CN117653578A - 玉竹发酵液提取物及其制备方法、用途、化妆品和皮肤外用剂 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了玉竹发酵液提取物及其制备方法、用途、化妆品和皮肤外用剂。方法包括：将玉竹原料进行匀浆并灭菌、冷却，以提供初始发酵体系；向初始发酵体系中加入发酵菌进行培养发酵以得到玉竹发酵液，发酵菌在初始发酵体系中的活菌数为104～108CFU/mL；将玉竹发酵液分离得到玉竹发酵液提取物。根据本申请玉竹发酵液提取物的制备方法，通过微生物即酿酒酵母菌发酵的方式对玉竹中的活性成分进行完全、充分的提取，来减少活性成分的流失，并通过后续的灭菌步骤除去其中的微生物，然后通过分离技术得到玉竹发酵液提取物，解决现有技术中只对玉竹进行初级加工导致的活性成分浪费的技术问题，还可以更好的发挥其护肤效果。
Description
技术领域
本申请属于化妆品领域，尤其涉及一种玉竹发酵液提取物及其制备方法、用途、化妆品和皮肤外用剂。
背景技术
随着社会的发展，现代社会的人口老龄化不断加剧，积极探索和开发抗氧化、抗衰老产品对减缓社会人口老龄化具有重要意义。在大量实验证据的基础上,现代衰老学说中自由基学说最受重视。该学说指出,机体细胞在正常代谢过程中产生较多的活性氧自由基。自由基在人体内处于不断产生和不断清除的动态平衡之中，当人体受到外源性因素以及内源性因素的影响时，自由基产生过多或者清除过少都有可能造成组织细胞的损伤，进而引起机体的衰老以及其它的疾病。
现有技术中，玉竹一般是以水提方式提取玉竹内的活性物质的初级加工为主，提取率低，会造成一定的活性物质浪费。因此，本申请针对该技术问题进行了改进，提供以下技术方案。
发明内容
本申请实施例提供一种玉竹发酵液提取物的制备方法，能够解决现有的玉竹采用初级加工造成的玉竹活性成分浪费的问题。
本申请的第一方面，提供一种玉竹发酵液提取物的制备方法，包括：
S1、将玉竹原料进行匀浆并灭菌，以提供初始发酵体系；其中，玉竹原料为玉竹植株的根茎；
S2、向初始发酵体系中加入发酵菌进行培养发酵以得到玉竹发酵液，其中，发酵菌在初始发酵体系中的活菌数为104～108CFU/mL；
S3、从玉竹发酵液分离得到玉竹发酵液提取物。
本申请通过发酵菌对玉竹匀浆进行培养发酵，使得玉竹中所包含的活性物质能够完全被发酵菌开发、提取出来，最后通过灭菌和分离技术将各种活性物质进行充分的分离和提取，得到玉竹发酵液提取物，避免玉竹中的活性物质的流失和浪费。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图作简单的介绍，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本申请实施例1-4和对比例1-2提供的玉竹提取物对DPPH自由基清除率对比图；
图2是本申请实施例1-4和对比例1-2提供的玉竹提取物中的蛋白质含量对比图；
图3是本申请实施例1-4和对比例1-2提供的玉竹提取物中的总含糖量对比图；
图4是本申请实施例1-4和对比例1-2提供的玉竹提取物对人体皮肤成纤维细胞毒性试验中人体皮肤成纤维细胞存活率对比图。
具体实施方式
下面将详细描述本申请的各个方面的特征和示例性实施例，为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及具体实施例，对本申请进行进一步详细描述。应理解，此处所描述的具体实施例仅意在解释本申请，而不是限定本申请。对于本领域技术人员来说，本申请可以在不需要这些具体细节中的一些细节的情况下实施。下面对实施例的描述仅仅是为了通过示出本申请的示例来提供对本申请更好的理解。
玉竹，百合科(Liliaceae)植物，玉竹(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce)的干燥根茎，性平，味甘。玉竹普遍为民间药食两用，通过现代分析技术发现，玉竹中含有皂苷类、黄酮类、多糖类，以及挥发油类、氨基酸、微量元素等多种活性物质。其中，多种活性提取物是绿色、无毒、纯天然的药物及保健品的制剂成分，具有较大的发展前景，具有抗氧化、抗炎抗菌、抗肿瘤、降血糖、调节免疫等作用，因此常用于化妆品中。
