CN117915956A - M6pr细胞表面受体结合化合物和缀合物 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了一类包含特异性地结合到细胞表面甘露糖‑6‑磷酸酯受体(M6PR)的配体部分的化合物。所述M6PR结合化合物可以触发所述受体将结合的化合物内化到细胞中。本公开的配体部分可以与多种感兴趣的部分连接，而不影响与所述M6PR的特异性结合以及所述M6PR的功能。还提供了作为与生物分子诸如抗体连接的配体部分的缀合物的化合物，所述缀合物可以利用细胞途径来从所述细胞表面或所述细胞外环境中去除特定的靶蛋白质。例如，本文所述的缀合物可以隔离和/或降解细胞溶酶体中的感兴趣的靶分子。还提供了使用所述缀合物靶向蛋白质以进行隔离和/或溶酶体降解的方法。

Description

M6PR细胞表面受体结合化合物和缀合物
1.相关申请的交叉引用
本申请要求2021年7月14日提交的美国申请第63/221,915号的权益，该申请通过引用方式以其整体并入本文。
2.背景技术
许多治疗剂发挥作用是通过结合靶蛋白质上的重要功能位点，从而调节该蛋白质的活性，或者通过招募免疫效应子(与许多单克隆抗体药物一样)以作用于靶蛋白质。然而，存在尚未开发的医学上重要的被认为是“无成药性的”人类蛋白质库，因为这些蛋白质不容易接受目前可用的治疗靶向方法。因此，需要可以靶向更广泛的蛋白质的疗法。
甘露糖-6-磷酸酯是一种单糖配体，在它们所附接至的溶酶体水解酶的细胞内滞留和分泌中起关键作用。当这种糖残基结合到新合成的酶上时，它可以引导它们从高尔基体运输到它们活跃的溶酶体。膜结合的细胞表面甘露糖-6-磷酸酯受体(M6PR’s)在许多生物过程中发挥作用，包括此类溶酶体酶的分泌和内化。M6PR的内吞作用允许带有甘露糖6-磷酸酯(M6P)配体的化合物内化到细胞中并运输到溶酶体。
提供与细胞表面M6PR结合然后跨细胞膜转运的替代配体是非常令人感兴趣的。
3.发明内容
本公开提供了一类包含特异性地结合到细胞表面甘露糖-6-磷酸酯受体(M6PR)的配体部分的化合物。细胞表面M6PR结合化合物可以触发受体以将结合的化合物内化到细胞中。本公开的配体部分可以与多种感兴趣的部分连接，而不影响与细胞表面M6PR的特异性结合以及细胞表面M6PR的功能。还提供了作为与生物分子(例如抗体)连接的配体部分的缀合物的化合物，该缀合物可以利用细胞途径来从细胞表面或从细胞外环境中去除特定的感兴趣的蛋白质。例如，本文所述的缀合物可以隔离和/或降解细胞溶酶体中的感兴趣的靶分子。本文还提供了包含此类缀合物的组合物和使用缀合物靶向感兴趣多肽以进行隔离和/或溶酶体降解的方法，以及使用缀合物治疗病症或疾病的方法。
4.附图说明
根据以下说明书和附图，本发明的这些和其他特征、方面和优点将变得更好理解，在附图中：
图1示出了示例性缀合物马妥珠单抗(matuzumab)-(化合物A)缀合物对比去糖基化马妥珠单抗的代表性原生质谱MS分析。
图2示出了示例性缀合物马妥珠单抗-(化合物520(I-7))缀合物对比去糖基化马妥珠单抗的代表性原生质谱MS分析。
图3示出了如通过表面染色测量的西妥昔单抗-(化合物A)和西妥昔单抗-(化合物520(I-7))缀合物对Hela亲代和M6PR敲除(KO)细胞中表面EGFR水平的时程活性。
图4示出了如通过表面染色测量的马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物520(I-7))缀合物对Hela亲代和M6PR KO细胞中表面EGFR水平的时程活性。
图5示出了细胞内蛋白质印迹图像，其说明了西妥昔单抗-(化合物A)、西妥昔单抗-(化合物520(I-7))、马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗(化合物520(I-7))缀合物对Hela亲代和M6PR KO细胞中的总EGFR水平的剂量反应。
图6示出了西妥昔单抗-(化合物A)、西妥珠单抗-(化合物520(I-7))、马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物520(I-7))缀合物对Hela亲代和M6PR KO细胞中相对EGFR归一化水平的时程活性。
图7A-7F示出了以下经荧光标记的马妥珠单抗(mtz)或人IgG同种型抗体(同种型)([ab])与M6PR的各种示例性缀合物的M6PR结合亲和力曲线：未经标记的对照(图7A)、化合物520(I-7)(图7B)、化合物602(I-8)(图7C)、化合物603(I-9)(图7D)、化合物605(I-11)(图7E)和化合物716(I-12)(图7F)。通过ELISA确定与M6PR的结合。化合物520(I-7)(m或DAR＝8)的缀合物和化合物605(I-11)(m或DAR＝4)的缀合物分别显示出最高和最低的结合亲和力。d4是DAR 4。d8是DAR 8。RFU是相对荧光单位。
图8A-8C示出了小鼠中rIgG1(抗IgG2a)抗体的示例性缀合物的血清药代动力学(PK)分析。使用ELISA在施用后0.5、1、2、6和24小时测量小鼠血清中化合物520(I-7)(d8是DAR＝8)和(d4是DAR＝4)(图8A)、化合物604(I-10)和化合物605(I-11)(图8B)，以及化合物603(I-9)和化合物716(I-12)(图8C)的缀合物的细胞内水平。UNLB是抗体对照。
图9示出了Jurkat细胞中示例性抗IgG2a缀合物和结合的靶蛋白质随时间的细胞内摄取。经由荧光Alexa488-缀合的靶IgG2a抗体检测缀合物，并在1小时和24小时后使用FACS测定荧光的细胞内水平(MFI)。
图10图示了在24小时后作为占参考化合物520(I-7)(d8是DAR＝8)缀合物摄取的百分比的10nM示例性抗IgG2a缀合物和结合的靶蛋白质(Alexa488缀合的靶IgG2a抗体)进入Jurkat细胞的相对细胞内摄取。
图11示出了具有各种DAR负载的示例性化合物的多种抗体缀合物的M6PR结合测定结果图。
图12是细胞荧光(MFI)与抗体缀合物浓度([Ab])的关系图，其表明示例性M6PR结合抗体缀合物在温育1小时后表现出稳健的靶蛋白质进入Jurkat细胞的摄取。
图13示出了细胞荧光(MFI)与抗体缀合物浓度([Ab])的关系图，其表明示例性M6PR或ASGPR结合化合物的各种抗体缀合物在温育1小时后表现出相似的稳健的进入HepG2细胞的摄取。
图14示出了展示野生型(WT)K562细胞对比CI-M6PR敲除(KO)细胞中与经Alexa488标记的IgE靶标结合的示例性抗体缀合物的CI-M6PR依赖性细胞摄取的图。
图15示出了Jurkat细胞中奥马珠单抗(抗IgE)与示例性M6PR结合化合物的各种缀合物(即与经Alexa488标记的靶IgE结合的缀合物)的细胞摄取的图。
图16示出了图示来自图15的图中特定示例性缀合物的细胞摄取活性比较的图。
图17示出了图示来自图15的图中特定示例性缀合物的细胞摄取活性比较的图。
图18示出了Jurkat细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的奥马珠单抗(抗IgE)与示例性M6PR配体-接头的各种缀合物的细胞摄取的图。
图19示出了图示来自图18的图中特定示例性缀合物的细胞摄取活性比较的图。
图20示出了图示来自图18的图中特定示例性缀合物的细胞摄取活性比较的图。
图21示出了图示来自图18的图中特定示例性缀合物的细胞摄取活性比较的图。
图22示出了本公开的各种示例性西妥昔单抗(抗EGFR)缀合物的M6PR结合亲和力数据的图。
图23示出了图示本公开的特定示例性靶结合缀合物的细胞摄取活性的图。
图24示出了适合于附接至感兴趣的接头和/或部分的M6PR结合部分的合成方案。
图25示出了适合于附接至感兴趣的接头和/或部分的M6PR结合部分的合成方案。
5.具体实施方式
如上所概述，本公开提供了一类包含特定配体部分X的化合物，该配体部分特异性地结合到细胞表面甘露糖-6-磷酸酯受体(M6PR)，也称为M6PR结合部分或M6PR配体部分)。本公开的M6PR结合部分可以与多种感兴趣的部分连接，而不影响与细胞表面M6PR的特异性结合以及细胞表面M6PR的功能。发明人已经证明，本公开的化合物可以利用生物系统中细胞表面M6PR的功能，例如，用于内化和/或隔离到细胞的溶酶体，以及在一些情况下随后靶分子的溶酶体降解。本公开的化合物可用于多种应用。在一些实施方案中，M6PR结合部分X提供了感兴趣的部分的细胞内递送。在一些实施方案中，该化合物是包含与靶结合部分连接的M6PR结合部分X的双官能化合物，其用于结合的靶分子的内化和/或溶酶体降解。
因此，本公开提供了包含一个或多个与感兴趣的部分Y连接的M6PR结合部分的式(XI)化合物：
或其盐，其中：
X是M6PR结合部分(例如，如本文所述)；
n是1至500(例如，X是经由单价或多价接头连接的，如本文所述)；
m是1至500(例如，1至100或1至10)；
L是接头；并且
Y是感兴趣的部分(例如，如本文所述)。
以下更详细地描述了本公开的化合物和缀合物以及方法。描述了特定类别的M6PR结合化合物。在一些实施方案中，该化合物是包含一个或多个连接的M6PR结合部分的生物分子缀合物。还描述了可用于M6PR结合化合物的接头(L)和感兴趣部分(Y)，以及生物分子缀合物。还描述了其中使用本公开的化合物和缀合物的方法。
5.1.M6PR结合部分
如上所概述，本公开的M6PR结合部分(也称之为M6PR配体部分)可以与多种感兴趣的部分连接，而不影响与细胞表面M6PR的特异性结合以及细胞表面M6PR的功能。发明人已经证明，具有下面描述的特定结构的M6PR结合部分提供了与细胞表面M6PR的高亲和力结合，并且当经由根据本公开的双官能化合物的接头配置时能够利用生物系统中细胞表面M6PR的功能，例如，用于靶分子的内化和/或降解。
术语“甘露糖-6-磷酸酯受体”和“M6PR”是指甘露糖-6-磷酸酯受体家族的受体。M6PR是使酶靶向于细胞中的溶酶体的跨膜糖蛋白质受体。MP6R将携带以甘露糖-6-磷酸酯(M6P)残基封端的N-聚糖的蛋白质内源性地转运到溶酶体，并且在内涵体、细胞表面和高尔基复合体之间循环。参见，例如，Ghosh等人，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2003；4:202-213。M6PR的家族包括阳离子依赖性甘露糖-6-磷酸酯受体(CI-M6PR)。CI-M6PR还被称为胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)，并且在人体内由IGF2R基因编码(参见，例如，NCBI参考序列：NM_000876.3和NCBI基因ID：3482)。CI-M6PR结合胰岛素样生长因子2(IGF-2)和甘露糖-6-磷酸酯(M6P)标记的蛋白质。本公开的化合物可以与细胞表面M6PR例如内化的CI-M6PR细胞表面受体特异性地结合。在特定实施方案中，表面CI-M6PR是人CI-M6PR。应当理解，术语M6PR和CI-M6PR在提及本公开的M6PR结合部分和化合物的结合特性时可互换使用。
包含此类M6PR结合部分(X)(例如，如本文所述)的化合物可以与其他受体结合，例如，可以以较低的亲和力结合，如通过例如免疫测定法或本领域已知的其他测定法测定的。在一个具体的实施方案中，X或如本文所述的包含此类X的化合物以比当X或该化合物结合到另一个细胞表面受体时的亲和力高至少2log、2.5log、3log、4log的亲和力特异性地结合到细胞表面CI-M6PR。在一个具体的实施方案中，X或如本文所述的包含X的化合物以20nM或更低的亲和力(Kd)特异性地结合到CI-M6PR。在特定实施方案中，此类结合具有10mM或更低、1mM或更低、100uM或更低、10uM或更低、1uM或更低、100nM或更低、10nM或更低、或1nM或更低的亲和力(Kd)。在此上下文中，术语“结合”、“结合到”、“特异性地结合”或“特异性地结合到”可互换使用。
本公开的M6PR结合化合物包含部分(X)(例如，如本文所述)，该部分是特异性地结合到细胞表面受体M6PR的D-吡喃甘露糖类似物。M6PR结合化合物可以是单价或多价(例如，二价或三价或更高价)，其中单价化合物包括单个M6PR配体部分，并且单价化合物包括两个或更多个此类部分。
5.1.1.α-连接的吡喃糖环
本公开的化合物的M6PR结合部分可以包括由式(II)描述的连接的吡喃糖环：
其中：
W是亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z2选自O、S、NR21和C(R22)2，其中每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
在式(II)的一些实施方案中，Z2是以α构型在异头位置或1-位置处与吡喃糖糖环连接的连接部分，如以下式(IIa)中所示：
5.1.2.β-连接的吡喃糖环
本发明人已经证明，虽然具有拥有式(IIa)的异头α-构型的M6PR结合部分的M6PR结合化合物可以在受体处提供良好的结合和内化活性，但在一些情况下，有可能通过在异头位置处以β-构型配置M6PR结合部分的中心吡喃糖糖环而在M6PR处赋予更强效的结合和内化活性。在一些实施方案中，此类M6PR结合部分可以在吡喃糖环处提供增加的稳定性。
因此，在式(II)的一些实施方案中，Z2是以β-构型在异头位置或1-位置处与糖环连接的连接部分，如以下式(IIb)中所示：
5.2.M6PR结合化合物
虽然式(II)的部分可以显示出针对M6PR的结合活性，但本发明人已经证明，当特定类型的环状基团经由连接部分Z2以特定构型与式(II)的吡喃糖环相邻地连接时，可以产生具有希望的结合活性的M6PR结合部分。
因此，在式(II)的一些实施方案中，M6PR结合部分(X)可以由式(III)：
或其前药、或其盐描述，其中：
W是亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z2选自O、S、NR21和C(R22)2，其中每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
A独立地是任选取代的环状基团；并且
Z3独立地是连接部分。
在式(II)-(III)的一些实施方案中，W为不可水解的亲水性头部基团。
在式(II)-(III)的一些实施方案中，Z2为任选取代的亚乙基。在式(II)-(III)的一些实施方案中，Z2是任选取代的亚乙烯基。
在式(II)-(III)的一些实施方案中，Z2是O。在式(II)-(III)的一些实施方案中，Z2是S。在式(II)-(III)的一些实施方案中，Z2是-NR21-。在式(II)-(III)的一些实施方案中，Z2是-C(R22)2-，其中每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。在式(II)-(III)的一些实施方案中，Z2是-CH2-。
在式(II)-(III)的一些实施方案中，A是任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环或任选取代的环烷基。在式(II)-(III)的一些实施方案中，A独立地是任选取代的芳基或杂芳基连接部分(例如，任选取代的单环或双环芳基或杂芳基)。
本文描述了式(II)-(III)的示例性Z3连接部分。
式(III)的此类M6PR结合部分可以附接至感兴趣的部分或分子以产生经历有效M6PR介导的细胞内化的双官能化合物。本发明人已进一步证明，当感兴趣的部分或分子是靶蛋白质结合部分时，M6PR结合化合物还提供了M6PR介导的结合的靶蛋白质的内化和/或降解。
因此，在式(XI)的一些实施方案中，M6PR结合化合物具有式(XII)：
或其前药、或其盐，
其中：
W是亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z2选自O、S、NR21和C(R22)2，其中每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
A独立地是任选取代的环状基团；
Z3独立地是连接部分；
n是1至500；
L是接头；
Y是感兴趣的部分；并且
m是1至100。
在式(XI)-(XII)的一些实施方案中，m是1，并且细胞表面M6PR结合化合物具有式(XIII)：
或其前药、或其盐，
其中：
W是亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z2选自O、S、NR21和C(R22)2，其中每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
A独立地是任选取代的环状基团；
Z3独立地是连接部分；
n是1至500；
L是接头；并且
Y是感兴趣的部分(例如，如本文所述)。
在式(XIII)的一些实施方案中，Y是化学选择性的连结基团(ligation group)。在式(XIII)的一些实施方案中，n是1。在式(XIII)的一些实施方案中，Y是经由单一接头-L-与“n”个M6PR结合部分(Xn-)连接的化学选择性的连结基团。在式(XIII)的一些实施方案中，n是2、3、4或5。在式(XIII)的一些实施方案中，n是5-10。在式(XIII)的一些实施方案中，n是10-100，诸如20-80或20-50。在式(XIII)的一些实施方案中，当n是5或更大时，则L是含有接头(例如，如本文所述)的多肽。
在式(XII)-(XIII)的一些实施方案中，当n是1且A是苯基时，则：i)L包含至少16个连续原子(例如，至少18个连续原子或至少20个连续原子，在一些情况下至多约200个连续原子)的主链；ii)Y是生物分子；并且/或者ii)Z3是连向接头L的酰胺、磺酰胺、脲或硫脲连接部分。
在式(XII)的一些实施方案中，Z2是如式(IIa)中所示在异头位置或1-位置处以α-构型与糖环连接的连接部分，使得该化合物具有式(XIIa)：
在式(XII)的一些实施方案中，Z2是如式(IIb)中所示在异头位置或1-位置处以β-构型与糖环连接的连接部分，使得该化合物具有式(XIIb)：
在式(XI)-(XIIb)的一些实施方案中，例如式(III)的多个M6PR结合部分是经由多个接头L连接至感兴趣的部分Y上的不同连结位点。在一些实施方案中，当Y是生物分子时，式(XI)-(XIIb)的化合物可以称为缀合物。
5.2.1.亲水性头部基团和连接部分
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，M6PR结合部分(X)包括这样的D-吡喃甘露糖环类似物，其具有经由连接部分(Z1)与该糖环的5-位置连接的亲水性头部基团，或其前体或前药。连接部分可以具有1-6个原子的长度，诸如1-5、1-4或1-3个原子的长度，例如1个或2个原子的长度。应当理解，连接部分的长度可以结合亲水性头部基团进行选择。
亲水性头部基团(W)可以是任何适合的带负电荷的基团或其盐。在一些实施方案中，亲水性头部基团是中性、极性的亲水性基团。一般地讲，亲水性头部基团能够在水性或生理条件下与M6PR进行氢键合或静电相互作用，与M6P的磷酸酯基的氢键合或静电相互作用相似。亲水性头部基团可以是天然存在的甘露糖-6-磷酸酯配体的6-磷酸酯基的生物电子等排体(例如，结构或功能模拟物)。在一些实施方案中，亲水性头部基团是不可水解的，即对其在生理条件下从亲水性头部基团所附接至的X的Z1连接部分和/或吡喃糖环的切割(例如，化学或酶促切割)是稳定的官能团。
亲水性头部基团通常为小基团，诸如含有杂原子的官能团，或者单一杂环，并且在一些情况下具有小于200诸如小于150或小于100的MW。
在一些实施方案中，亲水性头部基团是膦酸酯/盐或其生物电子等排体，诸如羧酸酯/盐或丙二酸酯/盐。在一些实施方案中，亲水性头部基团是硫代膦酸酯/盐。
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团不是磷酸酯/盐、硫代磷酸酯/盐或二硫代磷酸酯/盐，因为此类基团将与该化合物具有磷酸酯键联，该磷酸酯键联可能在生理条件下是不稳定的并且易于被切割(例如，被生物系统中的磷酸酯酶切割或化学方法切割)。例如，如与膦酸酯/盐类似物或其他更稳定的头部基团相比，M6P的6-磷酸酯基团显示出不理想的稳定性。本公开还提供了除膦酸酯/盐之外的替代的不可水解的头部基团，其保留了所得M6PR结合化合物的结合和内化活性。
在式(II)-(XIII)的实施方案中的任何一个中，亲水性头部基团W选自–OH、–CR2R2OH、–NR3P＝O(OH)2、–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–(CR2R2)-P＝O(OH)2、–SO2OH(即，–SO3H)、–S(O)OH、–OSO2OH、–COOH、–CN、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)、–CONHSO2R3、–CONHSO2NR3R4、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、-NHC(O)CO2H、–NHSO2NHR3、-NHC(O)NHS(O)2R3、–NHSO2R3、–NHSO3H、 或其盐，
其中：
R1和R2独立地是氢、SR3、卤基或CN，并且R3和R4独立地是H、C1-6烷基或取代的C1-6烷基(例如，-CF3或-CH2CF3)；
A、B和C各自独立地是CH或N；并且
D各自独立地是O或S。
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W是磷酸酯/盐或硫代磷酸酯/盐，例如–OP＝O(OH)2、–SP＝O(OH)2、–OP＝O(SH)(OH)、–SP＝O(SH)(OH)、–OP＝S(OH)2、–OP＝O(N(R3)2)(OH)或–OP＝O(R3)(OH)或其盐。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W是不可水解的，并且因此不选自磷酸酯/盐或硫代磷酸酯/盐，例如–OP＝O(OH)2、–SP＝O(OH)2、–OP＝O(SH)(OH)、–SP＝O(SH)(OH)、–OP＝S(OH)2、–OP＝O(N(R3)2)(OH)或–OP＝O(R3)(OH)或其盐。
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W是带电荷的，例如能够在水性或生理条件下形成盐。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W选自–NR3P＝O(OH)2、–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–(CR2R2)-P＝O(OH)2、–COOH、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH和-NHC(O)CO2H。
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W是膦酸酯/盐或硫代膦酸酯/盐(例如，–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)或–P＝S(SH)(OH)或其盐)。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W是膦酸酯或其盐。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W是–CO2H或其盐。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W是丙二酸酯/盐(例如，–CH(COOH)2或其盐)。
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W选自–SO2OH(即，–SO3H)、–S(O)OH、–OSO2OH和–NHSO3H。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W是磺酸酯/盐(例如，-SO3H或其盐)。
在一些实施方案中，亲水性头部基团W是中性亲水性的。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W选自–OH、–CR2R2OH、–CN、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)、–CONHSO2R3、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、–NHSO2NHR3、-NHC(O)NHS(O)2R3和–NHSO2R3。
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W包含杂环，诸如
或其盐，
其中A、B和C各自独立地是CH或N；并且D各自独立地是O或S。
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W包括5元杂环，诸如
或其盐。
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，亲水性头部基团W经由选自任选取代的(C1-C2)亚烷基和任选取代的亚乙烯基的Z1与吡喃糖环连接。Z1可以结合W被选择成在环的5-位置和W的带电荷的或极性中心之间提供期望的间隔。例如，当W是具有连接两个羧酸基团的CH原子的丙二酸酯/盐时，Z1可以是亚甲基，它们一起在环和COOH基团之间提供希望的两个碳的间隔区。
在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，Z1是亚甲基或取代的亚甲基。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，Z1是乙基或取代的乙基。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，Z1是亚乙烯基或取代的亚乙烯基。在式(II)-(XIII)的一些实施方案中，Z1被一个或多个卤素例如氟基取代。
在式(III)的一些实施方案中，M6PR结合部分(X)由式(IV-1)至(IV-3)中之一描述：
其中Ra、Rb、Rc和Rd独立地是H或F。
在式(IV-1)至(IV-3)的一些实施方案中，Z2是O。
在式(IV-1)至(IV-3)的一些实施方案中，Z2是S。
在式(IV)-1至(IV-3)的一些实施方案中，Z2是-NR21-。
在式(IV-1)至(IV-3)的一些实施方案中，Z2是-C(R22)2-，其中每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。在式(IV-1)至(IV-3)的一些实施方案中，Z2是-CH2-。
在式(IV-1)至(IV-3)的一些实施方案中，Ra、Rb、Rc和Rd各自是H。
在式(IV-1)的一些实施方案中，Ra是H，并且Rb是F。在式(IV-1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是F。
在式(IV-2)的一些实施方案中，Rc是H。在式(IV-2)的一些实施方案中，Rc是F。
在式(IV-3)的一些实施方案中，Rd是H。在式(IV-3)的一些实施方案中，Rd是F。
在式(IV-1)和(IV-3)的一些实施方案中，W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)和–COOH或其盐。在式(IV-1)和(IV-3)的一些实施方案中，W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-1)和(IV-3)的一些实施方案中，W是COOH或其盐。
在式(IV-1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是F，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是H，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-1)的一些实施方案中，Ra是F，Rb是H，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。
在式(IV-1)至(IV-3)的一些实施方案中，Z2以α-构型连接至吡喃糖环的异头位置。在此类情况下，(IV-1)至(IV-3)的M6PR结合部分可以分别称为式(IV-A1)至(IV-A3)。
在式(IV-A1)至(IV-A3)的一些实施方案中，Z2是S。在式(IV-A1)至(IV-A3)的一些实施方案中，Z2是O。在式(IV-A1)至(IV-A3)的一些实施方案中，Z2是-CH2-。在式(IV-A1)至(IV-A3)的一些实施方案中，Z2是-CF2-。
在式(IV-A1)和(IV-A3)的一些实施方案中，W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)和–COOH或其盐。在式(IV-A1)和(IV-A3)的一些实施方案中，W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-A1)和(IV-A3)的一些实施方案中，W是COOH或其盐。
在式(IV-A1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是F，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-A1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是H，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-A1)的一些实施方案中，Ra是F，Rb是H，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。
在式(IV-1)至(IV-3)的一些实施方案中，Z2以β-构型连接至吡喃糖环的异头位置。本发明人证明了，包含具有β-糖苷构型的M6PR结合部分的化合物可以具有如与具有相应α-糖苷构型的缀合物相比至少等同的结合和/或细胞摄取活性。在一些实施方案中，如与具有β-糖苷构型的参考化合物相比，此类具有β-糖苷构型的M6PR结合部分可以提供增加的稳定性。因此，在式(IV)的一些实施方案中，M6PR结合部分(X)由式(IV-B1)至(IV-B3)之一描述：
其中Ra、Rb、Rc和Rd独立地是H或F。
在式(IV-B1)至(IV-B3)的一些实施方案中，Z2是S。在式(IV-B1)至(IV-B3)的一些实施方案中，Z2是O。在式(IV-B1)至(IV-B3)的一些实施方案中，Z2是-CH2-。在式(IV-B1)至(IV-B3)的一些实施方案中，Z2是-CF2-。
在式(IV-B1)和(IV-B3)的一些实施方案中，W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)和–COOH或其盐。
在式(IV-B1)和(IV-B3)的一些实施方案中，W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)和–COOH或其盐。在式(IV-B1)和(IV-B3)的一些实施方案中，W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-B1)和(IV-B3)的一些实施方案中，W是COOH或其盐。
在式(IV-B1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是F，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-B1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是H，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-B1)的一些实施方案中，Ra是F，Rb是H，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。
本发明人证明了，包含具有β-S-糖苷构型的M6PR结合部分的缀合物可以具有如与具有相应α-S-糖苷构型的缀合物或与具有α-O-糖苷构型的缀合物相比至少等同或更好的结合和/或细胞摄取活性。参见图19。
因此，在式(IV-B1)至(IV-B3)的一些实施方案中，M6PR结合部分(X)由式(IV-BS1)至(IV-BS3)之一描述：
其中Ra、Rb、Rc和Rd独立地是H或F。
在式(IV-BS1)至(IV-BS3)的一些实施方案中，Ra、Rb、Rc和Rd各自是H。
在式(IV-BS1)的一些实施方案中，Ra是H，并且Rb是F。在式(IV-BS1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是F。
在式(IV-BS2)的一些实施方案中，Rc是H。在式(IV-B2)的一些实施方案中，Rc是F。
在式(IV-BS3)的一些实施方案中，Rd是H。在式(IV-BS3)的一些实施方案中，Rd是F。
在式(IV-BS1)至(IV-BS3)的一些实施方案中，Z2是S。在式(IV-BS1)至(IV-BS3)的一些实施方案中，Z2是O。在式(IV-BS1)至(IV-BS3)的一些实施方案中，Z2是-CH2-。在式(IV-BS1)至(IV-BS3)的一些实施方案中，Z2是-CF2-。
在式(IV-BS1)和(IV-BS3)的一些实施方案中，W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)和–COOH或其盐。在式(IV-BS1)和(IV-BS3)的一些实施方案中，W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-BS1)和(IV-BS3)的一些实施方案中，W是COOH或其盐。
在式(IV-BS1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是F，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-BS1)的一些实施方案中，Ra和Rb各自是H，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。在式(IV-BS1)的一些实施方案中，Ra是F，Rb是H，并且W是–P＝O(OH)2或其盐。
在一些实施方案中，M6PR结合部分的甘露糖环或其类似物可以通过连接部分与附接在糖环的异头位置或1-位置处的Z2基团的附接而并入到本公开的化合物中。
在一些实施方案中，M6PR结合部分通过接头与附接至环状基团A的Z3基团的附接而并入到本公开的化合物中。应当理解，在式(III)的化合物中，附接至Z2的环状基团可以被视为M6PR结合部分(X)的一部分，并提供了希望的与M6PR的结合特性。
5.2.2.环状基团A
式(III)-(XIII)的A环状基团可以是单环或双环基团。感兴趣的双环基团可以是稠合的双环基团或含有两个经由共价键连接的单环的双环基团。式(III)-(XIII)的A环状基团可以是任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环(例如，饱和杂环)或任选取代的环烷基。
式(III)-(XIII)的A环状基团可以是单环芳基或单环杂芳基基团。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是5元单环杂芳基基团。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是6元单环芳基或杂芳基基团。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A可以是多环芳基或多环杂芳基基团，诸如双环芳基或双环杂芳基基团。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是稠合的双环基团。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是包含两个经由共价键连接的芳基和/或杂芳基单环的双环基团。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是具有两个6元环的双环芳基或双环杂芳基基团。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是具有一个经由共价键连接至或稠合至5元环的6元环的双环芳基或双环杂芳基基团。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A选自任选取代的苯基、任选取代的吡啶基、任选取代的联苯基、任选取代的萘、任选取代的喹啉、任选取代的三唑和任选取代的亚苯基-三唑。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A不是苯基(在式(III)的背景下还称之为亚苯基，例如，1,4-亚苯基)。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A被至少一个OH取代基取代。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A被1、2或更多个OH基团取代。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A被至少一个任选取代的(C1-C6)烷基取代。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是任选取代的1,4-亚苯基、任选取代的1,3-亚苯基或任选取代的2,5-亚吡啶基。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A选自：
其中：
R11至R14独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；并且
R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是任选取代的稠合双环芳基或任选取代的稠合双环杂芳基。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是任选取代的萘或任选取代的喹啉。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A选自：
其中：
R11和R13至R14独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；
s是0至3；并且
每个R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A选自：
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A是下式的任选取代的双环芳基或任选取代的双环杂芳基：
或其盐，其中：
Cy独立地是单环芳基或单环杂芳基；
R11至R15独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；
s是0至4；并且
每个R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
在一些实施方案中，当Cy是任选取代的苯基时，则A是下式的任选取代的联苯基：
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，A选自：
在一些实施方案中，当Cy是三唑时，则A选自：
在一些实施方案中，R11至R15中的至少一者是OH(例如，至少两者是OH)。
在一些实施方案中，R11至R15各自是H。
5.2.3.连接部分Z3
连接部分Z3可以是将接头L连接至环状环A的任何方便的连接部分。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是3个或更少个原子的主链。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3选自共价键、-O-、-NR23-、-NR23CO-、-CONR23-、-NR23CO2-、-OCONR23、-NR23C(＝X1)NR23-、-CR24＝N-、-CR24＝N-X2、-N(R23)SO2-和-SO2N(R23)-；其中X1和X2选自O、S和NR23；并且R23和R24独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是将A连接至L的共价键。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是任选取代的酰氨基、脲或硫脲。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是
/>
其中：
X1是O或S；
t是0或1；并且
每个R23独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基或乙基)和取代的C(1-3)-烷基。在Z3的一些实施方案中，X1是O。在Z3的一些实施方案中，X1是S。在Z3的一些实施方案中，t是0，并且X1是O，使得Z3是酰胺基。在Z3的一些实施方案中，t是1，使得Z3是脲或硫脲。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是-N(R23)SO2-或-SO2N(R23)-。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是-NHSO2-或-SO2NH-。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是-N(R23)CO-或-CON(R23)-。在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是-NHCO-或-CONH-。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是-NHC(＝X1)NH-，其中X1是O或S。在一些实施方案中，X1是O(即，Z3是-NHC(＝O)NH-)。在一些实施方案中，X1是S。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z3是任选取代的三唑。当Z3是任选取代的三唑时，它可以合成地衍生自化合物的含叠氮基前体和含炔烃前体的点击化学缀合作用。
在一些实施方案中，Z3与环状基团A和/或连接部分Z1组合地被选择成为X提供了希望的M6PR结合和内化特性。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，-A-Z3-选自：
/>
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，-A-Z3-选自：
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，-A-Z3-选自：
在式(II)-(XIb)的一些实施方案中，-A-Z3-选自：
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，-A-Z3-选自：
/>
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z2是O。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z2是S。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z2是-NR21-。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z2是-C(R22)2-，其中每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。在一些实施方案中，Z2是-CH2-。在一些实施方案中，Z2是-CHF-。在一些实施方案中，Z2是-CF2-。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，Z2-A-Z3-是
其中：
Z21是O、S或-C(R22)2-；
R16是OH或CH3；并且
w是0至4(例如，w是0、1或2)。
在一些实施方案中，Z21是S或O。在一些实施方案中，Z21是-CH2-。在一些实施方案中，Z21是-CHF-。在一些实施方案中，Z21是-CF2-。在一些实施方案中，R16是OH并且w是1。在一些实施方案中，R16是CH3并且w是1。在一些实施方案中，w是0。
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，-Z2-A-Z3-是：
在式(III)-(XII)的一些实施方案中，-Z2-A-Z3-是
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，-Z2-A-Z3-是
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，-Z2-A-Z3-是
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，-Z2-A-Z3-是
在式(III)-(XIII)的一些实施方案中，-Z2-A-Z3-是
5.2.4.示例性M6PR配体
表1中示出了式(I)-(XIII)的示例性M6PR结合部分X，其可以用于制备本公开的化合物和缀合物。
/>
/>
/>
/>
/>
表2中示出了示例性合成子或合成前体，其可以用于制备本公开的用于并入感兴趣的期望的M6PR结合部分的化合物。应当理解，替代合成子(包括表2中所示合成子的同系物和类似物)是可能的，这取决于所选择的M6PR结合部分和接头。应当理解，表2的合成子可以包括连接部分Z3的结构前体以及成为本公开的化合物和缀合物中接头(L)的一部分的结构元件。应当理解，根据表2的示例性合成前体，可以使用对应于表1中任何M6PR结合部分的合成子制备本公开的化合物。
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
表3中示出了感兴趣的其他M6PR结合部分及其合成子或合成前体。X101-X103示出具有磷酸酯/盐或硫代磷酸酯/盐头部基团的化合物。X109-X110示出式(V)的示例性化合物。在一些实施方案中，此类M6PR结合部分被用在用于评估评估式(XII)的化合物的参考化合物中。
/>
/>
5.2.5.含有M6PR结合部分的二糖
本公开的方面包括这样的式(I)的化合物和缀合物，其具有包含特定二甘露糖结构的M6PR结合部分，该二甘露糖结构具有连接至第二2,5-连接的吡喃糖环的第一吡喃糖环(例如，式(II)的吡喃糖环)，该第二2,5-连接的吡喃糖环进一步连接至接头。
图20示出了选定的细胞摄取活性，其图示了式(III)缀合物的化合物和具有特定二甘露糖M6PR结合部分的化合物之间的比较。各自具有带有连接至接头的2,5-连接吡喃糖环的M6PR结合化合物660或659的缀合物显示出比化合物520(I-7)的缀合物的缀合物强效以及与之相似的活性。
因此，本公开的方面包括式(XV)的细胞表面M6PR结合化合物：
或其前药、或其盐，其中：
W是不可水解的亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z4选自-Z14-、-Z14-A-、-A-和-CH2-Z14-，
Z14选自O、S、NR21和C(R22)2，其中R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
A是任选取代的环状基团(例如，任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、任选取代的环烷基)；
n是1至500；
m是1至500；
L是接头；并且
Y是感兴趣的部分。
在式(XV)的一些实施方案中，Z4是-CH2-Z14-，其中Z14选自O、S、NR21和C(R22)2。
在式(XV)的一些实施方案中，Z4是-CH2-A-。
在式(XV)的一些实施方案中，Z4是-A-。
在式(XV)的一些实施方案中，A是环状基团(例如，任选取代的芳基、任选取代的杂芳基，例如，如上文针对式(III)所述)。在式(XV)的一些实施方案中，A是如上文在式(III)中所定义的环状基团。
在式(XV)的一些实施方案中，A是三唑。
在式(XV)的一些实施方案中，Z4是其中“*”表示与接头L的连接。
式(XV)的M6PR结合部分可以适用于如本文所述的多种化合物和缀合物。
在式(XV)的一些实施方案中，m是1至100，诸如1-5、5-10、10-20、10-100、20-80或20-50。在式(XV)的一些实施方案中，m是1、2、3、4或5。
5.2.6.前药
本公开的方面包括本文所述的并入到本公开的化合物和缀合物中的任何M6PR结合部分的前药。
术语“前药”是指这样的剂，其在体内被一些生理或化学过程转化为药物(例如，前药在达到生理pH值时被转化为期望药物形式)。
本文所述的任何M6PR结合部分的前药形式都可能是有用的，因为例如作为所得化合物或缀合物在身体内的半衰期延长或所需活性剂量减少的结果，可以引起特定的治疗益处。
前药在一些情况下也可能是有用的，因为它们可能比母体药物更容易施用。它们可能例如通过经口施用而具有可生物利用性，而母体药物则不能如此。与母体药物相比，前药在药物组合物中也可能具有改善的溶解度。
M6PR结合部分的前药衍生物通常包含位于该化合物的合适的不稳定位点(例如式(II)的吡喃糖环的羟基基团)处的引入部分(promoiety)取代基。引入部分是指当前药在体内转化为药物时被酶促或化学反应移除的基团。例如，引入部分可以是经由酯键联附接至化合物的羟基基团的任选取代的烷基酰基基团。示例性烷基酰基引入部分基团包括乙酰基。在一些实施方案中，吡喃糖糖环的羟基基团中的一个或多个羟基基团的前药衍生物可被并入到化合物中。例如，酯引入部分可在糖环的2、3和/或4个位置处的一个或多个羟基基团处并入。
在一些实施方案中，亲水性头部基团(W)的前药衍生物可被并入到本公开的M6PR结合部分和化合物中。例如，酯引入部分可被并入到膦酸酯/盐或硫代膦酸酯/盐头部基团上，或者酯引入部分可被并入到羧酸或丙二酸头部基团上。
5.3.接头
术语“接头”、“连接部分”和“连接基团(linking group)”可互换使用，是指共价连接两个或更多个部分或化合物的连接部分，诸如M6PR结合部分和其他感兴趣的部分。在一些情况下，接头是二价的并连接两个部分。在某些情况下，接头是三价或更高多价的支链连接基团。在一些情况下，连接两个或更多个部分的接头具有500个原子或更少(诸如400个原子或更少、300个原子或更少、200个原子或更少、100个原子或更少、80个原子或更少、60个原子或更少、50个原子或更少、40个原子或更少、30个原子或更少、或甚至20个原子或更少)长度的直链或支链主链，例如，如在两个或更多个部分之间测量的。连接部分可以是连接两个基团的共价键或长度在1到500个原子之间的直链或支链，例如长度约1、2、3、4、5、6、8、10、12、14、16、18、20、30、40、50、100、150、200、300、400或500个碳原子，其中接头可以是直链、支链、环状或单个原子。在某些情况下，接头主链的一个、两个、三个、四个、五个或更多、十个或更多或甚至更多碳原子可任选地被杂原子例如硫、氮或氧杂原子取代。在某些情况下，当接头包括PEG基团时，接头主链的该区段的每三个原子被氧取代。主链原子之间的键可以是饱和的或不饱和的，通常在接头主链中将存在不超过一个、两个或三个不饱和键。接头可包括一个或多个例如烷基、芳基或烯基基团的取代基基团。接头可包括但不限于以下的一种或多种：寡聚(乙二醇)、醚、硫醚、二硫醚、酰胺、碳酸酯、氨基甲酸酯、叔胺、烷基，它们可以是直链的或支链的，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)等。接头主链可以包括环状基团，例如芳基、杂环、环烷基或杂环基，其中在主链中包含环状基团的2个或更多个原子，例如2、3或4个原子。
在一些实施方案中，“接头”或连接部分衍生自具有两个反应性末端的分子，一个反应性末端用于缀合至感兴趣的部分(Y)，例如生物分子(例如，抗体)，而另一个反应性末端用于缀合至结合到细胞表面M6PR的部分(记为X)。当Y是多肽时，接头的多肽缀合反应性末端在某些情况下是能够通过多肽上的半胱氨酸硫醇或赖氨酸胺基团缀合至多肽的位点，因此可以是硫醇反应性基团例如马来酰亚胺或二溴马来酰亚胺，或如本文所定义，或胺反应性基团，如活性酯(例如，五氟苯基酯或四氟苯基酯或NHS酯)，或如本文所定义。
在本文所述式的某些实施方案中，接头L包含一个或多个直链或支链碳部分和/或聚醚(例如，乙二醇)部分(例如，-CH2CH2O-的重复单元)，和它们的组合。在某些实施方案中，这些接头任选地具有酰胺键联、脲或硫脲键联、氨基甲酸酯键联、酯键联、氨基键联、醚键联、硫醚键联、硫醇键联或其他杂官能键联。在某些实施方案中，接头包含碳原子、氮原子、硫原子、氧原子及其组合中的一种或多种。在某些实施方案中，接头包含醚键、硫醚键、胺键、酰胺键、碳-碳键、碳-氮键、碳-氧键、碳-硫键及其组合中的一种或多种。在某些实施方案中，接头包含直链结构。在某些实施方案中，接头包含支链结构。在某些实施方案中，接头包含环状结构。
在某些实施方案中，L的长度介于约10和约20/>之间。在某些实施方案中，L的长度介于约15/>和约20/>之间。在某些实施方案中，L的长度为约15/>在某些实施方案中，L的长度为约16/>在某些实施方案中，L的长度为约17/>
在某些实施方案中，L是介于约5和约500/>之间的接头。在某些实施方案中，L介于约10/>和约400/>之间。在某些实施方案中，L介于约10/>和约300/>之间。在某些实施方案中，L介于约10/>和约200/>之间。在某些实施方案中，L介于约10/>和约100/>之间。在某些实施方案中，L介于约10/>和约20/>之间、介于约20/>和约30/>之间、介于约30/>和约40/>之间、介于约40/>和约50/>之间、介于约50/>和约60/>之间、介于约60/>和约70/>之间、介于约70/>和约80/>之间、介于约80/>和约90/>之间、或介于约90/>和约100/>之间。在某些实施方案中，L是介于5/>和约500/>之间的接头，其包含与细胞表面M6PR结合部分(X)连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基(heteroarylene)、与X连接的任选取代的亚杂环基(heterocyclene)或与X连接的任选取代的亚环烷基(cycloalkylene)。在某些实施方案中，L是介于10/>和约500/>之间的接头，其包含与细胞表面M6PR结合部分(X)连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚杂环基或与X连接的任选取代的亚环烷基。在某些实施方案中，L是介于10/>和约400/>之间的接头，其包含与细胞表面M6PR结合部分(X)连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚杂环基或与X连接的任选取代的亚环烷基。在某些实施方案中，L是介于10/>和约200/>之间的接头，其包含与细胞表面M6PR结合部分(X)连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚杂环基或与X连接的任选取代的亚环烷基。
在某些实施方案中，L将细胞表面M6PR结合部分(Y)和Y(或Z)分隔开包含至少10个连续原子的主链。在某些情况下，该主链为至少12个连续原子。在某些情况下，该主链为至少14个连续原子。在某些情况下，该主链为至少16个连续原子。在某些情况下，该主链为至少18个连续原子。在某些情况下，该主链为至少20个连续原子。在某些情况下，该主链为至少22个连续原子。在某些情况下，该主链为至少24个连续原子。在某些情况下，该主链为至少26个连续原子。在某些情况下，该主链为至少28个连续原子。在某些情况下，该主链为至少30个连续原子。在某些情况下，该主链为至少32个连续原子。在某些情况下，该主链为至少34个连续原子。在某些情况下，该主链为至少36个连续原子。在某些情况下，该主链为至少38个连续原子。在某些情况下，该主链为至少40个连续原子。在某些情况下，该主链为至多50个连续原子。在某些情况下，该主链为至多60个连续原子。在某些情况下，该主链为至多70个连续原子。在某些情况下，该主链为至多80个连续原子。在某些情况下，该主链为至多90个连续原子。在某些情况下，该主链为至多100个连续原子。
在某些实施方案中，接头L将细胞表面M6PR结合部分(X)和Y(或Z)分隔开4至500个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开4至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开6至50个连续原子的链、11至50个连续原子的链、16至50个连续原子的链、21至50个连续原子的链、26至50个连续原子的链、31至50个连续原子的链、36至50个连续原子的链、41至50个连续原子的链或46至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开6至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开11至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开16至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开21至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开26至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开31至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开36至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开41至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开46至50个连续原子的链。
在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开4或5个连续原子的链、6至10个连续原子的链、11至15个连续原子的链、16至20个连续原子的链、21至25个连续原子的链、26至30个连续原子的链、31至35个连续原子的链、36至40个连续原子的链、41至45个连续原子的链或46至50个连续原子的链。
在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z)分隔开50或55个连续原子的链、56至60个连续原子的链、61至65个连续原子的链、66至70个连续原子的链、71至75个连续原子的链、76至80个连续原子的链、81至85个连续原子的链、86至90个连续原子的链、91至95个连续原子的链或96至100个连续原子的链。
在某些实施方案中，接头L是5至500个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚杂环基、或任选与X连接的取代的亚环烷基。在某些实施方案中，接头L是7至500个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚杂环基、或任选与X连接的取代的亚环烷基。在某些实施方案中，接头L是10至500个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚杂环基、或任选与X连接的取代的亚环烷基。在某些实施方案中，接头L是15至400个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚杂环基、或任选与X连接的取代的亚环烷基。
在某些实施方案中，接头L是5至500个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚芳基、或与X连接的任选取代的亚杂芳基。在某些实施方案中，接头L是7至500个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚芳基、或与X连接的任选取代的亚杂芳基。在某些实施方案中，接头L是10至500个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚芳基、或与X连接的任选取代的亚杂芳基。在某些实施方案中，接头L是15至400个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚芳基、或与X连接的任选取代的亚杂芳基。
在某些实施方案中，接头L是5至500个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚苯基。在某些实施方案中，接头L是7至500个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚苯基。在某些实施方案中，接头L是10至500个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚苯基。在某些实施方案中，接头L是15至400个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚苯基。
在某些实施方案中，接头L是16至400个连续原子的链，其将X和Y(或Z)分隔开并且其包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚杂环基，或与X连接的任选取代的亚环烷基。
应当理解，接头可被视为直接连接至M6PR结合部分(X)的Z3或Z4基团(例如，如本文所述)。在式(III)或(V)的一些实施方案中，接头可被视为直接连接至Z3或Z4基团。替代地，接头式的-Z3-L1-基团或-Z4-L1-(例如，如本文所述)可被视为连接Z3或Z4至Y的连接部分的一部分。本公开旨在包括M6PR结合部分(X)和接头(L)的所有此类构型。
在式(XI)-(XIII)的一些实施方案中，L是式(VII)的接头：
其中
L1和L3独立地是接头，并且L2是支链连接部分，其中L1至L3一起提供介于X和Y之间的直链或支链接头；
a、b和c独立地是0或1；
**代表X经由Z1与L1的附接点；并且
***代表与Y的附接点；
其中：
当n是1时，a是1，并且b是0；
当n是>1时，a是1，并且b是1。
在式(VII)的接头的某些实施方案中，L1至L3各自独立地包含一个或多个独立地选自以下的连接部分：–C1-20-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、–NH C1-6-亚烷基–、–NHCONH-C1-6-亚烷基–、–NHCSNH-C1-6-亚烷基–、–C1-6-亚烷基–NHCO-、–C1-6-亚烷基–CONH-、–C1-6-亚烷基–NH-、–C1-6-亚烷基–NHCONH-、–C1-6-亚烷基–NHCSNH-、-O(CH2)p–、–(OCH2CH2)p–、–NHCO–、–CONH–、–NHSO2–、–SO2NH–、–CO–、–SO2–、–O–、–S–、单环杂芳基(例如，1,2,3-三唑)、单环芳基(例如，苯基，例如，1,4-连接的苯基或1,3-连接的苯基)、单环杂环(例如，如本文所述的吡咯烷-2,5-二酮、哌嗪或哌啶环)、氨基酸残基(天然或非天然存在的氨基酸残基)、–NH–和–NMe–，其中每个p独立地是1至50。
在式(VII)的接头的某些实施方案中，L1-L3中的任一者都包含重复乙二醇部分(例如，-CH2CH2O-或-OCH2CH2-)。在某些情况下，式(VII)的接头包含1至25个乙二醇部分，诸如3至25个、5至25个、7至25个、10至25个、15至25个、17至25个、20至25个或22至25个乙二醇部分。在一些情况下，式(VII)的接头包含3个或更多个乙二醇部分，诸如5个或更多个、7个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、或甚至更多个乙二醇部分。
在式(VII)的接头的某些实施方案中，L1-L3中的任一者都包含一个或多个三唑连接部分。在一些情况下，接头包含一个或多个1,2,3-三唑连接部分。在某些情况下，所述一个或多个1,2,3-三唑部分选自以下结构之一：
其中w1、u1和q1独立地是1至25(例如，1至12，诸如1至6)。
在式(VII)的接头的某些实施方案中，n是1，使得b是0，并且接头具有式(VIIa)：
其中
L1和L3独立地是接头(例如，如本文所述)，其中L1至L3一起提供介于X和Y之间的直链接头；
a是1；
c为0或1；
**代表X经由Z1与L1的附接点；并且
***代表与Y的附接点。
在式(VIIa)的接头的某些实施方案中，直链接头具有经由Z1将X共价连接至Y的20个或更多个连续原子(诸如25个或更多个连续原子或30个或更多个连续原子，并且在一些情况下，至多100个连续原子)的主链。在式(VIIa)的某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开20至50个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头L将X和Y(或Z1)分隔开21至50个连续原子的链、22至50个连续原子的链、23至50个连续原子的链、24至50个连续原子的链、25至50个连续原子的链、26至50个连续原子的链、27至50个连续原子的链、28至50个连续原子的链或29至50个连续原子的链。在式(VIIa)的某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开30至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开31至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开32至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开33至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开34至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开35至50个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开36至50个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开41至50个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开46至50个连续原子的链。
在式(VII)的某些其他实施方案中，n为2或更大，使得L1至L3一起提供介于X和Y之间的支链接头。
在式(VII)的某些实施方案中，n为2或更大，并且L2选自：
其中每个x和y独立地是1至10。
在式(VII)的某些实施方案中，L1-L2包含介于X和支链原子之间的14个或更多个连续原子的主链，诸如介于X和支链原子之间的14至50个、14至40个、14至35个或14至30个连续原子的主链。
在式(VII)或(VIIa)的某些实施方案中，L3包含10至80个连续原子诸如12至70个、12至60个或12至50个连续原子的主链。
在式(VII)或(VIIa)的某些实施方案中，其中L3包含选自(C10-C20-亚烷基(例如，C12-亚烷基)或–(OCH2CH2)p–的连接部分，其中p是1至25，诸如3至25、5至24、7至25、10至25、15至25或20至24。
在某些实施方案中，L具有式(VIIb)：
/>
其中每个L1至L5独立地是连接部分，其一起提供Z1和Y之间的直链或支链接头；
a、b、c、d和e各自独立地是0、1或2；
**代表X经由Z1与L1的附接点；并且
***代表与Y的附接点；
其中：
当n是1时，a是1，并且c是0；并且
当n是>1时，a是1，并且c是1。
在式(VIIb)的接头的某些实施方案中，L1至L3各自独立地包含一个或多个独立地选自以下的连接部分：–C1-20-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、–NH C1-6-亚烷基–、–NHCONH-C1-6-亚烷基–、–NHCSNH-C1-6-亚烷基–、–C1-6-亚烷基–NHCO-、–C1-6-亚烷基–CONH-、–C1-6-亚烷基–NH-、–C1-6-亚烷基–NHCONH-、–C1-6-亚烷基–NHCSNH-、-O(CH2)p–、–(OCH2CH2)p–、–NHCO–、–CONH–、–NHSO2–、–SO2NH–、–CO–、–SO2–、–O–、–S–、单环杂芳基(例如，1,2,3-三唑)、单环芳基(例如，苯基，例如，1,4-连接的苯基或1,3-连接的苯基)、单环杂环(例如，如本文所述的吡咯烷-2,5-二酮、哌嗪或哌啶环)、氨基酸残基(天然或非天然存在的氨基酸残基)、–NH–和–NMe–，其中每个p独立地是1至50。
在式(VIIb)的某些实施方案中，-(L1)a-包含任选取代的烷基或乙二醇连接部分。在某些情况下，L1包含任选取代的-C1-6-亚烷基–。在某些情况下，L1包含乙二醇连接部分。
在式(VIIb)的某些实施方案中，L1独立地选自：
-C1-6-亚烷基–、–(CH2CH2O)t–、–-C1-6-亚烷基-NR4CO–、–C1-6-亚烷基CONH–或OCH2，其中t是1至20；并且R4独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。在某些情况下，L1是-C1-6-亚烷基–，诸如-C1-3-亚烷基–。在某些情况下，L1是––(CH2CH2O)t–，其中t是1至20，诸如1至15、1至10、1至8、1至6或1至4。在某些情况下，L1是-C1-6-亚烷基-NR4CO–。在某些情况下，L1是–C1-6-亚烷基CONH–。在某些情况下，L1是或OCH2。
在式(VIIb)的一些实施方案中，一个或多个L1独立地是–CH2O–；–(CH2CH2O)t–、–NR4CO–、-C1-6-亚烷基–、
其中：R13选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R21)2、-OCOR21、-COOR21、-CONHR21和-NHCOR21；
每个r独立地是0至20，并且任何L1部分任选地进一步被取代。
在式(VIIb)的某些实施方案中，L2独立地选自：
–NR4CO-C1-6-亚烷基–、–CONR4-C1-6-亚烷基、
-OCH2-和–(OCH2CH2)q–，其中q是1至10，u是0至10，w是1至10，并且R4独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。在某些情况下，L2是–NR4CO-C1-6-亚烷基–。在某些情况下，L2是–CONR4-C1-6-亚烷基–。
在某些情况下，L2是其中w是1，并且u是0或1。
在某些情况下，L2是其中w是1，并且u是0或1。
在某些情况下，L2是其中w是1，u是0或1，并且q是1。
在某些情况下，L2是其中u是0或1。
在某些情况下，L2是
在某些实施方案中，L2是-OCH2-。在某些其他实施方案中，L2是(OCH2CH2)q–，并且q是1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2。在某些情况下，q是2至8，诸如2至6、4至6或2至4。
在式(VIIb)的某些实施方案中，L4不存在或独立地选自-C1-6-亚烷基–、–(CH2CH2O)t–、-C1-6-亚烷基-NHCO–、–C1-6-亚烷基CONH–或OCH2，其中t是1至20。在某些情况下，L4不存在。在某些情况下，L4是-C1-6-亚烷基–。在某些情况下，L4是–(CH2CH2O)t–，其中t是1至20，诸如1至15、1至12、1至10、1至8、1至6、1至4或1至3。在某些情况下，L4是-C1-6-亚烷基-NHCO–。在某些情况下，L4是–C1-6-亚烷基CONH–。在某些情况下，L4是OCH2。
在主题化合物的一些实施方案中，n是1，并且式(VIIb)中的L3不存在。
在主题化合物的某些实施方案中，n是2或更大，并且式(VIIb)中的L3是支链连接部分。
因此，在式(VIIb)的一些实施方案中，L3是支链连接部分，例如，三价连接部分。例如，L3连接部分可以具有以下通式之一：
在式(VIIb)的一些实施方案中，支链连接部分可以具有较高的价态，并且由以下通式之一描述：
等。
其中任何两个L3基团可以直接连接或经由任选的直链连接部分(例如，如本文所述)连接。
在式(VIIb)的一些实施方案中，支链连接部分可以包括一个、两个或更多个L3连接部分，每个均是三价部分，它们在被连接在一起时可以为配体的共价附接提供多个支化点并且可由以下通式之一描述：
其中t为0至500，诸如0至100、0至20或0至10。
在一些实施方案中，支链连接部分(例如，L3)包含以下中的一种或多种：氨基酸残基(例如，Asp、Lys、Orn、Glu、Ser)、N-取代的酰胺基(-N(-)C(＝O)-)、叔氨基、多元醇(例如，O-取代的甘油)等。
在式(VIIb)的一些实施方案中，一个或多个L3是选自 />
的支链部分，
其中每个x和y各自独立地是1至10，诸如1-6、1-3，例如1或2。在一些情况下，每个x是1、2或3，例如2。
在式(VIIb)的一些实施方案中，一个或多个L1独立地是–CH2O–；–(CH2CH2O)t–、–NR4CO–、-C1-6-亚烷基–、
其中：R13选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R21)2、-OCOR21、-COOR21、-CONHR21和-NHCOR21；
每个r独立地是0至20，并且任何L5部分任选地进一步被取代。
在某些情况下，L5是–CH2O–。在某些情况下，L5是–(CH2CH2O)t–，其中t是1至20，诸如1-15、1-12、1-10、1-8、1-6或1至4。在某些情况下，L5是–NR4CO–，其中R4是H或任选取代的(C1-C6)烷基。在某些情况下，L5是-C1-6-亚烷基–。
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5，并且R13是H或任选取代的(C1-C6)烷基。/>
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5，并且R13是H或任选取代的(C1-C6)烷基。
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5，并且R13是H或任选取代的(C1-C6)烷基。
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5，并且R13是H或任选取代的(C1-C6)烷基。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在式(VIIb)的某些实施方案中，a是1。在某些情况下，b、c、d和e中的至少一者不是0。在某些情况下，b是1或2。在某些情况下，c是1或2。在某些情况下，e是1或2。在某些情况下，b、d和e独立地是1或2。在某些情况下，a、b、d和e各自是1，并且c是0。
在式(VIIb)的一些实施方案中，L5包含以下中的一者或多者：氨基酸残基(例如，Asp、Lys、Orn、Glu、Ser)、氨基酸类似物、N-取代的酰胺基(-N(-)C(＝O)-)、叔氨基、多元醇(例如，O-取代的甘油)等。氨基酸的类似物包括但不限于不饱和氨基酸以及本领域已知的其他修饰。氨基酸包括L-氨基酸、D-氨基酸或两者，并且可以包括本领域已知的多种氨基酸修饰或类似物中的任何一种。
在式(VIIb)的一些实施方案中，L1-L5包含以下单元中的一种或多种：
其中Ra是(C1-C6)烷基或取代的(C1-C6)烷基，例如，任选被胺取代的(C1-C6)烷基、叔胺、任选取代的烷氧基、任选取代的羧基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。应当理解，Ra可以与M6PR结合部分连接。
