CN117886968A - 一种羧甲基壳聚糖的制备工艺及羧甲基壳聚糖凝胶 - Google Patents
一种羧甲基壳聚糖的制备工艺及羧甲基壳聚糖凝胶 Download PDFInfo
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Abstract
本申请涉及多糖类物质制备领域，具体公开了一种羧甲基壳聚糖的制备工艺及羧甲基壳聚糖凝胶；一种羧甲基壳聚糖的制备工艺包括如下步骤：壳聚糖置于聚乙二醇溶液中溶胀处理，然后经冷冻处理、恢复室温、过滤，制得预处理壳聚糖；预处理壳聚糖经碱化处理，制得碱化壳聚糖；碱化壳聚糖经羧基化反应，然后中和、醇洗、脱水离心、吸附处理、干燥、包装，制得羧甲基壳聚糖；一种羧甲基壳聚糖凝胶，制备方法包括以下步骤：称取羧甲基壳聚糖与水混合搅拌，溶解后经常压过滤、过滤除菌处理、浓缩、NaCl调节、高压灭菌、包装，制得成品。
Description
技术领域
本申请涉及多糖类物质制备领域，具体涉及一种羧甲基壳聚糖的制备工艺及羧甲基壳聚糖凝胶。
背景技术
羧甲基壳聚糖是一种水溶性壳聚糖衍生物，能够促进创面愈合、止血、抑制瘢痕、镇痛抑菌，并具有良好的生物相容性和可降解性，被广泛应用于生物医疗、制药等领域。
现有的羧甲基壳聚糖合成方法一般分为：溶胀、碱化、羧甲基化、提纯等步骤，但反应过程中容易出现盐类等副产物；当羧甲基壳聚糖应用于生物医疗领域时，副产物容易影响伤口愈合、修复，导致伤口敏感、感染等；保证羧甲基壳聚糖能够达到医用标准，是有待解决的问题。
发明内容
为使羧甲基壳聚糖能够达到医用标准，本发明提供一种羧甲基壳聚糖的制备工艺及羧甲基壳聚糖凝胶。
第一方面，本发明提供一种羧甲基壳聚糖的制备工艺，采用如下技术方案：
一种羧甲基壳聚糖的制备工艺，包括如下步骤：
S1、壳聚糖置于聚乙二醇溶液中溶胀处理，然后经冷冻处理、恢复室温、过滤，制得预处理壳聚糖；
S2、预处理壳聚糖经碱化处理，制得碱化壳聚糖；
S3、碱化壳聚糖经羧基化反应，然后中和、醇洗、脱水离心、吸附处理、干燥、包装，制得羧甲基壳聚糖。
通过上述技术方案，壳聚糖、聚乙二醇溶液、冷冻处理相配合，刺破细菌与壳聚糖之间的粘膜，随后在碱化处理和羧基化反应过程中，进一步杀灭细菌，配合吸附处理，将细菌尸体从壳聚糖表面去除，制备的羧甲基壳聚糖表面无活菌以及细菌尸体，不仅提高了纯度，而且使羧甲基壳聚糖达到医用标准。
壳聚糖表面带正电荷，而壳聚糖表面的细菌带负电荷，壳聚糖与细菌结合形成粘膜将细菌包裹在里面；利用聚乙二醇所带的负电荷，使聚乙二醇与细菌之间电荷互斥，而与壳聚糖电荷相吸，配合壳聚糖对聚乙二醇的吸附效果，便于使聚乙二醇进入壳聚糖内部并附着在壳聚糖表面没有细菌处；再配合冷冻处理，聚乙二醇的冰点高于水，聚乙二醇先逐渐结晶，随后水分逐渐结晶，冰晶的膨胀刺状结构便于刺破壳聚糖与细菌之间的粘膜，并且冰晶生长也能够促进细菌与壳聚糖分离；恢复室温后，壳聚糖表面原冰晶位置处细菌与壳聚糖没有粘膜束缚，配合聚乙二醇溶液的润滑效果，进一步促进细菌脱离壳聚糖表面。
预处理壳聚糖经过碱液的碱化处理以及酸液的羧基化反应后，残留在预处理壳聚糖表面的细菌被杀灭，经过吸附处理，使羧甲基壳聚糖表面的细菌尸体被吸附，羧甲基壳聚糖内无内毒素，能够达到医用级标准。
优选的，所述碱化处理过程中，碱化温度为25-65℃，碱化时间为5-120h，搅拌速度为100-180r/min。
