重楼提取物与所述三七提取物的重量比为1：5-200，较佳地1：5-100，更佳地1：10-90，更佳地1：10-80，更佳地1：10-70，更佳地1：20-60，更佳地1：25-55，更佳地1：30-50，更佳地1：35-45，更佳地1：38-42，更佳地1：40。
优选地，所述的活性成分组合中，至少有一种活性成分是独立的。
优选地，所述的活性成分组合中，第一活性成分和第二活性成分是相互独立的。
本发明第三方面提供一种药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒，所述药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒包括：
(A)含有第一活性成分的第一制剂，所述的第一活性成分包括重楼提取物；和/或
(B)含有第二活性成分的第二制剂，所述的第二活性成分包括三七提取物。
优选地，所述的重楼提取物如上本发明第一方面所述。
优选地，所述的三七提取物如上本发明第一方面所述。
优选地，所述的药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒包括抗衰老药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒。
优选地，所述的重楼提取物与所述三七提取物的重量比为1：5-200，较佳地1：5-100，更佳地1：10-90，更佳地1：10-80，更佳地1：10-70，更佳地1：20-60，更佳地1：25-55，更佳地1：30-50，更佳地1：35-45，更佳地1：38-42，更佳地1：40。
优选地，所述的第一制剂和第二制剂是相互独立制剂。
优选地，所述的第一制剂和第二制剂是合并制剂。
优选地，所述的药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒还包括使用说明书。
优选地，所述的使用说明书中注明将所述第一制剂和第二制进行联用，从而用于抗衰老。
本发明第四方面提供一种如本发明第一方面所述的组合物、如本发明第二方面所述的活性成分组合、或如本发明第三方面所述的药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒的用途，用于制备药物、食品、保健品或化妆品，所述药物、食品、保健品或化妆品用于抗衰老。
优选地，所述的抗衰老包括预防和/或治疗衰老。
优选地，所述的衰老包括皮肤衰老。
优选地，所述的衰老包括人衰老。
优选地，所述抗衰老的对象包括人。
优选地，所述的皮肤包括人皮肤。
优选地，所述的衰老包括光线辐射引起的衰老。
优选地，所述的衰老包括紫外线辐射引起的衰老。
优选地，所述的紫外线包括UVA紫外线。
优选地，所述的衰老包括Ⅲ型胶原蛋白降低引起的衰老。
优选地，所述的抗衰老包括提高Ⅲ型胶原蛋白水平来抗衰老。
优选地，所述的水平包括含量水平。
优选地，所述的Ⅲ型胶原蛋白包括皮肤细胞中的Ⅲ型胶原蛋白。
优选地，所述的Ⅲ型胶原蛋白包括皮肤成纤维细胞的Ⅲ型胶原蛋白。
优选地，所述皮肤成纤维细胞包括人皮肤成纤维细胞HFF-1。
优选地，所述药物、食品、保健品或化妆品的施用对象包括人。
优选地，所述的药物、食品、保健品或化妆品的剂型为固体制剂、半固体制剂或液体制剂。
优选地，所述的药物、食品或保健品的剂型为口服制剂。
优选地，所述的药物或化妆品的剂型为外用制剂。
优选地，所述的药物或化妆品的剂型为乳膏、霜剂、溶液剂、喷雾剂或贴剂。
本发明第五方面提供一种提高皮肤成纤维细胞中的Ⅲ型胶原蛋白含量的方法，所述的方法包括步骤：
将皮肤成纤维细胞与如本发明第一方面所述的组合物或如本发明第二方面所述的活性成分组合接触，从而提高皮肤成纤维细胞中的Ⅲ型胶原蛋白含量。
优选地，所述皮肤成纤维细胞包括人皮肤成纤维细胞。
优选地，所述皮肤成纤维细胞包括人皮肤成纤维细胞HFF-1。
优选地，所述的皮肤成纤维细胞包括紫外线辐射的皮肤成纤维细胞。
优选地，所述的紫外线包括UVA紫外线。
优选地，所述的方法包括非治疗性和非诊断性方法。
优选地，所述的方法包括体外方法。
优选地，所述的接触包括体外接触。
优选地，所述的接触包括在体外培养基中接触。