在式(VIIb)的某些实施方案中，a是1。在某些情况下，b、c、d和e中的至少一者不是0。在某些情况下，b是1或2。在某些情况下，c是1或2。在某些情况下，e是1或2。在某些情况下，b、d和e独立地是1或2。在某些情况下，a、b、d和e各自是1，并且c是0。
在式(VII)、(VIIa)或(VIIb)的某些实施方案中，接头包含20至100个连续原子，诸如20至90个、20至80个、20至70个、20至60个、20至50个、20至40个，或20至30个连续原子。在某些情况下，接头包含25至100个连续原子，诸如30至100个、35至100个、40至100个、45至100个、50至100个、55至100个、60至100个、65至100个、70至100个、75至100个、80至100个、85至100个、90至100个，或95至100个连续原子。
在式(VII)、(VIIa)或(VIIb)的某些实施方案中，接头包含25或更多个连续原子，诸如26个或更多个、27个或更多个、28个或更多个、29个或更多个，或30个或更多个连续原子。在式(VII)、(VIIa)或(VIIb)的某些实施方案中，接头包含30个或更多个连续原子，诸如31个或更多个、32个或更多个、33个或更多个、34个或更多个、35个或更多个、36个或更多个、37个或更多个、38个或更多个、39个或更多个、40个或甚至更多个连续原子。
在其中式(VII)或(VIIb)的接头为支链接头的某些实施方案中，该接头的每个分支包含14个或更多个连续原子的直链接头，以经由Z1将每个X部分共价连接至该接头的支化点。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的15个或更多个连续原子的直链接头。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的16个或更多个连续原子的直链接头。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的18个或更多个连续原子的直链接头。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的20个或更多个连续原子的直链接头。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的22个或更多个连续原子的直链接头。
在式(VII)或(VIIb)的某些实施方案中，接头是包含经由Z1将每个X部分共价连接至接头的支化点的分支的支链接头和将支化点共价连接至Y的直链接头。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是12个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是15个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是20个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是25个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是30个或更多个连续原子。
在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是40个或更多个连续原子。
在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是50个或更多个连续原子。
在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是60个或更多个连续原子。
在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是70个或更多个连续原子。
在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是80个或更多个连续原子。
在一些实施方案中，接头包括多肽支架，其中氨基酸残基的一些或全部侧链基团已被修饰成附接M6PR结合部分(例如，如本文所述)。应当理解，M6PR结合部分(例如，如本文所述)可以经由方便的缀合化学与含有多肽的接头的氨基酸残基诸如Asp、Lys、Orn、Glu和Ser缀合。在一些实施方案中，接头含有聚赖氨酸多肽。在一些实施方案中，接头含有聚鸟氨酸多肽。在一些实施方案中，接头含有聚丝氨酸多肽。在一些实施方案中，接头含有聚天冬氨酸多肽。该多肽可以是具有平均长度的随机聚合的聚合物或例如以受控分步方式制备的限定长度的聚合物。在一些情况下，多肽接头区段具有10-100个氨基酸残基诸如20-90个或20-50个氨基酸残基的长度。在一些实施方案中，多肽接头区段的N末端或C末端被修饰成包含连向另外的M6PR结合部分的连接单元(例如，如本文所述)。在一些实施方案中，多肽接头区段的N末端或C末端被修饰成具有一个或多个适合于与感兴趣的Y部分附接的连接单元(例如，如本文所述)。
在一些实施方案中，接头包含式(VIIIa)或(VIIIb)的支架：
其中：
L0是连接部分(例如，一个或多个氨基酸残基)、连接的M6PR结合部分、任选取代的烷基或任选取代的芳基或杂芳基；
Ra是(C1-C6)烷基或取代的(C1-C6)烷基(例如，任选被胺取代的(C1-C6)烷基、叔胺、任选取代的烷氧基、任选取代的羧基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基)、氨基酸侧链基团(例如，赖氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、鸟氨酸等)的衍生物，或连接的M6PR结合部分；
r是1-10(例如，r是1-5)；
t是1-11(例如，t是1-5)；
u是0-5(例如，u是0、1或2)；并且
s是1-50(例如，s是1-20、1-10或1-5)。
应当理解，式(VIIIa)-(VIIIb)的C末端羧酸基团可以提供与进一步的连接部分(例如，一个或多个氨基酸残基)和/或感兴趣的部分(Y)(例如，如本文所述)的偶联(例如，经由化学选择性连结基团)。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，r是1-3。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3-11，诸如3-5。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，s是至少2。在式(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，s是2-10，诸如2-5，例如2或3。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，r是1-3，t是3-5，u是0或1，并且s是2-5(例如，2或3)。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是1，r是1，并且u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是1，r是1，并且u是0。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是1，r是2，并且u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是1，r是2，并且u是0。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是1，r是3，并且u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是1，r是3，并且u是0。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是2，r是1，并且u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是2，r是1，并且u是0。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是2，r是2，并且u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是2，r是2，并且u是0。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是2，r是3，并且u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是2，r是3，并且u是0。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是3，r是1，并且u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是3，r是1，并且u是0。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是3，r是2，并且u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是3，r是2，并且u是0。
在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是3，r是3，并且u是1。在(VIIIa)或(VIIIb)的一些实施方案中，t是3，s是3，r是3，并且u是0。
5.3.1.示例性接头和连接部分
表4-6中示出了可以用于制备本公开的化合物的示例性接头和连接部分(例如，将M6PR结合部分(X)连接至式(XI)-(XV)中感兴趣的部分(Y)的示例性接头和连接部分)。
在某些实施方案中，接头包含如表4中所示的直链接头或连接部分。在某些实施方案中，接头包含如表5中所示的直链接头或连接部分。在某些实施方案中，接头包含如表6中所示的直链接头或连接部分。应当理解，针对示例性连接部分的各种末端修饰可基于化合物的制备中使用的合成程序和/或缀合化学来并入。
表4示出了可用于本文所述的化合物的多种示例接头或连接部分。在式(XI)-(XV)的一些实施方案中，所述化合物包含表4中列出的接头或连接部分中的任一种。
/>
/>
/>
/>
/>
表6列出了被用于例如经由缀合化学制备本公开的化合物的接头组分的示例性合成前体。应当理解，本公开还涵盖表6中所示的结构的多种同系物，其提供了多种长度的接头。应当理解，还可以根据需要并入替代的化学选择性连结基团和其他化学官能团以制备期望的接头。
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
5.4.化学选择性连结基团
在式(XI)-(XV)的某些实施方案中，Y是化学选择性连结基团或其前体。化学选择性连结基团是具有能够与第二部分的相容性基团缀合的反应性功能团(functionality)或官能基团的基团。例如，化学选择性连结基团(或其前体)可以是与缀合化学相关的一对基团中的一个，所述缀合化学诸如叠氮基-炔烃点击化学、无铜点击化学、Staudinger连结、四嗪连结、肼-异-Pictet-Spengler(HIPS)连结、半胱氨酸反应性连结化学(例如，硫醇-马来酰亚胺、硫醇-卤代乙酰胺或炔烃硫氢醇化(hydrothiolation))、胺活性酯偶联、酪氨酸特异性缀合化学(例如，e-Y-CLICK)、甲硫氨酸特异性缀合化学(例如，基于氧杂吖丙丙啶(oxaziridine)的或ReACT化学)、还原性胺化、芳酸二烷基酯化学等。
表6列出了用于制备本公开的化合物并且具有各种化学选择性连结基团的接头组分的示例性合成前体。还可以根据需要并入多种其他化学官能团以制备期望的接头。
可用于连接两个部分的化学选择性连结基团包括但不限于氨基(例如多肽的N-末端氨基或赖氨酸侧链基团)、叠氮基、芳基叠氮、炔基(例如乙炔基或环辛炔或衍生物)、活性酯(例如，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯、磺基-NHS酯或PFP酯或硫酯)、卤代乙酰胺(例如，碘乙酰胺或溴乙酰胺)、氯乙酰、溴乙酰、酰肼、马来酰亚胺、乙烯基砜、2-磺酰基吡啶、氰基-炔烃、硫醇(例如，半胱氨酸残基)、二硫化物或受保护的硫醇、异氰酸酯、异硫氰酸酯、醛、酮、烷氧基胺、酰肼、氨氧基、膦、HIPS肼基-吲哚基或氮杂-HIPS肼基-吡咯并吡啶基、四嗪、环辛烯、方酸等。
在一些情况下，当两个基团在合适的条件(例如，无铜点击化学条件)下接触时，化学选择性连结基团能够自发缀合至相容的化学基团。在一些情况下，当两个基团在催化剂或其他试剂(例如，铜催化的点击化学条件)的存在下接触时，化学选择性连结基团能够与相容的化学基团缀合。
在一些实施方案中，化学选择性连结基团是光活性连结基团。例如，在用紫外线照射时，二氮丙啶基团可以形成反应性卡宾，其可以插入第二部分的C-H、N-H和O-H键中。
在一些情况下，Y是能够与第二部分的相容基团缀合的反应性功能团或官能基团的前体。例如，羧酸是活性酯化学选择性连结基团的前体。
在某些实施方案中，Y是能够形成连向多肽的共价键(例如，与具有相容反应性基团的多肽的氨基酸侧链)的反应性部分。反应性部分可以称为化学选择性连结基团。
可适用于本公开的化合物的示例性化学选择性连结基团及其合成前体示于表6B中。
/>
/>
在表6B中，可以代表Y与连接部分或连接的X部分(例如，M6PR结合部分)的附接点。
5.5.缀合物
本公开的方面包括例如式(XIII)的本文所述化的合物的缀合物，其中Y是具有另一个感兴趣部分的化学选择性连结基团。当制备此类缀合物时，一个或多个M6PR配体-接头化合物可以附接或缀合到另一个感兴趣部分。例如，当感兴趣部分是生物分子时，M6PR配体-接头化合物的化学选择性连结基团可以在该生物分子的一个或几个位点处缀合。应当理解，式(XI)、(XII)和(II)-(III)以及下面描述的的式可以涵盖本公开的此类生物分子缀合物。
在一些实施方案中，本公开的缀合物由式(XII)：
或其前药、或其盐(例如，药学上可接受的盐)描述，其中：
W是不可水解的亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z2选自O、S、NR21和C(R22)2，其中每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
每个A独立地是环状基团(例如，任选取代的芳基或杂芳基连接部分)；
每个Z3独立地是连接部分；
n是1至500；
m是1至100；
L是接头；并且
Y是生物分子。
在式(XII)的一些实施方案中，当A是苯基并且Z2是O时，则：
(i)W是-P(O)(OH)2；或
(ii)所述接头L包含至少16个连续原子的主链并且Y是靶结合部分。
在(XII)的一些实施方案中，细胞表面甘露糖-6-磷酸酯受体(M6PR)结合缀合物具有式(XIIa)：
在(XII)的一些实施方案中，细胞表面甘露糖-6-磷酸酯受体(M6PR)结合缀合物具有式(XIIa)：
在一些实施方案中，M6PR结合部分所连接至的感兴趣部分是生物分子。在一些实施方案中，该感兴趣部分是生物分子。在一些实施方案中，该生物分子选自多肽(例如，肽或蛋白质)、多核苷酸、多糖、聚糖、糖蛋白质、脂质、酶、抗体和抗体片段。
在一些实施方案中，感兴趣部分Y选自小分子、小分子药物、化疗剂、细胞毒性剂、诊断剂、染料、荧光团等。在一些实施方案中，m是1，其中一个M6PR结合部分与Y连接。
在一些实施方案中，一个Y生物分子经由接头L与特异性地结合到细胞表面M6PR的单个部分(X)缀合。在一些实施方案中，一个Y生物分子与一个(Xn-L)-基团缀合，其中当n＝1时，(Xn-L)-基团称为单价基团，并且当n>1时，(Xn-L)-基团称为多价基团(例如，二价、三价等)。应当理解，在本文所述的式的一些实施方案中，其中Y是生物分子，Y可以缀合到两个或更多个(Xn-L)-基团，其中每个(Xn-L)-基团本身可以是单价的或多价的(例如，二价、三价等)。在此类情况下，连接的(Xn-L)-基团与生物分子的比率可以是为2或更大。
在式(XII)的一些实施方案中，缀合物是由式(XIII)的化合物(其中Y是化学选择性连结基团)与生物分子的缀合而产生，其中缀合物具有式(XXI)：
或其前药、或其药学上可接受的盐，其中：
n是1至3；
m是1至20的负载(loading)；
L是接头；
P是特异性地结合靶蛋白质的生物分子；
Z5是由位于式(XIII)的接头末端处的化学选择性连结基团与P的相容基团的共价键联产生的残基连接部分(residual linking moiety)。在式(XXI)的一些实施方案中，Z2以β构型连接到吡喃糖环的异头位置。根据使用的化学选择性连结基团和缀合化学，m可以是平均负载(本文中也称为DAR)，或者m可以是特定负载(例如，m是1或2)。
在式(XXI)的一些实施方案中，缀合物具有式(XXIa)：
在式(XXI)的一些实施方案中，缀合物具有式(XXIa)：
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是1。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是2。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是3。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是4。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是5或更大，诸如n是5至500、5至100、5至50、5至20或5至10。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是5。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是10至100，诸如10-50、10-20或20-50。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，L包括多肽，诸如聚赖氨酸或聚丝氨酸衍生物。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，L是含有多肽的接头，其中多肽的每个氨基酸残基有一个M6PR结合部分(X)附接至L。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是生物分子P上M6PR结合部分(X)的平均负载。例如，当赖氨酸缀合化学被用于将X连接至P并且P包括多个赖氨酸残基时，应当理解，m可以指代平均负载。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是1至10，诸如1至8、1至7或1至6。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是2至20，诸如2至10、2至8、2至7或2至6。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是至少3。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是至少4。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是约8、约7、约6、约5、约4、约3或约2。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是1，并且m是1至10。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是2至8(例如，2至6或3至5)。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是约4。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是生物分子P上M6PR结合部分(X)的特定负载。例如，当使用位点特异性缀合化学经由接头将X连接到P时，应当理解，m可以指代特定负载。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是1。在一些实施方案中，生物分子P是具有用于缀合的单个位点的多肽。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是2。在一些实施方案中，生物分子P是抗体。在一些实施方案中，生物分子P是抗体片段。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是2，并且m是1至6(例如，2至6，或3至5)。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，m是约4。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，n是3，并且m是1至6(例如，2至6，或3至5)。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，Z5是由硫醇反应性化学选择性连结基团(例如，马来酰亚胺)与P的一个或多个半胱氨酸残基的共价键联产生的残基部分(residualmoiety)，例如，
其中/>表示与接头L的附接点，并且/>表示与P的附接点。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，Z5是由胺反应性化学选择性连结基团(例如，PFP酯或TFP酯或NHS酯)与P的一个或多个赖氨酸残基的共价键联(即以及酰胺键-CONH-)产生的残基部分。
本文描述了另外的残基部分Z5和它们所衍生自的化学选择性连结基团。
在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，L是具有将Z3共价连接至P的16或更多个连续原子的主链(例如，16-100、18-100或20-100个连续原子的主链)的直链接头。在式(XXI)-(XXIb)的一些实施方案中，L是具有介于Z3和接头的支化原子之间的14或更多个连续原子(例如，诸如14至50，或14至30个原子)的主链的支链接头。
5.5.1.靶结合部分
在优选的实施方案中，感兴趣部分是特异性地结合到感兴趣靶标(即，靶结合部分)的分子。因此，本公开的化合物可以称为靶蛋白质降解化合物或缀合物。在此类情况下，本公开的缀合物可以在它非共价结合到缀合物后提供靶标的细胞摄取，随后是溶酶体降解。本发明人已经证明，本公开的具有带有期望价态和长度的接头的有期望亲和力的特定M6PR结合部分的缀合物可以同时以高亲和力特异性地结合到M6PR和靶标。因此，本公开的缀合物可以提供细胞溶酶体中结合的靶蛋白质的内化和隔离以及后续该靶蛋白质的降解。
靶结合部分可以是对靶标的亲和力小于1μm(诸如300nM或更低、100nM或更低、30nM或更低、10nM或更低、3nM或更低、或1nM或更低)的任何部分，例如，如在体外结合测定中所测量的。在一些实施方案中，靶结合部分对靶蛋白质的亲和力为10nM或更低，诸如1nM或更低。
在一些实施方案中，靶结合部分是生物分子。在一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶蛋白质的生物分子。在一些实施方案中，该生物分子选自多肽(例如，肽或蛋白质)、多核苷酸、多糖、聚糖、抗体、抗体片段和糖蛋白质。应当理解，术语多肽涵盖抗体、抗体片段和糖蛋白质。
在一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶分子诸如靶蛋白质或靶核酸的多核苷酸。术语多核苷酸和核酸可以互换使用。在一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶分子诸如靶蛋白质的核酸适体。
在一些实施方案中，靶结合部分是聚糖。在一些实施方案中，靶结合部分包括针对自身抗体的聚糖表位。
5.5.1.1多肽
在例如式(XXI)的一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶分子(诸如靶蛋白质)的多肽(例如，肽或蛋白质靶结合基序、蛋白质结构域、工程化的多肽、糖蛋白质、抗体或抗体片段)。在一些实施方案中，本公开的双官能化合物的靶结合部分包括结合到感兴趣的可溶性(例如，分泌的)靶蛋白质的多肽。在一些实施方案中，靶结合部分是结合靶细胞表面受体的针对靶标的多肽配体，其包括受体配体或受体配体的受体结合部分或片段。
根据来源，靶结合多肽可含有L-氨基酸、D-氨基酸或两者，并且可含有多种天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸和/或本领域已知的氨基酸修饰或类似物中的任一种。有用的修饰包括例如N-末端乙酰化、酰胺化、甲基化等。
在某些实施方案中，缀合物的多肽(P)包括结合到感兴趣的可溶性(例如，分泌的)靶蛋白质的多肽。在某些实施方案中，例如，感兴趣的靶蛋白质是结合细胞表面受体的配体，并且P包括细胞表面受体的配体结合部分或其生物电子等排体，例如，细胞表面受体的胞外结构域，例如，细胞表面受体的胞外结构域的配体结合结构域。在某些实施方案中，感兴趣的靶蛋白质是细胞表面受体，并且P包括结合细胞表面受体的配体或该配体的受体结合部分，或其生物电子等排体。
在一些实施方案中，本公开的缀合物的多肽(P)是感兴趣靶蛋白质的合成D-蛋白质结合剂，例如，如WO2020198074和WO2020198075中所述的结合VEGF-A的或结合PD1的D-蛋白质。
多肽的缀合物(即，Y是P)，例如抗体(Ab)和化合物的缀合物(Xn-L-Y，其中Y是化学选择性连结基团)可使用多种双官能蛋白质偶联剂诸如BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB和SVSB(琥珀酰亚胺基-(4-乙烯砜)苯甲酸酯)来制备。本公开进一步考虑了本文所述的缀合物可使用如本文领域的任何合适的方法来制备(参见，例如，Bioconjugate Techniques(Hermanson编著，第2版，2008))。
在本文所述缀合物的某些实施方案中，L通过酰胺键与P的赖氨酸残基键合。在本文所述缀合物的某些实施方案中，L通过硫醚键与P的半胱氨酸残基键合。
5.5.1.2抗体
在例如式(XXI)的一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶部分(诸如靶蛋白质)的抗体或抗体片段。
因此，本文提供了下式(XXII)的缀合物：
或其前药、或其药学上可接受的盐，其中：
n是1至20；
m是1至80的平均负载；
每个X是结合到细胞表面M6PR的部分(例如，X具有如本文所述的式(III))；
每个L是接头；
每个Z5是由化学选择性连结基团与Ab的相容基团的共价键联产生的残基部分；并且
Ab是特异性地结合靶蛋白质的抗体或抗体片段。
在式(XXII)的一些实施方案中，L是接头(例如，如本文所述)。在式(XXII)的一些实施方案中，Xn-L-Z5-衍生自式(XIII)的化合物(例如，如本文所述)，其中Y是化学选择性连结基团。
在式(XXII)的一些实施方案中，L是下式的接头：
其中L1、L2、L3、L4、L5、a、b、c、d、e和n在本文有定义。
在式(XXII)的某些实施方案中，L选自表4-5的接头。
在式(XXII)中，Z5可以是由化学选择性连结基团(Y)与抗体(Ab)的相容反应基团的共价键联或缀合产生的任何方便的残基部分。在一些情况下，抗体(Ab)的相容反应性基团是可以自然地成为生物分子一部分的基团。在一些情况下，抗体(Ab)的相容反应性基团是在缀合之前引入或并入到生物分子中的基团。在此类情况下，抗体(Ab)可以是生物分子的经修饰型式。例如，生物分子的官能团(例如，氨基、羧酸基或硫醇基)可以被修饰(例如，使用化学试剂诸如2-卤代乙酰基试剂或2-亚胺基硫杂环戊烷等，或者经由包含诸如叠氮基、炔基等的化学选择性连结基团的接头基团的偶联)以引入相容的化学选择性连结基团。
在式(XXII)的一些实施方案中，Z5选自
其中表示与接头L的附接点，
其中表示与Ab的附接点，
W是CH2、N、O或S；并且
Ab是抗体。
在式(XXII)的某些实施方案中，Z5选自
其中表示与L的附接点，
其中表示与Ab的附接点；并且
Ab是抗体。
在式(XXII)的某些实施方案中，Z5选自
其中/>表示与L的附接点，其中/>表示与Ab的附接点。
在式(XXI)-(XXII)的实施方案中，Z5衍生自本文公开的化学选择性连结基团。
在式(XXI)-(XXII)的某些实施方案中，n是1。在某些实施方案中，n是2。在某些实施方案中，n是3。在某些实施方案中，n是4。在某些实施方案中，n是5。
M6PR结合部分可以经由任选的连接部分与抗体或抗体片段进行位点特异性地地共价连接。M6PR结合部分可以经由抗体或抗体片段(例如，L443C)和硫醇反应性化学选择性连结基团与抗体或抗体片段共价连接。M6PR结合部分可以经由抗体或抗体片段的一个或多个赖氨酸残基和胺反应性化学选择性连结基团与抗体或抗体片段共价连接。
M6PR结合部分可以经由嵌合蛋白质融合、经由任选的间隔区序列与靶结合抗体或抗体片段连接。
在一些实施方案中，本公开的缀合物包含抗体(Ab)。在一些实施方案中，Ab是单克隆抗体。在一些实施方案中，Ab是人抗体。在一些实施方案中，Ab是人源化抗体。在一些实施方案中，Ab是嵌合抗体。在一些实施方案中，Ab是包含两个重链和两个轻链的全长抗体。在一些实施方案中，Ab是IgG抗体，例如是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在一些实施方案中，Ab是单链抗体。在一些实施方案中，靶结合部分是抗体的抗原结合片段，例如，Fab片段。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到癌抗原。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到肝细胞抗原。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到巨噬细胞上呈递的抗原。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到完整补体或其片段。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到完整补体或其片段内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到细胞表面受体。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到细胞表面受体配体。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到表皮生长因子(EGF)蛋白质，例如人EGF。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到EGF蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到表皮生长因子(EGFR)蛋白质，例如人EGFR。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到EGFR蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含存在于西妥昔单抗中的CDR。在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含存在于西妥昔单抗中的可变轻链和可变重链。在一些实施方案中，抗体是西妥昔单抗。在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含存在于马妥珠单抗中的CDR。在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含存在于马妥珠单抗中的可变轻链和可变重链。在一些实施方案中，抗体是马妥珠单抗。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质，例如人VEGF蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到VEGF蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到血管内皮生长因子(VEGFR)蛋白质，例如人VEGFR蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白质，例如人VEGFR2蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)蛋白质，例如人VEGFR3蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到VEGFR蛋白质、VEGFR2蛋白质或VEGFR3蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到成纤维细胞生长因子(FGF)，例如人FGF。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到FGF蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到成纤维细胞生长因子(FGFR)，例如人FGFR。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)蛋白质，例如人FGFR2蛋白质，例如FGFR2b蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合血管内皮生长因子受体3(FGFR3)蛋白质，例如人FGFR3蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到FGFR蛋白质、FGFR2蛋白质或FGFR3蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到受体酪氨酸激酶cMET蛋白质。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到受体酪氨酸激酶cMET蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到CD47蛋白质，例如人CD47蛋白质。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到CD47蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，抗体结合到免疫检查点抑制剂内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到程序性死亡蛋白质，例如人PD-1。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到PD-1蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白质，例如人PD-L1。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到PD-L1蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体结合到TIM3。在一些实施方案中，抗体结合到TIM3内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到卵磷脂。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到卵磷脂内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到SIGLEC。在一些实施方案中，抗体结合到SIGLEC内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到细胞因子受体。在一些实施方案中，抗体结合到细胞因子受体内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到sIL6R。在一些实施方案中，抗体结合到sIL6R内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到细胞因子。在一些实施方案中，抗体结合到细胞因子内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到MCP-1、TNF(例如，TNF-α)、IL1a、IL1b、IL4、IL5、IL6、IL12/IL23、IL13、IL17或p40。在一些实施方案中，抗体结合到MCP-1、TNF(例如，TNF-α)、IL1a、IL1b、IL4、IL5、IL6、IL12/IL23、IL13、IL17或p40内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体结合到主要组织相容性蛋白质(例如，MHC I类或II类分子)。在一些实施方案中，抗体结合到主要组织相容性蛋白质(例如，MHC I类或II类分子)内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到β2微球蛋白质。在一些实施方案中，抗体结合到β2微球蛋白内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，靶结合部分是作为TNF蛋白质(例如，TNF-α)的拮抗剂的生物制剂。许多生物制剂(例如，单克隆抗体药物)已经被开发用于抑制TNF与TNF受体的结合并且已被证明在多种自身炎症性疾病中具有临床有效性。
在本文所述缀合物的某些实施方案中，L通过酰胺键与P的赖氨酸残基键合。在本文所述缀合物的某些实施方案中，L通过硫醚键与P的半胱氨酸残基键合。在本文所述缀合物的某些实施方案中，L通过酰胺键与Ab的赖氨酸残基键合，如上所述。在本文所述缀合物的某些实施方案中，L通过硫醚键与Ab的半胱氨酸残基键合，如上所述。在本文所述缀合物的某些实施方案中，L通过两个硫醚键与Ab的两个半胱氨酸残基键合，其中两个半胱氨酸残基来自Ab中打开的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键，如上所述。在某些实施方案中，打开的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键是链间二硫键。
在本文所述缀合物的某些实施方案中，当L通过酰胺键与P的赖氨酸残基键合时，m是从1至80的整数。在本文所述缀合物的某些实施方案中，当L通过硫醚键与P的半胱氨酸残基键合时，m是从1至8的整数。
在某些实施方案中，与多肽P或抗体Ab的缀合可经由位点特异性缀合进行。例如，位点特异性缀合可以导致均匀负载和最小化缀合物亚群，其中可能改变抗原结合或药代动力学。在某些实施方案中，例如，缀合可以包括在多肽或抗体上的位置处工程化半胱氨酸取代，例如在抗体的重链和/或轻链上，这提供反应性硫醇基团并且不破坏多肽或抗体折叠和组装或改变多肽或抗原结合(参见例如Junutula等人，J.Immunol.Meth.2008；332:41-52；和Junutula等人，Nature Biotechnol.2008；26:925-32；也可参见WO2006/034488(通过引用方式以其整体并入本文))。在另一种非限制性方法中，通过将终止密码子UGA从终止重新编码到硒代半胱氨酸插入，将硒代半胱氨酸共翻译地插入多肽或抗体序列中，从而允许在存在其他天然氨基酸的情况下在硒代半胱氨酸的亲核硒醇基团处进行位点特异性共价缀合(参见，例如，Hofer等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2008；105:12451-56；和Hofer等人，Biochemistry 2009；48(50):12047-57)。允许与多肽或抗体进行位点特异性缀合的其他非限制性技术包括在特定键联位点处工程化非天然氨基酸，包括例如对乙酰基苯丙氨酸(对乙酰基-Phe)、对叠氮甲基-N-苯丙氨酸(对叠氮基甲基-Phe)和叠氮赖氨酸(叠氮-Lys)，并且可以进一步包括工程化独特的功能标签，包括例如LPXTG、LLQGA、唾液酸和GlcNac，用于酶介导的缀合。参见Jackson,Org.Process Res.Dev.2016；20:852-866；以及Tsuchikama和An，Protein Cell 2018；9(1)：33-46，其中每一个的内容以引用方式以其整体并入。还可参见US2019/0060481 A1&US2016/0060354 A1，其每一个的内容通过引用以其整体并入本文。所有此类方法均被考虑用于与制备本文所述的缀合物结合使用。
式(I)和(III)-(IIIb)的化合物向本文所述的多肽(例如，抗体)的负载由各种式中的“m”表示，并且是每个缀合物分子中“Xn-L-”或“Xn-”的平均单元数。如本文所用，术语“DAR”是指“m”的平均值或缀合物的负载。每个“Xn-L-”或“Xn-”单元的“X”部分(例如，M6P部分)的数目由式中的“n”表示。术语“价态(valency)”或“价态(valencies)”是指每单元的“X”部分的数目(“n”)。应当理解，负载或DAR不一定等于每个缀合物分子的“X”部分的数目。例如，如果每个单元有一个“X”部分(n＝1；价态为“1”)，并且每个缀合物有一个“Xn-L-”单元(m＝1)，则每个缀合物将有1x 1＝1个“X”部分。然而，如果每个单元有两个“X”部分(n＝2；价态为“2”)，并且每个缀合物有四个“Xn-L-”单元(m＝4)，则每个缀合物将有2x 4＝8个“X”部分。因此，对于本文所述的缀合物，每个缀合物分子的“X”部分的总数将为n×m。如本文所用，术语“总价态(total valency)”或“总价态(total valencies)”是指每个缀合物分子的“X”部分的总数目(n×m；总价态)。
DAR(负载)范围为每个缀合物1至80个单元。本文提供的缀合物可以包括与单元范围例如1至80缀合的多肽、抗体或抗原结合片段的集合。来自缀合反应的缀合物制剂中每个多肽或抗体的平均单元数可以通过常规手段诸如质谱来表征。也可以确定关于m的DAR(负载)的定量分布。在一些情况下，可以通过诸如电泳的手段实现对其中m是某值的均质缀合物的分离、纯化和表征。
在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至80。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至70。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至60。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至50。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至40。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至35。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至30。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至25。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至20。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至18。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至15。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至12。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至10。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至9。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至8。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至7。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至6。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至5。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至4。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至3。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至12。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至10。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至9。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至8。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至7。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至6。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至5。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至4。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至12。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至10。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至9。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至8。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至7。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至6。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至5。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至4。
在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至约8；从约2到约6；从约3至约5；从约3到约4；从约3.1至约3.9；从约3.2至约3.8；从约3.2至约3.7；从约3.2至约3.6；从约3.3至约3.8；或从约3.3至约3.7。
在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12或更多。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约3.1、约3.2、约3.3、约3.4、约3.5、约3.6、约3.7、约3.8或约3.9。
在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为从2至20、2至19、2至18、2至17、2至16、2至15、2至14或2至13。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为从3至20、3至19、3至18、3至17、3至16、3至15、3至14或3至13。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约1。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约2。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约3。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约4。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约3.8。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约5。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约6。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约7。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约8。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约9。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约10。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约11。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约12。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约13。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约14。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约15。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约16。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约17。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约18。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约19。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约20。
在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约25。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约30。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约35。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约40。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约50。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约60。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约70。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约80。
在某些实施方案中，在缀合反应期间，少于理论最大值的单元与多肽例如抗体缀合。多肽可以包含例如不与化合物或接头试剂反应的赖氨酸残基。通常，例如，抗体不包含许多可与药物单元连接的游离和反应性半胱氨酸硫醇基团；事实上，抗体中的大多数半胱氨酸硫醇残基以二硫桥键的形式存在。在某些实施方案中，可以在部分或全部还原条件下用还原剂诸如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)还原抗体，以产生反应性半胱氨酸硫醇基团。在某些实施方案中，抗体经受变性条件以显示反应性亲核基团，诸如赖氨酸或半胱氨酸。在一些实施方案中，化合物经由抗体上的赖氨酸残基缀合。在一些实施方案中，接头单元或药物单元经由抗体上的半胱氨酸残基缀合。
在某些实施方案中，与单元连接的氨基酸在抗体的重链中。在某些实施方案中，与单元连接的氨基酸在抗体的轻链中。在某些实施方案中，与单元连接的氨基酸位于抗体的铰链区中。在某些实施方案中，与单元连接的氨基酸位于抗体的Fc链区中。在某些实施方案中，与单位连接的氨基酸位于抗体的恒定区(例如，重链的CH1、CH2或CH3，或轻链的CH1)中。在又其他实施方案中，与单元或药物单元连接的氨基酸在抗体的VH框架区中。在又其他实施方案中，与单元连接的氨基酸在抗体的VL框架区中。
缀合物的DAR(负载)可以不同方式控制，例如，通过：(i)限制化合物或缀合试剂相对于多肽的摩尔过量，(ii)限制缀合反应时间或温度，(iii)部分或限制半胱氨酸硫醇修饰的还原条件，(iv)通过重组技术改造多肽的氨基酸序列，从而修饰半胱氨酸残基的数目和位置以控制接头-药物连接的数目和/或位置(例如对于如WO2006/034488(通过引用方式以其整体并入本文)中公开制备的硫代单抗)。
应当理解，本文所述的缀合物的制备可以产生缀合物的混合物，其具有与多肽(例如抗体)连接的一个或多个单元的分布。可以通过质谱鉴定混合物中的单个缀合物分子并通过HPLC例如疏水相互作用色谱(包括本领域已知的此类方法)分离。在某些实施方案中，可以通过电泳或色谱法从缀合混合物中分离具有单一DAR(负载)值的均质缀合物。
5.5.1.3小分子
在一些实施方案中，本公开的双官能化合物的靶结合部分是特异性地结合到靶分子诸如靶蛋白质的小分子。在一些实施方案中，双官能化合物包括靶蛋白质的小分子抑制剂或配体。小分子靶结合部分可经由接头共价连接到一个或多个M6PR结合部分。接头可经由小分子的任何合适位点处的取代连接到小分子，使得与靶蛋白质的结合基本上得以保留。
在一些实施方案中，靶结合部分是靶蛋白质的小分子抑制剂或拮抗剂(例如，如本文所述)。已知结合感兴趣靶标的任何方便的小分子都可以适合用于主题化合物和缀合物。
在一些实施方案中，靶结合部分是VEGF的小分子抑制剂或拮抗剂。在一些实施方案中，靶结合部分是PD-L1的小分子抑制剂或拮抗剂。
在一些实施方案中，靶结合部分是EGFR蛋白质、VEGFR蛋白质、FGFR2蛋白质或FGFR3蛋白质的小分子抑制剂或拮抗剂。
在一些实施方案中，靶结合部分是TNF蛋白质(例如，TNF-α)的小分子抑制剂或拮抗剂。TNF-α(TNFα)是作为免疫和炎症性过程的一部分的单核细胞和巨噬细胞产生的可溶性细胞因子，并且参与包括分化、增殖、炎症和细胞死亡在内的各种各样的细胞反应。TNFα是可以被切割并且以可溶形式被分泌的II类跨膜蛋白质。TNFα的跨膜和可溶性生物活性形式是可以通过TNF受体1和2(TNF-R1和TNF-R2)发出信号的同三聚体复合体。TNFα通过调控细胞内NF-κB、JNK和p38-MAPK信号传导通路而直接参与全身炎症。
TNFα结合部分可以是TNFα抑制剂，诸如TNF受体结合的竞争抑制剂或TNF信号传导的变构抑制剂。本公开的化合物可以包括强效的TNFα抑制剂，例如具有亚微摩尔抑制活性的抑制剂。在一些实施方案中，TNFα抑制剂是变构抑制剂。在一些实施方案中，TNFα结合部分是变构去对称TNFα抑制剂。变构去对称TNFα抑制剂是指结合到TNFα内的变构位点并将三聚体单元稳定在非对称构象的化合物，该非对称构象允许TNFα三聚体仅募集三个拷贝中的两个拷贝的TNF受体(TNFR，例如TNFR1)，导致TNFα-TNFR信号传导复合体不能发挥作用。
参见例如，Xiao等人,Journal of Medicinal Chemistry 2020 63(23),15050-15071和McMillan等人在Nature Communications(2021)12:582，其公开了与TNFα结合的示例性抑制剂的X射线共晶结构的分析。变构去对称TNFα抑制剂可以经由特定作用机制发挥作用以提供强效的抑制活性。例如，(a)TNFα抑制剂结合位点是TNFα三聚体内经由单体A的运动产生的空腔，(b)该抑制剂通过形成关键的π-π和氢键合相互作用将TNFα三聚体稳定在非活性构象，(c)变构去对称TNFα抑制剂结合到TNFα三聚体，导致一个TNFR结合位点的主要破坏和第二位点的次要破坏，而第三位点保持不变，以及(d)变构去对称TNFα抑制剂通过变构机制而不是与TNFR的直接竞争来调节TNF-R活性。因此，变构去对称TNFα抑制剂与对称性TNFα三聚体的结合可以导致不对称三聚体的形成，不对称三聚体阻止信号传导所需的三种TNF受体分子的募集。
5.5.2.靶标
如上所概述，本公开的双官能化合物可以包含特异性地结合靶分子的感兴趣部分(Y)。靶分子可以是细胞表面分子或细胞外分子。
在本公开的化合物和方法的一些实施方案中，靶分子是细胞表面分子。“细胞表面分子”意指与细胞膜相关的靶分子，例如因为该分子具有插入到细胞膜中或者跨越细胞膜的结构域，例如细胞膜栓连的结构域或跨膜结构域。细胞表面分子可以是经由内体/溶酶体途径的靶向降解所需的任何细胞表面分子。在一些实施方案中，细胞表面分子是细胞表面受体。
感兴趣的细胞表面受体包括但不限于干细胞受体、免疫细胞受体、生长因子受体、细胞因子受体、激素受体、受体酪氨酸激酶、表皮生长因子受体(EGFR)家族中的受体(例如，HER2(人表皮生长因子受体2)等)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族中的受体、血管内皮生长因子受体(VEGFR)家族中的受体、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)家族中的受体、转染过程中重排(RET)的受体家族中的受体、Eph受体家族中的受体、盘状蛋白结构域受体(discoidin domain receptor,DDR)家族中的受体，和粘蛋白蛋白质(例如，MUC1)。在一些实施方案中，细胞表面分子是CD71(转铁蛋白受体)。在某些方面，细胞表面受体是选自T细胞受体、B细胞受体、自然杀伤(NK)细胞受体、巨噬细胞受体、单核细胞受体、嗜中性粒细胞受体、树突细胞受体、肥大细胞受体、嗜碱性粒细胞受体和嗜酸性粒细胞受体的免疫细胞受体。
在一些实施方案中，感兴趣部分(Y)特异性地结合细胞表面分子，该细胞表面分子不是通过特定的分子相互作用介导其作用(并且因此不易受阻断影响)，而是通过本体生物物理或聚集效应介导其作用。此类细胞表面分子的非限制性实例是粘蛋白。粘蛋白的实例包括但不限于MUC1、MUC16、MUC2、MUC5AC、MUC4、CD43、CD45、GPIb等。
在一些实施方案中，当感兴趣部分特异性地结合细胞表面分子时，癌细胞上存在该细胞表面分子。“癌细胞”意指表现出肿瘤细胞表型的细胞，其特征可以是例如以下中的一种或多种：例如异常细胞生长、异常细胞增殖、密度依赖性生长抑制丧失、锚定非依赖性生长潜力、在免疫功能低下的非人类动物模型中促进肿瘤生长和/或发育的能力，和/或细胞转化的任何适当指标。“癌细胞”可在本文中与“肿瘤细胞”、“恶性细胞”或“癌性细胞”互换使用，并且涵盖实体瘤、半实体瘤、血液恶性肿瘤(例如，白血病细胞、淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞等)、原发性肿瘤、转移性肿瘤等的癌细胞。在一些实施方案中，癌细胞上存在的细胞表面分子是肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原。在某些方面，当感兴趣部分(Y)特异性地结合细胞表面分子时，细胞表面分子存在于免疫细胞上。在一些实施方案中，细胞表面分子存在于选自以下的免疫细胞上：T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。在某些方面，免疫细胞上存在的细胞表面分子是抑制性免疫受体。如本文所用，“抑制性免疫受体”是负向调控免疫反应的免疫细胞上存在的受体。可以根据本公开的方法抑制的抑制性免疫受体的实例包括Ig超家族的抑制性免疫受体，包括但不限于：CD200R、CD300a(IRp60；小鼠MAIR-I)、CD300f(IREM-1)、CEACAM1(CD66a)、FcyRIIb、ILT-2(LIR-1；LILRB1；CD85j)、ILT-3(LIR-5；CD85k；LILRB4)、ILT-4(LIR-2；LILRB2)、ILT-5(LIR-3；LILRB3；小鼠PIR-B)；LAIR-1、PECAM-1(CD31)、PILR-a(FDF03)、SIRL-1和SIRP-a。可以根据本公开的方法抑制的抑制性免疫受体的进一步实例包括唾液酸结合Ig样卵磷脂(Siglec)受体，例如Siglec 7、Siglec 9和/或等。可以根据本公开的方法抑制的抑制性免疫受体的另外的实例包括C型卵磷脂，包括但不限于：CLEC4A(DCIR)、Ly49Q和MICL。关于抑制性免疫受体的详细信息可在例如Steevels等人(2011)Eur.J.Immunol.41(3):575-587中找到。在一些实施方案中，免疫细胞上存在的细胞表面分子是抑制性免疫受体的配体。在某些方面，免疫细胞上存在的细胞表面分子是免疫检查点分子。感兴趣部分(Y)可特异性地结合到的免疫检查点分子的非限制性实例包括PD-1、PD-L1、CTLA4、TIM3、LAG3、TIGIT和B7家族的成员。
在本公开的化合物和方法的一些实施方案中，靶分子是细胞外分子。“细胞外分子”意指可溶性分子附近的任何细胞的细胞膜外部的可溶性分子。细胞外分子可以是经由内体/溶酶体途径的靶向降解所需的任何细胞外分子。
在一些实施方案中，细胞外分子是可溶性靶蛋白质。在一些实施方案中，细胞外分子是疾病中蓄积的分泌的蛋白质(例如，α-突触核蛋白)、胆固醇载剂(例如，ApoB)、感染性疾病毒素(例如，AB毒素、ESAT-6)、感染性颗粒(例如，全病毒、全细菌等)、凝固因子(例如，因子IX)、结合到细胞外分子的任何FDA批准的抗体的靶标(例如，TNFα)、任何趋化因子或细胞因子(例如，脓毒症或慢性炎症的介体诸如IL-1)、蛋白质类激素(例如，胰岛素、ACTH等)、心境病症的蛋白质类介体、能量稳态的蛋白质类介体(例如，瘦素、脑肠肽等)、存在于血流中的蛋白质类过敏原或针对此类过敏原的抗体(例如，对于花生过敏)、蛋白质类毒素(例如，蛇毒透明质酸酶等)、自身抗体等。
在一些实施方案中，靶分子是细胞外分子，其为抗体，例如特异性地结合细胞表面分子或不同细胞外分子的抗体。在一些实施方案中，抗体是自身抗体。在一些实施方案中，抗体是人免疫球蛋白A(IgA)。在一些实施方案中，IgA是在粘膜的免疫功能中起到关键作用的特定抗体。在血液中，IgA与在免疫效应细胞上表达的称为CD89的Fc受体相互作用，以启动炎性反应。异常IgA表达与许多自身免疫病症和免疫介导的病症相关。在一些实施方案中，靶标是人免疫球蛋白G(IgG)。IgG的Fc区包括重链恒定区中天冬酰胺297处的保守N-糖基化位点。各种N-聚糖可连接到此位点。N-聚糖IgG组成与数种自身免疫、感染性和代谢性疾病有关。此外，IgG4的过表达与IG4相关疾病相关。在一些实施方案中，靶标是人免疫球蛋白E(IgE)。IgE是一类在I型超敏反应中发挥重要作用的免疫球蛋白，I型超敏反应可表现为各种过敏性疾病和疾患。
在一些实施方案中，细胞外分子是细胞表面受体的配体。感兴趣的细胞表面受体配体包括但不限于生长因子(例如，表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)等)、细胞因子(例如，白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子(TNF)、转化生长因子b(TGF-b)，包括此类细胞因子的任何特定亚型)、激素等。在某些方面，感兴趣的部分(Y)特异性地结合载脂蛋白E4(ApoE4)。
5.5.3.用于细胞内递送的感兴趣部分
在一些实施方案中，感兴趣部分是不结合到细胞外靶标的分子，而是本身希望在细胞内递送的分子。在一些实施方案中，感兴趣部分选自酶(例如，溶酶体酶)、纳米颗粒、病毒组合物(例如，病毒颗粒)、治疗性蛋白质、治疗性抗体。
在一些实施方案中，感兴趣部分Y选自小分子、小分子药物、化疗剂、细胞毒性剂、诊断剂、染料、荧光团等。
在一些实施方案中，感兴趣部分Y是适合于在纳米颗粒内递送一种或多种剂或货物的纳米颗粒。
5.5.3.1用于酶替代疗法的缀合物
在一些实施方案中，感兴趣部分是用于递送到细胞用于酶替代疗法的溶酶体酶，诸如酸性α-葡糖苷酶(GAA)。可以适合用于本公开的缀合物的感兴趣溶酶体酶包括但不限于酸性α-葡糖苷酶、酸性β-半乳糖苷酶-1、酸性鞘磷脂酶、α-D-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶、α-半乳糖苷酶A、α-氨基葡糖苷乙酰转移酶、α-葡糖苷酶、α-L-艾杜糖醛酸酶、α-N-乙酰半乳糖苷酶、α-乙酰氨基葡糖苷酶、α-D-神经氨酸苷酶、芳基硫酸酯酶A、芳基硫酸酯酶B、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶、β-甘露糖苷酶、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、神经酰胺酶、胱氨酸转运蛋白(cystinosine)、神经节苷脂活化剂GM2、半乳糖脑苷脂酶、葡糖脑苷脂酶、类肝素硫酸酯酶、氨基己糖苷酶A、氨基己糖苷酶B、透明质酸酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、LAMP2、溶酶体酸性脂酶、N-乙酰葡糖胺-1-磷酸转移酶、N-乙酰半乳糖胺6-硫酸酯酶、N-乙酰葡糖胺-1-磷酸转移酶、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸硫酸酯酶、N-天冬氨酰-β-氨基葡糖苷酶、棕榈酰-硫代酯酶-1、酸性磷酸酶、受保护的蛋白质/组织蛋白酶A(PPCA)、唾液酸转运蛋白(活化sialin)、三肽基肽酶1。
可使用本文所述的用于制备多肽和抗体缀合物的方法实现与酶的缀合。
5.5.3.2用于病毒转导的经修饰的病毒组合物
在具体的实施方案中，Y是包括病毒颗粒、病毒衣壳、病毒包膜或病毒蛋白质的病毒组合物。在一些实施方案中，病毒组合物是包含转基因的病毒颗粒。在一些实施方案中，病毒蛋白质是病毒衣壳蛋白质或病毒包膜蛋白质。本公开的一种或多种化合物与病毒组合物的缀合物产生经修饰的病毒组合物，其与未经标记的病毒组合物相比提供增强的病毒转导。
在某些方面，本文提供了包括病毒组合物的经修饰的病毒组合物，例如附接到(例如，直接或例如经由插入接头序列间接缀合到)结合到细胞表面受体的M6PR结合部分的病毒颗粒、病毒衣壳或病毒蛋白质(例如，病毒衣壳蛋白质或包膜蛋白质)。在某些实施方案中，经修饰的病毒组合物包括包含多核苷酸的病毒颗粒，所述多核苷酸任选地包含转基因，例如可用于治疗性应用的转基因。
本文提出的经修饰的病毒组合物，例如病毒缀合物，可包括本文所述的任何病毒组合物，例如任何病毒颗粒、衣壳或病毒蛋白质，例如衣壳蛋白质或包膜蛋白质，或其片段，如本文所述。
在某些方面，本文所述的病毒组合物可包括病毒颗粒。术语“病毒颗粒(virusparticle)”、“病毒颗粒(viral particle)”、“病毒载体(virus vector)”或“病毒载体(viral vector)”在本文中可互换使用。“病毒颗粒”是指病毒衣壳和多核苷酸(DNA或RNA)，其可以包含病毒基因组、病毒基因组的一部分，或衍生自病毒基因组的多核苷酸(例如，一个或多个ITR)，该多核苷酸任选地包含转基因。在某些情况下，病毒颗粒进一步包含包围衣壳或部分包围衣壳的包膜(其通常包含脂质部分和包膜蛋白质)。
病毒颗粒可以称为“重组病毒颗粒(recombinant viral particler)”或“重组病毒颗粒(recombinant virus particle)”，如本文使用的这些术语是指已经例如通过内源性病毒基因的缺失或其他突变和/或异源性核酸构建体向病毒颗粒的多核苷酸中的添加或插入进行遗传改变的病毒颗粒。因此，重组病毒颗粒通常是指包含其中包装有多核苷酸序列的衣壳外衣(capsid coat)或外壳(和任选的外包膜)的病毒颗粒，该多核苷酸序列包括病毒起源的序列和非病毒起源的序列(即，对于病毒来说是异源的多核苷酸)。此多核苷酸序列通常是细胞遗传改变感兴趣的序列。
在某些方面，本文所述的病毒组合物可包含“病毒衣壳”、“空病毒颗粒(emptyviral particle)”、“空病毒颗粒(empty virus particle)”或“衣壳”或“空颗粒”，当在本文中在病毒的上下文中被提及时，如本文所用的这些术语是指包含任选地被外包膜包围或部分包围的病毒衣壳蛋白质的三维外壳或外衣。在特定实施方案中，病毒组合物是病毒颗粒或其片段、病毒衣壳或其片段、病毒蛋白质，例如，病毒衣壳蛋白质或其片段或包膜蛋白质或其片段。
在一些实施方案中，本文提供的经修饰的病毒组合物中使用的病毒是腺病毒(AV)；腺相关病毒(AAV)；逆转录病毒(例如，慢病毒(LV)、弹状病毒、鼠白血病病毒)；单纯疱疹病毒、冠状病毒、呼肠孤病毒等。在一些实施方案中，本公开中使用的病毒载体、病毒颗粒或病毒蛋白质衍生自无包膜病毒，例如，腺相关病毒(AAV)。
在一些实施方案中，慢病毒载体可用于CAR-T基因递送、疫苗或研究工具，例如，以将基因引入到成熟T细胞中以通过递送嵌合抗原受体(CAR)或经克隆的T细胞受体来产生针对癌症的免疫力。
天然存在的AAV形成病毒颗粒，其包含由衣壳蛋白质(VP1、VP2和VP3)构成的三维衣壳外衣或外壳(“衣壳”)以及包含在衣壳内的AAV病毒基因组。
本文提出的经修饰的AAV组合物，例如AAV缀合物或融合体，可包括本文所述的任何AAV组合物，例如任何AAV颗粒、衣壳或衣壳蛋白质，或其片段，如本文所述。术语“AAV衣壳蛋白质”或“AAV cap蛋白质”是指由AAV衣壳(cap)基因(例如，VP1、VP2和VP3)或其变体或片段编码的蛋白质。该术语包括由AAV(例如，重组AAV，诸如嵌合AAV)表达或从该AAV衍生的衣壳蛋白质。例如，术语包括但不限于衍生自诸如以下的任何AAV血清型的衣壳蛋白质：AAV1、AAV2、AAV2i8、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV rh10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV-DJ、AAV3b、AAV LK03、AAV rh74、AAV Anc81、Anc82、Anc83、Anc84、Anc110、Anc113、Anc126或Anc127、AAV_go.1、AAV hu.37或AAV rh.8或其变体。
5.5.3.3结合病毒组合物的桥接部分
在一些实施方案中，Y是特异性地结合到上述病毒组合物，例如病毒颗粒、病毒衣壳、病毒包膜或病毒蛋白质(例如，病毒衣壳蛋白质或包膜蛋白质)的桥接部分，其中该结合不是经由共价键联进行。此类缀合物可以用于增强靶病毒组合物的细胞内递送和病毒转导。
结合病毒颗粒、病毒衣壳、病毒包膜或病毒蛋白质(例如，病毒衣壳蛋白质或包膜蛋白质)的任何合适部分可以适合用于本公开的桥接部分缀合物中。
在某些实施方案中，桥接部分是特异性地结合病毒组合物的多肽。在一些实施方案中，桥接部分是结合到病毒组合物(例如，病毒颗粒、病毒衣壳、病毒包膜或病毒蛋白质，例如病毒衣壳蛋白质或病毒包膜蛋白质)的多肽。在某些方面，当病毒蛋白质是病毒颗粒的一部分时，桥接组合物结合病毒衣壳蛋白质或病毒包膜蛋白质。
在某些实施方案中，桥接部分是特异性地结合病毒组合物的抗体或抗体片段(例如，抗体的抗原结合片段)。在某些实施方案中，结合病毒蛋白质的桥接部分还可以结合病毒颗粒，例如经由结合到并入在病毒颗粒中的病毒蛋白质来结合病毒颗粒。同样，在某些实施方案中，即使如果病毒蛋白质未并入在病毒颗粒中，结合病毒颗粒的桥接部分也可以结合该病毒蛋白质。病毒颗粒可以是AAV病毒颗粒。病毒蛋白质可以是AAV衣壳蛋白质。
在一些实施方案中，本公开的桥接部分特异性地结合到AAV组合物，例如AAV颗粒、AAV衣壳或AAV病毒蛋白质(例如，AAV衣壳蛋白质，例如VP1、VP2或VP3蛋白质)。
可以与本文提供的经修饰的病毒组合物结合使用，例如与本文提出的桥接组合物和桥接部分结合使用的抗体或抗原结合片段包括但不限于单克隆抗体，由至少两种完整抗体形成的具有多表位或单表位特异性的抗体组合物、多克隆或单价抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体，只要它们表现出所需的生物活性即可)，单链抗体，及其片段(例如，结构域抗体)。
5.6.示例性缀合物
本公开的包含化学选择性连结基团的示例性单体化合物示于表7，其可以用于制备感兴趣部分的缀合物。
本公开的示例性二聚(n＝2)化合物示于表8中，其包含化学选择性连结基团并且可以用于制备感兴趣部分的缀合物。
本公开的示例性单体(n＝1)化合物的结构示于表9中，其包含化学选择性连结基团并且可以用于制备感兴趣部分的缀合物。
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本公开的示例性多价(n>1)化合物的结构示于表12中，其可以用于制备感兴趣部分的缀合物。
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本公开的示例性多价(n>1)化合物的结构示于表12B中，其可以用于制备感兴趣部分的缀合物。
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5.7.另外的实验观察结果
不受任何特定机制或理论的限制，在某些期望范围内，M6PR配体的结合亲和力可与所得化合物和缀合物的较长半衰期反相关，并且期望结合亲和力的选择可用于调整(例如，改良)本文所述的缀合物的药代动力学特性。在某些实施方案中，具有本文所述结构的化合物或缀合物可被选择成对细胞表面M6PR具有结合亲和力，其提供了期望的药代动力学特性(例如，足够的半衰期)的组合，同时提供了足够稳健的靶标摄取或降解。
5.8.药物组合物
在另一个实施方案中，本文提供了包含一种或多种本文公开的缀合物和药学上可接受的载剂的药物组合物。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物在药学上可接受的载剂中含有治疗有效量的一种或多种本文提供的缀合物，以及任选的一种或多种另外的预防或治疗剂。药物组合物可用于预防、治疗、控制或改善本文所述的疾病或病症或其一种或多种症状。
适用于施用本文提供的缀合物的药用载剂包括本领域技术人员已知的适用于特定施用方式的任何此类载剂。
本文所述的缀合物可配制成组合物中唯一的药物活性成分或可与其他活性成分组合。
在某些实施方案中，将缀合物配制成一种或多种合适的药物制剂，例如用于肠胃外施用的无菌溶液或悬浮液中的溶液、悬浮液、粉剂、缓释制剂或酏剂，或作为透皮贴剂制剂和干粉吸入剂。
在本文提供的组合物中，本文所述的缀合物可以与合适的药用载剂混合。组合物中缀合物的浓度可以例如在施用后有效递送治疗、预防或改善本文所述的病况或病症或其症状的量。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物被配制用于单剂量施用。为了配制组合物，将重量分数的缀合物以有效浓度溶解、悬浮、分散或以其他方式混合在选定的载剂中，从而缓解、预防所治疗的疾患或改善一种或多种症状。
本文提供的药物组合物中缀合物的浓度将取决于例如缀合物的物理化学特征、施用方案和施用量以及本领域技术人员已知的其他因素。
本文所述的药物组合物以单位剂型提供以施用给受试者，例如人或动物(例如哺乳动物)，例如含有适量化合物或其药学上可接受的衍生物的无菌肠胃外(例如静脉内)溶液或悬浮液。还提供了用于以单位剂型施用于人和动物的药物组合物，包括含有适量的缀合物或其药学上可接受的衍生物的口服或鼻用溶液或混悬剂以及油水乳剂。在某些实施方案中，缀合物以单位剂量形式或多剂量形式配制和施用。如本文所用的单位剂量形式是指适用于人或动物(例如哺乳动物)受试者并且如本领域已知的单独包装的物理上离散的单位。每个单位剂量含有预定量的足以产生期望治疗效果的缀合物，以及所需的药物载剂、赋形剂或稀释剂。单位剂量形式的实例包括安瓿和注射器以及单独包装的胶囊。单位剂量形式可以分次或多次施用。多剂量形式是包装在单个容器中的多个相同的单位剂量形式，以便以分开的单位剂量形式施用。多剂量形式的实例包括小瓶、胶囊瓶或瓶子。因此，在特定方面，多剂量形式是在包装中不分离的多个单位剂量。