但是现有的以水提为主的初级加工方式，存在玉竹的活性物质提取率低，会造成一定的活性物质浪费。因此需要对此进行改进。
为了解决现有技术问题，本申请实施例提供了一种玉竹发酵液提取物的制备方法。下面首先对本申请实施例所提供的玉竹发酵液提取物的制备方法进行介绍。
一种玉竹发酵液提取物的制备方法，包括：
S1、将玉竹原料进行匀浆并灭菌，以提供初始发酵体系；其中，玉竹原料为玉竹植株的根茎；
S2、向初始发酵体系中加入发酵菌进行培养发酵以得到玉竹发酵液，其中，发酵菌在初始发酵体系中的活菌数为104～108CFU/mL；
S3、从玉竹发酵液分离得到玉竹发酵液提取物。
本发明通过发酵菌对玉竹匀浆进行培养发酵，使得玉竹中所包含的活性物质能够完全被发酵菌开发出来，灭菌后通过分离技术将各种活性物质进行充分的分离和提取，得到玉竹发酵液提取物，避免玉竹中的活性物质的流失和浪费。相较于使用水提的方式提取活性物质的效率低，采用微生物培养发酵提取的活性物质提取率更高。
在本申请的一个实施例中，在步骤S1中，玉竹采用去离子水进行匀浆，去离子水和玉竹的质量比优选为10～200:1，进一步优选为20～150：1，更进一步优选为100:1，以便去离子水对玉竹进行分散，进而便于酿酒酵母菌在加入匀浆后对玉竹发酵。
在本申请的一个实施例中，步骤S1得到初始发酵体系的灭菌条件为：采用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌温度110～125℃，灭菌压强0.1～0.14MPa，灭菌时间15～35分钟，对初始发酵体系进行灭菌以避免匀浆在后续的发酵过程中受其他杂菌的影响，本申请的初始发酵体系灭菌完成后需将初始发酵体系冷却至室温，然后再进行发酵菌接种培养发酵。
在本申请的一个实施例中，步骤S1得到初始发酵体系的优选灭菌条件为：灭菌温度115～121℃，灭菌压强0.1～0.13MPa，灭菌时间15～25分钟。
在本申请的一个实施例中，步骤S1得到初始发酵体系的最佳选灭菌条件为：灭菌温度121℃，灭菌压强0.12MPa，灭菌时间20分钟。
在本申请的一个实施例中，步骤S2将发酵菌以菌液的形式向初始发酵体系中进行接种。
在本申请的一个实施例中，步骤S2中使用的发酵菌菌液是通过以下方法制备的：将酿酒酵母菌接种到YPD固体培养基中进行划线活化，于28℃培养箱中培养48h，获得单菌落；采用接种环挑取获得的单菌落于YPD液体培养基中，在温度为28℃，转速为180r/min的震荡培养箱中培养，得到酿酒酵母菌菌液，即发酵菌菌菌液。酵母菌培养时间为36～72h，进一步优选为48h，所述酿酒酵母菌菌液的活菌数为105～109CFU/mL，进一步优选为106～108CFU/mL。
在本申请的一个实施例中，步骤S2所述发酵菌为酿酒酵母菌(SaCCharomyCesCerevisiae)、黄酒酵母、植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarumsubsp.plantarum)中的一种或其组合；其中，酿酒酵母菌(SaCCharomyCes Cerevisiae)的保藏编号为CGMCC No.17452,购自中国普通微生物菌种保藏管理中心；植物乳杆菌植物亚种的保藏编号为CICC No.20261，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；黄酒酵母菌的菌种编号为AS2.1392，购自北京市食品酿造研究所菌种保藏中心，植物乳杆菌植物亚种CICCNo.20261和黄酒酵母菌AS2.1392为市场上能够购得的菌种。
在本申请的一个实施例中，步骤S2所述发酵菌在所述初始发酵体系中的活菌数为105～107CFU/mL。
在本申请的一个实施例中，步骤S2所述初始发酵体系加入发酵菌菌液摇匀后的培养条件为：在30℃恒温环境中旋转培养96小时，摇床转速为200rpm/分钟，以使发酵菌对初始发酵体系进行完全、充分的发酵。
