CN117940442A - 苦丁皂苷a化合物的晶型、其药物组合物和用途 - Google Patents

苦丁皂苷a化合物的晶型、其药物组合物和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供苦丁皂苷A化合物的晶型、其药物组合物和用途，所述晶型包括晶型A、B、C、D、E、G、J、K和L，各晶型的X‑射线粉末衍射(XRPD)图的特征峰如文中所述。本发明的晶型在合适的条件下可稳定存在，尤其是晶型A、C和J。本发明的晶型可用于制备治疗肺部疾病的药物组合物。

Description

苦丁皂苷A化合物的晶型、其药物组合物和用途 技术领域
本发明涉及化学医药、晶体制备技术领域，具体涉及苦丁皂苷A化合物的晶型、其药物组合物和用途。
背景技术
苦丁茶冬青为冬青科冬青属植物苦丁茶冬青的嫩叶或叶，是我国南部及西南地区民间传统的药用植物，运用广泛，历史悠久，具有清热解毒、杀菌消炎、健胃消积、止咳化痰、生津止渴、提神醒脑和明目益智的功效，可用于治疗头疼、齿疼、目赤、热病烦渴和痢疾等症；也具有活血脉、调节血脂的功效，可用于高血压和高血脂等疾病的治疗；还具有扩张支气管平滑肌的功效，适用于治疗各种呼吸道肺部疾病(如COPD和哮喘)。
从苦丁茶冬青中可提取分离出多种具有上述功效的苦丁皂苷类化合物(如苦丁皂苷A)，已有大量文献对其进行报道，例如可以参考屠鹏飞等(“苦丁茶冬青的化学成分及其降血脂作用的研究”，中国化学会第二十五届学术年会，2006年)。苦丁皂苷A，即3β-12α-19α-三羟基-乌苏烷-13(18)-烯-28，20β-内酯-3-O-[β-D-葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖苷的结构如式(I)所示：
一种药用化合物的晶型不同，会导致其具有不同的物理、化学性质，并且溶解度和稳定性也会存在差异，从而影响其在体内的降解和吸收，导致其临床药效的差异。因此，在研发药用化合物时，需要全面系统地筛选不同的晶型，探究其在体内的效用，以便选择最适合开发的晶型。
发明内容
本发明通过在多种溶剂体系中运用多种结晶方式筛选得到苦丁皂苷A的11种晶型，分别记为晶型A、B、C、D、E、G、I 1、I 2、J、K和L。其中，晶型I 1和晶型I 2为弱结晶态(或称低结晶态)，不能稳定存在。
因此，本发明提供苦丁皂苷A的晶型A、B、C、D、E、G、J、K和L。本发明也包括任意两种以上的所述晶型的任意比例的混合物。本发明的晶型可在合适的条件下稳定存在，尤其是晶型A、C和J，其在常温条件下能以干燥粉末的形式稳定存在。因此，在优选的实施方案中，本发明提供苦丁皂苷A的晶型A、C和J及其任意混合物。
具体而言，本发明提供苦丁皂苷A化合物的晶型A，所述晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：6.7°±0.2°，7.3°±0.2°，7.9°±0.2°，10.5°±0.2°，10.9°±0.2°，14.1°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.6°±0.2°，12.8°±0.2°，13.2°±0.2°，13.6°±0.2°，15.2°±0.2°，16.1°±0.2°，18.3°±0.2°，24.1°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型A具有基本上如图1a所示的X-射线粉末衍射(XRPD)图。
在优选的实施例中，所述晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表1所示的2θ角有特征峰：
表1：晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)峰列表
2θ° d间隔 相对强度(％)
3.617 24.4057 100
4.396 20.0831 8.8
5.417 16.302 4.3
6.309 13.998 2.2
6.702 13.1788 15.2
7.28 12.1329 22.2
7.919 11.1546 19.8
8.843 9.9916 3.3
10.639 8.3085 24.8
10.899 8.1112 19.8
11.298 7.8252 5.5
12.523 7.0627 2.7
12.765 6.929 11.2
13.322 6.6405 9.6
13.642 6.4858 11.8
14.105 6.2737 20.9
14.708 6.0177 3.1
15.045 5.884 9.3
15.383 5.7553 13.7
16.105 5.4988 10.4
16.589 5.3394 6.2
17.168 5.1608 3.3
17.662 5.0175 4.3
18.349 4.831 12.1
18.689 4.7441 7.8
19.005 4.6657 7.2
19.285 4.5987 4.4
19.664 4.5109 7.4
20.548 4.3188 3.6
20.814 4.2642 3.5
21.408 4.1472 3.4
22.387 3.968 5.3
23.025 3.8594 1.9
23.366 3.8039 1.4
23.559 3.7732 2.3
24.067 3.6946 7.9
24.625 3.6122 5.7
25.148 3.5382 3.3
25.351 3.5104 4.1
26.065 3.4158 5.4
27.57 3.2327 3.4
28.573 3.1214 3.1
28.994 3.0771 2
30.269 2.9503 3.1
31.535 2.8347 1.1
32.408 2.7603 1.3
33.276 2.6903 2.3
33.618 2.6637 2.6
34.875 2.5704 2
37.24 2.4125 1.2
37.677 2.3855 1.4
38.671 2.3264 1.1
39.072 2.3035 1.2
在优选的实施例中，所述晶型A具有基本上如图1b所示的差示扫描量热(DSC)分析图。
在优选的实施例中，所述晶型A具有基本上如图1c所示的热重分析(TGA)图。
在优选的实施例中，所述晶型A具有基本上如图1d所示的动态水分吸附(DVS)图。
本发明提供的苦丁皂苷A化合物的晶型C的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：7.8°±0.2°，12.7°±0.2°，14.4°±0.2°，14.9°±0.2°，16.3°±0.2°，18.6°±0.2°，25.1°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型C的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.9°±0.2°，8.3°±0.2°，13.2°±0.2°，19.5°±0.2°，20.3°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型C具有基本上如图2a所示的X-射线粉末衍射(XRPD)图。
在优选的实施例中，所述晶型C的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表2所示的2θ角有特征峰：
表2：晶型C的X-射线粉末衍射(XRPD)峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
3.921 22.5186 28.5
6.329 13.9538 2.1
7.802 11.3216 16.4
8.343 10.5886 8.1
12.042 7.3433 1.5
12.664 6.9841 43.1
13.203 6.7 7.9
14.364 6.1611 28.8
14.886 5.9461 100
15.548 5.6944 3.4
16.346 5.4184 34.8
16.647 5.3209 6.6
18.109 4.8946 7.4
18.587 4.7698 24.2
19.466 4.5564 12.4
20.266 4.3782 13.6
20.587 4.3107 3.3
21.185 4.1903 2.8
21.981 4.0404 1.1
22.449 3.9572 7.1
23.725 3.7471 3.6
24.285 3.662 4.3
25.09 3.5463 13.9
26.171 3.4023 2.1
26.456 3.3662 0.9
26.949 3.3057 2.6
27.509 3.2397 4.7
28.01 3.1829 1.2
28.651 3.1131 2.5
29.593 3.0161 2.4
29.909 2.985 1.6
30.247 2.9524 0.9
30.668 2.9128 1.9
30.91 2.8905 1.6
31.433 2.8437 1.4
32.366 2.7638 1
32.869 2.7226 1.5
33.933 2.6396 1.6
34.595 2.5907 3.2
34.957 2.5646 1.2
35.325 2.5388 0.8
35.874 2.5011 1
39.254 2.2932 2
在优选的实施例中，所述晶型C具有基本上如图2b所示的差示扫描量热(DSC)分析图。
在优选的实施例中，所述晶型C具有基本上如图2c所示的热重分析(TGA)图。
在优选的实施例中，所述晶型C具有基本上如图2d所示的动态水分吸附(DVS)图。
本发明提供的苦丁皂苷A化合物的晶型J的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：7.7°±0.2°，9.3°±0.2°，12.1°±0.2°，14.1°±0.2°，15.1°±0.2°，16.6°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型J的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.5°±0.2°，4.7°±0.2°，12.7°±0.2°，13.7°±0.2°，15.5°±0.2°，16.2°±0.2°，18.1°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型J具有基本上如图3a所示的X-射线粉末衍射(XRPD)图。
在优选的实施例中，所述晶型J的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表3所示的2θ角有特征峰：