在某些实施方案中，本文的缀合物在液体药物制剂中。液体药学上可施用制剂可以例如通过将缀合物和任选的药用佐剂溶解、分散或以其他方式混合在载剂例如水、盐水、含水右旋糖、甘油、乙二醇等中来制备，从而形成溶液或悬浮液。在某些实施方案中，本文提供的待施用的药物组合物还可以包含少量无毒辅助物质，例如润湿剂、乳化剂、增溶剂和pH缓冲剂等。
制备此类剂型的实际方法对于本领域技术人员而言是已知的或将是显而易见的；例如，参见，例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy(2012)第22版，Pharmaceutical Press,Philadelphia,PA。可以制备含有范围在0.005％至100％的抗体、余量由非毒性载剂构成的剂型或组合物。
在某些实施方案中，胃肠外施用的特征在于注射，皮下、肌内或静脉内也在本文中考虑。可将注射剂制备成常规形式，或者作为液体溶液或悬浮液、适合在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式，或者作为乳液。注射剂、溶液和乳液还含有一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是例如水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。其他施用途径可包括肠内施用、脑内施用、鼻内施用、动脉内施用、心内施用、骨内输注、鞘内施用和腹膜内施用。
用于肠胃外施用的制剂包括准备用于注射的无菌溶液、准备在使用前与溶剂结合的无菌干燥可溶性产品，例如冻干粉剂，包括皮下注射用片剂、准备用于注射的无菌混悬剂、准备在使用前与载体结合的无菌干燥不溶性产品，和无菌乳液。溶液可以是水性的或非水性的。
如果静脉内施用，合适的载剂包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，以及含有增稠剂和增溶剂例如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇及其混合物的溶液。
用于肠胃外制剂的药学上可接受的载剂包括水性载剂、非水性载剂、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮剂和分散剂、乳化剂、隔离剂或螯合剂和其他药学上可接受的物质。
药物载剂还包括用于水溶性载剂的乙醇、聚乙二醇和丙二醇；用于调节pH的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。
在某些实施方案中，含有本文所述缀合物的无菌水溶液的静脉内或动脉内输注是有效的施用方式。另一个实施方案是含有本文所述缀合物的无菌水性或油性溶液或悬浮液，其在必要时注射以产生期望的药理作用。
在某些实施方案中，药物制剂是冻干粉剂，其可以重构以作为溶液、乳液和其他混合物施用。它们也可以重构并配制成固体或凝胶。
通过将本文提供的缀合物溶解在合适的溶剂中来制备冻干粉末。在一些实施方案中，冻干粉末是无菌的。合适的溶剂可以包含改善稳定性的赋形剂或粉末或由粉末制备的重构溶液的其他药理学成分。可以使用的赋形剂包括但不限于右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他合适的试剂。合适的溶剂还可包含缓冲剂，例如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾或本领域技术人员已知的其他此类缓冲剂，在某些实施方案中，pH约为中性。随后对溶液进行无菌过滤，然后在本领域技术人员已知的标准条件下冻干提供了制剂的实例。在某些实施方案中，所得溶液将被分配到小瓶中用于冻干。冻干粉末可以在适当的条件下储存，例如在约4℃至室温。
用注射用水重构这种冻干粉末提供了用于肠胃外施用的制剂。对于重构，将冻干粉末添加到无菌水或其他合适的载剂中。
在某些实施方案中，本文提供的缀合物可配制成凝胶、乳膏和洗剂的形式用于局部施用或外部施用，例如用于皮肤和粘膜的局部施用，例如在眼睛中，以及用于施用至眼睛或脑池内或脊柱内应用。局部施用被考虑用于透皮递送，也用于向眼睛或粘膜施用，或用于吸入疗法。也可以单独施用活性化合物的鼻溶液或与其他药学上可接受的赋形剂组合。
5.9.使用方法
一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物从细胞表面去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物从细胞外环境中去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。例如，在一个实施方案中，本文提供了使用本文所述的缀合物通过将靶蛋白质隔离在细胞的溶酶体中从细胞表面去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。在另一个实施方案中，本文提供了使用本文所述的缀合物通过将靶蛋白质隔离在细胞的溶酶体中从细胞的胞外空间(胞外环境)去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。在另一个实施方案中，本文提供了使用本文所述的缀合物通过将靶蛋白质隔离在细胞的溶酶体中并降解靶蛋白质来从细胞表面去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。在另一个实施方案中，本文提供了使用本文所述的缀合物通过将靶蛋白质隔离在细胞的溶酶体中并降解靶蛋白质来从细胞的细胞外空间(细胞外环境)去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。
靶蛋白质的去除可以指靶蛋白质从细胞表面或细胞外空间或细胞外环境中的减少或消耗，即靶蛋白质在细胞表面上或细胞外环境中的量的减少或消耗。在一些实施方案中，该方法是降低生物系统或细胞样品中靶蛋白质的量或水平的方法。
一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物将感兴趣的多肽(靶蛋白质)隔离在细胞的溶酶体中的方法。一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物将感兴趣的多肽(靶蛋白质)隔离在细胞的溶酶体中并降解感兴趣的多肽的方法。
一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物降解感兴趣多肽(靶蛋白质)的方法。
一方面，本文提供了通过经由细胞的溶酶体途径降解来消耗本文所述的感兴趣多肽(靶蛋白质)的方法。
在另一方面，本文提供了通过向有需要的受试者施用有效量的本文所述的缀合物或药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物来消耗本文所述的感兴趣多肽(靶蛋白质)的方法。在某些实施方案中，受试者是哺乳动物(例如，人)。
在某些实施方案中，靶蛋白质是膜结合蛋白质。在某些实施方案中，靶蛋白质是细胞表面受体。在某些实施方案中，靶蛋白质是细胞外蛋白质。
在某些实施方案中，靶蛋白质是VEGF蛋白质、EGFR蛋白质、VEGFR蛋白质、PD-L1蛋白质、FGFR2蛋白质或FGFR3蛋白质。
在另一个方面，本文提供了通过向有需要的受试者例如人施用有效量的本文所述的缀合物或药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物来治疗疾病或病症的方法。
术语“施用(administer)”、“施用(administration)”或“施用(administering)”是指将物质(例如，本文提供的缀合物或药物组合物)注射或以其他方式物理递送至受试者或患者(例如，人)的行为，例如通过粘膜、局部、皮内、肠胃外、静脉内、肌肉内递送和/或本文所述或本领域已知的任何其他物理递送方法。在一个具体实施方案中，施用是通过静脉输注。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以治疗、诊断、预防、延迟发作、减少和/或改善给定状况、障碍或疾病和/或与其相关的症状的严重程度和/或持续时间的治疗剂(例如，本文提供的缀合物或药物组合物)的量。这些术语还涵盖减少、减缓或改善给定疾病的进展或进程，减少、减缓或改善给定疾病的复发、发展或发作，和/或改善或增强另一种疗法的预防或治疗效果或作为另一种疗法的桥梁。在一些实施方案中，如本文所用的“有效量”还指本文所述的缀合物达到特定结果的量。
在某些实施方案中，当病症或疾病是癌症时，“有效量”或“治疗有效量”是指本文提供的缀合物或药物组合物在施用至患有癌症的人时足以实现对癌症的治疗的量。癌症的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括以下一项或多项：
(1)限制/抑制癌症的生长，例如限制其发展；
(2)减少/预防癌症扩散，例如减少/预防转移；
(3)缓解癌症，例如导致癌症消退，
(4)减少/预防癌症复发；和
(5)减轻癌症的症状。
术语“受试者”和“患者”可互换使用。受试者可以是哺乳动物，例如非灵长类动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、山羊、兔子、大鼠、小鼠等)或灵长类动物(例如，猴子和人)，例如人类。在某些实施方案中，受试者是被诊断患有本文提供的疾病或病症的哺乳动物，例如人。在另一个实施方案中，受试者是有发生本文提供的疾病或病症的风险的哺乳动物，例如人。在一个具体实施方案中，受试者是人。
术语“疗法(therapies)”和“疗法(therapy)”可指可用于预防、治疗、管理或改善疾病或病症或其症状(例如，本文提供的疾病或病症或与其相关的一种或多种症状或病况)的任何方案、方法、组合物、制剂和/或药剂。在某些实施方案中，术语“疗法(therapies)”和“疗法(therapy)”是指可用于治疗、管理、预防或改善疾病或病症或其一种或多种症状的药物疗法、辅助疗法、放射疗法、手术、生物疗法、支持疗法和/或其他疗法。在某些实施方案中，术语“疗法”是指不同于本文所述的缀合物或其药物组合物的疗法。
在某些实施方案中，通过溶酶体途径降解消耗靶蛋白质来治疗疾病或病症。
在某些实施方案中，通过消耗某些蛋白质，例如可溶性蛋白质，例如分泌蛋白质、细胞表面蛋白质(例如细胞表面受体蛋白质，例如酪氨酸激酶受体、可溶性细胞因子受体和免疫检查点受体，例如EGFR、VEGFR、FGFR和PD-L1)、凝集素、补体、脂蛋白质、转运蛋白质、MHC I类和II类分子、细胞因子、趋化因子和/或受体，或上述任何一个的片段或子单元来治疗疾病或病症。
在某些实施方案中，疾病或病症是癌症。
在某些实施方案中，癌症选自膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管癌、子宫内膜癌、肝细胞癌、肾癌、黑色素瘤、骨髓瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、尤文氏肉瘤和霍奇金淋巴瘤。
在某些实施方案中，癌症是实体瘤。
在某些实施方案中，疾病或病症是炎性或自身免疫性疾病。
在某些实施方案中，疾病或病症是炎性疾病。
在某些实施方案中，疾病或病症是自身免疫性疾病。
5.10.定义
应当理解，本公开不限于所描述的特定实施方案，因此当然可以变化。还应理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并且并非旨在是限制性的，因为本公开的范围将仅由所附权利要求进行限制。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域中普通技术人员通常所理解的相同的含义。与本文所述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以用于本公开的实施方案的实践或测试。
必须指出，如本文和所附权利要求中所用，单数形式“一个/种(a)”“和”和“该/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因此，例如，对“化合物”的提及不仅包括单一化合物，而且包括两种或更多种化合物的组合，对“取代基”的提及包括单一取代基以及两种或更多种取代基等。
在描述并要求保护本发明时，某些术语将根据以下列出的定义来使用。应了解，本文提供的定义并非旨在相互排斥。因此，一些化学部分可落在多于一个术语的定义范围内。
如本文所用，短语“例如(for example)”、“例如(for instance)”、“诸如(suchas)”或“包括”意在引入进一步阐明更一般主题的实例。提供这些实例仅仅是为了帮助理解本公开，并非旨在以任何方式进行限制。
本文所论述的公布仅针对它们在本申请提交日之前的公开内容而提供。此处的任何信息都不应解释为承认本发明无权先于现有发明的此类公开。进一步地，所提供的出版物的日期可不同于可能需要被单独确认的实际出版日期。
术语“蛋白质”和“多肽”可互换使用。蛋白质可以包括除氨基酸以外的部分(例如，可以是糖蛋白质等)并且/或者可以以其他方式加工或修饰。本领域普通技术人员将理解，“蛋白质”可以是由细胞产生的完整蛋白质链(具有或不具有信号序列)，或者可以是其蛋白质部分。普通技术人员将理解蛋白质有时可以包括多于一条例如非共价或共价附接，例如通过一个或多个二硫键连接或通过其他方式缔合的蛋白质链。在某些实施方案中，多肽可以以单链或者两个或更多个相关链的形式存在，例如，可以以多聚体例如二聚体、三聚体的形式存在。该术语还涵盖已经被天然地修饰或通过干预，例如，通过二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰而修饰的氨基酸聚合物。还包括在该定义内的是例如，含有一种或多种氨基酸类似物(包括但不限于非天然氨基酸)以及本领域已知的其他修饰的多肽。多肽可以包含L-氨基酸、D-氨基酸或两者，并且可以包含本领域已知的多种氨基酸修饰或类似物中的任何一种。有用的修饰包括例如末端乙酰化、酰胺化、甲基化等。在一些实施方案中，蛋白质可以包括天然氨基酸、非天然氨基酸、合成氨基酸及其组合。在一些实施方案中，蛋白质是抗体、抗体片段、其生物活性部分和/或其特征部分。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”是本领域术语并且在本文中可以以其最广泛的含义互换使用，并且包括包含一个或多个特异性地结合到抗原或表位的抗原结合结构域的某些类型的免疫球蛋白分子。
在某些实施方案中，特异性地结合感兴趣的蛋白质例如EGFR的本文所述的分离的抗体(例如单克隆抗体)或其抗原结合片段与一个或多个溶酶体靶向部分缀合，例如，经由接头。
“抗原”是包含抗体可以特异性地结合的表位的部分或分子。因此，抗原也与抗体特异性地结合。在一个具体的实施方案中，本文所述的抗体所结合的抗原是感兴趣的蛋白质，例如，EGFR(例如，人EGFR)，或其片段，或例如，EGFR(例如，人EGFR)的胞外结构域。
“表位”是本领域已知的术语，是指抗体可以特异性地结合的抗原的局部区域。表位可以是连续氨基酸的线性表位或可以包含来自抗原的两个或更多个非连续区域的氨基酸。
在抗体结合的上下文中，术语“结合”、“结合到”、“特异性地结合”或“特异性地结合到”是指抗体与抗原(例如，表位)的结合，因为这种结合是本领域技术人员所理解的。例如，特异性地结合到抗原的分子可以结合到其他多肽，通常以较低的亲和力，如通过例如免疫测定、BiacoreTM、KinExA 3000仪器(Sapidyne Instruments，Boise，ID)或本领域已知的其他测定所确定的。在一个具体的实施方案中，与抗原特异性地结合的分子与该抗原以比当该分子与另一种抗原结合时的Kd低(高)至少2log、2.5log、3log、4log的亲和力(Kd)结合。在另一个具体实施方案中，与抗原特异性地结合的分子不与其他蛋白质发生交叉反应。在另一个具体的实施方案中，其中EGFR是感兴趣的蛋白质，与抗原特异性地结合的分子不与其他非EGFR蛋白质发生交叉反应。
抗体具体包括但不限于全长抗体(完整的免疫球蛋白)、抗体片段、单克隆抗体、多克隆抗体、重组产生的抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、合成抗体、包含两条重链和两条轻链分子的四聚体抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链/抗体重链对、具有两个轻链/重链对(例如，相同对)的抗体、胞内抗体、异源缀合抗体、单域抗体、单价抗体、二价抗体(包括单特异性或双特异性二价抗体)、单链抗体或单链Fvs(scFv)、骆驼化抗体、affybodies、Fab片段、F(ab')片段、F(ab')2片段、二硫键连接的Fvs(sdFv)、抗独特型(anti-Id)抗体(包括，例如，抗-抗-Id抗体)，和上述任一种的表位结合片段。
抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a或IgG2b)的免疫球蛋白分子。在某些实施方案中，本文所述的抗体是IgG抗体(例如，人IgG)，或其类别(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或其亚类。
在一个具体实施方案中，抗体是包含两个重(H)链/轻(L)链对的4链抗体单元，其中H链的氨基酸序列是相同的并且L链的氨基酸序列是相同的。在一个具体实施方案中，H链和L链包含恒定区，例如人恒定区。在又一个更具体的实施方案中，此类抗体的L链恒定区是κ或λ轻链恒定区，例如人κ或λ轻链恒定区。在另一个具体实施方案中，此类抗体的H链恒定区包含γ重链恒定区，例如人γ重链恒定区。在一个具体实施方案中，此类抗体包含IgG恒定区，例如人IgG恒定区。
术语“恒定区域”或“恒定域”是本领域众所周知的抗体术语(有时称为“Fc”)，并且是指抗体部分，例如轻链和/或重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但可以表现出各种效应子功能，例如与Fc受体的相互作用。该术语是指免疫球蛋白分子的一部分，其相对于免疫球蛋白可变结构域具有通常更保守的氨基酸序列。
当用于提及抗体时，基于恒定结构域的氨基酸序列，术语“重链”可以指任何不同的类型，例如阿尔法(α)、德尔塔(δ)、艾普西龙(ε)、伽马(γ)和缪(μ)，其分别产生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类抗体，包括IgG的亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
当用于提及抗体时，基于恒定结构域的氨基酸序列，术语“轻链”可以指任何不同的类型，例如卡帕(κ)或拉姆达(λ)。轻链氨基酸序列是本领域众所周知的。在具体实施方案中，轻链是人轻链。
术语“单克隆抗体”是本领域众所周知的术语，是指从同源或基本同源抗体群体中获得的抗体。术语“单克隆”不限于用于制备抗体的任何特定方法。通常，单克隆抗体群体可以由细胞、细胞群体或细胞系产生。在具体实施方案中，如本文所用，“单克隆抗体”是由单细胞(例如，产生重组抗体的杂交瘤或宿主细胞)产生的抗体，其中该抗体特异性地结合表位，如通过例如ELISA或本领域或本文提供的实施例中已知的其他抗原结合或竞争性结合测定确定的。在特定实施方案中，单克隆抗体可以是嵌合抗体或人源化抗体。在某些实施方案中，单克隆抗体是单价抗体或多价(例如，二价)抗体。在特定实施方案中，单克隆抗体是单特异性或多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体的一部分，通常是轻链或重链的一部分，通常在成熟重链中氨基末端约110至120个氨基酸和成熟轻链中约90至100个氨基酸。可变区包括两侧为框架区(FR)的互补决定区(CDR)。通常，CDR和FR的空间方向如下，在N端到C端的方向：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。不希望受任何特定机制或理论的束缚，认为轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和抗体对表位的特异性。在一个具体的实施方案中，本文所述的抗体的氨基酸位置编号是根据欧盟索引，如Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department ofHealth and Human Services，NIH出版号91-3242。在某些实施方案中，可变区是人可变区。
在某些方面，抗体的CDR可以根据以下确定：(i)Kabat编号系统(Kabat等人(1971)Ann.NY Acad.Sci.190:382-391和Kabat等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH出版号91-3242)；或(ii)Chothia编号方案，在本文将被称为“Chothia CDRs”(参见例如Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.,196:901-917；Al-Lazikani等人,1997,J.Mol.Biol.,273:927-948；Chothia等人,1992,J.Mol.Biol.,227:799-817；Tramontano等人,1990,J.Mol.Biol.215(1):175-82；美国专利7,709,226；和Martin,A.,“Protein Sequence andStructure Analysis of Antibody Variable Domains”，Antibody Engineering,Kontermann和Dübel编辑，第31章，pp.422-439,Springer-Verlag,Berlin(2001))；或(iii)ImMunoGeneTics(IMGT)编号系统，例如描述于Lefranc,1999,The Immunologist,7:132-136和Lefranc等人,1999,Nucleic Acids Res.,27:209-212(“IMGT CDRs”)；或(iv)AbM编号系统，本文将被称为“AbM CDRs”，例如，如MacCallum等人,1996,J.Mol.Biol.,262:732-745中描述。也参见例如Martin,A.,“Protein Sequence and Structure Analysis ofAntibody Variable Domains”，Antibody Engineering,Kontermann和Dübel编辑，第31章，pp.422-439,Springer-Verlag,Berlin(2001)；或(v)Contact编号系统，本文将其称为“Contact CDRs”(Contact定义是基于对可用复杂晶体结构的分析(bioinf.org.uk/abs)(参见，例如，MacCallum等人，1996，J.Mol.Biol.,262:732-745))。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“整个抗体”在本文中可互换使用，是指基本上完整形式的抗体，而不是如下定义的抗体片段。该术语特别是指具有包含Fc区的重链的抗体。
“抗体片段”仅包含完整抗体的一部分，其中当存在于完整抗体中时，该部分保留至少一种、两种、三种和尽可能最多的或全部的通常与该部分相关的功能。一方面，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，因此保留了结合抗原的能力。在另一个方面，抗体片段，例如包含Fc区的抗体片段，当存在于完整抗体中时保留至少一种通常与Fc区相关的生物学功能。这样的功能可以包括FcRn结合、抗体半衰期调节、缀合物功能和补体结合。在另一个方面，抗体片段是具有与完整抗体基本相似的体内半衰期的单价抗体。例如，这样的抗体片段可以包含与能够赋予片段体内稳定性的Fc序列连接的抗原结合臂。适合用于本公开的化合物的抗体片段包括例如Fv片段、Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、scFv(sFv)片段和scFv-Fc片段。
如本文可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸,或其类似物)的多聚形式。多核苷酸可以具有任何三维结构，并且可以执行任何已知或未知的功能。多核苷酸的非限制性实例包括基因、基因片段、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、支链多核苷酸、质粒、载体、任何序列的经分离的DNA、控制区、任何序列的经分离的RNA、核酸探针和引物。核酸分子可为直链的或环状的。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或者可以通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应并入到聚合物中的任何底物。多核苷酸可以包含经修饰的核苷酸，诸如甲基化的核苷酸及其类似物。核苷酸分子可以是适体。
术语“纯化(的)”是指物质(化合物、多核苷酸、蛋白质、多肽、多肽组合物)的分离，该分离使得感兴趣的物质占其所在样本的大部分。通常在样本中，基本上纯化的组分占样本的50％、80％-85％、90-99％，诸如至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％。用于纯化感兴趣的多核苷酸、多肽和病毒颗粒的技术是本领域众所周知的，并且包括例如离子交换色谱、亲和色谱和根据密度的沉降。
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等是指获得所需的药理和/或生理作用，诸如肿瘤负荷减少。该作用就完全或部分预防疾病或其症状而言可为预防性的并且/或者就部分或完全治愈疾病和/或可归因于疾病的副作用而言可为治疗性的。如本文所用的“治疗(Treatment)”涵盖哺乳动物特别是人类疾病的任何治疗，并且包括：(a)预防可能易患疾病但尚未被诊断患有疾病(例如，包括可能与原发性疾病相关或由原发性疾病引起的疾病(如在慢性HCV感染的上下文中可能引起的肝纤维化中))的受试者发生疾病或疾病症状发生；(b)抑制疾病，即遏制其发展；和(c)缓解疾病，即导致疾病消退(例如，肿瘤负担减少)。
术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指动物，包括但不限于人和非人灵长类动物，包括猿猴和人类；啮齿动物类，包括大鼠和小鼠；牛科动物；马科动物；绵羊；猫科动物；犬科动物等。“哺乳动物”意指任何哺乳动物物种的一个或多个成员，并且包括例如犬科动物；猫科动物；马科动物；牛科动物；绵羊；啮齿动物等以及灵长类动物(例如非人灵长类动物)和人。非人动物模型，例如哺乳动物，例如非人灵长类动物、鼠科动物、兔形目等可用于实验研究。
“治疗有效量”或“有效量”意指当施用给哺乳动物或其他受试者用于治疗疾病、疾患或病症时，足以实现此种针对该疾病、疾患或病症的治疗的化合物的量。“治疗有效量”将取决于化合物、疾病及其严重程度和待治疗的受试者的年龄、体重等。
除非另有特别说明，在化合物可呈现替代互变异构体、区域异构体和/或立体异构体形式的情况下，所有代替异构体旨在涵盖在要求保护的主题的范围内。例如，当化合物被描述为特定的旋光异构体D-或L-时，意在将两种旋光异构体都包括在本文中。例如，在化合物被描述为具有两种互变异构形式之一的情况下，旨在将两种互变异构体都包括在本文中。因此，本文提供的化合物可以是对映体纯的，或者是立体异构体或非对映异构体混合物。本文提供的化合物可以包含手性中心。这样的手性中心可以是(R)或(S)构型，或者可以是它们的混合物。本文提供的化合物的手性中心可在体内进行差向异构化。本文提供的化合物的手性中心可在体内进行差向异构化。因此，本领域技术人员将认识到，对于在体内经历差向异构化的化合物而言，施用其(R)形式的化合物等同于施用其(S)形式的化合物。
本公开还包括根据本公开的化合物的所有合适的同位素变体，无论是否具有放射性。根据本公开的化合物的同位素变体被理解为是指这样的化合物，其中根据本公开的化合物中的至少一个原子已被交换为具有相同原子序数但具有与通常或主要存在于自然界中的原子质量不同的原子质量的另一原子。可以结合到根据本公开的化合物中的同位素的实例是氢、碳、氮、氧、氟、氯、溴和碘的同位素，例如2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、18F、36Cl、82Br、123I、124I、125I、129I和131I。根据本公开的化合物的特定同位素变体，尤其是其中已并入一种或多种放射性同位素的那些，可能有益于例如检查体内的作用机制或活性化合物分布。用3H、14C和/或18F同位素标记的化合物适用于此目的。此外，同位素(例如氘)的并入由于化合物的更高代谢稳定性，例如延长体内半衰期或减少所需的活性剂量，可导致特别的治疗益处。在一些实施方案中，本文所述的化合物的氢原子可以被氘原子取代。在某些实施方案中，“氘化的”如应用于化学基团并且除非另有说明，是指以显著大于其天然丰度的量在同位素方面富含氘的化学基团。根据本公开的化合物的同位素变体可以通过各种方法制备，包括例如下文和工作实施例中描述的方法，其通过使用其中的特定试剂和/或起始化合物的相应同位素修饰。
因此，本文所述的任何实施方案意在包括化合物的盐、单一立体异构体、立体异构体的混合物和/或同位素形式。
“药学上可接受的赋形剂”、“药学上可接受的稀释剂”、“药学上可接受的载剂”和“药学上可接受的佐剂”意指可用于制备药物组合物的赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂，其通常安全、无毒且在生物学上和在其他方面不是不符合需要的，并且包括对于兽用以及人类药物使用是可接受的赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂。如说明书和权利要求中使用的“药学上可接受的赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂”包括一种和多于一种此类赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂。
“药物组合物”意在涵盖适合于施用给受试者(诸如哺乳动物,尤其是人)的组合物。一般地讲，“药物组合物”是无菌的，并且优选不含能够在受试者内引起不希望的反应的污染物(例如，药物组合物中的一种或多种化合物是药用级)。药物组合物可以被设计用于经由许多不同的施用途径施用给有此需要的受试者或患者，该施用途径包括经口、经颊、直肠、胃肠外、腹膜内、真皮内、气管内、肌内和皮下等。
术语“药学上可接受的”意指被联邦或州政府的监管机构批准，或在美国药典、欧洲药典或其他公认的药典中列出用于动物，更特别是用于人类。
术语“药学上可接受的盐”是指适用于与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等的那些盐。药学上可接受的盐是本领域众所周知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,66:1-19(1977)中详细描述了药学上可接受的盐。该盐可以在缀合物化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或者通过化合物的游离碱官能团或基团与合适的有机酸反应单独制备。药学上可接受的盐的实例包括但不限于无毒的酸加成盐，或与无机酸形成的氨基的盐
“酰基”是指基团H-C(O)-、烷基-C(O)-、取代的烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、取代的烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、取代的炔基-C(O)-、环烷基-C(O)-、取代的环烷基-C(O)-、环烯基-C(O)-、取代的环烯基-C(O)-、芳基-C(O)-、取代的芳基-C(O)-、杂芳基-C(O)-、取代的杂芳基-C(O)-、杂环基-C(O)-和取代的杂环基-C(O)-，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环的和取代的杂环如本文所定义。例如，酰基包括“乙酰基”基团CH3C(O)-
术语“烷基”是指支链的或无支链的饱和烃基基团(即,单基)，通常但不一定含有1至约24个碳原子，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、辛基、癸基等，以及环烷基，诸如环戊基、环己基等。通常，尽管不是必须的，本文中烷基基团可含有1至约18个碳原子，并且此类基团可含有1至约12个碳原子。术语“低级烷基”意指1至6个碳原子的烷基基团。“取代的烷基”是指被一个或多个取代基基团取代的烷基，并这包括其中来自烷基取代基中同一碳原子的两个氢原子被替代的情况，诸如在羰基基团(即，取代的烷基基团可包含-C(＝O)-部分)中。术语“含有杂原子的烷基”和“杂烷基”是指其中至少一个碳原子被杂原子替代的烷基取代基，如下文进一步所详述。如果未另行说明，术语“烷基”和“低级烷基”分别包括直链、支链、环状、未取代、取代和/或含杂原子的烷基或低级烷基。
术语“取代的烷基”意在包括如本文定义的烷基基团，其中烷基链中的一个或多个碳原子已任选地被杂原子诸如-O-、-N-、-S-、-S(O)n-(其中n为0至2)、-NR-(其中R是氢或烷基)取代，并且该烷基基团具有1个至5个选自由以下组成的组的取代基：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、氨基酰基、氨基酰基氧基、氧基氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳基氧基、硫代杂芳基氧基、硫代杂环氧基(thioheterocyclooxy)、硫醇、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳基氧基、杂芳基、杂芳基氧基、杂环基、杂环氧基、羟基氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基和-NRaRb，其中R’和R”可为相同或不同的并且选自氢、任选取代的烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、杂芳基和杂环。
术语“烯基”是含有至少一个双键的2至24个碳原子的直链、支链或环状烃基团，诸如乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、辛烯基、癸烯基、十四烯基、十六烯基、二十烯基、二十四烯基等。通常，尽管同样不是必须的，本文的烯基基团可含有2个至约18个碳原子，并且例如可含有2个至12个碳原子。术语“低级烯基”意指2至6个碳原子的烯基基团。术语“取代的烯基”是指被一个或多个取代基基团取代的烯基，并且术语“含杂原子的烯基”和“杂烯基”是指其中至少一个碳原子被杂原子取代的烯基。如果未另行说明，术语“烯基”和“低级烯基”分别包括直链、支链、环状、未取代、取代和/或含杂原子的烯基和低级烯基。
术语“炔基”是指含有至少一个三键的2至24个碳原子的直链或支链烃基团，诸如乙炔基、正丙炔基等。通常，尽管同样不是必须的，本文的炔基基团可含有2个至约18个碳原子，并且此类基团可进一步含有2至12个碳原子。术语“低级炔基”意指2至6个碳原子的炔基基团。术语“取代的炔基”是指被一个或多个取代基基团取代的炔基，并且术语“含杂原子的炔基”和“杂炔基”是指其中至少一个碳原子被杂原子取代的炔基。如果未另行说明，术语“炔基”和“低级炔基”分别包括直链、支链、未取代、取代和/或含杂原子的炔基和低级炔基。
术语“烷氧基”是指通过单一的末端醚键联结合的烷基基团；即，“烷氧基”基团可以表示为-O-烷基，其中烷基如上所定义。“低级烷氧基”基团是指含有1至6个碳原子的烷氧基基团，并且包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基等。本文中标识为“C1-C6烷氧基”或“低级烷氧基”的取代基可以，例如，可以含有1至3个碳原子，并且作为进一步的实例，此类取代基可含有1或2个碳原子(即，甲氧基和乙氧基)。
术语“取代的烷氧基”是指以下基团：取代的烷基-O-、取代的烯基-O-、取代的环烷基-O-、取代的环烯基-O-和取代的炔基-O-，其中取代的烷基、取代的烯基、取代的环烷基、取代的环烯基和取代的炔基如本文所定义。
除非另有规定，术语“芳基”是指芳族取代基，其通常但并非一定，含有5至30个碳原子并且含有单个芳族环或多个芳族环，该多个芳族环稠合在一起、直接连接或间接连接(使得不同的芳族环结合到常见基团诸如亚甲基或亚乙基部分)。芳基基团可以，例如，含有5至20个碳原子，并且作为进一步的实例，芳基基团可含有5至12个碳原子。例如，芳基基团可含有一个芳族环或两个或更多个稠合或连接的芳族环(即，联芳基、芳基取代的芳基等)。实例包括苯基、萘基、联苯基、二苯醚、二苯基胺、二苯甲酮等。“取代的芳基”是指被一个或多个取代基基团取代的芳基部分，并且术语“含杂原子的芳基”和“杂芳基”是指芳基取代基，其中至少一个碳原子被杂原子取代，如下文进一步所详述。芳基意在包括稳定的环状、杂环、多环和多杂环不饱和C3-C14部分，例如但不限于苯基、联苯基、萘基、吡啶基、呋喃基、噻吩基(thiophenyl)、咪唑基、嘧啶基和噁唑基；其可以被一至五个选自由以下组成的组的成员进一步取代：羟基、C1-C8烷氧基、C1-C8支链或直链烷基、酰基氧基、氨基甲酰基、氨基、N-酰基氨基、硝基、卤素、三氟甲基、氰基和羧基(参见例如Katritzky,Handbook ofHeterocyclic Chemistry)。如果没有其他指示，术语“芳基”包括未取代的、取代的和/或含杂原子的芳族取代基。
术语“芳烷基”是指具有芳基取代基的烷基基团，并且术语“烷芳基”是指具有烷基取代基的芳基基团，其中“烷基”和“芳基”如上所定义。一般地讲，本文中芳烷基和烷芳基含有6至30个碳原子。芳烷基和烷芳基基团可以，例如，含有6至20个碳原子，并且作为进一步的实例，此类基团可含有6至12个碳原子。
术语“亚烷基”是指双基(di-radical)的烷基基团。除非另有指示，此类基团包括含有1至24个碳原子的饱和烃链，其可为取代的或未取代的，可含有一个或多个脂环族基团，并且可为含杂原子的。“低级亚烷基”是指含有1至6个碳原子的亚烷基键联。实例包括亚甲基(--CH2--)、亚乙基(--CH2CH2--)、亚丙基(--CH2CH2CH2--)、2-甲基亚丙基(--CH2--CH(CH3)--CH2--)、亚己基(--(CH2)6--)等。
类似地，术语“亚烯基”、“亚炔基”、“亚芳基”、“亚芳烷基”和“亚烷芳基”分别是指双基的烯基、炔基、芳基、芳烷基和烷芳基基团。
术语“氨基”是指基团-NRR’，其中R和R’独立地是氢或非氢取代基，其中非氢取代基包括例如烷基、芳基、烯基、芳烷基和它们的取代的变体和/或含杂原子的变体。
术语“卤基”和“卤素”以常规意义用于指代氯基、溴基、氟基或碘基取代基。
“羧基(Carboxyl)”、“羧基(carboxy)”或“羧酸酯/盐”是指–CO2H或其盐。
“环烷基”是指具有单个或多个环状环(包括稠合环、桥接环和螺环体系)的3至10个碳原子的环状烷基基团。合适的环烷基的实例包括例如金刚烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环辛基等。此类环烷基包括例如单环结构(诸如环丙基、环丁基、环辛基等)或多环结构(诸如金刚烷基等)。
术语“取代的环烷基”是指具有1至5个取代基或1至3个取代基的环烷基基团，该取代基选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰胺基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨酰基、氨基酰氧基、氧基氨酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基(thioketo)、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、硫醇、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟基氨基、烷氧氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-杂芳基
如“含杂原子的烷基基团”(也称为“杂烷基”基团)或“含杂原子的芳基基团”(也称为“杂芳基”基团)中的术语“含杂原子的”是指其中一个或多个碳原子被除碳以外的原子(例如，氮、氧、硫、磷或硅，通常为氮、氧或硫)替代的分子、键联或取代基。同样地，术语“杂烷基”是指含杂原子的烷基取代基，术语“杂环烷基”是指含杂原子的环烷基取代基，术语“杂环的”或“杂环”是指含杂原子的环状取代基，术语“杂芳基”和“杂芳族”分别是指含杂原子的“芳基”和“芳族”取代基等。杂烷基基团的实例包括烷氧基芳基、烷基硫烷基取代的烷基、N-烷基化氨基烷基等。杂芳基取代基的实例包括吡咯基、吡咯烷基、吡啶基、喹啉基、吲哚基、呋喃基、嘧啶基、咪唑基、1,2,4-三唑基、四唑基等，并且含杂原子的脂环族基团的实例为吡咯烷子基、吗啉代、哌嗪子基、哌啶子基、四氢呋喃基等。
“杂芳基”是指环中具有1至15个碳原子(诸如1至10个碳原子)和1至10个选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子的芳族基团。此类杂芳基基团可以在环体系中具有单环(诸如吡啶基、咪唑基或呋喃基)或多个稠合环(例如，如在诸如吲哚嗪基、喹啉基、苯并呋喃、苯并咪唑基或苯并噻吩基的基团中)，其中环体系内的至少一个环是芳族的，条件是附接点是通过芳族环的原子。在某些实施方案中，杂芳基基团的一个或多个氮和/或硫环原子任选地被氧化以提供N-氧化物(N→O)、亚磺酰基或磺酰基部分。该术语包括例如吡啶基、吡咯基、吲哚基、噻吩基和呋喃基。除非另外受杂芳基取代基的定义所限制，此类杂芳基基团可以任选地被1至5个取代基、或1至3个取代基取代，该取代基选自酰基氧基、羟基、硫醇、酰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、取代的烷基、取代的烷氧基、取代的烯基、取代的炔基、取代的环烷基、取代的环烯基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、酰基氨基、烷芳基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、羧基烷基、氰基、卤素、硝基、杂芳基、杂芳基氧基、杂环基、杂环氧基、氨基酰基氧基、氧基酰基氨基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫代杂芳基氧基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-杂芳基以及三卤代甲基。
术语“杂环”、“杂环的”和“杂环基”是指具有单环或多个稠合环(包括稠合环、桥接环和螺环体系)和具有3至15个环原子(包括1至4个杂原子)的饱和或不饱和基团。这些环杂原子选自氮、硫和氧，其中在稠合环体系中，一个或多个环可以是环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，条件是附接点是通过非芳香族环。在某些实施方案中，杂环基团的一个或多个氮原子和/或硫原子被任选地氧化以提供N-氧化物、-S(O)-或–SO2-部分。
杂环和杂芳基的实例包括但不限于：氮杂环丁烷、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲嗪、异吲哚、吲哚、二氢吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹噁啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、异噻唑、吩嗪、异噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚啉、邻苯二甲酰亚胺、1,2,3,4-四氢异喹啉、4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑烷、噻吩、苯并[b]噻吩(benzo[b]thiophene)、吗啉基、硫代吗啉基(也称为硫杂吗啉基(thiamorpholinyl))、1,1-二氧代硫代吗啉基、哌啶基、吡咯烷、四氢呋喃基等。
除非另外受杂环取代基的定义所限制，此类杂环基团可以任选地被1至5个，或1至3个取代基取代，该取代基选自烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰胺基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨酰基、氨基酰氧基、氧基氨酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、硫醇、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟基氨基、烷氧氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基和稠合的杂环
“烃基”是指含有1至约30个碳原子(包括1至约24个碳原子，进一步包括1至约18个碳原子，并且进一步包括约1至12个碳原子)的单价烃基自由基，包括直链、支链、环状、饱和和不饱和的物质，诸如烷基基团、烯基基团、芳基基团等。烃基可被一个或多个取代基基团取代。术语“含杂原子的烃基”是指其中至少一个碳原子被杂原子替代的烃基。除非另外指示，术语“烃基”应解释为包括取代的和/或含杂原子的烃基部分。
如前面提到的定义中一些定义中提到的，如“取代的烃基”、“取代的烷基”、“取代的芳基”等中的“取代(的)”意指在烃基、烷基、芳基或其他部分中，与碳(或其他)原子结合的至少一个氢原子被一个或多个非氢取代基替代。此类取代基的实例包括但不限于官能团和烃基部分C1-C24烷基(包括C1-C18烷基，进一步包括C1-C12烷基，并且进一步包括C1-C6烷基)、C2-C24烯基(包括C2-C18烯基，进一步包括C2-C12烯基，并且进一步包括C2-C6烯基)、C2-C24炔基(包括C2-C18炔基，进一步包括C2-C12炔基，并且进一步包括C2-C6炔基)、C5-C30芳基(包括C5-C20芳基，并且进一步包括C5-C12芳基)和C6-C30芳烷基(包括C6-C20芳烷基，并且进一步包括C6-C12芳烷基)。上面提到的烃基部分可进一步被一个或多个官能团或另外的烃基部分诸如具体枚举的那些官能团取代。除非另外指示，本文所述的任何基团除未取代的基团外，需解释为包括取代的和/或含杂原子的部分。
“磺酰基”是指基团SO2-烷基、SO2-取代的烷基、SO2-烯基、SO2-取代的烯基、SO2-环烷基、SO2-取代的环烷基、SO2-环烯基、SO2-取代的环烯基、SO2-芳基、SO2-取代的芳基、SO2-杂芳基、SO2-取代的杂芳基、SO2-杂环基和SO2-取代的杂环基，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基和取代的杂芳基如本文所定义。磺酰基包括例如甲基-SO2-、苯基-SO2-和4-甲基苯基-SO2-
术语“官能团”意指化学基团，诸如卤基、羟基、巯氢基、C1-C24烷氧基、C2-C24烯基氧基、C2-C24炔基氧基、C5-C20芳基氧基、酰基(包括C2-C24烷基羰基(-CO-烷基)和C6-C20芳基羰基(-CO-芳基))、酰基氧基(-O-酰基)、C2-C24烷氧基羰基(-(CO)-O-烷基)、C6-C20芳基氧基羰基(-(CO)-O-芳基)、卤代羰基(-CO)-X，其中X是卤基)、C2-C24烷基氧基羰氧基(carbonato)(-O-(CO)-O-烷基)、C6-C20芳基氧基羰氧基(-O-(CO)-O-芳基)、羧基(-COOH)、羧酸根基(-COO-)、氨基甲酰基(-(CO)-NH2)、单取代的C1-C24烷基氨基甲酰基(-(CO)-NH(C1-C24烷基))、二取代的烷基氨基甲酰基(-(CO)-N(C1-C24烷基)2)、单取代的芳基氨基甲酰基(-(CO)-NH-芳基)、硫代氨基甲酰基(-(CS)-NH2)、脲基(-NH-(CO)-NH2)、氰基(-C≡N)、异氰基(-N+≡C-)、氰氧基(-O-C≡N)、异氰氧基(-O-N+≡C-)、异氰硫基(-S-C≡N)、叠氮基(-N＝N+＝N-)、甲酰基(-(CO)-H)、硫代甲酰基(-(CS)-H)、氨基(-NH2)、单-和二-(C1-C24烷基)-取代的氨基、单-和二-(C5-C20芳基)-取代的氨基、C2-C24烷基酰胺基(-NH-(CO)-烷基)、C5-C20芳基酰胺基(-NH-(CO)-芳基)、亚胺基(-CR＝NH，其中R＝氢、C1-C24烷基、C5-C20芳基、C6-C20烷芳基、C6-C20芳烷基等)、烷基亚胺基(-CR＝N(烷基)，其中R＝氢、烷基、芳基、烷芳基等)、芳基亚胺基(-CR＝N(芳基)，其中R＝氢、烷基、芳基、烷芳基等)、硝基(-NO2)、亚硝基(-NO)、磺酸基(-SO2-OH)、磺基氧基(-SO2-O-)、C1-C24烷基硫烷基(-S-烷基；也称为“烷硫基”)、芳基硫烷基(-S-芳基；也称为“芳硫基”)、C1-C24烷基亚磺酰基(-(SO)-烷基)、C5-C20芳基亚磺酰基(-(SO)-芳基)、C1-C24烷基磺酰基(-SO2-烷基)、C5-C20芳基磺酰基(-SO2-芳基)、膦酸基(-P(O)(OH)2)、膦酸根基(-P(O)(O-)2)、亚膦酸根基(-P(O)(O-))、二氧磷基(-PO2)和膦基(-PH2)、单-和二-(C1-C24烷基)-取代的膦基、单-和二-(C5-C20芳基)-取代的膦。此外，如果特定基团允许，前面提到的官能团可被一个或多个另外的官能团或被一个或多个烃基部分诸如以上具体枚举的那些进一步取代
如“连接基团(linking group)”、“接头部分”等中的“连接”或“接头”意指经由共价键连接两个基团的连接部分。接头可为直链、支链、环状或单原子。此类连接基团的实例包括烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚烷芳基、亚芳烷基和含有官能团的连接部分，该官能团包括但不限于：酰胺基(-NH-CO-)、亚脲基(-NH-CO-NH-)、二酰亚胺(-CO-NH-CO-)、环氧(-O-)、环硫(-S-)、环二氧(-O-O-)、羰基二氧基(-O-CO-O-)、烷基二氧基(-O-(CH2)n-O-)、环氧亚胺基(-O-NH-)、环亚胺基(-NH-)、羰基(-CO-)等。在某些情况下，接头主链的一个、两个、三个、四个或五个或多个碳原子可任选地被硫、氮或氧杂原子取代。主链原子之间的键可以是饱和的或不饱和的，通常在接头主链中将存在不超过一个、两个或三个不饱和键。接头可包括一个或多个取代基，其例如具有烷基、芳基或烯基。接头可包括但不限于一个或多个聚(乙二醇)单元(例如，-(CH2-CH2-O)-)；醚、硫醚、胺、烷基(例如，(C1-C12)烷基)，其可以是直链的或支链的，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)等。接头主链可以包含环状基团，例如芳基、杂环或环烷基，其中主链中包含环状基团的2个或更多个原子，例如2个、3个或4个原子。接头可以是可切割的或不可切割的。可使用接头到被连接的基团的任何方便的取向和/或连接。
当术语“取代的”出现在可能的取代的基团清单之前时，预期该术语适用于该基团的每个成员。例如，短语“取代的烷基和芳基”应解释为“取代的烷基和取代的芳基”
除本文的公开之外，术语“取代的”当用于修饰指定基团或自由基时，也可以意指该指定基团或自由基的一个或多个氢原子彼此独立地被如以下定义的相同或不同取代基基团替代。
除针对本文各个术语而公开的基团外，除非另有指示，用于取代指定基团或自由基中饱和碳原子上的一个或多个氢(单个碳上的任何两个氢都可被＝O、＝NR70、＝N-OR70、＝N2或＝S替代)的取代基基团是-R60、卤基、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-SO2R70、-SO2O–M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O–M+、-OSO2OR70、-P(O)(O–)2(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O–M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2 –M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下组成的组：任选取代的烷基、环烷基、杂烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，每个R70独立地是氢或R60；每个R80独立地是R70或替代地，两个R80’与它们所键合至的氮原子一起形成5-、6-或7-元杂环烷基，该杂环烷基可任选地包含1至4个选自由O、N和S组成的组的相同或不同的另外的杂原子，其中N可具有-H或C1-C3烷基取代；并且每个M+是带有单个净正电荷的反离子。每个M+可独立地是例如碱金属离子，诸如K+、Na+、Li+；铵离子，诸如+N(R60)4；或碱土离子，诸如[Ca2+]0.5、[Mg2+]0.5或[Ba2+]0.5(“下标0.5意指此类二价碱土离子的其中一个反离子可以是本发明化合物的离子化形式而另一个为典型的反离子诸如氯离子，或者本文公开的两种离子化化合物可以用作此类二价碱土离子的反离子，或者本发明的双离子化化合物可以用作此类二价碱土离子的反离子)。作为具体的实例，-NR80R80意在包括-NH2、-NH-烷基、N-吡咯烷基、N-哌嗪基、4N-甲基-哌嗪-1-基和N-吗啉基。
除本文的公开之外，除非另有指示，“取代的”烯烃、炔烃、芳基和杂芳基基团中不饱和碳原子上氢的取代基基团为-R60、卤基、-O-M+、-OR70、-SR70、-S–M+、-NR80R80、三卤代甲基、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、-N3、-SO2R70、-SO3 –M+、-SO3R70、-OSO2R70、-OSO3 –M+、-OSO3R70、-PO3 -2(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-CO2 –M+、-CO2R70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OCO2 –M+、-OCO2R70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2 –M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80和M+如前所定义，条件是在取代的烯烃或炔烃的情况下，取代基不是-O-M+、-OR70、-SR70或-S–M+。
除针对本文各个术语而公开的基团外，除非另有指示，用于“取代的”杂烷基和环杂烷基基团中氮原子上氢的取代基基团是-R60、-O-M+、-OR70、-SR70、-S-M+、-NR80R80、三卤基甲基、-CF3、-CN、-NO、-NO2、-S(O)2R70、-S(O)2O-M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OS(O)2O-M+、-OS(O)2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR 70)O-M+、-P(O)(OR70)(OR70)、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70C(O)OR70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80和M+如前所定义。
除本文的公开之外，在某些实施方案中，被取代的基团具有1、2、3或4个取代基，1、2或3个取代基，1或2个取代基，或1个取代基
本文中未明确定义的取代基的命名是通过命名功能团的末端部分，随后命名朝向该附接点的相邻功能团而实现，另有说明的除外。例如，取代基“芳基烷氧基羰基”是指基团(芳基)-(烷基)-OC(O)-。
对于本文所公开的含有一个或多个取代基的任何基团，当然应当理解，此类基团不含在空间上不切实际和/或在合成上不可行的任何取代或取代模式。此外，主题化合物包括由这些化合物的取代产生的所有立体化学异构体。
在某些实施方案中，取代基可促成化合物的旋光异构和/或立体异构。化合物的盐、溶剂化物、水合物和前药形式也是感兴趣的。本公开包含了所有此类形式。因此，本文所述的化合物包括其盐、溶剂化物、水合物、前药和异构体形式，包括其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药和异构体。在某些实施方案中，化合物可被代谢成药学上活性的衍生物
除非另有指示，对原子的提及意指包括该原子的同位素。例如，对H的提及意指包括1H、2H(即，D)和3H(即，T)，并且对C的提及意指包括12C和碳的所有同位素(诸如13C)。
除非另有说明，否则术语“约”或“大约”是指由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差，这部分取决于如何测量或确定该值在某些实施方案中，术语“约”或“大约”是指在1、2或3个标准差内在某些实施方案中，术语“约”或“大约”是指在给定值或范围的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.25％、0.2％、0.1％或0.05％之内在需要整数的某些实施方案中，术语“约”是指在给定值或范围的正负10％内，向上或向下舍入到最接近的整数。
在本说明书中，化学名称与化学结构如有不一致之处，以化学结构为准。
其他术语和概念的定义出现在整个具体实施方式中。
M6PR结合化合物和缀合物描述于2021年1月8日提交的国际申请号PCT/US2021/012846，其公开内容通过引用方式以其整体并入本文。
5.11.附加实施方案
本公开的附加实施方案也描述在以下条款中。
条款1.一种下式的细胞表面甘露糖-6-磷酸酯受体(M6PR)结合化合物：
或其盐，其中：
每个W独立地是亲水性头部基团；
每个Z1独立地选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
每个Z2独立地选自O、S、NR21和C(R22)2，其中每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
每个Ar独立地是任选取代的芳基或杂芳基连接部分(例如，任选取代的单环或双环芳基或杂芳基)；
每个Z3独立地是连接部分；
n是1至500；
L是接头；并且
Y是感兴趣的部分；
其中当m是1且Ar为苯基时，则：i)L包含至少16个连续原子的主链；ii)Y是生物分子；和/或ii)Z3是酰胺、磺酰胺、脲或硫脲。
条款2.根据条款1所述的化合物，其中每个Ar独立地选自任选取代的苯基、任选取代的吡啶基、任选取代的联苯基、任选取代的萘、任选取代的三唑和任选取代的亚苯基-三唑。
条款3.根据条款2所述的化合物，其中Ar选自任选取代的1,4-亚苯基、任选取代的1,3-亚苯基或任选取代的2,5-亚吡啶基。
条款4.根据条款3所述的化合物，其中所述化合物具有下式之一：
或其盐，其中：
每个R11至R14独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；并且
每个R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
条款5.根据条款1所述的化合物，其中Ar是任选取代的稠合双环芳基或稠合双环杂芳基。
条款6.根据条款5所述的化合物，其中Ar是任选取代的萘或任选取代的喹啉。
条款7.根据条款6所述的化合物，其中所述化合物具有下式之一：
或其盐，其中：
每个R11和R13至R14独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；
s是0至3；并且
每个R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
条款8.根据条款7所述的化合物，其中所述化合物具有下式之一：
或其盐。
条款9.根据条款1所述的化合物，其中Ar是任选取代的双环芳基或任选取代的双环杂芳基并且其中所述化合物具有下式
或其盐，其中：
每个Cy独立地是单环芳基或单环杂芳基；
每个R11至R15独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；
s是0至4；并且
每个R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
条款10.根据条款9所述的化合物，其中Ar是任选取代的联苯基，Cy是任选取代的苯基，并且所述化合物具有下式：
或其盐。
条款11.根据条款10所述的化合物，其中所述化合物具有下式之一：
或其盐。
条款12.根据条款1至10中任一项所述的化合物，其中Ar被至少一个OH取代基取代。
条款13.根据条款4、6、7、9和10中任一项所述的化合物，其中R11至R15各自为H。
条款14.根据条款4、6、7、9和10中任一项所述的化合物，其中R11至R15中的至少一者是OH(例如，至少两者是OH)。
条款15.根据条款1至14中任一项所述的化合物，其中：
Z3选自共价键、-O-、-NR23-、-NR23CO-、-CONR23-、-NR23CO2-、-OCONR23、-NR23C(＝X1)NR23-、-CR24＝N-、-CR24＝N-X2、-N(R23)SO2-和-SO2N(R23)-；
X1和X2选自O、S和NR23；并且
R23和R24独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
条款16.根据条款1至15中任一项所述的化合物，其中Z3是
其中：X1是O或S；t是0或1；并且每个R23独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
条款17.根据条款16所述的化合物，其中Z3是-NHC(＝X1)NH-，其中X1是O或S。
条款18.根据条款1至14中任一项所述的化合物，其中Ar是三唑，并且所述化合物具有下式之一：
条款19.根据化合物18所述的化合物，其中Z3是任选取代的三唑并且所述化合物具有下式之一
或其盐，
其中：
每个R11至R14独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；并且
每个R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
条款20.根据条款1至19中任一项所述的化合物，其中-Ar-Z3-选自：
/>
/>
条款21.根据条款1至20中任一项所述的化合物，其中m是至少2，并且L是将每个Ar基团共价连接至Y的支链接头。
条款22.根据条款21所述的化合物，其中m是2至20(例如，m是2至6，诸如2或3)。
条款23.根据条款21所述的化合物，其中：m是20至500(例如，20至400、20至300、或20至200、或50至500、或100至500)；并且L是α-氨基酸聚合物(例如，聚-L-赖氨酸)，其中大量-Ar-Z3-基团经由侧链基团共价连接到聚合物主链(例如，经由缀合到赖氨酸残基的侧链氨基基团)。
条款24.根据条款21至23中任一项所述的化合物，其中m是至少2，并且每个Z3连接部分经由接头L与每个其他Z3连接部分隔开至少16个连续原子的链(例如至少20、至少25或至少30个连续原子的链，并且在一些情况下多达100个连续原子的链)。
条款25.根据条款1至24中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有下式：
或其盐，其中：
n是1至500(例如，n是1至20、1至10、1至6或1至5)；
每个L1至L7独立地是在n个Z2基团和Y之间一起提供直链或支链接头的连接部分，并且其中–(L1)a-包括连接部分Ar，其是任选取代的芳基或杂芳基基团；
a为1或2；并且
b、c、d、e、f和g各自独立地是0、1或2。
条款26.根据条款25所述的化合物，其中所述直链或支链接头将每个Z2和Y分隔开至少16个连续原子(例如至少20个连续原子、至少30个连续原子或16至100个连续原子)的链。
条款27.根据条款25至26中任一项所述的化合物，其中n是1至20。
条款28.根据条款25至27中任一项所述的化合物，其中n为至少2(例如，n为2或3)。
条款29.根据条款28所述的化合物，其中d>0并且L4是与每个L1连接部分共价连接的支链连接部分。
条款30.根据条款25至29中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有下式
其中：
Ar是任选取代的芳基或杂芳基基团(例如，单环或双环或三环芳基或杂芳基基团)；
Z11是连接部分(例如，共价键、杂原子、具有1-3个原子长度的主链的基团或三唑)；
r为0或1；并且
n是1至6；
条款31.根据条款30所述的化合物，其中Ar选自任选取代的苯基、任选取代的吡啶基、任选取代的联苯基、任选取代的萘、任选取代的喹啉、任选取代的三唑、任选取代的苯基-三唑、任选取代的联苯基-三唑和任选取代的萘-三唑。
条款32.根据条款31所述的化合物，其中Ar是任选取代的1,4-亚苯基。
条款33.根据条款30至32中任一项所述的化合物，其中Ar被至少一个羟基取代。
条款34.根据条款25至33中任一项所述的化合物，其中L1或-Ar-(Z11)r-选自：
/>
其中：
Cy是单环芳基或杂芳基；
r为0或1；
s是0至4；
R11至R14和每个R15独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25，其中每个R25独立地选自H、C(1-6)-烷基和取代的C(1-6)-烷基；并且
Z11选自共价键、-O-、-NR23-、-NR23CO-、-CONR23-、-NR23CO2-、-OCONR23、-NR23C(＝X1)NR23-、-CR24＝N-、-CR24＝N-X2-和任选取代的三唑，其中X1和X2选自O、S和NR23，其中R23和R24独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
条款35.根据条款34所述的化合物，其中L1是
条款36.根据条款34所述的化合物，其中L1是
条款37.根据条款34所述的化合物，其中L1选自：
/>
条款38.根据条款34至37中任一项所述的化合物，其中r为0。
条款39.根据条款34至37中任一项所述的化合物，其中r为1且Z11选自-O-、-NR23-、-NR23CO-、CONR23-、-NR23CO2-、-OCONR23-、-NR23C(＝X1)NR23-、-CR24＝N-和-CR24＝N-X2-，其中X1和X2选自O、S和NR23，并且每个R23和R24独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
条款40.根据条款34至37中任一项所述的化合物，其中r为1并且Z11为
其中：X1是O或S；t是0或1；并且每个R23独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
条款41.根据条款40所述的化合物，其中Z11是-NHC(＝X1)NH-，其中X1是O或S。
条款42.根据条款34至37中任一项所述的化合物，其中r为1且Z11为三唑。
条款43.根据条款1至42中任一项所述的化合物，其中Y选自小分子、染料、荧光团、单糖、二糖、三糖和化学选择性连结基团或其前体。
条款44.根据条款1至42中任一项所述的化合物，其中Y是生物分子。
条款45.根据条款44所述的化合物，其中所述生物分子选自肽、蛋白质、多核苷酸、多糖、糖蛋白质、脂质、酶、抗体和抗体片段。
条款46.根据条款1至45中任一项所述的化合物，其中Y是特异性地结合靶蛋白质的部分。
条款47.根据条款46所述的化合物，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
条款48.根据条款46所述的化合物，其中所述靶蛋白质是细胞外蛋白质。
条款49.根据条款46至49中任一项所述的化合物，其中Y选自抗体、抗体片段(例如，抗体的抗原结合片段)、嵌合融合蛋白质、工程化蛋白质结构域、靶蛋白质的D-蛋白质结合剂、适体、肽、酶底物和小分子抑制剂或配体。
条款50.根据条款49所述的化合物，其中Y是特异性地结合靶蛋白质的抗体或抗体片段，并且所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中：
n是1至20；
m是1至80的平均负载；
Ab是特异性地结合靶蛋白质的抗体或抗体片段；并且
Z是由化学选择性连结基团与Ab的相容基团的共价键联产生的残基部分。
条款51.根据条款49所述的化合物，其中Y是靶蛋白质的小分子抑制剂或配体。
条款52.根据条款1至51中任一项所述的化合物，其中所述亲水性头部基团W选自–OH、–CR2R2OH、–OP＝O(OH)2、–SP＝O(OH)2、–NR3P＝O(OH)2、–OP＝O(SH)(OH)、–SP＝O(SH)(OH)、–OP＝S(OH)2、–OP＝O(N(R3)2)(OH)、–OP＝O(R3)(OH)、–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–(CR2R2)-P＝O(OH)2、–SO2OH(即，–SO3H)、–S(O)OH、–OSO2OH、–COOH、–CN、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)、–CONHSO2R3、–CONHSO2NR3R4、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、-NHC(O)CO2H、–NHSO2NHR3、-NHC(O)NHS(O)2R3、–NHSO2R3、–NHSO3H、 或其盐。
其中：R1和R2独立地是氢、SR3、卤基或CN，并且R3和R4独立地是H、C1-6烷基或取代的C1-6烷基(例如，-CF3或-CH2CF3)；A、B和C各自独立地是CH或N；并且D各自独立地是O或S。
条款53.根据条款52所述的化合物，其中W选自–P＝O(OH)2、–SO3H、–COOH和–CH(COOH)2或其盐。
条款54.根据条款1至53中任一项所述的化合物，其中：Z1是-(CH2)j-或-(C(R22)2)j-，其中每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；并且j为1至3。
条款55.根据条款1至53中任一项所述的化合物，其中Z1是-CH＝CH-。
条款56.根据条款1至55中任一项所述的化合物，其中Z2是O或S。
条款57.根据条款1至55中任一项所述的化合物，其中Z2是-NR21-。
条款58.根据条款1至55中任一项所述的化合物，其中Z2是-C(R22)2-，其中每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
条款59.根据条款1至53中任一项所述的化合物，其中：Z1选自-(CH2)j-、取代的(C1-C3)亚烷基和-CH＝CH-；j是1至3；并且Z2选自O和CH2。
条款60.根据条款60所述的化合物，其中：Z1是-(CH2)2-、-CH2-CF2-或-CH2-CHF-；并且Z2是O。
条款61.根据条款60所述的化合物，其中：Z1是-(CH2)2-、-CH2-CF2-或-CH2-CHF-；并且Z2是CH2。
条款62.根据条款60所述的化合物，其中：Z1是-CH＝CH-；并且Z2是O。
条款63.根据条款60所述的化合物，其中：Z1是-CH＝CH-；并且Z2是CH2。
条款64.根据条款1至63中任一项所述的化合物，其中X选自：
条款65.根据条款25至64中任一项所述的化合物，其中n是1至6(例如，n是1至5、或2至6、或1、2或3)，并且其中：
当d是0时，n是1；
当d是1时，n是1至3；并且
当d是2时，n是1至6。
条款66.根据条款25至65中任一项所述的化合物，其中：
每个L2独立地选自–C1-6-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-O(CH2)p–和–(OCH2CH2)p–，其中p是1至10；并且
每个L3独立地选自：
和–(OCH2CH2)q–，其中q是1至10，u为0至10，和w为1至10。
条款67.根据条款25至66中任一项所述的化合物，其中当n为2或更大时，存在至少一个L4并且是支链连接部分。
条款68.根据条款25至67中任一项所述的化合物，其中每个L4独立地选自：
–OCH2CH2–、
其中每个x和y各自独立地是1至10。
条款69.根据条款25至68中任一项所述的化合物，其中：
每个L5独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、或–(OCH2CH2)r–；
每个L6独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–或–(OCH2CH2)s–；
每个L7独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、–(OCH2CH2)t–或–OCH2–；并且
r、s和t各自独立地是1至20。
条款70.根据条款25至69中任一项所述的化合物，其中a是1。
条款71.根据条款25至70中任一项所述的化合物，其中b、c、e、f和g中的至少一者不为0。
条款72.根据条款25至71中任一项所述的化合物，其中b或c中的至少一个者为0，并且e、f和g中的至少一者不为0。
条款73.根据条款25至72中任一项所述的化合物，其中a、b和c各自独立地是1或2。
条款74.根据条款1至73中任一项所述的化合物，其中所述接头L选自表2-3的结构中的任何一种结构。
条款75.根据条款1至74中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自表5-9中的化合物。
条款76.一种式(I)的细胞表面受体结合缀合物：
Xn-L—Y
(I)
或其盐，其中：
X是结合到细胞表面甘露糖-6-磷酸酯受体(M6PR)的部分；
n是1至500(例如，n是1至20、1至10、1至6或1至5)；并且
L是接头；
Y是特异性地结合靶蛋白质的生物分子。
条款77.根据条款76所述的缀合物，其中所述缀合物具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中：
n是1至20；
m是1至80的平均负载；
Ab是特异性地结合所述靶蛋白质的抗体或抗体片段；并且
Z是由化学选择性连结基团与Ab的相容基团的共价键联产生的残基部分。
条款78.根据条款76或77所述的缀合物，其中n是1至6。
条款79.根据条款76或77所述的缀合物，其中n是2或更小。
条款80.根据条款79所述的缀合物，其中n是1。
条款81.根据条款76或77所述的缀合物，其中n为至少2。
条款82.根据条款81所述的缀合物，其中n是2。
条款83.根据条款81所述的缀合物，其中n是3。
条款84.根据条款81所述的缀合物，其中n是4。
条款85.根据条款76至84中任一项所述的缀合物，其中m是1至20。
条款86.根据条款76至84中任一项所述的缀合物，其中m是1至12。
条款87.根据条款76至86中任一项所述的缀合物，其中m是至少约2。
条款88.根据条款76至86中任一项所述的缀合物，其中m是至少约3。
条款89.根据条款76至86中任一项所述的缀合物，其中m是至少约4。
条款90.根据条款77至89中任一项所述的缀合物，其中Z是由硫醇反应性化学选择性连结基团与Ab的一个或多个半胱氨酸残基的的共价键联产生的残基部分。