在本申请的一个实施例中，步骤S3包括：将所述玉竹发酵液进行高温灭菌，灭菌温度为110℃～125℃，灭菌压强为0.1MPa～0.14MPa，灭菌时间为15分钟～35分钟；灭菌完成后，将所述玉竹发酵液冷却至室温进行离心，取上清液得玉竹发酵液提取物，离心转速为3000rpm～9000rpm/分钟，离心时间为10分钟～40分钟；离心结束后，对玉竹发酵液提取物进行二次灭菌，二次灭菌的温度和压强参数与高温灭菌参数相同，二次灭菌时间为20分钟～40分钟。
在本申请的一个实施例中，步骤S3玉竹发酵液的离心转速为4000rpm～6000rpm/分钟。
在本申请的一个实施例中，步骤S3包括：将所述玉竹发酵液进行高温灭菌，灭菌温度为115℃～121℃，灭菌压强为0.1MPa～0.13MPa，灭菌时间为15分钟～25分钟；灭菌完成后，将所述玉竹发酵液冷却至室温进行离心，取上清液得玉竹发酵液提取物，离心转速为4000rpm～6000rpm/分钟，离心时间为20分钟～40分钟；离心结束后，对玉竹发酵液提取物进行二次灭菌，二次灭菌的温度和压强参数与高温灭菌参数相同，二次灭菌的时间为25分钟～40分钟。
在本申请的一个实施例中，步骤S3还包括：向所述玉竹发酵液中添加防腐剂并搅拌混合，玉竹发酵液和防腐剂混合时的温度为50℃～80℃，所述防腐剂包括对羟基苯乙酮和/或1,2-己二醇。
在本申请的一个实施例中，所述玉竹发酵液和防腐剂混合时的温度为70℃～80℃。
在本申请的一个实施例中，所述步骤S3包括：向所述玉竹发酵液中添加防腐剂对羟基苯乙酮和1,2-己二醇，所述对羟基苯乙酮占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％～2％，所述1,2-己二醇占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％～2％。
第二方面，本申请实施例提供了一种玉竹发酵液提取物，是用酿酒酵母菌对玉竹匀浆进行发酵、灭菌、分离后得到的玉竹发酵液提取物。
第三方面，本申请实施例提供了一种玉竹发酵液提取物用于制备化妆品的用途，即作为添加剂添加到化妆品基础配方中使用，或者作为基底物在皮肤外用剂中使用，玉竹发酵液提取物在皮肤外用剂中作为抗氧化活性成分。
皮肤外用剂包括面膜、精华或者爽肤水。
皮肤外用剂还进一步包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分和抗氧化活性成分中的至少一种，保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分均为现有的可采购获得的原料。
第四方面，本申请实施例提供了一种化妆品，包括上述的玉竹发酵液提取物，玉竹发酵液提取物是利用本申请的玉竹发酵液制备方法制备得到。
在本申请的一个实施例中，玉竹发酵液提取物可以作为化妆品直接使用。即玉竹发酵液提取物的含量为100％wt。
在本申请的一个实施例中，玉竹发酵液提取物占皮肤外用剂类化妆品的质量百分比为1％～100％wt，优选质量百分比为60％～99％wt。
本申请实施例的玉竹发酵液提取物的制备方法，通过微生物发酵菌即酿酒酵母菌进行发酵的方式，对玉竹中的活性成分进行完全提取，将玉竹充分利用，减少活性成分的流失和资源浪费，并通过后续的灭菌步骤除去其中的微生物，然后通过分离技术得到玉竹发酵液提取物，解决现有技术中只对玉竹进行初级加工导致的活性成分浪费的技术问题，还可以更好的发挥其护肤效果。
本申请利用玉竹制备得到的玉竹发酵液提取物，既可以作化妆品直接使用，也可以添加到化妆品基础配方中使用，具有较好的抗氧化、抗衰老、滋养肌肤的效果。制备玉竹发酵提取物的过程中不添加任何化学成分，属于纯天然植物原料，对肌肤零负担，具有较好的安全性，在化妆品领域具有很好的应用前景。
以下是实施例中使用的发酵菌及其来源：
酿酒酵母菌CGMCC No.17452，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心；
植物乳杆菌植物亚种CICC No.20261，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；黄酒酵母菌AS2.1392，购自北京市食品酿造研究所菌种保藏中心。
