CN117942292A

CN117942292A - 用于化妆品的黄精提取物的制备方法和黄精提取物和化妆品

Info

Publication number: CN117942292A
Application number: CN202211296520.2A
Authority: CN
Inventors: 田云才; 徐玉华; 吴丹; 田勇; 戴钰; 罗立
Original assignee: Shanghai Zhizhen Zhichen Technology Co ltd
Current assignee: Shanghai Zhizhen Zhichen Technology Co ltd
Priority date: 2022-10-21
Filing date: 2022-10-21
Publication date: 2024-04-30

Abstract

本申请公开了一种用于化妆品的黄精提取物的制备方法和黄精提取物和化妆品，制备方法包括：将黄精根、黄精茎或其组合的粉碎物料与水的混合物灭菌和冷却，以得到浆液；在浆液中加入碳源，后接种发酵菌种，进行发酵，以得到黄精发酵液；将黄精发酵液进行固液分离并高温灭菌，从滤液中得到黄精提取物。使得黄精中所包含的活性物质能够充分被发酵菌开发、提取出来，最后通过高温灭菌和固液分离技术将活性物质分离和提取，避免传统方法处理黄精时活性物质的流失和浪费，是一种高效，天然绿色的制备方法，制得的黄精提取物安全、无副作用，可以用于化妆品。

Description

用于化妆品的黄精提取物的制备方法和黄精提取物和化妆品

技术领域

本申请属于化妆品原料提取技术领域，具体涉及一种用于化妆品的黄精提取物的制备方法和黄精提取物和化妆品。

背景技术

黄精为百合科黄精属多年生草本植物，是我国药食两用资源。黄精含有黄精多糖、皂苷、黄酮、生物碱等活性成分。

现有技术中，一般采用水提的方式提取黄精内的活性物质，这种初级的加工方式导致活性物质的提取率较低。药用黄精一般为制黄精，即通过蒸、晒等传统炮制的方法进行处理，该过程由于长时间高温处理，部分活性物质失活、变性、挥发，造成的活性物质浪费。因此，对黄精有效成分的提取技术仍有待改进。

发明内容

鉴于此，本申请提供一种用于化妆品的黄精提取物的制备方法和黄精提取物和化妆品，旨在提供一种保留更多有效活性物质的黄精提取物的制备方法。

第一方面，本申请实施例提供了一种用于化妆品的黄精提取物的制备方法，包括：

将黄精根、黄精茎或其组合的粉碎物料与水的混合物灭菌和冷却，以得到浆液；

在所述浆液中加入碳源，后接种发酵菌种，进行发酵，以得到黄精发酵液；

将所述黄精发酵液进行固液分离并高温灭菌，从滤液中得到黄精提取物。

根据本申请的一个方面的实施例，所述制备方法还包括：

将黄精根、黄精茎或其组合与水以1:20～200的质量比进行混合和粉碎，以提供所述黄精根、黄精茎或其组合的粉碎物料与水的混合物。

根据本申请的一个方面的实施例，灭菌包括：在温度为115℃～125℃的条件下进行灭菌。

根据本申请的一个方面的实施例，发酵菌种选自酿酒酵母菌、植物乳杆菌、双歧杆菌或其组合，可选为双歧杆菌乳亚种。

根据本申请的一个方面的实施例，在浆液中加入碳源，后接种发酵菌种，进行发酵，以得到黄精发酵液包括：

在浆液中加入碳源，后接种发酵菌种，在温度为28℃-32℃，PH为6.5～7.0的条件下，同时在搅拌转速为100rpm～500rpm的条件下进行发酵，发酵的时间为36-72h，以得到黄精发酵液。