本发明第六方面提供一种抗衰老的方法，所述的方法包括给所需的对象施用如本发明第一方面所述的组合物、如本发明第二方面所述的活性成分组合、或如本发明第三方面所述的药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒，从而抗衰老。
优选地，所述对象包括人。
优选地，所述的抗衰老包括预防和/或治疗衰老。
优选地，所述的衰老包括皮肤衰老。
优选地，所述的衰老包括人衰老。
优选地，所述的皮肤包括人皮肤。
优选地，所述的衰老包括光线辐射引起的衰老。
优选地，所述的衰老包括紫外线辐射引起的衰老。
优选地，所述的紫外线包括UVA紫外线。
优选地，所述的衰老包括Ⅲ型胶原蛋白降低引起的衰老。
优选地，所述的抗衰老包括提高Ⅲ型胶原蛋白水平来抗衰老。
优选地，所述的水平包括含量水平。
优选地，所述的Ⅲ型胶原蛋白包括皮肤细胞中的Ⅲ型胶原蛋白。
优选地，所述的Ⅲ型胶原蛋白包括皮肤成纤维细胞的Ⅲ型胶原蛋白。
优选地，所述皮肤成纤维细胞包括人皮肤成纤维细胞HFF-1。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。
附图说明
图1为各组处理后的细胞裂解上清液中的COL-3(Ⅲ型胶原蛋白)含量，其中，p代表与模型组相比是否具有显著性差异，“*”表示p＜0.05，表明具有显著性差异；“**”表示p<0.01，表明存在极显著性差异。
具体实施方式
本发明开发了一种重楼提取物和三七提取物，所述的重楼提取物和三七提取物具有优异抗衰老效果，且本发明实验研究表明，特定用量的重楼提取物和三七提取物在抗衰老方面具有优异的协同效果。
术语
如本文所用，术语“包括”、“包含”与“含有”可互换使用，不仅包括开放式定义，还包括半封闭式、和封闭式定义，所述术语包括了“由……构成”、“基本上由……构成”。
在本发明中，术语“重楼”为球药隔重楼(Paris fargesii Franch.)的干燥根茎。
在本发明中，术语“三七”为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根。
在本发明中，术语“芦荟”是指本品为百合科植物库拉索芦荟Aloe barbadensisMiller植物叶的汁液浓缩干燥物。
如本文所用，术语“70％(v/v)乙醇水溶液”是指乙醇的体积分数为70％的乙醇水溶液，例如，“70％(v/v)乙醇水溶液通过70mL无水乙醇和30mL水混合配制，以此类推。
如本文所用，术语“COL-3”是指Ⅲ型胶原蛋白，英文为Collagen TypeIIIProtein。
如本文所用，术语“DMEM培养基”是指Dulbecco's Modified Eagle Medium。
如本文所用，术语“ELISA”是指酶联免疫吸附试验(enzyme linkedimmunosorbent assay)。
在本发明中，术语“预防”表示预防疾病和/或它的附随症状的发作或者保护对象免于获得疾病的方法。
在本发明中，术语“治疗”包括延缓和终止疾病的进展，或消除疾病，并不需要100％抑制、消灭和逆转。
重楼提取物
本发明提供一种重楼提取物，所述的重楼提取物具有优异的抗衰老效果。
在本发明的一个优选例中，所述的重楼提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(1)将重楼用乙醇水溶液提取，得到提取液，所述提取液经石油醚萃取，分离的水层用乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，所述正丁醇层萃取液经蒸干，得到重楼提取物。
具体地，本发明所述的重楼提取物如上本发明第一方面所述。
三七提取物
本发明提供一种三七提取物，所述的三七提取物具有优异的抗衰老效果。
在本发明的一个优选例中，所述的三七提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(a)将三七用乙醇水溶液提取，得到三七提取物。
具体地，本发明所述的三七提取物如上本发明第一方面所述。
用途
本发明所述的重楼提取物和三七提取物具有优异抗衰老效果，且本发明所述的重楼提取物和三七提取物在抗衰老方面具有优异的协同效果。
在本发明的一个优选例中，所述的抗衰老包括预防和/或治疗衰老。