表3：晶型J的X-射线粉末衍射(XRPD)峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
3.542 24.9274 100
4.663 18.9364 19.7
5.859 15.0718 3.6
6.461 13.668 3.3
7.001 12.6151 3.6
7.721 11.4402 19.9
9.323 9.4783 19.5
11.049 8.0008 2.8
12.143 7.2825 85.5
12.662 6.9853 12.2
13.703 6.4568 16.8
14.143 6.2571 59.1
14.663 6.0362 7.4
15.103 5.8614 25.3
15.46 5.7266 9.5
16.186 5.4716 13
16.565 5.3471 30.7
17.666 5.0164 7.9
18.106 4.8955 12.7
18.567 4.7748 5
18.767 4.7244 4.2
19.507 4.5469 7.6
19.782 4.4842 6.5
20.006 4.4346 7
20.526 4.3234 8.8
21.009 4.225 4.3
21.53 4.1239 9.8
22.264 3.9896 3.3
22.988 3.8656 3.7
23.734 3.7458 7.3
24.412 3.6433 3.4
25.116 3.5427 2.3
25.451 3.4968 4
26.292 3.3869 3.5
26.611 3.347 2.3
27.892 3.1961 4.7
29.254 3.0503 2
31.571 2.8315 1.8
31.876 2.8052 1.6
33.033 2.7095 1.8
33.876 2.6439 1.7
34.634 2.5878 2
35.966 2.4949 1.5
36.576 2.4548 1.7
38.087 2.3607 1.5
在优选的实施例中，所述晶型J具有基本上如图3b所示的差示扫描量热(DSC)分析图。
在优选的实施例中，所述晶型J具有基本上如图3c所示的热重分析(TGA)图。
在优选的实施例中，所述晶型J具有基本上如图3d所示的动态水分吸附(DVS)图。
本发明提供的苦丁皂苷A的晶型B的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：7.4°±0.2°，7.9°±0.2°，11.8°±0.2°，12.5°±0.2°，14.3°±0.2°，15.4°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型B的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：4.8°±0.2°，8.1°±0.2°，14.6°±0.2°。
在优选的实施方案中，所述晶型B的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表14所示的2θ角有特征峰。
本发明提供的苦丁皂苷A的晶型D的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：6.2°±0.2°，9.9°±0.2°，12.4°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型D的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：4.5°±0.2°，7.2°±0.2°，12.9°±0.2°，19.0°±0.2°。
在优选的实施方案中，所述晶型D的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表15所示的2θ角有特征峰。
本发明提供的苦丁皂苷A的晶型E的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：5.6°±0.2°，11.1°±0.2°，14.4°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型E的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：4.5°±0.2°，7.7°±0.2°，13.6°±0.2°，18.1°±0.2°，19.8°±0.2°，20.8°±0.2°，28.0°±0.2°。
在优选的实施方案中，所述晶型E的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表16所示的2θ角有特征峰。
本发明提供的苦丁皂苷A的晶型G的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：5.7°±0.2°，7.8°±0.2°，9.2°±0.2°，9.9°±0.2°，17.5°±0.2°，19.8°±0.2°，20.0°±0.2°，28.5°±0.2°，37.8°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型G的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.4°±0.2°，7.3°±0.2°，12.0°±0.2°，14.4°±0.2°，17.0°±0.2°，18.8°±0.2°，22.5°±0.2°，25.5°±0.2°，25.7°±0.2°，26.1°±0.2°。
在优选的实施方案中，所述晶型G的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表17所示的2θ角有特征峰。
本发明提供的苦丁皂苷A的晶型K的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：7.6°±0.2°，11.1°±0.2°，12.1°±0.2°，14.3°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型K的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：4.5°±0.2°，4.9°±0.2°，5.5°±0.2°，8.2°±0.2°，13.5°±0.2°，18.7°±0.2°。
在优选的实施方案中，所述晶型K的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表20所示的2θ角有特征峰。
本发明提供的苦丁皂苷A的晶型L的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：9.5°±0.2°，12.3°±0.2°，13.6°±0.2°，14.5°±0.2°，15.4°±0.2°，16.2°±0.2°。
在优选的实施例中，所述晶型L的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.7°±0.2°，7.9°±0.2°，16.9°±0.2°，17.3°±0.2°，18.8°±0.2°，20.4°±0.2°。
在优选的实施方案中，所述晶型L的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表21所示的2θ角有特征峰。
本发明也提供了苦丁皂苷A化合物的晶型A、C、J的制备方法。
在一个较佳的实施例中，苦丁皂苷A的晶型A可由苦丁茶粉浸提纯化后在特定溶剂中 以结晶方式获得。
优选地，所述晶型A的制备方法为：取苦丁茶粉，经渗漉提取、浓缩后获得提取物浸膏；取浸膏稀释并离心，获得粗样品；将粗样品经两次高压色谱纯化后，再进行活性炭脱色、重结晶、冷冻干燥；最后粉碎得到苦丁皂苷A晶型(即晶型A)。
在优选的实施方案中，用醇类溶剂(如乙醇)进行渗漉提取。例如使用纯乙醇或50-90％(v/v)的乙醇水溶液进行渗漉提取。通常，苦丁茶粉与醇的质量比为1∶2.5-1∶1.5。提取物浸膏可先后用水和无水乙醇稀释并离心，以获得粗样品。水的用量可以是苦丁茶粉质量的0.5-1倍，无水乙醇的用量可以是苦丁茶粉质量的0.3-0.8倍。
优选地，用醇溶解该粗样品，然后将其置于10℃以下的条件下进行重结晶。醇可以是乙醇或其水溶液，如20-50％(v/v)的乙醇溶液。溶解在较高的温度如60-90℃下进行。可冷冻干燥(如在约0℃冷冻干燥)所获得的晶体，然后升高至室温(如约20-28℃)干燥，最后再在如32℃以上的温度下干燥，即可获得晶型A。通常，冷冻干燥的时间可为1-3小时，室温干燥的时间可约为3-5小时，32℃以上的干燥时间可为5-8小时。
在另一个较佳的实施例中，苦丁皂苷A的晶型A可由无定型的苦丁皂苷A在特定溶剂中以结晶方式获得。
优选地，所述晶型A的制备方法可以采用以下三种中的任意一种：
方法一：用醇类溶剂溶解无定型苦丁皂苷A，获得苦丁皂苷A的溶解液，浓缩该溶解液至白色沉淀析出且蒸出液收集容器入口处基本无液滴产生，此即为浓缩终点，获得浓缩液；冷冻干燥该浓缩液，从而获得晶型A；
方法二：用醇类溶剂溶解无定型苦丁皂苷A，获得苦丁皂苷A的溶解液，超声处理该溶解液，然后过滤，取滤液减压浓缩后得到干燥固体，即为晶型A；
方法三：用醇类溶剂溶解无定型苦丁皂苷A，获得苦丁皂苷A的溶解液，室温下使该溶解液自然挥发得到干燥固体，即为晶型A。
优选地，所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。优选地，方法一和二使用乙醇，如乙醇水溶液(如70％的乙醇溶液)溶解无定型苦丁皂苷A。优选地，方法三中，使用甲醇溶解无定型苦丁皂苷A。对醇类溶剂的用量无特殊限制，其用量应足以充分溶解该无定型苦丁皂苷A。
优选地，方法一中，获得苦丁皂苷A的溶解液后，先过滤获得澄清溶液，再浓缩该澄清溶液。可采用滤孔＜5微米的滤膜进行过滤。可使用旋转蒸发仪浓缩该溶解液或其澄清溶液。浓缩可在50-60℃的水浴中进行，转速可控制为30-80rpm，真空度可控制为不低于0.08MPa。
在一个较佳的实施例中，苦丁皂苷A的晶型C可由晶型A在特定溶剂中重结晶获得。
优选地，所述晶型C的制备方法可以采用以下三种中的任意一种：
方法四：用溶剂(如乙腈和异丙醚)溶解晶型A，得到混悬液；室温下搅拌3-5天，离心；取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型C；
方法五：用乙酸乙酯溶解晶型A，得到混悬液；室温下搅拌2-4天，离心；取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型C；