条款91.根据条款76至89中任一项所述的缀合物，其中Z是由胺反应性化学选择性连结基团与Ab的一个或多个赖氨酸残基的共价键联产生的残基部分。
条款92.根据条款76至91中任一项所述的缀合物，其中X是结合M6PR的部分并且具有下式：
/>
或其盐，其中：
每个W独立地是亲水性头部基团；
每个Z1独立地选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；并且
每个Z2独立地选自O、S、NR21和C(R22)2，其中每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
条款93.根据条款92所述的缀合物，其中所述亲水性头部基团W选自–OH、–CR2R2OH、–OP＝O(OH)2、–SP＝O(OH)2、–NR3P＝O(OH)2、–OP＝O(SH)(OH)、–SP＝O(SH)(OH)、–OP＝S(OH)2、–OP＝O(N(R3)2)(OH)、–OP＝O(R3)(OH)、–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–(CR2R2)-P＝O(OH)2、–SO2OH(即，–SO3H)、–S(O)OH、–OSO2OH、–COOH、–CN、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)、–CONHSO2R3、–CONHSO2NR3R4、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、-NHC(O)CO2H、–NHSO2NHR3、-NHC(O)NHS(O)2R3、–NHSO2R3、–NHSO3H、 或其盐。
其中：R1和R2独立地是氢、SR3、卤基或CN，并且R3和R4独立地是H、C1-6烷基或取代的C1-6烷基(例如，-CF3或-CH2CF3)；A、B和C各自独立地是CH或N；并且D各自独立地是O或S。
条款94.根据条款93所述的缀合物，其中W选自–P＝O(OH)2、–SO3H、–CO2H和–CH(CO2H)2，或其盐。
条款95.根据条款92至94中任一项所述的缀合物，其中Z1是-(CH2)j-且j为1至3。
条款96.根据条款92至95中任一项所述的缀合物，其中Z1是-CH＝CH-。
条款97.根据条款92至96中任一项所述的缀合物，其中Z2是O或S。
条款98.根据条款92至96中任一项所述的缀合物，其中Z2是-NR21-。
条款99.根据条款92至96中任一项所述的缀合物，其中Z2是-C(R22)2-。
条款100.根据条款92至94中任一项所述的缀合物，其中：Z1选自-(CH2)j-、取代的(C1-C3)亚烷基和-CH＝CH-；j是1至3；并且Z2选自O和CH2。
条款101.根据条款100所述的缀合物，其中：Z1是-(CH2)2-、-CH2-CF2-或-CH2-CHF-；并且Z2是O。
条款102.根据条款100所述的缀合物，其中：Z1是-(CH2)2-、-CH2-CF2-或-CH2-CHF-；并且Z2是CH2。
条款103.根据条款100所述的缀合物，其中：Z1是-CH＝CH-；并且Z2是O。
条款104.根据条款100所述的缀合物，其中：Z1是-CH＝CH-；并且Z2是CH2。
条款105.根据条款92至104中任一项所述的缀合物，其中X选自：
条款106.根据条款76至105所述的缀合物，其中所述接头L具有式(IIa)：
-[(L1)a-(L2)b-(L3)c]n-(L4)d-(L5)e-(L6)f-(L7)g-
(IIa)
其中
每个L1至L7独立地是连接部分，并且一起提供介于X和Y之间的直链或支链接头；
a为1或2；
b、c、d、e、f和g各自独立地是0、1或2；
n是1至6(例如，n是1至5，或2至6，或1、2或3)。
条款107.根据条款108所述的缀合物，其中：
当d是0时，n是1；
当d是1时，n是1至3；并且
当d是2时，n是1至6。
条款111.根据条款109或110所述的缀合物，其中-(L1)a-包括任选取代的芳基或杂芳基连接部分。
条款112.根据条款111所述的缀合物，其中每个L1独立地选自/>
并且/>其中v为0至10并且z为0至10。
条款113.根据条款109至112中任一项所述的缀合物，其中：
每个L2独立地选自–C1-6-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-O(CH2)p–和–(OCH2CH2)p–，其中p是1至10；并且
每个L3独立地选自：
和–(OCH2CH2)q–，其中q是1至10，u为0至10，和w为1至10。
条款114.根据条款109至113中任一项所述的缀合物，其中当n为2或更大时，至少一个L4存在并且为支链连接部分。
条款115.根据条款109至114中任一项所述的缀合物，其中每个L4独立地选自：
–OCH2CH2–、
其中每个x和y各自独立地是1至10。
条款116.根据条款109至115中任一项所述的缀合物，其中：
每个L5独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、或–(OCH2CH2)r–；/>
每个L6独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–或–(OCH2CH2)s–；
每个L7独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、–(OCH2CH2)t–或–OCH2–；并且r、s和t各自独立地是1至20。
条款117.根据条款109至116中任一项所述的缀合物，其中a为1。
条款118.根据条款109至117中任一项所述的缀合物，其中b、c、e、f和g中的至少一者不为0。
条款119.根据条款109至118中任一项所述的缀合物，其中b或c中的至少一者不为0，并且e、f和g中的至少一者不为0。
条款120.根据条款109至119中任一项所述的化合物，其中a、b和c各自独立地是1或2。
条款121.根据条款109至120中任一项所述的缀合物，其中所述接头L选自表2-3的结构中的任何一种结构。
条款122.根据条款76或77所述的缀合物，其中所述缀合物选自：
i)衍生自本文所述的化合物表中的结构中的任何一种结构的化合物和生物分子的缀合的缀合物；
ii)衍生自本文所述化合物表中的结构中的任何一种结构的化合物和多肽的缀合的缀合物；或
iii)衍生自本文所述化合物表中的结构中的任何一种结构的化合物和抗体或抗体片段的缀合的缀合物。
条款123.根据条款77-122中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段是IgG抗体。
条款124.根据条款77-122中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段是人源化抗体。
条款125.根据条款77-124中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合到分泌的蛋白质或可溶性蛋白质。
条款126.根据条款77-124中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合到细胞表面受体。
条款127.一种在包含M6PR细胞表面受体的细胞中内化靶蛋白质的方法，所述方法包括：使包含所述细胞和所述靶蛋白质的细胞样品与有效量的条款1至75中任一项所述的化合物或条款76至132中任一项所述的缀合物接触，其中所述化合物或缀合物特异性地结合所述靶蛋白质并特异性地结合所述细胞表面受体以促进所述靶蛋白质的细胞摄取。
条款128.根据条款127所述的方法，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
条款129.根据条款127所述的方法，其中所述靶蛋白质是细胞外蛋白质。
条款130.根据条款127至129中任一项所述的方法，其中所述化合物或缀合物包含特异性地结合所述靶蛋白质的抗体或抗体片段(Ab)。
条款131.一种降低生物系统中靶蛋白质水平的方法，所述方法包括：使所述生物系统与有效量的条款1至75中任一项所述的化合物或条款76至126中任一项所述的缀合物接触，其中所述化合物或缀合物特异性地结合所述靶蛋白质并且特异性地结合所述生物系统中细胞的M6PR细胞表面受体以促进所述靶蛋白质的细胞摄取和降解。
条款134.根据条款131至133中任一项所述的方法，其中所述生物系统是人类受试者。
条款135.根据条款131至133中任一项所述的方法，其中所述生物系统是体外细胞样本。
条款136.根据条款131至135中任一项所述的方法，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
条款137.根据条款131至135中任一项所述的方法，其中所述靶蛋白质是细胞外蛋白质。
条款138.一种治疗与靶蛋白质相关的疾病或病症的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用有效量的根据条款1至75中任一项的化合物，或根据条款76至126中任一项的缀合物，其中所述化合物或缀合物特异性地结合所述靶蛋白质。
条款139.根据条款138所述的方法，其中所述疾病或病症是炎性疾病。
条款140.根据条款138所述的方法，其中所述疾病或病症是自身免疫性疾病。
条款141.根据条款138所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
条款151.一种下式(I)的化合物：
Xn-L-Y (I)
或其盐、单一立体异构体、立体异构体的混合物或其同位素形式，其中：
X是结合到M6PR细胞表面受体的部分；
L是下式的接头：
-[(L1)a-(L2)b-(L3)c]n-(L4)d-(L5)e-(L6)f-(L7)g-；并且
其中
每个L1独立地是
每个L2独立地是-C1-6-亚烷基-、-NHCO-C1-6-亚烷基-、-CONH-C1-6-亚烷基–、–(OCH2)p–或–(OCH2CH2)p–；
每个L3独立地是 或–(OCH2CH2)q–；
每个L4独立地是–OCH2CH2–、
每个L5独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、
-C1-6-亚烷基–、或–(OCH2CH2)r–；
每个L6独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、
-C1-6-亚烷基–或–(OCH2CH2)s–；
每个L7独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、
-C1-6-亚烷基–、–(OCH2CH2)t–或–OCH2–；
p、q、r、s和t各自独立地是1至20的整数；a为1或2；b、c、d、e、f和g各自独立地是0、1或2；u、v、w、x、y和z各自独立地是1至10的整数；
n是1至5的整数；其中当d为0时，n是1，当d是1时，n是1-3的整数，当d为2时，n是1-5的整数；
Y是选自由以下组成的组的部分
其中表示与L的附接点；
R是氢或氟；
每个R’独立地是氢或卤基；
G选自-F、-Cl、-Br、-I、-O-甲磺酰基和-O-甲苯磺酰基；
J选自-Cl、-Br、-I、-F、-OH、-O-N-琥珀酰亚胺、-O-(4-硝基苯基)、-O-五氟苯基、-O-四氟苯基和–O-C(O)-ORJ’，并且RJ’是-C1-C8烷基或-芳基。
条款154.根据条款151所述的化合物，其中a是1。
条款155.根据条款151所述的化合物，其中b、c、e、f和g中的至少一者不为0。
条款156.根据条款151所述的化合物，其中b或c中的至少一者不为0，并且e、f和g中的至少一者不为0。
条款157.根据条款151所述的化合物，其中a、b和c各自独立地是1或2。
条款158.根据条款151所述的化合物，其中每个X独立地选自下式之一：
其中，
R”选自由以下组成的组：–OH、–CR1R2OH、–P＝O(OH)2、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–(CR1R2)-P＝O(OH)2、–SO2OH、–S(O)OH、–OSO2OH、–COOH、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)–CONHSO2R3、–CONHSO2NR3R4、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、-NHC(O)NHS(O)2R3、–NHSO2R3、
j是1至3的整数；
R1和R2各自独立地是氢、卤基或CN；
R3和R4各自独立地是C1-6烷基；
A、B和C各自独立地是CH或N；并且
D各自独立地是O或S。
条款159.根据条款151所述的化合物，其中每个X独立地选自下式之一：
其中
R”选自由以下组成的组：–OH、–CR1R2OH、–P＝O(OH)2、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–(CR1R2)-P＝O(OH)2、–SO2OH、–S(O)OH、–OSO2OH、–COOH、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)–CONHSO2R3、–CONHSO2NR3R4、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、-NHC(O)NHS(O)2R3、–NHSO2R3、
j是1至3的整数；
R1和R2各自独立地是氢、卤基或CN；
R3和R4各自独立地是C1-6烷基；
A、B和C各自独立地是CH或N；
D各自独立地是O或S。
条款161.一种下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐，
其中：
X是结合到M6PR细胞表面受体的部分；
L是下式的接头：
-[(L1)a-(L2)b-(L3)c]n-(L4)d-(L5)e-(L6)f-(L7)g-；
并且
其中
每个L1独立地是
每个L2独立地是-C1-6-亚烷基-、-NHCO-C1-6-亚烷基-、-CONH-C1-6-亚烷基-、-(OCH2)p-或-(OCH2CH2)p-；
每个L3独立地是 或-(OCH2CH2)q-；
每个L4独立地是–OCH2CH2–、/>
每个L5独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、
-C1-6-亚烷基–、或–(OCH2CH2)r–；
每个L6独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、
-C1-6-亚烷基–或–(OCH2CH2)s–；
每个L7独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、C1-6-亚烷基–、–(OCH2CH2)t–或–OCH2–；
p、q、r、s和t各自独立地是1至20的整数；a为1或2；b、c、d、e、f和g各自独立地是0、1或2；u、v、w、x、y和z各自独立地是1至10的整数；
n是1至5的整数；其中当d为0时，n是1，当d是1时，n是1-3的整数，当d为2时，n是1-5的整数；
Z选自由以下组成的组
其中表示与L的附接点，
其中表示与P的附接点，/>
X是CH2、NH、O或S；并且
P是多肽。
条款162.根据条款161所述的缀合物，其中P包含抗体或抗体的抗原结合片段。
条款163.一种下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐，
其中：
X是结合到M6PR细胞表面受体的部分；
L是下式的接头：
-[(L1)a-(L2)b-(L3)c]n-(L4)d-(L5)e-(L6)f-(L7)g-
并且
其中
每个L1独立地是
每个L2独立地是-C1-6-亚烷基-、-NHCO-C1-6-亚烷基-、-CONH-C1-6-亚烷基-、-(OCH2)p-或-(OCH2CH2)p-；
每个L3独立地是 或-(OCH2CH2)q-；
每个L4独立地是-OCH2CH2-、/>
每个L5是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、或–(OCH2CH2)r–；
每个L6是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–或–(OCH2CH2)s–；
每个L7是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、–(OCH2CH2)t–或–OCH2–；
p、q、r、s和t各自独立地是1至20的整数；a为1或2；b、c、d、e、f和g各自独立地是0、1或2；u、v、w、x、y和z各自独立地是1、2、3、4、5或6；
n是1至5的整数；其中当d为0时，n是1，当d是1时，n是1-3的整数，当d为2时，n是1-5的整数；
m是从1至8的整数；
Z选自由以下组成的组：和其中/>表示与L的附接点，其中/>表示与/>的附接点；并且
是抗体。
条款166.根据条款161-165中任一项所述的缀合物，其中每个X独立地选自下式之一：
其中，
R”选自由以下组成的组：–OH、–CR1R2OH、–P＝O(OH)2、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–(CR1R2)-P＝O(OH)2、–SO2OH、–S(O)OH、–OSO2OH、–COOH、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)–CONHSO2R3、–CONHSO2NR3R4、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、-NHC(O)NHS(O)2R3、–NHSO2R3、
j是1至3的整数；
R1和R2各自独立地是氢、卤基或CN；
R3和R4各自独立地是C1-6烷基；
A、B和C各自独立地是CH或N；并且
D各自独立地是O或S。
条款167.根据条款161-165中任一项所述的缀合物，其中每个X独立地选自下式之一：
其中
R”选自由以下组成的组：–OH、–CR1R2OH、–P＝O(OH)2、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–(CR1R2)-P＝O(OH)2、–SO2OH、–S(O)OH、–OSO2OH、–COOH、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)–CONHSO2R3、–CONHSO2NR3R4、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、-NHC(O)NHS(O)2R3、–NHSO2R3、
j是1至3的整数；
R1和R2各自独立地是氢、卤基或CN；
R3和R4各自独立地是C1-6烷基；
A、B和C各自独立地是CH或N；
D各自独立地是O或S。
条款169.一种药物组合物，其包含根据条款161-168中任一项的缀合物或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载剂。
条款170.根据条款169所述的药物组合物，其中m是4至8的整数。
条款171.根据条款170所述的包含所述缀合物或药学上可接受的盐的药物组合物，其中m是4。
条款172.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是IgG抗体。
条款173.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是人源化抗体。
条款174.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到分泌的蛋白质或可溶性蛋白质。
条款175.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到细胞表面受体。
条款176.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白质。
条款177.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质。
条款178.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)蛋白质或成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)蛋白质。
条款179.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是西妥昔单抗。
条款180.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是马妥珠单抗。
条款181.根据条款163-168中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是阿替利珠单抗。
条款182.一种通过向有需要的受试者施用有效量的根据条款163-168中任一项的缀合物或药学上可接受的盐或根据条款169的药物组合物来治疗疾病或病症的方法。
条款183.根据条款182所述的方法，其中所述疾病或病症是炎性疾病。
条款184.根据条款182所述的方法，其中所述疾病或病症是自身免疫性疾病。
条款185.根据条款182所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
6.实施例
本节中的实施例通过说明而非限制的方式提供。
6.1.化合物的制备
以下是如何制备和测试本文所述的化合物的说明性方案和实施例。尽管这些实施例可以仅代表一些实施方案，但应该理解以下实施例是说明性的而不是限制性的。除非另有说明，所有取代基均如前所定义。试剂和起始材料对于本领域普通技术人员来说是容易获得的。可以将描述的每条路线的具体合成步骤以不同方式或与来自不同方案的步骤结合来组合，以制备本文描述的化合物。
用于制备本公开的M6PR结合部分、其前体和其缀合物(其可以适合用于制备化合物)以及其合成子的合成方法描述于国际申请号PCT/US2021/012846(以WO2021/142377公布)和PCT公布WO2020132100，其公开内容通过引用方式以其整体并入本文。
6.1.1.M6PR结合部分合成子的制备
合成子A-10和化合物A.(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(4-异硫氰基(isothiocyanato)苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(化合物A)的合成
(((2R,3S,4S,5R,6R)-2-(4-硝基苯氧基)-6(((三甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基)三(氧基))三(三甲基硅烷)(A-2)
将(2R,3S,4S,5S,6R)-2-(羟甲基)-6-(4-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇(A-1)(1.0eq,26.0g,86.37mmol)在DMF(500mL)中的溶液冷却至0℃。然后在氮气氛下将三乙胺(6.4eq，288mL，552.0mmol)和三甲基甲硅烷基氯化物(24.0eq 70mL，2071.0mmol)添加到上述溶液中。将所得混合物在室温和氮气下搅拌24小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将水层再次用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并通过硅胶色谱法(0至5％在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到中间体A-2，为无色油状物。产率：36.8g(72.3％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.18(dd,J＝12.36,3.16Hz,2H),7.16(dd,J＝12.4,3.12Hz,2H),5.37(d,J＝2.36Hz,1H),3.99-3.87(m,3H),3.72-3.69(m,2H),3.50-3.48(m,1H),0.2-0.07(m,36H)。
((2R,3R,4S,5S,6R)-6-(4-硝基苯氧基)-3,4,5-三((三甲基甲硅烷基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇(A-3)
在室温在氮气下向搅拌的中间体A-2(1.0eq,10.0g,16.97mmol)在DCM:甲醇(8:2比例,100mL)的混合物中的溶液中加入乙酸铵(1.5eq,1.96g,25.46mmol)。将所得混合物在室温和氮气下搅拌16小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将水层再次用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩并通过硅胶色谱法(20-30％在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到中间体A-3，为白色固体。产率：7.0g(80％)；LC-MS m/z 516.13[M-1]-。
(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(4-硝基苯氧基)-3,4,5-三((三甲基甲硅烷基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲醛(A-4)
在经5分钟向–78℃下的搅拌的草酰氯(1.1eq,0.5mL,5.31mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入DMSO(2.2eq,0.76mL,10.62mmol)在DCM(5mL)中的溶液。在–78℃搅拌20分钟后，将中间体A-3(1.0eq,2.5g,4.83mmol)在DCM(10mL)中的溶液添加到混合物中。将反应混合物在–78℃下进一步搅拌60分钟，然后加入三乙胺(5.0eq,3.4mL,24.15mmol)。使所得混合物在1小时内达到室温。用DCM稀释混浊混合物并用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在高真空下浓缩，得到中间体A-4，为浅棕色凝胶(2.2g，粗品)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
((E)-2-((2R,3R,4S,5S,6R)-6-(4-硝基苯氧基)-3,4,5-三((三甲基甲硅烷基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙烯基)膦酸二乙酯(A-5)
将搅拌的亚甲基双(膦酸)四乙酯(1.5eq,1.85g,6.40mmol)在无水THF(20mL)中的悬浮液冷却至–78℃并加入2.0M在己烷中的n-BuLi(1.25eq,2.6ml,5.33mmol)。将所得混合物在–78℃下搅拌1小时，然后在–78℃下添加在无水THF(10mL)中的中间体A-4(1.0eq,2.2g,4.27mmol)。移除浴，使反应混合物达到室温并继续搅拌12小时。加入饱和NH4Cl水溶液，用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层用水洗涤，然后用饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(30-40％在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到中间体A-5，为无色凝胶。产率(1.3g,48％)；LC-MS m/z 650.57[M+1]+。
((E)-2-((2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(4-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙烯基)膦酸二乙酯(A-6)
在室温在氮气氛下向搅拌的中间体A-5(1.0eq,1.3g,1.54mmol)在甲醇(15mL)中的溶液中加入Dowex 50WX8氢型。将所得混合物在室温在氮气下搅拌2小时。将反应混合物过滤并用甲醇洗涤，将滤液真空浓缩，得到((E)-2-((2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(4-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙烯基)膦酸二乙酯(6)，为白色固体。产率：0.78g(90％)；LC-MS m/z 434.17[M+1]+。
(2R,3R,4S,5S,6R)-2-((E)-2-(二乙氧基磷酰基)乙烯基)-6-(4-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(A-7)
在氮气下在0℃下向搅拌的中间体A-6(1.00eq,0.78g,1.80mmol)在吡啶(10mL)中的溶液中滴加乙酸酐(10.0eq,1.8mL,18.0mmol)。移除冷浴并将所得混合物在室温和氮气下搅拌16小时。在高真空下除去吡啶并将残留物在乙酸乙酯和1N HCl水溶液之间分配。将水层再次用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶色谱法(2.5％在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到中间体A-7，为白色固体。产率：1.0g(100％)；LC-MSm/z 560.17[M+1]+。
(2R,3S,4S,5R,6R)-2-(4-氨基苯氧基)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(A-8)
在室温和氮气下向搅拌的中间体A-7(1.0eq,1.0g,1.78mmol)在甲醇(15mL)中的溶液中加入10％钯碳(0.200g)。将所得混合物在室温和氢气压力(100psi)下搅拌16小时。将反应混合物通过硅藻土床过滤并用甲醇洗涤，将滤液真空浓缩，得到中间体A-8，为棕色粘性凝胶。产率：0.700g(73.6％)；LC-MS m/z 532.21[M+1]+。
(2-((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(4-氨基苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(A-9)
在氮气下于0℃向搅拌的中间体A-8(1.00eq,2.0g,5.73mmol)在乙腈(15mL)中的溶液中滴加三甲基溴硅烷(5.0eq,3.8mL,28.65mmol)。移除冷浴并将所得混合物在室温和氮气下搅拌16小时。在旋转蒸发仪上除去挥发物并将残留物在高真空下干燥。将粗残留物用乙醚研磨并在高真空下干燥，得到中间体A-9，为棕色固体。产率：2.2g，粗品。LC-MS m/z476.0[M+1]+。
(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-氨基苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(A-10)
在0℃下在氮气下向搅拌的中间体A-9(1.0eq,2.0g,4.21mmol)在甲醇:水(8:2,15mL)的混合物中的溶液中滴加三乙胺(5.0eq,2.93mL,21.05mmol)。移除冷浴并将所得混合物在室温下搅拌16小时。在旋转蒸发仪上除去甲醇并将残留物在高真空下干燥。将残留物吸收在水中并通过制备型HPLC(2-10％的在含5mM乙酸铵的水中的乙腈)纯化。将含有期望产物的级分合并并冻干，得到中间体A-10，为棕色固体。产率：0.350g(25％)；LC-MS m/z348.0[M-H]-。
(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(4-异硫氰基苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(化合物A)
在0℃在氮气下向搅拌的中间体A-10(1.0eq,1.75g,5.01mmol)在乙醇:水(7:3)(20ml)的混合物中的溶液中滴加硫光气(5.00eq,1.92mL,25.05mmol)。移除冷浴并将所得混合物在室温和氮气下搅拌3小时。在旋转蒸发仪上除去挥发物并将残留物在高真空下干燥。将残留物吸收在水中并通过制备型HPLC(20-40％的在含5.0mmol乙酸铵的水中的乙腈)纯化。将含有期望产物的级分合并并冻干，得到化合物A，为白色固体。产率：0.135g(6.8％)LC-MS m/z 392.08[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.32(d,J＝8.92Hz,2H),7.12(d,J＝8.96Hz,2H),5.57(s,1H),4.13(s,1H),3.96(dd,J＝9.16,3.44Hz,1H),3.59–3.48(m,2H),2.03–1.88(m,1H),1.68–1.54(m,2H),1.27–1.15(m,1H)。
合成子8D的制备
在氮气下在0℃下将DBU(0.05eq,0.025mL,0.168mmol)添加到搅拌的(2R,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)-6-羟基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(8A)(1.00eq,1.48g,3.36mmol)和三氯乙腈(10.0eq,3.4mL,33.6mmol)在DCM(30mL)中的溶液中。将所得混合物在氮气下在0℃搅拌。添加更多的DBU(0.0500eq,0.025mL,0.168mmol)并移除冷浴。将所得混合物在室温搅拌45分钟。在旋转蒸发仪上除去大部分溶剂。将残留物加载到硅胶负载柱上，该柱用含0.1％三乙胺的二氯甲烷预平衡并通过硅胶色谱法纯化(柱子用含0.1％三乙胺的30％乙酸乙酯/己烷预平衡)(30-100％在己烷中的乙酸乙酯)。合并含有期望产物的级分并在旋转蒸发仪上浓缩。将残留物从干燥二氯甲烷中汽提两次，在高真空下干燥30分钟，然后在-80℃下在氮气下储存，得到化合物8B，为无色半固体。产率：1.26g,64％；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.74(s,1H),6.21(s,1H),5.45(s,1H),5.34(t,J＝11.2Hz,1H),5.20(t,J＝10.0Hz,1H),4.16–4.00(m,4H),4.00–3.88(m,1H),2.18(s,3H),2.07(s,3H),2.00(s,3H),1.95–1.64(m,4H),1.31(t,J＝7.3Hz,6H)。
在氮气下在搅拌下将化合物8B(1.00eq,1.25g,2.14mmol)溶解在干燥的DCM(10mL)中。添加丁-3-炔-1-醇(2.00eq,0.32mL,4.28mmol)并将所得混合物在氮气下在搅拌下冷却至-78℃。缓慢加入三氟化硼乙醚合物(0.500eq，0.13mL，1.07mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。移除-78℃冷浴，让反应混合物在氮气下缓慢升温50分钟。将反应混合物用水/冰浴冷却并在氮气下于0℃再搅拌30分钟，然后进行后处理。将反应混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将水层再次用二氯甲烷萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤，并通过硅胶色谱法(20-100％在二氯甲烷中的乙酸乙酯)纯化，得到化合物8C，为无色粘稠油状物。产率：408mg,39％；LC-MS m/z 493.4[M+1]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ5.35–5.19(m,2H),5.09(t,J＝9.9Hz,1H),4.79(s,1H),4.21–3.98(m,4H),3.91–3.68(m,2H),3.64–3.50(m,1H),2.55–2.44(m,2H),2.15(s,3H),2.05(s,3H),1.98(s,3H),2.07–1.62(m,5H),1.32(t,J＝7.2Hz,6H)。
在氮气下于0℃下将三甲基溴硅烷(5.00eq,0.47mL,3.57mmol)缓慢加入到搅拌的化合物8C(1.00eq,352mg,0.715mmol)在MeCN(7mL)中的溶液中。移除冷浴并将所得混合物在室温和氮气下搅拌3.5小时。在旋转蒸发仪上除去挥发物并将残留物在高真空下短暂干燥。在氮气下搅拌下将残留物溶解在甲醇(7mL)中，并加入甲醇钠(在甲醇中25wt％)(2.50eq，0.41mL，1.79mmol)。将所得混合物在室温和氮气下搅拌1小时。加入乙酸(3.00eq，0.12mL，2.14mmol)，然后在旋转蒸发仪上除去挥发物。将残留物吸收在水中并通过制备型HPLC纯化(0-15％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)。在旋转蒸发仪上于30℃除去大部分溶剂，然后将剩余部分冻干至干，得到化合物8D，为白色固体。产率：208mg,94％；LC-MS m/z311.3[M+1]+；1H NMR(300MHz,氧化氘)δ4.88–4.80(m,1H),3.93(s,1H),3.84–3.70(m,2H),3.70–3.56(m,2H),3.48(t,J＝9.7Hz,1H),2.57–2.44(m,2H),2.37(s,1H),2.15–1.61(m,4H)。
化合物B的合成
使用针对化合物8D所描述的程序使用丁-3-炔-1-胺代替丁-3-炔-1-醇来合成化合物B。
可替代地，可以通过将吡啶添加到中间体B-1在过量乙酸酐中的溶液中来制备中间体B-2。将所得混合物在20℃搅拌16小时。将反应溶液真空浓缩，通过与甲苯共沸蒸馏除去残留的吡啶，然后高真空干燥，得到中间体B-2。
通过修改所示方法可以制备其他在吡喃糖环的1-位置处包含氨基连接基团的M6PR结合部分合成子。
合成子38C的合成
向含有中间体A-8(1.00eq,218mg,0.398mmol)的圆底烧瓶中加入N-己-5-炔基氨基甲酸(4-硝基苯基)酯(38A)(1.80eq,188mg,0.717mmol)和干燥DCM(4mL)。向反应溶液中加入三乙胺(2.08eq，0.11mL，0.826mmol)并将溶液在40℃搅拌16小时。然后将反应混合物用二氯甲烷(30mL)稀释并用NaOH水溶液、水和盐水洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱纯化，用甲醇/氯仿洗脱，得到化合物38B。产率：154mg,58％)；LCMS m/z 655.6[M+1]+。
向经氮气吹扫的含有化合物38B(1.00eq,170mg,0.260mmol)的圆底烧瓶中加入乙腈(4mL)。在滴加TMSBr(5.00eq,0.18mL,1.30mmol)之前使溶液在氮气下冷却至0℃。移除冷浴并将所得混合物在室温和氮气下搅拌。2小时的LCMS显示没有SM残留，观察到产物M+H＝599.6。在旋转蒸发仪上除去溶剂并将残留物在高真空下干燥。将得到的中间体2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-(己-5-炔基氨基甲酰氨基)苯氧基]四氢吡喃-2-基]乙基l膦酸(155mg,0.259mmol,99.72％产率)溶解在甲醇(3mL)中。在氮气下向搅拌的溶液中加入25wt％的在MeOH中的NaOMe(2.50eq,0.14mL,0.649mmol)。将所得混合物在室温和氮气下搅拌50分钟。LCMS发现大部分起始材料残留。加入另一份25wt％的在MeOH中的NaOMe(2.50eq，0.14mL，0.649mmol)，并在20℃下搅拌1小时以上。加入乙酸(13.5eq，0.20mL，3.50mmol)，并在旋转蒸发仪上除去溶剂。将残留物吸收在水中并通过制备型HPLC(0-35％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并纯化的产物级分并将其冻干至干，得到化合物38C，为白色固体。产率：45mg,37％；LCMS m/z 473.6[M+1]+。
合成子39B/53A的合成
向经氮气吹扫的圆底烧瓶中加入辛-7-炔酸(1.66eq，82.6mg，0.589mmol)、DMF(3mL)和HATU(1.50eq，203mg，0.534mmol)。在添加在1mL DMF中的中间体A-8(1.00eq,195mg,0.356mmol)之前，将反应溶液在20℃搅拌20分钟。在通过LCMS分析之前，将反应溶液在20℃下搅拌24小时。将反应溶液用EtOAc(30mL)稀释并用饱和NH4Cl水溶液(20mL)洗涤，然后用饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤。将分配的EtOAc相用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物，将其通过使用100％Hx至75％EtOAc/Hx(历时15分钟)的流动相的硅胶柱色谱法纯化，得到化合物39A。产率：182mg,76％；LCMS m/z 653.6[M+1]+。
在氮气下向在0℃下的经氮气吹扫的含有化合物39A(1.00eq,182mg,0.278mmol)和无水乙腈(1mL)的圆底烧瓶中加入TMSBr(5.00eq,0.18mL,1.39mmol)。移除冷浴并将所得混合物在室温和氮气下搅拌3.5小时。LCMS分析显示没有剩余起始试剂。在旋转蒸发仪上除去挥发物并将残留物在高真空下短暂干燥。在氮气下在搅拌下将残留物溶解在甲醇(1mL)中，加入25重量％的在MeOH中的甲醇钠(2.50eq,0.15mL,0.696mmol)。将所得混合物在室温下在氮气下搅拌30分钟。向反应混合物中加入乙酸(5.00eq，0.080mL，1.39mmol)，真空除去挥发物。将残留物吸收在DMSO中并通过反相制备型HPLC(0-35％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化，得到纯化的级分。将合并的级分冻干至干，得到化合物39B，为白色固体。产率：65mg,50％；LCMS m/z 472.3[M+1]+。
合成子49B的合成
将2-(2-(2-(丙-2-炔-1-氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(49A)(1.40eq,30.7mg,0.164mmol)在NMP(0.6mL)中的溶液加入在带有搅拌棒的1打兰小瓶中的中间体A(1.00eq,45.8mg,0.117mmol)中。将所得混合物加盖并在室温下搅拌18小时。固体缓慢溶解，得到澄清的黄色溶液。将反应混合物用乙醇和乙酸的混合物稀释，过滤，并通过制备型HPLC(10-30％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有期望产物的级分。在旋转蒸发仪上于29℃除去大部分溶剂，然后将剩余部分冻干至干，得到化合物49B，为白色固体。产率：47.7mg,70％；LCMS m/z579.4[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.28(d,J＝8.6Hz,2H),6.99(d,J＝8.5Hz,2H),5.32(s,1H),4.16–4.05(m,2H),3.85–3.76(m,1H),3.74–3.41(m,13H),3.40–3.24(m,3H),2.02–1.82(m,1H),1.72–1.40(m,2H),1.34–1.07(m,1H)。
合成子40A的合成
40A是使用与合成子49B相似的方法由中间体A制备的。
合成子59A的合成
59A是使用与合成子49B相似的方法制备的。
合成子60B的合成
向圆底烧瓶中加入(2R,3R,4S,5S,6R)-2-(3-乙氧基-3-氧丙基)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)硫脲基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(60A)(1.00eq,244mg,0.491mmol)和THF(4mL)。向搅拌的溶液中加入3M LiOH水溶液(10.4eq,1.7mL,5.10mmol)。将反应溶液在室温搅拌2小时。将反应溶液用EtOAc(30mL)和NH4Cl水溶液稀释。将有机相分配，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。产物化合物60B(210mg，91％产率)在不进行额外纯化的情况下使用。LC-MS m/z453.6[M+1]+。
合成子46C的合成
将(2R,3S,4S,5R,6R)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四基四乙酸酯(46A)(1.0eq,5.00g,10.4mmol)和(3-(5-羟基戊酰胺基)丙基)氨基甲酸苄酯(2.0eq,6.39g,20.7mmol)在DCM(100mL)中的溶液在0℃下冷却，滴加BF3·Et2O(12.0eq,15.4mL,124.0mmol)并将反应混合物在50℃加热16小时。通过LCMS监测反应。完成后，将反应混合物冷却至0℃并用三乙胺中和。然后，将反应混合物用DCM稀释并用水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其使用C-18柱和20-50％的在水中的乙腈通过反向柱色谱法纯化，得到化合物46B，为无色粘稠液体。产率：3.10g,35.83％；LCMS m/z731.29[M+1]+。
向化合物46B(1.0eq,2.6g,3.56mmol)在甲醇(26mL)中的溶液中加入乙酸(2.6mL)和钯碳(10％)(1.3g)，并在氢气气氛下于室温搅拌反应混合物3小时。完成后，过滤反应混合物，浓缩滤液并干燥，得到化合物46C，为无色粘稠液体。产率：3.1g(粗品)；LCMS m/z597.27[M+1]+。
合成子61A的合成
合成子62A的合成
合成子63A的合成
5-(3-溴苯基)戊-4-炔-1-醇(2)的合成。向1-溴-3-碘苯(1,16.8g,1.0eq,59.4mmol)在四氢呋喃(90mL)中的溶液加入戊-4-炔-1-醇(1a,5g,1.0eq,59.4mmol)、三乙胺(25.1mL，3.0eq，178mmol)和碘化亚铜(I)(1.13g，0.1eq，5.94mmol)，并将反应混合物用氩气流吹扫15分钟。然后将四(三苯基磷烷)钯(3.43g,0.05eq,2.97mmol)加入到反应混合物中，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离乙酸乙酯层，将其用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用硅胶柱并在作为洗脱剂的10-30％在己烷中的乙酸乙酯中洗脱产物的快速柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到5-(3-溴苯基)戊-4-炔-1-醇(2)，为棕色粘性胶状物。产率：14.0g,98.5％；LC-MS m/z 239.26[M+1]+
5-(4’-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-[1,1’-联苯基]-3-基)戊-4-炔-1-醇(3)的合成。向5-(3-溴苯基)戊-4-炔-1-醇(2,6.95g,1.3eq,29.1mmol)在1,4-二噁烷(120mL)中的溶液中加入4,4,5,5-四甲基-2-[4-(噁烷-2-氧基)苯基l]-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(2a,6.80g,1.0eq,22.4mmol)和碳酸钾溶液(9.27g,3eq,67.2mmol)在水(30.0ml)中的溶液，将反应混合物用氩气吹扫15分钟。然后加入[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II):DCM(0.912g,0.05eq.,1.12mmol)并将反应混合物在95℃搅拌4小时。通过加入水淬灭反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用硅胶柱并在作为洗脱剂的10-30％的在己烷中的乙酸乙酯中洗脱产物的快速色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(3)，为无色粘性胶状物。产率：4.90g,65.15％；LC-MS m/z 337.21[M+1]+
5-(4’-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-[1,1’-联苯基]-3-基)戊-1-醇(4)的合成。向(3)(0.25g,0.74mmol)在甲醇(10mL)中的溶液加入10％钯碳(0.080g)，然后将反应混合物在室温和氢气气氛下搅拌16小时。将反应混合物经硅藻土垫过滤，将所得的滤液减压浓缩，得到(4)，为无色粘性胶状物。产率：0.24g,94.86％；LC-MS m/z339.17[M-1]-。
5-(4’-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-[1,1’-联苯基]-3-基)戊醛(5)的合成。向在0℃下的(4)(0.470g,1.0eq,1.38mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入氯铬酸吡啶鎓(0.446g，1.5eq，2.07mmol)并将反应混合物在室温下搅拌4小时。完成后，将反应混合物经硅藻土垫过滤并用乙醚洗涤。在减压下浓缩获得的滤液并将获得的粗品通过使用硅胶柱并使用10％至20％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的combiflash色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(5)，为无色粘性胶状物。产率：0.290g,62.07％；LC-MS m/z 339.22[M-1]-
2-((3’-(己-5-炔-1-基)-[1,1’-联苯基]-4-基)氧基)四氢-2H-吡喃(6)的合成。在0℃下向(5)(0.29g,1.0eq,0.857mmol)在甲醇(15.0mL)中的溶液中加入碳酸钾(0.296g,2.5eq,2.14mmol)和10％的在乙腈中的(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(5a,3.29mL,2.0eq,1.71mmol)，并将反应混合物在室温搅拌3小时。通过加入冷水淬灭反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗化合物。将获得的粗化合物通过使用硅胶柱并利用0-20％在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的快速柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(6)，为无色粘性胶状物。产率：0.25g,87％；LC-MS m/z353.25[M+18]+
3’-(己-5-炔-1-基)-[1,1’-联苯基]-4-醇(7)的合成。向在0℃下的(6)(0.25g,0.747mmol)在甲醇(3.00mL)中的溶液中加入对甲苯磺酸(0.014g，0.1eq，0.074mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。减压浓缩反应混合物并将其在二氯甲烷和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离二氯甲烷层，将其用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用硅胶柱并使用5-15％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的combiflash柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(7)，为无色粘性胶状物。产率：0.16g,85％；LC-MS m/z 249.12[M-1]-
(2R,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)-6-((3’-(己-5-炔-1-基)-[1,1’-联苯基]-4-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(8)的合成。向搅拌的(7a)(1.45g,1.5eq.,3.00mmol)和3'-(己-5-炔-1-基)-[1,1'-联苯基]-4-醇(7,0.50g,1.0eq,2.00mmol)在干燥二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入经活化分子筛(100mg)并将反应混合物在室温搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并将三氟化硼乙醚合物(1.48mL，6eq，12.0mmol)缓慢加入反应混合物中，并使反应混合物达到室温并将其在50℃搅拌16小时。将反应混合物在二氯甲烷和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离二氯甲烷层，将其用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用硅胶柱并使用30％至50％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的combiflash柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(8)，为淡黄色粘性胶状物。产率：0.70g,52％；LC-MS m/z 673.39[M+1]+
(2-((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-((3’-(己-5-炔-1-基)-[1,1’-联苯基]-4-基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(9)的合成。向在0℃下的搅拌的(8)(0.720g,1.0eq,1.07mmol)在二氯甲烷(30.00mL)中的溶液中加入吡啶(1.30mL,15eq,16.1mmol)和溴三甲基硅烷(1.39mL,10eq,10.7mmol)并将反应混合物在室温搅拌3小时。完成后，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。将所得二氯甲烷层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到(9)，为淡黄色粘性胶状物。产率：0.60g,90.92％；LC-MS m/z 615.11[M-1]-
(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-((3’-(己-5-炔-1-基)-[1,1’-联苯基]-4-基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(63A)的合成。向在0℃下的(9)(0.630g,1eq,1.02mmol)在甲醇(10.0mL)中的溶液中加入甲醇钠溶液(25％,0.66mL,3eq,3.06mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。LCMS显示形成了所需化合物。将反应混合物冷却并用Dowex 50W X8氢型中和至pH 6并在烧结烧瓶上过滤。减压浓缩所得滤液，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用38-53％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈(0至10分钟)的反相制备型HPLC纯化。合并所需级分并将其冻干，得到(63A)，为灰白色固体。产率：0.246g,49.09％；LC-MS m/z 491.13[M+1]+1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.44-7.41(m,2H),7.33(t,J＝7.60Hz,1H),7.15-7.10(m,3H),5.43(s,1H),5.07-4.78(bm,3H),3.84(s,1H),3.67-3.65(m,1H),3.38-3.28(m,2H),2.74(bs,1H),2.64(t,J＝7.20Hz,2H),2.21-2.17(m,2H),1.97-1.94(m,1H),1.71-1.65(m,2H),1.58-1.45(m,4H),1.22-1.12(m,1H)。
合成子8和64A的合成
在-40℃下向搅拌的((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇(1,1.0eq,5.0g,10.8mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(1.8eq,3.32g,16.1mmol)和三氟甲磺酸酐(1.5eq,2.35mL,14.0mmol)并将反应混合物在相同温度下搅拌1小时。通过TLC监测反应的进展。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到粗产物。将粗产物立即通过使用15-50％在己烷中的乙酸乙酯的快速柱色谱法纯化，得到(2)，为淡黄色凝胶，其立即用于下一反应。
在-78℃下向搅拌的(二氟甲基)膦酸二乙酯(2a,4.0eq,5.30g,28.2mmol)和[双(二甲基氨基)磷酰基]二甲胺(4.0eq,5.05g,28.2mmol)在四氢呋喃(25mL)中的溶液中滴加2M的在四氢呋喃(4.0eq,14.1mL,28.2mmol)中的二异丙酰胺锂(LDA)，并在相同温度下搅拌30分钟，然后滴加(2,1.0eq,4.20g,7.04mmol)在四氢呋喃(25mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时。通过TLC监测反应的进展。完成后，将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过使用15-50％的在己烷中的乙酸乙酯从硅胶洗脱的快速柱色谱法纯化，得到(1,1-二氟-2-((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸二乙酯(3)，为棕色油状物。产率：2.40g,(49％)LCMS m/z 655.3[M+18]+。
向搅拌的(3)(1.0eq,7.0g,11.0mmol)在乙酸酐(80.0eq,83.4mL,882mmol)和乙酸(132.0eq,83.3mL,1.46mol)中的溶液中。在0℃加入硫酸(6.5eq,3.82mL,71.7mmol)并将反应混合物在室温搅拌16小时。通过TLC监测反应的进展。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到残留物。将残留物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。将该粗品通过使用30-50％的在己烷中的乙酸乙酯的快速柱色谱法纯化，得到(4)，为无色浆状物。产率：3.20g,(51％)；LCMS m/z 566.3[M+1]+。
向搅拌的(4,1.0eq,3.20g,5.65mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中加入4-硝基苯酚(4a,3.0eq,2.36g,16.9mmol)，然后加入三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(1.0eq,1.03mL,5.65mmol)并将反应混合物在0℃搅拌4小时。通过TLC监测反应的进展。反应完成后，混合物用冰水淬灭并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗品。将粗品通过使用30-80％的在己烷中的乙酸乙酯的快速柱色谱法纯化，得到(5)，为棕色浆状物。产率：2.45g,(67.1％)；LCMS m/z 663.20[M+18]+。
在0℃下向搅拌的(5,1.0eq,1.00g,1.55mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中加入吡啶(10.0eq,1.25mL 15.5mmol)，然后加入三甲基溴硅烷(10.0eq,2.0mL,15.5mmol)并将反应混合物搅拌16小时。通过LC-MS监测反应混合物。反应完成后，将反应混合物用冰水淬灭并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗品。将粗品与乙醚一起研磨并干燥，得到(6)，为灰白色固体。产率：0.83g(90％)；LCMS-MS m/z 588.2[M-1]-。
向在0℃下的搅拌的(6.1.0eq,1.10g,1.87mmol)溶解在甲醇(30mL)和二氯甲烷(10mL)中的溶液中滴加25％w/v的在甲醇中的甲醇钠(10.0eq,1.07mL,18.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌。3小时后，将反应混合物用Dowex-50氢型中和(至pH 7)，过滤并减压浓缩滤液，得到(7)的粗品，为灰白色固体。产率：0.618g,(66％)；LCMS m/z 504.13[M-1]-。
向搅拌的(7,1.0eq,0.55g,1.10mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入10％钯碳(0.27g)和20％Pd(OH)2(0.27g)并将其用氢气气体吹扫并在氢气气氛下在室温下搅拌5小时。然后通过注射器过滤器(NY 0.45μm)过滤反应混合物。将滤液减压蒸发，得到{2-[(2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-氨基苯氧基)-3,4,5-三羟基噁烷-2-基]-1,1-二氟乙基}膦酸(8)的粗品。该粗品不经进一步纯化直接用于下一反应。产率：0.31g,(40.8％)；LCMS m/z 386.1[M+1]+
(1,1-二氟-2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)硫脲基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(化合物编号64A)的合成
向在0℃下的搅拌的{2-[(2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-氨基苯氧基)-3,4,5-三羟基噁烷-2-基]-1,1-二氟乙基}膦酸(8,1.0eq,0.31g,0.815mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(4.0eq,0.39g,3.26mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL中)的溶液中加入6-异硫氰基己-1-炔(8a,3.0eq,0.34g,2.45mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液。然后将反应混合物在室温搅拌12小时。减压浓缩反应混合物，得到粗品。将粗品通过制备型HPLC(10-30％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。将含有所需产物的级分合并并冻干至干燥，得到(64A)，为白色固体。产率：0.059g,13.8％；LCMS m/z 523.1[M-1]-。
合成子7和65A的合成
在-40℃下在氮气氛下向搅拌的[(2R,3R,4S,5S,6R)-6-(4-硝基苯氧基)-3,4,5-三[(三甲基甲硅烷基)氧基]噁烷-2-基]甲醇(1,4.0g,7.73mmol)和2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(3.17g,15.45mmol)在二氯甲烷(40.0mL)中的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(1.69mL,10.04mmol)。在-40℃搅拌1小时后，TLC显示完全转化。然后蒸发挥发物，并且将粗品(2)直接用于下一反应。
在氮气气氛下在-78℃将n-BuLi(12.3mL，30.8mmol，2.5M己烷溶液)滴加到搅拌的甲基磺酸异丙酯(3,3.75mL,30.8mmol)和[双(二甲氨基)磷酰基]二甲胺(6.69mL，38.5mmol)在干燥四氢呋喃(60.0mL)中的溶液中。在30分钟后，将预冷却的(2,5.0g,7.69mmol)在干燥四氢呋喃(40.0mL)中的溶液添加到反应混合物中。10分钟后，将反应混合物用氯化铵水溶液淬灭。将反应混合物用乙酸乙酯(50.0mL)萃取两次并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。收集有机级分，然后将其经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在真空下蒸发。将粗物料通过硅胶柱色谱法(使用15％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(4)，为淡黄色固体。产率：2.4g,49％；LCMS m/z 655.3[M+18]+。
向搅拌的(4,1.7g,2.66mmol)在甲醇(80mL)中的溶液中加入DOWEX-50H(10g)。在室温下搅拌1小时后，滤出树脂，将其用甲醇洗涤，并将收集的甲醇部分在真空下蒸发。然后将粗反应物料通过硅胶柱色谱法(使用10％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到(5)，为白色泡沫。产率：0.845g,75％；LCMS m/z 420.1[M-1]-
向搅拌的(5,1.15g,2.73mmol)在甲醇(60ml)中的溶液中加入Amberlist-15H(20g)并在55℃加热16小时。然后滤出树脂，将其用甲醇洗涤，并将收集的甲醇部分在真空下蒸发。将粗产物通过反相柱色谱法(用1-2％的在水中的乙腈从C18柱洗脱)纯化。收集含有所需产物的级分并将其冻干，得到(6)，为白色固体。产率：0.776g,75％；LCMS m/z 378.0[M-1]-
向搅拌的(6,0.103g,0.272mmol)在甲醇-水(10ml,9:1,v/v)中的溶液中加入10％Pd/C(200.0mg)，然后用氢气气体吹扫并在室温下在氢气气氛下保持90分钟。然后将反应混合物通过NY 0.45μm过滤器过滤。然后减压蒸发挥发物，得到2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-氨基苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙烷-1-磺酸(7)，为白色泡沫。产率：0.092g,96％；LCMS m/z 350.0[M+1]+
向在0℃下的搅拌的(7,0.179g,0.512.0mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.188g,1.54mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入6-异硫氰基己-1-炔(8,0.214mg,1.54mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液。然后将反应混合物在室温搅拌12小时。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(15-47％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。将含有所需产物的级分合并并冻干至干燥，得到65A，为白色固体。产率：0.080g,32％；LCMS m/z 489.2[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)7.26-7.23(m,2H),7.20-7.17(m,2H),5.63(s,1H),4.18(s,1H),4.01(d,,J＝9.6Hz,1H),3.68.(t,,J＝9.6Hz,1H),3.62-3.55(m,3H),2.95-2.88(m,1H),2.66-2.59(m,1H),2.39-2.25(m,4H),1.89-1.80(m,1H),1.68(brs,2H),1.53(brs,2H)。
丙二酸酯合成子66A的合成
将((2R,3R,4S,5S,6R)-6-(4-硝基苯氧基)-3,4,5-三((三甲基甲硅烷基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇(1,1.00g,1.0eq,1.93mmol)、1H-咪唑(0.394g,3eq,5.79mmol)、三苯膦(0.503g,1.0eq,1.93mmol)和碘(0.61g,2.5eq.,4.83mmol)在甲苯(15mL)中的溶液加热至70℃并在此温度下再搅拌12小时。将反应混合物冷却，用乙酸乙酯稀释并通过加入水淬灭。分离乙酸乙酯层并用乙酸乙酯再萃取水层。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并减压蒸发，得到粗残留物，将其通过使用硅胶柱并使用0-3％乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂的快速柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(2)，为灰白色固体。产率：590mg,49％；LC-MS m/z 628.0[M+1]+。
向丙二酸二乙酯(1.99g,3eq.,12.4mmol)在干燥四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入氢化钠(0.497g,3eq.,12.4mmol)并搅拌10分钟。将(2,2.60g,1.0eq,4.14mmol)在干燥四氢呋喃(10mL)中的溶液缓慢加入到反应混合物中，并将反应混合物在70℃搅拌24小时。TLC和LCMS显示存在起始材料并形成所需产物。通过加入冷水淬灭反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用硅胶柱(40g)并使用梯度为3-10％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的combiflash纯化，以回收起始材料(2,1.20g)，并得到所需化合物(3)，为淡黄色粘性胶状物。产率：1.40g,51.2％；LC-MS m/z 658.2[M-1]-。
向(3,1.90g,1.0eq,2.88mmol)在甲醇(20.0mL)中的溶液中加入Dowex 50WX8氢型(0.10g)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物经烧结玻璃漏斗过滤，并将所得滤液减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过使用硅胶柱(12g)并使用4至5％的在二氯甲烷中的甲醇作为洗脱剂的combiflash柱色谱法纯化，得到(4)，为淡黄色固体。产率：0.80g,62.6％；LC-MS 442.2m/z[M-1]-。
向(4,0.80g,1.0eq,1.80mmol)在甲醇(15mL)中的溶液中加入10％Pd/C(0.20g)并将反应混合物在室温和氢气气氛下搅拌3小时。TLC显示起始材料消耗。将反应混合物经硅藻土垫过滤以除去催化剂，并将滤液减压浓缩，得到纯(5)，为淡黄色固体。产率：0.62g,83.1％；LC-MS m/z 414.1[M+1]+。
向在0℃下的(5,0.40g,1.0eq,0.968mmol)在四氢呋喃(10.0mL)中的溶液中加入溶于四氢呋喃(3mL)中的三乙胺(0.337mL,2.5eq,2.42mmol)和6-异硫氰基己-1-炔(5a,0.337g,2.5eq,2.42mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩并且通过使用硅胶柱并且在作为洗脱剂的5％的在二氯甲烷中的甲醇中洗脱产物的combiflash柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(6)，为淡黄色固体。产率：0.283g,50.2％；LC-MS m/z 553.3[M+1]+
向0℃下的(6,0.28g,1.0eq,0.512mmol)在四氢呋喃(10.0mL)和甲醇(1.0mL)中的溶液中加入NaOH(0.041g,2eq,1.02mmol)在水(0.5mL)中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。LCMS显示形成了所需化合物。用2N盐酸中和反应混合物至pH 6，并减压浓缩反应混合物，得到粗产物。将获得的粗产物通过反相制备型HPLC(20-30％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。将含有所需产物的级分合并并冻干至干燥，得到22-(((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)硫脲基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)丙二酸(66A)，为灰白色固体。产率：0.12g,47.9％；LC-MS m/z 497.2[M+1]+
合成子化合物I-67的合成
在0℃下向搅拌的(2R,3S,4S,5R,6R)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四基四乙酸酯(1,1.0eq,6.0g,12.4mmol)和4-硝基苯硫酚(5.0eq，9.65g，62.2mmol)在二氯甲烷(80mL)中的溶液中加入三氟化硼乙醚合物(10.0eq，15.2mL，124mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。之后，将反应混合物用冰水淬灭，用二氯甲烷萃取。将有机层用饱和碳酸氢盐溶液洗涤，然后用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗品。将粗品通过使用50-100％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的快速柱色谱法纯化，得到α:β异构体(7:3)(2)，为无色粘性固体。产率：4.0g,55.7％；LC-MS,m/z.578.14[M+1]+。