本发明所述的衰老优选为皮肤衰老，如人皮肤衰老。
在本发明的一个优选例中，所述的衰老包括光线辐射(如紫外线辐射)引起的衰老。
在本发明的一个优选例中，所述的抗衰老包括提高Ⅲ型胶原蛋白水平来抗衰老。
在本发明的一个优选例中，所述的衰老包括Ⅲ型胶原蛋白降低引起的衰老。
优选地，所述的Ⅲ型胶原蛋白包括皮肤细胞中的Ⅲ型胶原蛋白。
优选地，所述的Ⅲ型胶原蛋白包括皮肤成纤维细胞的Ⅲ型胶原蛋白。
优选地，所述皮肤成纤维细胞包括人皮肤成纤维细胞HFF-1。
组合物
本发明还提供一种组合物，所述的组合物优选为药物组合物、食品组合物、保健品组合物或化妆品组合物。本发明所述的组合物还包括药学上、食品上、保健品上或化妆品可接受的载体。
如本文所用，术语“药学上、食品上、保健品上或化妆品可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体、半固体、液体或凝胶填料，它们适合于人体或动物使用，而且有足够的纯度和足够低的毒性。
应理解，在本发明中，所述的载体没有特别的限制，可选用本领域常用材料，或用常规方法制得，或从市场购买得到。可接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等)、明胶、滑石粉、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、山梨醇等)、乳化剂(如吐温)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、缓冲剂、螯合剂、增稠剂、pH调节剂、透皮促进剂、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、抑菌剂、无热原水等。
在本发明的一个优选例中，本发明组合物包括重楼提取物和三七提取物。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的重楼提取物与所述三七提取物的重量比为1：5-200，较佳地1：5-100，更佳地1：10-90，更佳地1：10-80，更佳地1：10-70，更佳地1：20-60，更佳地1：25-55，更佳地1：30-50，更佳地1：35-45，更佳地1：38-42，更佳地1：40。
在本发明中，组合物的剂型包括(但不限于)固体制剂、半固体制剂或液体制剂。
药物制剂应与给药方式相匹配，给药时，是将治疗有效量的药物施用于所需对象(如人或非人哺乳动物)。如本文所用，术语“治疗有效量”，是指对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。本领域的普通技术人员应该理解，所述的“治疗有效量”可随着药物制剂的形式、给药途径、所用药物的辅料、疾病的严重程度以及与其它药物联合用药等情况的不同而有所不同，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明取得的主要技术效果包括：
本发明开发了一种重楼提取物和三七提取物，所述的重楼提取物和三七提取物具有优异抗衰老(如抗皮肤衰老)效果，且重楼提取物和三七提取物在抗衰老方面具有优异的协同效果。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，以下具体实施例以本技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体操作过程，但本发明的保护范围并不限于本实施例。
实施例
COL-3是指Ⅲ型胶原蛋白，英文为Collagen Type IIIProtein。
实施例1
本实施例考察不同中药提取物及其组合在抗衰老方面中的效果
1.不同中药提取物的制备
1.1重楼提取物的制备
(1)取粉碎后的200g重楼，加入1200mL 70％(v/v)乙醇水溶液，加热回流提取1.5h，过滤，得到的滤液经减压浓缩，得到200mL浓缩液，向浓缩液中加入等体积的石油醚萃取，分离的水层用等体积的乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用等体积正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，正丁醇层萃取液经减压浓缩蒸干，得到重楼提取物。