方法六：于150-200℃之间加热晶型A3-10分钟，得到晶型C。
优选地，所述方法四中，乙腈与异丙醚的体积比为1∶1到1∶5。优选地，晶型A与溶剂的质量体积比(克∶毫升)为1∶20到1∶50。
优选地，所述方法五中，晶型A与乙酸乙酯的质量体积比(克∶毫升)为1∶10到1∶30。
优选地，所述方法六中，在170±5℃的温度下加热晶型A并保温3-7分钟。
在一个较佳的实施例中，苦丁皂苷A的晶型J可由晶型A在特定溶剂中重结晶获得。
优选地，所述晶型J的制备方法可以采用以下两种中的任意一种：
方法七：用乙酸乙酯饱和水溶液溶解晶型A，得到混悬液；室温下搅拌3-5天，离心；取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型J；
方法八：用水溶解晶型A，得到混悬液；室温下搅拌2-4天，离心；取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型J。
优选地，所述方法七中，晶型A与乙酸乙酯饱和水溶液的质量体积比(克∶毫升)为1∶20到1∶50。
优选地，所述方法八中，晶型A与水的质量体积比(克∶毫升)为1∶10到1∶30。
在另一个较佳的实施例中，苦丁皂苷A的晶型J可由无定型的苦丁皂苷A在特定溶剂中以结晶方式获得。
优选地，所述晶型J的制备方法可以采用以下两种中的任意一种：
方法九：用醇类溶剂溶解无定型苦丁皂苷A；加入水，室温下搅拌过夜后，离心，然后将取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型J；
方法十：用醇类溶剂和水溶解无定型苦丁皂苷A后，0-10℃搅拌过夜，离心，将所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型J。
优选地，所述方法九中，醇类溶剂为无水醇类溶剂，如无水乙醇。苦丁皂苷A与醇类溶剂的质量体积比(克∶毫升)为1∶30到1∶100。加入的水的量可以是醇类溶剂体积的1-10倍。通常，加入水后会析出白色固体，此时室温下搅拌过夜。
优选地，所述方法十中，所述醇类溶剂优选为无水醇类溶剂，如无水乙醇。醇类溶剂与水的体积比可为1∶1到1∶5。苦丁皂苷A与醇类溶剂的质量体积比(克∶毫升)为1∶10到1∶50。混合醇类溶剂、水和苦丁皂苷A后，可在例如60-80℃的水浴中加热至苦丁皂苷A完全溶解。通常在约4℃搅拌过夜。
在一些实施方案中，晶型B由晶型A制备得到。具体而言，可将晶型A升温至110-130℃并保温3-10分钟，从而可获得晶型B。
在一些实施方案中，混合醇类溶剂(如异丙醇)和苦丁皂苷A，使其在例如55℃以上的水浴中完全溶解后慢慢析出固体，并缓慢降至室温，搅拌3-6天，离心，可得到晶型D。醇类溶剂与苦丁皂苷A的质量体积比(mg∶mL)可以在4-8∶1的范围内。
在一些实施方案中，混合苦丁皂苷A、醇类溶剂和水，在60℃以上的温度下溶解后，缓慢冷却至室温，静置，使其析出固体，从而得到晶型E。醇类溶剂可以是例如无水乙醇。对醇类溶剂和水的用量无特殊限制，只要其足以溶解苦丁皂苷A即可。
在一些实施方案中，混合苦丁皂苷A和有机溶剂(如四氢呋喃)以及水，使其完全溶解后室温下使溶剂挥发，从而可获得晶型G。对有机溶剂和水的用量并无特殊限制，只要其足以溶解苦丁皂苷A即可。当然，若溶剂用量过多，会影响到挥发时间，导致制备时间过长。具体用量可由本领域技术人员根据实际生产情况确定。
在一些实施方案中，用无水乙醇溶解苦丁皂苷A后，在25-30℃下减压浓缩干燥，可获得晶型K。
在一些实施方案中，将晶型J升温至110℃以上，保温3-10分钟，可获得晶型L。
本发明提供了苦丁皂苷A化合物各晶型在制备治疗肺部疾病药物中的应用。
在一个优选的实施例中，所述肺部疾病为慢性阻塞性肺疾病或哮喘。
在一个实施方案中，所述苦丁皂苷A化合物各晶型是通过扩张(支)气管来实现治疗目的；在另一个实施方案中，所述苦丁皂苷A化合物各晶型是通过抗炎来实现治疗目的。
本发明也提供了一种治疗肺部疾病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括苦丁皂苷A化合物的晶型A、B、C、D、E、G、J、K和L中的一种或多种的混合物，以及药学上可接受的载体。优选地，所述药物组合物含有苦丁皂苷A的晶型A、C和J中的任意一种或多种。优选地，在所述药物组合物中，所述苦丁皂苷A化合物能够保持晶型状态。
在一个较佳的实施例中，所述苦丁皂苷A化合物的晶型为晶型A、晶型C或晶型J。
在一个较佳的实施例中，所述药物组合物的剂型为吸入制剂。
在一个优选的实施例中，所述吸入制剂为吸入粉雾剂、吸入气雾剂、吸入喷雾剂、吸入混悬剂或吸入溶液剂。
术语“药学上可接受的载体”应当与本发明药物组合物中的苦丁皂苷A化合物(晶型)相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物组合物在肺部疾病(例如哮喘与慢性阻塞性肺疾病)治疗方面的效果。
在一个较佳的实施例中，所述药学上可接受的载体包括润滑剂、助流剂、抛射剂、助 溶剂、共溶剂、稀释剂、稳定剂和抑菌剂中的一种或多种。
在一个优选的实施例中，所述药学上的载体为乳糖。
在另一个优选的实施例中，所述药学上的载体为聚乙二醇200、乙醇和1，1，1，2-四氟乙烷(R134a)。
在一些实施方案中，本发明提供一种扩张(支)气管的方法，该方法包括给予需要扩张(支)气管的对象有效量的本文任一实施方案所述的苦丁皂苷A化合物的晶型、或采用本文任一实施方案所述的方法制备得到的产物、或含有所述晶型或产物的药物组合物。在一些实施方案中，本发明提供一种抗炎方法，该方法包括给予需要抗炎的对象(尤其是气管、支气管和/或肺部具有炎症的对象)有效量的本文任一实施方案所述的苦丁皂苷A化合物的晶型、或采用本文任一实施方案所述的方法制备得到的产物、或含有所述晶型或产物的药物组合物。在一些实施方案中，本发明提供一种治疗肺部疾病方法，该方法包括给予需要的对象有效量的本文任一实施方案所述的苦丁皂苷A化合物的晶型、或采用本文任一实施方案所述的方法制备得到的产物、或含有所述晶型或产物的药物组合物。优选地，这些方法中，所述晶型为晶型A、C或J或其任意混合物，所述产物含有晶型A、C或J或其任意混合物。优选地，这些方法中，所述对象为患有肺部疾病的对象，更优选为患有慢性阻塞性肺疾病或哮喘的患者。
附图说明
图1a：苦丁皂苷A的晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图，横坐标为2θ值(度)，纵坐标为强度(计数)。
图1b：苦丁皂苷A的晶型A的差示扫描量热(DSC)分析图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为热流(瓦/克)。
图1c：苦丁皂苷A的晶型A的热重分析(TGA)图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为重量(％)。
图1d：苦丁皂苷A的晶型A的动态水分吸附(DVS)图，横坐标为相对湿度(％)纵坐标为重量(％)。
图2a：苦丁皂苷A的晶型C的X-射线粉末衍射(XRPD)图，横坐标为2θ值(度)，纵坐标为强度(计数)。
图2b：苦丁皂苷A的晶型C的差示扫描量热(DSC)分析图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为热流(瓦/克)。
图2c：苦丁皂苷A的晶型C的热重分析(TGA)图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为重量(％)。
图2d：苦丁皂苷A的晶型C的动态水分吸附(DVS)图，横坐标为相对湿度(％)纵坐标为重量(％)。
图3a：苦丁皂苷A的晶型J的X-射线粉末衍射(XRPD)图，横坐标为2θ值(度)，纵坐标为强度(计数)。
图3b：苦丁皂苷A的晶型J的差示扫描量热(DSC)分析图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为热流(瓦/克)。
图3c：苦丁皂苷A的晶型J的热重分析(TGA)图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为重量(％)。
图3d：苦丁皂苷A的晶型J的动态水分吸附(DVS)图，横坐标为相对湿度(％)纵坐标为重量(％)。
图4a：长期试验和加速试验条件下苦丁皂苷A的晶型J的X-射线粉末衍射(XRPD)图，横坐标为2θ值(度)，纵坐标为强度(计数)。
图4b：长期试验和加速试验条件下苦丁皂苷A的晶型J的热重分析(TGA)图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为重量(％)。
图5a：晶型A和晶型J竞争起始混合样与单一晶型的X-射线粉末衍射(XRPD)图。横坐标为2θ值(度)，纵坐标为强度(计数)。
图5b：晶型A和晶型J竞争3天后的X-射线粉末衍射(XRPD)图。横坐标为2θ值(度)，纵坐标为强度(计数)。
具体实施方案
在以下描述中，阐述了某些具体细节以便提供对本发明各种实施方式的透彻理解。然而，本领域技术人员将理解，可以在没有这些细节的情况下实践本发明。以下对若干实施方式的描述是在理解本公开被视为所要求保护的主题的示例的情况下进行的，并且无意将所附权利要求限制于所示的特定实施方式。贯穿本公开使用的标题仅是为了方便而提供的，不应被解释为以任何方式限制权利要求。在任何标题下示出的实施方式可以与在任何其他标题下示出的实施方式组合。
除非上下文另有要求，否则在整个说明书和权利要求书中，词语“包括”及其变体以开放的、包含性的含义来解释，即“包括但不仅限于”；同时，“包括”及其变体如“包含”也包括“主要由......组成”以及“由......组成”。
整个本说明书中对“一个实施方式”或“一实施方式”的引用意味着结合该实施方式描述的特定特征、结构或特性包括在本发明的至少一个实施方式中。因此，贯穿本说明书在各个地方出现的短语“在一个实施方式中”或“在一实施方式中”不一定都指的是同一 实施方式。此外，特定特征、结构或特性可以在一个或多个实施方式中以任何适当的方式组合。
本文中，“药学上可接受的载体”包括但不限于任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂，其已被FDA或NMPA或其它相关机构批准为可接受用于人或家畜。
本文中，“药物组合物”是指本发明化合物以及本领域通常接受的用于递送生物活性化合物至哺乳动物(例如人类)的媒介物的制剂。此种媒介物包括为此的所有药学上可接受的赋形剂。