通过上述技术方案，限定碱化温度和碱化时间，保证碱化反应的进行，减少副产物出现；限定搅拌速度，尽量避免壳聚糖出现悬浮状态，影响壳聚糖与碱液的均匀接触，从而影响壳聚糖的碱化。
优选的，所述羧基化反应过程中，按质量比1:3-8:4-10称取碱化壳聚糖、氯乙酸和乙醇溶液混合。
通过上述技术方案，碱化壳聚糖、氯乙酸和乙醇相配合，不仅能够进一步溶胀碱化壳聚糖，促进碱化壳聚糖与氯乙酸发生羧基化反应，而且限定原料比，能够提高羧基化反应效率，降低副反应发生，从而提高成品羧甲基壳聚糖的收率和纯度。
优选的，所述聚乙二醇溶液由质量比为1:2-8:0.2-0.7的聚乙二醇800、水和纳米纤维素组成。
通过上述技术方案，聚乙二醇800、水和纳米纤维素相配合并限定原料比，制备聚乙二醇溶液过程中，利用纳米纤维素较好的吸水效果，使纳米纤维素表面负载聚乙二醇。
在壳聚糖溶胀过程中，利用聚乙二醇800水溶后较好的流动性，便于聚乙二醇溶液被吸附在壳聚糖内部及表面，纳米纤维素利用其表面聚乙二醇的羧基负电荷，也容易附着在壳聚糖表面，随着冷冻处理，冰晶逐渐膨胀、生长，纳米纤维素附近的细菌容易被冰晶所刺入，不仅能够刺破细菌细胞壁以及细菌与壳聚糖之间的粘膜，促进细菌涨破脱离壳聚糖表面，而且在细菌与壳聚糖接触位置的冰晶能够分离细菌和壳聚糖，使细菌脱离壳聚糖表面；同时纳米纤维素的存在使得靠近纳米纤维素的细菌脱离壳聚糖表面；制得的羧甲基壳聚糖表面无活体细菌以及细菌尸体，能够达到医用级别。
优选的，所述冷冻处理具体步骤如下：-4～0℃处理1-4h，然后-10～-4℃处理4-10h。
通过上述技术方案，限定冷冻处理的温度，控制冰晶成长速度，保证液体的流动能够促使冰晶均匀分散在壳聚糖表面，促进壳聚糖表面细菌脱离。
优选的，所述吸附处理步骤为将脱水离心后的半成品与载料硅胶颗粒混合搅拌。
通过上述技术方案，载料硅胶颗粒便于吸附去除细菌尸体，使成品能够达到医用级别。
优选的，所述载料硅胶颗粒由多开孔硅胶颗粒负载乙基纤维素制得。
通过上述技术方案，醇洗后进行脱水离心，而半成品中仍含有醇，利用乙基纤维素对乙醇的吸附效果，以及乙基纤维素逐渐溶解产生粘性，便于多开孔硅胶颗粒吸附半成品表面的细菌尸体，从而使成品能够达到医用级别。
第二方面，本申请提供一种羧甲基壳聚糖凝胶，采用如下技术方案：
一种羧甲基壳聚糖凝胶，制备步骤包括：
称取羧甲基壳聚糖与水混合搅拌，溶解后经常压过滤、除菌处理、浓缩、NaCl调节、高压灭菌、包装，制得成品。
通过上述技术方案，羧甲基壳聚糖凝胶一般在手术后使用，表面无菌的羧甲基壳聚糖凝胶进入人体内部，不易产生排异反应，不易出现伤口感染问题。
优选的，所述浓缩过程中添加纳米纤维素和透明质酸钠，在70-80℃、搅拌速度为80-200r/min的条件下，蒸发浓缩。
通过上述技术方案，纳米纤维素、透明质酸钠、羧甲基壳聚糖相配合，在搅拌浓缩过程中，以纳米纤维素为支架，羧甲基壳聚糖和透明质酸钠附着粘结为网络层，形成交联网络，交联网络不仅能够提高凝胶的抗粘连效果，而且能够促进伤口愈合，并且在人体内相容度较好，不易产生排异反应；同时纳米纤维素和羧甲基壳聚糖的网络能够阻止细菌进入，羧甲基壳聚糖作为最外层与伤口表面接触，不仅便于将伤口表面细菌吸附在网络结构表面，而且配合网络结构表面羧甲基壳聚糖的杀菌效果，可进一步杀灭伤口处细菌，抑制细菌滋生，从而使凝胶具有医用安全性高、促进伤口愈合、防粘连的优点。