向搅拌的(2,1.0eq,1.2g,2.08mmol)在二氯甲烷(15.0mL)中的溶液中加入10％钯碳(0.62g,50％w/w)，并将反应混合物在氢气(气球压力)下于室温搅拌16小时。通过LC-MS和TLC监测反应的进展。反应完成后，将反应混合物通过注射器过滤器过滤。在减压(浴温度<35℃)下浓缩滤液，得到α:β异构体(7:3)(2R,3S,4S,5R,6R)-2-((4-氨基苯基)硫代)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(α异构体)和(2R,3S,4S,5R,6R)-2-((4-氨基苯基)硫代)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基乙酸酯(β异构体)的粗混合物。将粗混合物通过使用(10-35％的在含0.1％TFA的水中的MeCN)的制备型HPLC纯化。将含有所需产物的级分合并并冻干至干燥，得到(2R,3S,4S,5R,6R)-2-((4-氨基苯基)硫代)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(3)，为灰白色固体。产率：0.65g，57％，α异构体；0.2g，18％，β异构体LC-MS，m/z.547.97[M+1]+。
向(3,1.0eq,0.65g,1.19mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.0eq,0.20mL,1.19mmol)和己-5-炔-1-基氨基甲酸4-硝基苯基酯(3a,1.20eq,0.37g,1.42mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌16小时。然后将反应混合物减压浓缩，得到粗品。将粗品通过使用20-50％的在水中的乙腈的反相(Aq C-18柱)柱色谱法纯化。将级分用乙酸乙酯萃取并分离。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，得到(4)，为棕色粘性固体；产率：0.33g,41.4％；LC-MS,m/z.671.2[M+1]+。
在0℃下向搅拌的(4,1.0eq,0.25g,0.373mmol)在二氯甲烷(8.0mL)中的溶液中加入吡啶(10.0eq，0.30mL，3.73mmol)和三甲基溴硅烷(10.0eq,0.49mL,3.73mmol)并将反应混合物在室温搅拌16小时。之后，将反应混合物用冰水淬灭，并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将其进一步用乙醚洗涤并干燥，得到(5)，为灰白色固体。产率：0.16g,69.84％；LC-MS,m/z.614.93[M+1]+。
向搅拌的(5)(1.0eq,0.16g,0.260mmol)在甲醇(5.0mL)中的溶液中滴加25％w/v的在甲醇中的甲醇钠(7.0eq,0.40mL，1.82mmol)并将反应混合物在室温搅拌2小时。之后，将反应混合物用Dowex氢型(200-400目)中和至pH-7。然后将反应混合物过滤，并减压浓缩，得到粗产物。将该粗物质通过使用(用50-80％的在含0.1％TFA的水中的MeCN从C18柱进行的洗脱)的制备型HPLC纯化。将含有所需产物的级分合并并冻干至干燥，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-((4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)苯基)硫代)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-67)，为白色固体。产率：0.058g,45.61％；LC-MS m/z 488.9[M+1]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(s,1H),7.37(d,J＝8.8Hz,2H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),6.18(t,J＝5.6Hz,1H),5.16(s,1H)5.10(brs,1H),4.79(brs,1H),3.86(s,1H),3.70(t,J＝7.2Hz,1H),3.42(dd,J＝9.2,3.2Hz,1H),3.39-3.29(m,2H),3.09-3.06(m,2H),2.76(t,J＝2.8Hz,1H),2.20-2.17(m,2H),2.03-2.01(m,1H),1.63-1.31(m,7H)。
合成子化合物I-68的合成
向搅拌的6-溴萘-2-醇(1,10.0g,1.0eq.,44.8mmol)在二氯甲烷(50.0mL)中的溶液中加入1H-咪唑(6.1g,2.0eq.,89.7mmol)，然后将混合物冷却至0℃。然后缓慢加入叔丁基(氯)二甲基硅烷(6.76g，1.0eq.，44.8mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后用二氯甲烷稀释并用水洗涤。分离有机层，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品，将粗品通过使用硅胶柱的快速柱色谱法(用5％的在己烷中的乙酸乙酯洗脱)纯化，得到(2)，为灰白色固体。产率：12.0g,79.3％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(s,1H),7.79(q,J＝9.6Hz,2H),7.53(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),7.31(d,J＝1.6Hz,1H),7.14(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),0.92(s,9H),0.22(s,6H)。
在室温下向搅拌的(2,4.0g,1.0eq.,11.9mmol)在1,4-二噁烷(40.0mL)中的溶液中加入二苯基甲亚胺(2.15g,1.0eq.,11.9mmol)和碳酸铯(5.41g,1.40eq.,16.6mmol)。将氩气在反应混合物中吹扫10分钟，然后加入xantphos(0.685g,0.1eq.,1.19mmol)和三(1,5-二苯基戊-1,4-二烯-3-酮)二钯(0.543g,0.05eq.,0.593mmol)。然后将反应混合物转移到经预热(在110℃)的加热浴中并将反应物搅拌12小时。加入水并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，将其经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗物质。将该粗产物通过使用硅胶柱的快速柱色谱法(30-40％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(3)，为黄色固体。产率：(0.80g,20.8％)；LCMS,m/z 322.1[M-1]-。
在-78℃下向冷(-78℃)的搅拌的(3a,1.50g,1.0eq,2.57mmol)和(3,0.830g,2.57mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入三氟化硼乙醚合物(0.633mL，2eq.，5.13mmol)，然后将反应混合物在0℃搅拌4小时。之后，将反应混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。分离有机层，将其经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗品，将其通过快速柱色谱法(30-40％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(4)，为黄色固体。产率：0.80g,42.0％；LC-MS m/z 746.3[M+1]+。
在0℃下向(4,0.80g,1.0eq.,1.07mmol)在二氯甲烷(15.0mL)中的溶液中加入三氟乙酸(3.00mL)，并将反应混合物在室温下搅拌6小时。之后，将反应混合物减压浓缩，得到粗化合物。将粗化合物通过与乙醚和戊烷溶剂一起研磨来纯化，得到(5)，为棕色固体。产率：0.75g,60.0％；LC-MS m/z-581.9[M+1]+。
在0℃下向(5,0.80g,1.0eq,1.38mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入三乙胺(0.580mL,3.0eq.,4.13mmol)和己-5-炔酰氯(5a,0.269g,1.50eq.,2.06mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。向反应混合物中加入水并用二氯甲烷萃取。将合并的有机级分经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过使用硅胶柱的快速柱色谱法(使用3-4％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到(6)，为棕色固体。产率：0.70g,45.0％；LC-MS m/z 676.0[M+1]+。
在0℃下向(6,0.70g,1.0eq,1.04mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入吡啶(2.51mL,30eq.,31.1mmol)和三甲基溴硅烷(2.73mL,20eq.,20.7mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。之后，加入水并用二氯甲烷萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(7)，为淡黄色粘性胶状物。产率：0.50g,77.9％；LC-MS,m/z 618.2[M-1]-。
在0℃下向(7,0.50g,0.807mmol)在甲醇(5.0mL)中的溶液中加入25％甲醇钠溶液(0.018mL,0.1eq.,0.081mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。之后，将反应混合物在减压下浓缩以获得粗化合物，将其通过制备型HPLC(用30-40％的在含0.1％TFA的水中的乙腈从C18柱洗脱)纯化。将所需级分冻干，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-((6-(己-5-炔酰胺基)萘-2-基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-68)，为白色固体。产率：0.188g,47.2％；LC-MS m/z494.1[M+1]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.23(s,1H),7.76-7.72(m,2H),7.52(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.42(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(dd,J＝9.2,2.4Hz,1H),5.51(d,J＝1.6Hz,1H),3.88-3.87(m,1H),3.68(dd,J＝8.4,3.2Hz,1H),3.39-3.34(m,4H),2.83(t,J＝2.4Hz,1H),2.46(t,J＝7.2Hz,2H),2.24(td,J＝6.8,2.4Hz,2H),1.96-1.93(m,1H),1.82-1.75(m,2H),1.63-1.48(m,2H),1.17-1.05(m,1H)。
合成子化合物I-70的合成
向0℃下的搅拌的4-碘苯酚(1,10g,1.0eq,45.5mmol)和咪唑(7.74g,2.50eq,114mmol)在二甲基甲酰胺(75.00mL)中的溶液中分批加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(10.3g,1.5eq,68.2mmol)，并将反应混合物在室温搅拌16小时。完成后，将反应物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗残留物，将其通过使用5-10％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶柱快速柱色谱纯化。减压浓缩所需级分，得到(2)，为无色油状物。产率：14.0g,92.14％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49(d,J＝8.40Hz,2H),6.60(d,J＝8.40Hz,2H),0.96(s,9H),0.18(s,6H)。
向(2,7.95g,1.0eq,23.8mmol)在四氢呋喃(120.0mL)中的溶液中加入辛-7-炔-1-醇(2a,3.00g,1.0eq,23.8mmol)、三乙胺(10.0mL,3.0eq,71.3mmol)和碘化亚铜(I)(0.45g,0.1eq,2.38mmol)并将反应混合物用氩气流吹扫15分钟。将四(三苯基磷烷)钯(1.37g,0.05eq,1.19mmol)添加到反应混合物中并且将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离乙酸乙酯层，将其用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过在作为洗脱剂的10-30％的在己烷中的乙酸乙酯中洗脱产物的硅胶柱快速柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(3)，为棕色粘性胶状物。产率：5.20g,65.78％；LCMS m/z 333.30[M+1]+。
向(3,4.00g,1.0eq,12.0mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中加入10％钯碳(0.400g)，然后将反应混合物在氢气气氛下在室温下搅拌16小时。通过LCMS监测反应的完成。将反应混合物经硅藻土垫过滤，将所得滤液减压浓缩，得到(4)，为无色粘性胶状物。产率：3.90g,96％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.00(d,J＝8.00Hz,2H),6.73(d,J＝8.40Hz,2H),3.65-3.58(m,2H),2.51(d,J＝8.00Hz,2H),1.55(bs,2H),1.47(bs,2H),1.31(bs,9H),0.97(s,9H),0.18(s,6H)。
向0℃下的(4,3.90g,1.0eq,11.6mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入氯铬酸吡啶鎓(3.25g,1.3eq,15.1mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。TLC显示产物的形成。将反应混合物经硅藻土垫过滤并用乙醚洗涤。减压浓缩滤液，并将所得粗品通过在作为洗脱剂的己烷至5％的在己烷中的乙酸乙酯中洗脱化合物来用柱纯化。减压浓缩所需级分，得到(5)，为无色油状物。产率：2.60g,57.90％；LCMS m/z 335.35[M+1]+
向在0℃下的(5,0.65g,1.0eq,1.94mmol)在甲醇(20.0mL)中的溶液中加入碳酸钾(0.805g,3eq.,5.83mmol)和10％(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯在乙腈(5a,7.46mL,2eq,3.89mmol)中的溶液，将反应混合物在室温下搅拌4小时。通过加入冷水淬灭反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗化合物。将获得的粗化合物通过使用硅胶柱并在5-20％的在己烷中的乙酸乙酯中洗脱化合物的快速柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到4-(壬-8-炔-1-基)苯酚(6)，为无色粘性胶状物。产率：0.350g,83.28％；LCMS m/z 215.19[M-1]-
向搅拌的4-(壬-8-炔-1-基)苯酚(6,0.30g,1.0eq,1.39mmol)和(3S,4S,5R,6R)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四基四乙酸酯(6a,0.669g,1.0eq,1.39mmol)的二氯甲烷(8.0mL)溶液中加入经活化分子筛(0.100g)，并将反应混合物在室温搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并将三氟化硼乙醚合物(1.03mL,6eq,8.32mmol)加入到反应混合物中并在室温下搅拌16小时。将反应混合物冷却并在二氯甲烷和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离二氯甲烷层，将其用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用硅胶柱并在作为洗脱剂的30-50％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯中洗脱产物的combiflash柱色谱法纯化，得到(7)，为无色粘性胶状物。产率：0.35g,33.87％；LCMS m/z 639.49[M+1]+
向0℃下的搅拌的(7,0.35g,1.0eq,0.546mmol)在二氯甲烷(7.00mL)中的溶液中加入吡啶(0.663mL,15eq.,8.22mmol)和三甲基溴硅烷(0.711mL,10eq,5.48mmol)并将反应混合物在室温搅拌3小时并通过LCMS监测反应。完成后，将反应混合物用水稀释并减压浓缩，得到粗产物。将得到的粗产物用乙醚稀释并过滤。减压浓缩滤液，得到(8)，为淡黄色粘性胶状物。产率：0.25g,78％；LCMS m/z581.35[M-1]-
向0℃下的(8,0.25g,1.0eq,0.429mmol)在甲醇(4.0mL)中的溶液中加入甲醇钠溶液(25％,3eq,0.27mL,1.28mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。LCMS显示形成了所需化合物。将反应混合物冷却并用Dowex 50WX8氢型中和并在烧结烧瓶上过滤。减压浓缩所得滤液，得到粗产物。将获得的粗产物通过制备型HPLC(30-62％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(4-(壬-8-炔-1-基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-70)，为灰白色固体。产率：0.075g,38.29％,LCMS m/z457.31[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.08(d,J＝8.0Hz,2H),6.92(d,J＝8.4Hz,2H),5.00-4.74(m,3H),3.79(s,1H),3.63-3.60(m,1H),3.39-3.28(m,6H),2.72(t,J＝2.4Hz,2H),2.14-2.10(m,2H),1.91(bs,1H),1.62-1.51(m,4H),1.43-1.40(m,2H),1.30-1.17(m,7H)。
合成子化合物I-71的合成
向0℃下的搅拌的乙酸4-羟基苯基酯(1,5.00g,1.0eq,0.032mol)和辛-7-炔-1-醇(1a,4.14g,1.0eq,0.032mol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中加入三苯基膦(9.22g，1.1eq，0.035mol)和偶氮二甲酸二异丙酯(7.11g，1.1eq，0.035mol)，将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗化合物。将粗化合物通过使用硅胶柱并使用5-7％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的combi快速柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到乙酸4-(辛-7-炔-1-基氧基)苯基酯(2)，为无色液体。产率：6.0g,70.13％；LC-MS m/z 259.18[M-1]-。
向0℃下的搅拌的乙酸4-(辛-7-炔-1-基氧基)苯基酯(2,6.0g,1.0eq,0.023mol)在甲醇(36.0mL)中的溶液中加入溶于水(24.0mL)中的氢氧化钠(1.84g,2.0eq,0.046mol)，并将反应混合物在相同温度下搅拌30分钟。完成后，将反应混合物减压浓缩，然后用水稀释，并用乙酸乙酯萃取化合物。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到4-(辛-7-炔-1-基氧基)苯酚(3)，为灰白色固体。产率：5.0g,99.38％；LC-MS m/z 217.14[M-1]-。
向搅拌的4-(辛-7-炔-1-基氧基)苯酚(3,0.905g,3.0eq,4.15mmol)和(2R,3S,4S,5R,6R)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四基四乙酸酯(3a，1.0g，1.0eq，1.39mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入经活化分子筛(0.10g)并将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并将三氟化硼乙醚合物(2.76mL,6eq,12.4mmol)加入到反应混合物中并将反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物冷却并在二氯甲烷和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离二氯甲烷层，将其用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过在作为洗脱剂的50-60％的在己烷中的乙酸乙酯中洗脱产物的combiflash柱色谱法纯化，得到(4)，为灰白色固体。产率：0.60g,45.18％；LC-MS m/z 641.26[M+1]+。
向0℃下的搅拌的(4,0.600g,1.0eq,0.937mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入吡啶(0.741ml,10.0eq,9.37mmol)并搅拌5分钟。将三甲基溴硅烷(1.24ml,10.0eq,9.37mmol)滴加到反应混合物中。将反应物在室温搅拌3小时并通过LCMS监测反应。用水和二氯甲烷稀释反应混合物。分离二氯甲烷层，并将水层用二氯甲烷再萃取。将合并的二氯甲烷经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到(5)，为黄色液体。产率0.500g,84.31％；LC-MS m/z583.44[M-1]-
向在0℃下的(5,0.50g,1.0eq,0.856mmol)在甲醇(6.00mL)中的溶液中滴加甲醇钠溶液(0.94mL,5.0eq,4.280mmol)并在室温下搅拌反应混合物3小时。完成后，用Dowex50WX8氢型淬灭反应物并将其在烧结漏斗上过滤。减压浓缩所得滤液，得到粗化合物。将粗化合物通过反相制备型HPLC(37-57％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(4-(辛-7-炔-1-基氧基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-71)，为灰白色固体。产率：0.202g,51.51％；LCMS m/z 459.27[M+1]+,1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.94(d,J＝9.2Hz,2H),6.88(d,J＝9.2Hz,2H),5.23(d,J＝1.2Hz,1H),4.98(bs,1H),4.72(bs,1H),3.88(t,J＝6.4Hz,2H),3.79(s,1H),3.60(d,J＝4.8Hz,1H),3.34-3.30(m,2H),2.73(t,J＝2.4Hz,1H),2.17-2.13(m,2H),1.96-1.93(m,1H),1.66(t,J＝6.4Hz,2H),1.62-1.40(m,9H),1.23-1.12(m,1H)。
合成子化合物I-73的合成
在0℃在氮气下将1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(0.085mL,0.568mmol)添加到搅拌的[(2R,3R,4S,5S,6S)-4,5-二乙酰氧基-2-(2-二乙氧基磷酰基乙基)-6-羟基-四氢吡喃-3-基]乙酸酯(73A,2.5g,5.68mmol)和三氯乙腈(5.69mL,56.8mmol)在二氯甲烷(30.0mL)中的溶液中。将所得混合物在氮气下在0℃搅拌。第30分钟时的TLC(100％乙酸乙酯)显示转化为极性较小的点。在旋转蒸发仪上除去大部分溶剂。将残留物加载到硅胶负载柱上，该柱用含0.1％三乙胺的二氯甲烷预平衡，并通过硅胶色谱法纯化(柱用含0.1％三乙胺的20％乙酸乙酯/二氯甲烷预平衡)(20-100％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯)，得到(2R,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)-6-(2,2,2-三氯-1-亚胺基乙氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(1)，为无色半固体化合物。产率：2.8g,84.35％。
在氮气下在搅拌下将(1,2.8g,4.79mmol)溶解在干燥二氯甲烷(25mL)中。添加2-甲基-4-硝基苯酚(2,1.83g,12.0mmol)并将所得澄清溶液在氮气下在搅拌下冷却至-78℃。缓慢加入三氟化硼乙醚合物(0.44mL，3.59mmol)。移除-78℃冷浴并用0℃冷浴代替。明亮的黄色很快褪去。反应物是白色混浊混合物。将反应混合物在0℃搅拌2小时。将反应混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将水层再次用二氯甲烷萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，并通过硅胶色谱法(20-100％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(3)，为粘稠液体。产率：1.5g,54.43％；LC-MS m/z 576.5[M+1]+。
向(3,1.50g,2.61mmol)在甲醇(20.0mL)中的溶液中添加10％钯碳(0.6g)。将反应混合物在氢气气氛下于室温搅拌1小时。完成后，将反应混合物通过注射器过滤器过滤，将滤液浓缩并干燥，得到(4)，为淡粉色液体。产率：1.2g,84.4％；LC-MS m/z 546.46[M+1]+。
向(4,1.20g,2.20mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15.0mL)中的溶液中加入N-(己-5-炔-1-基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(4a,0.505g，2.64mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.269g，2.20mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌24小时。完成后，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品通过快速色谱法(硅胶目数：100-200；(洗脱：3-5％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到(5)，为淡黄色粘性液体。产率：1.10g,74.78％；LC-MS m/z669.2[M+1]+。
在0℃下向(5,1.10g,1.65mmol)在乙腈(15.0mL)中的溶液中加入三甲基溴硅烷(1.09mL,8.23mmol)。将反应混合物在室温搅拌5小时。完成(通过LCMS监测)后，将反应混合物减压浓缩以获得粘性物料，将其与乙醚一起研磨以获得(6)，为粗化合物，其不经进一步纯化照原样用于下一步骤。产率：1.0g(粗品)；LCMS m/z 613.3[M+1]+。
在0℃下向(6，1.00g，1.63mmol)在甲醇(10.0mL)中的溶液中加入甲醇钠(0.49mL，8.16mmol)。将反应混合物在0℃至室温搅拌30分钟。完成(通过LCMS监测)后，将反应混合物减压浓缩以获得粗品。将粗品通过使用(20-50％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)的制备型HPLC纯化，得到{2-[(2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-{[(己-5-炔-1-基)氨基甲酰基]氨基}-2-甲基苯氧基)-3,4,5-三羟基噁烷-2-基]乙基}膦酸(I-73)，为灰白色固体。产率：0.47g,59.94％；487.5[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13(s,1H),7.18(d,J＝2.0Hz,1H),7.09(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,1H),6.03(t,J＝5.2Hz,1H),5.24(s,1H),5.00(bs,2H),4.72(bs,1H),3.83(s,1H),3.64(d,J＝6.0Hz,1H),3.35-3.25(m,1H),3.15(s,1H),3.05(t,J＝6.0Hz,2H),2.66(s,1H),2.18(t,J＝4.0Hz,2H),2.11(s,3H),1.95(bs,1H),1.65-1.58(m,1H),1.47(s,6H),1.23-1.13(m,1H)。
合成子化合物I-74的合成
将(2R,3S,4S,5R,6R)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四基四乙酸酯(1.0eq,2.0g,4.15mmol)和3-甲基-4-硝基苯酚(1,2.0eq,1.27g,8.29mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液冷却至0℃，滴加三氟化硼乙醚合物(5.0eq,2.67mL,20.7mmol)并将反应混合物在50℃加热16小时。完成后，将反应混合物冷却至0℃，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过使用硅胶(100-200目)和0-40％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯的柱色谱法纯化，得到(2)，为棕色粘稠液体。产率：1.1g,46.1％；LCMS m/z 576.35[M+1]+。
向(2,1.0eq,1.1g,1.91mmol)在甲醇(11mL)中的溶液中加入钯碳(10％)(0.500g)并将反应混合物在氢气气氛下在室温搅拌2小时。完成后，过滤反应混合物，浓缩滤液并干燥，得到(3)，为棕色粘稠液体。产率：0.900g,86.41％；LCMS m/z 546.29[M+1]+。
向(3,1.0eq,0.600g,1.10mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中加入N-(己-5-炔-1-基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(3a,1.2eq,0.252g,1.32mmol)和4-二甲氨基吡啶(1.0eq，0.134g，1.10mmol)并将反应混合物在80℃加热16小时。完成后，冷却反应混合物，加入水并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗品，将其通过使用硅胶(100-200目)和0-5％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到(4)，为无色粘稠液体。产率：0.380g,49.29％；LCMS m/z 669.47[M+1]+。
将(4,1.0eq,0.600g,0.897mmol)在二氯甲烷(12mL)中的溶液冷却至0℃，加入三甲基溴硅烷(8.0eq,0.94mL,7.18mmol)并将反应混合物在室温搅拌9小时。通过LCMS监测反应。完成后，将反应混合物浓缩并干燥，得到(5)，为棕色粘稠液体。产率：0.590g(粗品)；LCMS m/z 613.27[M+1]+。
将(5,1.0eq,0.590g,0.963mmol)在甲醇(6mL)中的溶液在0℃下冷却，加入甲醇钠(25％的甲醇溶液)(10.0eq,2.36mL,9.63mmol)并在室温下搅拌反应混合物1小时。完成后，浓缩反应混合物以获得粗品，将其用乙腈稀释并通过制备型HPLC(23-41％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。将含有所需产物的级分合并并冻干至干燥，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)-3-甲基苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-74)，为灰白色固体。产率：0.085g,18.11％；LCMS m/z 487.13[M+2]++；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56-7.53(m,1H),7.46(s,1H),6.83(s,1H),6.79-6.76(m,1H),6.35-6.34(m,1H),5.25(s,1H),4.99-4.73(m,2H),3.78(s,1H),3.61-3.59(m,1H),3.35-3.30(m,2H),3.07-3.06(m,2H),2.77-2.75(m,1H),2.18(bs,2H),2.13(s,3H),1.96-1.95(m,1H),1.60-1.57(m,1H),1.48(s,5H),1.23-1.14(m,1H)。
合成子化合物I-75的合成
向6-氨基吡啶-3-醇(1,1.5g,13.6mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15.0mL)中的溶液中加入N-(己-5-炔-1-基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(2,2.6g,13.6mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(1.66g,13.6mmol)。将反应混合物在65℃下加热16小时。完成后，将反应混合物减压浓缩以获得粗品。将粗品通过柱色谱法(硅胶目数：100-200；洗脱：2-5％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到3-(己-5-炔-1-基)-1-(4-羟苯基)脲(3)。
在惰性气氛中，将(4,1.0g,1.71mmol)溶解在干燥二氯甲烷(10.0mL)中并在室温下搅拌。将3-(己-5-炔-1-基)-1-(4-羟苯基)脲(3,0.4g,1.71mmol)添加到前一溶液中，并在氮气下在搅拌下将所得澄清溶液冷却至-78℃。将三氟化硼乙醚合物(0.21mL,1.71mmol)滴加到反应容器中并将-78℃冷浴替换为0℃冷浴。将反应混合物在0℃搅拌4小时并用TLC和LC-MS监测反应的进展。完成后，将反应混合物在0℃用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭并在二氯甲烷和水层之间分配。将水层再次用二氯甲烷(2×10mL)萃取。合并分离的有机层，将其经无水硫酸钠干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，并通过硅胶柱色谱法(10％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到(5)。
在0℃下向(5,1.0eq)在乙腈(10vol.)中的溶液中加入三甲基溴硅烷(5.0eq)。将反应混合物在室温搅拌5小时并通过TLC和LC-MS监测进展。完成后，将反应混合物减压浓缩以获得粗物料。将该粗品用乙醚洗涤并倾析，得到(6)。
在0℃下向(6,1.0eq)在甲醇(10vol.)中的溶液中加入甲醇钠(10.0eq)。将反应混合物在室温搅拌30分钟并通过TLC监测进展。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到粗品。将粗品通过制备型HPLC纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-((6-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)吡啶-3-基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸二苄基酯(I-75)。
合成子化合物I-76的合成
向化合物(4-羟基苯基)硼酸(1,3.00g,1eq,21.8mmol)和叠氮化钠(2.12g,1.5eq,32.6mmol)在乙腈(18.0mL)和水(18.0mL)的混合物中的溶液中加入乙酸铜(II)(0.39g,0.1eq,32.6mmol)并将反应混合物在室温下在空气中搅拌16小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离乙酸乙酯层并用乙酸乙酯再萃取水层。将合并的乙酸乙酯层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过在作为洗脱剂的20-30％的在己烷中的乙酸乙酯中洗脱产物的硅胶柱快速柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到4-叠氮基苯酚(2)，为棕色粘性胶状物。产率：1.80g,61％；LCMS m/z194.23[M+60]-。
向-78℃下的4-叠氮基苯酚(2,0.324g,2.0eq,2.39mmol)和[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-二乙酰氧基-2-(2-二乙氧基磷酰基乙基)-6-(2,2,2-三氯乙亚胺酰基)氧基-四氢吡喃-3-基]乙酸酯(2a，0.700g，1.0eq，1.20mmol)在干燥二氯甲烷(10mL)中的溶液中缓慢加入三氟化硼乙醚合物(0.111mL，0.75eq，0.898mmol)，使反应混合物达到室温并搅拌16小时。将反应混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将水层再次用二氯甲烷再萃取。将合并的有机物经无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发，得到粗残留物。将获得的粗产物通过在作为洗脱剂的40-50％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯中洗脱产物的硅胶柱快速柱色谱法纯化，得到(3)，为棕色粘性胶状物。产率：0.45g,67.43％；LCMS m/z 558.19[M+1]+。
向在0℃下的(3,0.450g,1.0eq,0.807mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入吡啶(0.977mL,15eq,12.1mmol)和三甲基溴硅烷(1.07mL,10eq,8.07mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。LCMS显示起始材料的消耗。将反应混合物冷却至0℃并通过加入冷水淬灭。分离二氯甲烷层，用二氯甲烷再萃取水层，合并二氯甲烷层，将其经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，得到(4)，呈棕色粘性胶状物。产率：0.45g,80％；LCMS m/z 500.23[M-1]-
向0℃下的(4,0.405g,1.0eq,0.807mmol)在甲醇(5.0mL)中的溶液中加入甲醇钠(25％溶液，0.533mL，3eq，2.42mmol)并将反应混合物在室温搅拌1小时。LCMS显示起始材料的消耗。用Dowex 50WX8氢型中和反应混合物并将其通过烧结漏斗过滤。减压浓缩所得滤液，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用13％至35％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈的反相制备型HPLC纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-叠氮苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-76)，为奶油色固体。产率：0.172g,56.78％；LCMS m/z376.15[M+1]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(bs,1H),7.10-7.04(m,5H),5.05-4.77(bm,3H),3.81(s,1H),3.61(d,J＝8.0Hz,1H),3.35-3.22(m,3H),1.95-1.92(bm,1H),1.61-1.45(m,2H),1.17-1.05(m,1H)。
合成子I-77的合成
向4-碘苯酚(1,3.0g,1.0eq,13.6mmol,1eq)在三乙胺(54.0mL)中的溶液中加入碘化亚铜(I)(0.077g,0.409mmol,0.03eq)并将氮气在反应混合物中吹扫10分钟。随后将双(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.287g,0.409mmol,0.03eq)和三甲基甲硅烷基乙炔(3.0mL,20.5mmol,1.5eq)加入反应混合物中，并将反应混合物在80℃加热3小时。将反应混合物冷却并减压浓缩，得到粗残留物。将获得的粗残留物通过使用硅胶柱并使用10％至20％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的快速柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙炔基]苯酚(2)，为棕色粘性胶状物。产率：2.58g(99％)；LCMS-MS m/z189.07[M-1]-。
向(2R,3R,4S,5S,6R)-3,5-双(乙酰氧基)-2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙基]-6-[(2,2,2-三氯乙亚胺酰基)氧基]噁烷-4-基乙酸酯(2a,1.40g,1.0eq,2.39mmol)在干燥二氯甲烷(20.0mL)中的溶液中加入4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙炔基]苯酚(2,0.911g,2.0eq,4.79mmol)并将所得溶液冷却至-78℃。缓慢加入三氟化硼乙醚合物(0.222mL，0.75eq，1.80mmol)，使反应混合物达到室温并搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物冷却并在二氯甲烷和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离二氯甲烷层并用二氯甲烷再萃取水层。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，并通过使用硅胶柱并使用20-30％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的快速柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(3)，为淡黄色粘性胶状物。产率：0.710g,48.4％；LCMS m/z 613.28[M+1]+。
向在0℃下的(3,0.610g,1.0eq,0.996mmol)在二氯甲烷(15.0mL)中的溶液中加入吡啶(1.21mL,15eq,14.9mmol)和三甲基溴硅烷(1.31mL,10eq,9.96mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。LCMS显示起始材料的消耗。将反应混合物冷却至0℃并通过加入冷水淬灭。分离二氯甲烷层，用二氯甲烷再萃取水层，合并二氯甲烷层，将其经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到(4)，为棕色粘性胶状物。产率：0.51g,92.3％；LCMS m/z 555.38[M-1]–
向0℃下的(4,0.510g,1.0eq,0.916mmol)在甲醇(8.00mL)中的溶液中加入甲醇钠(0.605mL,3eq,2.75mmol)并将反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物冷却并通过添加Dowex 50W X8氢型至pH 6淬灭并在烧结漏斗上过滤。减压浓缩所得滤液，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用10-35％的在水和0.1％TFA中的乙腈的反相制备型HPLC纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-乙炔基苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-77)，为奶油色固体。产率：0.213g,64％；LCMS m/z 359.06[M+1]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(bs,1H),7.41(d,J＝8.80Hz,2H),7.03(d,J＝8.80Hz,2H),5.44(s,1H),5.08-4.78(bm,3H),4.05(s,1H),3.81(s,1H),3.62(d,J＝6.40Hz,1H),3.35-3.19(m,3H),1.92(bs,1H),1.60-1.49(m,2H),1.14-1.05(m,1H)。
合成子化合物I-78的合成
向5-氟-2-硝基苯酚(1,5.00g,1.0eq,31.8mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50.0mL)中的溶液中加入碳酸钾(5.28g,1.20eq,38.2mmol)和苄基溴(4.16mL,35.0mmol)并将反应混合物在60℃加热3小时。完成后，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-(苄氧基)-4-氟-1-硝基苯(2)，为黄色固体，其不经进一步纯化照原样用于下一步骤。产率：8.0g,99.64；LC-MS m/z 248.2[M+1]+。
向2-(苄氧基)-4-氟-1-硝基苯(2,7.00g,28.3mmol)在二甲亚砜(35.00mL)中的溶液中加入1M氢氧化钠水溶液(35.0mL)。将反应混合物在80℃下搅拌18小时。完成(通过TLC监测)后，将反应混合物用1M盐酸(10mL)酸化，直到pH 3-4，并将所得溶液用乙酸乙酯萃取。将有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗品。将粗品通过使用15-20％的在己烷中的乙酸乙酯的快速柱色谱法(硅胶目数100-200目)纯化，得到3-(苄氧基)-4-硝基苯酚(3)，为黄色固体。产率：4.10g,59.05％；LC-MS m/z 246.2[M+1]+。
在氮气下在搅拌下将(3a,0.25g，1.0eq 0.428mmol)溶解在干燥二氯甲烷(2.5mL)中。添加3-(苄氧基)-4-硝基苯酚(3,0.105g,1.0eq,0.428mmol)并将所得澄清溶液在氮气下在搅拌下冷却至-78℃。缓慢加入三氟化硼乙醚合物(0.052mL，1.0eq，0.428mmol)。移除-78℃冷浴并用0℃冷浴代替。将反应混合物在0℃搅拌2小时。将反应混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将水层再次用二氯甲烷萃取。将合并的有机物经无水硫酸钠干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，并通过硅胶色谱法(5-10％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到(4)，为粘稠液体。产率：0.12g(LCMS测得纯度为约65％)；LC-MS m/z 668.6[M+1]+。
向(4,1.0eq)在甲醇(10vol.)中的溶液中加入10％钯碳(定量)。将反应混合物在氢气气氛下于室温搅拌3小时。完成后，将反应混合物通过注射器过滤器过滤，将滤液浓缩并干燥以获得(5)。LC-MS m/z 548.15[M+1]+。
向(5,1.0eq)在N,N-二甲基甲酰胺(10vol)中的溶液中加入N-(己-5-炔-1-基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(5a,1.2eq)和4-二甲氨基吡啶(1.0eq)。将反应混合物在60℃下搅拌24小时。完成后，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品通过快速色谱法(硅胶目数：100-200)和作为洗脱剂的5-10％的在二氯甲烷中的甲醇纯化，得到(6)。LC-MS m/z 671.25[M+1]+。
在0℃下向(6,1.0eq)在乙腈(10vol.)中的溶液中加入三甲基溴硅烷(5.0eq)。将反应混合物在室温搅拌5小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到粘性物料，将其与乙醚一起研磨，得到(7)，为粗化合物，其不经进一步纯化照原样用于下一步骤。LC-MS m/z615.15[M+1]+。
在0℃下向(7,1.0eq)在甲醇(10vol.)中的溶液中加入甲醇钠(10.0eq)。将反应混合物在0℃至室温搅拌30分钟。完成后，将反应混合物用Dowex 50WX8氢型中和至pH 6至7并过滤。减压浓缩滤液，得到粗品。将粗品通过反相制备型HPLC纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)-3-羟基苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-78)。LC-MS m/z 489.16[M+1]+。
合成子化合物I-79的合成
将2-氯喹啉-6-醇(1,1.0g,1.0eq,5.57mmol)和(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(1a,1.67mL,2.0eq,11.1mmol)的溶液在150℃加热16小时并通过TLC和LC-MS检查反应的进展。完成后，浓缩反应物，并将观察到的粗残留物通过使用硅胶柱和作为洗脱剂的30-40％的在己烷中的乙酸乙酯的combiflash色谱法纯化，得到2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)喹啉-6-醇(2)。
向0℃下的2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)喹啉-6-醇(2,0.10g,0.32mmol)在二氯甲烷(0.5mL)中的溶液中加入三氟乙酸(0.5mL)并将反应混合物在室温下搅拌6小时。减压浓缩反应混合物，得到2-氨基喹啉-6-醇三氟乙酸盐(3)。
向2-氨基喹啉-6-醇三氟乙酸盐(3,1.0eq.)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液中加入三乙胺(0.12mL,3.0eq,0.87mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.2eq.)。将反应混合物冷却至0℃并将己-5-炔酰氯(3a,0.045g,1.2eq,0.34mmol)添加至反应混合物中并搅拌16小时并通过TLC和LC-MS监测完成。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离乙酸乙酯层并用乙酸乙酯再萃取水层。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗残留物。通过使用硅胶柱并使用20-50％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的快速色谱法纯化获得的粗残留物，得到N-(6-羟基喹啉-2-基)己-5-炔酰胺(4)。
向(2R,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)-6-(2,2,2-三氯-1-亚胺基乙氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(4a,1.0eq.)在干燥二氯甲烷中的溶液中加入N-(6-羟基喹啉-2-基)己-5-炔酰胺(4,2.0eq.)并将所得溶液冷却至-78℃。缓慢加入三氟化硼乙醚合物(0.75eq)，使反应混合物达到室温并搅拌16小时。反应完成后，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应物并将其在二氯甲烷和水相之间分配。将水层用二氯甲烷复萃取，将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，并通过使用硅胶柱的快速柱色谱法纯化，得到(5)。
向0℃下的(5,1.0eq)在二氯甲烷中的溶液中加入吡啶(15eq)和三甲基溴硅烷(10eq)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。LCMS显示起始材料的消耗。将反应混合物冷却至0℃并通过加入冷水淬灭。分离二氯甲烷层并用二氯甲烷再萃取水层。将合并的二氯甲烷层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到(6)。
向0℃下的(6,1.0eq.)在甲醇中的溶液中加入甲醇钠(3.0eq.)并将反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物冷却并通过添加50W X8氢型至中性pH值来淬灭，并通过烧结漏斗过滤。减压浓缩所得滤液，得到粗产物。将所得粗产物通过反相制备型HPLC纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-乙炔基苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-79)。
合成子化合物I-80的合成
向4-硝基苯-1,2-二醇(1,2.0g,12.9mmol)在乙腈(20.0mL)中的溶液中加入樟脑磺酸(0.449g,0.019mmol)和1,1,1-三乙氧基乙烷(23.8mL,129mmol)。将反应混合物在95℃下搅拌18小时。完成(通过TLC监测)后，将反应混合物浓缩，得到粗产物，将粗产物通过使用0-10％的在己烷中的乙酸乙酯的柱色谱法(100-200目二氧化硅)纯化，得到2-甲氧基-2-甲基-5-硝基-2H-1,3-苯并二氧杂环戊烯(2)，为白色固体。产率：1.0g,34.44％。LCMS m/z226.07[M+1]+。
在氮气下向0℃下的2-乙氧基-2-甲基-5-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯(2,1.00g,1.0eq,4.4mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入碘化钠(1.97g,3eq.,13.2mmol)在丙酮(5.0mL)中的无水溶液和三氟化硼乙醚合物(0.72mL,1.33eq.,5.85mmol)。在0℃下5分钟后，加入水(20mL)和二氯甲烷(20mL)。分离各层，并在反萃取水层后，将合并的二氯甲烷层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到乙酸2-羟基-5-硝基苯基酯(3)。LCMS m/z198.09[M+1]+。
在氮气下在搅拌下向[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-二乙酰氧基-2-(2-二乙氧基磷酰基乙基)-6-(2,2,2-三氯乙亚胺酰基)氧基-四氢吡喃-3-基]乙酸酯(3a,1.0g,1.0eq,1.71mmol)在干燥二氯甲烷(10mL)中的溶液中。加入乙酸2-羟基-5-硝基苯基酯(3,0.33g,1.0eq,1.71mmol)并将所得澄清溶液在氮气下在搅拌下冷却至-78℃。缓慢加入三氟化硼乙醚合物(0.24g，1.0eq，1.71mmol)。移除-78℃冷浴并用0℃冷浴代替。将反应混合物在0℃搅拌2小时。将反应混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将水层再次用二氯甲烷萃取。将合并的有机物经无水硫酸钠干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，并通过硅胶色谱法纯化，得到(4)。LCMS m/z620.17[M+1]+。
向(4,0.50g,1.0eq,0.807mmol)在甲醇(5.0mL)中的溶液中添加10％钯碳(0.20g)。将反应混合物在氢气气氛下于室温搅拌3小时。完成后，将反应混合物通过注射器过滤器过滤，将滤液浓缩并干燥，得到(5)。LCMS m/z 590.14[M+1]+。
向(5,0.50g,1.0eq,0.84mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中的溶液中加入N-(己-5-炔-1-基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(5a,0.192g,1.2eq,1.008mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.102g,1.0eq,0.84mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌24小时。完成后，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将该粗品通过快速色谱法(硅胶目数：100-200)纯化，得到(6)。LCMS m/z 713.16[M+1]+。
在0℃下向(6,0.50g,1.0eq,0.702mmol)在乙腈(5.0mL)中的溶液中加入三甲基溴硅烷(0.46mL,5.0eq,3.51mmol)。将反应混合物在室温搅拌5小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到粘性物料，将其与乙醚一起研磨得到(7)，为粗化合物，其不经进一步纯化照原样用于下一步骤。LCMS m/z 657.20[M+1]+。
在0℃下向(7,0.50g,1.0eq,0.76mmol)在甲醇(5.0mL)中的溶液中加入甲醇钠(0.49mL,10.0eq,2.28mmol)。将反应混合物在0℃至室温搅拌3小时。完成后，将反应混合物用Dowex 50WX8氢型中和，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品通过反相制备型HPLC纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)-2-羟基苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-80)。LCMS m/z489.07[M+1]+。
合成子化合物I-101的合成
将锌粉(8.01g,2.0eq,123mmol)在真空下用热风枪加热5分钟并在真空下冷却至室温。在室温下将干燥四氢呋喃(10.0mL)和1,2-二溴乙烷(0.422mL,0.08eq,4.90mmol)加入锌粉中，并在氮气下在搅拌下将所得浆料加热至60℃保持10分钟。将浆料冷却至室温并将三甲基氯硅烷(0.468mL，0.06eq，3.69mmol)添加到先前的浆料中。然后将所得浆料再搅拌10分钟并冷却至0℃。将4-碘苄基溴(18.20g,1.0eq,61.3mmol)在干燥四氢呋喃(40.0mL)中的溶液在1小时内在氩气下在黑暗中在0℃下滴加到搅拌的经活化锌的悬浮液中。添加后，让混合物升温至室温并让其沉降。通过气密注射器将锌酸盐溶液从未反应的锌中转移出来，放入用氩气吹扫的烧瓶中，并在真空中除去溶剂(浴温35℃)。向残留物中加入干燥二氯甲烷(40.0mL)，并在氩气下在黑暗中将溶液冷却至-30℃。将(2R,3S,4R)-2-(乙酰氧基甲基)-3,4-二氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(10.0g,0.6eq,36.8mmol)在干燥二氯甲烷(20.0mL)中的溶液加入到锌酸盐中，然后加入BF3:OEt2(22.6mL,3.0eq,184mmol)。立即让混合物升温至0℃并搅拌15分钟。让反应混合物升温至室温，然后用二氯甲烷(80mL)稀释，并用盐水(20mL)洗涤；将有机层经硫酸钠干燥，过滤；并且真空除去溶剂。将残留物通过快速色谱法(乙酸乙酯-轻质石油，1:3)纯化，得到标题化合物(2)，为无色油状物。产率：7.10g(44.9％)；LCMS,m/z 371.21[M-OAc]+。
将N-甲基吗啉N-氧化物(2.25g,1.2eq,19.2mmol)以及然后将四氧化锇(4.0重量％在水中,10.2mL,0.1eq,1.60mmol)在室温下加入到搅拌的[(2R,3S,6R)-3-(乙酰氧基)-6-[(4-碘苯基)甲基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲基乙酸酯(2,6.90g,1.0eq,16.0mmol)在丙酮-水(5:1,80.0mL)中的溶液中。24小时后，TLC(乙酸乙酯-轻质石油，3:2)指示没有起始材料(Rf 0.8)残留并产生新的点(Rf 0.1)。加入在水(5mL)中的焦亚硫酸钠(0.610g,0.2eq,3.21mmol)，并将混合物剧烈搅拌0.5h。加入乙酸乙酯(50mL)，将混合物通过硅藻土过滤到分液漏斗中并用盐水(10mL)洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取，将合并的有机级分经硫酸钠干燥，过滤，并且真空除去溶剂。将残留物通过快速色谱法(洗脱梯度，乙酸乙酯-轻质石油，2:1至乙酸乙酯)纯化，得到(3)，为白色固体。产率：6.00g(80.5％)；LCMS m/z482.13[M+18]+。
将(3,6.00g,1.0eq,12.92mmol)溶解在甲醇(60.0mL)中并冷却至0℃，然后加入甲醇钠(0.287mL,0.1eq,1.29mmol,25％w/v的甲醇溶液)。将反应混合物在室温搅拌15分钟并用TLC检查。反应完成后，加入Dowex-50w X8-氢型至中性pH，然后将反应物料通过烧结漏斗过滤并真空浓缩，得到(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟甲基)-6-(4-碘苄基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇(4)，为灰白色固体。产率：4.10g(83.4％)。LCMS m/z 381.18[M+H]+。
将封闭烧瓶中的(4,4.0g,1.0eq,10.5mmol)、二碘铜(1.67g,0.5eq,5.26mmol)、叠氮化钠(1.37g,2.0eq,21.0mmol)、[2-(二甲氨基)乙基]二甲胺(0.476mL,0.3eq,3.16mmol)和抗坏血酸钠(0.625g,0.3eq,3.16mmol)在乙醇:水(50.0mL,7:3)中的混合物在氩气下加热至95℃，并通过LCMS监测反应的进展。24小时后，将反应物真空浓缩至干，将粗品溶于甲醇中，通过烧结玻璃漏斗过滤，浓缩，并真空干燥，得到(5)，为白色固体。产率：3.10g(99.7％)LCMS m/z 294.57[M-1]ˉ。
将搅拌的(5,1.0eq,3.0g,10.16mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(40.0mL)中的溶液冷却至0℃。然后在氮气氛下分别将三乙胺(6.4eq，288mL，552.0mmol)和三甲基甲硅烷基氯化物(24.0eq 70mL，2071.0mmol)添加到上述溶液中。将所得混合物在室温和氮气下搅拌16小时。然后将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将水层再次用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并通过硅胶色谱法(0-5％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(6)，为白色固体。产率：2.78g(46.3％)；LCMS m/z 584.17[M+1]+。
在室温下在氮气下向搅拌的(6,1.0eq,2.7g,4.62mmol)在DCM:MeOH(1:1,30mL)的混合物中的溶液中加入乙酸铵(1.5eq,0.534g,6.93mmol)。将所得混合物在室温和氮气下搅拌16小时。然后将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将水层再次用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩并通过硅胶色谱法(20-30％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(7)，为浓稠浆状物。产率：2.08g(87％)；LCMS-MS m/z 510.13[M-1]-。
经5分钟向在–78℃下的搅拌的草酰氯(1.1eq,0.371mL,4.30mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入二甲基亚砜(2.2eq,0.611mL,8.60mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。在-78℃搅拌20分钟后，将(7,1.0eq,2.0g,3.91mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液添加到混合物中。将反应混合物在–78℃下进一步搅拌60分钟，然后加入三乙胺(5.0eq,2.75mL,19.5mmol)。使所得混合物在1小时内达到室温。将混浊混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在高真空下浓缩，得到(8)，为浅棕色凝胶。产量(2.4g，粗品)。其直接用于下一步骤中。
将搅拌的亚甲基双(膦酸)四乙酯(8a,1.5eq,1.96mL,7.06mmol)在干燥四氢呋喃(tetrahedron)(50mL)中的悬浮液冷却至-78℃并加入n-BuLi溶液(1.5eq,2.94ml,7.06mmol,2.4M在己烷中)。将所得混合物在-78℃搅拌1小时，然后在-78℃下加入在干燥四氢呋喃(tetrahedron)(10mL)中的(8,1.0eq,2.40g,4.71mmol)。移除浴，并使反应混合物达到室温并继续搅拌12小时。加入饱和氯化铵水溶液并用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层用水并然后用盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(30-40％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(9)，为无色凝胶。产率(2.0g,65％)；LCMS m/z644.5[M+1]+。
在室温和氮气氛下向搅拌的(9,1.0eq,2.0g,3.11mmol)在甲醇(15mL)中的溶液中加入Dowex-50W X8(0.50g)。将所得混合物在室温下搅拌2小时，然后过滤，用甲醇洗涤，并将滤液在真空下浓缩，得到(10)，为灰白色固体。产率：1.10g(83％)；LC-MS；m/z,426.47[M-1]-。
在0℃下在氮气下向搅拌的(10,1.00eq,0.89g,2.08mmol)在吡啶(10mL)中的溶液中滴加乙酸酐(15.0eq,2.95mL,31.2mmol)。移除冷浴并将所得混合物在室温和氮气下搅拌16小时。在高真空下除去挥发物并将残留物在乙酸乙酯和1N-HCl水溶液之间分配。将水层再次用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶色谱法(30％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(11)，为浓稠浆状物。产率：1.0g(93％)；LC-MS m/z554.54[M+1]+。
在室温下在氮气下向搅拌的(11,1.00eq,1.0g,1.90mmol)在四氢呋喃:乙酸乙酯(1:1,15mL)中的溶液中加入20％碳载氢氧化钯(0.50g)和冰醋酸(1.5eq,0.162mL,2.83mmol)。将所得混合物在室温和氢气压力(10psi)下搅拌3小时。将反应混合物通过硅藻土床过滤并用甲醇洗涤，将滤液真空浓缩，得到(12)，为棕色粘性凝胶。产率：1.0g(粗品)；LCMS m/z 530.21[M+1]+。
向(12,1.0eq,1.00g,1.89mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7.0mL)中的溶液中加入在N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中的N,N-二异丙基乙胺(1.0eq,0.20mL,1.19mmol)和己-5-炔-1-基氨基甲酸4-硝基苯基酯(5.0eq,1.65mL,9.44mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。减压浓缩反应混合物，得到粗品。将粗品通过使用20-50％的在水中的乙腈作为洗脱剂的反相(Aq C-18柱)柱色谱法纯化。用乙酸乙酯洗涤级分。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(13)，为棕色粘性固体。产率：1.1g(89％)；LCMS m/z 653.21[M+1]+。
向搅拌的(13,1.0eq,1.0g,1.53mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入冷却至0℃的吡啶(10.0eq,1.35mL,15.32mmol)，以及三甲基溴硅烷(10.0eq,1.68mL,15.32mmol)，并将反应混合物搅拌16小时。完成后，将反应混合物用冰水淬灭，用二氯甲烷萃取。将有机层干燥，并减压浓缩，得到灰白色固体。将其进一步用乙醚洗涤并干燥，得到(14)，为灰白色固体。产率：0.87g(95％)；LCMS m/z595.21[M-1]-。
将(14,0.48g,1.0eq,0.816mmol)溶解在甲醇(10.0mL)中并冷却至0℃，然后加入甲醇钠(0.18mL,1.0eq,0.816mmol，25％w/v的甲醇溶液)。将反应物在室温搅拌15分钟，然后进行TLC。反应完成后，加入Dowex-50wX8-氢型直到获得中性pH值。将反应物通过烧结玻璃漏斗过滤，真空浓缩并通过利用(30-45％的在含0.1％TFA缓冲液的水中的乙腈)的反相制备型HPLC纯化，得到(2-((2R,3S,4R,5S,6R)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)苄基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-101)。产率0.015g，(4％)；LCMS m/z 471.18[M+1]+。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.27(d,J＝8.4Hz,2H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),4.03(t,J＝8.4Hz,1H),3.78-3.76(m,2H),3.51-3.47(m,2H),3.21(t,J＝6.8Hz,2H),2.95-2.89(m,1H),2.85-2.80(m,1H),2.24-2.21(m,3H),2.09-2.07(m,1H),1.76-1.74(m,2H),1.68-1.62(m,2H),1.60-1.57(m,2H),1.56-1.47(m,1H)。
合成子化合物I-102的合成
向(2S,3S,4S,5R,6R)-2-((4-氨基苯基)硫代)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(1,1.0eq,1.04g,1.90mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(12.0mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(2.0eq,0.663mL,3.80mmol)和己-5-炔-1-基氨基甲酸4-硝基苯基酯(1a,2.0eq,0.996g,3.80mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。通过LCMS监测反应的进展。减压浓缩反应混合物，得到粗品。将粗品通过使用20-50％的在水中的乙腈作为洗脱剂的反相(C-18柱)柱色谱法纯化。用乙酸乙酯洗涤级分。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(2)，为棕色粘性固体。产率：0.65g(52.5％)LCMSm/z.671.22[M+1]+。
向搅拌的(2,1.0eq,0.25g,0.373mmol)在二氯甲烷(8.0mL)中的溶液中加入冷却至0℃的吡啶(10.0eq,0.30mL,3.73mmol)，以及三甲基溴硅烷(10.0eq,0.49mL,3.73mmol)，并将反应混合物搅拌16小时。完成后，将反应混合物用冰水淬灭，用二氯甲烷萃取。分离有机层，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到灰白色固体。将其进一步用乙醚洗涤并干燥，得到(3)，为灰白色固体。产率：0.16g(69.8％)LCMS m/z.614.93[M+1]+。