本文中，“有效量”或“治疗有效量”是指根据本发明的化合物的量，其当施用至有此需要的患者时，足以实现对于化合物具有效用的疾病状态、病症或障碍的治疗。这样的量将足以引起研究人员或临床医生所寻求的组织系统或患者的生物或医学反应。构成治疗有效量的根据本发明的化合物的量将根据诸如以下的因素而变化：化合物及其生物活性、用于施用的组合物、施用时间、施用途径、化合物排泄速率、治疗持续时间、所治疗的疾病状态或病症的类型及其严重程度、与本发明化合物组合或一致使用的药物、以及患者的年龄、体重、一般健康、性别和饮食。本领域普通技术人员可以根据他们自身的知识、现有技术以及本公开而常规地确定此种治疗有效量。
除非另有说明，否则如本文所用的术语“治疗”是指逆转、减轻、抑制其进展、或预防此术语所适用的障碍或病症，或此种障碍或病症的一种或多种症状。“预防”是指导致疾病或病症的临床症状不发展的疾病或病症的任何治疗。
本文中，“受试者”或“患者”是指已经为或将要为治疗、观察或实验对象的动物，例如哺乳动物(包括人)。本文描述的方法可用于人类治疗和/或兽医应用。在一些实施方式中，受试者是哺乳动物(或患者)。在一些实施方式中，受试者(或患者)是人、家畜(例如狗和猫)、农场动物(例如，牛、马、绵羊、山羊和猪)和/或实验室动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、猪、兔、狗和猴)。在一些实施方式中，受试者(或患者)是人。“有此需要的人(或患者)”是指可能患有或怀疑患有将受益于某些治疗的疾病或病症的人；例如，根据本申请用本文公开的化合物治疗。
本文对“约”值或参数的提及包括(并描述)针对该值或参数本身的实施方式。例如，提及“约X”的描述包括“X”的描述。此外，单数形式“一”和“该”包括复数指代，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“该化合物”包括多种此类化合物，并且提及“该测定”包括提及一种或多种测定以及本领域技术人员已知的其等同物。
本文中，“药学上可接受的”或“生理学上可接受的”是指可用于制备适用于兽医或人类 药物用途的药物组合物的化合物、盐、组合物、剂量形式和其他物质。
本文中，“单位剂量形式”是适合作为受试者(例如，人类受试者和其他哺乳动物)的单位剂量的物理上离散的单位，每个单位含有预定量的经计算以产生所需的治疗效果的活性物质，连同合适的药用赋形剂。
本文中，当提及例如XRPD图谱、DSC热谱图、DVS图或TGA图时，术语“基本上如......中所示”包括不一定与本文描述的那些完全相同，但当由本领域普通技术人员考虑时，落入实验误差或偏差的限度内的图谱、热谱图或图。
在一些实施方式中，就化合物的特定结晶形式而言，术语“基本上纯的”或“基本上不含”是指包含该结晶形式的组合物含有少于20％，少于15％，少于10％，少于5％，或少于1％重量的其他物质，包括其他结晶形式和/或杂质。在一些实施方式中，“基本上纯的”或“基本上不含”是指不含其他物质(包括其他结晶形式和/或杂质)的物质。例如，杂质可包括副产物或来自化学反应的剩余试剂、污染物、降解产物、其他结晶形式、水和溶剂。
本文中，对于晶型的特征粉末X射线衍射峰位置，角度位置(2θ)的容许误差为±0.2°。该误差在比较两个粉末X射线衍射图时使用。如果一张图的某个衍射峰被指定作为测定的峰位置±0.2°的一定的角度位置范围(2θ)，而另一张图的一个衍射峰被指定作为测定的峰值位置±0.2°的另一角度位置范围(2θ)，而且如果这些峰值范围重叠，则这两个峰被认为有相同的角度位置(2θ)。例如，如果一张图的衍射峰经测定位于5.20°，对比较来说，容许误差使该峰值可被指定在5.00°-5.40°的范围。若另一衍射图的对照峰经测定位于5.35°，对比较来说，容许误差使该峰被指定在5.15°-5.55°的范围。因为两个峰位范围之间存在重叠，故比较的两个峰被认为有相同的角度位置(2θ)。在一些实施方案中，角度位置(2θ)的容许误差为±0.1°。
本文中，“超声”或“超声处理”用于使溶液内的物质充分混匀或完全溶解。超声处理的工艺参数根据不同处理对象而不同，可由本领域技术人员根据实际使用情况设置。例如，可设置超声处理的功率为60瓦-2000瓦，频率为20千赫兹到80千赫兹，时间为5分钟-150分钟。
本发明采用多种仪器分析方法，一方面鉴定了制备所得的苦丁皂苷A的晶型A、C、J(例如X-射线粉末衍射分析)；另一方面探究了它们的性质(如差示扫描量热分析、热重分析和动态水分吸附分析)。
X-射线粉末衍射(XRPD)常用于晶体结构分析，其衍射强度由晶体晶胞中原子的元素种类、数目及其排列方式决定。测定晶体的X-射线粉末衍射方法是本领域技术人员所熟知的，本发明运用X-射线粉末衍射仪对苦丁皂苷A的晶型A、C、J进行测定，具体测量条件如表4所示(除非特别说明，样品在检测前未经研磨)：
表4：X-射线粉末衍射仪及其测量参数
经测定，可知晶型A、C、J在X-射线粉末衍射图上有特定的特征峰；具体地，晶型A、C、J分别在如表1、2、3所示的2θ角有特征峰。
差示扫描量热分析(DSC)是一种重要的热分析方法，它以样品吸热或放热的速率(单位：毫焦/秒)为纵坐标，以温度或时间为横坐标，用以测定多种热力学和动力学参数，例如结晶速率、熔融温度、物质相变温度等。对晶体进行差示扫描量热分析的方法是本领域技术人员所熟知的，本发明中运用差示扫描量热分析仪对苦丁皂苷A的晶型A、C、J进行测定，具体测量条件如表5所示。
表5：差示扫描量热分析扫描仪及其测量参数
发明人运用上述方法主要对苦丁皂苷A的晶型A、C、J的脱溶剂峰和熔点等参数进行测定。
晶型A的差示扫描量热分析结果如图1b所示：其脱溶剂峰的温度范围约为30℃～120℃；其熔点约为205℃。
晶型C的差示扫描量热分析结果如图2b所示：其脱溶剂峰的温度范围约为20℃～60℃；其熔点约为310℃。
晶型J的差示扫描量热分析结果如图3b所示：其脱溶剂峰的温度范围约为20℃～120℃；其熔点约为309℃。
热重量分析(TGA)简称热重分析，指在程序控制温度下，测量待测样品的质量与温度或时间变化关系的一种热分析方法，用来研究样品的热稳定性和可能产生的中间产物组分等与质量相联系的信息。其常与其他热分析方法共用，进行综合热分析。对晶体进行热重分析的方法是本领域技术人员所熟知的，本发明运用热重分析仪对苦丁皂苷A的晶型A、C、J进行测定，具体测量条件如表6所示。
表6：热重分析仪及其测量参数
晶型A的热重分析结果如图1c所示：其在80℃前失重约6.8％，且其分解温度约为318℃。
晶型C的热重分析结果如图2c所示：其在70℃前失重约1.2％，且其分解温度约为315℃。
晶型J的热重分析结果如图3c所示：其在120℃前失重约5.8％，且其分解温度约为324℃。
动态水分吸附(DVS)法是一种用以分析样品水分吸附性能和记录水分吸附等温线的检测方法，通过鉴定化合物对水分的吸附能力来判断其稳定性。对晶体进行动态水分吸附分析的方法是本领域技术人员所熟知的，本发明运用动态水分吸附仪对苦丁皂苷A的晶型A、C、J进行吸湿性分析，具体测量条件如表7所示。
表7：动态水分吸附仪及其测量参数
晶型A的热重分析结果如图1d所示：在相对湿度为0％～80％范围内，其重量变化约为12％，故晶型A为有引湿性。
晶型C的热重分析结果如图2d所示：在相对湿度为0％～80％范围内，其重量变化约为1.8％，故晶型C为略有引湿性。
晶型J的热重分析结果如图3d所示：相对湿度为0％～80％范围内，其重量变化约为4.7％，故晶型J为有引湿性。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此，除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般例子。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料均可应用于本发明方法中。本文中所述的较佳和优选实施例与材料仅作示范之用。
在本说明书中，如果没有特别的说明，所述数值或数值范围不论是否带有前行词“约” 均涵盖相关领域技术人员能够理解的与该数值或数值范围等同的约略范围，例如该数值或端值±10％的范围，亦可是±5％、±3％、±2％、±1％或±0.5％的范围。
下面将结合实施例进一步详细地描述本发明。然而应当理解，列举这些实施例只是为了起说明作用，而并不是用来限制本发明的范围。
实施例1：苦丁皂苷A晶型A的制备及其X-射线粉末衍射测定
制备苦丁皂苷A晶型A的具体步骤如下：
取20kg苦丁茶粉，经34.4kg的80％乙醇溶液渗漉提取、浓缩后获得提取物浸膏，加入水得到最终浸膏17kg；用10.2kg无水乙醇稀释并离心，获得粗样品。
将粗样品逐次经30μm填料色谱柱和10μm填料色谱柱，共两次高压色谱纯化后，再进行活性炭脱色，得到苦丁皂苷A粗粉末；后用35％乙醇在80℃水浴条件下溶解苦丁皂苷A粗粉末，将其置于6℃水浴条件下析出结晶；将结晶在0℃冷冻干燥两个小时，然后升高到25℃干燥4小时，最后在35℃干燥6小时；最后粉碎得到苦丁皂苷A晶型(即晶型A)170g左右。
取上述制得的晶型A进行X-射线衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示。得到的数据如表1所示，即在如表1所示的2θ角上有特征峰。
实施例2：苦丁皂苷A晶型C的制备及其X-射线粉末衍射测定
制备苦丁皂苷A晶型C的具体步骤如下：
a.如实施例1所示制备方法，首先制得晶型A；
b.取晶型A 100mg，加入1mL乙腈和2mL异丙醚，得到混悬液，在室温条件下，搅拌4天，然后离心。取沉淀物，30℃真空干燥过夜，得到晶型C。
取苦丁皂苷A晶型C进行X-射线粉末衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到的数据如表2所示，即在如表2所示的2θ角上有特征峰。
实施例3：苦丁皂苷A晶型J的制备及其X-射线粉末衍射测定
制备苦丁皂苷A晶型J的具体步骤如下：
a.如实施例1所示制备方法，首先制得晶型A；
b.取晶型A 100mg，加入3mL乙酸乙酯饱和水溶液，得到混悬液，在室温条件下，搅拌4天，离心，30℃真空干燥过夜，得到晶型J。
取苦丁皂苷A晶型J进行X-射线粉末衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到 的数据如表3所示，即在如表3所示的2θ角上有特征峰。
实施例4：苦丁皂苷A晶型A的稳定性试验
取实施例1制得的晶型A，按表8所示条件进行稳定性试验。其中，晶型A放置于低硼硅玻璃管制药瓶中，且在外套了一个药用复合袋(即铝箔袋加一小包硅胶干燥剂)，抽真空后密封保存。
表8：稳定性试验条件
项目 试验条件
加速试验 温度：40℃±2℃；湿度：75％±5％
长期试验一 温度：25℃±2℃；湿度：60％±5％
长期试验二 温度：5℃±3℃；
采用高效液相色谱法对晶型A中性状、水分、苦丁皂苷A含量及有关物质进行测定，所用仪器为超高效液相色谱仪配备DAD(或PDA)检测器，相关参数如下：