下面通过具体的实施例来验证本申请技术方案的优点。
实施例1：取300mL去离子水和9g新鲜玉竹的根茎作为原料进行匀浆，加入0.6g葡萄糖作为碳源，将匀浆液于121℃高压灭菌锅中灭菌20min，灭菌后冷却至室温，得到初始发酵体系；在初始发酵体系中接种酿酒酵母菌CGMCC No.17452菌液和黄酒酵母菌AS2.1392菌液进行混合菌种发酵，其中酿酒酵母菌菌液的活菌数为107CFU/mL，菌液的添加量为15mL，黄酒酵母菌液的活菌数为107CFU/mL，菌液的添加量为15mL，接入菌液后摇匀在30℃恒温培养箱中培养96h，摇床转速为200r/min；发酵结束后，将得到的玉竹发酵液在高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20min。灭菌完成后，将发酵液冷却至室温进行离心，离心转速5000r/min，离心时间为30min。离心结束后，进行二次灭菌，二次灭菌的条件是121℃，30min，压强为0.12Mpa,灭菌结束后需在发酵液中添加防腐剂，与所述防腐剂混合的过程中，所述混合的温度为75℃；以发酵原液的质量为基准，加入0.5％对羟基苯乙酮和0.5％的1,2-己二醇，混合均匀得到玉竹发酵液提取物。
实施例2：制备方法同实施例1，不同之处在于仅用酿酒酵母菌发酵CGMCCNo.17452，总接菌量不变，其他条件参数同实施例1。
实施例3：制备方法同实施例1，不同之处在于只接种黄酒酵母菌AS2.1392，总接菌量不变，其他条件参数同实施例1。
实施例4：制备方法同实施例1，不同之处采用12g玉竹进行匀浆，其他条件参数不变。
对比例1：制备方法同实施例1，不同之处在于不接菌。
对比例2：制备方法同实施例1，不同之处在于接种植物乳杆菌植物亚种CICCNo.20261，菌液的制备是将植物乳杆菌亚种CICC No.20261的菌粉溶解于无菌去离子水中，其他条件参数不变。
将实施例1至4和对比例1以及对比例2制得的玉竹发酵液提取物进行性能测试，测试项目包括以下内容：
1、DPPH自由基清除实验
DPPH是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在517nm处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，DPPH的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。
DPPH自由基清除实验的具体实验步骤为：
(1)取等体积(1mL)的待测液与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A1管)；
(2)取等体积(1mL)的无水乙醇(待测物溶剂)与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A2管)；
(3)取等体积(1mL)的无水乙醇与待测液混匀(A3管)；
(4)避光反应30min后，在517nm下测A1管、A2管、A3管吸光度值；清除率计算公式为：清除率＝[(A2+A3)-A1]/A2×100％。
本实验对实施例1～4和对比例1～2进行DPPH自由基清除实验的测试，实验结果记录于表1中，并将清除率结果制成数据图1来进行直观的对比。
表1：实施例1-4及对比例1和2的DPPH自由基清除率对比表
| DPPH自由基清除率(％) | |
| 实施例1 | 74.67±0.74 |
| 实施例2 | 63.01±1.35 |
| 实施例3 | 70.65±1.53 |
| 实施例4 | 82.2±1.49 |
| 对比例1 | 47.3±1.68 |
| 对比例2 | 54.35±1.59 |
通过表1和图1可以得出，对DPPH自由基的清除率，接种酿酒酵母和黄酒酵母制备的玉竹发酵液提取物依次高于单独使用黄酒酵母、酿酒酵母、植物乳酸杆菌植物亚种、不接菌发酵制备的玉竹发酵液提取物；当增加玉竹原料的含量时，接种酿酒酵母和黄酒酵母制备的玉竹发酵液提取物对DPPH自由基的清除率提高，表明随着玉竹原料的增加，抗氧化活性物质含量也增加。以上信息表明，接菌或者接种混合菌的技术方案相比不接菌的技术方案，对于抗氧化活性物质的提取率更高。