根据本申请的一个方面的实施例，固液分离方式选自陶瓷膜分离、中空纤维膜分离、离心分离、板框压滤或其组合。

根据本申请的一个方面的实施例，将黄精发酵液进行固液分离并高温灭菌，从滤液中得到黄精提取物包括：

将黄精发酵液在温度为100℃～110℃的条件下进行第一次灭菌，第一次灭菌的时间为10～30min，后进行固液分离，以得到滤液；

将所述滤液在温度为115℃～125℃的条件下进行第二次灭菌，第二次灭菌的时间为15～30min，以得到黄精提取物。

第二方面，本申请提供了一种用于化妆品的黄精提取物，由第一方面制备方法得到。

根据本申请的一个方面的实施例，黄精提取物还包含防腐剂。

第三方面，本申请提供了一种化妆品，包含第一方面制备方法制得的黄精提取物或第二方面黄精提取物。

与现有技术相比，本申请至少具有以下有益效果：

本申请提供的制备方法，通过发酵菌对黄精根、黄精茎或其组合的粉碎物的浆液进行发酵，使得黄精中所包含的活性物质能够充分被发酵菌开发、提取出来，最后通过高温灭菌和固液分离技术将活性物质分离和提取，避免传统方法处理黄精时活性物质的流失和浪费，是一种高效，天然绿色的制备方法，制得的黄精提取物安全、无副作用，可以用于化妆品。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图作简单的介绍，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1示出了本申请的黄精提取物的制备方法流程图；

图2示出了本申请实施例和对比例中黄精提取物对DPPH自由基清除率；

图3示出了本申请实施例和对比例中黄精提取物的细胞毒性结果。

具体实施方式

为了使本申请的申请目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例对本申请进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本申请，并非为了限定本申请。

为了简便，本申请仅明确地公开了一些数值范围。然而，任意下限可以与任何上限组合形成未明确记载的范围；以及任意下限可以与其它下限组合形成未明确记载的范围，同样任意上限可以与任意其它上限组合形成未明确记载的范围。此外，尽管未明确记载，但是范围端点间的每个点或单个数值都包含在该范围内。因而，每个点或单个数值可以作为自身的下限或上限与任意其它点或单个数值组合或与其它下限或上限组合形成未明确记载的范围。

在本申请的描述中，需要说明的是，除非另有说明，“以上”、“以下”为包含本数，“一种或多种”中的“多种”的含义是两种及其两种以上。

本申请的上述申请内容并不意欲描述本申请中的每个公开的实施方式或每种实现方式。如下描述更具体地举例说明示例性实施方式。在整篇申请中的多处，通过一系列实施例提供了指导，这些实施例可以以各种组合形式使用。在各个实例中，列举仅作为代表性组，不应解释为穷举。

为了推动植物药材的多场景应用，发明人进行了大量研究，发现植物药材可以作为菌株的发酵基质，通过微生物发酵作用，可以对植物药材中的糖种类进行调节，减少单糖成分或降低多糖分子量，从而提高多糖分子的有效吸收。

传统技术中，黄精一般是以水提方式提取黄精内的活性物质的初级加工为主，提取率低。尤其是药用黄精一般为制黄精，即通过蒸、晒等传统炮制的方法进行处理，该过程由于长时间高温处理，部分活性物质失活、变性、挥发，造成的活性物质浪费。

发明人经研究发现，通过部分微生物作用，黄精中的蛋白质、氨基酸、脂肪酸以及多酚含量均会发生变化，发酵后黄精在抗衰老，维持皮肤微生态平衡及保湿方面的护肤作用可以得到较好的改善。

经进一步研究发现，发现使用部分发酵菌种的发酵液的抗氧化性能显著高于其他常用的发酵微生物，例如双歧杆菌；其可能的原因是双歧菌能够利用黄精溶出的活性成分，如皂苷、氨基酸、多糖化合物、蒽醌类化合物等，作为双歧感菌的益生元，一方面促进菌株的生长和代谢，一方面在代谢过程产生的各种酶类，会使黄精原有的活性成分发生转化，得到新的活性成分，或是被降解为更多低极性和小分子量的代谢产物，从而提高黄精的抗氧化性能。