色谱柱：安捷伦C18(2.1*100mm，1.8-Micron)；
流动相A：乙腈；
流动相B：超纯水；
检测波长：225nm；
流速：0.6mL/min；
进样量：5μl；
柱温：38℃；
运行时间：28min；
等度洗脱：流动相A∶流动相B＝26∶74(V/V)；
稀释液：乙腈∶水＝30∶70(V/V)；
空白溶液：稀释液。
一、测定苦丁皂苷A含量的具体步骤如下：
配制杂质A储备溶液：取杂质A(即苦丁皂苷B)约10mg，精密称定，置于100mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，制成每1mL约含100μg杂质A溶液，为杂质A储备溶液。
配制杂质D储备溶液：同上述配制杂质A储备溶液步骤，将杂质A替换成杂质D(即苦丁皂苷C)，制成每1mL约含100μg杂质D溶液。
配制杂质F储备溶液：同上述配制杂质A储备溶液步骤，将杂质A替换成杂质F(即 苦丁皂苷D)，制成每1mL约含100μg杂质F溶液。
配制分离度溶液：称取苦丁皂苷A约50mg，精密称定，置于100mL容量瓶中，用稀释液溶解稀释至刻度，混匀；然后精密量取该溶液1mL及杂质A、D、F储备溶液各0.6mL至10mL容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，制成每1mL约含苦丁皂苷A 50μg、杂质A 6μg、杂质D 6μg、杂质F 6μg的溶液，作为分离度溶液。
配制标准溶液1：称取苦丁皂苷A对照品约50mg，精密称定，置于100mL容量瓶中，用稀释液溶解稀释至刻度，混匀；精密量取1mL至10mL容量瓶中，用稀液稀释至刻度，混匀，制成每1mL约含KA 50μg的溶液，作为标准溶液1。
配制标准溶液2：同上述配制标准溶液1步骤，平行配制作为标准溶液2。
配制供试品溶液：称取样品约50mg，精密称定，置于100mL量瓶中，用稀释液溶解稀释至刻度，混匀；精密量取1mL溶液至10mL量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀即得(供试品溶液浓度为50μg/mL)(平行配制两份)。
所有样品溶液需经0.22μm PTFE针式过滤器滤过后才能进行UPLC分析。
进样程序：按照色谱条件分别进样空白溶液，分离度溶液，标准溶液1，标准溶液2，供试品溶液和标准溶液1回针，记录整个色谱过程。
结果计算：用标准溶液1以外标法计算苦丁皂苷A的含量。
二、测定有关物质含量的具体步骤如下：
首先，如上述测定苦丁皂苷A含量的方法，配制杂质A、D、F储备溶液，标准溶液1、标准溶液2。其次，配置如下溶液：
分离度溶液：取苦丁皂苷A60mg，精密称定，置于100mL量瓶中，分别加入杂质A、杂质D和杂质F储备溶液各0.9mL，用稀释液稀释至刻度，混匀即得(苦丁皂苷A、杂质A、杂质D和杂质F的浓度分别为600、0.9、0.9和0.9μg/mL)。
灵敏度溶液：精密量取1mL标准溶液1储备溶液至100mL容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀；精密量取3mL溶液至100mL容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，制成每1mL约含KA0.15μg的溶液，作为灵敏度溶液(相当于0.025％杂质限度溶液)。
供试品溶液：取苦丁皂苷A 60mg，精密称定，置于100mL量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀即得。平行配制两份样品，命名为TS1和TS2。
对照溶液：精密量取供试品溶液1mL于100mL量瓶中，用稀释液稀释至刻度。精密量取1mL溶液至10mL量瓶中，用稀释液稀释至刻度。平行配制两份样品，命名为TSR1和TSR2。
所有样品溶液需过0.22μm PTFE针式过滤器后才能进行UPLC分析。
进样程序：按照色谱条件分别进样空白溶液、分离度溶液、灵敏度溶液、标准溶液1、标准溶液2、供试品溶液、对照溶液和标准溶液1回针，记录整个色谱过程。
结果计算：以加校正因子的自身对照法计算供试品溶液中各有关物质的含量。其中，杂质A(即苦丁皂苷B)、杂质D(即苦丁皂苷C)、杂质F(即苦丁皂苷D)的校正因子分别为1.13、0.80、0.82。
利用以上方法，得到晶型A的稳定性数据如表9、10和11所示。
表9：长期试验一
注：N.D.表示结果低于检测限(杂质A、杂质D、杂质F的检测限分别为0.03％，0.02％，0.05％，0.02％)；
表10：长期试验二
注：N.D.表示结果低于检测限(杂质A、杂质D、杂质F的检测限分别为0.03％，0.02％，0.05％，0.02％)；
表11：加速试验
注：N.D.表示结果低于检测限(杂质A、杂质D、杂质F的检测限分别为0.03％，0.02％，0.05％，0.02％)；
由表9-11所示的结果可知：实施例1中制得的晶型A，无论在哪种试验条件下，其都符合所规定的质量标准，说明其具有良好的稳定性。
实施例5：苦丁皂苷A的晶型A、C、J的引湿性试验
取实施例1-3所制得的晶型A、C、J各约10mg，采用动态水分吸附仪(DVS)分别测试其引湿性(试验条件：温度为25℃，相对湿度为0％～80％)，并采用如下表12所示的标准判断各晶型的引湿性特征。此引湿性试验的方法步骤及判断标准详见《中华人民共和国药典2020年版(四部)》通则9103——药物引湿性试验指导原则。
表12：引湿性判断标准
引湿特征 增重界定
潮解 吸收足量水分形成液体
极具引湿性 引湿增重不小于15％
有引湿性 引湿增重小于15％但不小于2％
略有引湿性 引湿增重小于2％但不小于0.2％
无或几乎无引湿性 引湿增重小于0.2％
本试验中，晶型A、C、J的动态水分吸附(DVS)图分别如图1d、2d、3d所示。并且，其引湿性结果详见下表13。
表13：晶型A、C、J的引湿性测试结果
晶型 增重情况(相对湿度：0％～80％) 引湿特征
A 12％ 有引湿性
C 1.8％ 略有引湿性
J 4.7％ 有引湿性
由表13可知：晶型A、C、J的引湿性由大到小为：A＞J＞C。按照2020年版引湿性标准，晶型C为略有引湿性；晶型A和J为有引湿性。晶型C在引湿性能方面具有明显优势。
实施例6：苦丁皂苷A的晶型J的稳定性实验
取25mg晶型J，将其平铺于培养皿中，在长期条件(温度：25℃±2℃；相对湿度：65％±10％)和加速条件(温度：40℃±2℃；相对湿度：75％±10％)下敞口避光放置10天，对其进行X-射线粉末衍射测定及热重分析。所用的X-射线粉末衍射仪及其参数如表4所示；所用热重分析仪及其参数如表6所示。测定结果如附图4所示。
由图4a可知：在长期试验和加速试验条件下，晶型J的X-射线粉末衍射图上的特征峰均未发生改变，证明其晶型未变；由图4b可知：在长期试验和加速试验条件下，晶型J的失重情况并未发生改变。综上，晶型J稳定性能良好。
实施例7：苦丁皂苷A的晶型A和晶型J的竞争实验
首先进行起始混合样配置：取等量苦丁皂苷A的晶型A、晶型J样品，混合均匀，取样进行XRPD检测，所用仪器与其参数如表4所示，得到如图5a所示的对比图。
在样品中加入水形成悬浊液，室温下搅拌，3天后离心，取样进行XRPD检测(湿样)；30℃真空干燥后测XRPD(干样)，所用仪器与其参数如表4所示，测定结果如图5b所示。
由附图5b可知，无论取的是干样还是湿样，经测定所得的水合物均为晶型J。故可知：在一定条件下，晶型A趋向于转换成晶型J。
实施例8：苦丁皂苷A的其它新晶型的制备及其X-射线粉末衍射测定
1.晶型B的制备及其X-射线粉末衍射测定
苦丁皂苷A晶型B的制备方法：如实施例1所示制备方法，首先制得晶型A；取适量晶型A样品，热台升温至120℃，保温5分钟，即得晶型B。
取上述制得的晶型B进行X-射线衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到的数据如表14所示：
表14：晶型B的X-射线粉末衍射峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
3.684 23.9619 5.5
4.822 18.3124 29.6
5.221 16.9132 4.1
6.043 14.613 4.1
6.765 13.0557 11.5
7.441 11.8709 100
7.878 11.2127 61.5
8.104 10.9015 17.6
8.804 10.0352 10.7
9.723 9.0891 11.7
11.842 7.4668 73.4
12.224 7.2348 15.6
12.525 7.0613 30
14.045 6.3003 16
14.305 6.1866 48.1
14.606 6.0596 17.5
15.088 5.8672 7.9
15.409 5.7458 28
15.865 5.5816 10.6
17.065 5.1915 7.2
17.825 4.972 8.8
18.185 4.8743 8.6
18.595 4.7678 6.6
19.008 4.6651 8.9
19.186 4.6222 11
20.006 4.4346 6.6
21.231 4.1813 4.3
23.892 3.7213 4.4
24.673 3.6053 4.4
24.901 3.5728 4
29.572 3.0182 4.2
晶型B在如上表14所述的2θ角上有特征峰。并且，晶型B只能在高温条件下稳定存在。
2.晶型D的制备及其X-射线粉末衍射测定
取约100mg无定型的苦丁皂苷A，加入15mL异丙醇，超声，在60℃水浴中搅拌至完全溶解，后慢慢析出固体，缓慢降至室温，搅拌4天，离心，得到晶型D。
取上述制得的晶型D进行X-射线衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到的数据如表15所示：
表15：晶型D的X-射线粉末衍射峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
4.505 19.5974 5.9
6.225 14.1873 14.5
7.184 12.2955 5.1
8.151 10.8384 1.1
9.867 8.9571 10.6
12.441 7.1088 100
12.86 6.8782 4.3
13.447 6.5792 3.3
14.012 6.3153 2.2
14.825 5.9706 0.8
15.145 5.8453 2
15.887 5.5737 1.2
16.65 5.32 2.8
16.86 5.2542 1.6
17.601 5.0346 1.1
17.93 4.943 1