优选的，所述纳米纤维素由纳米纤维丝经聚乙二醇液改性制得。
通过上述技术方案，纳米纤维丝、聚乙二醇液相配合，利用纳米纤维丝的吸附效果，便于吸附聚乙二醇液，利用聚乙二醇表面羟基配合纳米纤维丝表面羟基配合羧甲基壳聚糖中羧基以及透明质酸钠中羟基，便于形成凝胶交联网络。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、壳聚糖、聚乙二醇溶液、冷冻处理相配合，刺破细菌与壳聚糖之间的粘膜，随后在碱化处理和羧基化反应过程中，进一步杀灭细菌，配合吸附处理，制备的羧甲基壳聚糖表面无活菌以及细菌尸体，不仅提高了羧甲基壳聚糖的纯度，而且使羧甲基壳聚糖达到医用标准。
2、多开孔硅胶颗粒、乙基纤维素相配合，利用乙基纤维素对醇洗后乙醇的吸附效果，以及乙基纤维素逐渐溶解产生粘性，配合多开孔硅胶颗粒的吸附效果，便于多开孔硅胶颗粒吸附半成品表面的细菌尸体，从而使成品能够达到医用级别。
3、纳米纤维素、透明质酸钠、羧甲基壳聚糖相配合，能够进一步杀灭伤口处细菌，同时抑制细菌滋生，从而使凝胶具有医用安全性高、促进伤口愈合、防粘连的优点。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
聚乙二醇溶液的制备例
以下原料中纳米纤维素购买于武汉华翔科洁生物技术有限公司，宽10nm，长0.5μm，其他原料及设备均为普通市售。
制备例1：聚乙二醇采用如下方法制备而成：
称取1kg聚乙二醇800置于5kg水中搅拌溶解，然后添加0.5kg纳米纤维素，分散均匀，制得成品聚乙二醇溶液。
制备例2：聚乙二醇采用如下方法制备而成：
称取1kg聚乙二醇800置于2kg水中搅拌溶解，然后添加0.2kg纳米纤维素，分散均匀，制得成品聚乙二醇溶液。
制备例3：聚乙二醇采用如下方法制备而成：
称取1kg聚乙二醇800置于8kg水中搅拌溶解，然后添加0.7kg纳米纤维素，分散均匀，制得成品聚乙二醇溶液。
载料硅胶颗粒的制备例
制备例4：载料硅胶颗粒采用如下方法制备而成：
称取多开孔硅胶颗粒置于乙基纤维素溶液中，在20kHz条件下浸泡分散10min，多开孔硅胶颗粒的粒径为80μm，乙基纤维素溶液为质量分数0.2%的乙基纤维素乙醇溶液，然后过滤出多开孔硅胶颗粒，经干燥，制得成品载料硅胶颗粒。
纳米纤维素的制备例
以下原料中纳米纤维素丝购买于武汉华翔科洁生物技术有限公司，其他原料及设备均为普通市售。
制备例5：纳米纤维素采用如下方法制备而成：
称取纳米纤维素丝置于聚乙二醇液中浸泡分散，纳米纤维素丝的直径为10nm，长度为0.5μm，聚乙二醇液为聚乙二醇1000置于水中搅拌溶解制得，聚乙二醇液的浓度为40%，过滤出纳米纤维素丝、经硅胶颗粒吸附处理、干燥，制得无菌的纳米纤维素成品。
实施例
实施例1：一种羧甲基壳聚糖的制备工艺：
S1、取干燥的虾壳脱去脂肪、蛋白、钙、色素等，经脱乙酰化处理，脱乙酰度为85%，得到壳聚糖，壳聚糖过40目筛；称取1kg壳聚糖置于5kg制备例1制备的聚乙二醇溶液中浸泡，在180r/min的转速下搅拌20min，溶胀处理后，-2℃冷冻处理2h，再-8℃冷冻处理8h，恢复室温，过滤后固液分离，固体为预处理壳聚糖；
S2、将预处理壳聚糖置于质量分数48%的氢氧化钠溶液中进行碱化处理，预处理壳聚糖与氢氧化钠溶液的质量比为1:10，碱化反应温度为40℃，碱化反应时间48h，碱化过程中搅拌速度为145r/min，制得碱化壳聚糖；