黄精提取物的制备方法

(a)将黄精根、黄精茎或其组合的粉碎物料与水的混合物灭菌和冷却，以得到浆液；

(b)在浆液中加入碳源，后接种发酵菌种，进行发酵，以得到黄精发酵液；

(c)将黄精发酵液进行固液分离并高温灭菌，从滤液中得到黄精提取物。

在本申请实施例中，黄精的主要功效成分有皂苷、氨基酸、多糖化合物、蒽醌类化合物等。黄精提取物在化妆品领域具有抗氧化、抗衰、抗菌、保湿、美白等多种功效。利用发酵菌种的发酵作用，将黄精中的大分子活性成分分解为小分子活性成分，例如，大分子多糖降解为易于皮肤吸收的小分子单糖或寡糖；从而更易被肌肤吸收，同时配合发酵菌种产生的代谢产物，大大增加了黄精功效成分的利用率及其抗氧化能力，进一步提高了黄精提取物中的有效活性物质，提高了提取物在化妆品中的使用是的抗氧化性和去除自由基的性能。可以将提取物作为化妆品直接使用或添加到化妆品基础配方中使用，具有较好的抗氧化、抗衰老、滋养肌肤的效果。

根据本申请实施例，上述制备方法利用发酵菌种的发酵作用，可产生各种外源活性酶(如SOD酶)或有益次级代谢产物，发酵过程中复合酶的破壁作用也有利于黄精中活性成分(如多糖、皂苷)溶出，甚至将大分子多肽降解为易于皮肤吸收的小分子。通过发酵处理还可去除生黄精的刺激性成分，有利于黄精功效性成分在皮肤上的应用，上述制备方法简单，提取效率高，生产周期短且具有良好的安全性。

根据本申请实施例，步骤(a)中，黄精可以为鲜黄精或未经加工的黄精，新鲜黄精的含水量可以为70％-85％，具有更多的有效活性组分。

在本申请实施例中，步骤(a)中，水可选为去离子水。可以避免在黄精中引入新杂质。

传统技术中，黄精以水提为主，提取率低；使用有机溶剂萃取的提取方法，可以提高提取率。由此本领域技术人员普遍存在为了提高提取率使用有机溶剂提取的技术偏见，而申请人通过大量的实验证明了，用水浸泡黄精根、黄精茎或其组合的粉碎物料，而不采用有机溶剂，再使用发酵菌种发酵，提高了有效活性成分的提取率，具有更好的抗氧化性，克服了本领域技术人员的上述技术偏见。

此外，如使用有机溶剂，黄精提取物中可能残留的有机溶剂也会影响提取物的在化妆品中的应用。

在一些实施例中，步骤(a)中，制备方法还包括：

根据本申请实施例，控制黄精根、黄精茎或其组合与水以1:20～200的质量比进行混合，可以在兼顾充分溶解黄精粉碎物，为后续发酵提供适宜的环境基础上，可以在不进行浓缩的基础上，提供有效活性物质在溶液中的浓度。

在一些实施例中，步骤(a)中，灭菌包括：在温度为115℃～125℃的条件下进行灭菌。

通过对黄精的粉碎物进行灭菌，可以避免杂菌在后续发酵中影响发酵菌种发酵，同时净化了黄精提取物，避免了很多杂菌在发酵液中产生有害物质，可以使其用于化妆品。

在一些实施例中，步骤(b)中，碳源选自葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖或其组合。根据本申请实施例，发酵菌种对发酵条件较为敏感，碳源的含量过低，无法满足发酵菌种前期生长繁殖的要求，含量过高，会影响发酵效果。发明人根据大量实验确定，碳源在浆液中的初始浓度可以为5g/L～15g/L，以便为后续发酵菌种提供充足的碳源，促进其充分发酵。

在一些实施例中，步骤(b)中，发酵菌种选自酿酒酵母菌、植物乳杆菌、双歧杆菌或其组合，可选为植物乳杆菌。上述发酵菌种可以使黄精中的有效活性组分溶出，同时可以将大分子物质分解为小分子物质，提高黄精提取物使用时的抗氧化性。

需要说明的是，实施例中使用的酿酒酵母、双歧杆菌均购于中国普通微生物保藏管理中心，编号为酿酒酵母CGMCC17452、双歧杆菌CGMCC1.2226。植物乳杆菌购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC22196。

在上述一些实施例中，申请人使用植物乳杆菌发酵黄精根、黄精茎或其组合具有较好效果。经进一步试验，通过使用一定比例植物乳杆菌与双歧杆菌混合菌种发酵黄精，发明人发现混合发酵得到的黄精提取物也具有较好的抗氧化活性比单一的酿酒酵母或双歧杆菌发酵得到的黄精提取物更高，其可能原因在于，两种菌种对提高黄精提取物的抗氧化活性的途径和方式存在一定的区别，同时两者对应的途径和方式之间存在一定的协同作用，从而在混合发酵中，使得混合黄精提取物的抗氧化活性得到进一步提升。