18.346 4.832 2.6
18.667 4.7496 0.9
18.965 4.6755 5
19.432 4.5641 0.8
19.8 4.4802 1.2
20.782 4.2707 0.8
21.569 4.1167 1
22.049 4.0281 2.9
22.778 3.9007 0.8
23.284 3.8172 1
23.949 3.7126 2
24.472 3.6344 1.2
25.133 3.5404 4.1
26.831 3.32 1.2
27.06 3.2924 1
27.569 3.2328 0.7
28.33 3.1477 1.1
28.65 3.1133 0.9
29.866 2.9892 0.7
30.078 2.9686 1.2
32.477 2.7546 0.6
32.85 2.7241 0.6
33.938 2.6392 0.8
34.29 2.613 0.6
36.769 2.4423 0.6
39.516 2.2786 0.9
晶型D在如上表15所述的2θ角上有特征峰。并且，晶型D只能在保持湿润的湿样下稳定存在。
3.晶型E的制备及其X-射线粉末衍射测定
苦丁皂苷A晶型E的制备方法：取约30mg无定型的苦丁皂苷A，加入0.8mL乙醇和0.2mL水，在70℃水浴中加热至其完全溶解，缓慢降至室温，放置一夜后析出固体，得到晶型E。
取上述制得的晶型E进行X-射线衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到的数据如表16所示：
表16：晶型E的X-射线粉末衍射峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
3.574 24.7011 1.3
4.541 19.4413 6.9
5.577 15.832 8.6
7.667 11.5208 3
9.329 9.4725 0.6
10.82 8.1702 0.5
11.137 7.9381 100
11.699 7.5582 1
12.145 7.2813 2
13.242 6.6806 0.5
13.588 6.5114 3.9
14.022 6.3107 0.7
14.37 6.1588 17.8
14.89 5.9446 0.4
15.454 5.7289 0.6
17.594 5.0368 0.6
18.148 4.8843 2.4
18.746 4.7296 1
19.846 4.4699 2.3
20.807 4.2655 2.8
21.106 4.2059 0.7
21.671 4.0975 0.4
22.328 3.9784 1.3
23.476 3.7863 0.7
24.269 3.6644 0.7
24.798 3.5873 0.5
25.43 3.4996 2.3
25.692 3.4646 1
26.19 3.3997 1.4
26.596 3.3488 0.3
27.411 3.251 0.6
28.013 3.1826 3.8
28.251 3.1563 1.5
28.738 3.1038 1.7
28.932 3.0835 1.1
30.089 2.9675 0.3
31.093 2.8739 1.7
31.992 2.7952 0.5
33.418 2.6791 1.1
33.956 2.6379 1
34.169 2.622 0.5
34.534 2.595 0.7
38.06 2.3624 0.2
38.47 2.3381 0.4
39.604 2.2737 0.3
晶型E在如上表16所述的2θ角上有特征峰。并且，晶型E只能在保持湿润的湿样下稳定存在。
4.晶型G的制备及其X-射线粉末衍射测定
苦丁皂苷A晶型G的制备方法：取约100mg无定型的苦丁皂苷A，加入3mL四氢呋喃和1.2mL水，超声使其完全溶解，放置在室温下敞口挥发，得到晶型G。
取上述制得的晶型G进行X-射线衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到的数据如表17所示：
表17：晶型G的X-射线粉末衍射峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
3.36 26.2771 100
5.682 15.5402 27.7
7.346 12.0233 15.9
7.781 11.3533 42.3
9.187 9.6179 37.5
9.943 8.8886 46.3
10.917 8.0975 7.9
11.442 7.7271 12.8
11.967 7.3893 16.8
12.547 7.0489 4.3
13.381 6.6116 6.3
13.726 6.4461 10
14.424 6.1359 23.6
14.812 5.9756 8.5
15.181 5.8315 5.6
16.459 5.3813 6.9
17.009 5.2086 19.2
17.504 5.0623 40.1
18.447 4.8056 23.8
18.788 4.7191 15.1
19.766 4.4879 64.9
20.027 4.43 36.1
20.468 4.3355 13.8
21.424 4.1441 12.4
22.488 3.9504 15.6
22.828 3.8924 13.6
23.328 3.81 6.5
24.108 3.6885 12.1
25.55 3.4835 17.1
25.951 3.4306 22.2
26.169 3.4025 18.5
27.59 3.2303 9.1
28.57 3.1218 30.3
29.017 3.0747 6.4
29.857 2.9901 3.5
30.331 2.9444 10.2
31.534 2.8347 7.8
32.052 2.7902 3.3
32.99 2.7129 5.3
33.394 2.681 7.3
33.712 2.6564 8.1
34.254 2.6156 13
34.955 2.5648 10.1
35.373 2.5354 11.3
36.129 2.4841 3.2
37.289 2.4094 5
37.794 2.3784 20.3
38.311 2.3475 7.6
晶型G在如上表17所述的2θ角上有特征峰。并且，晶型G只能在保持湿润的湿样下稳定存在。
5.晶型I 1的制备及其X-射线粉末衍射测定
苦丁皂苷A晶型I 1的制备方法：取约30mg无定型的苦丁皂苷A，加入1mL三氟乙醇，超声使其完全溶解，室温下敞口挥发干燥，得到晶型I 1。
取上述制得的晶型I 1进行X-射线衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到的数据如表18所示：
表18：晶型I 1的X-射线粉末衍射峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
5.108 17.2868 100
6.406 13.7853 94.3
7.684 11.4952 36.6
12.82 6.8993 38.5
13.998 6.3212 34
14.329 6.1761 29.4
14.705 6.0191 33.2
16.091 5.5036 26.4
19.227 4.6123 27.2
20.592 4.3097 18.9
25.806 3.4495 16.6
晶型I 1在如上表18所述的2θ角上有特征峰。
6.晶型I 2的制备及其X-射线粉末衍射测定
苦丁皂苷A晶型I 2的制备方法：取约100mg无定型的苦丁皂苷A，加入3mL三氟乙醇，超声至完全溶解过滤，室温下敞口挥发至干燥，得到晶型I 2。
取上述制得的晶型I 2进行X-射线衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到的数据如表19所示：
表19：晶型I 2的X-射线粉末衍射峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
5.525 15.9834 16.4
6.556 13.4717 18.7
7.937 11.1296 30.7
12.202 7.2476 16.9
13.848 6.3897 99.2
14.083 6.2837 100
15.604 5.6742 18.6
28.891 3.0878 10.2
晶型I 2在如上表19所述的2θ角上有特征峰。
7.晶型K的制备及其X-射线粉末衍射测定
苦丁皂苷A晶型K的制备方法：取约100mg无定型的苦丁皂苷A，加入15mL乙醇，超声至完全溶解过滤，在28℃下减压浓缩干燥，得到晶型K。
取上述制得的晶型K进行X-射线衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到的数据如表20所示：
表20：晶型K的X-射线粉末衍射峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
4.48 19.7084 26.1
4.957 17.8136 5.8
5.537 15.9474 8.5
6.04 14.6212 4.4
7.603 11.6176 25.2
8.182 10.7975 9.2
8.982 9.8372 0.9
9.387 9.4139 2.1
10.158 8.7007 1.7
11.102 7.9632 91
11.666 7.5792 4.9
12.123 7.2948 100
13.544 6.5324 9.4
14.345 6.1694 20.2
15.285 5.792 4.2
15.989 5.5384 2.1
16.439 5.3878 1.6
17.553 5.0485 1.5
18.107 4.8951 6
18.705 4.74 5.5
19.83 4.4735 3.1
20.789 4.2693 2.8
21.103 4.2064 1.4
21.629 4.1053 1.4
22.133 4.0129 0.8
22.324 3.9791 1.5
23.081 3.8502 0.7
23.525 3.7786 1.6
23.973 3.709 1.5
24.348 3.6526 3
25.418 3.5013 1.6
25.721 3.4608 2
26.208 3.3975 1.4
27.169 3.2795 0.8
27.491 3.2418 2.2
28.051 3.1784 1.5
28.289 3.1522 0.6
28.968 3.0798 2.1
29.956 2.9804 0.8
30.374 2.9403 0.6
31.207 2.8638 1.2
32.035 2.7916 0.7