向搅拌的(3,1.0eq,0.08g,0.142mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中，滴加25％w/v的在甲醇中的甲醇钠(7.0eq,0.21mL,0.991mmol)到此溶液中，并在室温下搅拌反应混合物。通过LCMS监测反应的进展。2小时后，将反应混合物用Dowex-氢型(200-400目)中和(直至pH-7)。过滤反应混合物，减压浓缩，得到粗产物。将粗品通过用50-80％的在含0.1％TFA的水中的乙腈从C18柱洗脱的制备型HPLC纯化。将含有所需产物的级分合并并冻干至干燥，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6S)-6-((4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)苯基)硫代)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-102)，为白色固体。产率：0.016g,23.1％；LC-MS,m/z.489.17[M+1]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H),7.34(d,J＝8.8Hz,2H),7.25(d,J＝8.4Hz,2H),6.16(t,J＝5.6Hz,1H),4.93(bs,1H),4.78(s,2H),3.81(s,1H),3.31(dd,J＝3.2,9.2Hz,1H),3.22(t,J＝9.2Hz,1H),3.08(dd,J＝6.0,11.6Hz,2H),3.02-2.97(m,1H),2.77(t,J＝2.8Hz,1H),2.20-2.16(m,2H),2.07-1.99(m,1H),1.78-1.67(m,1H).1.54-1.41(m,6H)。
用于X26的合成子的合成
在0℃和氮气气氛下向搅拌的((3S,4S,5R,6R)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四基四乙酸酯(1,1.0eq.,4.3g,8.91mmol)在乙腈(40mL)中的溶液中依次加入烯丙基三甲基硅烷(1a,4.0eq.,5.67mL,35.7mmol)，然后是三氟化硼乙醚合物(4.0eq.,4.4mL,35.7mmol)和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(0.3eq.,0.485mL,2.67mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌12小时。之后，将反应混合物倒入冰冷的饱和碳酸氢钠水溶液中并用二氯甲烷萃取。将有机部分再次用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩并通过硅胶柱色谱法(使用10％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到(2)，为淡黄色浆状物。产率：3.48g,84.06％,LC-MS m/z465.0[M+1]+。
在室温下将N-甲基吗啉N-氧化物(1.5eq.，0.397g，1.5eq，3.39mmol)以及然后将四氧化锇(0.1eq，1.44mL，0.226mmol，4.0重量％在水中)添加到搅拌的(2R,3R,4R,5R,6R)-2-烯丙基-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(2,1.0eq,1.05g,2.26mmol)在丙酮-水(5:1,30.0mL)中的溶液中。2小时后，TLC显示起始材料完全消耗并产生了较低的点(基于TLC观察)。然后加入乙酸乙酯(50mL)，并用乙酸乙酯萃取。将有机部分经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空中去除溶剂，得到粗品(3)，其直接用于下一步骤中。
向0℃下的搅拌的粗(3,1.2g,2.41mmol)在丙酮:水(2:1,20mL)的混合物中的溶液中加入高碘酸钠(2eq,1.03g,4.81mmol)，然后在室温下搅拌。在室温下搅拌2小时后，TLC显示起始材料已完全消耗，并且在TLC上产生了极性较小的新点。然后将乙酸乙酯加入到反应混合物中并用乙酸乙酯萃取。将有机部分经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，然后将其通过使用7-10％的在二氯甲烷中的甲醇的快速柱色谱法纯化，得到(4)，为无色浆状物。产率：0.91g,81.04％。LC-MS m/z 467.1[M+1]+。
向0℃下的(4,1.00eq,0.91g,1.95mmol)在甲醇(25.0mL)中的溶液中加入碳酸钾(3eq.,0.809g,5.85mmol)、(1-重氮基-2-氧丙基)膦酸二甲酯(4a,2eq.,0.75g,3.9mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。TLC显示形成极性点。然后在真空中蒸发挥发物以获得粗反应物料，将其通过使用10-12％的在二氯甲烷中的甲醇的硅胶快速柱色谱法纯化，得到(5)，为无色浆状物。产率：0.35g,53.34％。LC-MS m/z 337.0[M+1]+。
在0℃下向搅拌的(5,1.0eq,0.35g,1.04mmol)在二氯甲烷(15.0mL)中的溶液中加入吡啶(10.0eq,0.838mL,10.4mmol)和三甲基溴硅烷(10.0eq,1.37mL,10.4mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌。通过LC-MS监测反应的进展。16小时后，蒸发挥发物，并将粗物料通过制备型HPLC(使用40-60％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。收集含有所需化合物的级分并将其冻干，得到(2-((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(丙-2-炔-1-基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(6)，为灰白色固体。产率：0.101g,34.64％LC-MS m/z 281.0[M+1]+。
合成子化合物I-108的合成
向0℃下的(4aR,5R,7S,8S,8aR)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,3,7-三甲氧基-2,3-二甲基六氢-5H-吡喃[3,4-b][1,4]二噁英-8-醇(1,0.90g,1eq,2.13mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10.0mL)中的溶液中加入氢化钠(0.170g,2eq.,4.26mmol)、对甲氧基苄基氯(0.65mL,3.0eq,6.39mmol)和四丁基碘化铵(0.157g,0.2eq.,0.426mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌20分钟。然后，将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离乙酸乙酯层，将其用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物，将粗产物通过combi-flash柱色谱法(用10-20％的在己烷中的乙酸乙酯洗脱)进行纯化，得到(2)，为无色粘性胶状物。产率：0.52g(45％)。LCMS:m/z 560.2[M+18]+
向0℃下的(2,0.700g,1.0eq,1.33mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入四丁基氟化铵(1M的在THF中的溶液，1.99mL,1.5eq.,1.99mmol)，并使反应混合物缓慢地达到室温，并搅拌4小时。通过加入冷水淬灭反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过使用硅胶柱并利用30-40％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱的快速柱色谱法纯化，得到(3)，为无色粘性胶状物。产率：0.300g,52.69％。LCMS:m/z 446.0[M+18]+
向0℃下的(3,0.650g,1.0eq,1.52mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8.0mL)中的溶液中加入氢化钠(0.121g,2eq.,3.03mmol)和7-碘庚-1-炔(3a,0.674g,2eq.,3.03mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌5小时。然后，将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将乙酸乙酯层用水、盐水洗涤，将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物，将粗产物通过使用硅胶柱并利用5-20％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱的combi-flash柱色谱法纯化，得到(4)，为无色粘性胶状物。产率：0.40g(50.45％)。LC-MS m/z 540.2[M+18]+
向0℃下的(4,0.350g,1.0eq,0.67mmol)在乙腈(6.00mL)中的溶液中加入水(2.00mL)和硝酸铈铵(0.62g,1.5eq,1.14mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。之后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取(4×40mL)。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗物料，将粗物料通过柱色谱法(利用20-30％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂洗脱)纯化，得到(5)，为无色粘性胶状物。产率：0.20g(74.2％),LCMS:420.0[M+18]+
向0℃下的(5,0.370g,1.0eq,0.919mmol)和(2R,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)-6-(2,2,2-三氯-1-亚胺基乙氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(5a,0.645g,1.2eq.,1.10mmol)在干燥二氯甲烷(24.0mL)中的溶液中加入经活化分子筛(0.300g)，并将反应混合物在10℃下搅拌1小时。然后将反应混合物冷却至-78℃，并向反应混合物中加入三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(0.050mL,0.3eq.,0.276mmol)并使其在2小时内达到0℃。然后，将反应混合物通过加入三乙胺(0.129mL,1.0eq,0.919mmol)淬灭并过滤以除去分子筛，将反应混合物减压浓缩，得到粗产物，将粗产物通过combi-flash柱色谱法(利用20-50％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂洗脱)纯化，得到(6)，为淡黄色粘性胶状物。产率：0.55g(72.53％)。LCMS:m/z 842.3(M+18)+
向0℃下的(6,0.630g,1.0eq,0.764mmol)在二氯甲烷(12.0mL)中的溶液中加入吡啶(0.925mL,15eq.,11.5mmol)和三甲基溴硅烷(1.01mL,10eq.,7.64mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物冷却至0℃，并通过加入水(10mL)淬灭。将反应混合物用二氯甲烷(3×30mL)萃取。将合并的有机级分经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到(7)，为淡黄色粘性胶状物。产率：0.60g(81.75％)LCMS:m/z 767.0[M-1]-
向0℃下的(7,0.60g,1.0eq,0.780mmol)在甲醇(6.0mL)中的溶液中加入甲醇钠溶液(0.515mL,3.0eq,2.34mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物冷却至0℃，用Dowex-50w X8-氢型中和并用烧结漏掉过滤，将得到的滤液减压浓缩，得到(8)，为淡黄色粘性胶状物。产率：0.37g(73.77％)LC-MS m/z 641.0(M-1)-
向0℃下的(8,0.37g,1.0eq,0.57mmol)在二氯甲烷(4.0mL)中的溶液中加入三氟乙酸(4.0mL)和水(0.4mL)。然后将反应混合物在室温下搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，将其重新溶解于二氯甲烷中并用二氯甲烷再浓缩3次以除去残留的三氟乙酸。将得到的粗残留物直接提交用于基于HPLC的制备型纯化。制备型纯化是在HILIC柱上使用90-50％的在水和0.1％三氟乙酸中的乙腈(首先使用乙腈)作为缓冲液进行以得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(((2S,3S,4S,5S,6R)-6-((庚-6-炔-1-基氧基)甲基)-4,5-二羟基-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-108)，为灰白色固体。产率：0.16g(52.58％)。LCMS:m/z 529.1[M+1]+1HNMR(400MHz,D2O)δ5.04(bs,1H),4.89(bs,1H),4.07(bs,1H),3.99(bs,1H),3.89-3.81(m,3H),3.75-3.52(m,8H),3.44(s,3H),2.36-2.35(m,1H),2.25-2.21(m,2H),2.16-2.09(m,1H),1.99-1.88(m,1H),1.76-1.70(m,2H),1.67-1.60(m,2H),1.58-1.50(m,2H)。
合成子化合物I-109的合成
向甲基-α-D-吡喃甘露糖苷(6.00g,1.0eq,30.9mmol)在甲醇(100mL)中的溶液中加入2,2,3,3-四甲氧基丁烷(1a,5.51g,1.0eq.,30.9mmol)、樟脑磺酸(0.431g,0.06eq,1.85mmol)和正甲酸三甲酯(13.7mL,4.0eq,,124mmol)。将溶液加热至回流并保持16小时。TLC指示起始材料完全消耗。随后用三乙胺(0.478mL,0.11eq.,3.40mmol)淬灭反应物并将其减压浓缩。将粗产物通过柱色谱法(20-50％的在含0.1％三乙胺的二氯甲烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(2)，为无色浓稠浆状物。产率：7.0g(73.48％)。LC-MS,m/z 326.0[M+18]+。
向(2,5.50g,1.0eq.,17.8mmol)在吡啶(50mL)中的溶液中加入N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.436g,0.2eq.,3.57mmol)。将反应混合物搅拌5分钟，冷却至0℃，并经10分钟分次加入叔丁基(氯)二甲基硅烷(4.03g,1.5eq.,26.8mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，并用乙酸乙酯再萃取水层。将合并的有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过用20-30％的在己烷中的乙酸乙酯进行洗脱的硅胶柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(3)，为无色油状物。产率：4.80g(63.68％)。LC-MS,m/z 440.0[M+18]+。
向0℃下的(3,4.93g,1.0eq,11.7mmol)在吡啶(35.0mL)中的溶液中加入乙酸酐(2.21mL,2.0eq.,23.3mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。然后将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离乙酸乙酯层并用乙酸乙酯再萃取水层。用水、盐水溶液洗涤合并的有机层，将其经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过用0-20％的在己烷中的乙酸乙酯进行洗脱的硅胶柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(4)，为无色油状物。产率：2.90g(53.5％)。LC-MS,m/z 482.0[M+18]+。
向0℃下的(4,2.10g,1.0eq,4.52mmol)在四氢呋喃(40mL)中的溶液中加入四丁基氟化铵(1M在THF中的溶液，5.42mL,1.2eq.,5.42mmol)，并使反应混合物缓慢地达到室温，并搅拌4小时。然后通过加入冷水淬灭反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物，然后将粗产物通过利用30-40％的在含0.1％三乙胺的己烷中的乙酸乙酯(注：柱用含0.1％三乙胺的己烷中和，并使用含0.1％三乙胺的己烷)作为洗脱剂进行洗脱的快速柱色谱法纯化，得到(5)，为无色粘性胶状物。产率：1.50g(94.72％)。LC-MS,m/z 368.0[M+18]+。
向-78℃下的草酰二氯(0.45mL,1.1eq.,5.34mmol)在干燥二氯甲烷(15.0mL)中的溶液中加入二甲基亚砜(0.750mL,2.2eq.,10.7mmol)，并将溶液在-78℃下搅拌20分钟。经5分钟向此溶液中滴加在二氯甲烷(15.0mL)中的(5,1.70g,1.0eq,4.85mmol)。然后将反应混合物在-78℃下搅拌2小时，然后滴加三乙胺(3.41mL,5eq.,24.3mmol)。然后将反应混合物在-78℃下搅拌10分钟，然后在室温下再搅拌2小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离乙酸乙酯层，将其经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到(6)，为淡黄色粘性胶状物。产率：1.60g(85.2％)。LC-MS,m/z 349.0[M+1]+。
向0℃下的(6,1.60g,1.0eq,4.59mmol)在甲醇(24.0mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.90g,3.0eq.,13.8mmol)和(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(1.76g,2.0eq.,9.19mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。TLC显示形成非极性点。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将水层用乙酸乙酯再萃取。将合并的乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物。将粗产物通过combi-flash柱色谱法(利用20-30％的在己烷中的乙酸乙酯进行洗脱)纯化，得到(7)，为类白色固体。产率：0.85g(61.21％)。LC-MS,m/z 320.0[M+18]+。
向(7,1.20g,1.00eq,3.97mmol)和(2R,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)-6-(2,2,2-三氯-1-亚胺乙氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(7a,3.02g,1.3eq.,5.16mmol)在干燥二氯甲烷(72.0mL)中的溶液中加入经活化分子筛(0.50g)，并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。然后将反应混合物冷却至-78℃，向反应混合物中加入三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(0.217mL,0.3eq.,1.19mmol)，并使反应混合物在2小时期间达到0℃。然后通过加入三乙胺(0.558mL,1.0eq,3.97mmol)淬灭反应混合物，减压浓缩反应混合物并将其通过快速柱色谱法(注：硅胶柱用含0.1％三乙胺的二氯甲烷中和)(利用0-50％的在含0.1％三乙胺的二氯甲烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱)纯化，得到(8)，为淡黄色固体。产率：1.60g(55.62％)。LC-MS m/z 742.0[M+18]+
向0℃下的(8,1.60g,1.00eq,2.21mmol)在二氯甲烷(40.0mL)中的溶液中加入吡啶(2.67mL,15eq.,33.1mmol)和三甲基溴硅烷(2.91mL,10eq.,22.1mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。然后将反应混合物冷却至0℃，并通过加入水(10mL)淬灭。将反应混合物用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到(9)，为灰白色固体。产率：1.30g(79.20％)。LCMS m/z 667.1[M-1]-
向0℃下的(9,1.30g,1.0eq,1.94mmol)在甲醇(25.0mL)中的溶液中加入甲醇钠溶液(25％在甲醇中，1.26mL,3.0eq,5.83mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物冷却至0℃，用Dowex-50w X8-氢型中和并用烧结漏掉过滤，将得到的滤液减压浓缩，得到(10)，为淡黄色粘性胶状物。产率：1.20g(96.7％).541.1[M-1]–
向0℃下的(10,1.20g,1.0eq,2.21mmol)在二氯甲烷(6.0mL)中的溶液中加入三氟乙酸(6.0mL)和水(0.6mL)。然后将反应混合物在室温下搅拌3小时。然后，减压浓缩反应混合物并将其溶解于二氯甲烷中并用二氯甲烷再浓缩3次，以除去残留的三氟乙酸。将得到的粗残留物直接提交用于制备型HPLC纯化。纯化是在HILIC柱上使用90-50％的在水和0.1％乙酸中的乙腈(首先使用乙腈)作为缓冲液进行，以得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(((2S,3S,4S,5S,6R)-6-乙炔基-4,5-二羟基-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-109)，为灰白色固体。产率：0.50g(52.77％)。LC-MS m/z429.0[M+1]+。1H NMR(400MHz,D2O)δ5.03(d,J＝1.6Hz,1H),4.91(d,J＝1.2Hz,1H),4.33(dd,J＝9.2,1.6Hz,1H),4.08-4.07(m,1H),3.87(s,1H),3.87-3.76(m,3H),3.67-3.63(m,1H),3.57-3.52(m,1H),3.46(s,3H),2.98(d,J＝2.0Hz,1H),2.16-2.07(m,1H),1.96-1.85(m,1H),1.82-1.73(m,2H)。
合成子化合物110A的合成
在0℃下向(2R,3S,4S,5S,6R)-2-(氨基甲基)-6-(4-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇(1,1.0eq.,0.400g,1.33mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL)中的溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(3.0eq.,0.696mL,3.99mmol)和2-氯-2-氧代乙酸甲酯(1.5eq.,0.184mL,2.00mmol)，并将反应混合物在相同温度下搅拌2小时。此后，TLC显示起始材料的完全转化。减压蒸发挥发物，将粗残留物通过快速柱色谱法(使用2-5％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到(2)，为无色粘稠液体。产率：0.450g,45.47％。LCMS；m/z 387.2[M+1]+。
向(2,1.0eq.,0.450g,1.16mmol)在乙酸乙酯:四氢呋喃(1:1)(10.0mL)中的溶液中加入10％钯碳(0.225g)。将反应混合物在氢气气氛下于室温搅拌3小时。完成(通过TLC监测)后，使用烧结漏斗使反应混合物通过硅藻土床。减压浓缩滤液，得到(3)，为无色粘稠液体，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。产率：0.230g(粗品)；LCMS；m/z 357.0[M+1]+。
在室温下向2-((((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-氨基苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)氨基)-2-氧代乙酸甲酯(1.0eq.,0.230g,0.645mmol)和N-(己-5-炔-1-基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(3a,1.5eq.,0.185g,0.968mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL)中的溶液中加入N,N-二甲基吡啶-4-胺(1.0eq.,0.078g,0.645mmol)。然后将反应混合物在65℃下加热16小时。完成后，将反应混合物在真空下浓缩，得到粗品(4)，为深黄色浆状物，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。产率：0.250g(粗品)；LCMS；m/z 480.0[M+1]+。
在室温下向(4,1.0eq.,0.250g,0.521mmol)在四氢呋喃:水(1:1)(4.00mL)中的溶液中加入氢氧化锂(3.0eq.,0.037g,1.56mmol)，并将反应混合物在相同温度下搅拌12小时，此后TLC显示起始物料完全消耗。将反应混合物在真空下浓缩，得到粗残留物，其直接用于制备型HPLC纯化(使用15-35％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)。将含有所需化合物的所有级分合并并冻干，得到2-((((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)氨基)-2-氧代乙酸(110A)，为灰白色固体。产率：0.018g,7.42％。LCMS:m/z 466.3[M+1]+
合成子化合物111A的合成
将4-羟基苯甲酸(0.6g,1.0eq,4.34mmol)和己-5-炔-1-胺盐酸盐(1a,1.1eq,0.638g,4.78mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液冷却至0℃。加入N,N-二异丙基乙胺(4.01mL,5.0eq,21.7mmol)、({[3-(二甲基氨基)丙基]亚胺基}亚甲基)(乙基)胺盐酸盐(EDC.HCl)(1.25g,1.5eq,6.52mmol)和1H-1,2,3-苯并三唑-1-醇(HOBt)(0.88g,1.5eq,6.52mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，浓缩反应混合物以得到粗品，将粗品通过快速柱色谱法(使用70％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯)纯化，得到N-(己-5-炔-1-基)-4-羟基苯甲酰胺(2)，为棕色浆状物。产率：0.780g,75.59％。LCMS,m/z 216.04[M-1]-。
向-78℃下的搅拌的(2R,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)-6-(2,2,2-三氯-1-亚胺基乙氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(1.0g,1.0eq,1.71mmol)和N-(己-5-炔-1-基)-4-羟基苯甲酰胺(2,0.446g,1.2eq.,2.05mmol)在干燥二氯甲烷(20.0mL)中的溶液中加入三氟化硼乙醚合物(0.422mL,2.0eq.,3.42mmol)。5分钟后，移除-78℃冷浴并用0℃冷浴代替。将反应混合物在0℃搅拌2小时。此后，将反应混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将水层再次用二氯甲烷萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，得到粗物料，将粗物料通过快速硅胶柱色谱法(使用80-85％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(3)，为无色浆状物。产率：1.0g,91.42％,LCMS,m/z 640.35[M+1]+。
向(3,1.0eq,0.5g,0.782mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液中加入吡啶(15.0eq,0.966mL,11.7mmol)。然后在0℃下加入三甲基溴硅烷(10.0eq,1.03mL,7.82mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌12小时。完成(通过LCMS监测)后，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(4)，为粗品，其未经进一步纯化即用于下一反应中。产率：0.538g(粗品，80％LCMS纯度)。LCMS,m/z 582.23[M-1]-。
在0℃下向搅拌的(4,0.538g,1.0eq,0.922mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入25％甲醇钠溶液(0.609mL,3.0eq,2.77mmol)，然后在室温下搅拌。通过LC-MS监测反应的进展。2小时后，通过加入Dowex-50氢型中和该反应物至中性pH值。然后，通过烧结漏斗过滤树脂并蒸发滤液，得到粗物料，然后将粗物料通过制备型HPLC(使用30-45％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-(己-5-炔-1-基氨基甲酰基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(111A)，为灰白色固体。产率：0.139g,32.96％。LCMS,m/z 456.18[M-1]-。
合成子化合物112A的合成
在0℃下向搅拌的(2R,3S,4S,5R,6R)-2-(4-氨基苯氧基)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(1,1.0eq,0.500g,0.941mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液中加入丁-3-炔-1-磺酰氯(1a,2.0eq,0.287g,1.88mmol)和三乙胺(2.5eq,0.331mL,2.35mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，将反应混合物倒入水中，并用二氯甲烷萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品，将粗品通过快速色谱法(硅胶目数：100-200；洗脱：30-40％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(2)，为黄色浆状物。产率：0.270g,41.0％。LCMS,m/z 646.0[M-1]-。
向(2,1.0eq,0.270g,0.417mmol)在二氯甲烷(3.0mL)中的溶液中加入吡啶(15.0eq,0.515mL,6.25mmol)。然后在0℃下加入三甲基溴硅烷(10.0eq,0.550mL,4.17mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，将反应混合物倒入水中并用二氯甲烷萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(3)，为黄色浆状物，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。产率：0.160g(粗品，58％LCMS纯度)。LCMS,m/z 590.4[M-1]-。
在0℃下向搅拌的(3,0.070g,1.0eq,0.118mmol)在甲醇(1.0mL)中的溶液中加入25％甲醇钠溶液(0.025mL,0.2eq,0.0237mmol)，然后在室温下搅拌。通过LCMS监测反应的进展。2小时后，通过加入Dowex-50氢型中和该反应物至中性pH值。然后，通过烧结漏斗过滤树脂并蒸发滤液，得到粗物料，然后将粗物料通过制备型HPLC(使用5-23％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(4-(己-3-炔-1-基磺酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(112A)，为灰白色固体。产率：0.028g,50.84％。LCMS,m/z466.0[M+1]+。
合成子113A的合成
在-40℃下向搅拌的((2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(苄基氧基)-6-乙炔基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇(3.88g,1.0eq,8.46mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中加入2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(2.95g,1.5eq,14.4mmol)和三氟甲磺酸三氟甲磺酰基酯(1.99mL,1.2eq,11.8mmol)，并在相同温度下搅拌。通过TLC监测反应的进展。搅拌2小时后，TLC显示起始材料已完全消耗，并生成新非极性点。然后减压蒸发反应混合物，得到的粗品(2)立即直接用于下一反应中。
在-78℃下向搅拌的甲基膦酸二乙酯(2a,6.19mL,5.0eq.,42.3mmol)在四氢呋喃(25.00mL)中的溶液中依次加入六甲基磷酰胺(7.36mL,5eq.,42.3mmol)和正丁基锂(16.3mL,4.8eq.,40.6mmol,2.5M在己烷中)。1小时后，向反应混合物中加入粗[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-乙炔基噁烷-2-基]甲基三氟甲磺酸酯(粗品，从步骤1得到)在四氢呋喃(25.0mL)中的溶液，并在-78℃下搅拌。1小时后，用饱和氯化铵溶液淬灭反应物，并将其用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到粗品，将粗品通过快速柱色谱法(使用30-35％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(3)，为无色液体。产率：3.2g,63.78％；LCMS,m/z 593.34[M+1]+。
将(3,1.50g,1.0eq.,2.53mmol)溶解于乙酸酐(60mL)中，然后冷却至0℃，然后在氮气气氛下加入三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(3.66mL,8.0eq.,20.2mmol)。然后让反应物升温至室温并搅拌72小时。然后将深棕色溶液冷却至0℃并通过小心地加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭。用乙酸乙酯稀释反应混合物，然后用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤有机层。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到深棕色油状物，将其通过快速柱色谱法(使用35-40％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(4)，为棕色浆状物。产率：1.0g,88.12％。LC-MS,m/z 448.80[M+1]+。
在0℃下向搅拌的(4,1.5g,1.0eq.,3.35mmol)在二氯甲烷(25.0mL)中的溶液中依次加入吡啶(2.69mL,10.0eq.,33.5mmol)和三甲基溴硅烷(4.41mL,10.0eq.,33.5mmol)，并在室温下搅拌。通过LC-MS监测反应的进展。16小时后，向反应混合物中加入水并用二氯甲烷萃取。将有机部分经硫酸钠干燥并浓缩至干。用乙醚洗涤所得产物若干次，得到(5)。产率：1.1g,83.8％。LC-MS,m/z 390.60[M-1]-
在0℃下向搅拌的(5,1.3g,1eq,3.31mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中加入25％甲醇钠溶液(2.19mL,3.0eq,9.94mmol)，然后在室温下搅拌。通过LC-MS监测反应的进展。2小时后，通过加入Dowex-50氢型中和该反应物。然后，通过烧结漏斗过滤树脂并蒸发滤液，得到粗物料，然后将粗物料通过制备型HPLC(使用40-60％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(113A)，为灰白色固体。产率：0.175g,19.84％。LC-MS m/z 267.0[M+1]+。
合成子566A的合成
向0℃下的搅拌的(2S,3S,4S,5S,6R)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四醇(40.0g,1.0eq,222.0mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(150.0mL)中的溶液中分批加入对甲苯磺酸一水合物(1.91g,0.05eq,11.1mmol)，然后加入2-甲氧基丙-1-烯(77.7mL,5.0eq,1.11mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌16小时。通过TLC监测反应物的进展。完成后，用三乙胺淬灭反应混合物。向反应混合物中加入冷水(200mL)并用乙醚萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品(2)，为白色固体。将粗品用于下一步骤。产率：43.0g，粗品；LCMS m/z.261.15[M+1]+。
向(2,43.0g,1.0eq,165.0mmol)在干燥甲苯(1000mL)中的溶液中加入三苯基膦(52.0g,1.2eq,198.0mmol)和4-硝基苯酚(27.6g,1.2eq,198.0mmol)，并将反应混合物搅拌5分钟，然后在0℃下加入偶氮二羧酸二异丙酯(41.0mL,1.2eq,198.0mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。通过TLC监测反应的进展。完成后，用10％氢氧化钠水溶液淬灭反应混合物，用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品通过使用2-10％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱法纯化，得到(3)，为白色固体。产率：16.5g(26％)LCMS m/z.382.20[M+1]+。
向搅拌的(3,15.0g,1.0eq,39.3mmol)在甲醇(150mL)中的溶液中加入Dowex-50 H+(20.0g)，并将反应混合物在室温下搅拌6小时。完成后，通过烧结漏斗过滤反应混合物。减压浓缩滤液，得到(4)，为白色半固体。产率：9.6g，粗品；LCMS m/z.382.20[M+Na]+。
将搅拌的(4,5.00g,16.6mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液冷却至0℃。然后在氮气气氛下加入三乙胺(27.0mL,12.0eq.,199mmol)和三甲基氯硅烷(12.6mL,6.0eq,99.6mmol)。将所得混合物在室温和氮气下搅拌24小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将水层再次用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品通过使用20-40％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱法纯化，得到(5)，为无色凝胶。产率：8.0g,79.0％；LCMS m/z.607.15[M+18]+。
在室温和氮气下向搅拌的(5,5.5g,9.32mmol)在甲醇(30mL)和二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入乙酸铵(1.08g,1.50eq,14.0mmol)。将所得混合物在室温和氮气下搅拌16小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到粗品。将粗品通过使用20-40％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱法纯化，得到(6)，为白色固体。产率：3.50g,72％LCMSm/z.535.0[M+18]+。
向-78℃下的搅拌的草酰二氯(0.642mL,1.1eq,,7.44mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中经5分钟加入二甲基亚砜(1.06mL,2.2eq,,14.9mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。在-78℃下搅拌20分钟后，向混合物中加入(6,3.5g,6.76mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。将反应混合物进一步在-78℃下搅拌1小时，接着加入三乙胺(4.75mL,5.0eq,33.8mmol)。使所得混合物在1小时内达到室温。将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，得到(7)，为棕色浆状物。产率：3.50g，粗品；LCMS m/z.533.0[M+18]+。
在氮气气氛下向-78℃下的搅拌的[(二乙氧基磷酰基)甲基]膦酸二乙酯(7a,2.93mL,1.5eq,10.2mmol)在四氢呋喃(40.0mL)中的溶液中滴加正丁基锂(2.5M在己烷中)(5.09mL,1.5,10.2mmol)并在-78℃下搅拌1小时。然后，滴加溶解于四氢呋喃(10.0mL)中的(7,3.55g,1.0eq,6.79mmol)并让反应混合物升温至室温并搅拌16小时。完成反应后，用饱和氯化铵溶液淬灭反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品进一步通过使用15-60％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱法纯化，得到(8)，为无色液体。产率：1.85g,42％；LCMSm/z.650.27[M+1]+。
在室温和氮气下向搅拌的(8,1.80g,2.77mmol))在甲醇(20mL)中的溶液中加入Dowex 50WX8(1.80g)。将所得混合物在室温和氮气下搅拌2小时。将反应混合物过滤并用甲醇洗涤，减压浓缩滤液，得到(9)，为无色液体。产率：1.18g,98％；LCMS m/z 433.95[M+1]+。
将搅拌的(9,1.18g,1.0eq,2.72mmol)在吡啶(10.0mL)中的溶液冷却至0℃，然后向其中滴加乙酸酐(4.09mL,15.0eq,40.8mmol)，并将反应物质在室温下搅拌16小时。完成反应后，将反应混合物减压蒸发，然后用乙酸乙酯稀释。将有机层用水洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗液体。将粗液体进一步通过柱色谱法(在20-40％的在己烷中的乙酸乙酯中进行洗脱)纯化，得到(10)，为无色液体。产率：1.3g,84％；LCMS m/z560.10[M+1]+。
向(10,1.30g,2.32mmol)在二氯甲烷(20.0mL)中的溶液中加入10％钯碳(1.40g)，然后将反应混合物在氮气气氛(球囊压力)下搅拌16小时。通过TLC和LC-MS监测反应。完成反应后，通过注射器过滤器过滤反应混合物。将合并的滤液减压蒸发，得到(11)，为棕色凝胶。产率：1.10g(粗品)LCMS m/z 531.95[M+1]+。
向(11,0.40g,1.0eq 0.753mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.31mL,10.0eq,7.53mmol)和己-5-炔-1-基氨基甲酸4-硝基苯基酯(11a,3.0eq,0.592g,2.26mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。通过LCMS监测反应的进展。减压浓缩反应混合物，得到粗品。将粗品通过使用20-50％的在水中的乙腈作为洗脱剂的反相(Aq C-18柱)柱色谱法纯化。用乙酸乙酯洗涤级分。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(12)，为棕色粘性固体。产率：0.38g,39％；LCMS m/z.654.95[M+1]+。
将搅拌的(12,0.37g,1.0eq,0.339mmol)在二氯甲烷(10.0mL)和吡啶(0.27mL,10.0eq,3.39mmol)中的溶液冷却至0℃并向其中加入三甲基溴硅烷(0.44mL,10.0eq.,3.39mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到灰白色固体。将其进一步用乙醚洗涤并干燥，得到(13)，为灰白色固体。产率：0.25g，(粗品)；LCMS m/z 599.15[M+1]+。
向搅拌的(2-((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(13,0.25g,1.0eq,0.418mmol)在甲醇(5.0mL)中的溶液中加入甲醇钠(25％在甲醇中，0.63mL,7.0eq,2.92mmol)并将反应混合物在室温下搅拌2小时。通过LC-MS监测反应。完成反应后，将反应混合物减压浓缩，得到粗品。将粗品通过反相柱色谱法(使用20-32％的在含0.1％TFA的水中的ACN)纯化，得到(2-((2R,3S,4S,5S,6S)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(566A)，为白色固体。产率：0.025g(13％)LCMS m/z 473.20[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO与D2O交换)δ7.24(d,J＝8.88Hz,2H),6.83(d,J＝9.2Hz,2H),4.98(s,1H),),3.81(d,J＝3.2Hz,1H),3.36 -3.33(dd,J＝3.2,&9.2,Hz,1H),3.22(t,J＝9.2Hz,1H),3.15(t,J＝7.6Hz,1H),3.06(t,J＝6.0Hz,2H)2.69-2.66(m,1H),2.17-2.14(m,2H),2.02-1.99(m,1H),1.65-1.61(m,1H),1.50-1.42(m,6H)。
合成子642A的合成
(2-((2R,3S,4R,5S,6S)-6-(4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)苄基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(642)。参见图24的合成方案。标题化合物的合成可通过上面的方案实现，其中(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-2-((苄氧基)甲基)-6-甲氧基四氢-2H-吡喃(1)首先转化为(2R,3S,4R,5S,6S)-2-(羟基甲基)-6-(4-硝基苄基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇(9)。化合物9可使用实施例化合物A和I-38中例示的化学方案转化为642A。
合成子643A的合成
(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-6-(二氟(4-(3-(己-5-炔-1-基)脲基)苯基)甲基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(643A)。参见图25的合成方案。标题化合物的合成可通过上面的方案来实现，其中(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-2-((苄氧基)甲基)-6-甲氧基四氢-2H-吡喃(1)首先转化为(2R,3S,4S,5S,6R)-2-(二氟(4-硝基苯基)甲基)-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇(9)。化合物9可使用实施例化合物A和I-38中例示的化学方案转化为643A。
M6PR配体探针的合成
表13中的化合物是通过改变本文描述的方法从指示的起始材料和3-叠氮基吡啶来制备。
6.1.2.M6PR配体-接头化合物的制备
实施例1：从氨基中间体A-10合成化合物I-1
将3,3’-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二丙酸(1A)(1.0eq,0.200g,0.96mmol)和2,3,5,6-四氟苯酚(2.0eq,0.315g,1.9mmol)在乙酸乙酯(4mL)中的溶液冷却为0℃，加入N,N’-二异丙基碳二亚胺(3.0eq,0.44mL,2.8mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过硅藻土床过滤反应混合物并用乙酸乙酯洗涤硅藻土床。浓缩滤液得到粗产品，将粗产品通过使用硅胶(100-200目)和0-10％的在己烷中的乙酸乙酯的柱色谱法纯化，得到化合物1B，为无色粘稠液体。产率：0.370g,76.1％；LC-MS m/z 500.96[M-1]-。
将中间体A-10(1.0eq,0.040g,0.11mmol)溶解于二甲基亚砜(1mL)中并加入三乙胺(10.0eq,0.15mL,1.1mmol)。在另一个小瓶中，将化合物1B(5.0eq,0.276g,0.55mmol)溶解于二甲基亚砜(1mL)中并向此混合物中滴加上一个混合物(经30分钟)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟。完成后，用乙腈稀释反应混合物并将其通过制备型HPLC(25-45％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-1，为灰白色固体。产率：0.002g,2.5％；LC-MS m/z 686.25[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.35(d,J＝8.88Hz,2H),7.29-7.23(m,1H),7.07(d,J＝8.96Hz,2H),5.50(s,1H),4.13(bs,1H),3.98-3.95(m,1H),3.91(t,J＝5.64Hz,2H),3.86(t,J＝5.72Hz,2H),3.72(s,4H),3.58(d,J＝7.32Hz,2H),2.96(t,J＝5.76Hz,2H),2.66(t,J＝5.8Hz,2H),2.03-2.00(m,1H),1.74-1.63(m,2H),1.32-1.26(m,1H)。
实施例2：化合物I-2的合成
使用类似的方法制备化合物I-2。产率：0.03g,31％；LC-MS m/z 702.31[M+1]+。1HNMR(400MHz,D2O)δ7.37(d,J＝8.8Hz,2H),7.11(d,J＝8.9Hz,2H),6.77(s,2H),5.52(d,J＝1.48Hz,1H),5.20(bs,1H),4.14-4.13(m,1H),3.98-3.95(m,1H),3.85(t,J＝5.88Hz,2H),3.72-3.66(m,6H),3.60-3.55(m,4H),3.42(t,J＝6.96Hz,2H),3.29(t,J＝5.28Hz,2H),2.66(t,J＝5.84Hz,2H),2.10(t,J＝7.32Hz,2H),2.04-1.95(m,1H),1.69-1.57(m,2H),1.54-1.45(m,4H)。
实施例3：化合物I-3的合成
使用类似的方法制备化合物I-3(0.011g,10％产率)。LC-MS m/z 1142.6[M+1]+。1HNMR(400MHz,D2O)δ7.27(d,J＝9.0Hz,2H),7.16(d,J＝9.0Hz,2H)6.83(s,2H),5.56(s,1H),4.20–4.15(m,1H),4.05–3.98(m,1H),3.88(t,J＝6.0Hz,2H),3.75–3.58(m,49H),3.49(t,J＝6.8Hz,2H),3.37(t,J＝5.6Hz,2H),2.69(t,J＝6.0Hz,2H),2.23(t,J＝7.2Hz,2H),2.10–1.98(m,1H),1.75–1.55(m,6H),5.56(s,1H),1.38–1.20(m,2H)。
实施例4：化合物I-4的合成
使用类似的方法制备化合物I-4。产率：0.006g,8.0％；LC-MS m/z 543.27[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.35(d,J＝8.96Hz,2H),7.16(d,J＝9.0Hz,2H),6.77(s,2H),5.58(d,J＝1.64Hz,1H),4.17-4.16(m,1H),4.02-3.95(m,1H),3.63-3.57(m,2H),3.52(t,J＝6.84Hz,2H),2.39(t,J＝7.24Hz,2H),2.06-1.98(m,1H),1.74-1.58(m,6H),1.37-1.22(m,3H)。
实施例5：化合物I-5的合成
在二甲基亚砜(1.0mL)中，加入分子筛(粉末，催化剂载体，钠Y沸石，Aldrich目录号334448)，接着加入中间体A-10(1.0eq,0.060g,0.172mmol)、三乙胺(3.0eq,0.074mL,0.515mmol)和3-(2-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(5A)(1.0eq,0.053g,0.172mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，用乙腈稀释反应混合物并将其通过制备型HPLC(14-33％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物5B，为灰白色粘性固体。产率：0.018g,17.93％；LC-MS m/z 548.32[M+1]+。
将化合物5B(1.0eq,0.018g,0.032mmol)和3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯基酯(5C)(1.2eq,0.014g,0.039mmol)在二甲基亚砜(0.6mL)中的溶液在室温下搅拌5分钟。然后，加入六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.8eq,0.034g,0.092mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，用乙腈稀释反应混合物并将其通过制备型HPLC(40-60％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-5，为白色固体。产率：0.015g,48.67％；LC-MS m/z 917.37[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.97(s,1H),7.36(d,J＝9.2Hz,2H),7.08(d,J＝9.2Hz,2H),5.51(s,1H),4.59-4.55(m,2H),4.15-4.14(m,1H),3.97-3.92(m,3H),3.87-3.81(m,4H),3.70-3.57(m,14H),2.97(t,J＝6.0Hz,2H),2.66(t,J＝6.0Hz,2H),2.00(bs,1H),1.71-1.64(m,2H),1.33(bs,1H)。
实施例6：化合物I-6的合成
使用类似的方法制备化合物I-6。产率：0.0065g,11％；LC-MS m/z 1029.58[M+1]+。1H NMR(400MHz,D2O)δ7.42(d,J＝8.8Hz,2H),7.16(d,J＝9.2Hz,2H),6.86(s,2H),5.56(s,1H),4.16(d,J＝1.6Hz 1H),4.00(t,J＝9.6Hz 1H),3.87(t,J＝5.88Hz,2H),3.71-3.61(m,50H),2.69(t,J＝11.6Hz,2H),2.15-1.95(m,1H),1.75-1.61(m,2H),1.43-1.25(m,1H)。
实施例7：化合物I-7的合成
使用类似的方法制备化合物I-7。产率：11.1mg,35％；LC-MS m/z 946.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6 with D2O)δ7.80(s,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,2H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),5.32(s,1H),4.44(s,2H),3.86–3.68(m,5H),3.67–3.23(m,17H),3.05–2.91(m,2H),2.67–2.56(m,2H),2.00–1.81(m,1H),1.69–1.41(m,6H),1.30–1.07(m,1H)。
实施例8：化合物I-8的合成
将化合物8D(1.00eq,10.0mg,0.032mmol)和叠氮基-PEG4-全氟苯酚酯7B(1.20eq,17.7mg,0.039mmol)在搅拌下溶解于NMP(0.3mL)中。2分钟后，加入六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.80eq,33.6mg,0.090mmol)。给所得浅黄色溶液加盖，并将该溶液在室温下搅拌30分钟(慢慢变成更绿的颜色)。将反应混合物用NMP、乙醇和乙酸的混合物稀释，过滤，并通过制备型HPLC(15-65％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-8，为白色固体。产率：12.3mg,50％；LC-MS m/z 768.5[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.81(s,1H),4.59(s,1H),4.44(bs,2H),3.60–3.30(m,17H),3.27–2.76(m,9H),2.01–1.84(m,1H),1.77–1.58(m,1H),1.56–1.32(m,2H)。
实施例9：化合物I-9的合成
使用类似的方法制备化合物I-9。产率：18.9mg,63％；LC-MS m/z 944.6[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6 with D2O)δ7.81(s,1H),4.59(s,1H),4.44(s,2H),3.86–3.29(m,34H),3.29–2.69(m,8H),2.01–1.80(m,1H),1.80–1.57(m,1H),1.56–1.30(m,2H)。
实施例10：化合物I-10的合成
使用类似的方法制备化合物I-10。产率：17.7mg,52％；LC-MS m/z 680.5[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6 with D2O)δ7.81(s,1H),6.92(s,2H),4.59(s,1H),4.44(s,2H),3.63–3.26(m,15H),3.26–2.70(m,9H),2.36–2.21(m,2H),2.05–1.83(m,1H),1.79–1.60(m,1H),1.54–1.30(m,2H)。
实施例11：化合物I-11的合成
使用类似的方法制备化合物I-11。产率：14.9mg,54％；LC-MS m/z 636.4[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6 with D2O)δ7.75(s,1H),4.57(s,1H),4.51–4.35(m,2H),3.84–3.65(m,5H),3.60–3.45(m,2H),3.41–3.29(m,1H),3.21(t,J＝9.3Hz,1H),3.15–3.03(m,1H),3.03–2.88(m,2H),2.88–2.74(m,2H),2.02–1.82(m,1H),1.79–1.59(m,1H),1.56–1.28(m,2H)。
实施例12：化合物I-12的合成
使用类似的方法制备化合物I-12。产率：8.7mg,21％；LC-MS m/z 1410.9[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6 with D2O)δ7.81(s,2H),4.60(s,2H),4.45(s,4H),3.87–2.76(m,50H),2.03–1.83(m,2H),1.79–1.59(m,2H),1.55–1.29(m,4H)。
实施例13：化合物I-13的合成
使用类似的方法制备化合物I-13。产率：15.0mg,51％；LC-MS m/z 592.4[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6 with D2O)δ7.81(s,1H),6.95(s,2H),4.60(s,1H),4.52–4.36(m,2H),3.80–3.51(m,6H),3.42–3.29(m,3H),3.27–3.03(m,5H),2.91–2.78(m,2H),2.37–2.23(m,2H),2.01–1.85(m,1H),1.79–1.60(m,1H),1.54–1.33(m,2H)。
实施例14：化合物I-14的合成
使用类似的方法制备化合物I-14。产率：8.6mg,23％；LC-MS m/z 856.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6 with D2O)δ8.04(bs,1H),7.83(s,1H),6.97(s,2H),4.60(s,1H),4.52–4.38(m,2H),3.84–3.66(m,4H),3.52–3.28(m,29H),3.28–3.04(m,5H),2.85(t,J＝6.7Hz,2H),2.31(t,J＝7.4Hz,2H),2.03–1.86(m,1H),1.80–1.60(m,1H),1.56–1.29(m,2H)。
实施例15：化合物I-15的合成
使用类似的方法制备化合物I-15。产率：17.2mg,38％；LC-MS m/z 1032.6[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6+D2O)δ7.81(s,1H),6.91(s,2H),4.59(s,1H),4.50–4.36(m,2H),3.91–3.65(m,19H),3.62–3.27(m,30H),3.27–3.03(m,5H),2.91–2.78(m,2H),2.30(t,J＝7.4Hz,2H),1.99–1.85(m,1H),1.80–1.60(m,1H),1.55–1.33(m,2H)。
实施例16：化合物I-16的合成
向3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯基酯(16A)(1.0eq,0.200g,0.542mmol)在二甲基亚砜(4mL)中的溶液中加入3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(3,6,9,12-四氧杂十五碳-14-炔-1-基)丙酰胺(16B)(1.5eq,0.311g,0.812mmol)并搅拌5分钟，然后加入六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.8eq,0.565g,1.52mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，用乙腈稀释反应混合物并将其通过制备型HPLC(45-75％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物16C，为无色粘稠液体。产率：0.045g,10.88％；LC-MS m/z 752.33[M+1]+。
在二甲基亚砜(0.6mL)中，加入分子筛(粉末，催化剂载体，钠Y沸石，Aldrich目录号334448)，接着加入中间体A-10(1.0eq,0.019g,0.054mmol)、三乙胺(3.0eq,0.023mL,0.163mmol)和化合物16C(1.1eq,0.045g,0.059mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，用乙腈稀释反应混合物并将其通过制备型HPLC(13-23％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-16，为灰白色固体。产率：0.008g,15.82％；LC-MS m/z 917.33[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.98(s,1H),7.37(d,J＝8.8Hz,2H),7.13(d,J＝8.8Hz,2H),6.83(s,2H),5.55(s,1H),4.61(s,2H),4.56-4.54(m,2H),4.17-4.16(m,1H),4.00-3.98(m,1H),3.94(t,J＝4.8Hz,2H),3.82-3.75(m,4H),3.68-3.58(m,18H),3.53(t,J＝5.2Hz,2H),3.29(t,J＝5.6Hz,2H),2.64(t,J＝6.0Hz,2H),2.48(t,J＝6.4Hz,2H),2.15-1.90(m,1H),1.80-1.60(m,2H),1.40-1.25(m,1H)。
实施例17：化合物I-17的合成
使用1-(14-叠氮基-3,6,9,12-四氧杂十四烷基)-1H-吡咯-2,5-二酮(17A)代替化合物7B采用针对化合物I-7描述的程序合成化合物I-17。
实施例18：化合物I-18的合成
使用1-(14-叠氮基-3,6,9,12-四氧杂十四烷基)-3,4-二溴-1H-吡咯-2,5-二酮(18A)代替化合物7B采用针对化合物I-7描述的程序合成化合物I-18。
实施例19：中间体X-A、X-B和X-C的合成
使用化合物X-H作为起始材料代替甘露糖6-磷酸酯采用针对中间体A描述的程序合成中间体X-A。
使用X-H作为起始材料代替甘露糖6-磷酸酯采用针对中间体A-10描述的程序合成中间体X-B。
使用X-H作为起始材料代替甘露糖6-磷酸酯采用针对中间体8D描述的程序合成中间体X-C。
实施例20：化合物I-20的合成
使用化合物20A代替化合物1A采用针对化合物1B描述的程序合成化合物20B。
使用化合物20B和中间体X-B代替化合物1B和中间体A-10采用针对化合物1描述的程序合成化合物I-20。
实施例21：化合物I-21的合成
使用化合物21A和五氟苯酚代替化合物1A和2,3,5,6-四氟苯酚采用针对化合物1B描述的程序合成化合物21B。
使用化合物21B和中间体X-B代替化合物1B和中间体A-10采用针对化合物1描述的程序合成化合物I-21。
实施例22
使用化合物22A和五氟苯酚代替化合物1A和2,3,5,6-四氟苯酚采用针对化合物1B描述的程序合成化合物22B。
使用化合物22B和中间体X-B代替化合物1B和中间体A-10采用针对化合物1描述的程序合成化合物I-22。
实施例23：化合物I-21的合成
使用化合物23A和23B代替化合物2C和2D采用针对化合物2D和2E描述的程序合成化合物23B和23C。
使用化合物23C和中间体X-B代替化合物2E和中间体A-10采用针对化合物2描述的程序合成化合物I-23。
实施例24：化合物I-24的合成
使用化合物24A、23A和24B代替化合物2B、2C和2D采用针对化合物2D和2E描述的程序合成化合物24B和24C。
使用化合物24C和中间体X-B代替化合物2E和中间体A-10采用针对化合物2描述的程序合成化合物I-24。
实施例25：化合物I-25的合成
使用化合物25A和中间体X-B代替化合物6A和中间体A-10采用针对化合物I-6描述的程序合成化合物I-25。
实施例26：化合物I-26的合成
使用化合物26A和中间体X-A代替化合物13A、8D和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)采用针对化合物I-13描述的程序合成化合物I-26。
实施例27：化合物I-27的合成
使用化合物27A和中间体X-A代替化合物13A、8D和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)采用针对化合物I-13描述的程序合成化合物I-27。在标准Boc去保护条件下执行Boc保护基的去保护，然后加入中间体X-A。
实施例28：化合物I-28的合成
使用化合物28A和中间体X-A代替化合物13A、8D和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)采用针对化合物I-13描述的程序合成化合物I-28。在标准Boc去保护条件下执行Boc保护基的去保护，然后加入中间体X-A。
实施例29：化合物I-28的合成
使用化合物29A和中间体X-B代替化合物5A和中间体A-10采用针对化合物5B描述的程序合成化合物29B。
使用化合物29B和29C代替化合物5B和5C采用针对化合物I-5描述的程序合成化合物I-29。
实施例30：化合物I-30的合成
使用化合物30A代替化合物12A采用针对化合物12B描述的程序合成化合物30B。
使用化合物30B和中间体X-C代替化合物12B和8D采用针对化合物I-12描述的程序合成化合物I-30。
实施例31
使用化合物31A代替化合物12A采用针对化合物12B描述的程序合成化合物31B。
使用化合物31B和中间体X-C代替化合物12B和8D采用针对化合物I-12描述的程序合成化合物I-31。
实施例32：化合物I-32的合成
使用化合物32A代替化合物12A采用针对化合物12B描述的程序合成化合物32B。
使用化合物32B和中间体X-C代替化合物12B和8D采用针对化合物I-12描述的程序合成化合物I-32。
实施例33：化合物I-33的合成
在0℃和氮气下向搅拌的(2-((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-6-羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸二苄基酯(33A)(1.00eq)和三氯乙腈(10.0eq)在DCM中的溶液中加入DBU(0.1eq)。将所得混合物在0℃和氮气下搅拌，直到LC-MS指示完全转化为化合物33B。在旋转蒸发仪上除去大部分溶剂。将残留物通过硅胶色谱法纯化，得到化合物33B。将化合物33B(1.00eq)在搅拌和氮气下溶解于干燥DCM中。加入14-羟基-3,6,9,12-四氧杂十四烷酸全氟苯基酯(33C)(2.00eq)并将所得混合物在搅拌和氮气下冷却至-78℃。缓慢地加入三氟化硼乙醚合物(0.500eq)在二氯甲烷中的溶液。移除-78℃冷浴并让反应混合物在氮气下缓慢地升温至0℃，然后进行后处理。将粗物质通过硅胶色谱法纯化，得到化合物33D。将化合物33D(1eq)在搅拌下溶解于干燥乙酸乙酯中。加入钯碳(0.05eq)并将所得混合物在氢气球囊下剧烈搅拌，直到LC-MS指示完全转化为化合物I-33。将所得混合物通过硅藻土过滤，在旋转蒸发仪上浓缩并通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物I-33。
实施例33：化合物B的合成(参见上文)
实施例34：化合物I-34的合成
实施例35：化合物I-35的合成
实施例37：化合物I-37的合成
使用化合物B代替化合物8D采用针对化合物I-8描述的程序合成化合物I-37。
实施例38：化合物I-38的合成
使用类似的方法制备化合物I-38。产率：12mg,37％；LCMS m/z 930.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6 D2O)δ7.77(s,1H),7.24(d,J＝8.5Hz,2H),6.88(d,J＝8.6Hz,2H),5.23(s,1H),4.42(t,J＝5.1Hz,2H),3.89–3.25(m,20H),3.05(t,J＝6.2Hz,2H),2.95(t,J＝5.8Hz,2H),2.59(t,J＝7.5Hz,2H),2.02–1.82(m,1H),1.70–1.33(m,6H),1.30–1.05(m,1H)。
实施例39：化合物I-39的合成
使用类似的方法制备化合物I-39。产率：55mg,59％；LCMS m/z 929.6[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.76(s,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.2Hz,2H),5.28(s,1H),4.41(t,J＝5.1Hz,2H),3.86–2.87(m,22H),2.64–2.53(m,2H),2.23(t,J＝7.5Hz,2H),1.99–1.80(m,1H),1.68–1.40(m,6H),1.37–1.05(m,3H)。
实施例40：化合物I-40的合成
使用类似的方法制备化合物I-40。产率：38.9mg,66％；LCMS m/z 1765.9[M-1]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.81(s,2H),7.19(d,J＝8.5Hz,4H),6.99(d,J＝8.8Hz,4H),5.33(s,2H),4.43(t,J＝5.2Hz,4H),3.90–3.23(m,54H),2.97(t,J＝5.8Hz,2H),2.69–2.34(m,4H),2.01–1.81(m,2H),1.73–1.40(m,12H),1.34–1.10(m,2H)。
实施例41：化合物I-41的合成
使用类似的方法制备化合物I-41。产率：18.5mg,58％；LCMS m/z 1722.0[M-1]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.82(s,2H),7.26–7.09(m,4H),7.00(d,J＝8.5Hz,4H),6.90(s,2H),5.33(s,2H),4.52–4.32(m,4H),3.99–2.94(m,58H),2.69–2.57(m,4H),2.20(t,J＝6.5Hz,2H),1.99–1.81(m,2H),1.73–1.39(m,12H),1.33–1.08(m,2H)。