在一些实施例中，步骤(b)中，发酵菌种子液中活菌浓度为10⁶～10⁸CFU/mL。通过控制发酵菌种子液中活菌浓度，有利于保证发酵液中初始菌种的浓度，保证发酵的顺利进行，同时提高发酵的效率。

在一些实施例中，步骤(b)中，发酵菌种的接种体积为浆液总体积的2％～10％。通过控制发酵菌种的接种体积，有利于保证发酵液中初始菌种的浓度，保证发酵的顺利进行，同时提高发酵的效率。

发酵菌种接种量以及活菌数对最终得到发酵液具有一定的影响，发明人通过实验确定了上述活菌浓度和接种体积。

在一些实施例中，步骤(b)中，在浆液中加入碳源，后接种发酵菌种，进行发酵，以得到黄精发酵液包括：

根据本申请实施例，发酵菌种对发酵条件较为敏感，发酵体系中的水分活度以及氧气浓度等参数，会导致发酵过程以及产物存在区别。发酵温度，发酵时间对发酵产物的影响较大，时间太短，黄精的活性成分溶出不充分且发酵菌种的代谢产物较少，时间太长，可能导致微生物利用活性成分过多，导致发酵液中有效成分降低。发明人通过大量实验确定酿酒酵母菌、植物乳杆菌、双歧杆菌分别可以在温度为28℃-32℃，PH为6.5～7.0的条件下生长，并利用发酵液中的成分，实现对黄精有效活性物质的溶出，提高有效活性物质的组分。

示例性的，接入含有酿酒酵母菌的单一菌或与植物乳杆菌混合培养时，需要通气比为0.2V/V·m～1.5V/V·m。接入含有双歧杆菌的单一菌种或与植物乳杆菌的混合培养时，不通空气或通入氮气排除溶解氧，控制溶解氧≤1％。

通气比为0.2V/V·m～1.5V/V·m对酿酒酵母发酵菌种具有促进有氧代谢的积极作用，避免缺氧时进入乙醇代谢，产生过多的酒精；控制发酵的时间为36-72h，避免有害副产物的产生，使大分子物质分解为小分子物质，提高黄精提取物使用时的抗氧化性。

在一些实施例中，步骤(c)中，固液分离方式选自陶瓷膜分离、中空纤维膜分离、离心分离、板框压滤或其组合。上述固液分离的方式可以有效分离发酵混合物中的固体渣和发酵液，实现有效分离。例如，中空纤维膜分离中的膜呈毛细管状，微孔位于管壁上，能有效实现发酵混合物中各组分的分离，以各组分能否通过这些微孔来实现分离。

在一些实施例中，步骤(c)中，将黄精发酵液进行固液分离并高温灭菌，从滤液中得到黄精提取物包括：

根据本申请实施例，在温度为100℃～110℃的条件下进行第一次灭菌，是为了及时杀灭发酵菌种，终止菌种生长代谢，实现定向灭菌，避免在后续提取操作过程中，活菌继续生长，对功效成分过度利用，甚至进入微生物的衰退期。当发酵菌种在上述条件下发酵24-60h后，根据菌种繁殖的周期，发酵菌种处于衰退期，会分泌溶酶体，导致细胞自溶，所释放的胞内酶可能会对功效物质进行酶解、破坏、改变pH环境，最终造成有效物质的损失，甚至直接产生有害物质，如内毒素。

基于本申请的黄精提取物用于化妆品，而有害物质在后续过程中不易去除，且在后续去除过程中，可能会降低有效活性物质的含量或使其失活，避免黄精活性物质的流失和浪费。因此，在此时温度为100℃～110℃的条件下进行时十分有必要和关键的。

根据本申请实施例，将滤液在温度为115℃～125℃的条件下进行第二次灭菌，10～30min，是基于进行了固液分离，可能引入了部分杂菌，由于本申请的黄精提取物用于化妆品，在115℃～125℃的条件下进行灭菌，15～30min，去除杂菌，使黄精提取物可以进行无菌保藏。