33.433 2.6779 1.3
34.134 2.6246 1.1
34.429 2.6027 1.1
34.594 2.5907 0.6
35.915 2.4984 0.5
36.751 2.4435 0.6
37.968 2.3679 0.5
晶型K在如上表20所述的2θ角上有特征峰。
8.晶型L的制备及其X-射线粉末衍射测定
苦丁皂苷A晶型L的制备方法：如实施例3所示制备方法，首先制得晶型J；取适量晶型J，加热升温至120℃，保温5分钟，得到晶型L。
取上述制得的晶型L进行X-射线衍射测定，所用仪器与其参数如表4所示，得到的数据如表21所示：
表21：晶型L的X-射线粉末衍射峰列表
2θ° d间隔 相对强度％
3.659 24.1299 13.9
4.76 18.5477 9
6.159 14.3378 1.8
7.902 11.179 11.6
9.541 9.2621 21.9
11.359 7.7833 2
12.284 7.1992 100
12.822 6.8983 3.8
13.604 6.5039 64.6
14.585 6.0682 48
15.424 5.7401 35
16.165 5.4784 41
16.926 5.2341 17.1
17.344 5.1086 17.5
18.165 4.8797 8.9
18.806 4.7147 17.3
19.348 4.5839 6.1
19.969 4.4427 4
20.426 4.3442 12.9
22.266 3.9893 4.6
22.829 3.8921 2.8
23.546 3.7753 6.2
24.767 3.5918 3.9
26.07 3.4152 6.6
26.547 3.3549 2.5
28.629 3.1155 4.7
晶型L在如上表21所述的2θ角上有特征峰。并且，晶型L只能在高温下稳定存在。
实施例9：苦丁皂苷A的生物学活性
1.苦丁皂苷A对支气管平滑肌的舒张作用
首先，配置不同浓度的苦丁皂苷A溶液：称取实施例1获得的苦丁皂苷A晶型A0.3253g，加入1mL二甲基亚砜(DMSO)溶解，配制成苦丁皂苷A晶型A储备液，然后用DMSO依次稀释成1μM、3.2μM、10μM、32μM苦丁皂苷A晶型A溶液。
其次，制备支气管环：取6周龄C57BL/6J小鼠，断颈致死，取出左右支气管后在体式显微镜下进行支气管剥离，获得左右支气管并剪成长度约2mm的支气管环。
再者，平衡支气管环张力：用两根金属丝固定支气管环，将其悬挂于装有5mL平衡盐溶液(Kreb溶液)的37℃水浴槽中，同时持续通入含5％二氧化碳和95％氧气的混合气体；然后，利用张力换能器平衡支气管环张力，使用60mM氯化钾预刺激后重新平衡。
最后，进行气道张力测定与给药：仪器校正，检测系统调零；待小鼠张力稳定时记录张力值A；向5mL Kreb溶液中加入5μL、10mM黑色素浓缩激素，使其终浓度为10μM，待支气管环收缩张力达最高峰，分别加入5μL不同浓度(1μM、3.2μM、10μM、32μM)苦丁皂苷A晶型A溶液，观察记录支气管张力变化，计算气道张力松弛百分比，如表22。其中，加入苦丁皂苷A溶液前1分钟的平均张力值记为B，加入苦丁皂苷A后第20分钟的平均张力值记为C，气道张力松弛百分比＝(B-C)/(B-A)。
表22：不同浓度苦丁皂苷A下支气管平滑肌张力松弛比率
苦丁皂苷A浓度 张力平均松弛比率
1μM -3.57％
3.2μM 21.40％
10μM 42.93％
32μM 50.09％
由上表22可知：在苦丁皂苷A的浓度为1μM条件下，其对支气管平滑肌无舒张作用； 而在苦丁皂苷A的浓度为3.2μM、10μM、32μM条件下，支气管平滑肌均得到一定程度的舒张，且KA浓度越高，对支气管平滑肌的舒张作用越强。
2.苦丁皂苷A的抗炎作用
首先，配制不同浓度的苦丁皂苷A溶液，具体步骤如下：
(1)配制15mg/mL苦丁皂苷A晶型A储备液：称取实施例1获得的苦丁皂苷A晶型A 0.50990g，加入33.993mL丙二醇超声溶解，得到约40mL、15mg/mL苦丁皂苷A晶型A储备液，室温避光保存；
(2)配制1.5mg/mL苦丁皂苷A溶液：量取15mg/mL苦丁皂苷A晶型A储备液2mL，加入18mL 25％丙二醇稀释，得到20mL1.5mg/mL苦丁皂苷A溶液，现配现用。
(3)配制0.3mg/mL苦丁皂苷A溶液：量取1.5mg/mL苦丁皂苷A溶液4mL，加入16mL 32.5％丙二醇稀释，得到20mL 0.3mg/mL苦丁皂苷A溶液，现配现用。
(4)配制0.06mg/mL苦丁皂苷A溶液：量取0.3mg/mL苦丁皂苷A工作液3mL，加入12mL32.5％丙二醇稀释，得到15mL 0.3mg/mL苦丁皂苷A溶液，现配现用。
其次，构建具有明显肺部炎症的哮喘小鼠模型：第一天向Balb/c小鼠腹腔注射100μL 6mg/mL鸡卵清白蛋白和4mg氢氧化铝，第8天注射100μL 3.6mg/mL鸡卵清白蛋白和4mg氢氧化铝，第15天注射100μL 1mg/mL鸡卵清白蛋白和4mg氢氧化铝，并在第20-23天，每天使用6mL 2％鸡卵清白蛋白雾化激发30分钟，构建具有明显肺部炎症的哮喘小鼠模型。其中，空白对照组小鼠中，采用100μL PBS替代鸡卵清白蛋白。
最后，进行雾化治疗：从第24天开始，每天给予2次，每次30分钟，共12mL不同浓度(0.06mg/mL、0.3mg/mL、1.5mg/mL)的苦丁皂苷A溶液雾化治疗，在雾化治疗1小时后使用6mL 2％鸡卵清白蛋白雾化激发30分钟，以此给药并激发15天；并在末次给药并激发实验24小时后，即第39天开始取样，取样前给予2次，每次30分钟，共12mL相应雾化治疗浓度的苦丁皂苷A溶液进行治疗，以上为不同剂量苦丁皂苷A雾化治疗的实验组方案，阴性对照组小鼠以30％丙二醇替换苦丁皂苷A，，进行雾化给药。
采用流式细胞术检测小鼠肺泡灌洗液样品白细胞中嗜酸性粒细胞(EO)的占比情况。其中，空白组小鼠15只；阴性对照组小鼠12只；高、中、低浓度苦丁皂苷A实验组小鼠分别为18只、13只、14只。结果如下表23所示。
表23：嗜酸性粒细胞(EO)占比统计结果
由表23的结果可知：相较于空白对照组，阴性对照组嗜酸性粒细胞比例明显提升，说明肺部炎症的哮喘小鼠模型构建成功；相较于阴性对照组，各种剂量苦丁皂苷A给药组嗜酸性粒细胞比例均下降，表明苦丁皂苷A具有一定的抗炎作用。
尽管本发明描述了具体的例子，但是有一点对于本领域技术人员来说是明显的，即在不脱离本发明的精神和范围的前提下可对本发明作各种变化和改动。因此，所附权利要求覆盖了所有这些在本发明范围内的变动。

Claims (15)

  1. 苦丁皂苷A化合物的晶型，选自下述晶型A、C、J、B、D、E、G、K和L，其特征在于，
    所述晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：6.7°±0.2°，7.3°±0.2°，7.9°±0.2°，10.5°±0.2°，10.9°±0.2°，14.1°±0.2°；
    所述晶型C的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：7.8°±0.2°，12.7°±0.2°，14.4°±0.2°，14.9°±0.2°，16.3°±0.2°，18.6°±0.2°，25.1°±0.2°；
    所述晶型J的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：7.7°±0.2°，9.3°±0.2°，12.1°±0.2°，14.1°±0.2°，15.1°±0.2°，16.6°±0.2°；
    所述晶型B的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：7.4°±0.2°，7.9°±0.2°，11.8°±0.2°，12.5°±0.2°，14.3°±0.2°，15.4°±0.2°；
    所述晶型D的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：6.2°±0.2°，9.9°±0.2°，12.4°±0.2°；
    所述晶型E的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：5.6°±0.2°，11.1°±0.2°，14.4°±0.2°；
    所述晶型G的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：5.7°±0.2°，7.8°±0.2°，9.2°±0.2°，9.9°±0.2°，17.5°±0.2°，19.8°±0.2°，20.0°±0.2°，28.5°±0.2°，37.8°±0.2°；
    所述晶型K的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：7.6°±0.2°，11.1°±0.2°，12.1°±0.2°，14.3°±0.2°；
    所述晶型L的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角有特征峰：9.5°±0.2°，12.3°±0.2°，13.6°±0.2°，14.5°±0.2°，15.4°±0.2°，16.2°±0.2°。
  2. 如权利要求1所述的晶型，其特征在于，
    所述晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.6°±0.2°，12.8°±0.2°，13.2°±0.2°，13.6°±0.2°，15.2°±0.2°，16.1°±0.2°，18.3°±0.2°，24.1°±0.2°；
    所述晶型B的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：4.8°±0.2°，8.1°±0.2°，14.6°±0.2°；
    所述晶型C的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.9°±0.2°，8.3°±0.2°，13.2°±0.2°，19.5°±0.2°，20.3°±0.2°；
    所述晶型D的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：4.5°±0.2°， 7.2°±0.2°，12.9°±0.2°，19.0°±0.2°；
    所述晶型E的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：4.5°±0.2°，7.7°±0.2°，13.6°±0.2°，18.1°±0.2°，19.8°±0.2°，20.8°±0.2°，28.0°±0.2°；