2、蛋白质含量的测定
采用北京百瑞极生物科技有限公司生产的货号为BN27109的BCA蛋白定量检测试剂盒测试实施例1～4和对比例1～2制得的产品中蛋白质含量，将测定结果记录于表2中，并将数据制成对应的蛋白质含量数据图2来进行对比。
表2：实施例1-4及对比例1和2的蛋白质含量对比表
| 蛋白质含量(mg/ml) | |
| 实施例1 | 3.64±0.13 |
| 实施例2 | 3.48±0.06 |
| 实施例3 | 3.15±0.07 |
| 实施例4 | 3.74±0.11 |
| 对比例1 | 1.32±0.06 |
| 对比例2 | 1.58±0.12 |
表2和图2的结果表明，不接菌的玉竹发酵液提取物的蛋白质含量最低，其后蛋白质含量由低到高的依次为接种了植物乳杆菌植物亚种、黄酒酵母菌、酿酒酵母、黄酒酵母和酿酒酵母的玉竹发酵液提取物，证明采用微生物发酵菌进行发酵能够提高玉竹发酵液提取物中的蛋白质类物质的提取率。
3、总糖含量测定
采用北京索莱宝科技有限公司生产的货号为BC2715的总糖含量检测试剂盒测试实施例1～4和对比例1～2制得的产品中总糖含量，将测定结果记录于表3中，并制作成数据图3进行直观的对比。
表3：实施例1-4及对比例1和2的总糖含量对比表
| 总糖含量(mg/ml) | |
| 实施例1 | 6.84±0.11 |
| 实施例2 | 4.94±0.12 |
| 实施例3 | 4.59±0.08 |
| 实施例4 | 7.53±0.1 |
| 对比例1 | 1.55±0.09 |
| 对比例2 | 2.76±0.1 |
表3和图3的数据表明，总糖含量由高到低的依次为接种黄酒酵母和酿酒酵母、酿酒酵母、黄酒酵母、植物乳杆菌植物亚种、不接种菌液的玉竹发酵液提取物，证明接种发酵菌能够提高玉竹发酵液提取物中糖类物质的提取率。
4、人体皮肤成纤维细胞毒性实验
本实验采用的人体皮肤成纤维细胞来自中国科学细胞库，以验证上述实施例和对比例制得产品的细胞毒性。
试剂：
0.25％(含EDTA)胰蛋白酶，生产厂家为美国GIBCO公司；
DMEM培养基，生产厂家为美国GIBCO公司；
双抗，生产厂家为美国Corning公司；
CCK-8，生产厂家为北京拜尔迪生物技术有限公司；
胎牛血清，生产厂家为美国GIBCO公司；
磷酸盐缓冲液，生产厂家为北京百瑞极生物科技有限公司。
设备：
WJ-80A-Ⅱ型CO2恒温培养箱，生产厂家为上海圣科仪器设备有限公司；
Sunrise酶标仪，生产厂家为帝肯贸易有限公司；
TL80-2型医用离心机，生产厂家为江苏天力医疗器械有限公司；
NUNC 96孔细胞培养板，生产厂家为赛默飞世尔科技公司。
实验步骤：
分别将上述实施例1～4和对比例1～2制得的产品用无血清的DMEM培养基配置成体积百分数为5％的实验组待测液。人体皮肤成纤维细胞养于含10％胎牛血清以及1％双抗(1×105U/L的青霉素、100mg/L的链霉素)的DMEM培养基中。细胞生长于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中，当细胞融合达到85％以上时，以0.05％胰酶消化对数生长期细胞，用含血清的DMEM终止消化反应。用细胞计数板计数，将细胞悬液浓度调整到7×104个/mL，将细胞悬液按照每孔100μL的比例接种到96孔板上，37℃、5％CO2条件下孵育12h。去除旧培养液，用磷酸盐缓冲液清洗细胞两遍。实验组中每孔加入100μL上述配置的已过滤除菌的不同浓度的实验组待测液，每个待测液做6个复孔；对照组含有细胞，加入无血清的DMEM培养基；空白对照组无细胞，加入100μL的PBS。再于37℃、5％CO2条件下孵育24h。然后每孔加入10μL的CCK-8溶液，再孵育3h，在450nm波长下测定吸光度值，计算各组细胞存活率，细胞存活率的计算公式如下：
细胞存活率(％)＝(A实验组-A空白对照组)/(A对照组-A空白对照组)×100％。