黄精提取物

在一些实施例中，黄精提取物还包含防腐剂。

在一些实施例中，防腐剂选自对羟基苯乙酮、1,2-己二醇或其组合。

制备含防腐剂的黄精提取物时，向黄精提取物添加防腐剂在温度为60℃～80℃时，使两者充分混合，以得到含防腐剂的黄精提取物。

在本申请实施例中，防腐剂的添加有助于延长黄精提取物的使用寿命，防止细菌污染等积极效果。

在一些实施例中，对羟基苯乙酮添加于含防腐剂的黄精提取物中的体积百分数为0.5％～2％。在一些实施例中，1,2-己二醇添加于含防腐剂的黄精提取物中的体积百分数为0.5％～2％。添加上述体积分数的防腐剂，在不影响黄精提取物的功效基础上，可以延长使用期限。

化妆品

根据本申请实施例，黄精提取物可以添加到化妆品基础配方中使用，具体的，黄精提取物占皮肤外用化妆品的质量百分比为1％～80％；可选的，黄精提取物占皮肤外用化妆品的质量百分比为10％～60％

实施例

下述实施例更具体地描述了本申请公开的内容，这些实施例仅仅用于阐述性说明，因为在本申请公开内容的范围内进行各种修改和变化对本领域技术人员来说是明显的。除非另有声明，以下实施例中所报道的所有份、百分比、和比值都是基于重量计，而且实施例中使用的所有试剂都可商购获得或是按照常规方法进行合成获得，并且可直接使用而无需进一步处理，以及实施例中使用的仪器均可商购获得。

实施例1

本申请实施例提供了一种用于化妆品的黄精提取物的制备方法，制备流程图，如图1所示，包括：

(a)将黄精根、黄精茎或其组合的粉碎物料与水的混合物灭菌和冷却，以得到浆液；具体包括：将含水量为75％的新鲜黄精80g，洗净后加入去离子水4000g进行匀浆，匀浆液经过121℃灭菌20min。

(b)在浆液中加入碳源，后接种发酵菌种，进行发酵，以得到黄精发酵液；具体包括：冷却后用泵补入10g/L提前灭菌的葡萄糖，以形成初始发酵体系。随后接入提前培养至活菌量为10⁷CFU/mL的酿酒酵母菌种子液200ml，随后在30℃环境、通气比为1vvm、搅拌转速100rpm～500rpm、PH 6.5的条件下发酵培养48小时。

(c)将黄精发酵液进行固液分离并高温灭菌，从滤液中得到黄精提取物。具体包括将发酵液升温110℃，灭活15分钟～30分钟，冷却后，用板框进行压滤，获得透清滤液3500ml，随后将滤液于120℃灭菌20min,降温至80℃时，开始加入对羟基苯乙酮20g,1,2-己二醇17.5g，并混匀溶解，随后继续冷却至室温。

实施例2

本申请实施例提供了一种用于化妆品的黄精提取物的制备方法，包括：

将含水量为75％的新鲜黄精80g，洗净后加入去离子水4000g进行匀浆，匀浆液经过121℃灭菌20min，冷却后用泵补入10g/L提前灭菌的葡萄糖，以形成初始发酵体系。随后接入提前培养至活菌量为10⁷CFU/mL的植物乳杆菌种子液200ml，随后在32℃环境、通气比为0.5vvm、搅拌转速100rpm～500rpm、PH 6.5的条件下发酵培养48小时。发酵结束后，将发酵液升温105℃，灭活15分钟～30分钟，冷却后，用板框进行压滤，获得透清滤液3500ml，随后将滤液于115℃灭菌20min,降温至80℃时，开始加入对羟基苯乙酮20g,1,2-己二醇17.5g，并混匀溶解，随后继续冷却至室温。