S3、将碱化壳聚糖与质量分数90%的乙醇溶液混合搅拌，然后份3批添加氯乙酸进行羧基化反应，碱化壳聚糖、氯乙酸和乙醇溶液的质量比为1:5:8，羧基化反应温度为40℃，搅拌速度为145r/min，总反应时间为48h；第一批氯乙酸添加量为总量的1/4，反应时间10h，第二批氯乙酸添加量为总量的1/2，反应时间24h，第三批氯乙酸添加量为总量1/4，反应时间为14h；然后采用质量分数75%的乙醇溶液洗涤至无氯离子存在，中和至pH值为7-8，经过脱水离心后制得半成品；半成品干燥至水分含量25-30%，然后经研磨过400目筛；称取1kg半成品与2kg制备例4制备的载料硅胶颗粒混合搅拌进行吸附处理，搅拌速度为110r/min，吸附时间为30min，搅拌后筛分分离半成品和载料硅胶颗粒，将吸附处理后的半成品干燥，干燥至水分含量6-8%，经过包装，制得成品羧甲基壳聚糖。
实施例2：本实施例与实施例1的不同之处在于：
S1、取干燥的雪蟹壳脱去脂肪、蛋白、钙、色素等，经脱乙酰化处理，脱乙酰度为85%，得到壳聚糖，壳聚糖过40目筛；称取1kg壳聚糖置于5kg制备例2制备的聚乙二醇溶液中浸泡，在180r/min的转速下搅拌20min，溶胀处理后，-4℃冷冻处理1h，再-10℃冷冻处理4h，恢复室温，过滤后固液分离，固体为预处理壳聚糖；
S2、将预处理壳聚糖置于质量分数20%的氢氧化钠溶液中进行碱化处理，预处理壳聚糖与氢氧化钠溶液的质量比为1:5，碱化反应温度为65℃，碱化反应时间5h，碱化过程中搅拌速度为100r/min，制得碱化壳聚糖；
S3、将碱化壳聚糖与质量分数50%的乙醇溶液混合搅拌，然后份3批添加氯乙酸进行羧基化反应，碱化壳聚糖、氯乙酸和乙醇溶液的质量比为1:3:4，羧基化反应温度为40℃，搅拌速度为145r/min，总反应时间为48h；第一批氯乙酸添加量为总量的1/4，反应时间10h，第二批氯乙酸添加量为总量的1/2，反应时间24h，第三批氯乙酸添加量为总量1/4，反应时间为14h；然后采用质量分数75%的乙醇溶液洗涤至无氯离子存在，中和至pH值为7-8，经过脱水离心后制得半成品；称取1kg半成品与2kg制备例4制备的载料硅胶颗粒混合搅拌进行吸附处理，搅拌速度为110r/min，吸附时间为30min，搅拌后过滤分离半成品和载料硅胶颗粒，将吸附处理后的半成品干燥，干燥至水分含量6-8%，经过包装，制得成品羧甲基壳聚糖。
实施例3：本实施例与实施例1的不同之处在于：
S1、称取1kg壳聚糖置于5kg制备例3制备的聚乙二醇溶液中浸泡，在180r/min的转速下搅拌20min，溶胀处理后， 0℃冷冻处理4h，再-4℃冷冻处理10h，恢复室温，过滤后固液分离，固体为预处理壳聚糖；
S2、将预处理壳聚糖置于质量分数60%的氢氧化钠溶液中进行碱化处理，预处理壳聚糖与氢氧化钠溶液的质量比为1:20，碱化反应温度为25℃，碱化反应时间120h，碱化过程中搅拌速度为180r/min，制得碱化壳聚糖；