测试结果见下表4，将测试结果制成数据图4以进行对比。
表4：实施例1-4及对比例1和2的产物细胞存活率
| 细胞存活率(％) | |
| 体积分数 | 5％ |
| 实施例1 | 95.77±1.71 |
| 实施例2 | 92.28±1.38 |
| 实施例3 | 89.37±0.99 |
| 实施例4 | 96.43±2.16 |
| 对比例1 | 82.04±1.65 |
| 对比例2 | 85.52±1.03 |
从表4及图4的数据来看，细胞存活率最高的为接种黄酒酵母和酿酒酵母的玉竹发酵液提取物，其后细胞存活率由高到低依次为接种酿酒酵母、黄酒酵母、植物乳杆菌植物亚种、不接种菌液的玉竹发酵液提取物，证明接种发酵菌，特别是酿酒酵母发酵后提取的玉竹发酵液对人体皮肤成纤维细胞具有良好的安全性，人体皮肤成纤维细胞的存活率可以达到84.49-97.48％。
通过上述的DPPH自由基清除率、总糖含量、蛋白质含量以及人体皮肤成纤维细胞毒性实验证明，本申请利用接种发酵菌对玉竹进行发酵培养，能够更好的提取玉竹中的活性物质，且提取的活性物质对肌肤零负担，具有较好的抗氧化、抗衰老、滋养肌肤的效果，对人体皮肤成纤维细胞具有良好的安全性，人体皮肤成纤维细胞都可正常存活。
需要明确的是，本申请并不局限于上文所描述并在图中示出的特定配置和处理。为了简明起见，这里省略了对已知方法的详细描述。在上述实施例中，描述和示出了若干具体的步骤作为示例。但是，本申请的方法过程并不限于所描述和示出的具体步骤，本领域的技术人员可以在领会本申请的精神后，作出各种改变、修改和添加，或者改变步骤之间的顺序。
还需要说明的是，本申请中提及的示例性实施例，基于一系列的步骤或者装置描述一些方法或系统。但是，本申请不局限于上述步骤的顺序，也就是说，可以按照实施例中提及的顺序执行步骤，也可以不同于实施例中的顺序，或者若干步骤同时执行。
以上所述，仅为本申请的具体实施方式，所属领域的技术人员可以清楚地了解到，为了描述的方便和简洁，上述描述的系统、模块和单元的具体工作过程，可以参考前述方法实施例中的对应过程，在此不再赘述。应理解，本申请的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本申请揭露的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本申请的保护范围之内。
Claims (17)
1.一种玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，包括：
S1、将玉竹原料进行匀浆并灭菌、冷却，以提供初始发酵体系；所述玉竹原料为玉竹植株的根茎；
S2、向初始发酵体系中加入发酵菌进行培养发酵以得到玉竹发酵液，其中，发酵菌在初始发酵体系中的活菌数为104～108CFU/mL；
S3、将玉竹发酵液分离得到玉竹发酵液提取物。
2.根据权利要求1所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，所述发酵菌菌种为酿酒酵母菌(SaCCharomyCes Cerevisiae)、黄酒酵母菌、植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)中的一种或其组合；其中，酿酒酵母菌(SaCCharomyCes Cerevisiae)的保藏编号为CGMCC No.17452，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心；植物乳杆菌植物亚种的保藏编号为CICC No.20261，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；黄酒酵母菌的菌种编号为AS2.1392，购自北京市食品酿造研究所菌种保藏中心。
3.根据权利要求1或2所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，所述玉竹采用去离子水进行匀浆，所述去离子水和玉竹的质量比优为10～200:1。