实施例42：化合物I-42的合成
使用类似的方法由12B和38C制备化合物I-42。产率：40.0mg,61％；LCMS m/z1734.0[M-1]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6 with D2O)δ7.77(s,2H),7.24(d,J＝8.5Hz,4H),6.88(d,J＝8.6Hz,4H),5.23(s,2H),4.42(t,J＝5.1Hz,4H),3.92–3.23(m,48H),3.05(t,J＝6.2Hz,4H),2.95(t,J＝5.8Hz,4H),2.59(t,J＝7.5Hz,4H),2.03–1.81(m,2H),1.68–1.33(m,12H),1.29–1.07(m,2H)。
实施例43：化合物I-43的合成
使用类似的方法制备化合物I-43。产率：17.0mg,67％；LCMS m/z 1690.0[M-1]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.76(s,2H),7.23(d,J＝8.7Hz,4H),6.97–6.80(m,6H),5.24(s,2H),4.48–4.33(m,4H),4.04–2.95(m,58H),2.59(t,J＝7.4Hz,4H),2.19(t,J＝6.5Hz,2H),2.01–1.81(m,2H),1.69–1.32(m,12H),1.32–1.07(m,2H)。
实施例44：化合物I-44的合成
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向0℃下的搅拌的4-氨基-4-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基)庚二酸二叔丁酯(44A)(1.00eq,1.01g,2.43mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中加入1M的在水中的碳酸钠(1.50eq,3.6mL,3.65mmol)，然后加入FMOC-Cl(1.20eq,755mg,2.92mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的溶液。移除冷浴并将所得混合物在室温下剧烈搅拌2小时。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配。将有机物经硫酸镁干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，并通过硅胶色谱法(0-30％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到化合物44B，为白色泡沫固体。产率：1.50g,97％；LCMS m/z 660.6[M+Na]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.76(d,J＝7.4Hz,2H),7.59(d,J＝7.4Hz,2H),7.40(t,J＝7.5Hz,2H),7.31(t,J＝7.4Hz,2H),5.01(s,1H),4.36(d,J＝6.2Hz,2H),4.18(t,J＝6.5Hz,1H),2.25–2.12(m,6H),1.98–1.83(m,6H),1.43(s,27H)。
向0℃下的搅拌的化合物44B(1.00eq,1.50g,2.35mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入水(0.5mL)，然后加入TFA(3mL)。让所得混合物升温至室温，然后在室温下搅拌18小时。添加更多的TFA(2mL)并在室温下继续搅拌另外26小时。在旋转蒸发仪上除去挥发物。将残留物从干燥甲苯浓缩至干两次，然后在高真空下干燥，得到化合物44C，为白色固体。产率：1.19g。LCMS 470.4m/z[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.86(d,J＝7.5Hz,2H),7.68(d,J＝7.5Hz,2H),7.39(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.9Hz,2H),4.28–4.11(m,3H),2.19–2.00(m,6H),1.87–1.66(m,6H)。
将化合物44C(1.00eq,549mg,1.17mmol)、4-二甲氨基吡啶(0.0200eq,2.9mg,0.0234mmol)、DCC(3.30eq,796mg,3.86mmol)、五氟苯酚(3.50eq,753mg,4.09mmol)和DMF(2.5mL)合并在带有搅拌棒的闪烁小瓶中，加盖并在室温下搅拌4小时。添加更多的DCC(482mg，2.34mmol)和在DMF(1mL)中的五氟苯酚(430mg，2.34mmol)，将所得混合物加盖并在室温下搅拌2小时。将反应混合物用乙醚稀释并过滤。将滤液用盐水洗涤三次，用硫酸镁干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，并通过硅胶色谱法(0-50％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到化合物44D和五氟苯酚，为淡黄色油状物。产量：1.54g。该物质未经进一步纯化即用于下一步骤。
在室温下，将4-叠氮基丁-1-胺(0.5M在mTBE中)(4.00eq,8.7mL,4.34mmol)加入到搅拌的化合物44D(1.00eq,1.50g,1.09mmol)在THF(10mL)中的溶液中。将所得澄清溶液加盖并在室温下搅拌2小时。在室温下在旋转蒸发仪上除去大部分挥发物。将残留物加载到具有DCM的硅胶负载柱上并通过硅胶色谱法(0-100％的在DCM中的乙酸乙酯)然后(0-10％的在DCM中的甲醇)纯化，得到化合物44E，为无色蜡状固体。产率：624mg,76％；LCMS m/z758.6[M+1]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.77(d,J＝7.5Hz,2H),7.60(d,J＝7.4Hz,2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.31(t,J＝7.4Hz,2H),6.08(bs,3H),5.67(bs,1H),4.37(d,J＝7.0Hz,2H),4.18(t,J＝6.7Hz,1H),3.34–3.13(m,12H),2.24–2.09(m,6H),2.04–1.85(m,6H),1.66–1.47(m,12H)。
将二乙胺(20.0eq,1.7mL,16.3mmol)加入到搅拌的化合物44E(1.00eq,619mg,0.817mmol)在甲醇(8mL)中的溶液中。将所得澄清溶液加盖并在室温下搅拌16小时。在旋转蒸发仪上除去挥发物。添加甲醇(10mL)并再次在旋转蒸发仪上除去挥发物。再次重复此操作以馏出二乙胺。将残留物吸收在甲醇中并加载到来自Phenomenex的5g Strata X-C离子交换柱上。将柱依次用乙腈、甲醇以及然后是5％的在甲醇中的氢氧化铵洗脱。合并含有期望产物的级分，将其在旋转蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥，得到90％纯度的化合物44F，为黄色油状物。产率：483mg,99％；LCMS m/z 536.8[M+1]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ6.33(t,J＝5.8Hz,3H),3.48(s,2H),3.36–3.17(m,12H),2.33–2.12(m,6H),1.74–1.51(m,18H)。
向在氮气下的搅拌的十二烷二酸(44G)(1.00eq,610mg,2.65mmol)在THF(10mL)中的溶液中依次添加：五氟苯酚(2.50eq,1.22g,6.62mmol)在THF(1mL)中的溶液、EDC·HCl(2.20eq,1.12g,5.83mmol)，以及然后是DIPEA(2.50eq,1.2mL,6.62mmol)。将所得白色混合物在室温和氮气下搅拌4小时。将反应混合物在乙酸乙酯和1N的在水中的HCl之间分配。将有机物用盐水洗涤两次，用硫酸镁干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，并通过硅胶色谱法(0-50％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到化合物44H，为白色固体。产率：1.04g,70％；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ2.66(t,J＝7.4Hz,4H),1.77(p,J＝7.2Hz,4H),1.48–1.22(m,12H)。
将化合物44F(1.00eq,66.3mg,0.111mmol)、化合物44H(3.00eq,188mg,0.334mmol)、DIPEA(5.00eq,0.097mL,0.557mmol)和1,4-二噁烷(0.2500mL)合并在带有搅拌棒的可密封容器中，密封，搅拌，并在80℃下用加热块加热30分钟。冷却至室温后，在旋转蒸发仪上于30℃除去挥发物。将残留物吸收在NMP、乙醇和乙酸的混合物中，过滤，并通过制备型HPLC(30-90％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物44I，为黄色蜡状固体。产率：27.8mg,27％；LCMS m/z 914.7[M+1]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.53(s,1H),6.46(t,J＝6.1Hz,3H),3.38–3.13(m,12H),2.66(t,J＝7.5Hz,2H),2.35–2.11(m,8H),2.09–1.94(m,6H),1.84–1.69(m,2H),1.66–1.51(m,14H),1.44–1.22(m,12H)。
将化合物40A(3.20eq,52.5mg,0.107mmol)、化合物44I(1.00eq,30.7mg,0.0336mmol)和NMP(0.6mL)合并在带有搅拌棒的1打兰小瓶中，加盖并在室温下搅拌。5分钟后，加入[(CH3CN)4Cu]PF6(7.00eq,87.6mg,0.235mmol)。给所得浅黄色溶液加盖，在室温下搅拌1小时。反应混合物慢慢变成更绿的颜色。将反应混合物用NMP和乙酸的混合物稀释，过滤，并通过制备型HPLC(20-60％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-44，为白色固体。产率：29.1mg,36％；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.84(s,3H),7.13(d,J＝8.5Hz,6H),7.00(d,J＝8.4Hz,6H),5.34(s,3H),4.27(bs,6H),3.72–2.37(m,42H),2.10–1.00(m,56H)。
实施例45：化合物I-45的合成
使用类似的方法制备化合物I-45。产率：54.1mg,58％；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.83(s,3H),7.13(d,J＝8.5Hz,6H),7.00(d,J＝8.6Hz,6H),5.34(s,3H),4.26(bs,6H),3.88–2.87(m,40H),2.64–2.53(m,6H),2.04–1.40(m,40H),1.36–1.11(m,8H)。
实施例46：化合物I-46的合成
使用类似的方法制备化合物I-46。产率：0.0035g,11.6％；LCMS m/z 965.68[M+2]++；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.87(t,J＝4.8Hz,3H),7.82-7.78(m,4H),7.20-7.17(m,1H),4.54(s,3H),4.30(t,J＝7.2Hz,3H),3.70(bs,1H),3.56-3.52(m,6H),3.39-3.25(m,25H),3.22(d,J＝6.4Hz,8H),3.02(bs,13H),2.78(t,J＝7.6Hz,3H),2.41(t,J＝8.0Hz,2H),2.27(t,J＝6.0Hz,6H),2.10-2.06(m,6H),2.05-1.98(m,3H),1.84-1.77(m,3H),1.74-1.64(m,6H),1.60-1.39(m,25H),1.35-1.28(m,3H)。
实施例47：化合物I-47的合成
使用类似的方法制备化合物I-47。产率：35.8mg,75％；LCMS m/z 814.4[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.73(s,1H),7.31–7.15(m,2H),7.04–6.85(m,2H),5.31(s,1H),4.45(t,J＝5.2Hz,2H),3.89–3.23(m,8H),3.03–2.91(m,2H),2.62–2.39(m,4H),2.00–1.81(m,1H),1.71–1.39(m,6H),1.32–1.09(m,1H)。
实施例48：化合物I-48的合成
使用类似的方法制备化合物I-48。产率：64.4mg,70％；LCMS m/z 1122.6[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.80(s,1H),7.25(d,J＝8.6Hz,2H),6.97(d,J＝8.5Hz,2H),5.32(s,1H),4.44(t,J＝5.2Hz,2H),3.85–3.20(m,36H),2.99(t,J＝5.8Hz,2H),2.67–2.37(m,4H),2.02–1.82(m,1H),1.70–1.38(m,6H),1.30–1.05(m,1H)。
实施例49：化合物I-49的合成
使用类似的方法由49B制备化合物I-49。产率：44.2mg,66％；LCMS m/z904.4[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.96(s,1H),7.27(d,J＝8.5Hz,2H),6.98(d,J＝8.7Hz,2H),5.32(s,1H),4.57–4.40(m,4H),3.89–3.22(m,18H),2.98(t,J＝5.8Hz,2H),2.59–2.35(m,2H),2.02–1.82(m,1H),1.73–1.41(m,2H),1.34–1.11(m,1H)。
实施例50：化合物I-50的合成
化合物I-50是使用类似的方法由I-38制备。产率：25.8mg,72％；LCMS m/z886.6[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.78(s,1H),7.29–7.18(m,2H),6.95–6.81(m,4H),5.24(s,1H),4.42(t,J＝5.1Hz,2H),3.97–3.25(m,22H),3.21–3.11(m,2H),3.05(t,J＝6.6Hz,2H),2.66–2.54(m,2H),2.25–2.14(m,2H),2.03–1.81(m,1H),1.69–1.34(m,6H),1.31–1.07(m,1H)。
实施例51：化合物I-51的合成
化合物I-51是根据上面的方案制备的。产率：25.4mg,70％；LCMS m/z1244.7[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.82(s,1H),7.24(d,J＝8.2Hz,2H),6.98(d,J＝8.7Hz,2H),5.32(s,1H),4.28(t,J＝6.9Hz,2H),4.22–4.07(m,3H),3.88–2.89(m,26H),2.67–2.38(m,2H),2.15–2.04(m,2H),2.04–1.83(m,3H),1.67–1.41(m,6H),1.32–1.03(m,10H)。
实施例52：化合物I-52的合成
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使用类似的方法制备化合物I-52。产率：14.4mg,70％；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.87–7.73(m,4H),7.21–7.05(m,8H),7.05–6.91(m,8H),5.34(s,4H),4.36–4.05(m,11H),3.95–2.90(m,44H),2.68–2.51(m,10H),2.18–1.37(m,42H),1.33–1.04(m,10H)。
实施例53：化合物I-53的合成
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使用化合物12B和(2-((2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(4-(辛-7-炔酰胺基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(39B/53A)代替化合物52K和合成子40A采用针对化合物I-52描述的程序合成化合物I-53。
实施例54：化合物I-54的合成
使用化合物I-45代替化合物I-38采用针对化合物I-50描述的程序合成化合物I-54。
实施例55：化合物I-55的合成
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使用化合物I-52代替化合物I-38采用针对化合物I-50描述的程序合成化合物I-55。
实施例56：化合物I-56的合成
使用化合物I-52代替化合物I-38采用针对化合物I-50描述的程序合成化合物I-56。
实施例57：化合物I-57的合成
使用化合物I-39代替化合物I-38采用针对化合物I-50描述的程序合成化合物I-57。
实施例58：化合物I-58的合成
使用化合物I-53代替化合物I-38采用针对化合物I-50描述的程序合成化合物I-58。
实施例59：化合物I-59的合成
使用类似的方法制备I-59(18mg,47％产率)。LCMS m/z 954.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.76(s,1H),7.16(d,J＝8.2Hz,2H),6.94(d,J＝8.4Hz,2H),5.27(s,1H),4.41(t,J＝4.8Hz,2H),3.84–2.81(m,25H),2.65–2.20(m,3H),1.75–1.41(m,5H)。
实施例60：化合物I-60的合成
使用类似的方法由60B制备化合物I-60(44mg,38产率)。LCMS m/z 910.6[M+H]+。
实施例61：化合物I-61的合成
使用化合物61A代替化合物60B采用针对化合物I-60描述的程序合成化合物I-61。产率：33.8mg,55％；LCMS m/z 914.5[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.74(s,1H),7.06(d,J＝7.7Hz,2H),6.89(d,J＝8.6Hz,2H),5.27(s,1H),4.40(t,J＝4.8Hz,2H),3.82–3.67(m,5H),3.61(d,J＝8.4Hz,1H),3.54–3.24(m,14H),2.93(t,J＝6.0Hz,2H),2.59–2.37(m,4H),1.95–1.79(m,1H),1.63–1.38(m,6H),1.31–1.06(m,7H)。
实施例62：化合物I-62的合成
使用化合物62A代替化合物60B采用针对化合物I-60描述的程序合成化合物I-62。
实施例63：化合物I-63的合成
使用化合物63A代替化合物60B采用针对化合物I-60描述的程序合成化合物I-63。
实施例64：化合物I-64的合成
使用类似的方法由64A制备化合物I-64。产率：0.032g,33％；LCMS m/z982.4[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),7.81(s,1H),7.56(s,1H),7.23(d,J＝8.8Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),5.20(s,1H),5.06(s,1H),4.82(s,1H),4.45(t,J＝10.0Hz,2H),3.87-3.74(m,7H),3.67(t,J＝9.6Hz,1H),3.54-3.51(m,3H),3.49-3.30(m,13H),3.01(t,J＝5.6Hz,2H),2.66-2.50(m,4H),2.07-1.95(m,1H),1.63 1.57(m,4H)。
实施例65：化合物I-65的合成
使用类似的方法由65A制备化合物I-65。HPLC(30-70％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)，得到(I-65)，为白色固体。产率：20.0mg,33％；LCMS m/z 946.4[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)7.90(s,1H),7.20-7.18(m,4H),5.63(s,1H),4.60(brs,2H),4.19(s,1H),4.03-3.93(m,5H),3.71-3.55(m,16H),3.07(brs,2H),2.92(brs,1H),2.77(s,2H),2.64-2.63(1H),2.25(brs,1H),1.88(brs,1H),1.74-1.59(m,4H)。
实施例66：化合物I-66的合成
使用类似的方法由66A制备化合物I-66。产率：0.012g,31％；LC-MS m/z954.3[M+1]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(bs,1H),7.81(s,1H),7.44(bs,1H),7.23-7.21(m,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),5.25(s,1H),4.46-4.43(m,1H),3.79-3.74(m,4H),3.62-3.57(m,1H),3.53-3.47(m,15H),3.32(bs,5H),3.23-3.19(m,1H),3.03-3.00(m,2H),2.66-2.60(m,2H),2.36-2.32(m,1H),1.71-1.56(m,6H)。
实施例67：化合物I-67的合成(参见上文)
实施例68：化合物I-68的合成(参见上文)
实施例69：化合物I-69的合成
在室温下向1,3-二甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1,1.0eq,14.0g,99.9mmol)在乙醇(150mL)中的溶液中加入25％的在甲醇中的甲醇钠(2.0eq,44.0mL,200mmol)和2-氰基硫代乙酰胺(2,1.0eq,10.0g,99.9mmol)，将所得反应混合物在90℃下搅拌8小时。完成后，浓缩溶剂，将残留物与丙酮一起研磨，滤出沉淀的固体并将其在真空下干燥，得到6-羟基-2-巯基烟腈钠(3)，为淡黄色固体。产率：13.0g,74.75％；LCMS m/z 151.2[M-1]-。
在0℃下向6-羟基-2-巯基烟腈钠(3,1.0eq,13.0g,74.6mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(130mL)中的溶液中加入碘甲烷(4.65mL,1.0eq.,74.6mmol)，将反应混合物在室温下搅拌30分钟。完成反应后，用水稀释反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在高真空下浓缩，得到粗品。将粗品通过使用20-30％的在己烷中的乙酸乙酯的快速柱色谱法纯化，得到(4)，为淡黄色固体。产率：4.0g,32.24％；LCMS m/z 167.1[M+1]+。
在室温下向1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(4a,10.3g,1.2eq.,28.9mmol)在四氢呋喃(60.0mL)中的溶液中加入2-甲基丙-2-酸钾(28.9mL,1.2eq.,28.9mmol)和6-羟基-2-(甲硫基)烟腈(4,1.0eq,4.0g,24.1mmol)，将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，用水稀释反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在高真空下浓缩，得到粗品。将粗品通过使用20-30％的在己烷中的乙酸乙酯的快速柱色谱法纯化，得到(5)，为灰白色固体。产率：5.80g,80.8％；LCMS m/z 299.3[M+1]+。
在室温下向(5,1.0eq,5.80g,19.4mmol)在四氢呋喃(40.0mL)中的溶液中加入丙-2-炔-1-基氨基甲酸叔丁酯(5a,3.32g,1.1eq.,21.4mmol)和三乙胺(8.43mL,3eq.,58.3mmol)，将反应混合物在氮气气氛下脱气。加入双(三苯基磷烷)二氯化钯(2+)(0.682g,0.05eq.,0.972mmol)和碘化亚铜(I)(0.37g,0.1eq.,1.94mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌3小时。完成后，用水稀释反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取，将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在高真空下浓缩，得到粗品。将粗品通过使用20-30％的在己烷中的乙酸乙酯的快速柱色谱法纯化，得到(6)，为淡黄色固体。产率：3.50g,59.32％；LCMS m/z 304.2[M+1]+。
在0℃下向(6,1.0eq,3.30g,10.9mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入3-氯苯-1-碳过氧酸(8.64g,3eq.,32.6mmol)，将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，用碳酸氢钠溶液稀释反应混合物并将其用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在高真空下浓缩，得到粗品。将粗品通过使用30-50％的在己烷中的乙酸乙酯的快速柱色谱法纯化，得到(7)，为淡黄色油状物。产率：2.0g,42.21％；LCMS m/z 336.4[M+1]+。
在室温下向(7,1.0eq,2.0g,5.96mmol)在乙酸乙酯(30.0mL)中的溶液中加入10％钯碳(1.0g)，将反应混合物在室温和氢气气氛下搅拌3小时。完成后，通过硅藻土垫过滤反应混合物，浓缩滤液并将其在真空下干燥，得到(3-(5-氰基-6-(甲基磺酰基)吡啶-2-基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(8)，为淡黄色粘稠液体。产率：1.00g,42.98％；LCMS m/z 336.4[M+1]+。
在0℃下向(8,1.00g,2.95mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入4M的在1,4-二噁烷中的HCl(6.00mL)。将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。完成后，浓缩溶剂并干燥得到粗品，用乙醚和正戊烷洗涤粗品并将其干燥，得到6-(3-氨基丙基)-2-甲磺酰基吡啶-3-甲腈盐酸盐(I-69)，为灰白色固体。产率：0.785g,96.62％；LC-MS m/z 240.07[M+1]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.91(bs,3H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),3.56(s,1H),3.47(s,3H),3.04(t,J＝7.2Hz,1H),2.87-2.82(m,2H),2.06-1.99(m,2H)。
实施例70：化合物I-70的合成(参见上文)
实施例71：化合物I-71的合成(参见上文)
实施例72：化合物I-72的合成
向搅拌的3-(2-羟乙基)苯酚(1,3.50g,1.0eq,25.3mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液中加入碳酸钾(7.00g,2eq,50.7mmol)并将反应混合物冷却至0℃。然后缓慢加入苄基溴(6.02mL，2eq，50.7mmol)，将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将粗产物通过使用硅胶柱并使用20％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的快速柱色谱纯化，得到2-(3-(苄氧基)苯基)乙-1-醇(2)，为无色粘性胶状物。产率：5.0g,86％；LC-MSm/z 229.20[M+1]+。
向0℃下的搅拌的(2,5.00g,21.9mmol)在二甲基亚砜(20.0mL)的溶液中加入溶解于水(10.0ml)中的氢氧化钠(1.31g,1.5eq,32.9mmol)、丙-2-烯酸叔丁酯(9.57mL,3eq,65.7mmol)和四丁基碘化铵(1.62g,0.2eq.,4.38mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。完成后，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物，将粗产物通过使用硅胶柱并使用20％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的快速色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(3)，为无色粘性胶状物。产率：7.0g,89％；LC-MS m/z 355.29[M-1]-。
向(3,7.00g,19.6mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中加入10％钯碳(0.80g)并将反应混合物在氢气气氛下搅拌3小时。完成后，将反应混合物经硅藻土垫过滤，减压浓缩滤液，得到(4)，为无色粘性胶状物。产率：4.2g,80％；LC-MS m/z 267.25[M+1]+
向(4,0.700g,2.63mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.09g,3eq,7.88mmol)和甲磺酸2-(2-叠氮基乙氧基)乙酯(4a，0.660g，1.2eq，3.15mmol)并将反应混合物在80℃加热17小时。TLC显示原料消耗。将反应混合物冷却并通过加入水淬灭并用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用硅胶柱并在作为洗脱剂的15-20％的在己烷中的乙酸乙酯中洗脱产物的快速色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到叔丁酯(5)，为无色液体。产率：0.50g,50％；LC-MS m/z 397.40[M+18]+。
向0℃下的(5,0.400g,1.05mmol)在二氯甲烷(5.00mL)中的溶液中加入4N的在1,4-二噁烷中的盐酸(5mL)并将反应混合物在室温下搅拌16小时，完成后将反应混合物浓缩以获得粗产物，将粗产物通过使用硅胶柱并使用40％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的快速色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到3-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)苯乙氧基)丙酸(72A)，为无色粘性胶状物。产率：0.183g,53％；LC-MS m/z 324.21[M+18]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),7.19-7.16(m,1H),6.80-6.75(m,3H),4.07(t,J＝4.4Hz,2H),3.78-3.75(m,2H),3.66(t,J＝4.8Hz,2H),3.61-3.54(m,4H),3.43-3.40(m,2H),2.75(t,J＝7.2Hz,2H),2.43(t,J＝6.40Hz,2H)。
向0℃下的(72A,0.200g,0.619mmol)在乙酸乙酯(2.0mL)中的溶液中加入N,N’-二异丙基碳二亚胺(0.097mL,0.619mmol)和五氟苯酚(6,0.102g,0.9eq,0.557mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物经硅藻土床过滤，滤液减压浓缩，得到粗产物。将获得的粗产物通过使用硅胶柱并在作为洗脱剂的0-10％的在己烷中的乙酸乙酯中洗脱化合物的combiflash柱色谱法纯化。减压浓缩所需级分，得到(7)，为无色粘性胶状物。产率：0.13g,43％；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.22-7.17(m,1H),6.82-6.76(m,3H),4.13-4.08(m,2H),3.87-3.79(m,4H),3.76-3.73(m,2H),3.69-362(m,2H),3.43-3.40(m,2H),2.93-2.84(m,4H)。
向(7a，0.043g，0.088mmol)在二甲基亚砜(1.0mL)中的溶液中加入在二甲基亚砜(0.5mL)中的3-(3-(2-(2-叠氮乙氧基)乙氧基)苯乙氧基)丙酸全氟苯基酯(7,0.043g,1.0eq,0.088mmol)并将反应混合物冷却至0℃。将六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(0.082g,2.5eq.,0.220mmol)添加到反应混合物中并将反应混合物在室温下搅拌15分钟。完成后，使用30-70％的在含0.1％TFA的水中的乙腈通过反相制备型HPLC纯化反应混合物。将所需级分冻干以提供(I-72)，为灰白色固体。产率：0.021g,24％；LC-MS m/z 978.36[M+1]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),7.81(s,1H),7.57(bs,1H),7.25(d,J＝8.40Hz,2H),7.15(t,J＝8.0Hz,1H),6.98(d,J＝8.80Hz,2H),6.80-6.78(m,2H),6.73(d,J＝9.20Hz,2H),5.32(s,1H),4.48(t,J＝5.20Hz,2H),4.01(t,J＝4.00Hz,2H),3.84(t,J＝5.20Hz,2H),3.80(bs,1H),3.77-3.70(m,4H),3.64-3.56(m,3H),3.44(bs,2H),3.36-3.28(m,2H),3.01(t,J＝5.60Hz,2H),2.77(t,J＝7.20Hz,2H),2.59(t,J＝6.80Hz,2H),1.96-1.92(m,1H),1.55(bs,6H),1.26-1.15(m,1H)。
实施例73-80：化合物I-73至I-80的合成(参见上文)
实施例81：化合物I-81的合成
向0℃下的搅拌的4-氨基-4-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基)庚二酸二叔丁酯(1,1.00eq,1.01g,2.43mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中加入1M的在水中的碳酸钠(1.50eq,3.6mL,3.65mmol)，然后加入在1,4-二噁烷(4mL)中的FMOC-Cl(1.20eq,755mg,2.92mmol)。移除冷浴并将所得混合物在室温下剧烈搅拌2小时。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配。将有机物经硫酸镁干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，并通过硅胶色谱法(0-30％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(2)，为白色泡沫固体。产率：1.50g,97％；LCMSm/z 660.6[M+Na]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.76(d,J＝7.4Hz,2H),7.59(d,J＝7.4Hz,2H),7.40(t,J＝7.5Hz,2H),7.31(t,J＝7.4Hz,2H),5.01(s,1H),4.36(d,J＝6.2Hz,2H),4.18(t,J＝6.5Hz,1H),2.25–2.12(m,6H),1.98–1.83(m,6H),1.43(s,27H)。
向0℃下的搅拌的(2,1.00eq,1.50g,2.35mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入水(0.5mL)，然后加入TFA(3mL)。让所得混合物升温至室温，然后在室温下搅拌18小时。添加更多的TFA(2mL)并在室温下继续搅拌另外26小时。在旋转蒸发仪上除去挥发物。将残留物从干燥甲苯浓缩至干两次，然后在高真空下干燥，得到(3)，为白色固体。产率：1.19g。LCMS470.4m/z[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.86(d,J＝7.5Hz,2H),7.68(d,J＝7.5Hz,2H),7.39(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.9Hz,2H),4.28–4.11(m,3H),2.19–2.00(m,6H),1.87–1.66(m,6H)。
将(3,1.00eq,549mg,1.17mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0.0200eq,2.9mg,0.0234mmol)、N,N’-二环己基碳二亚胺(3.30eq,796mg,3.86mmol)、五氟苯酚(3.50eq,753mg,4.09mmol)和DMF(2.5mL)在带有搅拌棒的闪烁小瓶中混合，加盖并在室温下搅拌4小时。添加更多的在DMF(1mL)中的N,N’-二环己基碳二亚胺(482mg，2.34mmol)和五氟苯酚(430mg，2.34mmol)，将所得混合物加盖并在室温下搅拌2小时。将反应混合物用乙醚稀释并过滤。将滤液用盐水洗涤三次，经硫酸镁干燥，过滤，在旋转蒸发仪上浓缩，并通过硅胶色谱法(0-50％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(4)和五氟苯酚，为淡黄色油状物。产率：1.54g。此物质未经进一步纯化即用于下一步骤。
在室温下将4-叠氮基丁-1-胺(4a，0.5M在mTBE中)(4.00eq,8.7mL,4.34mmol)加入到搅拌的(4,1.00eq,1.50g,1.09mmol)在THF(10mL)中的溶液中。将所得澄清溶液加盖并在室温下搅拌2小时。在室温下在旋转蒸发仪上除去大部分挥发物。将残留物用二氯甲烷加载到硅胶负载柱上并通过硅胶色谱法(0-100％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯)然后(0-10％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到(5)，为无色蜡状固体。产率：624mg,76％；LCMS m/z 758.6[M+1]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.77(d,J＝7.5Hz,2H),7.60(d,J＝7.4Hz,2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.31(t,J＝7.4Hz,2H),6.08(bs,3H),5.67(bs,1H),4.37(d,J＝7.0Hz,2H),4.18(t,J＝6.7Hz,1H),3.34–3.13(m,12H),2.24–2.09(m,6H),2.04–1.85(m,6H),1.66–1.47(m,12H)。
将二乙胺(20.0eq,1.7mL,16.3mmol)加入到搅拌的(5,1.00eq,619mg,0.817mmol)在甲醇(8mL)中的溶液中。将所得澄清溶液加盖并在室温下搅拌16小时。在旋转蒸发仪上除去挥发物。添加甲醇(10mL)并再次在旋转蒸发仪上除去挥发物。再次重复此操作以馏出二乙胺。将残留物吸收在甲醇中并加载到来自Phenomenex的5g Strata X-C离子交换柱上。将柱依次用乙腈、甲醇以及然后是5％的在甲醇中的氢氧化铵洗脱。合并含有期望产物的级分，在旋转蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥，得到90％纯度的(6)，为黄色油状物。产率：483mg,99％；LCMS m/z 536.8[M+1]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ6.33(t,J＝5.8Hz,3H),3.48(s,2H),3.36–3.17(m,12H),2.33–2.12(m,6H),1.74–1.51(m,18H)。
向在室温和氮气下的搅拌的12-(叔丁氧基)-12-氧代十二烷酸(7,1.00eq,975mg,3.40mmol)在DCM(7mL)中的溶液中加入DMF(5微升)，然后加入草酰氯(2M在二氯甲烷中)(1.15eq，2.0mL，3.91mmol)。将所得澄清溶液在室温和氮气下搅拌1小时。观察到剧烈的起泡。加入更多草酰氯(2M在二氯甲烷中)(1.0mL，2.0mmol)，将所得混合物在室温和氮气下搅拌30分钟，然后在旋转蒸发仪上除去挥发物。将残留物在高真空下干燥，得到黄色油状物，其不经纯化用于下一步骤。
在0℃和氮气下将4-氨基-N1,N7-双(4-叠氮基丁基)-4-(3-((4-叠氮基丁基)氨基)-3-氧代丙基)庚二酰胺(6,1.00eq,707mg,1.19mmol)和N,N-二异丙基乙胺(6.00eq,1.2mL,7.13mmol)在DCM(4mL)中的溶液添加到搅拌的12-氯-12-氧代十二烷酸叔丁酯(8,3.00eq,1.09g,3.56mmol)在DCM(4mL)中的溶液中。将所得黄色溶液加盖并在室温下搅拌30分钟。在旋转蒸发仪上除去挥发物。将残留物吸收在乙酸中，并通过反相快速色谱法(10-100％的在含0.1％甲酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其在旋转蒸发仪上以30℃浓缩，并将残留物在高真空下干燥，得到(9)，为无色油状物。产率：596mg,62％；LCMS m/z 804.8[M+1]+。
将(9,1.00eq,592mg,0.736mmol)在搅拌下溶解在DCM(4mL)中，然后冷却至0℃。加入水(2滴)，然后将TFA(2mL)沿烧瓶的一侧缓慢加入。移除冷浴并将所得澄清溶液在室温下搅拌1小时20分钟。在旋转蒸发仪上除去挥发物。将残留物吸收在乙酸中，并通过反相快速色谱法(10-100％的在含0.1％甲酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分，将其在旋转蒸发仪上浓缩，并在高真空下干燥，得到(10)，为无色油状物。产率：440mg,80％；LCMSm/z 748.7[M+1]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.13(bs,1H),6.68(bs,3H),3.37–3.16(m,12H),2.38–2.20(m,8H),2.15(t,J＝7.4Hz,2H),2.08–1.96(m,6H),1.72–1.49(m,16H),1.41–1.18(m,12H)。
向搅拌的(10,1.00eq,436mg,0.583mmol)在THF(2.5mL)中的溶液中依次加入：N,N’二环己基碳二亚胺(1.50eq,180mg,0.874mmol)、2,3,4,5,6-五氟苯酚(1.50eq，161mg，0.874mmol)在THF(1mL)中的溶液，然后是4-二甲基氨基吡啶(0.0200eq，1.4mg，0.0117mmol)。将所得混合物加盖并在室温下搅拌1.5小时。添加更多的N,N’二环己基碳二亚胺(107mg，0.52mmol)并在室温下继续搅拌另外21.5小时。将反应混合物用乙醚稀释并过滤。将滤液在旋转蒸发仪上浓缩。将残留物吸收在乙酸中，并通过反相快速色谱法(10-100％的在含0.1％甲酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到(11)，为无色蜡。产率：431mg,81％；LCMS m/z 914.7[M+1]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.18(bs,1H),6.14(bs,3H),3.38–3.14(m,12H),2.66(t,J＝7.4Hz,2H),2.30–1.92(m,14H),1.83–1.68(m,2H),1.68–1.49(m,14H),1.45–1.20(m,12H)。
在-25℃下将1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮TFA盐(11a,1.00eq,6.8mg,0.0268mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.30eq,0.0061mL,0.0348mmol)在NMP(0.3mL)中的溶液添加到搅拌的(11,1.00eq,24.5mg,0.0268mmol)在DMF(0.3mL)中的溶液中。将所得混合物加盖，搅拌，并让其经30分钟缓慢升温至室温。升温至室温后，加入(11b,3.20eq,40.5mg,0.0858mmol)。将所得溶液在室温下搅拌3分钟，然后加入六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(7.50eq,74.9mg,0.201mmol)。将所得浅黄色溶液加盖，并在室温下搅拌25分钟。慢慢变成更绿的颜色。将反应混合物用NMP和乙酸的混合物稀释，过滤，并通过制备型HPLC(10-50％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到(I-81)，为白色固体。产率：14.1mg,23％；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.77(s,3H),7.29–7.17(m,6H),6.94–6.82(m,8H),5.24(s,3H),4.24(t,J＝6.8Hz,6H),3.84–3.77(m,3H),3.65–3.54(m,3H),3.45–2.88(m,20H),2.63–2.54(m,6H),2.05–1.03(m,70H)。
实施例82：化合物I-82的合成
使用类似的方法制备化合物I-82。产率：22.8mg,40％；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.81–7.70(m,4H),7.29–7.17(m,8H),6.94–6.82(m,10H),5.24(s,4H),4.31–4.05(m,11H),3.84–3.75(m,4H),3.67–3.55(m,4H),3.54–2.94(m,35H),2.59–2.53(m,8H),2.19(t,J＝6.0Hz,2H),2.15–2.04(m,2H),2.04–1.81(m,6H),1.79–1.04(m,46H)。
实施例83：化合物I-83的合成
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使用类似的方法制备化合物I-83。产率：26.9mg,62.6％；LCMS m/z 813.4[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.78(s,1H),7.24(d,J＝7.7Hz,2H),6.90(d,J＝7.7Hz,2H),5.29–5.21(m,1H),4.50–4.38(m,2H),3.84–3.74(m,3H),3.64–3.57(m,1H),3.55–2.96(m,18H),2.60(t,J＝7.6Hz,2H),1.98–1.84(m,1H),1.63–1.37(m,5H),1.30–1.09(m,2H)。
实施例84：化合物I-84的合成
使用类似的方法制备化合物I-84(24mg,0.025mmol,77％产率)。LCMS m/z985.6[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6+D2O)δ8.43–8.36(m,1H),7.76(s,1H),7.75–7.68(m,1H),7.23(d,J＝7.0Hz,2H),6.89(d,J＝9.0Hz,2H),5.28–5.20(m,1H),4.47–4.37(m,2H),3.84–3.78(m,1H),3.78–3.69(m,2H),3.65–3.50(m,3H),3.48–3.27(m,17H),3.13–2.99(m,5H),2.87(t,J＝7.5Hz,2H),2.59(t,J＝7.4Hz,2H),2.26(t,J＝6.2Hz,2H),1.98–1.76(m,3H),1.62–1.37(m,5H),1.28–1.15(m,1H)。
实施例85：化合物I-85的合成
使用类似的方法制备化合物I-85。产率：39.8mg,55％；LCMS m/z 916.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.75(s,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,2H),5.19(s,1H),4.41(t,J＝4.8Hz,2H),3.85–3.67(m,7H),3.64–3.53(m,1H),3.54–3.37(m,12H),3.31(d,J＝6.3Hz,2H),2.93(t,J＝5.9Hz,2H),2.56(t,J＝7.3Hz,2H),1.99–1.80(m,1H),1.70–1.04(m,11H)。
实施例86：化合物I-86的合成
使用类似的方法制备化合物I-86。产率：37.4mg,65％；LCMS m/z 944.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.77(s,1H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),6.81(s,1H),6.75(d,J＝8.8Hz,1H),5.23(s,1H),4.42(t,J＝5.5Hz,2H),3.97–3.68(m,5H),3.64–3.56(m,1H),3.54–3.38(m,12H),3.35–3.27(m,2H),3.04(t,J＝6.6Hz,2H),2.98–2.89(m,2H),2.59(t,J＝7.3Hz,2H),2.09(s,3H),1.98–1.81(m,1H),1.69–1.34(m,6H),1.31–1.10(m,1H)。
实施例87：化合物I-87的合成
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使用类似的方法制备化合物I-87。产率：39.8mg,69％；LCMS m/z 944.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.77(s,1H),7.12(s,1H),7.06(d,J＝8.7Hz,1H),6.88(d,J＝8.8Hz,1H),5.22(s,1H),4.41(t,J＝5.1Hz,2H),3.97–3.68(m,5H),3.67–3.59(m,1H),3.55–3.39(m,12H),3.37–3.22(m,2H),3.02(t,J＝7.3Hz,2H),2.94(t,J＝5.9Hz,2H),2.59(t,J＝7.5Hz,2H),2.08(s,3H),1.98–1.82(m,1H),1.71–1.33(m,6H),1.30–1.09(m,1H)。
实施例88：化合物I-88的合成
使用类似的方法制备化合物I-88。产率：40.5mg,68％；LCMS 948.5m/z[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.74(s,1H),7.55(d,J＝8.3Hz,2H),7.36(s,2H),7.30(t,J＝7.6Hz,1H),7.08(d,J＝8.0Hz,3H),5.39(s,1H),4.40(s,2H),3.79–3.58(m,5H),3.53–3.23(m,15H),2.92(t,J＝5.8Hz,2H),2.68–2.56(m,4H),2.01–1.80(m,1H),1.68–1.43(m,6H),1.28–1.06(m,1H)。
实施例89：化合物I-89的合成
使用类似的方法制备化合物I-89。产率：24.2mg,57％；LCMS m/z 1062.6[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.78(s,1H),7.24(d,J＝8.5Hz,2H),6.99–6.79(m,4H),5.24(s,1H),4.42(bs,2H),3.79–3.70(m,4H),3.64–3.55(m,1H),3.56–3.36(m,31H),3.35–3.28(m,2H),3.23–3.12(m,2H),3.11–2.99(m,2H),2.67–2.55(m,2H),2.24–2.12(m,2H),2.02–1.77(m,1H),1.71–1.34(m,6H),1.32–1.04(m,1H).
实施例90：化合物I-90的合成
使用类似的方法制备化合物I-90。产率：32.3mg,58％；LCMS m/z 821.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.58(s,1H),7.83–7.71(m,2H),7.29–7.17(m,2H),5.47(s,1H),4.58(s,2H),3.89–3.80(m,2H),3.72–3.62(m,3H),3.62–3.23(m,21H),2.85(t,J＝5.9Hz,2H),2.77(s,4H),2.00–1.82(m,1H),1.70–1.40(m,2H),1.27–1.03(m,1H)。
实施例91：化合物I-91的合成
使用类似的方法制备化合物I-91。产率：43.7mg,68％；LCMS m/z 904.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.35(s,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,2H),7.09(d,J＝8.3Hz,2H),5.40(s,1H),4.51(t,J＝5.0Hz,2H),3.85–3.79(m,3H),3.72(t,J＝5.8Hz,2H),3.64(dd,J＝8.8,3.4Hz,1H),3.53–3.23(m,22H),2.94(t,J＝5.8Hz,2H),2.01–1.78(m,1H),1.71–1.38(m,2H),1.28–1.00(m,1H)。
实施例92：化合物I-92的合成
使用类似的方法制备化合物I-92。产率：42.0mg,71％；LCMS m/z 946.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.77(s,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,1H),6.53–6.45(m,1H),6.43–6.32(m,1H),5.19(s,1H),4.41(t,J＝5.0Hz,2H),3.80–3.68(m,5H),3.61–3.54(m,1H),3.53–3.38(m,12H),3.33–3.27(m,2H),3.04(t,J＝6.9Hz,2H),2.93(t,J＝5.8Hz,2H),2.59(t,J＝7.4Hz,2H),2.00–1.83(m,1H),1.74–1.34(m,6H),1.34–1.12(m,1H)。
实施例93：化合物I-93的合成
使用类似的方法制备化合物I-93。产率：43.6mg,74％；LCMS m/z 946.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.77(s,1H),7.02–6.96(m,1H),6.83(d,J＝8.7Hz,1H),6.64–6.54(m,1H),5.11(s,1H),4.41(t,J＝5.2Hz,2H),3.88–3.85(m,1H),3.79–3.60(m,5H),3.57–3.36(m,13H),3.30(t,J＝9.4Hz,1H),3.03(t,J＝6.7Hz,2H),3.03–2.88(m,2H),2.59(t,J＝7.4Hz,2H),2.02–1.81(m,1H),1.69–1.14(m,7H)。
实施例94：化合物I-94的合成
使用类似的方法制备化合物I-94。产率：36.7mg,76％；LCMS m/z 951.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.15(s,1H),7.81(s,1H),7.71(d,J＝8.9Hz,2H),7.49(d,J＝8.9Hz,1H),7.39(d,J＝2.4Hz,1H),7.19(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),5.47(s,1H),4.43(t,J＝5.0Hz,2H),3.79–3.63(m,5H),3.52–3.27(m,15H),2.91(t,J＝5.8Hz,2H),2.65(t,J＝7.6Hz,2H),2.38(t,J＝7.4Hz,2H),1.97–1.82(m,3H),1.70–1.39(m,2H),1.24–1.01(m,1H)。
实施例95：化合物I-95的合成
使用类似的方法制备化合物I-95。产率：36.3mg,74％；LCMS m/z 946.5[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.77(s,1H),7.36–7.23(m,4H),5.14(s,1H),4.42(t,J＝4.9Hz,2H),3.90–3.64(m,6H),3.55–3.37(m,13H),3.32(t,J＝9.3Hz,1H),3.06(t,J＝6.7Hz,2H),2.95(t,J＝5.5Hz,2H),2.59(t,J＝7.4Hz,2H),2.04–1.87(m,1H),1.64–1.27(m,7H)。
实施例96：化合物I-96的合成
使用类似的方法制备使用类似的方法制备I-96。产率：10.6mg,44％；LCMS m/z1722.1[M-1]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.75(s,2H),6.98(s,2H),6.88–6.79(m,4H),6.59(d,J＝8.6Hz,2H),5.11(s,2H),4.45–4.35(m,4H),3.87(bs,2H),3.76–3.60(m,12H),3.55–3.25(m,38H),3.20–3.11(m,2H),3.08–2.96(m,4H),2.63–2.54(m,4H),2.25–2.14(m,2H),1.97–1.82(m,2H),1.65–1.12(m,14H)。
实施例97：化合物I-97的合成
使用类似的方法制备化合物I-97。产率：45mg,71％；LCMS m/z 1840.2[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.84(s,2H),7.30(d,J＝9.0Hz,4H),6.95(d,J＝9.1Hz,4H),5.30(d,J＝1.9Hz,2H),4.31(t,J＝6.7Hz,4H),4.18–4.13(m,1H),3.88–3.64(m,4H),3.61–3.32(m,18H),3.30–2.93(m,14H),2.68–2.61(m,4H),2.20–2.06(m,5H),2.03–1.90(m,1H),1.84–1.17(m,32H)。
实施例98：化合物I-98的合成
使用类似的方法制备化合物I-98。产率：19mg,55％；LCMS m/z 1796.0[M+1]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.75(s,2H),7.21(d,J＝8.9Hz,4H),6.91–6.80(m,6H),5.21(d,J＝1.9Hz,2H),4.22(t,J＝6.9Hz,4H),4.11–4.04(m,1H),3.61–3.53(m,2H),3.51–3.23(m,22H),3.18–2.89(m,14H),2.60–2.51(m,4H),2.16(t,J＝6.5Hz,2H),2.09–1.83(m,6H),1.77–1.10(m,32H)。
实施例99：化合物I-99的合成
根据与本文所述相似的方法由化合物97B制备化合物I-99。化合物编号I-99为白色固体。产率：99mg；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.78(s,2H),7.25(d,J＝8.5Hz,4H),6.89(d,J＝8.5Hz,4H),5.24(s,2H),4.30–4.20(m,4H),4.16–4.07(m,1H),3.48(d,J＝20.2Hz,116H),3.34(dd,J＝16.8,6.0Hz,8H),3.20–3.15(m,2H),3.08–2.92(m,8H),2.59(t,J＝7.4Hz,4H),2.30(t,J＝6.4Hz,2H),1.96–1.12(m,38H)。
实施例100：化合物I-100的合成
根据与本文所述相似的方法由化合物I-99制备化合物I-100。为白色固体。产率：27mg；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.03(br,2H),7.84(s,2H),7.30(d,J＝8.6Hz,4H),7.00–6.92(m,6H),5.30(s,2H),4.31(t,J＝6.9Hz,4H),4.20–4.14(m,1H),3.70–3.36(m,120H),3.28–3.19(m,6H),3.17–2.98(m,10H),2.65(t,J＝7.4Hz,4H),2.36(t,J＝6.3Hz,2H),2.27(t,J＝6.5Hz,2H),2.19–2.08(m,6H),2.02–1.18(m,32H)。
实施例101：化合物I-101B的合成
在0℃和氮气气氛下向搅拌的((3S,4S,5R,6R)-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四基四乙酸酯(1,1.0eq.,4.3g,8.91mmol)在乙腈(40mL)中的溶液中依次加入烯丙基三甲基硅烷(1a,4.0eq.,5.67mL,35.7mmol)，然后是三氟化硼乙醚合物(4.0eq.,4.4mL,35.7mmol)和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(0.3eq.,0.485mL,2.67mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌12小时。之后，将反应混合物倒入冰冷的饱和碳酸氢钠水溶液中并用二氯甲烷萃取。将有机部分再次用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩并通过硅胶柱色谱法(使用10％的在二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到(2)，为淡黄色浆状物。产率：3.48g,84.0％,LCMS m/z 465.0[M+1]+。
在室温下将N-甲基吗啉N-氧化物(1.5eq.，0.397g，1.5eq，3.39mmol)，随后是四氧化锇(0.1eq，1.44mL，0.226mmol，4.0重量％在水中)添加到搅拌的(2R,3R,4R,5R,6R)-2-烯丙基-6-(2-(二乙氧基磷酰基)乙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(2,1.0eq,1.05g,2.26mmol)在丙酮-水(5:1,30.0mL)中的溶液中。2小时后，TLC显示起始材料完全消耗并产生了较低的点(基于TLC观察)。用乙酸乙酯(50mL)萃取混合物。将有机部分经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空中去除溶剂，得到粗品(3)，其直接用于下一步骤中。
向0℃下的搅拌的粗品(3,1.2g,2.41mmol)在丙酮:水(2:1,20mL)中的混合物中的溶液中加入高碘酸钠(2eq,1.03g,4.81mmol)，然后在室温下搅拌。在室温下搅拌2小时后，TLC显示起始材料已完全消耗，并且在TLC上产生了极性较小的新点。然后将乙酸乙酯加入到反应混合物中并用乙酸乙酯萃取。将有机部分经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，然后将粗产物通过使用7-10％的在二氯甲烷中的甲醇的快速柱色谱法纯化，得到(4)，为无色浆状物。产率：0.91g,81.0％。LCMS m/z 467.1[M+1]+。
向0℃下的(4,1.00eq,0.91g,1.95mmol)在甲醇(25.0mL)中的溶液中加入碳酸钾(3eq.,0.809g,5.85mmol)、(1-重氮基-2-氧丙基)膦酸二甲酯(4a,2eq.,0.75g,3.9mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。TLC显示形成极性点。然后在真空中蒸发挥发物，得到粗反应物料，将粗反应物料通过使用10-12％的在二氯甲烷中的甲醇的硅胶快速柱色谱法纯化，得到(5)，为无色浆状物。产率：0.35g,53.3％。LCMS m/z 337.0[M+1]+。
在0℃下向搅拌的(5,1.0eq,0.35g,1.04mmol)在二氯甲烷(15.0mL)中的溶液中加入吡啶(10.0eq,0.838mL,10.4mmol)和三甲基溴硅烷(10.0eq,1.37mL,10.4mmol)，并让反应混合物在室温下搅拌。16小时后，蒸发挥发物，将粗物料通过制备型HPLC(使用40-60％的在含0.1％TFA的水中的乙腈从C18柱洗脱)纯化。收集含有所需化合物的级分并将其冻干，得到(6)，为灰白色固体。产率：0.101g,34.64％；LCMS m/z 281.0[M+1]+。
向1-叠氮基-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸2,3,4,5,6-五氟苯基酯(1.1eq,0.156g,0.342mmol)在二甲基亚砜(3mL)中的溶液中加入(6,1.0eq,0.087g,0.310mmol)、六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.8eq.,0.324g,0.869mmol)并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。此后，加入乙酸(0.5mL)并用乙腈稀释反应混合物，并将其通过制备型HPLC(23-41％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到(2-((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-((1-(15-氧代-15-(全氟苯氧基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)膦酸(I-101B)。产率：0.101g,44.1％,LCMS,m/z 738.20[M+1]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6与D2O交换)δ4.44(t,J＝5.2Hz,2H),3.89-3.86(m,1H),3.77-3.73(m,4H),3.60-3.56(m,2H),3.53-3.46(m,13H),3.29-3.28(m,2H),2.97(t,J＝5.6Hz,2H),2.86(d,J＝7.2Hz,2H),1.82(bs,1H),1.57(bs,1H),1.46-1.31(m,2H)。
实施例102：化合物I-102的合成(参见上文)
实施例103：化合物I-103的合成
使用类似的方法制备化合物I-103。产率：19mg,48％。1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.36(s,1H),8.25(s,1H),7.90(d,J＝5.5Hz,1H),7.82(s,1H),7.74(s,4H),7.29(d,J＝9.0Hz,2H),6.91(d,J＝9.0Hz,2H),6.07(s,1H),5.26(d,J＝1.8Hz,1H),4.46(t,J＝5.2Hz,2H),3.95–3.75(m,2H),3.75–3.55(m,87H),3.49(d,J＝2.3Hz,1H),3.32(d,J＝6.7Hz,2H),3.08(t,J＝6.0Hz,4H),2.63(t,J＝7.4Hz,2H),2.33(dt,J＝17.6,6.9Hz,4H),1.71(p,J＝6.9Hz,2H),1.65–1.55(m,1H),1.47(d,J＝7.8Hz,2H)。LC-MS m/z 974[M+1]+。
实施例104：化合物I-104的合成
使用类似的方法制备化合物I-104。产率：9.5mg,42％产率。1H NMR(300MHz,DMSO)δ9.28(s,1H),7.84(s,1H),7.58(s,1H),7.24(d,J＝8.3Hz,2H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),5.31(s,1H),4.46(t,J＝5.2Hz,2H),3.77(q,J＝6.2,5.7Hz,6H),3.55–3.40(m,16H),3.33(q,J＝7.8,6.1Hz,2H),3.02(t,J＝5.9Hz,2H),2.62(d,J＝7.0Hz,2H),2.10(q,J＝14.4,14.0Hz,2H),1.58(s,5H)。LC-MS m/z 947[M+1]+。
实施例105.化合物I-105的合成(化合物编号567)
使用类似的方法由(2-((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(丙-2-炔-1-基)四氢-2H-吡喃-2基)乙基)膦酸(6)制备化合物I-105。产率：0.101g,44.11％,LCMS,m/z738.20[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6与D2O交换)δ4.44(t,J＝5.2Hz,2H),3.89-3.86(m,1H),3.77-3.73(m,4H),3.60-3.56(m,2H),3.53-3.46(m,13H),3.29-3.28(m,2H),2.97(t,J＝5.6Hz,2H),2.86(d,J＝7.2Hz,2H),1.82(bs,1H),1.57(bs,1H),1.46-1.31(m,2H)。
实施例106：化合物I-106的合成
使用类似的方法由I-102制备化合物I-106。产率：17.4mg,64％；LCMS m/z946.5[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.76(s,1H),7.33–7.19(m,4H),4.73(s,1H),4.40(bs,2H),3.81(bs,1H),3.78–3.65(m,4H),3.56–2.84(m,19H),2.63–2.54(m,2H),2.03–1.89(m,1H),1.81–1.29(m,7H)。
实施例107：化合物I-107的合成
使用类似的方法由I-102制备化合物I-107。产率：25.3mg,52％；LCMS m/z986.6[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.75(s,1H),4.84(s,1H),4.54(s,1H),4.41(t,J＝5.1Hz,2H),3.92–3.17(m,31H),2.95(t,J＝5.8Hz,2H),2.56(t,J＝7.6Hz,2H),2.03–1.84(m,1H),1.83–1.62(m,1H),1.62–1.36(m,6H),1.36–1.22(m,2H)。
实施例108-109：化合物I-108至I-109的合成(参见上文)
实施例110：化合物I-110的合成
使用类似的方法由110A制备化合物I-110。产率：0.018g,50.23％；LCMS m/z923.5[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.78(s,1H),7.17(d,J＝8.8Hz,2H),6.87(d,J＝8.8Hz,2H),5.12(s,1H),4.43-4.40(m,2H),3.76-3.71(m,4H),3.63-3.56(m,2H),3.49-3.37(m,15H),3.35-3.21(m,1H),3.04(t,J＝6.8Hz,2H),2.94(t,J＝6.0Hz,2H),2.59(t,J＝7.2Hz,2H),2.10-2.04(m,1H),1.58-1.55(m,2H),1.43-1.40(m,2H)。
实施例111：化合物I-111的合成
使用类似的方法由111A制备化合物I-111。产率：0.038g,47.50％；LCMS,m/z915.42[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(t,J＝5.2Hz,1H),7.81-7.79(m,3H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),5.47(s,1H),4.48(t,J＝5.2Hz,2H),3.82-3.74(m,5H),3.65-3.62(m,1H),3.55-3.46(m,12H),3.34-3.22(m,4H),3.01(t,J＝6.0Hz,2H),2.67-2.61(m,2H),2.00-1.92(m,1H),1.62-1.54(m,5H),1.20-1.05(m,1H)。
实施例112：化合物I-112的合成
使用类似的方法由112A制备化合物I-112。产率：0.025g；50.44％。LCMS:m/z923.44[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.82(d,J＝4.8Hz,1H),7.14-7.11(m,2H),7.02-6.97(m,2H),5.30(s,1H),4.40(t,J＝4.8Hz,2H),3.80-3.70(m,4H),3.69-3.49(m,2H),3.48-3.38(m,13H),3.32-3.26(m,4H),3.02-3.00(m,2H),2.93-2.90(m,1H),1.89(bs,2H),1.69-1.39(m,2H),1.25-1.10(m,1H).