1.2三七提取物的制备
取粉碎后的200g三七，加入1200mL 70％(v/v)乙醇水溶液，加热回流提取1.5h，过滤，得到的滤液经减压浓缩蒸干，得到三七提取物。
1.3芦荟提取物的制备
取粉碎后的200g芦荟，加入1200mL水，在70℃下搅拌提取3h，过滤，得到的滤液在8000r/min下离心15min，收集得到的上清液经减压浓缩，得到200mL浓缩液，将浓缩液与Sevag试剂(Sevag试剂为三氯甲烷和正丁醇的混合液，其中，三氯甲烷与正丁醇的体积比为5:1)按体积比为4:1的比例充分震荡20min(即通过Sevag法除去蛋白质)后，在8000r/min下离心5min，分离得到上清液，向上清液中边搅拌边加入4倍体积的80％(v/v)乙醇水溶液，在4℃下静置12h后，过滤得到沉淀物，沉淀物经干燥即为芦荟提取物。
2.不同中药提取物及其组合的抗衰老效果考察
2.1实验方法和结果
(1)设置空白组、模型组、实验组A、实验组B、实验组C、实验组D、实验组E、实验组F、实验组G和实验组H。各组取对数生长期的人皮肤成纤维细胞HFF-1(来自协和细胞库)以2×106个/mL的细胞密度将细胞悬液接种于多孔板细胞培养板上，每孔加入1mL细胞悬液，37℃、5％CO2培养过夜后，吸弃上清液，然后各组孔板加入1mL同体积的如下药物处理：
空白组：DMEM培养基；
模型组：DMEM培养基；
实验组A：重楼提取物的DMEM培养基分散液，其中，重楼提取物的浓度为1.25μg/mL；
实验组B：三七提取物的DMEM培养基分散液，其中，三七提取物的浓度为0.5mg/mL；
实验组C：芦荟提取物的DMEM培养基分散液，其中，芦荟提取物的浓度为2.5mg/mL；
实验组D：重楼提取物和三七提取物的DMEM培养基分散液，其中，重楼提取物的浓度为1.25μg/mL，三七提取物的浓度为0.5mg/mL；
实验组E：重楼提取物和三七提取物的DMEM培养基分散液，其中，重楼提取物的浓度为1.25μg/mL，三七提取物的浓度为0.05mg/mL；
实验组F：重楼提取物、三七提取物和芦荟提取物的DMEM培养基分散液，其中，重楼提取物的浓度为1.25μg/mL，三七提取物的浓度为0.5mg/mL，芦荟提取物的浓度为2.5mg/mL；
实验组G：重楼提取物、三七提取物和芦荟提取物的DMEM培养基分散液，其中，重楼提取物的浓度为1.25μg/mL，三七提取物的浓度为0.05mg/mL，芦荟提取物的浓度为2.5mg/mL；
实验组H：重楼提取物、三七提取物和芦荟提取物的DMEM培养基分散液，其中，重楼提取物的浓度为1.25μg/mL，三七提取物的浓度为0.05mg/mL，芦荟提取物的浓度为1.25mg/mL；
每组重复3次，各组加药后，置于37℃、5％CO2培养6h，然后除空白组外，其它各组均采用相同的UVA紫外线刺激(9J/cm2)，紫外线刺激处理结束后，各组再培养24h，各组板孔去除培养液，用PBS 7.4缓冲液清洗1遍，然后各组的每孔中加入400μL细胞裂解液(按照RIPA:PMSF为100:1的比例配置)，用枪吹打数下，尽量避免气泡的产生，然后在10000r/min、4℃下离心5min，取上清，得到各组细胞裂解上清液，采用ELISA试剂盒(Cloud-Clone crop)检测各组细胞裂解上清液中的COL-3(Ⅲ型胶原蛋白)的含量，各组细胞裂解上清液中的COL-3(Ⅲ型胶原蛋白)含量如图1和表1所示。
表1各组处理后的细胞裂解上清液中的COL-3(Ⅲ型胶原蛋白)含量(M±SD)
备注：除空白组外，其它各组均采用相同的UVA紫外线刺激(9J/cm2)。