    所述晶型G的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.4°±0.2°，7.3°±0.2°，12.0°±0.2°，14.4°±0.2°，17.0°±0.2°，18.8°±0.2°，22.5°±0.2°，25.5°±0.2°，25.7°±0.2°，26.1°±0.2°；
    所述晶型J的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.5°±0.2°，4.7°±0.2°，12.7°±0.2°，13.7°±0.2°，15.5°±0.2°，16.2°±0.2°，18.1°±0.2°；
    所述晶型K的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：4.5°±0.2°，4.9°±0.2°，5.5°±0.2°，8.2°±0.2°，13.5°±0.2°，18.7°±0.2°；
    所述晶型L的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在下述2θ角还有特征峰：3.7±0.2°，7.9°±0.2°，16.9°±0.2°，17.3°±0.2°，18.8°±0.2°，20.4°±0.2°。
  3. 如权利要求1或2所述的晶型，其特征在于：
    所述晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表1所示的2θ角有特征峰；
    所述晶型B的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表14所示的2θ角有特征峰；
    所述晶型C的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表2所示的2θ角有特征峰；
    所述晶型D的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表15所示的2θ角有特征峰；
    所述晶型E的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表16所示的2θ角有特征峰；
    所述晶型G的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表17所示的2θ角有特征峰；
    所述晶型J的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表3所示的2θ角有特征峰；
    所述晶型K的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表20所示的2θ角有特征峰；
    所述晶型L的X-射线粉末衍射(XRPD)图上在表21所示的2θ角有特征峰。
  4. 如权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型A具有以下任意一项或多项特征：
    (1)具有基本上如图1a所示的X-射线粉末衍射(XRPD)图；
    (2)具有基本上如图1b所示的差示扫描量热(DSC)分析图；
    (3)具有基本上如图1c所示的热重分析(TGA)图；和
    (4)具有基本上如图1d所示的动态水分吸附(DVS)图。
  5. 如权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型C具有以下任意一项或多项特征：
    (1)具有基本上如图2a所示的X-射线粉末衍射(XRPD)图；
    (2)具有基本上如图2b所示的差示扫描量热(DSC)分析图；
    (3)具有基本上如图2c所示的热重分析(TGA)图；和
    (4)具有基本上如图2d所示的动态水分吸附(DVS)图。
  6. 如权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型J具有以下任意一项或多项特征：
    (1)具有基本上如图3a所示的X-射线粉末衍射(XRPD)图；
    (2)具有基本上如图3b所示的差示扫描量热(DSC)分析图；
    (3)具有基本上如图3c所示的热重分析(TGA)图；和
    (4)具有基本上如图3d所示的动态水分吸附(DVS)图。
  7. 苦丁皂苷A化合物晶型A的制备方法，包括：
    苦丁茶经渗漉提取、浓缩后获得提取物浸膏；取浸膏稀释并离心，获得粗样品；将粗样品经高压色谱纯化后，再进行脱色、重结晶、冷冻干燥，最后粉碎，得到晶型A；或
    采用下述三种方法中的任意一种制备所述晶型A：
    方法一：用醇类溶剂溶解无定型苦丁皂苷A，获得苦丁皂苷A的溶解液，浓缩该溶解液至白色沉淀析出且蒸出液收集容器入口处基本无液滴产生，此即为浓缩终点，获得浓缩液；冷冻干燥该浓缩液，从而获得晶型A；
    方法二：用醇类溶剂溶解无定型苦丁皂苷A，获得苦丁皂苷A的溶解液，超声处理该溶解液，然后过滤，取滤液减压浓缩后得到干燥固体，即为晶型A；
    方法三：用醇类溶剂溶解无定型苦丁皂苷A，获得苦丁皂苷A的溶解液，室温下使该溶解液自然挥发得到干燥固体，即为晶型A。
  8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，使用纯乙醇或50-90％(v/v)的乙醇水溶液进行渗漉提取，苦丁茶粉与醇的质量比为1∶2.5-1∶1.5；提取物浸膏先后用水和无水乙醇稀释并离心，以获得粗样品，其中，水的用量为苦丁茶粉质量的0.5-1倍，无水乙醇的用量为苦丁茶粉质量的0.3-0.8倍；用乙醇或其水溶液在60-90℃溶解该粗样品，然后将其置于10℃以下的条件下进行重结晶；在约0℃冷冻干燥所获得的晶体，然后升高至室温干燥，最后再在32℃以上的温度下干燥，获得晶型A，其中冷冻干燥的时间为1-3小时，室温干燥的时间为3-5小时，32℃以上的干燥时间为5-8小时。
  9. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法一和二使用乙醇水溶液溶解无定型苦丁皂苷A；所述方法三中，使用甲醇溶解无定型苦丁皂苷A；所述方法一中，获得苦丁皂苷A的溶解液后，先过滤获得澄清溶液，再浓缩该澄清溶液，其中，浓缩在50-60℃的水浴中进行，转速控制为30-80rpm，真空度控制为不低于0.08MPa。
  10. 苦丁皂苷A化合物的晶型C或J的制备方法，其特征在于，
    采用以下方法四～方法六中的任意一种进行制备晶型C：
    方法四：用溶剂溶解晶型A，得到混悬液；室温下搅拌3-5天，离心；取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型C；
    方法五：用乙酸乙酯溶解晶型A，得到混悬液；室温下搅拌2-4天，离心；取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型C；
    方法六：于150-200℃之间加热晶型A3-10分钟，得到晶型C；
    采用以下方法七～方法十中的任意一种制备晶型J：
    方法七：用乙酸乙酯饱和水溶液溶解晶型A，得到混悬液；室温下搅拌3-5天，离心；取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型J；
    方法八：用水溶解晶型A，得到混悬液；室温下搅拌2-4天，离心；取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型J；
    方法九：用醇类溶剂溶解无定型苦丁皂苷A；加入水，室温下搅拌过夜后，离心，然后将取所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型J；
    方法十：用醇类溶剂和水溶解无定型苦丁皂苷A后，0-10℃搅拌过夜，离心，将所得固体在25-30℃条件下真空干燥过夜，得到晶型J。
  11. 权利要求10所述的方法，其特征在于，
    所述方法四中，乙腈与异丙醚的体积比为1∶1到1∶5；晶型A与溶剂的质量体积比(克：毫升)为1∶20到1∶50；
    所述方法五中，晶型A与乙酸乙酯的质量体积比(克：毫升)为1∶10到1∶30；
    所述方法六中，在170±5℃的温度下加热晶型A并保温3-7分钟；
    所述方法七中，晶型A与乙酸乙酯饱和水溶液的质量体积比(克：毫升)为1∶20到1∶50；
    所述方法八中，晶型A与水的质量体积比(克：毫升)为1∶10到1∶30；
    所述方法九中，醇类溶剂为无水醇类溶剂，苦丁皂苷A与醇类溶剂的质量体积比(克：毫升)为1∶30到1∶100，加入的水的量是醇类溶剂体积的1-10倍；
    所述方法十中，所述醇类溶剂优选为无水醇类溶剂，醇类溶剂与水的体积比为1∶1到1∶5，苦丁皂苷A与醇类溶剂的质量体积比(克：毫升)为1∶10到1∶50。
  12. 如权利要求1-6中任一项所述的苦丁皂苷A化合物的晶型或采用权利要求7-11中任一项所述的方法制备得到的产物在制备用于扩张气管、用于抗炎、或用于治疗肺部疾病的药物中的应用；
    优选地，所述肺部疾病为慢性阻塞性肺疾病或哮喘；
    优选地，所述晶型为晶型A、C或J或其任意混合物；
    优选地，所述药物为吸入制剂；优选地，所述吸入制剂为吸入粉雾剂、吸入气雾剂、 吸入喷雾剂、吸入混悬剂或吸入溶液剂。
  13. 一种治疗肺部疾病的药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含治疗有效量的如权利要求1-6中任一项所述的苦丁皂苷A化合物的晶型或权利要求7-11中任一项所述的方法制备得到的产物以及药学上可接受的载体；
    优选地，所述晶型为晶型A、C或J或其任意混合物，所述产物含有晶型A、C或J或其任意混合物；
    优选地，所述药物组合物为吸入制剂；优选地，所述吸入制剂为吸入粉雾剂、吸入气雾剂、吸入喷雾剂、吸入混悬剂或吸入溶液剂。
  14. 一种扩张气管、抗炎或治疗肺部疾病的方法，其特征在于，所述方法包括给予需要的患者有效量的权利要求1-6中任一项所述的苦丁皂苷A化合物的晶型或采用权利要求7-11中任一项所述的方法制备得到的产物，或含有所述晶型或产物的药物组合物；优选地，所述晶型为晶型A、C或J或其任意混合物，所述产物含有晶型A、C或J或其任意混合物。
  15. 如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述肺部疾病为慢性阻塞性肺疾病或哮喘。
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