S3、将碱化壳聚糖与质量分数99%的乙醇溶液混合搅拌，然后份3批添加氯乙酸进行羧基化反应，碱化壳聚糖、氯乙酸和乙醇溶液的质量比为1:8:10，羧基化反应温度为40℃，搅拌速度为145r/min，总反应时间为48h；第一批氯乙酸添加量为总量的1/4，反应时间10h，第二批氯乙酸添加量为总量的1/2，反应时间24h，第三批氯乙酸添加量为总量1/4，反应时间为14h；然后采用质量分数75%的乙醇溶液洗涤至无氯离子存在，中和至pH值为7-8，经过脱水离心后制得半成品；称取1kg半成品与2kg制备例4制备的载料硅胶颗粒混合搅拌进行吸附处理，搅拌速度为110r/min，吸附时间为30min，搅拌后过滤分离半成品和载料硅胶颗粒，将吸附处理后的半成品干燥，干燥至水分含量6-8%，经过包装，制得成品羧甲基壳聚糖。
实施例4：本实施例与实施例1的不同之处在于：
S1中聚乙二醇溶液原料中未添加纳米纤维素。
实施例5：本实施例与实施例1的不同之处在于：
S3吸附处理过程中，以同等质量的多开孔硅胶颗粒替换载料硅胶颗粒。
实施例6：本实施例与实施例1的不同之处在于：
S3吸附处理过程中，以同等质量的海藻酸钠溶液替换乙基纤维素溶液，海藻酸钠溶液为质量分数1%的海藻酸钠水溶液。
对比例
对比例1：本对比例与实施例1的不同之处在于：
S1、取干燥的虾壳脱去脂肪、蛋白、钙、色素等，得到壳聚糖，壳聚糖过40目筛；
S2、将壳聚糖置于质量分数48%的氢氧化钠溶液中进行碱化处理。
对比例2：本对比例与实施例1的不同之处在于：
S1中未经过冷冻处理。
对比例3：本对比例与实施例1的不同之处在于：
S1中未经过聚乙二醇溶液进行溶胀处理。
对比例4：本对比例与实施例1的不同之处在于：
S3中无吸附处理操作。
应用例
应用例1：一种羧甲基壳聚糖凝胶：
称取1kg实施例1制备的羧甲基壳聚糖与99kg水混合搅拌，水温为65℃，溶解后经常压过滤，然后经过0.22μm的微孔过滤器过滤除菌处理，过滤后的料液在-0.1MPa真空度、80℃条件下蒸馏水分进行浓缩处理，浓缩处理后采用质量分数0.8%的NaCl溶液调节，以维持人体渗透压平衡，最后在121℃条件下高压灭菌20min，在百级无菌环境下分装到注射器中，然后装入PE包装袋内封口，转入万级铝箔袋中密封，制得成品。
应用例2：本应用例与应用例1的不同之处在于：
称取1kg实施例1制备的羧甲基壳聚糖与99kg水混合搅拌，水温为65℃，溶解后经常压过滤，然后经过0.22μm的微孔过滤器过滤除菌处理，过滤后的料液添加1kg制备例5制备的纳米纤维素和2kg透明质酸钠混合搅拌均匀，在-0.1MPa真空度、温度80℃、搅拌速度145r/min的条件下蒸馏水分进行浓缩处理，浓缩处理后采用质量分数0.8%的NaCl溶液调节，以维持人体渗透压平衡，最后在121℃条件下高压灭菌20min，在百级无菌环境下分装到注射器中，然后装入PE包装袋内封口，转入万级铝箔袋中密封，制得成品。
应用例3：本应用例与应用例2的不同之处在于：
羧甲基壳聚糖为实施例2制备的羧甲基壳聚糖；
料液添加1kg制备例5制备的纳米纤维素和2kg透明质酸钠混合搅拌均匀，在-0.1MPa真空度、温度70℃、搅拌速度85r/min的条件下蒸馏水分进行浓缩处理。
应用例4：本应用例与应用例2的不同之处在于：
羧甲基壳聚糖为实施例3制备的羧甲基壳聚糖；
料液添加1kg制备例5制备的纳米纤维素和2kg透明质酸钠混合搅拌均匀，在-0.1MPa真空度、温度80℃、搅拌速度200r/min的条件下蒸馏水分进行浓缩处理。
应用例5：本应用例与应用例2的不同之处在于：
浓缩处理过程中纳米纤维素表面未经聚乙二醇液处理，即为普通的市售纳米纤维素丝。
性能检测试验
1、细菌内毒素检测