实施例3

将含水量为80％的新鲜黄精80g，洗净后加入去离子水4000g进行匀浆，匀浆液经过121℃灭菌20min，冷却后用泵补入10g/L提前灭菌的葡萄糖，以形成初始发酵体系，通入高纯氮气，使得溶解氧≤1％。随后接入提前培养至活菌量为10⁷CFU/mL的双歧杆菌种子液200ml，随后在35℃环境、搅拌转速100rpm-200rpm、PH 6.5，并通过间歇性通入氮气，控制溶解氧≤1％的条件下发酵培养48小时。发酵结束后，将发酵液升温110℃，灭活15分钟～30分钟，冷却后，用板框进行压滤，获得透清滤液3500ml，随后将滤液于125℃灭菌20min,降温至80℃时，开始加入对羟基苯乙酮20g,1,2-己二醇17.5g，并混匀溶解，随后继续冷却至室温。

实施例4-8

制备方法同实施例1，不同之处在于发酵菌种的种类和接种量，其他条件参数同实施例1。最终对发酵产物滤液的抗氧化性能进行DPPH自由基清除率的比较，结果如表2，作图如图2。从数据可知，植物乳杆菌种子液6％接种量发酵时，其发酵产物滤液的DPPH自由基清除率最高，间接反映了发酵产物的相对较优的抗氧化性能。

表1实施例4-9不同发酵菌种接种量。

对比例1

制备方法同实施例2，不同之处在于不接菌。

对比例2

制备方法同实施例1，不同之处在于：

在发酵培养后，直接进行固液分离，以得到滤液；

将滤液在温度为115℃～125℃的条件下进行灭菌，灭菌的时间为15～30min，以得到黄精提取物。

测试部分

DPPH自由基清除率

DPPH是含有自由基的化学反应中作为一种监测反应的物质，典型的用于抗氧化成分的体外抗氧化性评价，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在517nm处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，DPPH的孤对电子被配对而使其褪色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。

DPPH自由基清除实验的具体实验步骤为：

(1)取等体积(1mL)的待测液与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A1管)；

(2)取等体积(1mL)的无水乙醇(待测物溶剂)与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A2管)；

(3)取等体积(1mL)的无水乙醇与待测液混匀(A3管)；

(4)避光反应30min后，在517nm下测A1管、A2管、A3管吸光度值；清除率计算公式为：清除率＝[(A2+A3)-A1]/A2×100％。

本实验对实施例1～8和对比例1～2的样品稀释2倍后进行DPPH自由基清除实验的测试，测试结果如表2、图2所示。

表2.DPPH自由基清除率。

对上述发酵产物滤液的抗氧化性能进行DPPH自由基清除率的比较，结果如表2，作图如图2。从数据可知，植物乳杆菌种子液6％接种量进行发酵时，其发酵产物滤液的DPPH自由基清除率最高，反映了发酵产物的相对较优的抗氧化性能。

根据上述DPPH自由基清除率测定方法，对实施例1和对比例1中的黄精提取物进行。记录结果，如表3所示。

从数据可知，在抗氧化性能方面，接种发酵后，50％样品浓度下其DPPH自由基清除率达到了77.8％，比不接菌发酵前提高了23％，表明本申请方案对黄精提取物在化妆品的抗氧性方面具有显著的优势。

有效活性组分的测定

实施例中所描述的功效成分：总蛋白、总多酚、总糖、总黄酮、总皂苷。其含量检测方法参考描述如下：

总蛋白含量检测采用北京百瑞极生物科技有限公司生产的货号为BN27109的BCA蛋白定量检测试剂盒进行测定。

总多酚含量检测按照GB/T8313-2018《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》进行测定。

总糖含量检测按照GB/T 15672-2009《食用菌中总糖含量的测定》，稍作调整，将试样水解操作过程调整为“取发酵液5ml,加10％盐酸25ml，于100℃水浴30min，冷却后加水定容至50ml”其余不变。