实施例113：化合物I-113的合成
使用类似的方法由113A制备化合物I-113。产率：0.028g,25.89％；LCMS,m/z900.47[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6与D2O交换)δ7.97(s,1H),4.88(d,J＝2.0Hz,1H),4.49(t,J＝4.4Hz,2H),4.21(t,J＝2.8Hz,1H),3.80-3.78(m,2H),3.50-3.45(m,30H),3.11(t,J＝8.8Hz,1H),2.97(t,J＝6.0Hz,2H),2.42(t,J＝6.0Hz,2H),1.89(bs,1H),1.78-1.71(m,1H),1.67-1.61(m,1H),1.48-1.41(m,1H)。
实施例114-118：额外的化合物
改变上面所述的材料和方法由合成子M6PR结合部分和接头中间体合成以下化合物。
6.2.缀合物的制备
实施例119：基于异硫氰酸酯的配体-接头化合物与抗EGFR和抗PD-L1抗体的缀合。
该实施例提供了用于将基于异硫氰酸酯的配体-接头化合物(例如，化合物A)与抗EGFR抗体(例如，马妥珠单抗、西妥昔单抗)和抗PD-L1抗体(例如，阿替利珠单抗、抗PD-L1(29E.2A3))的赖氨酸残基上的伯胺缀合的通用方案。由此得到的缀合物列于表14中。
将抗体缓冲液更换为5mg/mL浓度的100mM碳酸氢钠缓冲液pH 9.0，之后将约30当量的基于异硫氰酸酯的配体-接头化合物(例如，化合物A；新鲜制备为DMSO中的20mM储备溶液)加入并在环境温度下在管式旋转器中以10rpm的速度温育过夜。
使用PD-10脱盐柱(GE Healthcare)纯化每个抗体平均含有八个配体-接头部分的缀合物，然后使用Amicon Ultra 15mL离心过滤器将最终缀合物配制到PBS pH 7.4中，过滤器截留分子量30kDa。
实施例120：基于全氟苯氧基的配体-接头化合物与抗EGFR和IgG抗体的缀合。
该实施例提供了用于将基于全氟苯氧基的配体-接头化合物(例如，化合物I-7)与抗EGFR抗体(例如，马妥珠单抗、西妥昔单抗)和IgG抗体(例如，IgG2a-UNLB)的赖氨酸残基上的伯胺缀合的通用方案。由此得到的缀合物列于表14中。
将抗体缓冲液更换为5mg/mL浓度的50mM磷酸钠缓冲液pH 8.0，然后加入约22当量的基于全氟苯氧基配体-接头化合物(例如，化合物I-7；新鲜制备为DMSO中的20mM储备溶液)加入并在环境温度下在管式旋转器中以10rpm的速度温育3小时。
使用PD-10脱盐柱(GE Healthcare)纯化每个抗体平均含有八个配体-接头部分的缀合物，然后使用Amicon Ultra 15mL离心过滤器将最终缀合物配制到PBS pH 7.4中，过滤器截留分子量30kDa。
实施例121：通过质谱法测定DAR值。
该实施例提供了确定如实施例119和120中所述制备的缀合物的DAR值的方法。为了确定DAR值，将10μg抗体(未缀合的或缀合的)在2μL非还原性变性缓冲液(10X，NewEngland Biolabs)中在75℃下处理10分钟。然后通过添加1.5μL Rapid-PNGase F(NewEngland Biolabs)对变性抗体溶液进行去糖基化，并在50℃下温育10分钟。将去糖基化样品在水中稀释50倍，并在与Xevo G2-SQToF质谱仪连接的Waters ACQUITY UPLC上进行分析。使用Waters MassLynx4.2软件获得解卷积质量。使用以下公式，使用与每种负载物质相对应的峰强度的加权平均值计算DAR值：
DAR∑药物负载为n的每个Ab的
药物负载分布(％))(n)/100
如实施例137和138中所述制备的缀合物的DAR值示于表14中。如实施例137和138中所述制备的缀合物之一的示例性LC-MS数据示于图1-2中。
实施例122：通过SEC方法测定缀合物的纯度。
如实施例119和120中所述制备的缀合物的纯度通过尺寸排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)使用20分钟等度法测定，其中流动相为0.2M磷酸钠、0.2M氯化钾、15w/v异丙醇，pH 6.8。以0.35mL/min的恒定流速将10μL的进样体积加载到TSKgel SuperSW3000色谱柱。基于洗脱时间对色谱仪进行积分以计算单体缀合物种类的纯度。
实施例123：抗体二硫化物还原和硫醇反应性配体-接头与抗体的缀合。
此实施例提供了用于还原本文所述抗体的二硫化物以及将经还原的抗体与本文所述的硫醇反应性配体-接头化合物(例如，含有马来酰亚胺化学反应性连结基团的硫醇反应性配体-接头化合物)缀合的示例性方案。
方案：抗体二硫化物还原
A)在PBS pH 7.4中稀释抗体至15mg/mL(0.1mM IgG)。
B)在H2O中制备新鲜的20mM(5.7mg/mL)三(2羧乙基)膦(TCEP)储备溶液。
C)将上述步骤B)中的25μL TCEP储备溶液添加到上述步骤A)中的1mL抗体中(0.5mM最终浓度TCEP)。
D)在37℃下温育2小时(使用5,5’-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)(DTNB)测试检查游离硫醇)。
E)将经还原抗体等分分装到4个管中(每管250μL)。
配体-接头与抗体的缀合
A)在DMSO(DMA、DMF或CH3CN也是可接受的)中制备硫醇反应性配体-接头化合物的10mM储备溶液。
B)将上述步骤A)中5当量的12.5μL储备溶液添加到每管经还原抗体(0.5mM终浓度配体-接头化合物储备溶液)中。
C)在室温下4℃温育过夜4小时；使用DTNB测试检查游离硫醇。
D)运行分析疏水相互作用色谱(HIC)以确定DAR和均匀性。
实施例124：奥马珠单抗缀合物的制备
使用与实施例120-122中所述的方法类似的方法制备和表征示例性抗体奥马珠单抗(一种抗IgE抗体)与一系列含全氟苯基酯的配体-接头化合物的一系列缀合物。
如实施例127中所述，在两个批次(第1组和第2组)中评估这些缀合物的细胞摄取活性。
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6.3.化合物和缀合物活性的评估
实施例125：试剂、缓冲液和培养基。
本实施例提供了本文所述方案中使用的试剂、缓冲液和培养基。
试剂：
Hela细胞(Sigma,#93021013)
西妥昔单抗(R&D systems)
马妥珠单抗(R&D systems)
Alexafluor647标记试剂盒(Invitrogen)
Amicon过滤器，30kDa截止(Sigma Millipore)
DAPI(Invitrogen)
PFA(16％多聚甲醛水溶液，Electron Microscopy Sciences)
BSA(牛血清白蛋白；Sigma Millipore)
TrypLE(Invitrogen)
Accutase(Invitrogen)
兔抗EGFR(CST)
小鼠抗β-肌动蛋白(SCB)
驴抗兔800CW(Licor)
驴抗小鼠680RD(Licor)
Odyssey Intercept封闭缓冲液(Licor)
电穿孔增强剂(IDT)
tracrRNA(IDT)
Amaxa电穿孔仪(Lonza)
SE缓冲液(Lonza)
16孔电穿孔比色皿(Lonza)
M6P(D-甘露糖-6磷酸酯二钠盐水合物；Sigma)
M6Pn(甘露糖-6膦酸酯)
PBS(磷酸盐缓冲盐水；ThermoFisher)
FACS缓冲液
在1x PBS中
2％FBS(Invitrogen)、2mM EDTA(Invitrogen)、25mM HEPES(Invitrogen)
经0.2μM无菌过滤
生长培养基
基础培养基：DMEM+L-Glut+丙酮酸钠(Invitrogen)
添加剂：10％FBS(Invitrogen),1x Anti-Anti(Invitrogen)
经0.2μM无菌过滤
实施例126：CI-M6PR CRISPR KO生成。
本实施例提供了生成M6PR敲除(KO)细胞的方案。将细胞用PBS洗涤并使用TrypLE分离。将培养基添加到烧瓶中以使胰蛋白酶失活。收集细胞并计数。然后将总共1×106个细胞以300xg离心5分钟。用PBS洗涤细胞沉淀一次并以300xg离心5分钟。将细胞沉淀重新悬浮在补充有补充剂1和电穿孔增强剂(最终为5μM)的Lonza SE缓冲液中。通过在PCR管中合并等体积的100μM crRNA和tracrRNA开始CRISPR RNP反应。使用热循环仪，将该混合物加热至95℃持续5分钟，然后缓慢冷却至室温。将退火的sgRNA产物与TrueCut Cas9结合，并使其在室温下温育15分钟。将在SE缓冲液中重悬的细胞与RNP反应混合并温育5分钟。然后将整个反应内容物置于16孔电穿孔比色皿的单个孔中。使用Lonza Amaxa细胞以代码CA-163进行脉冲。脉冲后，将细胞接种到10cm培养皿中。RNP后六天，收集一部分细胞并制备裂解物以测试蛋白质的敲除。
实施例127：Alexa Fluor标记。
根据制造商的方案，使用Alexa FluorTM647蛋白质标记试剂盒(Invitrogen)将西妥昔单抗、马妥珠单抗和人IgG同种型抗体与Alexa Fluor 647缀合。简而言之，将要标记的抗体在PBS中稀释至2mg/mL，总体积为500μL。15DOL(标记度)用于与荧光团的缀合。通过用PBS预润湿Amicon 30kDa过滤器去除游离染料。温育后，然后将缀合反应加入过滤器并高速旋转10分钟。然后将保留的溶液重新悬浮在PBS中，最终体积为1mL，并在4℃下无限期储存。
可对以上程序进行修改，以使用例如NHS-赖氨酸缀合化学用替代染料诸如AlexaFluorTM488对多种抗体或感兴趣的靶蛋白质进行荧光标记。
实施例128：通过表面染色测量EGFR/IgG水平。
本实施例提供了以下的测量方案：西妥昔单抗-(化合物A)、西妥昔单抗-(化合物I-7)、马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物I-7)缀合物的时程活性对通过表面染色测量的Hela亲代和M6PR KO细胞中的表面EGFR和IgG水平。
第-1天
将1e6 Hela亲代或M6PR KO细胞接种在6孔板中的2mL培养基中。
第0天
用1.5mL新鲜培养基替换培养基。
将PBS、未缀合抗体和m6P缀合抗体以20nM的最终浓度添加到各个孔中。
第1/2/3天
从孔中吸出培养基并用PBS洗涤三次。加入750μL无酶解离缓冲液，让细胞在冰上分离。
将细胞收集在试管中并在4℃下以300xg减速旋转5分钟。
将细胞重新悬浮在PBS中，并将体积等分到两个试管中。
所有管在4℃下以300xg旋转5分钟。一组，抽吸PBS并将沉淀冷冻在-80℃。
另一组，抽吸PBS并用冷的FACS缓冲液洗涤2次。
最后一次洗涤后，将沉淀重新悬浮在300μL FACS缓冲液中。
将300μL悬浮液分成96孔板的三个孔(每个孔100μL)。
第1组：Ctx::AF647以1:100稀释，并在黑暗中在冰上温育1小时。
第2组：Mtz::AF647以1:100稀释，并在黑暗中在冰上温育1小时。
第3组：山羊抗人IgG PE，浓度为2μg/mL，并在黑暗中在冰上温育1小时。
将细胞在4℃下以1000xg减速旋转3分钟并倾析出液体。将细胞沉淀重新悬浮在200μL冷FACS缓冲液中。总共重复3次。
在最后一次洗涤和倾析后，将细胞重新悬浮在含有DAPI的100μL冷FACS缓冲液中(最终为25ug/mL)。
然后在Biorad ZE5上分析染色的细胞。
图3示出了通过表面染色测量的西妥昔单抗-(化合物A)和西妥昔单抗-(化合物I-7)缀合物对Hela亲代和M6PR KO细胞中表面EGFR水平的时程活性。
图4示出了通过表面染色测量的马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物I-7)缀合物对Hela亲代和M6PR KO细胞中表面EGFR水平的时程活性。
这些结果表明本文所述的缀合物可以诱导膜EGFR的减少。
实施例129：流式细胞术对活细胞EGFR表面染色。
本实施例提供了用于确定马妥珠单抗-(化合物A)或马妥珠单抗-(化合物I-7)缀合物对通过使用流式细胞仪进行表面染色测量的表面EGFR水平的影响的替代方案。
将Hela亲本或M6PR(阳离子非依赖性甘露糖6-磷酸酯受体)敲除(M6PR KO)细胞接种在6孔板中，并用载体(PBS)、未缀合的抗EGFR抗体(马妥珠单抗、Mtz)或马妥珠单抗-(化合物A)或马妥珠单抗-(化合物I-7)缀合物处理指定的时间段。
温育后，吸出培养基并用PBS洗涤细胞三次，使用Accutase提起并通过在300xg下离心5分钟来沉淀。将细胞重新悬浮在冷的FACS缓冲液中，并在剩余的染色过程中保持低温。作为未染色对照，一部分细胞被排除在染色程序之外。将细胞在黑暗中在冰上用人IgG同种型-AF647或西妥昔单抗-AF647缀合物染色1小时。然后将细胞在4℃下以300xg离心5分钟，并用冷的FACS缓冲液洗涤总共三次。最后一次洗涤后，将细胞重新悬浮在100μL的FACS缓冲液中，并以5μg/mL的最终浓度添加DAPI。使用BioRad ZE5流式细胞仪分析细胞，并使用FlowJo软件分析数据。首先对细胞进行门控以去除碎片、双峰和死细胞(DAPI阴性)。基于AF647平均荧光强度(MFI)确定EGFR细胞表面水平。
在亲代Hela细胞中，用M6Pn缀合的抗体(西妥昔单抗-(化合物A)、西妥昔单抗-(化合物I-7)、马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物I-7))处理导致与用未偶联抗体(Ctx或Mtz)处理的细胞相比，EGFR的表面水平减小。细胞表面EGFR的减少依赖于M6PR，因为它们没有发生在M6PR敲除(M6PR KO)细胞中。
这些结果表明用本文所述的缀合物处理细胞可以诱导被靶向细胞表面受体的减少。
实施例130：通过蛋白质印迹测量总EGFR水平。
本实施例提供了以下的测量方案：西妥昔单抗-(化合物A)、西妥昔单抗-(化合物I-7)、马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物I-7)缀合物的时程活性对通过蛋白质印迹测量的Hela亲代和M6PR KO细胞中的总IgG水平。
一旦收集了上述实施例的所有时间点后，将所有细胞沉淀重悬于50μL放射免疫沉淀测定(RIPA)缓冲液(+蛋白酶/磷酸酶抑制剂+核酸酶)中。
将裂解物在冰上温育1小时。
然后将裂解物在4℃下高速旋转10分钟
将40μL澄清的裂解物转移到96孔板中。
使用BCA测定(1:3稀释)，计算所有裂解物浓度。
使用RIPA作为稀释剂将所有裂解物平衡至2mg/mL。
然后将等体积(15μL)的裂解液与LDS样品缓冲液(3x LDS+2.5x还原剂)混合。
将样品在98℃下温育几分钟并使其冷却。
将样品涡旋并减速旋转。
将15μL样品上样到26孔bis-tris 4-12％midi-gel上。
让凝胶在180V下运行20分钟。
使用iBlot 2(恒定20V，7分钟)将凝胶转移到硝酸纤维素膜上。
将膜在PBS中洗涤1次，然后在室温下置于Odyssey封闭缓冲液中1小时，伴随摇动。
将一抗小鼠抗β肌动蛋白(SCB)和兔抗EGFR(CST)在封闭缓冲液中按1:1000稀释，并在4℃下摇动温育过夜。
用PBS-T(吐温20 0.1％)洗涤膜三次，每次洗涤至少5分钟。
将二抗抗小鼠680rd和抗兔800cw在封闭缓冲液中按1:5000稀释，并在室温下振荡温育1小时。
用PBS-T(吐温20 0.1％)洗涤膜三次，每次洗涤至少5分钟。
使用licor odyssey扫描仪对膜进行成像。
实施例131：通过细胞内蛋白质印迹测量总EGFR水平。
本实施例提供了以下的测量方案：通过细胞内蛋白质印迹法测量的西妥昔单抗-(化合物A)、西妥昔单抗-(化合物I-7)、马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物I-7)缀合物对Hela亲代和M6PR KO细胞中总EGFR水平的剂量反应。
第-1天
将3e4 Hela亲代或M6PR KO细胞以每孔100μL接种在透明底黑壁96孔板(Costar3603)中
第0天
将培养基倒出并将100μL新鲜培养基添加回孔中。
将50μL 3x剂量反应的未缀合和m6P缀合抗体添加到各个孔中。
80nM最终起始浓度，1:2稀释。在3个孔中加入EGF，最终浓度为50ng/mL。
第2天
倒出培养基并用PBS洗涤孔三次。
孔在室温下用PBS中的4％PFA固定15分钟。
孔用PBS洗涤三次。
用0.2％triton-x100在PBS中渗透细胞15分钟。总共重复3次。
将细胞在含有0.2％triton-x100的Odyssey封闭缓冲液中在室温下封闭1小时。
将细胞在封闭缓冲液中用山羊抗EGFR(AF231,R&D，最终为1μg/mL)在4℃下染色过夜。
用PBS-T(吐温20 0.1％)洗涤细胞3次。
将细胞用驴抗山羊800CW二抗(1:200)和CellTag700(1:500)在封闭缓冲液中在黑暗中室温染色1小时。
用PBS-T(吐温20 0.1％)洗涤细胞3次。
倒出最后一次洗涤物并将板吸干在纸巾上以去除残留液体。
将板在Licor扫描仪上成像(偏移3mm)。
图5示出了通过细胞内蛋白质印迹法测量的西妥昔单抗-(化合物A)、西妥昔单抗-(化合物I-7)、马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物I-7)缀合物对Hela亲代和M6PR KO细胞中的总EGFR水平的剂量反应。
与单独的未缀合的抗体相比，M6Pn缀合的抗EGFR抗体(西妥昔单抗-(化合物A)、西妥昔单抗-(化合物I-7)、马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物I-7))显示细胞EGFR的剂量依赖性降低。EGFR的减少依赖于M6PR，因为它在亲代Hela细胞中观察到，但在缺乏M6PR(M6PR KO)的细胞中没有。
这些结果与上述实施例的结果一致，并且表明用本文所述的缀合物处理细胞可以诱导被靶向细胞表面受体的减少(例如，降解)。
实施例132：通过免疫细胞化学评估的细胞EGFR蛋白质水平的测量。
本实施例提供了一种替代方案，用于确定M6Pn缀合的抗EGFR抗体(Mtz或Ctx)对通过免疫细胞化学评估的细胞EGFR蛋白质水平的影响。
将Hela亲本或M6PR(阳离子非依赖性甘露糖6-磷酸酯受体)敲除(M6PR KO)细胞接种在6孔板中，并用载体(PBS)、未缀合的抗EGFR抗体(马妥珠单抗、Mtz)或马妥珠单抗-(化合物A)或马妥珠单抗-(化合物I-7)缀合物在37℃处理24小时。温育后，吸出培养基并用PBS洗涤细胞三次。将细胞在室温下用4％PFA固定10分钟，用PBS洗涤三次，然后在室温下用PBS中5％BSA封闭1小时。用PBS中0.2％Triton-X100渗透细胞15分钟。洗涤后，将细胞用封闭缓冲液中的山羊抗EGFR(AF321；R&D Systems)在4℃下染色过夜。洗涤后，将细胞用抗山羊800CW二抗或CellTag700染色，并在Licor扫描仪上成像。
与单独的未缀合的抗体相比，M6Pn缀合的抗EGFR抗体(西妥昔单抗-(化合物A)、西妥昔单抗-(化合物I-7)、马妥珠单抗-(化合物A)和马妥珠单抗-(化合物I-7))显示细胞EGFR的剂量依赖性降低。EGFR的减少依赖于M6PR，因为它在亲代Hela细胞中观察到，但在缺乏M6PR(M6PR KO)的细胞中没有。
这些结果与上述实施例的结果一致，并且表明用本文所述的缀合物处理细胞可以诱导被靶向细胞表面受体的减少(即，降解)。
实施例133A：人CI-M6PR结合测定
将Nunc黑色实心底MaxiSorp板在4℃下温育过夜，其涂有在50μL PBS中的1μg/mL重组人CI-M6PR蛋白质(R&D，6418-GR-050)。第二天，倾析涂层并用PBS洗涤板3次。在室温下用350μL 3％BSA-PBS封闭孔1小时。去除封闭溶液并将马妥珠单抗缀合物(马妥珠单抗-化合物I-7(d4)、马妥珠单抗-化合物I-7(d8)、马妥珠单抗-化合物I-8(d4)、马妥珠单抗-化合物I-9(d4)、马妥珠单抗I-11(d4)和马妥珠单抗-化合物I-12(d4))和它们各自的同种型对照(与所测试的配体-接头化合物缀合的人IgG(bioxcell,BP0297))在3％BSA-PBS中稀释。将50μL稀释的缀合物添加到板中，并在室温下温育2小时。温育后，将板中的溶液倒出并用350μL 0.05％PBS-吐温20洗涤三次，每次在干净的纸巾上擦干板。将在3％BSA-PBS中稀释至0.2μg/mL的50μL过氧化物酶AffiniPure小鼠抗人IgG(Jackson Immuno,209-035-088)添加到板中，并在室温下避光温育1小时。温育后，将板中的溶液倒出并用350μL 0.05％PBS-吐温20洗涤3次，每次在干净的纸巾上擦干板。按照制造商的建议制备QuantaBlu荧光过氧化物酶底物(ThermoFisher,15169)并平衡至室温。将50μL QuantaBlu溶液加入孔中并在室温下温育5-10分钟。温育后，使用分别用于激发和发射的光度计340和Umbelliferone 460滤光片组在Perkin Elmer EnVision上读取板。使用GraphPad Prism进行数据分析和非线性曲线拟合。图7A-7F示出了测试的缀合物的各种结合亲和力，化合物I-7(d8)和化合物I-11(d4)分别显示出最高和最低的结合亲和力。
图11示出了具有各种DAR平均负载的示例性化合物的多种抗体缀合物的M6PR结合测定的结果图。图11的EC50值示于表16A中。另外的M6PR结合测定的进一步结果示于表16B中。
图22示出了各种示例性西妥昔单抗(抗EGFR)缀合物的M6PR结合亲和力数据的图。基于此数据计算的EC50值示于表16C中。
表16D示出了比较具有不同价态的各种示例性缀合物的M6PR结合亲和力数据(EC50 nm)。
实施例133B：通用M6PR结合测定
使用荧光偏振测定在黑色96孔板中测量M6PR结合。合成了由连接到Cy5的参考M6Pn配体组成的荧光探针。将测试化合物悬浮于DMSO中，并以100x最终浓度进行3倍连续稀释。以100μl最终体积在20mM HEPES(pH 7.5)100mM NaCl 0.015％吐温-20 1％DMSO中利用100nM M6PR(结构域1-9,R&DSystems)和1nM探针中进行结合反应。在2小时温育时间后，在Envision读板器(Perkin Elmer)上使用λex＝620nm、λem＝688nm测量荧光偏振。按一式两份分析剂量反应并将其针对每个平板上与DMSO(高)和1μM参考化合物(低)的反应作归一化。通过在GraphPad Prism中拟合至4参数曲线来确定IC50值。
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这些结果表明与M6PR的结合受配体结构、接头价态和/或接头几何形状调节。
实施例134：不同结合亲和力的rIgG1抗体缀合物的血清药代动力学分析
在小鼠中进行了前面实施例中描述的rIgG1(抗IgG2a)抗体缀合物的药代动力学分析。具体地说，对C57B6小鼠以10μg/小鼠(每组5只小鼠)静脉内施用每种rIgG1抗体缀合物。在0.5、1、2、6和24小时收集血液，并根据制造商的说明使用ELISA试剂盒(Abcam)分析血清rIgG1。样品在3个不同的板上运行，所有3个板上都包含未缀合的rIgG1对照(UNLB-抗IgG2a rIgG1)。图8A-8C示出了与化合物I-7(dar8)和(dar4)缀合的抗IgG2a(图8A)、与化合物I-10缀合的抗IgG2a和与化合物I-11缀合的抗IgG2a(图8B)以及与化合物I-9缀合的抗IgG2a和与化合物I-12缀合的抗IgG2a(图8C)的随时间的血清水平。
如图8A-8C显示，PK分析结果表明与化合物I-7相比，对M6PR的结合亲和力较弱的配体接头诸如化合物I-9、I-10、I-11和I-12的缀合物在小鼠中表现出更长的半衰期。此结果表明，配体可根据期望的结合亲和力被选择成可用于调整本公开的缀合物的药代动力学特性。
实施例135：不同结合亲和力的缀合物随时间介导IgG2a摄取进入细胞
抗IgG2a缀合物与IgG2a-Alexa488结合如下：在室温下将等摩尔比的抗IgG2a和IgG2a-Alexa488加入组织培养基中，持续30分钟。将得到的抗IgG2a:IgG2a抗体-Alexa488组合物添加到Jurkat细胞(100k个细胞/50ul/孔，n＝2)，并通过流式细胞术在1小时和24小时测量Alexa488荧光水平(通过Alexa488测量)。由于荧光标记的靶标(IgG2a抗体)在细胞中蓄积，因此荧光提供了一种测量细胞随时间推移的细胞内总摄取量的方法。
图9示出了在1h和24h时aIgG2a缀合物化合物I-7(dar8)和(dar4)、化合物I-10、化合物I-11、化合物I-9和化合物I-12的细胞内水平。图10示出了24小时后作为占aIgG2a缀合物-化合物I-7(dar8)摄取的百分比的在10nM下测试的缀合物进入Jurkat细胞的细胞内摄取。这些数据表明，对M6PR的结合亲和力比化合物I-7弱的配体接头(例如化合物I-9、I-10、I-11和I-12)的缀合物仍然表现出足够稳健的摄取，因此可用于调整缀合物的药代动力学特性，同时仍能介导摄取。
图12示出了细胞荧光与抗体缀合物浓度的关系图，其表明示例性M6PR结合化合物的各种抗体缀合物在温育一小时后表现出稳健的进入Jurkat细胞的摄取。化合物519(I-47)(DAR10)、528(I-51)(DAR9)、522(I-49)(DAR11)、529(I-38)(DAR10)、537(I-66)(DAR9)和513(I-39)(DAR9)的缀合物都表现出强烈的细胞摄取。具有平均负载DAR9的化合物528(I-51)缀合物表现出比具有较低平均负载DAR2的化合物528(I-51)缀合物更大的摄取。
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实施例136：M6PR或ASGPR结合化合物的缀合物介导的IgG2a进入人肝癌细胞的摄取
使用类似于以上实施例中描述的方法，在Hep G2细胞中评估示例性M6PR或ASGPR结合化合物的抗体缀合物的摄取。图13示出了细胞荧光与抗体缀合物浓度的关系图，其表明示例性M6PR或ASGPR结合化合物的各种抗体缀合物在温育一小时后表现出稳健的进入HepG2细胞摄取。化合物816(ASGPR结合化合物I-124)(平均负载DAR6)、化合物817(ASGPR结合化合物I-123)(平均负载DAR4)和M6PR结合化合物520(I-7)(平均负载DAR4)的缀合物表现出相似的HepG2细胞摄取。化合物816和817根据2021年1月8日提交的国际申请第PCT/US2021/012846号中描述的方法制备。
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实施例137.CI-M6PR介导的K562 WT或KO细胞中靶蛋白质的摄取
在野生型(WT)K562细胞和CI-M6PR敲除(KO)细胞中使用与上述方法类似的方法评估化合物520(I-7)(平均负载DAR9)与示例性化合物537(I-66)(平均负载DAR9)的示例性奥马珠单抗(抗IgE)抗体缀合物的摄取。图14示出了经荧光标记的Alexa488-IgE靶标与具有不同浓度的缀合物的未经标记的对照IgE(UNLB)的细胞摄取的图。细胞摄取被证明具有CI-M6PR依赖性。
实施例138.Jurkat细胞中靶蛋白质的摄取
如下使实施例142的奥马珠单抗缀合物与IgE-Alexa488(根据实施例144制备)结合：在室温下将等摩尔比的奥马珠单抗(抗-IgE)缀合物和IgE-Alexa488加入到组织培养基中并保持30分钟。将所得的抗-IgE缀合物:IgE抗体-Alexa488组合物加入到Jurkat细胞(100k细胞/50ul/孔，n＝2)中，并在1小时时通过流式细胞术测量细胞中的Alexa488荧光水平。由于荧光标记的靶标(IgE抗体)在细胞中蓄积，因此荧光提供了一种测量细胞随时间推移的细胞内总摄取量的方法。
图15示出了Jurkat细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的奥马珠单抗(抗IgE)与表15A中示例性M6PR配体-接头的缀合物的细胞摄取活性的图。表15A的缀合物的结构详情示于下表17。该缀合物在表17中根据如图15所示的相对摄取活性进行了排序。
/>
图16示出了来自图15的选定细胞摄取活性，其说明了所选缀合物之间的比较。含脲Z3基团的M6PR配体(529(I-38))显示出与硫脲Z3类似物(520(I-7)，其中m＝4)相似的活性。三聚(n＝3,m＝4)M6PR配体(716)缀合物显示出低于m＝8的520(I-7)的摄取，尽管这些化合物由于具有不同的M6PR结合部分而不能直接比较。
图17示出了来自图15的选定细胞摄取活性，其说明了所选缀合物之间的比较。含C-糖苷的M6PR配体缀合物(化合物566(其中Z1-A为-CH2-苯基-)与化合物567(其中Z1-A为-CH2-三唑-)对比)具有相似的摄取活性，但活性低于O-糖苷类似物529(I-38)(其中Z1-A为-CH2-苯基-)。
虽然含有具有丙二酸酯/盐亲水性头部基团(558)的M6PR结合部分的缀合物在本测定中具有活性，但是与含有膦酸酯/盐亲水性头部基团的相应类似物(529(I-38))相比活性较低。
含有具有环己烷环(665)而不是甘露糖的吡喃糖环的M6PR结合部分的缀合物在本测定中表现出低活性。
含有具有磺酸酯/盐亲水性头部基团的M6PR结合部分的缀合物(556(I-104))在本测定中表现出低活性。
图18示出了Jurkat细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的奥马珠单抗(抗IgE)与表15B中示例性M6PR配体-接头的各种缀合物的细胞摄取的图。该缀合物在表18中根据如图18所示的相对摄取活性进行了排序。
图19示出来自图18的选定细胞摄取活性，其说明了所选缀合物之间的比较。
具有S-糖苷的缀合物(552,m＝6)显示出与O-糖苷(520(I-7)，m＝8)相似的活性。在本测定中，具有S-糖苷的缀合物(552)在m＝6负载时比m＝4负载时显示出更大的活性。
在本测定的整个剂量反应范围内，具有β-S-糖苷构型的缀合物(570)的活性优于具有α-S-糖苷构型的缀合物(552)，并且优于具有α-O-糖苷构型的缀合物(520(I-7),m＝8)。
具有在异头位置处连接的三唑基团的缀合物(664)在本测定中显示出最低的活性。
图20示出来自图18的选定细胞摄取活性，其说明了所选缀合物之间的比较。各自具有带有连接至接头的2,5-连接吡喃糖环的二甘露糖结构的配体660或659的缀合物显示出与520(I-7)的缀合物相似的活性。
具有经由糖环的6-位置连接至丙二酸酯/盐头部基团的接头的化合物666的缀合物在本测定中显示最低的活性。
图21示出来自图18的选定细胞摄取活性，其说明了所选缀合物之间的比较。二聚配体701(I-12)的缀合物显示出活性，但活性低于713的二聚配体缀合物。具有二聚配体(713)的缀合物在整个剂量反应范围内显示优于单体配体(520(I-7)，m＝8)的活性。
实施例139.示例性β-糖苷的靶结合缀合物与α-糖苷M6PR结合部分的靶结合缀合物相比的活性评估
图23示出了Jurkat细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的奥马珠单抗(抗-IgE)与表19中示例性M6PR配体-接头的缀合物对比未经标记的奥马珠单抗(UNLB-Oma)的缀合物的细胞摄取活性的图。该缀合物的结构详情示于下表19。该缀合物在表19中根据如图23所示的相对摄取活性进行了排序。在整个剂量反应范围内，具有β-S-糖苷M6PR结合部分的570的缀合物的活性优于含有α–O-糖苷(529)和含有α–S-糖苷(552)的M6PR结合部分的相应缀合物。α–S-糖苷(552)缀合物显示出与α–O-糖苷(529)的缀合物相似但更低的活性。
还经由SPR结合测定评估了表19的奥马珠单抗(抗-IgE)缀合物的CI-M6PR结合亲和力。在DAR为约4时，β–S-糖苷(570)的缀合物相对于相应α–O(529)和α–S-糖苷(552)具有更好的Kd。在同等的DAR(m)值下，奥马珠单抗(抗-IgE)缀合物的koff率为552>529>570。
建模研究表明，含有α–S-糖苷和含有α–O-糖苷的M6PR结合部分在1-位置采用相似的轴向构象异构体取向，而含有β–S-糖苷的M6PR结合部分可以接近两个低能量赤道构象异构体，其中2,3,4-羟基基团可保留类似的受体结合构象。
实施例140.示例性靶结合部分的降解活性的进一步评估
评估了示例性靶结合缀合物的靶降解活性。申请人之前已经证明，展现出M6PR介导的靶蛋白质的细胞更新的双官能化合物也可提供溶酶体中靶标的降解。
降解活性可使用多种涉及靶标的测定进行评估，该测定包括例如细胞摄取测定、靶蛋白质定量测定或靶活性测定。
使用EGFR HiBiT测定评估了马妥珠单抗(抗-EGFR)与示例性M6PR配体-接头(例如，β–S-糖苷(570)对比α–O(529)和α–S-糖苷(552))的缀合物的降解活性。
7.等效物和通过引用并入
虽然已经参考优选的实施方案和各种替代实施方案对本发明进行特别展示和描述，但相关领域的技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可对其做出形式和细节上的改变。
本说明书的正文中引用的所有参考文献、已发布的专利和专利申请，都通过引用以其整体并入本文用于所有目的。

Claims (131)

1.一种式(XIIa)的细胞表面M6PR结合化合物物：
或其前药、或其盐，
其中：
W是不可水解的亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z2选自O、S、NR21和C(R22)2，其中每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
每个A独立地是任选取代的芳基或杂芳基连接部分(例如，任选取代的单环或双环芳基或杂芳基)；
每个Z3独立地是连接部分；
n是1至500；
m是1至100；
L是接头；并且
Y是感兴趣的部分；
其中当A是苯基且Z2是O时，则：
(i)W是-P(O)(OH)2；或
(ii)所述接头L包含至少16个连续原子的主链并且Y是靶结合部分。
2.一种式(XIa)的细胞表面甘露糖-6-磷酸酯受体(M6PR)结合化合物：
或其前药、或其盐，
其中：
W是不可水解的亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z2选自O、S、NR21和C(R22)2，其中R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
A是任选取代的环状基团(例如，任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、或任选取代的环烷基)；
每个Z3独立地是连接部分；
n是1至500；
m是1至100；
L是接头；并且
Y是感兴趣的部分。
3.如权利要求2所述的化合物，其中Z2是S。
4.如权利要求2或3所述的化合物，其中W是膦酸酯、硫代膦酸酯、羧酸或丙二酸、或其盐。
5.如权利要求2至4中任一项所述的化合物，其中所述化合物包含下式之一的M6PR结合部分(X)：
其中Ra、Rb、Rc和Rd独立地是H或F。
6.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物包含下式之一的M6PR结合部分(X)：
其中Ra、Rb、Rc和Rd独立地是H或F。
7.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中A是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基，优先A独立地选自任选取代的苯基、任选取代的吡啶基、任选取代的联苯基、任选取代的萘、任选取代的三唑和任选取代的亚苯基-三唑。
8.如权利要求7所述的化合物，其中A选自任选取代的1,4-亚苯基、任选取代的1,3-亚苯基、任选取代的2,5-亚吡啶基和三唑。
9.如权利要求8所述的化合物，其中A选自：
其中：
R11至R14独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；并且
R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
10.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中A是任选取代的稠合双环芳基或任选取代的稠合双环杂芳基。
11.如权利要求10所述的化合物，其中A是任选取代的萘或任选取代的喹啉。
12.如权利要求11所述的化合物，其中A选自：
其中：
R11和R13至R14独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；
s是0至3；并且
每个R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
13.如权利要求12所述的化合物，其中A选自：
14.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中A是下式的任选取代的双环芳基或任选取代的双环杂芳基：
或其盐，
其中：
Cy独立地是单环芳基或单环杂芳基；
R11至R15独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；
s是0至4；并且
每个R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
15.如权利要求14所述的化合物，其中Cy是任选取代的苯基，并且A是下式的任选取代的联苯基：
16.如权利要求15所述的化合物，其中A选自：
17.如权利要求14所述的化合物，其中Cy是三唑，并且A选自：
18.如权利要求6至17中任一项所述的化合物，其中A被至少一个OH取代基取代。
19.如权利要求9和12-17中任一项所述的化合物，其中R11至R15中的至少一者是OH(例如，至少两者是OH)。
20.如权利要求9和12-17中任一项所述的化合物，其中R11至R15各自为H。
21.如权利要求1至20中任一项所述的化合物，其中：
Z3选自共价键、-O-、-NR23-、-NR23CO-、-CONR23-、-NR23CO2-、-OCONR23、-NR23C(＝X1)NR23-、-CR24＝N-、-CR24＝N-X2、-N(R23)SO2-和-SO2N(R23)-，其中：
X1和X2选自O、S和NR23；并且
R23和R24独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
22.如权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中Z3为
其中：
X1是O或S；
t是0或1；并且
每个R23独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
23.如权利要求22所述的化合物，其中Z3是-NHC(＝O)NH-。
24.如权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中-Ar-Z3-选自：
25.如权利要求1和4-24中任一项所述的化合物，其中Z2是O。
26.如权利要求1-24中任一项所述的化合物，其中Z2是S。
27.如权利要求1和4-24中任一项所述的化合物，其中Z2是-NR21-。
28.如权利要求1和4-24中任一项所述的化合物，其中Z2是-C(R22)2-，其中每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
29.如权利要求28所述的化合物，其中Z2是-CH2-或-CF2-。
30.如权利要求1和5-24中任一项所述的化合物，其中-Z2-Ar-Z3-是
其中：
X是O、S、-CH2-或-CF2；
R16是OH；并且
w是0至4(例如，w是0、1或2)。
31.如权利要求30所述的化合物，其中-Z2-Ar-Z3-是
32.一种式(XV)的细胞表面M6PR结合化合物：
或其前药、或其盐，
其中：
W是不可水解的亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z4选自-Z14-、-Z14-A-、-A-和-CH2-Z14-，
Z14选自O、S、NR21和C(R22)2，其中R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
A是任选取代的环状基团(例如，任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、任选取代的环烷基)；
n是1至500；
m是1至100；
L是接头；并且
Y是感兴趣的部分。
33.如权利要求32所述的化合物，其中Z4是-CH2-Z14-，其中Z14选自O、S、NR21和C(R22)2。
34.如权利要求32所述的化合物，其中Z4是-CH2-A-。
35.如权利要求32所述的化合物，其中Z4是-A-。
36.如权利要求34或35所述的化合物，其中A是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。
37.如权利要求36所述的化合物，其中A是三唑。
38.如权利要求35所述的化合物，其中Z4是其中“*”表示与所述接头L的连接。
39.如权利要求1至38中任一项所述的化合物，其中所述不可水解的亲水性头部基团W选自–OH、–CR2R2OH、–NR3P＝O(OH)2、–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–CR1R2-P＝O(OH)2、–SO2OH(即，–SO3H)、–S(O)OH、–COOH、–CN、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)、–CONHSO2R3、–CONHSO2NR3R4、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、-NHC(O)CO2H、–NHSO2NHR3、-NHC(O)NHS(O)2R3、–NHSO2R3、–NHSO3H、 或其盐，
其中：
R1和R2独立地是氢、SR3、卤基或CN，并且R3和R4独立地是H、C1-6烷基或取代的C1-6烷基(例如，-CF3或-CH2CF3)；
A、B和C各自独立地是CH或N；并且
D各自独立地是O或S。
40.如权利要求39所述的化合物，其中W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)、–COOH和–CH(COOH)2，或其盐。
41.如权利要求1至40中任一项所述的化合物，其中Z1是-(C(R22)2)j-，其中每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基，并且j为1至3。
42.如权利要求41所述的化合物，其中Z1是-(CH2)2-、-CH2-CF2-、-CH2-CHF-。
43.如权利要求41所述的化合物，其中Z1是-CH2-或-CF2-。
44.如权利要求1至40中任一项所述的化合物，其中Z1是-CH＝CH-。
45.如权利要求41所述的化合物，其中：
Z1是-(CH2)2-、-CH2-CF2-或-CH2-CHF-；并且
W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)和–COOH，或其盐。
46.如权利要求60所述的化合物，其中：
Z1是-CH＝CH-；并且
W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)和–COOH，或其盐。
47.如权利要求41所述的化合物，其中：
Z1是-CH2-或-CF2-；并且
W是–CH(COOH)2，或其盐。
48.如权利要求1至47中任一项所述的化合物，其中n是1至20(例如，1至10、1至6、或1至3)。
49.如权利要求48所述的化合物，其中n是1。
50.如权利要求49所述的化合物，其中L包括具有将Z3共价连接至Y的16或更多个连续原子的主链(例如，16-100或20-100个连续原子的主链)的直链接头。
51.如权利要求48所述的化合物，其中n是2。
52.如权利要求48所述的化合物，其中n是3。
53.如权利要求1至52中任一项所述的化合物，其中L具有式(II)：
其中
L1和L3独立地是接头，并且L2是支链连接部分，其中L1至L3一起提供介于X和Y之间的直链或支链接头；
a、b和c独立地是0或1；
**代表X经由Z1与L1的附接点；并且
***代表与Y的附接点；
其中：
当n是1时，a是1，并且b是0；
当n是>1时，a是1，并且b是1。
54.如权利要求53所述的化合物，其中L1至L3各自独立地包含一个或多个独立地选自以下的连接部分：–C1-20-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、–NH C1-6-亚烷基–、–NHCONH-C1-6-亚烷基–、–NHCSNH-C1-6-亚烷基–、–C1-6-亚烷基–NHCO-、–C1-6-亚烷基–CONH-、–C1-6-亚烷基–NH-、–C1-6-亚烷基–NHCONH-、–C1-6-亚烷基–NHCSNH-、-O(CH2)p–、–(OCH2CH2)p–、–NHCO–、–CONH–、–NHSO2–、–SO2NH–、–CO–、–SO2–、–O–、–S–、吡咯烷-2,5-二酮、1,2,3-三唑、–NH–和–NMe–，其中每个p独立地是1至50。
55.如权利要求53或54所述的化合物，其中L包含重复乙二醇部分(例如，-CH2CH2O-或-OCH2CH2-)。
56.如权利要求55所述的化合物，其中L包含1至25个乙二醇部分(例如，3、7或24个乙二醇部分)。
57.如权利要求53至56中任一项所述的化合物，其中L包含一个或多个1,2,3-三唑连接部分。
58.如权利要求57所述的化合物，其中L包含一个或多个选自以下结构的连接部分：
其中w1、u1和q1独立地是1至25(例如，1至12，诸如1至6)。
59.如权利要求53至58中任一项所述的化合物，其中n是1。
60.如权利要求53至58中任一项所述的化合物，其中n是2或更大。
61.如权利要求60所述的化合物，其中L2选自：
其中每个x和y独立地是1至10。
62.如权利要求53至61中任一项所述的化合物，其中L1-L2包含介于Z2或Z4和支化原子之间的14或更多个连续原子(例如，诸如14至50、或14至30个原子)的主链。
63.如权利要求53至62中任一项所述的化合物，其中L3包含10至80个连续原子(例如，诸如12至50个原子)的主链。
64.如权利要求63所述的化合物，其中L3包含选自(C10-C20-亚烷基(例如，C12-亚烷基)或–(OCH2CH2)p–的连接部分，其中p是1至25(例如，3、7或24)。
65.如权利要求53至64中任一项所述的化合物，其中式(II)的所述接头包含20至100个连续原子。
66.如权利要求65所述的化合物，其中式(II)的所述接头包含25或更多个连续原子。
67.如权利要求65所述的化合物，其中式(II)的所述接头包含30或更多个连续原子。
68.如权利要求1至67中任一项所述的化合物，其中m是1。
69.如权利要求1至67中任一项所述的化合物，其中m是至少2。
70.如权利要求69所述的化合物，其中m是2至20(例如，m是2至10)。
71.如权利要求69所述的化合物，其中：
m是20至500(例如，20至400、20至300、或20至200、或50至500、或100至500)；并且
L是α-氨基酸聚合物(例如，聚-L-赖氨酸)，其中大量-Ar-Z3-基团经由侧链基团(例如，经由缀合到赖氨酸残基的侧链氨基基团)共价连接到聚合物主链。
72.如权利要求1至71中任一项所述的化合物，其中Y选自小分子、染料、荧光团、单糖、二糖、三糖和化学选择性连结基团或其前体。
73.如权利要求1至71中任一项所述的化合物，其中Y是生物分子。
74.如权利要求73所述的化合物，其中所述生物分子选自肽、蛋白质、多核苷酸、多糖、糖蛋白质、脂质、酶、抗体和抗体片段。
75.如权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中Y是特异性地结合靶蛋白质的部分。
76.如权利要求76所述的化合物，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
77.如权利要求76所述的化合物，其中所述靶蛋白质是可溶性细胞外蛋白质。
78.如权利要求74至77中任一项所述的化合物，其中Y选自抗体、抗体片段(例如，抗体的抗原结合片段)、嵌合融合蛋白质、工程化蛋白质结构域、靶蛋白质的D-蛋白质结合剂、适体、肽和小分子抑制剂或配体。
79.一种式(XXI)的靶蛋白质降解缀合物：
或其前药、或其药学上可接受的盐，
其中：
n是1至3；
m是1至10的平均负载；
L是接头；
P是特异性地结合所述靶蛋白质的生物分子；
Z5是由所述接头L的化学选择性连结基团与P的相容基团的共价键联产生的残基连接部分；
W是不可水解的亲水性头部基团；
Z1选自任选取代的(C1-C3)亚烷基和任选取代的亚乙烯基；
Z2选自O、S、NR21和C(R22)2，其中R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基，并且每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
A是任选取代的环状基团；并且
Z3是连接部分。
80.如权利要求79所述的缀合物，其中所述缀合物具有式(XXIb)：
81.如权利要求79或80所述的缀合物，其中Z2是S。
82.如权利要求79或80所述的缀合物，其中Z2是O。
83.如权利要求79或80所述的缀合物，其中Z2是-CH2-或-CF2-。
84.如权利要求79-83中任一项所述的缀合物，其中A是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。
85.如权利要求79-84中任一项所述的缀合物，其中A独立地选自任选取代的苯基、任选取代的吡啶基、任选取代的联苯基、任选取代的萘、任选取代的三唑和任选取代的亚苯基-三唑。
86.如权利要求79-85中任一项所述的缀合物，其中A选自：
其中：
R11至R14独立地选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R25)2、-OCOR25、-COOR25、-CONHR25和-NHCOR25；并且
R25独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。
87.如权利要求84至86中任一项所述的缀合物，其中A被至少一个OH取代基取代。
88.如权利要求86所述的缀合物，其中R11至R14中的至少一者是OH(例如，至少两者是OH)。
89.如权利要求86所述的缀合物，其中R11至R15各自为H。
90.如权利要求79至89中任一项所述的缀合物，其中：
Z3选自共价键、-O-、-NR23-、-NR23CO-、-CONR23-、-NR23CO2-、-OCONR23、-NR23C(＝X1)NR23-、-CR24＝N-、-CR24＝N-X2、-N(R23)SO2-和-SO2N(R23)-，其中：
X1和X2选自O、S和NR23；并且
R23和R24独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
91.如权利要求79至90中任一项所述的缀合物，其中Z3是
其中：
X1是O或S；
t是0或1；并且
每个R23独立地选自H、C(1-3)-烷基(例如，甲基)和取代的C(1-3)-烷基。
92.如权利要求91所述的缀合物，其中Z3是-NHC(＝O)NH-。
93.如权利要求79至90中任一项所述的缀合物，其中-A-Z3-选自：
94.如权利要求79至93中任一项所述的化合物，其中所述不可水解的亲水性头部基团W选自–OH、–CR2R2OH、–NR3P＝O(OH)2、–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)、P(＝O)R1OH、-PH(＝O)OH、–CR1R2-P＝O(OH)2、–SO2OH(即，–SO3H)、–S(O)OH、–COOH、–CN、-CONH2、–CONHR3、–CONR3R4、–CONH(OH)、–CONH(OR3)、–CONHSO2R3、–CONHSO2NR3R4、–CH(COOH)2、–CR1R2COOH、–SO2R3、–SOR3R4、–SO2NH2、–SO2NHR3、–SO2NR3R4、–SO2NHCOR3、–NHCOR3、-NHC(O)CO2H、–NHSO2NHR3、-NHC(O)NHS(O)2R3、–NHSO2R3、–NHSO3H、/> 或其盐，
其中：
R1和R2独立地是氢、SR3、卤基或CN，并且R3和R4独立地是H、C1-6烷基或取代的C1-6烷基(例如，-CF3或-CH2CF3)；
A、B和C各自独立地是CH或N；并且
D各自独立地是O或S。
95.如权利要求94所述的缀合物，其中W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)、–COOH和–CH(COOH)2，或其盐。
96.如权利要求79至95中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物包含下式之一的M6PR结合部分：
其中：
W选自–P＝O(OH)2、–P＝S(OH)2、–P＝O(SH)(OH)、–P＝S(SH)(OH)和–COOH，或其盐；并且
Ra、Rb、Rc和Rd独立地是H或F。
97.如权利要求79至96中任一项所述的缀合物，其中n是1。
98.如权利要求79至96中任一项所述的缀合物，其中n是2。
99.如权利要求79至96中任一项所述的缀合物，其中n是3。
100.如权利要求79至99中任一项所述的缀合物，其中Y是特异性地结合所述靶蛋白质的抗体或抗体片段。
101.如权利要求76至99中任一项所述的缀合物，其中m是1至8(例如，1至7、或1至6)。
102.如权利要求101所述的缀合物，其中m是约8、约6、约5、约4、约3或约2。
103.如权利要求79至96中任一项所述的缀合物，其中n是1，并且m是1至10。
104.如权利要求103所述的缀合物，其中m是2至8(例如，2至6或3至5)。
105.如权利要求104所述的缀合物，其中m是约4。
106.如权利要求79至96中任一项所述的缀合物，其中n是2，并且m是1至6(例如，2至6、或3至5)。
107.如权利要求106所述的缀合物，其中m是约4。
108.如权利要求79至107中任一项所述的缀合物，其中Z5是由硫醇反应性化学选择性连结基团(例如，马来酰亚胺)与P的一个或多个半胱氨酸残基的共价键联产生的残基部分。
109.如权利要求79至107中任一项所述的缀合物，其中Z5是由胺反应性化学选择性连结基团(例如，PFP酯或TFP酯)与P的一个或多个赖氨酸残基的共价键联产生的残基部分。
110.如权利要求79至109中任一项所述的缀合物，其中L是具有将Z3共价连接至P的16或更多个连续原子的主链(例如，16-100个、或20-100个连续原子的主链)的直链接头。
111.如权利要求79至109中任一项所述的缀合物，其中L是具有介于Z2和所述接头的支化原子之间的14或更多个连续原子(例如，诸如14至50、或14至30个原子)的主链的支链接头。
112.如权利要求79至111中任一项所述的缀合物，其中所述接头L选自表4-5的结构中的任何一种结构。
113.如权利要求79至112中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物衍生自表7-9、12和13中的结构中的任何一种结构的化合物与所述生物分子P的缀合。
114.如权利要求113所述的缀合物，其中P是抗体或抗体片段。
115.如权利要求114所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段是IgG抗体。
116.如权利要求114或115所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段是人源化抗体。
117.如权利要求114-116中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合到分泌的蛋白质或可溶性蛋白质。
118.如权利要求114-116中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合到细胞表面受体。
119.一种在包含细胞表面M6PR的细胞中内化靶蛋白质的方法，所述方法包括使包含所述细胞和所述靶蛋白质的细胞样本与有效量的根据权利要求1至78中任一项所述的化合物或根据权利要求79至118中任一项所述的缀合物接触，其中所述化合物或缀合物特异性地结合所述靶蛋白质并特异性地结合所述细胞表面受体以促进所述靶蛋白质的细胞摄取。
120.如权利要求119所述的方法，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
121.如权利要求119所述的方法，其中所述靶蛋白质是细胞外蛋白质。
122.如权利要求119至121中任一项所述的方法，其中所述化合物或缀合物包含特异性地结合所述靶蛋白质的抗体或抗体片段(Ab)。
123.一种降低生物系统中靶蛋白质的水平的方法，所述方法包括使所述生物系统与有效量的根据权利要求1至78中任一项所述的化合物或根据权利要求79至118中任一项所述的缀合物接触，其中所述化合物或缀合物特异性地结合所述靶蛋白质并且特异性地结合所述生物系统中细胞的细胞表面M6PR以促进所述靶蛋白质的细胞摄取和降解。
124.如权利要求123所述的方法，其中所述生物系统是人类受试者。
125.如权利要求123所述的方法，其中所述生物系统是体外细胞样本。
126.如权利要求123至125中任一项所述的方法，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
127.如权利要求123至125中任一项所述的方法，其中所述靶蛋白质是细胞外蛋白质。
128.一种治疗与靶蛋白质相关的疾病或病症的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用有效量的根据权利要求1至78中任一项所述的化合物，或根据权利要求79至118中任一项所述的缀合物，其中所述化合物或缀合物特异性地结合所述靶蛋白质。
129.如权利要求128所述的方法，其中所述疾病或病症是炎性疾病。
130.如权利要求128所述的方法，其中所述疾病或病症是自身免疫性疾病。
131.如权利要求128所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
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