分别采用实施例1-6及对比例1-4的制备方法制备成品羧甲基壳聚糖；参考2020年版药典四部通则1143细菌内毒素检查法和GB/T14233.2-2005，检测羧甲基壳聚糖的细菌内毒素，记录数据。
分别采用应用例1-5的制备方法制备成品羧甲基壳聚糖凝胶，同样检测凝胶的细菌内毒素，记录数据。
2、微生物检测
分别采用实施例1-6及对比例1-4的制备方法制备成品羧甲基壳聚糖，参考YY0953-2015医用羧甲基壳聚糖中的检测方法，检测实施例1-6以及对比例1-4制备的成品中蛋白质含量、羧甲基壳聚糖含量，记录数据。
表1羧甲基壳聚糖性能检测表
结合实施例1-3并结合表1可以看出，羧甲基壳聚糖细菌内毒素较少，并且蛋白质含量较低，说明羧甲基壳聚糖纯度较高，能够达到医用标准。
结合实施例1和实施例4-6并结合表1可以看出，实施例4羧甲基壳聚糖制备过程中，S1中聚乙二醇溶液原料未添加纳米纤维素，相比于实施例1，实施例4制备的羧甲基壳聚糖细菌内毒素含量大于实施例1；说明聚乙二醇、纳米纤维素相配合，能够促进溶胀，并且便于细菌纤维素附着在壳聚糖表面菌体附近，配合冷冻处理，便于破坏壳聚糖与细菌之间的粘膜，从而便于吸附处理过程中去除细菌尸体，使成品羧甲基壳聚糖能够达到医用标准。
实施例5羧甲基壳聚糖制备过程中，S3吸附处理过程中，以同等质量的多开孔硅胶颗粒替换载料硅胶颗粒，相比于实施例1，实施例5制备的羧甲基壳聚糖细菌内毒素含量大于实施例1；说明多开孔硅胶颗粒负载乙基纤维素，利用乙基纤维素对乙醇的吸引效果，配合多开孔硅胶颗粒自身对细菌的吸附效果，能够提高载料硅胶颗粒对细菌尸体的吸附，从而使羧甲基壳聚糖达到医用级。
实施例6羧甲基壳聚糖制备过程中，S3吸附处理过程中，以同等质量的海藻酸钠溶液替换乙基纤维素溶液，海藻酸钠溶液为质量分数1%的海藻酸钠水溶液，相比于实施例1，实施例6制备的羧甲基壳聚糖细菌内毒素均大于实施例1；说明海藻酸钠无法吸收乙醇，并且不会缓慢溶解而产生粘性，从而影响了载料硅胶颗粒对细菌尸体的吸附处理。
结合实施例1和对比例1-4并结合表1可以看出，对比例1羧甲基壳聚糖制备过程中，未经过聚乙二醇溶液和冷冻处理，对比例2羧甲基壳聚糖制备过程中，未经过冷冻处理，对比例3羧甲基壳聚糖制备过程中，未经过聚乙二醇溶液处理，对比例4羧甲基壳聚糖制备过程中，未经过吸附处理，相比于实施例1，对比例1、2、3、4制备的羧甲基壳聚糖细菌内毒素和细菌总数均大于实施例1；说明壳聚糖、聚乙二醇溶液、冷冻处理相配合，刺破细菌与壳聚糖之间的粘膜，随后在碱化处理和羧基化反应过程中，进一步杀灭细菌，配合吸附处理，将细菌尸体从壳聚糖表面去除，制备的羧甲基壳聚糖表面无活菌以及细菌尸体，不仅提高了羧甲基壳聚糖的纯度，而且使羧甲基壳聚糖达到医用标准。
3、防粘连检测
分别采用应用例1-5的制备方法制备成品羧甲基壳聚糖凝胶，以白兔为实验动物，10只一组，每组白兔分别采用应用例1-5制备的羧甲基壳聚糖凝胶；
操作步骤如下：耳缘静脉留置套管针，注射苯巴比妥钠全麻。常规消毒铺巾，无菌操作，于腹正中开长约6厘米切口；开腹后找到回盲部，在其附近破坏两段结肠局部肠壁浆膜层。以刀片轻刮肠壁至出现均匀出血点，放置羧甲基壳聚糖凝胶；进行标志后还纳肠管，逐层关腹；术后按时静注青霉素。
四周后5只白兔再次开腹观察粘连情况，增加对照组，对照组的白兔伤口处无羧甲基壳聚糖凝胶。
一周后5只白兔开腹检查愈合情况；其中肠壁无血点则愈合良好，记录残余血点占肠壁创面的百分比。