总皂苷的测定方法按照T-AHFIA 004-2018《食品中总皂苷含量的测定-分光光度法》进行测定。

总黄酮的测定方法按照DB43T 476-2009《植物源性食品中总黄酮的测定》进行测定。

根据上述方法对实施例1和对比例1-2中的黄精提取物进行含量检测。结果如表4所示。

表4黄精提取物功效成分比较

由上表可知，实施例1相比对比例1-2中的有效活性组分，实施例中总皂苷、总多酚、总黄酮含量更高。

细胞(HaTAC)急性毒性的测试

试剂：

0.25％(含EDTA)胰蛋白酶，生产厂家为美国GIBCO公司；

DMEM培养基，生产厂家为美国GIBCO公司；

双抗，生产厂家为美国Corning公司；

CCK-8，生产厂家为北京拜尔迪生物技术有限公司；

胎牛血清，生产厂家为美国GIBCO公司；

磷酸盐缓冲液，生产厂家为北京百瑞极生物科技有限公司。

设备：

WJ-80A-Ⅱ型CO₂恒温培养箱，生产厂家为上海圣科仪器设备有限公司；

Sunrise酶标仪，生产厂家为帝肯贸易有限公司；

TL80-2型医用离心机，生产厂家为江苏天力医疗器械有限公司；

NUNC 96孔细胞培养板，生产厂家为赛默飞世尔科技公司。

具体步骤：分别将上述实施例1～8和对比例1～2制得的产品用无血清的DMEM培养基配置成体积百分数为5％的实验组待测液。人永生化角质形成细胞养于含10％胎牛血清以及1％双抗(1×10⁵U/L的青霉素、100mg/L的链霉素)的DMEM培养基中。细胞生长于37℃、5％ CO₂饱和湿度的培养箱中，当细胞融合达到85％以上时，以0.05％胰酶消化对数生长期细胞，用含血清的DMEM终止消化反应。用细胞计数板计数，将细胞悬液浓度调整到7×10⁴个/mL，将细胞悬液按照每孔100μL的比例接种到96孔板上，37℃、5％ CO₂条件下孵育12h。去除旧培养液，用磷酸盐缓冲液清洗细胞两遍。实验组中每孔加入100μL上述配置的已过滤除菌的不同浓度的实验组待测液，每个待测液做6个复孔；对照组含有细胞，加入无血清的DMEM培养基；空白对照组无细胞，加入100μL的PBS。再于37℃、5％CO₂条件下孵育24h。然后每孔加入10μL的CCK-8溶液，再孵育3h，在450nm波长下测定吸光度值，计算各组细胞存活率，细胞存活率的计算公式如下：

细胞存活率(％)＝(A实验组-A空白对照组)/(A对照组-A空白对照组)×100％。

测试结果见下表5，将测试结果制成数据图3以进行对比。

表5黄精提取物急性毒性的测试结果。

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从表的数据来看，不同样品浓度下，HaCAT细胞存活率均大于85％，表明本申请方法所制备的黄精提取物对人体角质形成细胞具有良好的安全性，人体角质形成细胞可正常生长。结合上述结果，表明该方法所得黄精提取物是一种可以安全且有效地应用于化妆品的原料。

以上所述，仅为本申请的具体实施方式，但本申请的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本申请揭露的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本申请的保护范围之内。因此，本申请的保护范围应以权利要求的保护范围为准。

Claims

1.一种用于化妆品的黄精提取物的制备方法，包括：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述灭菌包括：

在温度为115℃～125℃的条件下进行灭菌。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵菌种选自酿酒酵母菌、植物乳杆菌、双歧杆菌或其组合，可选为双歧杆菌乳亚种。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述浆液中加入碳源，后接种发酵菌种，进行发酵，以得到黄精发酵液包括：

在所述浆液中加入碳源，后接种发酵菌种，在温度为28℃-32℃,PH为6.5～7.0的条件下，同时在搅拌转速为100rpm～500rpm的条件下进行发酵，发酵的时间为36-72h，以得到黄精发酵液。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述固液分离方式选自陶瓷膜分离、中空纤维膜分离、离心分离、板框压滤或其组合。

7.根据权利要求1-5中任意一项所述的制备方法，其特征在于，将所述黄精发酵液进行固液分离并高温灭菌，从滤液中得到黄精提取物包括：

将所述黄精发酵液在温度为100℃～110℃的条件下进行第一次灭菌，第一次灭菌的时间为10～30min，后进行固液分离，以得到滤液；

8.一种用于化妆品的黄精提取物，由如权利要求1-7任一项所述的制备方法得到。

9.根据权利要求8所述的黄精提取物，其特征在于，所述黄精提取物还包含防腐剂。

10.一种化妆品，包含权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的黄精提取物或权利要求8或9所述的黄精提取物。