4.根据权利要求3所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，所述去离子水和玉竹的质量比为20～150:1。
5.根据权利要求1所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，所述发酵菌在所述初始发酵体系中的活菌数为105～107CFU/mL。
6.根据权利要求5所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，所述初始发酵体系加入发酵菌的菌液摇匀后的培养条件为：在30℃恒温环境中旋转培养96小时，摇床转速为200rpm/分钟。
7.根据权利要求1所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤S3包括：将所述玉竹发酵液进行高温灭菌，灭菌温度为110℃～125℃，灭菌压强为0.1MPa～0.14MPa，灭菌时间为15分钟～35分钟；灭菌完成后，将所述玉竹发酵液冷却至室温进行离心，取上清液得玉竹发酵液提取物，离心转速为3000rpm～9000rpm/分钟，离心时间为10分钟～40分钟；离心结束后，对玉竹发酵液提取物进行二次灭菌，二次灭菌的温度和压强参数与高温灭菌参数相同，二次灭菌时间为20分钟～40分钟。
8.根据权利要求7所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤S3包括：将所述玉竹发酵液进行高温灭菌，灭菌温度为115℃～121℃，灭菌压强为0.1MPa～0.13MPa，灭菌时间为15分钟～25分钟；灭菌完成后，将所述玉竹发酵液冷却至室温进行离心，取上清液得玉竹发酵液提取物，离心转速为3000rpm～9000rpm/分钟，离心时间为10分钟～40分钟；离心结束后，对玉竹发酵液提取物进行二次灭菌，二次灭菌的温度和压强参数与高温灭菌参数相同，二次灭菌的时间为20分钟～40分钟。
9.根据权利要求1至8任一项所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤S3还包括，向所述玉竹发酵液中添加防腐剂的步骤中，并搅拌混合，玉竹发酵液和防腐剂混合时的温度为50℃～80℃，所述防腐剂包括对羟基苯乙酮和/或1,2-己二醇。
10.根据权利要求9所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，所述玉竹发酵液和防腐剂混合时的温度为70℃～80℃。
11.根据权利要求9所述的玉竹发酵液提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤S3还包括：向所述玉竹发酵液中添加防腐剂对羟基苯乙酮和1,2-己二醇，所述对羟基苯乙酮占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％～2％，所述1,2-己二醇占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％～2％。
12.一种玉竹发酵液提取物，其特征在于，根据权利要求1-11任一项所述的玉竹发酵液提取物的制备方法制得。
13.如权利要求12所述的玉竹发酵液提取物用于制备化妆品中的用途。
14.一种化妆品，其特征在于，包括如权利要求12所述的玉竹发酵液提取物。
15.根据权利要求15所述的化妆品，其特征在于，所述玉竹发酵液提取物的含量为1％～100％wt。
16.根据权利要求15所述的化妆品，其特征在于，所述玉竹发酵液提取物的含量为60％～99％wt。
17.一种皮肤外用剂，包括如权利要求12所述的玉竹发酵液提取物，以及保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分中的至少一种。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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