表2羧甲基壳聚糖凝胶性能检测表
结合应用例1和对照组并结合表2可以看出，本发明制备的凝胶可以用于手术后创面，细菌内毒素含量较低，不易引起伤口处的排异反应，从而不易导致伤口处感染发炎，并且具有较好的防粘连效果，可以作为医用级凝胶广泛使用。
结合应用例1和应用例2-4并结合表2可以看出，纳米纤维素、透明质酸钠、羧甲基壳聚糖相配合，能够在伤口处形成网络，便于促进伤口愈合，具有较好的防粘连效果；并且对细菌内毒素影响较小，满足医用级标准。
结合应用例2和应用例5并结合表2可以看出，纳米纤维丝、聚乙二醇液相配合，利用聚乙二醇表面羟基配合纳米纤维丝表面羟基配合羧甲基壳聚糖中羧基以及透明质酸钠中羟基，便于形成交联网络，从而形成凝胶网络，便于促进伤口愈合。
Claims (10)
1.一种羧甲基壳聚糖的制备工艺，其特征在于，包括如下步骤：
S1、壳聚糖置于聚乙二醇溶液中溶胀处理，然后经冷冻处理、恢复室温、过滤，制得预处理壳聚糖；
S2、预处理壳聚糖经碱化处理，制得碱化壳聚糖；
S3、碱化壳聚糖经羧基化反应，然后中和、醇洗、脱水离心、吸附处理、干燥、包装，制得羧甲基壳聚糖。
2.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖的制备工艺，其特征在于：所述碱化处理过程中，碱化温度为25-65℃，碱化时间为5-120h，搅拌速度为100-180r/min。
3.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖的制备工艺，其特征在于，所述羧基化反应过程中，按质量比1:3-8:4-10称取碱化壳聚糖、氯乙酸和乙醇溶液混合。
4.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖的制备工艺，其特征在于，所述聚乙二醇溶液由质量比为1:2-8:0.2-0.7的聚乙二醇800、水和纳米纤维素组成。
5.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖的制备工艺，其特征在于，所述冷冻处理具体步骤如下：-4～0℃处理1-4h，然后-10～-4℃处理4-10h。
6.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖的制备工艺，其特征在于，所述吸附处理步骤为将脱水离心后的半成品与载料硅胶颗粒混合搅拌。
7.根据权利要求6所述的一种羧甲基壳聚糖的制备工艺，其特征在于，所述载料硅胶颗粒由多开孔硅胶颗粒负载乙基纤维素制得。
8.一种羧甲基壳聚糖凝胶，其特征在于，制备步骤包括：
称取羧甲基壳聚糖与水混合搅拌，溶解后经常压过滤、除菌处理、浓缩、NaCl调节、高压灭菌、包装，制得成品；羧甲基壳聚糖采用权利要求1-7任一项所述的羧甲基壳聚糖的制备工艺制备的羧甲基壳聚糖。
9.根据权利要求8所述的一种羧甲基壳聚糖凝胶，其特征在于，所述浓缩过程中添加纳米纤维素和透明质酸钠，在70-80℃、搅拌速度为80-200r/min的条件下，蒸发浓缩。
10.根据权利要求9所述的一种羧甲基壳聚糖凝胶，其特征在于，所述纳米纤维素由纳米纤维丝经聚乙二醇液改性制得。
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