从图1和表1中可以看出，与模型组相比，本实施例1制备的重楼提取物、三七提取物和芦荟提取物能够有效提高皮肤成纤维细胞中的Ⅲ型胶原蛋白含量，从而具有优异的抗皮肤衰老效果。特别地，与实验组A和实验组B的单独重楼提取物和三七提取物提高皮肤成纤维细胞中的Ⅲ型胶原蛋白含量相比，实验组E的特定用量的重楼提取物和三七提取物的联用在提高皮肤成纤维细胞中的Ⅲ型胶原蛋白含量方面具有协同效果，因此，实验组E的特定用量的重楼提取物和三七提取物的联用在抗皮肤衰老方面具有协同效果，从而显著提高抗衰老效果。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于，所述的组合物包括重楼提取物和/或三七提取物。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的重楼提取物与所述三七提取物的重量比为1：5-200，较佳地1：5-100，更佳地1：10-90，更佳地1：10-80，更佳地1：10-70，更佳地1：20-60，更佳地1：25-55，更佳地1：30-50，更佳地1：35-45，更佳地1：38-42，更佳地1：40。
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的重楼提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(1)将重楼用乙醇水溶液提取，得到提取液，所述提取液经石油醚萃取，分离的水层用乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，所述正丁醇层萃取液经蒸干，得到重楼提取物；
所述的三七提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(a)将三七用乙醇水溶液提取，得到三七提取物。
4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的重楼提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(1)将重楼加入到65-75％(v/v)乙醇水溶液中，加热回流提取，得到提取液，向提取液中加入石油醚萃取，分离的水层用乙酸乙酯萃取，然后分离的水层用正丁醇萃取，分离得到正丁醇层萃取液，所述正丁醇层萃取液经减压浓缩蒸干，得到重楼提取物；
所述的三七提取物通过以下方法制备，所述的方法包括：
(a)将三七加入到65-75％(v/v)乙醇水溶液中，加热回流提取，得到提取液，所述提取液经蒸干，得到三七提取物。
5.一种活性成分组合，其特征在于，所述的活性成分组合包括以下组分：
(i)第一活性成分，所述的第一活性成分包括重楼提取物；和/或
(ii)第二活性成分，所述的第二活性成分包括三七提取物。
6.一种药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒，其特征在于，所述药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒包括：
(A)含有第一活性成分的第一制剂，所述的第一活性成分包括重楼提取物；和/或
(B)含有第二活性成分的第二制剂，所述的第二活性成分包括三七提取物。
7.如权利要求5所述的活性成分组合或如权利要求6所述的盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒，其特征在于，所述的重楼提取物和所述三七提取物如权利要求3或4所述；
所述的重楼提取物与所述三七提取物的重量比为1：5-200，较佳地1：5-100，更佳地1：10-90，更佳地1：10-80，更佳地1：10-70，更佳地1：20-60，更佳地1：25-55，更佳地1：30-50，更佳地1：35-45，更佳地1：38-42，更佳地1：40。
8.一种如权利要求1所述的组合物、如权利要求5所述的活性成分组合、或如权利要求6所述的药盒、食品盒、保健品盒或化妆品盒的用途，其特征在于，用于制备药物、食品、保健品或化妆品，所述药物、食品、保健品或化妆品用于抗衰老。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的衰老包括紫外线辐射引起的衰老。
10.一种提高皮肤成纤维细胞中的Ⅲ型胶原蛋白含量的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：
将皮肤成纤维细胞与如权利要求1所述的组合物或如权利要求5所述的活性成分组合接触，从而提高皮肤成纤维细胞中的Ⅲ型胶原蛋白含量。
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